專利名稱：將河鲀毒素作為鎮(zhèn)痛藥的耐受抑制劑在制備復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及將河鲀毒素作為鎮(zhèn)痛藥的耐受抑制劑在制備復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中的應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
河鲀毒素(Tetrodotoxin，TTX)是一種化學(xué)結(jié)構(gòu)獨(dú)特，生物活性極強(qiáng)的海洋生物神經(jīng)毒素，其分子式為C11H17N3O8，分子量為319.27。TTX毒性極強(qiáng)，其毒性比氰化納強(qiáng)1250倍，這種令人生畏的毒素，只需0.35mg-0.5mg就可致人于死地。由于TTX具有阻斷神經(jīng)細(xì)胞膜Na+通道的作用，所以，TTX目前已成為神經(jīng)生物學(xué)和生理學(xué)研究領(lǐng)域一種非常重要的工具藥。
日本從上世紀(jì)三十年代起就將TTX用于人體鎮(zhèn)痛、局麻、鎮(zhèn)痙、鎮(zhèn)癢等臨床試用(潘心富，黃致強(qiáng).藥學(xué)通報(bào)，1984，440)，但因TTX毒性極強(qiáng)，TTX的治療劑量與中毒量較接近的技術(shù)難題長期以來未能得到徹底解決，所以，TTX至今仍未被列入藥典名錄，其在臨床上的運(yùn)用受到較大的局限性。
十幾年來，我國在TTX的藥用研究方面得到了卓有成效的發(fā)展，尤其是在TTX的臨床應(yīng)用上取得多項(xiàng)成果(1)如以TTX為原料制成注射劑，用于戒除藥物依賴性和鎮(zhèn)痛的應(yīng)用(WO95/24903、ZL981020720、CN1145225A、CN1353990A、CN1356104A、CN1051706C)；(2)采用新技術(shù)研制TTX呼吸道給藥制劑和TTX油相制劑等新劑型，在戒毒或鎮(zhèn)痛中的應(yīng)用(CN1459286A、CN1754539A)；(3)TTX與其他藥物的配伍研究，如與抗心律失常藥配伍或與局麻藥配伍的研究等，表明TTX可提高抗心律失常藥物或局麻藥物的療效和治療指數(shù)，而對抗心律失常藥物毒性無明顯影響(李蘊(yùn)山等，海洋藥物，1984，17-9；1986，210-12；張永健，河北醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1989，19-13)。
目前現(xiàn)有技術(shù)中尚未有關(guān)于將TTX作為藥物耐受抑制劑在制備復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑運(yùn)用方面的報(bào)道。
眾所周知，目前臨床上應(yīng)用的阿片類藥物在顯示其優(yōu)異的鎮(zhèn)痛作用的同時(shí)，人們也一直為其所帶來的耐受性和依賴性問題所困擾，這不僅限制了阿片類藥物的臨床應(yīng)用，而且還造成了吸毒這一世界性社會(huì)問題。盡管目前人們尚未尋找到鎮(zhèn)痛作用強(qiáng)、耐受性和依賴性小的新型鎮(zhèn)痛藥物，但有關(guān)報(bào)道說明，通過給老鼠服用少劑量的第二種止痛藥，這種動(dòng)物開始形成耐藥性的時(shí)間會(huì)減慢(Li He，etal.Cell.2002，108271.)，此舉不失為解決目前鎮(zhèn)痛類藥物產(chǎn)生耐受性問題的一種方法。目前現(xiàn)有鎮(zhèn)痛藥物的抑制劑主要有NOS(一氧化氮合酶)抑制劑L-甲基精氨酸(L-NMMA)、N(G)-硝基-L-精氨酸(L-NNA)、N(G)-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)、7-N1等；另外CaM(鈣調(diào)蛋白)抑制劑-三氟拉嗪、CaMK II(依賴(于)鈣-鈣調(diào)蛋白的蛋白激酶II)抑制劑KN-62和KN-93、NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受體拮抗劑MK801、DAMGO(腦啡肽)和氯胺酮等均可不同程度地阻斷嗎啡耐受性的產(chǎn)生，但是，有的抑制劑在對動(dòng)物試驗(yàn)中，動(dòng)物體會(huì)出現(xiàn)血壓升高及與嗎啡有交叉產(chǎn)生耐受性等副作用(朱興族.藥理學(xué)進(jìn)展，北京人民衛(wèi)生出版社，1997.14；Fan GH，Wang LE，Qiu HC，et al.Mol Pharmacol，1999，56(1)39；Menendez L，Hidalgo A，BaamondeA.Eur J Pharmacol，1997，335(1)9；CN1309562A)。
