專利名稱：：三乙烯四胺作為一種抗腫瘤輔助藥物的應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及三乙烯四胺的用途，尤其涉及三乙烯四胺作為一種抗腫瘤輔助藥物的應用。
背景技術：
：腫瘤(癌癥)在全球范圍內是僅次于心血管疾病的第二大″殺手″。近幾年來，腫瘤化療取得了相當?shù)倪M步，腫瘤患者生存時間明顯延長，特別是對白血病、惡性淋巴瘤等的治療有了突破，但對危害人類生命健康最嚴重、占惡性腫瘤90％以上的實體瘤的治療未能達到滿意的效果。藥學家和腫瘤學家越來越深刻地認識到要提高腫瘤治療的療效，必須從腫瘤發(fā)生發(fā)展的機制著手，才能取得新的突破性進展。幾年來，國外醫(yī)學界對于腫瘤疾病的發(fā)病機理在細胞基礎上又有了新的認識。如發(fā)現(xiàn)″端?！搴汀宥肆Ｃ浮迮c腫瘤之間的關系即為近幾年來腫瘤理論研究的一大突破性進展。所謂″端?！澹侵溉旧wDNA區(qū)域的終端部分，它由核苷多次重復組成。端粒對細胞具有多重作用，如保護染色體末端，控制細胞分裂次數(shù)、細胞衰老與死亡等等。科學研究揭示絕大多數(shù)腫瘤細胞的端粒比正常細胞短。因此，腫瘤細胞必須借助″端粒酶′來保持其長度。迄今已發(fā)現(xiàn)90％的腫瘤細胞存在著端粒酶活性。由此可見，只要找到具有抑制端粒酶作用的藥物(亦即″端粒酶抑制劑″)，即可抑制腫瘤細胞的快速生長，最終達到治療腫瘤的目的。端粒酶(telomerase)是一種RNA依賴的DNA聚合酶，能以本身RNA為模板，在染色體末端合成六聚脫氧核苷酸TTAGGG的重復序列，以補償細胞分裂時的染色體末端縮短，解決″末端復制問題″。端粒酶在絕大部分正常人體細胞中沒有活性，但在腫瘤細胞中卻廣泛表達，提示它可能為惡性腫瘤細胞無限增殖所必需。抑制端粒酶的活力，將有可能阻止腫瘤細胞惡性增殖；因此，端粒酶抑制劑在腫瘤治療中具有潛在的應用價值。由于端粒酶抑制劑使端粒DNA的縮短需要較長的時間，單獨使用端粒酶抑制劑難以治愈癌癥，但若與標準的療法相結合，可能有助于延緩甚至預防腫瘤通過外科手術、化療或放療去除后復發(fā)。由于大多數(shù)病人都是死于癌癥的復發(fā)，因此有效的端粒酶抑制劑將對多種癌癥的治療產(chǎn)生巨大影響。同時，根據(jù)抗腫瘤藥物的作用機制和細胞增殖動力學，設計出聯(lián)合用藥方案，可以提高療效、延緩耐藥性的產(chǎn)生，減少細胞毒性。另外，從抗腫瘤藥物的作用機制考慮，不同作用機制的抗腫瘤藥合用也可能增強療效。美國德克薩斯大學西南醫(yī)學中心高級研究員、藥理學和生物化學教授Corey博士進一步研究發(fā)現(xiàn)，端粒酶抑制劑可在幾周內有效減緩腫瘤的形成，但若輔以常規(guī)治癌藥物，如carboplatin(卡鉑)和cisplatin(順鉑)，端粒酶抑制劑還具有額外的抑制腫瘤細胞增殖的效果，而且還會加速腫瘤細胞的端?？s短。該發(fā)現(xiàn)再次證實，端粒酶抑制劑可能成為一種強有力的抗腫瘤新藥。并且，研究人員還指出單獨使用端粒酶抑制劑的藥效不如雙管齊下，應該將其與常規(guī)抗癌藥混合使用，可有助于減緩和防止癌細胞在手術后，或放療和化療后再度復發(fā)、擴散。NCBIPubchem數(shù)據(jù)庫(網(wǎng)址http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi？cid＝5565)已公開了化合物三乙烯四胺(TriethyleneTetraamine，TETA)，其結構式為分子式為C6H18N4(NH2(CH2CH2NH)2CH2CH2NH2)，分子量為146，常用作合成樹脂固化劑、添加劑、織物整理劑等。溶于水和乙醇，微溶于乙醚、易燃。相對密度0.9818(20℃)。凝固點12℃。沸點266～267℃。閃點143℃。自燃點338℃。折射率nD(20℃)1.4971。三乙烯四胺是一種用作合成樹脂固化劑、添加劑、織物整理劑的化工原料，在幾乎所有的有機化工產(chǎn)品的企業(yè)均可以買到，目前價格約在26500元/噸。三乙烯四胺(TETA)已知的用途是用三乙烯四胺鹽酸鹽作為銅離子螯合劑治療肝豆狀核變性(wilson病)，它與Penicillamine相比，對肝臟的毒性小，而且不會產(chǎn)生耐藥性。(參見文獻ThenewEnglandjournalofmedicine，1987；317209-13和Lancet，1982；1(8273)643-7)。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的是提供三乙烯四胺在醫(yī)藥方面的另一新用途，具體是提供一種三乙烯四胺作為抗腫瘤輔助藥物的應用。本發(fā)明涉及將三乙烯四胺作為端粒酶抑制劑用作治療或預防腫瘤疾病的輔助藥物與常規(guī)抗腫瘤藥物聯(lián)用。常規(guī)抗腫瘤藥物包括但不局限于阿霉素、卡鉑、紫杉醇；腫瘤疾病包括但不局限于宮頸癌、肝癌、乳腺癌等。由于超過85％的腫瘤細胞中都存在端粒酶活性，而且端粒酶活性直接影響了腫瘤細胞的增殖。我們的研究結果表明三乙烯四胺是一種有效的端粒酶抑制劑，在宮頸癌HeLa、肝癌SMMC-7721、乳腺癌MCF-7等多種腫瘤細胞中顯示出端粒酶抑制活性，同時長期培養(yǎng)能夠延緩腫瘤細胞的增殖速度。但由于端粒酶抑制劑促使端粒縮短需要較長的時間，單獨使用端粒酶抑制劑難以治愈腫瘤。但是，如果將端粒酶抑制劑與常規(guī)的不同作用機制的抗腫瘤藥物聯(lián)用，不僅可以延緩甚至預防腫瘤通過外科手術、化療或放療去除后復發(fā)，而且還能降低常用抗腫瘤藥物的劑量，進而減少用藥的濃度。目前腫瘤治療一般是手術治療、化療、放療、生物學治療或基因治療，尤其是手術治療和化療使用較多，但是由于大多數(shù)化療藥物的選擇性差，常規(guī)化療藥物對正常細胞也具有毒性，病人常常耐受差；在取得治療效果的同時，常出現(xiàn)不同程度的毒副作用，而且對病人的免疫功能有一定的影響?；熓∈菍е履[瘤轉移和復發(fā)的重要因素，而腫瘤的轉移和復發(fā)是腫瘤高死亡率的主要原因之一。因此，減少常規(guī)抗腫瘤藥物的用藥劑量，降低化療藥物的毒副作用抗腫瘤藥物的臨床應用具有十分重要的意義。端粒酶抑制劑由于其高選擇性(90％以上的腫瘤細胞有端粒酶活性而正常細胞基本檢測不到端粒酶活性)，如果端粒酶抑制劑本身無毒，那么在臨床使用中作為抗腫瘤輔助藥物使用，無疑具有非常重要的價值。本發(fā)明提出了新的端粒酶抑制劑三乙烯四胺的新用途，它自身對腫瘤細胞的增殖抑制較弱，但是在低劑量的三乙烯四胺存在條件下，能明顯增強常規(guī)抗腫瘤藥物(包括阿霉素、紫杉醇、卡鉑)的抗腫瘤效果；低劑量的三乙烯四胺聯(lián)合低劑量的常規(guī)抗腫瘤藥物可以達到高劑量抗腫瘤藥物同樣的抗腫瘤效果。