專利名稱：一種原料中含有人參和附子的藥物制劑及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是屬于藥物制劑領(lǐng)域，具體的說，涉及一種原料中含有人參和附子的藥物制劑及其制備方法和質(zhì)量控制方法。
背景技術(shù)：
古方“參附湯”，其方由人參、附子兩味藥組成。根據(jù)中醫(yī)藥理論，該方是回陽(yáng)救逆、益氣固脫之方，臨床主要應(yīng)用于陽(yáng)氣暴脫的厥脫癥。
人參中含有皂苷類、多糖類成分；附子中含有生物堿類成分，主要是烏頭類生物堿；酯型生物堿為烏頭類生物堿中的一種，有毒。
目前市場(chǎng)上有參附注射液銷售，同時(shí)有多項(xiàng)有關(guān)參附注射液、參附注射用凍干粉針在中國(guó)申請(qǐng)的已公開的專利。但其都沒有在制劑成品中保留人參中的多糖類成分作為一種主要的有效成分，如中國(guó)申請(qǐng)(專利)號(hào)為CN96117458.7、CN03135691.5、CN03135701.6、CN02149368.5、CN200510059785.0、CN200410013725.0、CN200510047701.1的已公開專利。
人參中的多糖類成分具有多種活性，如人參中的多糖類成分可以從多種途徑發(fā)揮抗腫瘤的作用；人參中的多糖類成分對(duì)機(jī)體的特異性免疫和非特異性免疫均有明顯的促進(jìn)作用；以及人參中的多糖類成分具有降血糖作用等多種生理活性。人參中的多糖類成分能提高休克病人的抵抗力并對(duì)其恢復(fù)具有促進(jìn)作用。
更進(jìn)一步的開發(fā)質(zhì)量穩(wěn)定、可控，有效成分種類保留更全、有效成分含量更高的參附的藥物制劑，更加完整的保留和發(fā)揚(yáng)傳統(tǒng)古方的藥效，能為臨床使用提供更多更好的用藥選擇，也是更好的發(fā)展傳統(tǒng)中藥學(xué)的需要。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明人在實(shí)驗(yàn)過程中意外的發(fā)現(xiàn)對(duì)于人參和附子的藥物制劑，在制劑成品中保留了人參中的多糖類成分的藥物制劑的藥理作用明顯優(yōu)于未保留人參中的多糖類成分的藥物制劑。
本發(fā)明人在前述發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上，經(jīng)過大量的研究探索，結(jié)合新穎獨(dú)特技術(shù)，研制出了一種原料中含有人參和附子的藥物制劑。該藥物制劑中含有人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種原料中含有人參和附子的藥物制劑。
在傳統(tǒng)古方、驗(yàn)方的基礎(chǔ)上，利用傳統(tǒng)中醫(yī)藥理論、現(xiàn)代中醫(yī)藥理論和現(xiàn)代醫(yī)藥理論，通過在古方、驗(yàn)方上增減藥味，改變藥量配比，增加無(wú)配伍禁忌的、能起協(xié)同作用的中藥、天然藥物、中藥提取物、天然藥物提取物、中藥有效部位、天然藥物有效部位、中藥有效化合物單體、天然藥物有效化合物單體、化學(xué)藥物等藥物，對(duì)古方、驗(yàn)方進(jìn)行更進(jìn)一步的深入研究和二次開發(fā)，是開發(fā)療效更好，安全性更佳、研究開發(fā)成本更低的新藥的一條捷徑。
本發(fā)明的藥物制劑中的原料中含有人參、附子，同時(shí)在該藥物制劑中可以不添加或添加一種或一種以上的無(wú)配伍禁忌的、能起協(xié)同作用的中藥、天然藥物、中藥提取物、天然藥物提取物、中藥有效部位、天然藥物有效部位、中藥有效化合物單體、天然藥物有效化合物單體、化學(xué)藥物等藥物，如甘草、黃芪、甘草提取物、黃芪提取物、鹽酸納洛酮、鹽酸多巴胺等。
該藥物制劑中的人參和附子為野生品或人工栽培品，為道地藥材或非道地藥材。如所述的人參可為人參或山參或園參或林下參等。
同時(shí)所述的人參和附子為其鮮藥材或依傳統(tǒng)方法炮制而成的炮制品或依現(xiàn)代方法炮制而成的炮制品。如所述的人參可為人參或生曬山參或生曬參或紅參等，所述的附子可為黑順片或白附片或鹽附子等。
本發(fā)明的一種原料中含有人參和附子的藥物制劑可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑。
所述口服固體制劑可為片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、固體分散劑、散劑、顆粒劑、微顆粒劑、微丸劑、微囊劑、微球劑、和其它藥學(xué)上可接受的口服固體制劑。所述的口服液體制劑可為口服液和其它藥學(xué)上可接受的口服液體制劑。所述的注射劑可為注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑、葡萄糖注射液、氯化鈉注射液和其它藥學(xué)上可接受的注射劑。
本發(fā)明的藥物制劑，優(yōu)選的是片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、固體分散劑、口服液、注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑、葡萄糖注射液、氯化鈉注射液。更優(yōu)選片劑、硬膠囊劑、固體分散劑、口服液、注射液、注射用凍干制劑。更優(yōu)選為片劑、硬膠囊劑、口服液、注射液、注射用凍干制劑。
本發(fā)明的藥物制劑，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式是指單劑量制劑，如注射劑的每支，每瓶，口服制劑的每粒，每片等。
本發(fā)明的藥物制劑，原料中人參∶附子的比例為1-10∶1-10，優(yōu)選1-4∶1-8，更優(yōu)選1-2∶1-4，最優(yōu)選1∶2。
本發(fā)明的藥物制劑，在每一單位劑量的制劑中，按原料計(jì)含有人參0.1g-25g，附子0.2g-50g；優(yōu)選含有人參0.15g-20g，附子0.3g-40g；更優(yōu)選含有人參0.2g-14g，附子0.4g-28g；更優(yōu)選含有人參0.2g-11g，附子0.4g-22g。
本發(fā)明的藥物制劑，在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷1mg～90mg，人參總多糖2mg～282mg，附子總生物堿0.02mg～22mg。優(yōu)選含有人參總皂苷2mg～60mg，人參總多糖4mg～188mg，附子總生物堿0.05mg～15mg。更優(yōu)選含有人參總皂苷2.5mg～45mg，人參總多糖6mg～141mg，附子總生物堿0.06mg～11mg。
具體的可為在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)，為8mg～15mg；人參總多糖以葡萄糖計(jì)，為25mg～47mg；附子總生物堿0.2mg～3.6mg。
或在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)，為16mg～30mg；人參總多糖以葡萄糖計(jì)，為50mg～94mg；附子總生物堿0.4mg～7.2mg。
或在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)，為40mg～75mg；人參總多糖以葡萄糖計(jì)，為125mg～235mg；附子總生物堿1mg～18mg。
或在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)，為2.5mg～5mg；人參總多糖以葡萄糖計(jì)，為8mg～16mg；附子總生物堿0.06mg～1.2mg。
附子中的酯型生物堿為烏頭類生物堿中的一種，有毒。本發(fā)明的藥物制劑，在每一單位劑量的制劑中，含烏頭類生物堿以烏頭堿(C24H47NO11)計(jì)，不得高于10.0mg，優(yōu)選不得高于5.0mg，更優(yōu)選不得高于3.0mg，更優(yōu)選不得高于2.0mg，更優(yōu)選不得高于1.0mg。
本發(fā)明的藥物制劑中含有量均分子量為30～36×104、8～12×104、3.5～7.5×104的人參的多糖類成分中的一種或幾種，其中量均分子量為33.0445×104、或9.8878×104、或5.4087×104的人參的多糖類成分的含量較高。
本發(fā)明的藥物制劑在必要時(shí)還含有或使用藥物可接受的輔料(或載體)，所述輔料為藥學(xué)上可接受的制劑輔助劑。
本發(fā)明的藥物制劑中優(yōu)選含有0.05％～90％(重量百分比)的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分和附子的生物堿類成分，及99.95％～0％(重量百分比)的藥學(xué)上可用的輔料。在所述制劑中人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分和附子的生物堿類成分的含量更優(yōu)選為0.08％～80％，更優(yōu)選0.1％～75％，更優(yōu)選0.15％～70％。
對(duì)于口服固體制劑和口服半固體制劑，所述輔料選自稀釋劑、潤(rùn)濕劑、粘合劑、崩解劑、助流劑、抗粘劑、潤(rùn)滑劑、色、香、味及其調(diào)節(jié)劑、固體分散體載體材料、抗氧化劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、PH調(diào)節(jié)劑和其它藥學(xué)上可接受的口服固體制劑、口服半固體制劑用輔料中的一種或一種以上的物質(zhì)，每種輔助劑可不選或選用該種輔助劑中的一種或一種以上的物質(zhì)。
所述稀釋劑是選自淀粉、可壓性淀粉、糖粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、甘露醇、山梨醇、硫酸鈣、碳酸鈣和其它藥學(xué)上可接受的稀釋劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述潤(rùn)濕劑是選自乙醇、水和其它藥學(xué)上可接受的潤(rùn)濕劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述粘合劑是選自羥丙甲纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙纖維素、淀粉漿、聚維酮、明膠、聚乙二醇、50％至70％蔗糖溶液、海藻酸鈉溶液和其它藥學(xué)上可接受的粘合劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述崩解劑是選自羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、干淀粉、交聯(lián)聚維酮、泡騰崩解劑和其它藥學(xué)上可接受的崩解劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述助流劑、抗粘劑、潤(rùn)滑劑是選自滑石粉、微粉硅膠、硬脂酸鎂、聚乙二醇類、月桂醇硫酸鈉、月桂醇硫酸鎂、氫化植物油和其它藥學(xué)上可接受的助流劑、抗粘劑、潤(rùn)滑劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述色、香、味及其調(diào)節(jié)劑是選自藥用色素、食用色素、香精和其它藥學(xué)上可接受的色、香、味及其調(diào)節(jié)劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的固體分散體載體材料是選自聚乙二醇類、纖維素衍生物、有機(jī)酸類、表面活性劑類、聚維酮類、糖類與醇類、纖維素類、聚丙烯酸樹脂類、β-谷甾醇、膽固醇、膽固醇硬脂酸酯、棕櫚酸甘油酯、氫化蓖麻油、蓖麻油蠟、蜂蠟、巴西棕櫚蠟和其它藥學(xué)上可接受的固體分散體載體材料中的一種或一種以上的物質(zhì)，每類固體分散體載體材料可不選或選用該類固體分散體載體材料中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的pH調(diào)節(jié)劑可以是至少一種藥學(xué)上可接受的用于調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)，所述調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)是選自堿性化合物、緩沖系統(tǒng)、酸和其它藥學(xué)上可接受的用于調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)中的一種或一種以上的物質(zhì)。
對(duì)于口服液體制劑，所述輔料選自溶劑、增溶劑、助溶劑、潛溶劑、防腐劑、矯味劑、著色劑、pH調(diào)節(jié)劑、抗氧劑、金屬離子絡(luò)合劑和其它藥學(xué)上可接受的液體制劑附加劑中的一種或一種以上的物質(zhì)，每種輔助劑可不選或選用該種輔助劑中的一種或一種以上的物質(zhì)。
所述的溶劑是選自水、一定濃度的乙醇、甘油、丙二醇和其它藥學(xué)上可接受的液體制劑用溶劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的防腐劑是選自對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等對(duì)羥基苯甲酸酯類、山梨酸及其鹽、苯甲酸及其鹽、薄荷油和其它藥學(xué)上可接受的液體制劑用防腐劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的矯味劑是選自蔗糖、單糖漿、果汁糖漿、山梨醇、甘油、甘露醇、糖精鈉、薄荷揮發(fā)油和其它藥學(xué)上可接受的液體制劑用矯味劑中的一種或一種以上的物質(zhì)。
對(duì)于注射劑，所述輔料選自藥學(xué)上可接受的注射用溶劑、增溶劑、抑菌劑、抗氧劑、穩(wěn)定劑、絡(luò)合劑、鎮(zhèn)痛劑、等滲調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑，以及藥學(xué)上可接受的具有其它輔助功能的藥物中的一種或一種以上的物質(zhì)，每種輔助劑可不選或選用該種輔助劑中的一種或一種以上的物質(zhì)。
所述的注射用溶劑是選自注射用水、一定濃度的乙醇、甘油、丙二醇、苯甲醇和其它藥學(xué)上可接受的注射用溶劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的增溶劑是選自聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚山梨酯40、聚山梨酯60和其它藥學(xué)上可接受的注射劑用增溶劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的抑菌劑是選自羥丙丁酯、羥丙甲酯、苯甲醇、苯酚、三氯叔丁醇和其它藥學(xué)上可接受的注射劑用抑菌劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的抗氧劑是選自焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉和其它藥學(xué)上可接受的注射劑用抗氧劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的絡(luò)合劑是選自乙二胺四醋酸二鈉、環(huán)己二胺四醋酸鈉、N-羥基二乙胺三醋酸、二乙基三胺六醋酸和其它藥學(xué)上可接受的絡(luò)合劑中的一種或一種以上的物質(zhì)。
所述的pH調(diào)節(jié)劑是選自一定濃度的氫氧化鈉溶液、一定濃度的鹽酸溶液、磷酸、醋酸-醋酸鈉緩沖溶液、醋酸鹽緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液和其它藥學(xué)上可接受的pH調(diào)節(jié)劑中的一種或一種以上的物質(zhì)。
其中所述的注射用凍干制劑還可以在制劑中不加入或加入了一種或一種以上的藥物可接受的適量的賦形劑。所述賦形劑選自甘露醇、山梨醇、甘氨酸、乳糖、氯化鈉、葡萄糖和其它藥學(xué)上可接受的賦形劑中的一種或一種以上的物質(zhì)。所述的賦形劑優(yōu)選甘露醇、山梨醇。
本發(fā)明的藥物制劑在使用時(shí)根據(jù)患者具體情況確定用法用量，可每日使用1～4次，每次使用1～20單位劑量的藥物制劑，如每次使用1～20片或?；蛑?。
本發(fā)明另一目的是提供一種原料中含人參和附子的藥物制劑的制備方法。
本發(fā)明的藥物制劑的制備方法如下處方人參、附子、起協(xié)同作用的藥物(添加或不添加)、輔料(添加或不添加)制備方法簡(jiǎn)述提取人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分，添加或不添加起協(xié)同作用的藥物，添加或不添加輔料，制成一種原料中含有人參和附子的口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑。
制備方法一、人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分的提取(1)人參的處理人參采用一定濃度的乙醇提取(提取方法采用回流提取法或超聲提取法或滲漉法或浸漬法或連續(xù)提取法或減壓提取法)，所得提取液濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.5～4.5g，用水飽和的正丁醇萃取，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參的皂苷類成分中間體，備用；(2)人參藥渣的處理人參被一定濃度的乙醇提取后的藥渣先用水提取(提取方法采用煎煮法或回流提取法或超聲提取法或滲漉法或浸漬法或連續(xù)提取法或減壓提取法)，所得提取液濾過，調(diào)整藥液濃度為0.2～2.4g生藥/ml，溫度為20～70℃，加入85～95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到70～90％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液(或不離心，濾過后直接調(diào)整藥液濃度)，調(diào)整上清液藥液濃度為0.7～6g生藥/ml，加入85～95％的乙醇使含醇量達(dá)60～80％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液(或不離心，濾過后直接取濾液)，上一步所得上清液或?yàn)V液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；上一步所得上清液采用截留分子量100K～900K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或?qū)⑸弦徊剿蒙锨逡合扔媒亓舴肿恿?00K～900K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量1K～10K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；(3)附子的處理附子藥材先用水提取(提取方法采用煎煮法或回流提取法或超聲提取法或滲漉法或浸漬法或連續(xù)提取法或減壓提取法)，所得提取液濾過，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.0～1.25，溫度20～65℃，用85～95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)60～80％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.05～1.45時(shí)加入85～95％的乙醇使醇含量達(dá)75～90％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；濾液加熱至沸，保持微沸10～60分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.7～2.5g，每次加入0.5～3倍量的二氯甲烷萃取2～9次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；二、起協(xié)同作用的藥物的處理(4)起協(xié)同作用的藥物的處理起協(xié)同作用的藥物是中藥或天然藥物的，提取其有效部位或有效成分單體，(精制)，水溶，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，濾過，即得中間體，備用；起協(xié)同作用的藥物是化學(xué)藥物的，水溶，pH值調(diào)至5.5～8.5，濾過，即得中間體，備用；(備注用于制備口服固體制劑、口服半固體制劑時(shí)可以不水溶)三、各藥物制劑成品的制備(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體，混勻；(6)將“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中間體合并，混勻，所得藥液濾過，濃縮成清膏[或?qū)ⅰ?5)”所得藥液濾過，濃縮成清膏，與“(4)”未水溶的中間體混合]，加入適量的口服固體制劑、口服半固體制劑用輔料混勻，制軟材，制粒，烘干，壓片或裝入膠囊，制成一種原料中含有人參和附子的片或膠囊。
(7)將“(5)”所得藥液用純化水或注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.1～2.0g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的口服液體制劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的口服液體制劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加純化水或注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，濾過，按劑量分裝至口服液包裝容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的口服液。
(8)將“(5)”所得藥液用注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.1～2.0g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的注射劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的注射劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，(調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5)，加入0.02～0.5％活性炭加熱至沸，保持微沸10～60分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，精濾(過0.22～0.50μm微孔濾膜或相似孔徑的垂熔玻璃濾器)，按劑量分裝至注射液包裝用容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的注射液。
(9)將“(5)”所得藥液用注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.3～2.0g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的注射劑用輔料、注射用凍干制劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的注射劑用輔料、注射用凍干制劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加入0.02～0.5％活性炭加熱至沸，保持微沸10～60分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，精濾(過0.22～0.50μm微孔濾膜或相似孔徑的垂熔玻璃濾器)，無(wú)菌分裝至每支管制注射劑玻璃瓶中含1～8ml藥液，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑。
(10)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段普通預(yù)凍，預(yù)凍溫度-60℃～-40℃，預(yù)凍時(shí)間約2.5～6小時(shí)；或選擇反復(fù)預(yù)凍，預(yù)凍溫度-60℃～-40℃，回溫溫度-15℃～-7℃，預(yù)凍時(shí)間約3～9小時(shí)。
b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-60℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-30℃～-15℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束。
c再干燥階段擱板溫度慢慢升至-5℃～30℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間3～12小時(shí)。
優(yōu)選的制備方法本發(fā)明的藥物制劑優(yōu)選的制備方法為一、人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分的提取(1)人參的處理人參分別加3～9倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～3倍量)60～80％乙醇回流提取或超聲提取1～4次，每次0.5～3小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.75～3.0g，每次加入0.7～3倍量的水飽和的正丁醇萃取2～9次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參的皂苷類成分中間體，備用；(2)人參藥渣的處理醇提后的人參藥渣分別加6～13.5倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～5倍量)煎煮提取或回流提取2～6次，每次0.5～4小時(shí)，合并提取液，濾過，調(diào)整藥液濃度為0.4～1.6g生藥/ml，溫度為20～60℃，加入90～95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到75～85％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液(或不離心，濾過后直接調(diào)整藥液濃度，用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備)，調(diào)整上清液藥液濃度為1.0～4.0g生藥/ml，加入90～95％的乙醇使含醇量達(dá)65～75％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液(或不離心，濾過后直接取濾液，用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備)，上一步所得上清液或?yàn)V液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；上一步所得上清液采用截留分子量100K～700K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或?qū)⑸弦徊剿蒙锨逡合扔媒亓舴肿恿?00K～700K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量1K～8K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；(3)附子的處理附子藥材加4～12倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～4倍量)，煎煮提取或回流提取2～6次，每次0.5～3小時(shí)，合并提取液，濾過，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.01～1.21，溫度20～60℃，用90～95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)65～75％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.15～1.40時(shí)加入90～95％的乙醇使醇含量達(dá)80～90％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；濾液加熱至沸，保持微沸15～55分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.8～2.0g，每次加入0.8～2倍量的二氯甲烷萃取3～7次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；二、起協(xié)同作用的藥物的處理(4)起協(xié)同作用的藥物的處理起協(xié)同作用的藥物是中藥或天然藥物的，提取其有效部位或有效成分單體，(精制)，水溶，調(diào)節(jié)pH值至6～8，濾過，即得中間體，備用；起協(xié)同作用的藥物是化學(xué)藥物的，水溶，pH值調(diào)至6～8，濾過，即得中間體，備用；(備注用于制備口服固體制劑、口服半固體制劑時(shí)可以不水溶)三、各藥物制劑成品的制備
(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體，混勻；(6)將“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中間體合并，混勻，所得藥液濾過，濃縮成清膏[或?qū)ⅰ?5)”所得藥液濾過，濃縮成清膏，與“(4)”未水溶的中間體混合]，加入適量的口服固體制劑、口服半固體制劑用輔料混勻，制軟材，制粒，烘干，壓片或裝入膠囊，制成一種原料中含有人參和附子的片或膠囊。
(7)將“(5)”所得藥液用純化水或注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.1～1.5g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的口服液體制劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的口服液體制劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加純化水或注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，濾過，按劑量分裝至口服液包裝容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的口服液。
(8)將“(5)”所得藥液用注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.1～1.5g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的注射劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的注射劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，(調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0)，加入0.02～0.3％活性炭加熱至沸，保持微沸10～40分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，精濾(過0.22～0.45μm微孔濾膜或相似孔徑的垂熔玻璃濾器)，按劑量分裝至注射液包裝用容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的注射液。(9)將“(5)”所得藥液用注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.5～2.0g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的注射劑用輔料、注射用凍干制劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的注射劑用輔料、注射用凍干制劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加入0.02～0.3％活性炭加熱至沸，保持微沸10～40分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，精濾(過0.22～0.45μm微孔濾膜或相似孔徑的垂熔玻璃濾器)，無(wú)菌分裝至每支管制注射劑玻璃瓶中含1～6ml藥液，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑。
(10)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段普通預(yù)凍，預(yù)凍溫度-60℃～-45℃，預(yù)凍時(shí)間約2.5～6小時(shí)；或選擇反復(fù)預(yù)凍，預(yù)凍溫度-60℃～-45℃，回溫溫度-13℃～-8℃，預(yù)凍時(shí)間約3～9小時(shí)。
b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-60℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-26℃～-15℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束。
c再干燥階段擱板溫度慢慢升至0℃～25℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間3～12小時(shí)。
本發(fā)明的藥物制劑的制備方法中的“人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分的提取”的方法可以更優(yōu)選為(1)人參的處理人參分別加5～7倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～2倍量)65～75％乙醇回流提取2～3次，每次1.5～2.5小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含人參生藥1.0～2.0g，每次加入0.8～1.2倍量的水飽和的正丁醇萃取5～7次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參的皂苷類成分中間體，備用；(2)人參藥渣的處理醇提后的人參藥渣分別加8～10倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～4倍量)煎煮提取或回流提取2～4次，每次1.5～2.5小時(shí)，合并提取液，濾過，調(diào)整藥液濃度為0.6～1.0g生藥/ml，溫度為20～45℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到75～85％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液(或不離心，濾過后直接調(diào)整藥液濃度，用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備)，調(diào)整上清液藥液濃度為1.5～2.5g生藥/ml，加入95％的乙醇使含醇量達(dá)65～75％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液(或不離心，濾過后直接取濾液，用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備)，上一步所得上清液或?yàn)V液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；上一步所得上清液采用截留分子量100K～600K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或?qū)⑸弦徊剿蒙锨逡合扔媒亓舴肿恿?00K～600K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量1K～8K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；(3)附子的處理附子藥材加7～9倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～3倍量)，煎煮提取或回流提取2～4次，每次0.5～1.5小時(shí)，合并提取液，濾過，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.05～1.16，溫度40～55℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)65～75％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.21～1.35時(shí)加入95％的乙醇使醇含量達(dá)80～90％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；濾液加熱至沸，保持微沸30～45分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.8～1.2g，每次加入0.8～1.2倍量的二氯甲烷萃取4～6次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備。
本發(fā)明的再一個(gè)目的是提供一種原料中含有人參和附子的藥物制劑的質(zhì)量控制方法。使本發(fā)明的藥物制劑的質(zhì)量穩(wěn)定可控。
本發(fā)明優(yōu)選的提供一種原料中含有人參和附子的注射劑的質(zhì)量控制方法，包括下述的鑒別、檢查、含量測(cè)定、指紋圖譜。
所述的鑒別、檢查、含量測(cè)定、指紋圖譜及其中的單個(gè)的具體方法可分別選用或任意組合使用，用于一種原料中含有人參和附子的注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑的質(zhì)量控制。
所述的鑒別、檢查、含量測(cè)定、指紋圖譜包括人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的鑒別、附子的鑒別，烏頭類生物堿的限量檢查，人參皂苷Rg1和Re的含量測(cè)定、人參總皂苷的含量測(cè)定、人參中的多糖類成分的含量測(cè)定，人參藥材指紋圖譜、附子藥材指紋圖譜、制劑中的人參皂苷的指紋圖譜和生物堿的指紋圖譜。
所述的一種原料中含有人參和附子的注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑的質(zhì)量控制方法如下[1]鑒別[1.1]人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的鑒別取制備好的注射劑內(nèi)容物1.0g，加水30ml溶解，加氯仿30～50ml，振搖，取水液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加入水飽和的正丁醇8～12ml超聲處理25～40分鐘，取正丁醇液置分液漏斗中，加入2～4倍量的氨試液，洗滌，洗液棄去，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參藥材1g(過60目篩)，加乙醇20～40ml，加熱回流20～40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，濾過，濾液同法制成人參藥材溶液。再分別取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各2.5～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(14～16∶38～42∶21～23∶9～11)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與人參藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
附子的鑒別取制備好的注射劑內(nèi)容物3.5g，加水30ml溶解，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～11，加乙醚振搖提取2～4次，每次40～50ml，醚液低溫蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，做為供試品溶液。另取附子藥材粗粉20g，置具塞錐形瓶中，加乙醚130～170ml，振搖9～12分鐘，加氨試液9～11ml，振搖25～35分鐘，放置1～2小時(shí)，分取醚層，揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為附子藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各12～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板(厚500μm)上，層析缸先以氨水飽和，以石油醚-乙醚-丙酮(4.8～5.2∶2.8～3.2∶2.8～3.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與附子藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
檢查[2.1]烏頭類生物堿的限量檢查[2.1.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取上述對(duì)照品溶液0.2～0.3ml、0.4～0.6ml、0.65～0.85ml、0.9～1.1ml、1.4～1.6ml、1.65～1.85ml、1.9～2.1ml，分別置分液漏斗中，分別加入0.01mol/L鹽酸溶液1.85～1.65ml、1.6～1.4ml、1.35～1.15ml、1.1～0.9ml、0.6～0.4ml、0.35～0.15ml、0.00ml，分別精密加入醋酸-醋酸鈉緩沖液(取0.2mol/L醋酸溶液250ml，用0.2mol/L醋酸鈉溶液調(diào)pH值至3.1)8～12ml，溴甲酚綠液(取溴甲酚綠50mg，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿振搖提取3次，每次30ml，棄去氯仿液)1.5～2.5ml，氯仿8～12ml，振搖2～6分鐘，靜置，分取氯仿液，隨行空白，照分光光度度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)在415nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備 取制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加水10ml溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加氨試液調(diào)節(jié)pH值至10～11，用等量的氯仿振搖提取3～5次，合并氯仿液，蒸干。殘?jiān)?.01mol/L鹽酸溶液分次溶解，并轉(zhuǎn)入10ml量瓶中，稀釋至刻度搖勻，即得。
測(cè)定法 精密量取上述供試品溶液2ml，分別置分液漏斗中，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
制備好的注射劑每支含烏頭類生物堿以烏頭堿(C24H47NO11)計(jì)，不得高于1.0mg。
含量測(cè)定[3.1]人參皂苷Rg1和Re的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸溶液(17～23∶75～85)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rg1及人參皂苷Re對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.3mg、人參皂苷Re0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，置5ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10～30μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
制備好的注射劑每支含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量之和應(yīng)為0.2～2.0mg。
人參總皂苷的含量測(cè)定[3.2.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rb10.3mg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取上述人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液0.05～0.15ml，0.15～0.25ml，0.25～0.35ml，0.35～0.45ml，0.45～0.55ml，0.55～0.65ml，0.65～0.75ml，分別置具塞試管中，揮去溶劑，各加入5％香草醛—冰醋酸溶液(新鮮配制)0.15～0.25ml及高氯酸0.6～1.0ml，于55～65℃水浴上加熱12～18min，取出，迅速冷卻，加冰醋酸3～7ml，搖勻，同時(shí)以相應(yīng)的試劑作為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)于556nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加蒸餾水10ml溶解，置分液漏斗中，用氯仿振搖提取3～5次，每次8～12ml，棄去氯仿液，水液再以水飽和的正丁醇振搖提取3～5次，每次8～12ml，合并正丁醇液，再用正丁醇飽和的水洗滌2～3次，每次8～12ml，棄去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 精密量取樣品溶液0.1ml置具塞試管中，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”項(xiàng)下自“揮去溶劑”起依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
制備好的注射劑每支含人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)，應(yīng)為2.0～20.0mg。
人參中多糖類成分的含量測(cè)定[3.3.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1ml含葡萄糖0.2mg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液0.05～0.15ml，0.15～0.25ml，0.25～0.35ml，0.35～0.45ml，0.45～0.55ml，0.55～0.65ml，0.65～0.75ml，0.75～0.85ml，分別置具塞試管中，分別加水使成1.0ml，各精密加入新鮮配制的0.2％蒽酮硫酸(硫酸濃度為80％)溶液6～10ml，搖勻，在100℃水浴中加熱8～12分鐘，迅速冷卻后，隨行空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)在620nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物3.5g，精密稱定，加水25～35ml溶解后，加入乙醇使含醇量達(dá)75～85％，離心，沉淀?yè)]干乙醇后加入蒸餾水溶解，并定容至100ml量瓶中。取上述溶液1～3ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 精密量取0.2ml于具塞試管中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下自“分別加蒸餾水至1.0ml”起依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
制備好的注射劑每支含人參中的多糖類成分以葡萄糖計(jì)，應(yīng)為4～60mg。
指紋圖譜參照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)，結(jié)合指紋圖譜的要求進(jìn)行測(cè)定[4.1]人參藥材指紋圖譜[4.1.1]藥材名稱和來(lái)源本人參藥材指紋圖譜中的人參選用紅參，紅參為五加科植物人參Panaxginseng C.A.Mey.的栽培品(習(xí)稱“園參”)經(jīng)蒸制后的干燥根及根莖。
人參藥材指紋圖譜的測(cè)定 色譜條件 色譜柱ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒徑5μm；流動(dòng)相乙腈與水為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件

