專利名稱：：海洋膠原肽在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及海洋膠原肽的新用途，具體來說是海洋膠原肽在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中的用途。屬食品保健和醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：近年來，免疫功能低下，包括原發(fā)性及繼發(fā)性免疫功能缺陷、缺乏或受損，受到國內(nèi)外醫(yī)學(xué)家們的廣泛關(guān)注，因為它們本身及所誘發(fā)的各種并發(fā)癥，特別是感染，常使病人的病情嚴重，難以治療，并可引起嚴重的后果，甚至危及生命。如果通過開發(fā)保健食品，來改善機體免疫功能，經(jīng)濟實用，將對我國的衛(wèi)生保健行業(yè)帶來很大的前景。植物和動物蛋白質(zhì)水解產(chǎn)生的某些肽具有免疫活性作用。Meisel等(1996)證實酪蛋白序列中存在不同的生物活性成份，經(jīng)酶解后可得到下列四種活性肽①opioidagonists阿片類激動劑。②opiiodanregonists阿片類拮抗劑。③immunostinulants(immunopeptides)免疫刺激劑。④mineralCarriers(Caseinphosphopeptided)金屬載體。β-酪蛋白水解生成的三肽Leu-Leu-Tyr以及α-酪蛋白的N末端Thr-Thy-Met-Pro-Leu-Phe在試驗中可以促進人和綿羊腹膜內(nèi)巨噬細胞的吞噬作用。Berthoa等(1981)，Parker等從人乳酪蛋白酶解中分離得到的二種活性肽，Val-Gln-Pro-Ile-Pro-tyr和Gly-Leu-Phe這二種肽濃度在0.1umol/L時就能激活腹膜巨噬細胞對綿羊紅細胞的吞噬作用。Cosre等(1992)報道β-酪蛋白胃蛋白酶-糜蛋白酶消化產(chǎn)物中的多肽可促進大鼠成熟的淋巴細胞的未成熟的脾細胞的增殖。Azuma等(1989)從卵清蛋白中提取的肽能促進細胞的生長和DNA的合成。陳棟梁等學(xué)者應(yīng)用同位素示蹤動物實驗也證實了白蛋白多肽與核酸共同食用，可促進核苷酸的吸收及利用促進免疫器官核酸的分布量，有益于免疫細胞內(nèi)核酸代謝的補救合成，提高機體的細胞免疫功能。海洋膠原肽是由海洋魚類(大馬哈魚、羅非魚等)的魚皮經(jīng)水解產(chǎn)生的一組分子量在200～1000D的小分子肽。具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點。已有研究表明，海洋膠原肽具有調(diào)節(jié)血脂作用、增加骨密度的作用。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明旨在通過進一步研究，提供海洋膠原肽在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中的用途，為通過飲食改善機體免疫功能提供一種新途徑。其中所述的藥物為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑。其中所述的食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。具體實施方案以下通過動物實驗來闡明本發(fā)明所述海洋膠原肽在免疫調(diào)節(jié)方面的作用效果。1.材料和方法1.1受試樣品海洋膠原肽，由北京中食海氏生物技術(shù)有限公司制備。1.2實驗動物清潔級雌性ICR小鼠192只，6～8周齡，18～22克，由北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實驗動物中心提供，批準號為SCXK11-00-0004，清潔級動物房飼養(yǎng)，飼養(yǎng)環(huán)境溫度25℃，濕度60％RH。1.3檢驗指標小鼠脾臟和胸腺重；抗體形成細胞(IgM-PFC/脾)測定，采用Jerne改良玻片法；血清抗體滴度，采用血清半數(shù)溶血值HC50；遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)，采用足跖腫脹法測定；ConA刺激的小鼠脾淋巴細胞增殖功能，采用MTT法；巨噬細胞吞噬功能的檢測，采用碳粒廓清法及腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞(半體內(nèi)法)測定；NK細胞活性測定，采用乳酸脫氫酶(LDH)測定法。1.4實驗方法動物分成溶劑對照組、低劑量組、中劑量組和高劑量組，每組48只，每組再分為4個亞組，每個亞組12只。將海洋膠原肽配成低、中、高三個濃度，即0.22gl/kg、0.45g/kg和1.35g/kg體重，分別相當于人每天用量(2.7g/d)的5、10和30倍，各實驗組小鼠每天灌胃一次，灌胃量按0.1ml/10g體重計，連續(xù)灌胃30天，實驗結(jié)束時按照衛(wèi)生部《保健食品功能學(xué)評價程序和檢驗方法》進行上述指標檢測。2.結(jié)果2.1海洋膠原肽對小鼠免疫器官重量的影響結(jié)果顯示，給予海洋膠原肽30天，未對小鼠脾臟和胸腺的絕對重量和相對重量產(chǎn)生明顯影響。2.2海洋膠原肽對小鼠細胞免疫功能的影響由表1中可見，與對照組比較，0.45和1.35g/kgbw組小鼠足跖腫脹程度顯著增高(P＜0.05)；表2顯示各劑量組小鼠淋巴細胞增殖顯著高于對照組(P＜0.05)。上述結(jié)果表明海洋膠原肽對小鼠細胞免疫功能中的遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)和ConA刺激的T淋巴細胞增殖有明顯的增強作用。表1.海洋膠原肽對小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響()<tablesid="table1"num="001"><tablewidth="648">劑量動物數(shù)(只)足跖腫脹程度(mm)0g/kgBW0.22g/kgBW0.45g/kgBW1.35g/kgBW121212120.32±0.070.32±0.070.40±0.07*0.42±0.12*</table></tables>*與對照組(0g/kgBW)比較差異有顯著性，P＜0.05表2.