據(jù)報(bào)道，微量TTX(1nmol.L-1)對交感神經(jīng)釋放去甲腎上腺素具有選擇生抑制作用(任雷鳴等.TTX對電刺激誘發(fā)的兔隱動(dòng)脈雙相血管收縮反應(yīng)的作用.中國藥理學(xué)通報(bào)，2005，91123)，這表明微量TTX的脫癮和抑制嗎啡耐受作用，可能是TTX選擇性抑制交感神經(jīng)所致。這一研究結(jié)果使我們萌生出新的思路，為將TTX作為耐受生抑制劑的應(yīng)用提供了依據(jù)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是為了將河鲀毒素作為鎮(zhèn)痛藥的耐受抑制劑在制備復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中的應(yīng)用方法，另一目的在于，用TTX與阿片受體的弱激動(dòng)劑(美沙酮、丁丙諾啡)配伍制成復(fù)方制劑，用于戒毒治療并能消除美沙酮等藥物本身所引起的戒斷綜合癥。將TTX作為耐受抑制劑與鎮(zhèn)痛藥物配伍制成的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑，既不影響原鎮(zhèn)痛藥物的療效，又能抑制或降低鎮(zhèn)痛藥物所產(chǎn)生的耐受性。
為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明是通過以下技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)的一、TTX與鹽酸嗎啡進(jìn)行配伍，可制成復(fù)方鹽酸嗎啡注射液(2)。
方法取鹽酸嗎啡10g溶于約900ml注射用中水，另取TTX 10mg溶于0.1％1ml稀鹽酸中，兩藥進(jìn)行混合后，過濾，在自濾器上添加注射用水，使混合藥液達(dá)到1000ml的劑量，再經(jīng)過混合攪拌均勻后，進(jìn)行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到復(fù)方鹽酸嗎啡注射液。
二、TTX與鹽酸嗎啡進(jìn)行配伍，可制成復(fù)方鹽酸嗎啡粉劑。
方法取TTX 1mg和鹽酸嗎啡5g，置于容器內(nèi)，在容器內(nèi)再加入枸櫞酸鹽緩沖溶液，將兩藥進(jìn)行溶解，再經(jīng)過混合攪拌均勻后，進(jìn)行精濾、分裝(每瓶復(fù)方鹽酸嗎啡粉劑含有鹽酸嗎啡5mg，TTX 1μg)，經(jīng)過低溫真空干燥，進(jìn)行瓶口熔封，即可得到復(fù)方鹽酸嗎啡粉劑。
三、TTX與美沙酮進(jìn)行配伍，可制成復(fù)方美沙酮片劑。
方法取美沙酮2.5g、醋酸鹽TTX 0.5mg，加入適量賦型劑，混合攪拌均勻，用制藥設(shè)備壓制成1000片的片劑，(每片含有美沙酮2.5mg，TTX 0.5μg，用玻璃藥瓶進(jìn)行封裝，即可得到復(fù)方美沙酮片劑。
本發(fā)明所述的TTX的化學(xué)登記號為CAS-4368-28-9，在國內(nèi)外均有銷售，TTX也可以用公開的技術(shù)從河豚魚等生物組織中提取(潘心富，黃致強(qiáng)等.從蟲紋東方豚卵巢中分離TTX的研究簡報(bào).海洋藥物通訊.1980，246；ZL98102596.X)。
本發(fā)明所述的TTX包括以下一種或多種化合物TTX，4-表TTX，6-表TTX，脫水TTX，脫氧TTX，胺基TTX。
本發(fā)明所述的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑每毫升或每片(粒)TTX有效含量為0.01μg-15μg。
本發(fā)明所述TTX的溶劑為醋酸、稀鹽酸，苯甲酸，檸檬酸，及其酸的緩沖液。
本發(fā)明所述的鎮(zhèn)痛藥主要包括阿片、嗎啡、哌替啶、美沙酮、丁丙諾啡、二氫埃托啡、芬太尼、曲馬多、鎮(zhèn)痛新、及其制劑。
本發(fā)明所述的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑可以是注射劑、粉針劑，口服劑，口含片，噴霧劑、膠囊、栓劑、油相制劑。
本發(fā)明復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中，TTX的含量僅是TTX中毒量的幾十之一至幾百分之一，而該劑量與人的致死量相差幾十倍至幾百倍，所以上述復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑是安全、可靠的，而且療效顯著，克服了TTX常規(guī)臨床用藥中，有時(shí)出現(xiàn)中毒癥狀的難題，從而實(shí)現(xiàn)了鎮(zhèn)痛類藥物的升級。