柱溫25～35℃；分析時(shí)間60～120min；流速0.6～1.0ml/min；ELSD漂移管100～120℃，載氣流速2.0～4.0ml/min。理論板數(shù)以人參皂苷Rb1峰計(jì)應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品2mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 取紅參藥材粉末(過20目篩)2g，精密稱定，加70％乙醇回流提取2次，每次0.8～1.5小時(shí)，第一次加6～8倍量，第二次加5～7倍量；提取液濾過，濾液回收乙醇，濃縮，用等量水飽和的正丁醇振搖提取4～6次，合并正丁醇液，并用等量的氨試液洗滌；洗滌液棄去，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果 將人參皂苷Rb1峰設(shè)定為參照物峰，并以其峰面積的對(duì)數(shù)作為1.000，根據(jù)人參皂苷Rb1峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％；并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相對(duì)峰面積比(峰面積對(duì)數(shù)比)為0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191。
附子藥材指紋圖譜[4.2.1]附子藥材的名稱和來(lái)源附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。本附子藥材指紋圖譜中的附子選用黑順片。
附子藥材指紋圖譜的測(cè)定[4.2.2.1]色譜條件色譜柱ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)，填料粒徑5μm；流動(dòng)相甲醇與0.1％磷酸-0.04％三乙胺-水溶液為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件