海洋膠原肽對ConA刺激的小鼠T淋巴細胞增殖(DTH)的影響()<tablesid="table2"num="002"><tablewidth="766">劑量動物數(shù)(只)增殖能力(OD差值)0g/kgBW0.22g/kgBW0.45g/kgBW1.35g/kgBW121212120.42±0.020.49±0.05*0.53±0.03*0.46±0.03*</table></tables>*與對照組(0g/kgBW)比較差異有顯著性，P＜0.052.3海洋膠原肽對小鼠體液免疫功能的影響由表3中可見，與對照組比較，0.45和1.35g/kgbw組小鼠抗體生成細胞數(shù)量顯著增高(P＜0.05)；表4顯示各劑量組小鼠半數(shù)溶血值與對照組相比未見明顯變化(P＞0.05)。上述結(jié)果表明海洋膠原肽可明顯提高小鼠抗體生成細胞的數(shù)量，對小鼠血清抗體滴度沒有明顯影響；結(jié)果提示海洋膠原肽對小鼠體液免疫功能有增強的作用。表3.海洋膠原肽對小鼠抗體生成細胞(IgM-PFC)的影響()<tablesid="table3"num="003"><tablewidth="741">劑量動物數(shù)(只)lg(IgM-PFC/spleen)0g/kgBW0.22g/kgBW0.45g/kgBW1.35g/kgBW121212124.96±0.134.94±0.145.28±0.15*5.89±0.16*</table></tables>*與對照組(0g/kgBW)比較差異有顯著性，P＜0.05表4.海洋膠原肽對小鼠半數(shù)溶血值(HC50)的影響()<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="742">劑量動物數(shù)(只)半數(shù)溶血值(HC50)0g/kgBW0.22g/kgBW0.45g/kgBW1.35g/kgBW12121212120.9±17.6124.7±17.8124.8±12.2125.5±10.7</table></tables>2.4海洋膠原肽對小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響由表5中可見，與對照組比較，0.45和1.35g/kgbw組小鼠碳粒廓清指數(shù)顯著增高(P＜0.05)；表6顯示各劑量組小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞的吞噬率(PP)和吞噬指數(shù)(PI)與對照組相比均顯著升高(P＜0.05)。上述結(jié)果表明海洋膠原肽可明顯提高小鼠抗體生成細胞的數(shù)量，對小鼠血清抗體滴度沒有明顯影響；結(jié)果提示海洋膠原肽對小鼠體液免疫功能有增強的作用。表5.海洋膠原肽對小鼠碳粒廓清能力的影響()<tablesid="table5"num="005"><tablewidth="622">劑量動物數(shù)(只)碳粒廓清指數(shù)(a)0g/kgBW0.22g/kgBW0.45g/kgBW1.35g/kgBW121212125.41±0.735.29±0.676.28±1.03*6.26±0.94*</table></tables>*與對照組(0g/kgBW)比較差異有顯著性，P＜0.05表6.海洋膠原肽對小鼠巨噬細胞吞噬率(PP)和吞噬指數(shù)(PI)的影響()<tablesid="table6"num="006"><tablewidth="603">GroupNumberPP(％)PI0g/kgBW0.22g/kgBW0.45g/kgBW1.35g/kgBW1212121229.5±8.050.0±6.3*53.8±9.1*49.5±7.8*0.61±0.221.14±0.25*1.22±0.17*1.29±0.18*</table></tables>*與對照組(0g/kgBW)比較差異有顯著性，P＜0.052.5海洋膠原肽對小鼠自然殺傷(NK)細胞活性的影響結(jié)果顯示，與對照組比較，給予海洋膠原肽30天未對小鼠NK細胞活性產(chǎn)生明顯影響。3.結(jié)論小鼠經(jīng)口給予海洋膠原肽30天后，其檢測結(jié)果表明，海洋膠原肽對細胞免疫功能中遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)和ConA刺激的T淋巴細胞增殖有明顯的增強作用；對體液免疫功能中的抗體生成細胞數(shù)量具有明顯的升高作用；對巨噬細胞碳粒廓清能力和對雞紅細胞的吞噬能力具有明顯促進作用；綜上結(jié)果顯示海洋膠原肽具有免疫調(diào)節(jié)作用。權(quán)利要求1.海洋膠原肽在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中的用途。2.按權(quán)利要求1，其中所述的藥物為粉劑、顆粒劑、膠囊、片劑、丸劑。3.按權(quán)利要求1，其中所述的食品為淀粉制品、乳及乳制品、豆制品、烘焙制品。全文摘要本發(fā)明涉及海洋膠原肽在制備免疫調(diào)節(jié)藥物或食品中的用途。海洋膠原肽是由海洋魚類(大馬哈魚、羅非魚等)的魚皮經(jīng)水解產(chǎn)生的一組分子量在200～1000D的小分子肽，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特點。實驗證實，給予小鼠海洋膠原肽可明顯增強小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)(DTH)能力和ConA刺激的T淋巴細胞增殖；同時可明顯增加抗體生成細胞數(shù)量，并對巨噬細胞碳粒廓清能力和對雞紅細胞的吞噬能力具有明顯促進作用。上述結(jié)果表明海洋膠原肽對細胞免疫功能、體液免疫功能及巨噬細胞的吞噬功能均具有調(diào)節(jié)作用。文檔編號A61K9/48GK101091789SQ20061008681公開日2007年12月26日申請日期2006年6月19日優(yōu)先權(quán)日2006年6月19日發(fā)明者李勇,蔡木易,王軍波申請人:李勇,蔡木易,王軍波