在體外的人乳腺癌MCF-7細胞和宮頸癌HeLa細胞中的實驗結果表明，盡管低劑量的三乙烯四胺自身短時間內對腫瘤細胞的增殖沒有顯著的抑制作用，但可以明顯增強阿霉素、紫杉醇和卡鉑對這兩種腫瘤細胞增殖的抑制；同時，我們在B16小鼠腫瘤模型上也證實，低劑量的三乙烯四胺對腫瘤體積和動物體重沒有明顯的抑制作用，但可以顯著增強阿霉素的抗腫瘤效果，與單獨給予阿霉素的實驗組相比有顯著差異(但長時間、大劑量三乙烯四胺長期作用有一定的腫瘤抑制作用，這是因為端粒酶抑制劑長期作用誘導腫瘤細胞端?？s短、引起腫瘤細胞衰老，啟動了腫瘤細胞的凋亡程序)，這一結果提示，三乙烯四胺可以作為一種抗腫瘤輔助藥物，通過與常規(guī)的抗腫瘤藥物聯(lián)用，提高常規(guī)抗腫瘤藥物的療效，也可以降低常規(guī)抗腫瘤藥物的用量，降低其毒副作用，減少其臨床用量。圖1是本發(fā)明的三乙烯四胺對腫瘤細胞端粒酶活性的抑制效果圖；圖2是本發(fā)明的三乙烯四胺對端粒酶催化亞基轉錄調控因子c-myc表達抑制的效果圖；圖3是本發(fā)明的三乙烯四胺對端粒酶催化亞基hTERT表達抑制的效果圖；圖4是本發(fā)明的三乙烯四胺不同濃度短期培養(yǎng)對MCF-7和HeLa細胞增殖抑制的效果圖；圖5是本發(fā)明的低劑量三乙烯四胺長期培養(yǎng)對MCF-7和HeLa細胞增殖抑制的效果圖；圖6是本發(fā)明的三乙烯四胺增強阿霉素(聯(lián)用10天)對B16動物模型腫瘤體積抑制的效果圖；圖中1對照組；2阿霉素；30.5％三乙烯四胺；40.2％三乙烯四胺；5阿霉素+0.5％三乙烯四胺；6阿霉素+0.2％三乙烯四胺圖7是圖6所顯示的TETA和阿霉素聯(lián)用10天的抑瘤率。圖8是本發(fā)明的三乙烯四胺增強阿霉素對B16動物模型重量抑制的效果圖；圖中1對照組；2生理鹽水組；30.2％三乙烯四胺；40.5％三乙烯四胺；5阿霉素；6阿霉素+0.2％三乙烯四胺；7阿霉素+0.5％三乙烯四胺圖9是三乙烯四胺和阿霉素聯(lián)用(18天)對B16動物模型腫瘤體積的影響。圖中1對照組；2阿霉素；30.5％三乙烯四胺；40.2％三乙烯四胺；5阿霉素+0.5％三乙烯四胺；6阿霉素+0.2％三乙烯四胺圖10是圖9所顯示的TETA與阿霉素聯(lián)用18天的抑瘤率。具體實施例方式下面結合附圖對本發(fā)明做進一步說明為了更好地理解本發(fā)明的實質，以下在分析三乙烯四胺抑制端粒酶活性作用機制的基礎上，將通過MTT方法測定三乙烯四胺與紫杉醇、阿霉素、卡鉑等常規(guī)抗腫瘤藥物在乳腺癌MCF-7和HELa細胞中的抗腫瘤效果。同時，分析三乙烯四胺聯(lián)用阿霉素對小鼠B16腫瘤生長的影響(一)三乙烯四胺抑制乳腺癌MCF-7中端粒酶活性及作用機制實驗材料MCF-7、HeLa細胞購自中國科學院上海細胞所細胞庫銀染試劑盒Promega公司血清、培養(yǎng)基DMEM，Hyclone公司三乙烯四胺Merk公司卡鉑、紫杉醇、阿霉素Sigama公司CBL517小鼠第三軍醫(yī)大學其他化學試劑Amershco公司儀器設備PCR儀PE-9700，PE-2400，PE公司電泳設備Bio-Red公司凝膠成像系統(tǒng)Bio-Red公司二氧化碳孵育箱Heraeus公司倒