本發(fā)明所述的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中，鎮(zhèn)痛藥的用量可參照《中國藥典》或《中國藥物大全》規(guī)定藥劑的劑量±50％范圍配制。
表1 幾種常用鎮(zhèn)痛藥的劑型和劑量

摘自2005中國藥典、中國藥物大全 第三版本發(fā)明主要具有以下優(yōu)點(diǎn)和特征1、本發(fā)明的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑可以按常規(guī)鎮(zhèn)痛藥方法生產(chǎn)，生產(chǎn)工藝簡單、易于實(shí)施，生產(chǎn)成本低。
2、本發(fā)明將TTX作為耐受性抑制劑與鎮(zhèn)痛藥配伍制成的復(fù)方制劑，能抑制或降低鎮(zhèn)痛類藥物的耐受性，不產(chǎn)生影響鎮(zhèn)痛藥的毒性，且可提高鎮(zhèn)痛藥治療指數(shù)，延續(xù)治療時(shí)間。其中，制成的復(fù)方美沙酮制劑等既不影響在戒毒治療中的療效，又能降低或消除美沙酮等本身所引起的耐受生。


圖1是嗎啡與TTX合用對大鼠甩尾痛閾時(shí)程的曲線圖；圖2是納絡(luò)酮催促小鼠體重改變的曲線圖。
圖1中的豎坐標(biāo)軸代表大鼠甩尾痛閾時(shí)間，橫坐標(biāo)軸代表對大鼠的治療天數(shù)。
圖2中的豎坐標(biāo)軸代表小鼠體重改變的百分比，橫坐標(biāo)軸代表測定小鼠體重的時(shí)間。
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1取鹽酸嗎啡10g溶于約900ml的注射用水中，另取TTX 5mg溶于pH為4.5的苯甲酸10m中，兩藥進(jìn)行混合后，過濾，在自濾器上添加注射用水，使混合藥液達(dá)到1000ml的劑量，再經(jīng)過混合攪拌均勻后，進(jìn)行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到復(fù)方鹽酸嗎啡注射液(1)。
實(shí)施例2取鹽酸嗎啡10g溶于約900ml注射用中水，另取TTX 10mg溶于0.1％1ml稀鹽酸中，兩藥進(jìn)行混合后，過濾，在自濾器上添加注射用水，使混合藥液達(dá)到1000ml的劑量，再經(jīng)過混合攪拌均勻后，進(jìn)行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到復(fù)方鹽酸嗎啡注射液(2)。
實(shí)施例3取TTX 1mg和鹽酸嗎啡5g，置于容器內(nèi)，在容器內(nèi)再加入枸櫞酸鹽緩沖溶液，將兩藥進(jìn)行溶解，再經(jīng)過混合攪拌均勻后，進(jìn)行精濾、分裝(每瓶復(fù)方鹽酸嗎啡粉劑含有鹽酸嗎啡5mg，TTX 1μg)，經(jīng)過低溫真空干燥，瓶口熔封，即可得到復(fù)方鹽酸嗎啡粉劑。
實(shí)施例4取美沙酮2.5g、醋酸鹽TTX 0.5mg，加入適量賦型劑，混合攪拌均勻，用制藥設(shè)備壓制成1000片的片劑，(每片含有美沙酮2.5mg，TTX 0.5μg，用玻璃藥瓶進(jìn)行封裝，即可得到復(fù)方美沙酮片劑。
實(shí)施例5取鹽酸哌替啶50g，溶于約900ml注射用水中，另取TTX 1mg溶于0.1％2ml的醋酸中，將兩藥混合后，過濾，在自濾器上添加注射用水，使混合藥液達(dá)到1000ml的劑量，再經(jīng)過混合攪拌均勻后，進(jìn)行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到復(fù)方鹽酸哌替啶注射液。
實(shí)施例6取枸櫞酸芬太尼100mg和枸櫞酸鹽TTX 0.1mg，置于容器內(nèi)，在容器內(nèi)再加入注射用水，使混合藥液達(dá)到1000ml的劑量，再經(jīng)過混合攪拌均勻后，進(jìn)行精濾，灌封，滅菌程序處理，即可得到復(fù)方枸櫞酸芬太尼注射液。
實(shí)驗(yàn)例實(shí)驗(yàn)例1TTX抑制嗎啡耐受性的實(shí)驗(yàn)。
取大鼠24只，隨機(jī)分成四組1、嗎啡組 2、嗎啡+TTX-a組 3、嗎啡+TTX-b組 4、生理鹽水對照組。
四組均采用在大鼠尾部靜脈滴注給藥，嗎啡+TTX二個(gè)組中除TTX外，所注射的嗎啡量與嗎啡組相同，對照組為生理鹽水。采用溫浴浸尾測定大鼠的甩尾痛閥，間隔同樣時(shí)間后，每天以同樣方法測試鎮(zhèn)痛效果一次，連續(xù)7天。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明嗎啡組在給藥第3天后痛刺激閾值逐日下降，到第7天痛閾值與生理鹽水對照組接近(P＞0.05)；嗎啡+TTX二個(gè)組鎮(zhèn)痛作用明顯，嗎啡+TTX-a組與嗎啡組相比較有顯著差異(P＜0.01)(見圖1嗎啡與TTX合用對大鼠甩尾痛閾時(shí)程曲線)。研究表明TTX能抑制嗎啡耐受性的產(chǎn)生。