柱溫25～35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；分析時(shí)間60～120min；流速0.7～1.3ml/min；理論板數(shù)以新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的新烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 附子藥材粗粉10g，用氨試液3～5ml、乙醚40～60ml冷浸過夜，濾過；藥渣加乙醚∶氯仿(2.8～3.2∶0.8～1.2)混合溶液40～60ml，超聲處理25～40min，濾過，藥渣用混合溶液洗滌3～4次，每次14～16ml，洗液與濾液合并，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，用0.45μm的濾膜濾過，即可進(jìn)行測(cè)定。
測(cè)定法 分別精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液15～25μl和供試品溶液30～50μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果 將新烏頭堿峰設(shè)定為參照物峰，根據(jù)新烏頭堿峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出8個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.146±10％、0.254±10％、0.531±10％、0.630±10％、0.727±10％、0.833±10％、1.000、1.114±10％；并以峰面積最穩(wěn)定且較大的相對(duì)保留時(shí)間為0.531±10％的峰之峰面積作為1.000，并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.727±10％、1.114±10％的峰的相對(duì)峰面積比為0.182～0.272、0.373～0.552。
人參皂苷指紋圖譜[4.3.1]色譜條件 色譜柱ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒徑5μm；乙腈與水為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件

柱溫25～35℃；分析時(shí)間60～120min；流速0.6～1.0ml/min；ELSD參數(shù)漂移管100～120℃，載氣流速2.0～4.0ml/min。理論板數(shù)以人參皂苷Rb1峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品2mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 取制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加水溶解至8～12ml，用等量的水飽和正丁醇振搖提取4～6次，合并正丁醇液，用等量的氨試液洗滌1～2次，分取正丁醇液，回收正丁醇，殘?jiān)谜麴s水溶解并定容至5ml量瓶中，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～15μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果 將人參皂苷Rb1峰設(shè)定為參照物峰，并以其峰面積的對(duì)數(shù)作為1.000，根據(jù)人參皂苷Rb1峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.441±10％、0.632±10％、0.942±10％、1.000、1.042±10％、1.062±10％、1.089±10％、1.188±10％、1.701±10％、1.737±10％；并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.441±10％、0.632±10％、1.042±10％、1.089±10％的峰的相對(duì)峰面積比(峰面積對(duì)數(shù)比)分別為0.688～1.148、0.673～1.121、0.692～1.154、0.688～1.146。
生物堿指紋圖譜[4.4.1]色譜條件 色譜柱ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒徑5μm；甲醇與0.1％磷酸-0.04％三乙胺水溶液為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件

柱溫25～35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；分析時(shí)間60～120min；理論板數(shù)以新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的新烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加1％磷酸溶液3ml，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密量取制備好的注射劑內(nèi)容物1.0g，加水溶解至8～12ml，置分液漏斗中，加氨試液調(diào)pH值至9～11，用等量的乙醚-氯仿(2.8～3.2∶0.8～1.2)的混合液振搖提取4～6次，合并萃取液，低溫?fù)]干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加入內(nèi)標(biāo)溶液40～60μl，濾過，作為供試品溶液。
測(cè)定法 分別精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液15～25μl和供試品溶液30～50μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果 將新烏頭堿峰設(shè)定為相對(duì)保留時(shí)間的參照物峰，根據(jù)新烏頭堿峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出5個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.259±10％、0.342±10％、0.532±10％、0.724±10％、1.000±10％；并以峰面積最穩(wěn)定且較大的相對(duì)保留時(shí)間為0.532±10％的峰之峰面積作為1.000，并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.724±10％的峰的相對(duì)峰面積比為0.455～0.683。
所述的一種原料中含有人參和附子的注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑的質(zhì)量控制方法，其各具體步驟如下[1]鑒別[1.1]人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的鑒別取制備好的注射劑內(nèi)容物1.0g，加水30ml溶解，加氯仿40ml，振搖，取水液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加入水飽和的正丁醇10ml超聲處理30分鐘，取正丁醇液置分液漏斗中，加入3倍量的氨試液，洗滌，洗液棄去，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參藥材1g(過60目篩)，加乙醇30ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，濾過，濾液同法制成人參藥材溶液。再分別取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各2.5～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與人參藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
附子的鑒別取制備好的注射劑內(nèi)容物3.5g，加水30ml溶解，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至10，加乙醚振搖提取3次，每次45ml，醚液低溫蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，做為供試品溶液。另取附子藥材粗粉20g，置具塞錐形瓶中，加乙醚150ml，振搖10分鐘，加氨試液10ml，振搖30分鐘，放置1～2小時(shí)，分取醚層，揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為附子藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各12～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板(厚500μm)上，層析缸先以氨水飽和，以石油醚-乙醚-丙酮(5∶3∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與附子藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
檢查[2.1]烏頭類生物堿的限量檢查 對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取上述對(duì)照品溶液0.25ml、0.50ml、0.75ml、1.00ml、1.50ml、1.75ml、2.00ml，分別置分液漏斗中，分別加入0.01mol/L鹽酸溶液1.75ml、1.50ml、1.25ml、1.00ml、0.50ml、0.25ml、0.00ml，分別精密加入醋酸-醋酸鈉緩沖液(取0.2mol/L醋酸溶液250ml，用0.2mol/L醋酸鈉溶液調(diào)pH值至3.1)10ml，溴甲酚綠液(取溴甲酚綠50mg，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿振搖提取3次，每次30ml，棄去氯仿液)2ml，氯仿10ml，振搖3分鐘，靜置，分取氯仿液，隨行空白，照分光光度度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)在415nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備 取制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加水10ml溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加氨試液調(diào)節(jié)pH值至10～11，用等量的氯仿振搖提取4次，合并氯仿液，蒸干。殘?jiān)?.01mol/L鹽酸溶液分次溶解，并轉(zhuǎn)入10ml量瓶中，稀釋至刻度搖勻，即得。
測(cè)定法 精密量取上述供試品溶液2ml，分別置分液漏斗中，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
制備好的注射劑每支含烏頭類生物堿以烏頭堿(C24H47NO11)計(jì)，不得高于1.0mg。
含量測(cè)定[3.1]人參皂苷Rg1和Re的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)測(cè)定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rg1及人參皂苷Re對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.3mg、人參皂苷Re0.2mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，置5ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
制備好的注射劑每支含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量之和應(yīng)為0.8～1.4mg。
人參總皂苷的含量測(cè)定[3.2.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rb10.3mg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取上述人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，分別置具塞試管中，揮去溶劑，各加入5％香草醛—冰醋酸溶液(新鮮配制)0.2ml及高氯酸0.8ml，于60℃水浴上加熱15min，取出，迅速冷卻，加冰醋酸5ml，搖勻，同時(shí)以相應(yīng)的試劑作為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)于556nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加蒸餾水10ml溶解，置分液漏斗中，用氯仿振搖提取4次，每次10ml，棄去氯仿液，水液再以水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10ml，棄去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 精密量取樣品溶液0.1ml置具塞試管中，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”項(xiàng)下自“揮去溶劑”起依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
制備好的注射劑每支含人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)，應(yīng)為8.0～15.0mg。
人參中多糖類成分的含量測(cè)定[3.3.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1ml含葡萄糖0.2mg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，0.8ml，分別置具塞試管中，分別加水使成1.0ml，各精密加入新鮮配制的0.2％蒽酮硫酸(硫酸濃度為80％)溶液8ml，搖勻，在100℃水浴中加熱10分鐘，迅速冷卻后，隨行空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄V A)在620nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物3.5g，精密稱定，加水30ml溶解后，加入乙醇使含醇量達(dá)80％，離心，沉淀?yè)]干乙醇后加入蒸餾水溶解，并定容至100ml量瓶中。取上述溶液2ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 精密量取0.2ml于具塞試管中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下自“分別加蒸餾水至1.0ml”起依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得。
制備好的注射劑每支含人參中的多糖類成分以葡萄糖計(jì)，應(yīng)為27～47mg。
指紋圖譜參照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI D)，結(jié)合指紋圖譜的要求進(jìn)行測(cè)定[4.1]人參藥材指紋圖譜[4.1.1]藥材名稱和來(lái)源本人參藥材指紋圖譜中的人參選用紅參，紅參為五加科植物人參Panaxginseng C.A.Mey.的栽培品(習(xí)稱“園參”)經(jīng)蒸制后的干燥根及根莖。
人參藥材指紋圖譜的測(cè)定[4.1.2.1]色譜條件 色譜柱ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒徑5μm；流動(dòng)相乙腈與水為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件

柱溫30℃；分析時(shí)間60min；流速0.8ml/min；ELSD漂移管110℃，載氣流速3.0ml/min。理論板數(shù)以人參皂苷Rb1峰計(jì)應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品2mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 取紅參藥材粉末(過20目篩)2g，精密稱定，加70％乙醇回流提取兩次，每次1小時(shí)，第一次加7倍量，第二次加6倍量；提取液濾過，濾液回收乙醇，濃縮，用等量水飽和的正丁醇振搖提取5次，合并正丁醇液，并用等量的氨試液洗滌；洗滌液棄去，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果 將人參皂苷Rb1峰設(shè)定為參照物峰，并以其峰面積的對(duì)數(shù)作為1.000，根據(jù)人參皂苷Rb1峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％；并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相對(duì)峰面積比(峰面積對(duì)數(shù)比)為0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191。
附子藥材指紋圖譜[4.2.1]附子藥材的名稱和來(lái)源附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。本附子藥材指紋圖譜中的附子選用黑順片。
附子藥材指紋圖譜的測(cè)定[4.2.2.1]色譜條件色譜柱ZORBAX SBC18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒徑5μm；流動(dòng)相甲醇與0.1％磷酸-0.04％三乙胺-水溶液為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件

柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；分析時(shí)間60min；流速1.0ml/min；理論板數(shù)以新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的新烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 附子藥材粗粉10g，用氨試液4ml、乙醚50ml冷浸過夜，濾過；藥渣加乙醚∶氯仿(3∶1)混合溶液50ml，超聲處理30min，濾過，藥渣用混合溶液洗滌3～4次，每次15ml，洗液與濾液合并，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，用0.45μm的濾膜濾過，即可進(jìn)行測(cè)定。
測(cè)定法 分別精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液20μl和供試品溶液40μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果 將新烏頭堿峰設(shè)定為參照物峰，根據(jù)新烏頭堿峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出8個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.146±10％、0.254±10％、0.531±10％、0.630±10％、0.727±10％、0.833±10％、1.000、1.114±10％；并以峰面積最穩(wěn)定且較大的相對(duì)保留時(shí)間為0.531±10％的峰之峰面積作為1.000，并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.727±10％、1.114±10％的峰的相對(duì)峰面積比為0.182～0.272、0.373～0.552。
人參皂苷指紋圖譜[4.3.1]色譜條件 色譜柱ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒徑5μm；乙腈與水為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件

柱溫30℃；分析時(shí)間60min；流速0.8ml/min；ELSD參數(shù)漂移管110℃，載氣流速3.0ml/min。理論板數(shù)以人參皂苷Rb1峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。
對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品2mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 取制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加水溶解至10ml，用等量的水飽和正丁醇振搖提取5次，合并正丁醇液，用等量的氨試液洗滌1次，分取正丁醇液，回收正丁醇，殘?jiān)谜麴s水溶解并定容至5ml量瓶中，搖勻，即得。
測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果 將人參皂苷Rb1峰設(shè)定為參照物峰，并以其峰面積的對(duì)數(shù)作為1.000，根據(jù)人參皂苷Rb1峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.441±10％、0.632±10％、0.942±10％、1.000、1.042±10％、1.062±10％、1.089±10％、1.188±10％、1.701±10％、1.737±10％；并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.441±10％、0.632±10％、1.042±10％、1.089±10％的峰的相對(duì)峰面積比(峰面積對(duì)數(shù)比)分別為0.688～1.148、0.673～1.121、0.692～1.154、0.688～1.146。
生物堿指紋圖譜[4.4.1]色譜條件 色譜柱ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒徑5μm；甲醇與0.1％磷酸-0.04％三乙胺水溶液為流動(dòng)相，梯度條件見下表
梯度條件

柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；分析時(shí)間60min；理論板數(shù)以新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。
內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的新烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加1％磷酸溶液3ml，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
供試品溶液的制備 精密量取制備好的注射劑內(nèi)容物1.0g，加水溶解至10ml，置分液漏斗中，加氨試液調(diào)pH值至10，用等量的乙醚-氯仿(3∶1)的混合液振搖提取5次，合并萃取液，低溫?fù)]干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加入內(nèi)標(biāo)溶液50μl，濾過，作為供試品溶液。
測(cè)定法 分別精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液20μl和供試品溶液40μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
結(jié)果 將新烏頭堿峰設(shè)定為相對(duì)保留時(shí)間的參照物峰，根據(jù)新烏頭堿峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出5個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.259±10％、0.342±10％、0.532±10％、0.724±10％、1.000±10％；并以峰面積最穩(wěn)定且較大的相對(duì)保留時(shí)間為0.532±10％的峰之峰面積作為1.000，并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.724±10％的峰的相對(duì)峰面積比為0.455～0.683。
本發(fā)明的藥物制劑，保留了人參中的多糖類成分，可以添加起協(xié)同作用的藥物，更加全面的保留和發(fā)揚(yáng)了傳統(tǒng)古方“參附湯”的優(yōu)良藥效，同時(shí)采用了先進(jìn)的質(zhì)量控制方法，如指紋圖譜技術(shù)，使本發(fā)明的藥物制劑的質(zhì)量穩(wěn)定可控，一改中藥制劑的質(zhì)量可控性較差的缺點(diǎn)。能發(fā)揮更好的臨床療效，為臨床使用提供更多更好的用藥選擇。
本發(fā)明的口服固體制劑攜帶服用方便，大幅減少了藥物體積，改變了傳統(tǒng)中藥量大、攜帶服用不便的缺點(diǎn)；本發(fā)明的注射液的有效成分的種類比現(xiàn)有市售的參附注射液多，能更加全面的保留和發(fā)揚(yáng)古方的療效，起效迅速；本發(fā)明的注射用凍干制劑在注射液所有優(yōu)點(diǎn)的基礎(chǔ)上，儲(chǔ)存時(shí)間更長(zhǎng)，性質(zhì)更穩(wěn)定，起效迅速。同時(shí)本發(fā)明人通過大量的正交篩選實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選適宜的制備方法，在本發(fā)明中可以采用超濾技術(shù)，除去大分子雜質(zhì)，也可以再除去小分子雜質(zhì)，更好的保證制劑的穩(wěn)定性。
同時(shí)本發(fā)明的藥物制劑的制備方法不繁瑣，可以較好的控制成本。制成的制劑性質(zhì)穩(wěn)定，質(zhì)量可控，可口服給藥或注射給藥?？捎糜谥委熽?yáng)氣暴脫的厥脫癥(感染性、失血性、失液性休克等)；也可用于陽(yáng)虛(氣虛)所致的驚悸、怔忡、喘咳、胃疼、泄瀉、痹癥等，及其它原“參附湯”所治疾病。能為臨床使用提供更多更好的用藥選擇。
本發(fā)明的藥物制劑的主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明的藥物制劑具有優(yōu)良的藥理作用。
從本發(fā)明的藥物制劑的主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)中可以看出，本發(fā)明制得的“注射用參附(凍干)”，主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明在同等劑量下，其與目前市場(chǎng)上銷售的參附注射液(雅安三九藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)041103)相比，注射用參附(凍干)高劑量組延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧的存活時(shí)間顯著的更長(zhǎng)，增加冠脈流量、抑制CK、LDH釋放的作用更強(qiáng)。證明了本發(fā)明的有益效果。
具體實(shí)施例方式
下面將通過實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述，這些描述并不是對(duì)本發(fā)明內(nèi)容做進(jìn)一步的限定。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)理解，對(duì)本發(fā)明的技術(shù)特征所作的同等替換，或相應(yīng)的改進(jìn)，仍屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1處方

制備方法(1)人參分別加6倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，藥液濃縮至每1ml相當(dāng)于含人參生藥1.45～1.55g，每次加入等量的水飽和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參皂苷中間體，備用；(2)醇提后的紅參藥渣分別加9倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉模嗉?倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，濃縮至藥液濃度為0.75～0.85g生藥/ml，溫度為38～42℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到80％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液，調(diào)整上清液藥液濃度為1.95～2.05g生藥/ml，加入95％的乙醇使含醇量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液(或不離心，濾過后直接取濾液)，上一步所得上清液或?yàn)V液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液采用截留分子量100K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量2K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；(3)附子藥材加8倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，濃縮至藥液相對(duì)密度1.09～1.13，溫度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.27～1.31時(shí)加入95％的乙醇使醇含量達(dá)85％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，即得附子中間體，備用；濾液加熱至沸，保持微沸38～45分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用；(4)將“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體合并，混勻，過濾，濃縮成清膏；(5)將除95％乙醇、硬脂酸鎂外的輔料過60～80目篩，混勻，與“(4)”所得物混勻，加入適量的95％乙醇，制成軟材，擠壓過20～24目篩制粒，40℃至65℃干燥1h至4h，過20目篩整粒，加入硬脂酸鎂，混勻，(6)將上述顆粒壓片，即得一種原料中含有人參和附子的片；(7)將“(6)”所得片包薄膜衣或包糖衣，即得原料中含有人參和附子的片劑；(8)將“(5)”所得顆粒填充至膠囊，然后將所得膠囊拋光，即得一種原料中含有人參和附子的膠囊。
實(shí)施例2處方





制備方法備注本實(shí)施例中同類制劑處方的制備方法相同。
(1)人參分別加6倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，藥液濃縮至每1ml相當(dāng)于含人參生藥1.45～1.55g，每次加入等量的水飽和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參皂苷中間體，備用；(2)醇提后的紅參藥渣分別加9倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，濃縮至藥液濃度為0.75～0.85g生藥/ml，溫度為38～42℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到80％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液，調(diào)整上清液藥液濃度為1.95～2.05g生藥/ml，加入95％的乙醇使含醇量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液(或不離心，濾過后直接取濾液，用于口服液體制劑的制備)，上一步所得上清液或?yàn)V液即為人參的多糖類成分中間體，備用，用于口服液體制劑的制備；或上一步所得上清液采用截留分子量100K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，用于口服液體制劑、注射劑的制備；或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，用于口服液體制劑、注射劑的制備；或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，用于口服液體制劑、注射劑的制備；或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，用于口服液體制劑、注射劑的制備；或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量2K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，用于口服液體制劑、注射劑的制備；或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，用于口服液體制劑、注射劑的制備；(3)附子藥材加8倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，濃縮至藥液相對(duì)密度1.09～1.13，溫度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.27～1.31時(shí)加入95％的乙醇使醇含量達(dá)85％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，濾液加熱至沸，保持微沸38～45分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用；
或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用；(4)將“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體合并，混勻，加純化水或注射用水至全量，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加熱至沸，保持微沸38～42分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過，濾液調(diào)節(jié)pH值至7.0，加純化水或注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，濾過，按劑量分裝至口服液包裝容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的口服液。
(5)將“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體合并，混勻，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加熱至沸，保持微沸40～45分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過，(調(diào)節(jié)pH值至7.0)，加入0.1％活性炭加熱至沸，保持微沸20～25分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，過0.45μm微孔濾膜，按劑量分裝至注射液包裝用容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的注射液。
(6)將“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體合并，混勻，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加熱至沸，保持微沸40～45分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過，濾液中加入甘露醇/或山梨醇，攪勻，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入0.1％活性炭加熱至沸，保持微沸20～25分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，過0.45μm微孔濾膜，無(wú)菌分裝至管制注射劑玻璃瓶中，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑。
(7)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段預(yù)凍溫度-56℃～-45℃，預(yù)凍時(shí)間約2.5～6小時(shí)；b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-56℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-21℃～-19℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束。
c再干燥階段擱板溫度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間4～11小時(shí)。
實(shí)施例3處方

制備方法(1)人參分別加6倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，藥液濃縮至每1ml相當(dāng)于含人參生藥1.45～1.55g，每次加入等量的水飽和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參皂苷中間體，備用；(2)醇提后的紅參藥渣分別加9倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，濃縮至藥液濃度為0.75～0.85g生藥/ml，溫度為37～43℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到80％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液，調(diào)整上清液藥液濃度為1.95～2.05g生藥/ml，加入95％的乙醇使含醇量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液，將上清液先用截留分子量500K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；(3)附子藥材加8倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，濃縮至藥液相對(duì)密度1.09～1.13，溫度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.27～1.31時(shí)加入95％的乙醇使醇含量達(dá)85％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，濾液加熱至沸，保持微沸38～45分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用；(4)將“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體合并，混勻，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加熱至沸，保持微沸40～45分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過，濾液中加入甘露醇，攪勻，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入0.1％活性炭加熱至沸，保持微沸20～25分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，過0.45μm微孔濾膜，無(wú)菌分裝至管制注射劑玻璃瓶中，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑。(備注調(diào)節(jié)pH值使用1mol/L氫氧化鈉溶液，或使用1mol/L鹽酸溶液。)(5)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段選擇反復(fù)預(yù)凍，預(yù)凍溫度-56℃～-45℃，回溫溫度-11℃～-10℃，預(yù)凍時(shí)間約4～7小時(shí)。
b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-56℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-21℃～-19℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束。
c再干燥階段擱板溫度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間4～11小時(shí)。
實(shí)施例4處方

制備方法(1)人參分別加6倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，藥液濃縮至每1ml相當(dāng)于含人參生藥1.45～1.55g，每次加入等量的水飽和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參皂苷中間體，備用；(2)醇提后的紅參藥渣分別加9倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉模嗉?倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，濃縮至藥液濃度為0.75～0.85g生藥/ml，溫度為37～43℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到80％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液，調(diào)整上清液藥液濃度為1.95～2.05g生藥/ml，加入95％的乙醇使含醇量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液，將上清液先用截留分子量500K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；(3)附子藥材加8倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，濃縮至藥液相對(duì)密度1.09～1.13，溫度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用；(4)將“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體合并，混勻，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加熱至沸，保持微沸40～45分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過，濾液中加入甘露醇/或山梨醇，攪勻，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入0.1％活性炭加熱至沸，保持微沸20～25分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，過0.45μm微孔濾膜，無(wú)菌分裝至管制注射劑玻璃瓶中，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑。(備注調(diào)節(jié)pH值使用1mol/L氫氧化鈉溶液，或使用1mol/L鹽酸溶液。)(5)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段選擇反復(fù)預(yù)凍，預(yù)凍溫度-56℃～-45℃，回溫溫度-11℃～-10℃，預(yù)凍時(shí)間約4～7小時(shí)。
b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-56℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-21℃～-19℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束。
c再干燥階段擱板溫度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間4～11小時(shí)。
實(shí)施例5處方

制備方法(1)人參分別加6倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，藥液濃縮至每1ml相當(dāng)于含人參生藥1.45～1.55g，每次加入等量的水飽和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參皂苷中間體，備用；(2)醇提后的紅參藥渣分別加9倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，濃縮至藥液濃度為0.75～0.85g生藥/ml，溫度為37～43℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到80％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液，調(diào)整上清液藥液濃度為1.95～2.05g生藥/ml，加入95％的乙醇使含醇量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液，或上一步所得上清液采用截留分子量100K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量2K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量500K超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量2K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；(3)附子藥材加8倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，濃縮至藥液相對(duì)密度1.09～1.13，溫度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.27～1.31時(shí)加入95％的乙醇使醇含量達(dá)85％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，濾液加熱至沸，保持微沸35～45分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用；(4)將“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體合并，混勻，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加熱至沸，保持微沸40～45分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過，濾液中加入甘露醇，攪勻，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加入0.1％活性炭加熱至沸，保持微沸20～25分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，過0.45μm微孔濾膜，無(wú)菌分裝至管制注射劑玻璃瓶中，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑。
(5)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段選擇反復(fù)預(yù)凍，預(yù)凍溫度-56℃～-45℃，回溫溫度-11℃～-10℃，預(yù)凍時(shí)間約4～7小時(shí)。
b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-56℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-21℃～-19℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束。
c再干燥階段擱板溫度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間4～11小時(shí)。
實(shí)施例6處方