置顯微鏡日本Nicon高溫高壓滅菌鍋TOMYAUOCLAVESS325，Gene公司離心機superfuge，Heraeus公司純水儀美國Millipore公司低速離心機Ependof公司HeLa細胞培養(yǎng)HeLa細胞在37℃、5％CO2的孵箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)基為DMEM(Hyclone)補加10％滅活小牛血清、100μg/mL鏈霉素、100U/mL青霉素。隔天換液，每次更換50％培養(yǎng)基。細胞傳代時，先倒盡瓶中的培養(yǎng)基，加入適量的0.25％胰蛋白酶消化，輕輕吹打，以吹散細胞團，取對數(shù)生長期的細胞進行實驗。端粒酶活性分析端粒酶含有RNA組分，為了防止RNase的污染，所有實驗用品及試劑都要經(jīng)過DEPC水處理，高壓滅菌，整個操作過程都要帶手套。收集計數(shù)1×106細胞于2500rpm離心5分鐘，沉淀用預冷的PBS緩沖液洗滌兩次。將細胞重懸于預冷的洗滌液中，4℃、2500rpm離心5分鐘，再將細胞重懸于200μL預冷的裂解液中，充分混勻，冰浴30分鐘，4℃、14000rpm離心30分鐘。迅速取出上清，于液氮中快速凍存。在Kim等的TRAP法的基礎上進行了改進，把延伸端粒DNA和PCR擴增分開來做，同時采用銀染代替放射自顯影。TRAP的具體操作分兩步進行①端粒DNA重復序列的延伸反應總體積49μL，包括10×TRAP緩沖液50μL，5μmol/LdNTPs，0.1μgTS引物，1μL的細胞提取液(2μg/μL)，濃度分別為2.5、20μM的三乙烯四胺，DEPC水補充體積。不含三乙烯四胺的細胞提取液樣品作為陽性對照，不含細胞提取液的裂解緩沖液作為陰性對照。充分混勻后在PCR儀上進行延伸反應，溫度條件為30℃、30分鐘，90℃、2分鐘，4℃保存。反應產(chǎn)物經(jīng)酚/氯仿抽提，乙醇沉淀，自然干燥，加20μL滅菌水溶解。②PCR擴增反應反應總體積50μL，包括20μL滅菌水溶解的端粒DNA產(chǎn)物、10×ExTaq緩沖液5μL、2.5μmol/LdNTPs4μL、TS和CX引物各0.2μmol/L、2UExTaq、DEPC滅菌水補充體積，充分混勻，短暫離心后進行PCR反應，循環(huán)條件為94℃30秒，55℃45秒，72℃90秒，循環(huán)35次，最后72℃保溫15分鐘，4℃終止反應。TRAP產(chǎn)物的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(denaturingpolyacryl-amidegelelectrophoresis，PAGE)制作1.0mm厚度的10％非變性聚丙烯酰胺凝膠。取30μLPCR產(chǎn)物進行電泳，電壓100V，緩沖液為1×TBE，電泳8～12小時，取出凝膠用銀染法顯色。非變性聚丙烯酰胺凝膠的銀染銀染顯色按照Promega銀染試劑盒的說明進行。將凝膠在雙蒸水中漂洗后，用10％醋酸固定30分鐘；固定完畢，用雙蒸水漂洗3次；然后在染色液(AgNO31g/L，37％HCHO0.5mL/L)中染色30分鐘；染色完畢，漂洗10秒鐘，立即放入顯色液(Na2CO330g/L，37％HCHO1.5mL/L，Na2S2O32mg/L)中顯色，直至條帶清晰；將凝膠放入10％的醋酸終止顯色。