實(shí)驗(yàn)例2TTX抑制嗎啡依賴性實(shí)驗(yàn)取體重為21-25克的小鼠40只，隨機(jī)分成4組1、生理鹽水對照組 2、嗎啡組組 3、嗎啡+TTX-1組 4、嗎啡+TTX-2組。采用2天遞增法，建立嗎啡依賴小鼠模型，除生理鹽水對照組外，實(shí)驗(yàn)三個(gè)組，二天共接受7次腹腔注射不同劑量的嗎啡，造成小鼠對嗎啡的依賴性。嗎啡+TTX二個(gè)組在接受同嗎啡組一樣劑量嗎啡外，還注射TTX。各組小鼠末次給藥后2h，分別腹腔注射納絡(luò)酮(6mg/kg)催促戒斷反應(yīng)。觀察記錄20min內(nèi)小鼠跳躍次數(shù)，記錄催促24h內(nèi)小鼠體重變化。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，納絡(luò)酮催促后小鼠平均跳躍次數(shù)與生理鹽水組相比有明顯增加。嗎啡+TTX-1組和嗎啡+TTX-2組均能減少跳躍次數(shù)，尤其是在11-20min之間抑制作用明顯，嗎啡+TTX-1組與嗎啡組相比較有顯著差異(P＜0.01)，見表2。
納絡(luò)酮催促后各組小鼠體重均有下降，其中嗎啡組催促6h體重下降最明顯，嗎啡+TTX-1組和嗎啡+TTX-2組體重下降與生理鹽水對照組基本一致(P＞0.05)，嗎啡+TTX-1組下降程度顯著低于嗎啡組(P＜0.01)(圖2納絡(luò)酮催促小鼠體重改變曲線)。表明TTX能有效防止嗎啡依賴性的產(chǎn)生。
表2 納絡(luò)酮催促后20分鐘內(nèi)小鼠跳躍反應(yīng) (X±SD)

與嗎啡組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
權(quán)利要求
1.將河鲀毒素作為鎮(zhèn)痛藥的耐受抑制劑在制備復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中的應(yīng)用，其特征在于所述的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑每毫升或每片(粒)的河鲀毒素的有效含量為0.01μg-15μg。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的將河鲀毒素作為耐受抑制劑在制備復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中的應(yīng)用，其特征在于所述的鎮(zhèn)痛藥主要包括阿片、嗎啡、哌替啶、美沙酮、丁丙諾啡、二氫埃托啡、芬太尼、曲馬多、鎮(zhèn)痛新、及其制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的將河鲀毒素作為耐受抑制劑在制備復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中的應(yīng)用，其特征在于所述的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑可以是注射劑、粉針劑、口服劑、口含片、噴霧劑、膠囊、栓劑、油相制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及將河鲀毒素作為鎮(zhèn)痛藥的耐受抑制劑在制備復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑中的應(yīng)用，所述的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑為注射劑、粉針劑、口服劑、口含片、噴霧劑、膠囊、栓劑和油相制劑，可抑制鎮(zhèn)痛藥的耐受性，不產(chǎn)生影響鎮(zhèn)痛藥的毒性，提高鎮(zhèn)痛藥的療效。所述的復(fù)方鎮(zhèn)痛制劑的制備方法具有工藝簡單，容易實(shí)施，所需成本低的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號A61K31/135GK1864685SQ20061009263
公開日2006年11月22日 申請日期2006年6月26日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月26日
發(fā)明者黃致強(qiáng), 黃海燕, 黃海楓 申請人:黃致強(qiáng)