制備方法(1)人參分別加6倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉模嗉?倍量)70％乙醇回流提取2次，每次2小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，藥液濃縮至每1ml相當(dāng)于含人參生藥1.45～1.55g，每次加入等量的水飽和正丁醇萃取6次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參皂苷中間體，備用；(2)醇提后的紅參藥渣分別加9倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)煎煮提取或回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過，濃縮至藥液濃度為0.75～0.85g生藥/ml，溫度為37～43℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到80％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液，調(diào)整上清液藥液濃度為1.95～2.05g生藥/ml，加入95％的乙醇使含醇量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液，上一步所得上清液采用截留分子量100K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液采用截留分子量200K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液采用截留分子量500K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量200K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量2K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量2K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；或上一步所得上清液先用截留分子量500K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量5K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用；(3)附子藥材加8倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?倍量)，煎煮提取或回流提取3次，每次1小時(shí)，濾過，濃縮至藥液相對(duì)密度1.09～1.13，溫度47～53℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)70％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.27～1.31時(shí)加入95％的乙醇使醇含量達(dá)85％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，濾液加熱至沸，保持微沸38～45分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.95～1.05g，每次加入1.0～1.1倍量的二氯甲烷萃取5次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用；(4)將“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體合并，混勻，加注射用水至全量，調(diào)節(jié)pH值至7.0，加熱至沸，保持微沸40～45分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過，濾液中加入鹽酸納洛酮/或鹽酸多巴胺(鹽酸納洛酮/或鹽酸多巴胺已溶于少量水中，調(diào)整水溶液pH值至7左右，并過濾)、甘露醇，攪勻，調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，加入0.1％活性炭加熱至沸，保持微沸20～25分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至7.0左右，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，過0.45μm微孔濾膜，無(wú)菌分裝至管制注射劑玻璃瓶中，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑。
(5)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段預(yù)凍溫度-56℃～-45℃，預(yù)凍時(shí)間約2.5～6小時(shí)；或選擇反復(fù)預(yù)凍，預(yù)凍溫度-56℃～-45℃，回溫溫度-11℃～-10℃，預(yù)凍時(shí)間約4～7小時(shí)。
b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-56℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-21℃～-19℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束。
c再干燥階段擱板溫度慢慢升至0℃～20℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間4～11小時(shí)。
實(shí)施例7以下是本發(fā)明的藥物制劑的主要藥效學(xué)試驗(yàn)。
1實(shí)驗(yàn)?zāi)康募皟?nèi)容根據(jù)注射用參附(凍干)的臨床用途，在動(dòng)物上進(jìn)行主要藥效學(xué)驗(yàn)證，主要進(jìn)行以下實(shí)驗(yàn)注射用參附(凍干)高、中、低劑量組對(duì)對(duì)小鼠常壓耐缺氧存活時(shí)間的影響，對(duì)垂體持葉素(Pit)所致大鼠急性心肌缺血的影響，對(duì)急性大鼠血瘀模型的影響，對(duì)離體大鼠心臟缺血再灌注損傷的影響，對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞的影響，對(duì)麻醉犬血流動(dòng)力學(xué)的影響。
2實(shí)驗(yàn)材料2.1受試藥物注射用參附(凍干)，由天津市軒宏醫(yī)藥技術(shù)有限公司提供，批號(hào)040710，采用本發(fā)明實(shí)施例3所用處方和制備方法制成。臨用前用一定體積的0.9％的氯化鈉注射液配制成所需要的濃度。
2.2藥品與試劑參附注射液，雅安三九藥業(yè)有限公司，批號(hào)041103(即為本實(shí)驗(yàn)中所指的參附原藥組所用藥品)；丹參注射液，正大青春寶藥業(yè)有限公司，批號(hào)0405202；硝酸甘油注射液，北京益民藥業(yè)有限公司，批號(hào)040217；肝素鈉注射液，常州生物千紅制藥有限公司，批號(hào)040615；枸椽酸鈉，上海實(shí)意化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)040128；鹽酸腎上腺素，天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)0403031；戊巴比妥鈉，北京化學(xué)試劑公司，批號(hào)020402；垂體后葉素，上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號(hào)040501；烏拉坦，中國(guó)醫(yī)藥公司上海化學(xué)試劑公司，批號(hào)20021104；乳酸脫氫酶(LDH-L)試劑盒，sysmex濟(jì)南希森美康醫(yī)用有限公司，批號(hào)ZG4001；肌酸激酶(CK)試劑盒，sysmex濟(jì)南希森美康醫(yī)用有限公司，批號(hào)ZG4004；氯化鈉，AR級(jí)，上海實(shí)意化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)050705；氯化鉀，AR級(jí)，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)021031；氯化鈣，AR級(jí)，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)030619；碳酸氫鈉，AR級(jí)，上海虹光化工廠，批號(hào)030604；葡萄糖，AR級(jí)，上海精析化工科技有限公司，批號(hào)030823；活化部分凝血酶原時(shí)間(APTT)測(cè)定試劑盒，北京世帝科學(xué)儀器公司批號(hào)ST20201-20；纖維蛋白原(FIB)測(cè)定試劑盒，北京世帝科學(xué)儀器公司批號(hào)ST20401-16；凝血酶原時(shí)間(PT)測(cè)定試劑盒，北京世帝科學(xué)儀器公司批號(hào)ST10101-22；洛氏液配制NaCl 9.0g/L，KCl 0.42g/L，CaCl20.24g/L，NaHCO30.2g/L，Glu 1.0g/L；甲醛南京化學(xué)試劑廠，批號(hào)20040721。
2.3實(shí)驗(yàn)儀器RM-6000八道生理記錄儀及附件，日本NIHON KOHDEN公司；DH140人工呼吸器，浙江醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)儀器實(shí)驗(yàn)廠；DHG-9053A型電熱恒溫干燥箱，上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠；FA2104上皿電子天平，上海天平儀器廠；JNA型精密扭力天平，上海第二天平儀器廠；心電圖儀，日本NIHON KOHDEN公司；Vitalab 200型全自動(dòng)生化分析儀，荷蘭vital scientific公司；BT01-100型恒流泵，保定蘭格恒流泵有限公司；灌流裝置自制Langendorff灌流裝置；LMS-2B型二道生理記錄儀，成都儀器廠；WC/09-05恒溫槽，中國(guó)重慶銀河試驗(yàn)儀器有限公司。
2.4動(dòng)物昆明種小鼠，體重18～22g；SD大鼠，體重180-220g；家兔，體重2.0～2.4kg，雌雄各半，均由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物責(zé)任有限公司供給。合格證SCXK(滬)2003-0003。
雜種犬，體重7-10kg，雌雄兼用，均由南京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心收購(gòu)自市郊的雜種犬，實(shí)驗(yàn)前在該中心馴養(yǎng)，經(jīng)檢疫及驅(qū)蟲后，用于該項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。
3實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示(X±S)。所有計(jì)量資料采用Student-t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)。
變化率(發(fā)生率)％＝(X給藥后-X給藥前)/X給藥前×100％X給藥后為給藥后觀測(cè)值，X給藥前為給藥前觀測(cè)值。
3.1對(duì)小鼠常壓耐缺氧的影響3.1.1實(shí)驗(yàn)方法取昆明種小鼠120只，雌雄各半，隨機(jī)分為6組，即對(duì)照組(給予等容積的生理鹽水)、陽(yáng)性藥物組(丹參注射液20.0g生藥/kg)、參附原藥組(3.2g生藥/kg)、注射用參附(凍干)高、中、低(3.2、1.6、0.8g生藥/kg)。各組均通過尾靜脈給藥，給藥容積為20ml/kg。靜脈給藥15min后，將小鼠置于125ml密閉廣口瓶中(內(nèi)置鈉石灰20g)。以小鼠張口呼吸停止為小鼠死亡標(biāo)志，記錄小鼠的存活時(shí)間，超過60min的以60min計(jì)。
3.1.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
表1 注射用參附(凍干)對(duì)小鼠常壓耐缺氧的保護(hù)作用(X±SD)

與對(duì)照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
與注射用參附(凍干)高劑量組比較▲P＜0.05。
結(jié)果顯示，注射用參附(凍干)高、中劑量組及參附原藥組均能延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧的存活時(shí)間，與對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05)，且參附(凍干)高劑量組小鼠存活時(shí)間顯著長(zhǎng)于原藥組(P＜0.05)。
3.2對(duì)垂體后葉素(Pit)所致大鼠心肌缺血的影響3.2.1實(shí)驗(yàn)方法取健康SD大鼠56只，雌雄各半，體重180～220g，隨機(jī)分為7組，即正常組、模型組(以上兩組給予等容積的生理鹽水)、陽(yáng)性藥物組(硝酸甘油0.5mg/kg)、注射用參附(凍干)低、中、高(0.4、0.8、1.6g生藥/kg)3個(gè)劑量組、參附原藥組(1.6g生藥/kg)。實(shí)驗(yàn)前大鼠禁食不禁水12h，腹腔注射烏拉坦1g/kg麻醉，取仰臥位，針狀電極小心刺入四肢皮下，測(cè)定II導(dǎo)聯(lián)心電圖，手術(shù)后穩(wěn)定15min，并記錄正常心電圖。各組動(dòng)物分別經(jīng)尾靜脈注射給藥，15min后，除正常對(duì)照組外，各組分別經(jīng)舌下靜脈注射垂體后葉素1.5u/kg，注射時(shí)間不超過5s。立即記錄注射垂體后葉素后15s、30s、1min、2min、3min、5min、7min、10min、15min的心電圖。
觀察指標(biāo)主要定為T波高度變化、心率變化。T波高度測(cè)量以PR段為基線，每時(shí)間點(diǎn)測(cè)3個(gè)連續(xù)的波型，取其平均值。記錄并計(jì)算T波高度的變化值(無(wú)論升高或降低，取變化的絕對(duì)值)。對(duì)于T波高度變化及心率等時(shí)序關(guān)系的動(dòng)態(tài)觀察指標(biāo)，在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上，以用藥后的變化值作組間t檢驗(yàn)。
20.3.2.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2、表3。
(1)注射用參附對(duì)垂體后葉素所致心肌缺血大鼠心電圖T波位移的影響，見表2。
表2 對(duì)垂體后葉素所致心肌缺血大鼠心電圖T波的影響(X±S)(n＝8)

與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與參附高劑量組比較*P＜0.05正常對(duì)照組大鼠靜脈注射垂體后葉素后，心電發(fā)生明顯改變，第一期(1～30s)出現(xiàn)明顯的T波高聳；第二期(30s以后)，呈現(xiàn)明顯的T波低平或倒置。
注射用參附(凍干)高、中、低劑量及原藥組在15s時(shí)間點(diǎn)可顯著對(duì)抗垂體后葉素引起的心電T波位移(P＜0.01)，參附(凍干)高、中劑量及原藥組在30s時(shí)間點(diǎn)可顯著對(duì)抗垂體后葉素引起的心電T波位移(P＜0.05)，且高、中、低劑量之間存在一定的量效關(guān)系，參附高劑量組與原藥比在15s、30s、1min、5min也顯著性差異(P＜0.05)。
(2)注射用參附對(duì)垂體后葉素所致心肌缺血大鼠心率的影響，結(jié)果見表3。
表3 對(duì)垂體后葉素所致心肌缺血大鼠心率的影響(X±S)(n＝8)

與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；
正常對(duì)照組大鼠靜脈注射垂體后葉素后，可使大鼠心率明顯減慢，至15min仍未恢復(fù)。注射用參附(凍干)高劑量在10min時(shí)能緩解垂體后葉素所致的心率減慢，參附原藥在2min時(shí)能緩解垂體后葉素所致的心率減慢，與模型組比差異顯著(P＜0.05)，但參附(凍干)高劑量與參附原藥相比在緩解垂體后葉素所致的心率減慢的作用上并無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
3.2.3結(jié)論注射用參附(凍干)高、中、低劑量及原藥能明顯對(duì)抗垂體后葉素引起的心電圖T段的變化且高、中、低劑量之間存在一定的量效關(guān)系，參附(凍干)高劑量及原藥在某些時(shí)間點(diǎn)能緩解垂體后葉素所致的心率減慢，提示注射用參附(凍干)具有一定的對(duì)抗垂體后葉素所致心肌缺血的作用。
3.3對(duì)急性血瘀模型大鼠血液流變學(xué)的影響3.3.1實(shí)驗(yàn)操作方法取SD雄性大鼠56只，體重350～450g，隨機(jī)分為7組，即正常對(duì)照組、模型組(以上兩組給予等容積的生理鹽水)、陽(yáng)性藥物組(10g生藥/kg丹參注射液)、注射用參附(凍干)低、中、高(0.4、0.8、1.6g生藥/kg)3個(gè)劑量組、參附原藥組(1.6g生藥/kg)，給藥容積為5ml/kg，靜脈連續(xù)給藥3天，于第2次給藥后，除正常對(duì)照組外，各組動(dòng)物皮下注射鹽酸腎上腺素注射液(Adr)0.8ml/kg共2次，間隔4h，在第二次注射Adr之前，將大鼠置于冰水中浸泡5min，造成血瘀癥模型。禁食，于手術(shù)前15min給藥1次，以10％水合氯醛麻醉(300mg/kg，ip)，仰位固定，頸動(dòng)脈插管放血，用3.8％的枸椽酸鈉或肝素鈉生理鹽水溶液(500ul/ml)按1∶9抗凝，檢測(cè)血液流變學(xué)的各項(xiàng)指標(biāo)。
3.3.2實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)(1)對(duì)大鼠血小板聚集率的影響將3.8％的枸椽酸鈉抗凝的血液以800r/min離心10min，取富血小板血漿(PRP)，剩余部分以3000r/min離心，取貧血小板血漿(PPP)，利用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析儀記錄最大聚集率并按下列公式計(jì)算抑制率。
聚集抑制率(％)＝[(模型組最大聚集率-給藥組最大聚集率)/模型組最大聚集率]×100％(2)血液粘度檢測(cè)①全血粘度將肝素抗凝的血液采用LG-R-80系列血液粘度儀測(cè)定。
②血漿粘度全血測(cè)試完畢后，剩余血樣以3000r/min離心，進(jìn)行血漿粘度的測(cè)試。
③紅細(xì)胞變形能力、紅細(xì)胞聚集能力檢測(cè)將肝素抗凝的血液采用LG-R-190型紅細(xì)胞變形/聚集能力測(cè)定儀。
(3)凝血系統(tǒng)的檢測(cè)將3.8％的枸椽酸鈉抗凝的血液以3000r/min離心10min，分離貧血小板血漿，采用LG-PABER型血小板聚集及凝血因子分析儀測(cè)定活化部分凝血酶原時(shí)間(APTT)、凝血酶原時(shí)間(PT)、血漿纖維蛋白原(FIB)。
3.3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4～表7。
(1)注射用參附(凍干)對(duì)血瘀癥模型大鼠血小板聚集率的影響，結(jié)果見表4。
表4 注射用參附(凍干)對(duì)血瘀癥模型大鼠血小板聚集率的影響(X±s)

與模型組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
(2)注射用參附(凍干)對(duì)血瘀癥模型大鼠紅細(xì)胞變形及聚集能力的影響，結(jié)果見表5。
表5 注射用參附(凍干)對(duì)血瘀癥模型大鼠紅細(xì)胞變形及聚集能力的影響(X±s)

與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
(3)注射用參附(凍干)對(duì)血瘀癥模型大鼠APTT、PT、FIB的影響，結(jié)果見表6。
表6 注射用參附(凍干)對(duì)血瘀癥模型大鼠APTT、PT、FIB的影響(n＝8，X±s)


與模型組比較*P＜0.05。
(4)注射用參附(凍干)對(duì)血瘀癥模型大鼠血液粘度的影響，結(jié)果見表7。
表7 注射用參附(凍干)對(duì)血瘀癥模型大鼠血液粘度的影響(n＝8，X±s)