凝膠電泳的陽性結果為間隔6個堿基對的梯狀條帶。我們采用的實驗方法為改進的TRAP-銀染法，在端粒DNA延伸完成后對延伸產(chǎn)物進行分離純化，再進行PCR擴增，并用銀染色法代替了放射自顯影。常用的銀染方法比較簡單，只需固定、染色、顯色等步驟，而且具有較高的靈敏度，通?？蛇_到0.05～0.1ng。實驗結果我們用TRAP方法分析三乙烯四胺作用三天后的HeLa細胞中端粒酶活性的變化，實驗結果表明，三乙烯四胺可以顯著地抑制HeLa細胞中的端粒酶活性，而且有劑量依賴關系，結果如圖1所示。(二)三乙烯四胺抑制端粒酶活性的作用機制Westernblotting分析三乙烯四胺對c-myc和hTERT蛋白水平的影響。實驗方法在用三乙烯四胺處理細胞一定時間后，PBS洗三次，裂解細胞，蛋白定量后，取30-50μg蛋白進行SDS-PAGE，轉移到PVDF膜上，用anti-c-Myc或anti-hTERT抗體室溫孵育1-2小時，TBST洗三次，用HRP標記的二抗孵育(約1小時)，TBST洗后，用ECL試劑盒顯色，X光片曝光、顯影、定影后，掃描分析各種處理的目標蛋白帶光密度差異。實驗以β-actin作為參照。實驗結果三乙烯四胺抑制端粒酶催化亞基(hTERT)及其轉錄調控因子c-myc表達Westernblot實驗結果證實，三乙烯四胺能劑量依賴地抑制HeLa細胞中的c-myc蛋白表達，200μM三乙烯四胺作用三天，可以抑制約70％c-myc蛋白表達。實驗結果如圖2所示(圖2為多次重復實驗中有代表性的結果之一)。同時，三乙烯四胺對端粒酶催化亞基hTERT的表達也有明顯的抑制作用，200μM三乙烯四胺作用三天，可以抑制約60％c-myc蛋白表達。實驗結果如圖3所示(圖3為多次重復實驗中有代表性的結果之一)。(三)三乙烯四胺分別與紫杉醇、卡鉑和阿霉素聯(lián)用的體外抗腫瘤效果實驗步驟MTT法測定三乙烯四胺以及三乙烯四胺與卡鉑、紫杉醇和阿霉素聯(lián)合應用的抗腫瘤效果。具體操作如下MCF-7和HeLa細胞分別在添加了不同濃度的三乙烯四胺和卡鉑、阿霉素以及紫杉醇的培養(yǎng)基中培養(yǎng)72小時后，加入濃度為0.5mg/mL的MTT溶液，37℃下孵育2～4小時。終止孵育后，小心吸去上清，加入DMSO(pH4.7)，溶解活細胞中的甲臜顆粒。然后用酶標儀在570nm波長下測定光密度值OD570，參考波長為630nm(吸光值表示為OD630)。細胞存活率的計算方法為細胞存活率為50％時，對應的三乙烯四胺的濃度即為EC50。實驗結果實驗表明，三乙烯四胺自身對腫瘤細胞的增殖影響較小，1mM三乙烯四胺作用三天對MCF-7細胞的抑制幾乎沒有明顯的影響；但對HeLa細胞的增殖較MCF-7細胞明顯，1mM三乙烯四胺作用三天的抑制率可以達到10％，可能是因為HeLa細胞的端粒比MCF-7細胞的端粒短結果如圖4所示。但是，低劑量的三乙烯四胺長期培養(yǎng)對腫瘤細胞的增殖也有一定的抑制作用，我們用100μM三乙烯四胺處理著兩種細胞長達30天，結果發(fā)現(xiàn)，對MCF-7細胞的抑制率可以達到15％，對HeLa細胞的抑制率可以達到38％。這與其他的端粒酶抑制劑作用相似，實驗結果如圖5所示。同時，我們分別在結腸癌HeLa細胞和乳腺癌MCF-7細胞中驗證了三乙烯四胺與阿霉素(0.25mM)、卡鉑(100μM)和紫杉醇(2.5nM)聯(lián)用對腫瘤細胞增殖的影響，實驗結果表明，單獨使用低劑量的三乙烯四胺(100μM)在短時間內(作用3天)對這兩種細胞的增殖沒有明顯的影響，但都能不同程度地增強這些常規(guī)抗腫瘤藥物對腫瘤細胞增殖的抑制；而且在HeLa細胞中有更好的效果，結果如表1所示。表1三乙烯四胺與阿霉素、卡鉑和紫杉醇聯(lián)合使用的抗腫瘤效果<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="886">實驗內容對MCF-7細胞增殖的影響對HeLa細胞增殖的影響對照組100100三乙烯四胺97.2±6.493.1±6.7卡鉑75.7±5.668.9±4.5紫杉醇84.3±4.976.4±5.2</table></tables><tablesid="table2"num="002"><tablewidth="840">阿霉素72.6±7.568.3±8.2三乙烯四胺+卡鉑52.7±4.842.1±4.4三乙烯四胺+紫杉醇62.3±4.653.5±3.1三乙烯四胺+阿霉素56.7±4.143.9±3.7</table></tables>(四)、三乙烯四胺聯(lián)用阿霉素對小鼠B16腫瘤生長的影響實驗步驟1、B16黑色素皮下腫瘤模型的建立(1)含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液(10％FBSDMEM)培養(yǎng)B16細胞至250ml培養(yǎng)瓶底80％～90％滿，0.25％胰酶消化，離心，10％FBSDMEM重懸細胞，計數(shù)細胞總數(shù)，離心，取適量NS重懸細胞，調細胞濃度至1.0×107/ml，備用。(2)C57BL小鼠右側腋下75％乙醇皮膚消毒，取0.2ml細胞懸液皮下注射至小鼠腋下。2、分組及用藥(1)皮下注射腫瘤細胞后5天左右，將皮下生長出腫瘤的小鼠隨機分為5組，每組10只，具體如下①Normal組；②NS組；③0.2％三乙烯四胺組；③0.5％三乙烯四胺組；④5mg/kgADM組；⑤5mg/kgADM+0.2％三乙烯四胺組；⑥5mg/kgADM+0.5％三乙烯四胺組。(2)用藥方式NSip，0.2ml/只。ADMip，以5mg/kg計算0.2ml/只(以每只小鼠20g計算)。三乙烯四胺溶解在飲水中的質量體積比0.2％或者0.5％，小鼠自由飲水，每3天新鮮配制。(3)藥物配制①ADM10mgADM中加入NS20ml，充分溶解，成0.5mg/ml的溶液，ip，0.2ml/只。②三乙烯四胺(p＝0.9819g/ml)取0.21ml或0.51ml充分混勻于飲用蒸餾水中，稀鹽酸調節(jié)pH值為7.0，定容至100ml，終濃度分別為0.2％或者0.5％，每3天新鮮配制用于試驗。(4)以上用藥均是Qd，6-8天后，待腫瘤長至100mm3開始用藥，連續(xù)用藥15天。3、病理檢測(1)腫瘤體積每4天用游標卡尺測量皮下腫瘤組織的最長徑(a)和最短徑(b)，計算腫瘤體積V＝0.5ab2。(2)保存組織第16天處死小鼠，取腫瘤、腎臟、心臟組織，10％中性甲醛溶液固定，或液氮中保存。4、統(tǒng)計分析所有數(shù)據(jù)的表示都是用平均值±標準誤差，統(tǒng)計方法采用one-wayANOVA檢驗，除非特別指明，P＜0.05被認為有顯著差異。