與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01結(jié)果參附(凍干)高劑量可以抑制血小板聚集、降低紅細(xì)胞聚集能力、降低全血粘度(低切)及血漿粘度，延長(zhǎng)血漿PT、降低血漿纖維蛋白(FIB)含量，與模型組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)。中劑量亦可抑制血小板聚集、降低全血粘度(低切)及血漿粘度，與模型組比較差異顯著(P＜0.05)。參附原藥可以抑制血小板聚集、降低紅細(xì)胞聚集能力、降低全血粘度(低切)及血漿粘度，延長(zhǎng)血漿PT、降低血漿纖維蛋白(FIB)含量，與模型組比較差異顯著(P＜0.05)；但參附原藥與參附(凍干)高劑量相比并無(wú)顯著差異(P＞0.05)。
3.4對(duì)離體大鼠心臟缺血再灌注損傷的影響3.4.1實(shí)驗(yàn)操作(1)分組與劑量取SD大鼠56只，體重200g～300g，隨機(jī)分為7組，每組8只，雌雄各半。即(1)正常對(duì)照組含氧洛氏液；(2)模型組氮飽和洛氏液；(3)陽(yáng)性藥組氮飽和丹參注射液，1.3mg/ml；(4)注射用參附(凍干)高劑量組氮飽和參附，0.31mg/ml；(5)注射用參附(凍干)中劑量組氮飽和參附0.16mg/ml；(6)注射用參附(凍干)低劑量組氮飽和參附，0.08mg/ml；(7)參附原藥組氮飽和原參附注射液，0.31mg/ml。所用藥物均用洛氏液配制。
大鼠尾靜脈注射肝素鈉(1000U/kg)，15min后擊暈，開胸，將心臟迅速取出，移至貯有4℃洛氏液的培養(yǎng)皿中，盡量洗出心臟血液，在液面下迅速把主動(dòng)脈接于灌流的套管上，并以線結(jié)扎固定。立即以含氧洛氏液進(jìn)行灌流。灌注壓70cm水柱，灌流溫度38±0.5℃，流速11.5±0.5ml/min。用蛙心夾掛住心尖部并與換能器相連，連于二道生理記錄儀描記心率變化。心臟復(fù)跳及心率顯示正常后，穩(wěn)定30min，再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，該期間出現(xiàn)心律失常者棄去。
(2)方法采用缺氧再灌注損傷方法造模模型組以含氧洛氏液灌流30min使心臟工作穩(wěn)定后，調(diào)節(jié)三通開關(guān)至預(yù)先氮飽和洛氏液的灌流管一側(cè)，改用預(yù)先氮飽和洛氏液作為缺氧灌注40min，再恢復(fù)含氧洛氏液灌流40min。造成缺氧再灌注損傷模型。
陽(yáng)性藥組和各給藥組方法基本同上，僅在用預(yù)先氮飽和洛氏液作缺氧灌注時(shí)加入不同藥物灌注40min。
正常對(duì)照組以含氧洛氏液灌流110min。
記錄正常以及再灌注后第20、40min時(shí)冠脈流量及心率，測(cè)定各點(diǎn)灌流液中乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)的溢出量，計(jì)算變化率。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用10％甲醛固定心臟，作病理組織學(xué)檢查。
下降率％＝(停灌前-再灌注后)/停灌前×100％上升率％＝(再灌注后-停灌前)/停灌前×100％3.4.2統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Student-t檢驗(yàn)。
3.4.3結(jié)果 見表8～表11。
(1)注射用參附(凍干)對(duì)缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟心率的影響，結(jié)果見表8。
表8注射用參附(凍干)對(duì)缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟心率的影響(X±S)(n＝8)

與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組在停灌前心率均無(wú)差異，在再灌注后20min和40min時(shí)，注射用參附(凍干)高、中、低劑量組心率均低于模型組，下降率與模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)。注射用參附(凍干)高劑量組心率下降率與同濃度參附原藥相比，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
(2)注射用參附(凍干)對(duì)缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟冠脈灌流量的影響，結(jié)果見表9。
表9注射用參附(凍干)對(duì)缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟冠脈灌流量的影響(X±S)(n＝8)

與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組在停灌前灌流量與正常組比較均無(wú)差異，在再灌注后20min和40min時(shí)，注射用參附(凍干)高、中劑量組灌流量明顯高于模型組，其下降率低與模型組，有顯著性差異(P＜0.01)。參附(凍干)低劑量組灌流量下降率均低于模型組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。參附(凍干)三個(gè)劑量組在對(duì)冠脈灌流量的影響上，呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。參附(凍干)高劑量組冠脈灌流量下降率低于參附原藥組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
(3)注射用參附(凍干)對(duì)缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟CK的影響，結(jié)果見表10。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組在停灌前CK值與正常組比較均無(wú)差異，在再灌注后20min和40min時(shí)，注射用參附(凍干)高、中、低劑量組CK值顯著低于模型組，其上升率與模型組比較，低于模型組，有顯著性差異(P＜0.01)。參附(凍干)三個(gè)劑量組均能抑制心肌細(xì)胞損傷所致CK溢出，呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。參附(凍干)高劑量組CK值上升率低于同濃度參附原藥組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
表10注射用參附(凍干)對(duì)缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟CK的影響(X±S)(n＝8)

與模型組比較*P＜0.05；**P＜0.01。
(4)注射用參附(凍干)對(duì)缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟LDH的影響，結(jié)果見表11。
表11注射用參附(凍干)對(duì)缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟LDH的影響(X±S)(n＝8)