實驗結果經(jīng)過三乙烯四胺與阿霉素聯(lián)合用藥，實驗結果表明(1)0.2％的三乙烯四胺單獨用藥(10天)對B16腫瘤的體積以及小鼠的重量幾乎沒有影響；(2)0.5％三乙烯四胺(作用10天)對腫瘤體積和小鼠的重量有一定的抑制作用，但p＜0.05時，兩組數(shù)據(jù)之間沒有顯著差異，表示作用效果不明顯。(3)高劑量的三乙烯四胺(0.2％和0.5％)長期作用(作用時間18天)對腫瘤體積有明顯的抑制作用(P＜0.05)。結果如圖9和圖10所示(4)在三乙烯四胺與阿霉素聯(lián)用使用的模型上，0.2％和0.5％三乙烯四胺都能顯著地增加阿霉素的抗腫瘤效果(包括腫瘤體積和動物的體重)，且兩組數(shù)據(jù)有統(tǒng)計差異(**，##，P＜0.01)。實驗結果如圖6、7和圖8所示，圖6、7表示三乙烯四胺和阿霉素對模型動物腫瘤體積的影響；圖8表示ETA和阿霉素對模型動物體重的影響。在動物實驗中，將三乙烯四胺按體積比0.2％(低劑量)或0.5％(高劑量)溶解在小鼠飲用水中，自由飲用。在臨床實驗中，以制劑的方式服用或通過靜脈注射，將三乙烯四胺按體積比0.2％(低劑量)或0.5％(高劑量)融解在生理鹽水中，通過靜脈注射或輸液的方式給藥，可獲得較好效果。本發(fā)明的優(yōu)點由上述實驗結果證實，三乙烯四胺是的一種新型的端粒酶活性抑制劑，能明顯抑制人宮頸癌HeLa細胞、乳腺癌MCF-7細胞和人體肝癌SMMC-7721細胞中的端粒酶活性，并延長腫瘤細胞的增殖周期。其作為抗腫瘤輔助藥物與常規(guī)的不同作用機制的抗腫瘤藥物聯(lián)用，能增強常規(guī)抗腫瘤藥物卡鉑、阿霉素、紫杉醇的抗腫瘤效果。體外、體內的實驗結果表明，三乙烯四胺對細胞沒有任何毒副作用，但在三乙烯四胺存在的條件下，相同劑量的阿霉素、卡鉑或紫杉醇能夠抑制更多的腫瘤細胞增殖，這一現(xiàn)象提示，如果需要降低這些常規(guī)藥物的用藥劑量，可以給予一定劑量的三乙烯四胺(體積比在0.1％-0.5％)，在給予低濃度的阿霉素、卡鉑或紫杉醇的條件下，可以獲得等同的抗腫瘤效果，這將有助于減少這些抗腫瘤藥物在臨床使用時的用藥劑量，降低它們對其他器官或系統(tǒng)的毒副作用。權利要求1.用三乙烯四胺作為抗腫瘤輔助藥物與常規(guī)抗腫瘤藥物聯(lián)用。2.用三乙烯四胺作為治療和預防宮頸癌HeLa、肝癌SMMC-7721、乳腺癌MCF-7的抗腫瘤輔助藥物與常規(guī)抗腫瘤藥物阿霉素、卡鉑或紫杉醇聯(lián)用。全文摘要本發(fā)明提供三乙烯四胺在醫(yī)藥方面的另一新用途，具體是提供一種三乙烯四胺作為抗腫瘤輔助藥物的應用，將三乙烯四胺作為端粒酶抑制劑用作治療或預防腫瘤疾病的輔助藥物與常規(guī)抗腫瘤藥物聯(lián)用。常規(guī)抗腫瘤藥物包括但不局限于阿霉素、卡鉑、紫杉醇；腫瘤疾病包括但不局限于宮頸癌、肝癌、乳腺癌等。與常規(guī)抗腫瘤藥物聯(lián)用，可以在降低這些藥物用量的條件下，獲得等同的抗腫瘤效果，這有助于減少這些抗腫瘤藥物在臨床使用時的用藥劑量，降低它們對其他器官或系統(tǒng)的毒副作用。文檔編號A61K31/704GK1850061SQ20061005431公開日2006年10月25日申請日期2006年5月20日優(yōu)先權日2006年5月20日發(fā)明者劉建輝,殷菲,陳剛,郭莉霞,鄭旭煦申請人:重慶工商大學