與模型組比較，*P＜0.05；**P＜0.01。高劑量組與對(duì)照組比較▲P＜0.05。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果各組在停灌前LDH值與正常組比較均無(wú)差異，在再灌注后20min和40min時(shí)，注射用參附(凍干)高、中劑量組LDH值均低于模型組，其上升率與模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01，P＜0.05)。參附(凍干)低劑量組在再灌注后20min時(shí)，LDH上升率低于模型組(P＜0.05)，再灌注后40min時(shí)，上升率亦低于模型組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。參附(凍干)三個(gè)劑量組均能抑制心肌細(xì)胞損傷所致LDH溢出，呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。參附(凍干)高劑量組LDH值均低于同濃度參附原藥組，且有一定差異(P＜0.05)，高劑量組LDH上升率低于同濃度參附原藥組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
3.4.4結(jié)論注射用參附(凍干)高、中劑量組在再灌注后20min和40min時(shí)，心率、灌流量下降率及CK、LDH上升率，均低于模型組(P＜0.01，P＜0.05)。提示參附(凍干)高、中劑量組能改善缺氧再灌注損傷所造成的心率下降，同時(shí)增加冠脈流量，抑制CK、LDH釋放。其中參附(凍干)高劑量組增加冠脈流量、抑制CK、LDH釋放的作用顯示出強(qiáng)于同濃度參附原藥組的趨勢(shì)。
注射用參附(凍干)低劑量組在再灌注后20min和40min時(shí)，心率下降率、CK上升率均與模型組有一定差異(P＜0.05，P＜0.01)，在再灌注后20min時(shí)，LDH上升率低于模型組(P＜0.05)。提示注射用參附(凍干)低劑量組能改善缺血再灌注所造成的心率下降、抑制CK、LDH釋放。
缺氧再灌注損傷大鼠離體心臟結(jié)果表明，注射用參附(凍干)主要通過改善缺氧再灌注損傷所造成的心率下降、擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、抑制心肌酶的溢出來(lái)發(fā)揮對(duì)心臟的保護(hù)作用，同時(shí)具有一定擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈流量，改善缺氧再灌注損傷所造成的心率下降的作用，三個(gè)劑量組在對(duì)冠脈灌流量和CK，LDH的影響上，均呈現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。
大鼠離體心臟缺血再灌注損傷組織病理檢查報(bào)告顯示注射用參附(凍干)對(duì)大鼠離體心肌缺血再灌注所致?lián)p傷有一定的保護(hù)作用。
3.5對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞的影響3.5.1實(shí)驗(yàn)方法取家犬35只，體重為7-10kg，隨機(jī)分為7組，每組5只動(dòng)物，雌雄兼用(1)假手術(shù)組給予等容積生理鹽水。(2)模型組給予等容積生理鹽水。(3)陽(yáng)性藥物丹參注射液對(duì)照組2.0g生藥/kg。(4)注射用參附(凍干)低劑量組0.2g生藥/kg。(5)注射用參附(凍干)中劑量組0.4g生藥/kg。(6)注射用參附(凍干)高劑量組0.8g生藥/kg。(7)參附原藥對(duì)照組0.4g生藥/kg。將各組動(dòng)物所用藥物溶于0.9％氯化鈉注射液中，給藥容積為1ml/kg。
家犬由前肢小隱靜脈用3％戊巴比妥鈉(30mg/kg)麻醉后，背位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪去頸部、胸部和左后肢內(nèi)側(cè)的毛。將針狀電極插入犬四肢皮下，記錄心電圖(ECG)。分離氣管并插入氣管插管。分離左側(cè)股動(dòng)脈、股靜脈，分離股靜脈插入靜脈插管，緩慢恒速輸入生理鹽水(約1ml/min)；分離股動(dòng)脈插入動(dòng)脈插管(管內(nèi)充滿500u/ml的肝素生理鹽水)接壓力換能器(TP-400T)，經(jīng)放大(AP-641G)測(cè)量動(dòng)脈收縮壓(SAP)、動(dòng)脈舒張壓(DAP)、平均動(dòng)脈壓(MAP)，定標(biāo)靈敏度為13.33kPa(100mmHg)/cm。聯(lián)接記錄儀的連線板直接由動(dòng)脈壓觸發(fā)心率記數(shù)儀(AT-601G)記錄心率(HR)。于左側(cè)第四、五肋間開胸，暴露心臟，并接人工呼吸機(jī)。打開心包膜，縫于胸壁，做成荷包搖籃。暴露右心耳，靜注肝素5-10mg/kg使肝素化，用心耳鉗夾住右心耳，作一荷包縫口，將縫線穿于一小段橡皮管內(nèi)，用小鋼絲將線勾入橡皮管，于荷包口中心剪一小口，迅速插入冠狀竇插管(內(nèi)徑4-5mm，管口為斜角，近管口處為圓形膨大，斜角面避免管口與竇壁緊貼，膨大部為使冠狀竇血不致外溢)，將小橡皮管內(nèi)荷包縫線拉緊，靠小橡皮管頂住插管，以避免出血，迅速將插管準(zhǔn)確插入冠狀竇，結(jié)扎右心耳處荷包縫線，固定插管。該插管的遠(yuǎn)端連接一三通管以備取血。用0號(hào)絲線結(jié)扎左冠狀動(dòng)脈前降支中下1/3處，假手術(shù)組只穿線不結(jié)扎。選擇梗塞區(qū)附近位置12個(gè)標(biāo)測(cè)點(diǎn)縫置心外膜電圖電極，并在遠(yuǎn)離梗塞區(qū)選一對(duì)照點(diǎn)，用手持絕緣金屬點(diǎn)狀電極按標(biāo)測(cè)點(diǎn)順序進(jìn)行標(biāo)測(cè)，經(jīng)傳感器(JB-642G)、放大器(AB-621G)，用八道生理記錄儀記錄心外膜電圖(EECG)(定標(biāo)1mm＝1mv)。結(jié)扎15min后經(jīng)股靜脈恒流泵恒速給藥(1ml/min)，直接記錄動(dòng)脈收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)、平均動(dòng)脈壓(MAP)、心率(HR)，并描記EECG及動(dòng)脈壓(BP)曲線。記錄結(jié)扎前、結(jié)扎15min和給藥后5、15、30、60、90、120min的EECG、SAP、DAP、MAP、HR。統(tǒng)計(jì)各標(biāo)測(cè)點(diǎn)EECG的ST段偏移∑-ST，以及ST段抬高≥2mv以上的N-ST。各組分別于給藥前和給藥60min后，左心室取血測(cè)動(dòng)脈血氧，冠狀竇處取血測(cè)冠狀竇血氧，兩者氧差反映心肌耗氧；各組分別于結(jié)扎前、結(jié)扎15min、給藥60min后股靜脈取血，用試劑盒測(cè)定血清CK、LDH值。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，立即取出心臟，用生理鹽水洗去血液后，稱取全心重和心室重量，并把心室橫切成5片，置于37℃ 1％TTC溶液中染色15min，剪去各心肌片被染色的非梗塞區(qū)，把未染色的梗塞區(qū)心肌稱重，除以全心重或心室重分別得到梗塞范圍占全心重或占心室重的百分率。
心肌耗氧量(kpa/min)＝MAP*HR3.5.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞BP(SAP、DAP、MAP、HR和心肌耗氧量的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射用參附(凍干)高，中劑量組能降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞麻醉犬的DAP、MAP、HR和心肌耗氧量，與模型組比較有明顯差異(P＜0.05，P＜0.01)，并且其中中劑量組與參附原藥組比較有顯著性差異(P＜0.05)。
(2)注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬動(dòng)靜脈血氧氣分壓(Po2)、動(dòng)靜脈血二氧化碳分壓(Pco2)的影響結(jié)果表明注射用參附(凍干)高、中劑量組與模型組比較，可顯著抑制冠脈結(jié)扎所致的動(dòng)靜脈氧差增加(P＜0.05)，且其中劑量組與參附原藥組比較某些點(diǎn)有顯著性差異(P＜0.01)。
(3)注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞∑-ST的影響結(jié)果表明注射用參附(凍干)高、中、低劑量組可降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞麻醉犬∑-ST，部分時(shí)間點(diǎn)與模型組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)，表明注射用參附(凍干)能明顯減輕心肌缺血程度，且其中劑量組與參附原藥組比較某些點(diǎn)有顯著性差異(P＜0.01)。
(4)注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞N-ST的影響結(jié)果表明注射用參附(凍干)高、中、低劑量組可降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞麻醉犬N-ST，部分時(shí)間點(diǎn)與模型組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)，且其中劑量組與參附原藥組某些點(diǎn)比較有顯著性差異(P＜0.01)。
(5)注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞的血清CK、LDH的影響。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射用參附(凍干)高、中、低劑量組，可減少麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞后血清中CK、LDH的釋放，與模型組比較差異顯著(P＜0.01)。
(6)注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞梗塞范圍的影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射用參附(凍干)高、中劑量組可減少麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞梗塞范圍，與模型組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)，且其中劑量組與參附原藥組比較有顯著性差異(P＜0.01)。
3.5.3結(jié)論麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射用參附(凍干)高，中劑量組能降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞麻醉犬的DAP、MAP、HR和心肌耗氧量，抑制冠脈結(jié)扎所致的動(dòng)靜脈氧差增加，部分時(shí)間點(diǎn)與模型組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)；高、中、低劑量組可降低冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞麻醉犬∑-ST，N-ST，部分時(shí)間點(diǎn)與模型組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)；高、中、低劑量組可減少麻醉犬冠脈結(jié)扎所致心肌梗塞后血清中LDH和CK的釋放，與模型組比較差異顯著(P＜0.05)，以上個(gè)指標(biāo)原藥組與中劑量組比較差異顯著。表明注射用參附(凍干)能明顯減輕心肌缺血程度。
3.6對(duì)麻醉犬血流動(dòng)力學(xué)的影響[5-6]3.6.1實(shí)驗(yàn)方法取家犬30只，雌雄兼用，隨機(jī)分為6組，每組5只動(dòng)物，即(1)正常對(duì)照組給予等容積生理鹽水；(2)陽(yáng)性藥丹參注射組2.0g生藥/kg。(3)注射用參附(凍干)低劑量組0.2g生藥/kg。(4)注射用參附(凍干)中劑量組0.4g生藥/kg。(5)注射用參附(凍干)高劑量組0.8g生藥/kg。(6)參附原藥組0.4g生藥/kg，將各組動(dòng)物所用藥物溶于0.9％氯化鈉注射液中，給藥容積為1ml/kg。
用3％戊巴比妥鈉30mg/kg前肢皮下頭靜脈麻醉，背位固定于手術(shù)臺(tái)上，頸部、胸部和左后肢內(nèi)側(cè)去毛備用。分離氣管并插入氣管插管；分離股靜脈插入靜脈插管，緩慢恒速輸入生理鹽水(約1ml/min)；分離股動(dòng)脈插入動(dòng)脈插管(管內(nèi)充滿500u/ml的肝素生理鹽水)，以測(cè)量動(dòng)脈血壓。人工呼吸下，于第4肋間開胸，剪開心包膜，縫于胸壁，分離升主動(dòng)脈根部和左冠狀動(dòng)脈前降支，放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計(jì)探頭(12mm，2mm)，連接于電磁血流量計(jì)上測(cè)量心輸出量(CO)和冠脈流量(CBF)。將左心室插管(管內(nèi)充滿肝素生理鹽水)經(jīng)左心室心尖部創(chuàng)口插入左心室內(nèi)，測(cè)量左室內(nèi)壓(LVSP)、左室舒張末期壓力(LVEDP)、室內(nèi)壓最大上升速率(LVdp/dtmax)；將針狀電極插入犬四肢皮下，記錄心電圖(ECG)。待穩(wěn)定后，用恒流泵經(jīng)股靜脈給藥(1ml/min)，直接記錄動(dòng)脈收縮壓(SAP)、舒張壓(DAP)、平均動(dòng)脈壓(MAP)、心率(HR)、心輸出量(CO)、冠脈流量(CBF)，并于八道生理記錄儀上描記ECG、左室內(nèi)壓(LVSP)、LVdp/dtmax、LVEDP及動(dòng)脈壓(BP)曲線。測(cè)量并計(jì)算給藥前后各時(shí)間段麻醉犬的BP(SAP、DAP、MAP)、HR、CO、CBF、LVSP、LVEDP、+dp/dtmax(心肌收縮參數(shù))、-dp/dtmax(心肌舒張參數(shù))、t～dp/dtmax(左室開始收縮至左室內(nèi)壓上升速率峰值時(shí)間)、射血時(shí)間、SV(每搏輸出量)、CI(心臟指數(shù))、SI(心搏指數(shù))、LVWI(左室作功指數(shù))、TTI(總耗氧指數(shù))、TPVR(總外周血管阻力)。
計(jì)算公式CI(心臟指數(shù))＝CO/體表面積； SV(每搏輸出量)＝CO*1000/HR；SI(心搏指數(shù))＝CI*1000/HR； TTI(總耗氧指數(shù))＝MAP*HR*射血時(shí)間；TPVR(總外周血管阻力)＝MAP/CO；LVWI(左室作功指數(shù))＝CI*1.025*(SAP-0.667)*13.6*0.0013.6.2實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬SAP、DAP、MAP、HR的影響結(jié)果表明注射用參附(凍干)高、中劑量組能降低麻醉犬的DAP，減慢心率，與正常對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)。
(2)注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬CO、CBF、SV、CI、SI的影響結(jié)果表明注射用參附(凍干)高、中劑量組能增加麻醉犬冠脈流量(CBF)、心搏指數(shù)(SI)、每搏輸出量(SV)，與正常對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)；高、中劑量組能明顯增加麻醉犬心輸出量(CO)、心臟指數(shù)(CI)，(與正常對(duì)照組比較P＜0.01)，且其中劑量組與參附原藥組比較差異顯著(P＜0.05)。
(3)對(duì)麻醉犬射血時(shí)間、LVSP、LVEDP的影響結(jié)果表明注射用參附(凍干)三各劑量組對(duì)麻醉犬射血時(shí)間、LVSP、LVEDP均無(wú)顯著影響。
(4)對(duì)麻醉犬+dp/dtmax、-dp/dtmax、t-dp/dtmax的影響結(jié)果表明注射用參附(凍干)三個(gè)劑量組對(duì)麻醉犬+dp/dtmax、-dp/dtmax和t-dp/dtmax無(wú)顯著影響(與正常對(duì)照組比較，P＞0.05)。
(5)對(duì)麻醉犬LVWI、TTI、TPVR的影響結(jié)果表明注射用參附(凍干)高、中兩個(gè)劑量組能減少麻醉犬總外周阻力(TPVR)、總耗氧量(TTI)，與正常對(duì)照組比較，差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)，且其中劑量組與參附原藥組比較差異顯著(P＜0.05)。
3.6.3實(shí)驗(yàn)結(jié)論麻醉犬血流動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明注射用參附(凍干)高、中劑量組能降低麻醉犬的DAP，減慢心率，減少麻醉犬總外周阻力(TPVR)、總耗氧量(TTI)，增加麻醉犬心輸出量(CO)、心臟指數(shù)(CI)，與正常對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)。高、中劑量組能增加麻醉犬冠脈流量(CBF)、心搏指數(shù)(SI)、每搏輸出量(SV)，與正常對(duì)照組比較差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)且以上個(gè)指標(biāo)原藥組與中劑量組比較差異顯著。
以上兩個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明注射用參附(凍干)對(duì)麻醉犬冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎所致的心肌缺血和心功能具有改善作用，在不降低心臟供血功能的基礎(chǔ)上，緩解心肌缺血程度。
由本主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，本發(fā)明制得的“注射用參附(凍干)”性質(zhì)穩(wěn)定，主要藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明在同等劑量下，其與目前市場(chǎng)上銷售的參附注射液相比，高劑量組延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧的存活時(shí)間顯著的更長(zhǎng)，高劑量組增加冠脈流量、抑制CK、LDH釋放的作用更強(qiáng)。證明了本發(fā)明的有益效果。
實(shí)施例8取實(shí)施例2中處方12、處方13所使用的原料和按相應(yīng)的制備方法(保留了5K～500K分子量的人參中的多糖類成分)制成的注射液，按“發(fā)明內(nèi)容”中“一種原料中含有人參和附子的注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑的質(zhì)量控制方法”中的方法進(jìn)行檢測(cè)(樣品取樣量按實(shí)施例3、實(shí)施例4中制劑成品內(nèi)容物的重量相對(duì)應(yīng)的原藥材的重量進(jìn)行相應(yīng)的折算)，符合該質(zhì)量控制方法中的規(guī)定。
實(shí)施例9取實(shí)施例3、實(shí)施例4所使用的原料和所得制劑，按“發(fā)明內(nèi)容”中“一種原料中含有人參和附子的注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑的質(zhì)量控制方法”中的方法進(jìn)行檢測(cè)，符合該質(zhì)量控制方法中的規(guī)定。
權(quán)利要求
1.一種原料中含有人參和附子的藥物制劑，其特征在于所述制劑中含有人參中的皂苷類成分、人參中的多糖類成分、附子中的生物堿類成分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于所述藥物制劑的原料主要為人參、附子，人參∶附子的比例為1-10∶1-10，或1-4∶1-8，或1-2∶1-4，或1∶2。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于所述人參和附子為野生品或人工栽培品，為道地藥材或非道地藥材。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于所述人參和附子為其鮮藥材或依傳統(tǒng)方法炮制而成的炮制品或依現(xiàn)代方法炮制而成的炮制品。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷1mg～90mg，人參總多糖2mg～282mg，附子總生物堿0.02mg～22mg；或者含有人參總皂苷2mg～60mg，人參總多糖4mg～188mg，附子總生物堿0.05mg～15mg；或者含有人參總皂苷2.5mg～45mg，人參總多糖6mg～141mg，附子總生物堿0.06mg～11mg。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)為8mg～15mg，人參總多糖以葡萄糖計(jì)為25mg～47mg，附子總生物堿0.2mg～3.6mg；或在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)為16mg～30mg，人參總多糖以葡萄糖計(jì)為50mg～94mg，附子總生物堿0.4mg～7.2mg；或在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)為40mg～75mg，人參總多糖以葡萄糖計(jì)為125mg～235mg，附子總生物堿1mg～18mg；或在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)為2.5mg～5mg，人參總多糖以葡萄糖計(jì)為8mg～16mg，附子總生物堿0.06mg～1.2mg。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于在每一單位劑量的制劑中，含烏頭類生物堿以烏頭堿(C24H47NO11)計(jì)，不得高于10.0mg，或不得高于5.0mg，或不得高于3.0mg，或不得高于2.0mg，或不得高于1.0mg。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于所述制劑為口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、或注射劑；所述口服固體制劑可為片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、丸劑、滴丸劑、固體分散劑、散劑、顆粒劑、微顆粒劑、微丸劑、微囊劑、微球劑、或者其它藥學(xué)上可接受的口服固體制劑；所述口服液體制劑可為口服液或者其它藥學(xué)上可接受的口服液體制劑；所述注射劑可為注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑、葡萄糖注射液、氯化鈉注射液或者其它藥學(xué)上可接受的注射劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于所述制劑是片劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、固體分散劑、口服液、注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑、葡萄糖注射液、或者氯化鈉注射液。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于本發(fā)明的藥物制劑在必要時(shí)還含有或使用藥物可接受的輔料(或載體)，所述輔料為藥學(xué)上可接受的制劑輔助劑；對(duì)于口服固體制劑和口服半固體制劑，所述輔料選自稀釋劑、潤(rùn)濕劑、粘合劑、崩解劑、助流劑、抗粘劑、潤(rùn)滑劑、色、香、味及其調(diào)節(jié)劑、固體分散體載體材料、抗氧化劑、表面活性劑、穩(wěn)定劑、PH調(diào)節(jié)劑和其它藥學(xué)上可接受的口服固體制劑、口服半固體制劑用輔料中的一種或一種以上的物質(zhì)，每種輔助劑可不選或選用該種輔助劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述稀釋劑是選自淀粉、可壓性淀粉、糖粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、甘露醇、山梨醇、硫酸鈣、碳酸鈣和其它藥學(xué)上可接受的稀釋劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述潤(rùn)濕劑是選自乙醇、水和其它藥學(xué)上可接受的潤(rùn)濕劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述粘合劑是選自羥丙甲纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙纖維素、淀粉漿、聚維酮、明膠、聚乙二醇、50％至70％蔗糖溶液、海藻酸鈉溶液和其它藥學(xué)上可接受的粘合劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述崩解劑是選自羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、干淀粉、交聯(lián)聚維酮、泡騰崩解劑和其它藥學(xué)上可接受的崩解劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述助流劑、抗粘劑、潤(rùn)滑劑是選自滑石粉、微粉硅膠、硬脂酸鎂、聚乙二醇類、月桂醇硫酸鈉、月桂醇硫酸鎂、氫化植物油和其它藥學(xué)上可接受的助流劑、抗粘劑、潤(rùn)滑劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述色、香、味及其調(diào)節(jié)劑是選自藥用色素、食用色素、香精和其它藥學(xué)上可接受的色、香、味及其調(diào)節(jié)劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的固體分散體載體材料是選自聚乙二醇類、纖維素衍生物、有機(jī)酸類、表面活性劑類、聚維酮類、糖類與醇類、纖維素類、聚丙烯酸樹脂類、β-谷甾醇、膽固醇、膽固醇硬脂酸酯、棕櫚酸甘油酯、氫化蓖麻油、蓖麻油蠟、蜂蠟、巴西棕櫚蠟和其它藥學(xué)上可接受的固體分散體載體材料中的一種或一種以上的物質(zhì)，每類固體分散體載體材料可不選或選用該類固體分散體載體材料中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的pH調(diào)節(jié)劑可以是至少一種藥學(xué)上可接受的用于調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)，所述調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)是選自堿性化合物、緩沖系統(tǒng)、酸和其它藥學(xué)上可接受的用于調(diào)節(jié)pH值的物質(zhì)中的一種或一種以上的物質(zhì)；對(duì)于口服液體制劑，所述輔料選自溶劑、增溶劑、助溶劑、潛溶劑、防腐劑、矯味劑、著色劑、pH調(diào)節(jié)劑、抗氧劑、金屬離子絡(luò)合劑和其它藥學(xué)上可接受的液體制劑附加劑中的一種或一種以上的物質(zhì)，每種輔助劑可不選或選用該種輔助劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的溶劑是選自水、一定濃度的乙醇、甘油、丙二醇和其它藥學(xué)上可接受的液體制劑用溶劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的防腐劑是選自對(duì)羥基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯、丁酯等對(duì)羥基苯甲酸酯類、山梨酸及其鹽、苯甲酸及其鹽、薄荷油和其它藥學(xué)上可接受的液體制劑用防腐劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的矯味劑是選自蔗糖、單糖漿、果汁糖漿、山梨醇、甘油、甘露醇、糖精鈉、薄荷揮發(fā)油和其它藥學(xué)上可接受的液體制劑用矯味劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；對(duì)于注射劑，所述輔料選自藥學(xué)上可接受的注射用溶劑、增溶劑、抑菌劑、抗氧劑、穩(wěn)定劑、絡(luò)合劑、鎮(zhèn)痛劑、等滲調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、pH調(diào)節(jié)劑，以及藥學(xué)上可接受的具有其它輔助功能的藥物中的一種或一種以上的物質(zhì)，每種輔助劑可不選或選用該種輔助劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的注射用溶劑是選自注射用水、一定濃度的乙醇、甘油、丙二醇、苯甲醇和其它藥學(xué)上可接受的注射用溶劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的增溶劑是選自聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚山梨酯40、聚山梨酯60和其它藥學(xué)上可接受的注射劑用增溶劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的抑菌劑是選自羥丙丁酯、羥丙甲酯、苯甲醇、苯酚、三氯叔丁醇和其它藥學(xué)上可接受的注射劑用抑菌劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的抗氧劑是選自焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉和其它藥學(xué)上可接受的注射劑用抗氧劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的絡(luò)合劑是選自乙二胺四醋酸二鈉、環(huán)己二胺四醋酸鈉、N-羥基二乙胺三醋酸、二乙基三胺六醋酸和其它藥學(xué)上可接受的絡(luò)合劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；所述的pH調(diào)節(jié)劑是選自一定濃度的氫氧化鈉溶液、一定濃度的鹽酸溶液、磷酸、醋酸-醋酸鈉緩沖溶液、醋酸鹽緩沖溶液、磷酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸鹽緩沖溶液、枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液和其它藥學(xué)上可接受的pH調(diào)節(jié)劑中的一種或一種以上的物質(zhì)；其中所述的注射用凍干制劑還可以在制劑中不加入或加入了一種或一種以上的藥物可接受的適量的賦形劑。所述賦形劑選自甘露醇、山梨醇、甘氨酸、乳糖、氯化鈉、葡萄糖和其它藥學(xué)上可接受的賦形劑中的一種或一種以上的物質(zhì)。所述的賦形劑優(yōu)選甘露醇、山梨醇。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物制劑，其特征在于所述的藥物制劑中含有量均分子量為30～36×104、8～12×104、3.5～7.5×104的人參的多糖類成分中的一種或幾種，其中量均分子量為33.0445×104、或9.8878×104、或5.4087×104的人參的多糖類成分的含量較高。
12.一種權(quán)利要求1所述的藥物制劑的制備方法，其特征在于所述藥物制劑的制備方法為提取人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分，添加或不添加起協(xié)同作用的藥物，添加或不添加輔料，制成一種原料中含有人參和附子的口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑。
13.一種權(quán)利要求1所述的藥物制劑的制備方法，其特征在于所述藥物制劑的制備方法包括以下步驟一、人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分的提取(1)人參的處理人參采用一定濃度的乙醇提取(提取方法采用回流提取法或超聲提取法或滲漉法或浸漬法或連續(xù)提取法或減壓提取法)，所得提取液濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.5～4.5g，用水飽和的正丁醇萃取，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參的皂苷類成分中間體，備用；(2)人參藥渣的處理人參被一定濃度的乙醇提取后的藥渣先用水提取(提取方法采用煎煮法或回流提取法或超聲提取法或滲漉法或浸漬法或連續(xù)提取法或減壓提取法)，所得提取液濾過，調(diào)整藥液濃度為0.2～2.4g生藥/ml，溫度為20～70℃，加入85～95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到70～90％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液(或不離心，濾過后直接調(diào)整藥液濃度)，調(diào)整上清液藥液濃度為0.7～6g生藥/ml，加入85～95％的乙醇使含醇量達(dá)60～80％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液(或不離心，濾過后直接取濾液)，上一步所得上清液或?yàn)V液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；上一步所得上清液采用截留分子量100K～900K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或?qū)⑸弦徊剿蒙锨逡合扔媒亓舴肿恿?00K～900K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量1K～10K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；(3)附子的處理附子藥材先用水提取(提取方法采用煎煮法或回流提取法或超聲提取法或滲漉法或浸漬法或連續(xù)提取法或減壓提取法)，所得提取液濾過，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.0～1.25，溫度20～65℃，用85～95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)60～80％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.05～1.45時(shí)加入85～95％的乙醇使醇含量達(dá)75～90％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；濾液加熱至沸，保持微沸10～60分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.7～2.5g，每次加入0.5～3倍量的二氯甲烷萃取2～9次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；二、起協(xié)同作用的藥物的處理(4)起協(xié)同作用的藥物的處理起協(xié)同作用的藥物是中藥或天然藥物的，提取其有效部位或有效成分單體，(精制)，水溶，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，濾過，即得中間體，備用；起協(xié)同作用的藥物是化學(xué)藥物的，水溶，pH值調(diào)至5.5～8.5，濾過，即得中間體，備用；其中用于制備口服固體制劑、口服半固體制劑時(shí)可不水溶；三、各藥物制劑成品的制備(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體，混勻；(6)將“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中間體合并，混勻，所得藥液濾過，濃縮成清膏[或?qū)ⅰ?5)”所得藥液濾過，濃縮成清膏，與“(4)”未水溶的中間體混合]，加入適量的口服固體制劑、口服半固體制劑用輔料混勻，制軟材，制粒，烘干，壓片或裝入膠囊，制成一種原料中含有人參和附子的片或膠囊；(7)將“(5)”所得藥液用純化水或注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.1～2.0g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的口服液體制劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的口服液體制劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加純化水或注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，濾過，按劑量分裝至口服液包裝容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的口服液；(8)將“(5)”所得藥液用注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.1～2.0g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的注射劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的注射劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，(調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5)，加入0.02～0.5％活性炭加熱至沸，保持微沸10～60分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，精濾(過0.22～0.50μm微孔濾膜或相似孔徑的垂熔玻璃濾器)，按劑量分裝至注射液包裝用容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的注射液；(9)將“(5)”所得藥液用注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.3～2.0g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的注射劑用輔料、注射用凍干制劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的注射劑用輔料、注射用凍干制劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加入0.02～0.5％活性炭加熱至沸，保持微沸10～60分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至5.5～8.5，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，精濾(過0.22～0.50μm微孔濾膜或相似孔徑的垂熔玻璃濾器)，無(wú)菌分裝至每支管制注射劑玻璃瓶中含1～8ml藥液，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑；(10)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段普通預(yù)凍，預(yù)凍溫度-60℃～-40℃，預(yù)凍時(shí)間約2.5～6小時(shí)；或選擇反復(fù)預(yù)凍，預(yù)凍溫度-60℃～-40℃，回溫溫度-15℃～-7℃，預(yù)凍時(shí)間約3～9小時(shí)；b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-60℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-30℃～-15℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束；c再干燥階段擱板溫度慢慢升至-5℃～30℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間3～12小時(shí)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的藥物制劑的制備方法，其特征在于所述藥物制劑的制備方法包括以下步驟一、人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分的提取(1)人參的處理人參分別加3～9倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～3倍量)60～80％乙醇回流提取或超聲提取1～4次，每次0.5～3小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.75～3.0g，每次加入0.7～3倍量的水飽和的正丁醇萃取2～9次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參的皂苷類成分中間體，備用；(2)人參藥渣的處理醇提后的人參藥渣分別加6～13.5倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～5倍量)煎煮提取或回流提取2～6次，每次0.5～4小時(shí)，合并提取液，濾過，調(diào)整藥液濃度為0.4～1.6g生藥/ml，溫度為20～60℃，加入90～95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到75～85％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液(或不離心，濾過后直接調(diào)整藥液濃度，用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備)，調(diào)整上清液藥液濃度為1.0～4.0g生藥/ml，加入90～95％的乙醇使含醇量達(dá)65～75％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液；或不離心，濾過后直接取濾液，用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；上一步所得上清液或?yàn)V液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；上一步所得上清液采用截留分子量100K～700K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或?qū)⑸弦徊剿蒙锨逡合扔媒亓舴肿恿?00K～700K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量1K～8K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；(3)附子的處理附子藥材加4～12倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～4倍量)，煎煮提取或回流提取2～6次，每次0.5～3小時(shí)，合并提取液，濾過，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.01～1.21，溫度20～60℃，用90～95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)65～75％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.15～1.40時(shí)加入90～95％的乙醇使醇含量達(dá)80～90％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；濾液加熱至沸，保持微沸15～55分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.8～2.0g，每次加入0.8～2倍量的二氯甲烷萃取3～7次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；二、起協(xié)同作用的藥物的處理(4)起協(xié)同作用的藥物的處理起協(xié)同作用的藥物是中藥或天然藥物的，提取其有效部位或有效成分單體，(精制)，水溶，調(diào)節(jié)pH值至6～8，濾過，即得中間體，備用；起協(xié)同作用的藥物是化學(xué)藥物的，水溶，pH值調(diào)至6～8，濾過，即得中間體，備用；用于制備口服固體制劑、口服半固體制劑時(shí)可不水溶；三、各藥物制劑成品的制備(5)合并“(1)”、“(2)”、“(3)”所得的中間體，混勻；(6)將“(1)”、“(2)”、“(3)”、“(4)”所得的中間體合并，混勻，所得藥液濾過，濃縮成清膏[或?qū)ⅰ?5)”所得藥液濾過，濃縮成清膏，與“(4)”未水溶的中間體混合]，加入適量的口服固體制劑、口服半固體制劑用輔料混勻，制軟材，制粒，烘干，壓片或裝入膠囊，制成一種原料中含有人參和附子的片或膠囊；(7)將“(5)”所得藥液用純化水或注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.1～1.5g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的口服液體制劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的口服液體制劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加純化水或注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，濾過，按劑量分裝至口服液包裝容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的口服液；(8)將“(5)”所得藥液用注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.1～1.5g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的注射劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的注射劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，(調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0)，加入0.02～0.3％活性炭加熱至沸，保持微沸10～40分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，精濾(過0.22～0.45μm微孔濾膜或相似孔徑的垂熔玻璃濾器)，按劑量分裝至注射液包裝用容器中，封口，常規(guī)方法滅菌，即得一種原料中含有人參和附子的注射液；(9)將“(5)”所得藥液用注射用水調(diào)整體積至相當(dāng)于藥液濃度為0.5～2.0g生藥/ml，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加熱至沸，保持微沸20～60分鐘，冷卻，冷藏過夜；濾過[或?yàn)V液加入“(4)”所得的中間體和適量的注射劑用輔料、注射用凍干制劑用輔料或不加輔料，或?yàn)V液加入適量的注射劑用輔料、注射用凍干制劑用輔料或不加輔料；混勻，(濾過)]，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加入0.02～0.3％活性炭加熱至沸，保持微沸10～40分鐘，濾過，調(diào)節(jié)pH值至6.0～8.0，加注射用水調(diào)整體積至全量，測(cè)pH值，精濾(過0.22～0.45μm微孔濾膜或相似孔徑的垂熔玻璃濾器)，無(wú)菌分裝至每支管制注射劑玻璃瓶中含1～6ml藥液，冷凍干燥，壓蓋、軋蓋，即得一種原料中含有人參和附子的注射用凍干制劑；(10)冷凍干燥工藝如下a預(yù)凍階段普通預(yù)凍，預(yù)凍溫度-60℃～-45℃，預(yù)凍時(shí)間約2.5～6小時(shí)；或選擇反復(fù)預(yù)凍，預(yù)凍溫度-60℃～-45℃，回溫溫度-13℃～-8℃，預(yù)凍時(shí)間約3～9小時(shí)；b升華干燥階段當(dāng)冷凝器的溫度降至-60℃～-45℃以下，開啟真空泵，將擱板的溫度設(shè)置在-26℃～-15℃，制品慢慢升溫，觀察升華界面，至游離水全部走凈，升華干燥階段結(jié)束；c再干燥階段擱板溫度慢慢升至0℃～25℃，用真空度下降法來(lái)判斷再干燥的終點(diǎn)，再干燥時(shí)間3～12小時(shí)。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的藥物制劑的制備方法，其特征在于所述藥物制劑的制備方法中的“人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分的提取”的方法可以更優(yōu)選為(1)人參的處理人參分別加5～7倍量(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～2倍量)65～75％乙醇回流提取2～3次，每次1.5～2.5小時(shí)，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液濃度至每1ml相當(dāng)于含人參生藥1.0～2.0g，每次加入0.8～1.2倍量的水飽和的正丁醇萃取5～7次，合并正丁醇液，回收正丁醇至無(wú)正丁醇味，轉(zhuǎn)水溶，濾過，得人參的皂苷類成分中間體，備用；(2)人參藥渣的處理醇提后的人參藥渣分別加8～10倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～4倍量)煎煮提取或回流提取2～4次，每次1.5～2.5小時(shí)，合并提取液，濾過，調(diào)整藥液濃度為0.6～1.0g生藥/ml，溫度為20～45℃，加入95％的乙醇醇沉使含醇量達(dá)到75～85％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，合并上清液(或不離心，濾過后直接調(diào)整藥液濃度，用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備)，調(diào)整上清液藥液濃度為1.5～2.5g生藥/ml，加入95％的乙醇使含醇量達(dá)65～75％，靜置過夜，濾過，沉淀干燥，加適量水溶解后，離心，取上清液；或不離心，濾過后直接取濾液，用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；上一步所得上清液或?yàn)V液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；上一步所得上清液采用截留分子量100K～600K的超濾膜超濾，超濾液即為人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或?qū)⑸弦徊剿蒙锨逡合扔媒亓舴肿恿?00K～600K的超濾膜超濾，然后將所得超濾液用截留分子量1K～8K的超濾膜除去小分子量雜質(zhì)，即得人參的多糖類成分中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；(3)附子的處理附子藥材加7～9倍量水(第一次因?yàn)槭歉伤幉?，多?～3倍量)，煎煮提取或回流提取2～4次，每次0.5～1.5小時(shí)，合并提取液，濾過，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.05～1.16，溫度40～55℃，用95％的乙醇醇沉使乙醇含量達(dá)65～75％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液的相對(duì)密度為1.21～1.35時(shí)加入95％的乙醇使醇含量達(dá)80～90％，靜置過夜，濾過，濾液回收乙醇至無(wú)醇味，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑的制備；濾液加熱至沸，保持微沸30～45分鐘，冷卻，冷藏，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備；或第一次醇沉液回收乙醇至無(wú)醇味，調(diào)整藥液至每1ml相當(dāng)于含人參生藥0.8～1.2g，每次加入0.8～1.2倍量的二氯甲烷萃取4～6次，合并二氯甲烷液，回收二氯甲烷至盡，轉(zhuǎn)水溶，濾過，即得附子中間體，備用，可用于口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑的制備。
16.一種權(quán)利要求1所述的藥物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的優(yōu)選的提供的一種原料中含有人參和附子的注射劑的質(zhì)量控制方法，包括下述的鑒別、檢查、含量測(cè)定、指紋圖譜；所述的鑒別、檢查、含量測(cè)定、指紋圖譜及其中的單個(gè)的具體方法可分別選用或任意組合使用，用于一種原料中含有人參和附子的注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑的質(zhì)量控制；所述的一種原料中含有人參和附子的注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑的質(zhì)量控制方法如下[1]鑒別[1.1]人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的鑒別取制備好的注射劑內(nèi)容物1.0g，加水30ml溶解，加氯仿30～50ml，振搖，取水液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加入水飽和的正丁醇8～12ml超聲處理25～40分鐘，取正丁醇液置分液漏斗中，加入2～4倍量的氨試液，洗滌，洗液棄去，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參藥材1g(過60目篩)，加乙醇20～40ml，加熱回流20～40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，濾過，濾液同法制成人參藥材溶液。再分別取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VI B)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各2.5～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(14～16∶38～42∶21～23∶9～11)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與人參藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；[1.2]附子的鑒別取制備好的注射劑內(nèi)容物3.5g，加水30ml溶解，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至9～11，加乙醚振搖提取2～4次，每次40～50ml，醚液低溫蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，做為供試品溶液。另取附子藥材粗粉20g，置具塞錐形瓶中，加乙醚130～170ml，振搖9～12分鐘，加氨試液9～11ml，振搖25～35分鐘，放置1～2小時(shí)，分取醚層，揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為附子藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各12～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板(厚500μm)上，層析缸先以氨水飽和，以石油醚-乙醚-丙酮(4.8～5.2∶2.8～3.2∶2.8～3.2)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與附子藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；[2]檢查[2.1]烏頭類生物堿的限量檢查[2.1.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得；[2.1.2]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取上述對(duì)照品溶液0.2～0.3ml、0.4～0.6ml、0.65～0.85ml、0.9～1.1ml、1.4～1.6ml、1.65～1.85ml、1.9～2.1ml，分別置分液漏斗中，分別加入0.01mol/L鹽酸溶液1.85～1.65ml、1.6～1.4ml、1.35～1.15ml、1.1～0.9ml、0.6～0.4ml、0.35～0.15ml、0.00ml，分別精密加入醋酸-醋酸鈉緩沖液(取0.2mol/L醋酸溶液250ml，用0.2mol/L醋酸鈉溶液調(diào)pH值至3.1)8～12ml，溴甲酚綠液(取溴甲酚綠50mg，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿振搖提取3次，每次30ml，棄去氯仿液)1.5～2.5ml，氯仿8～12ml，振搖2～6分鐘，靜置，分取氯仿液，隨行空白，照分光光度度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄V A)在415nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；[2.1.3]供試品溶液的制備 取制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加水10ml溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加氨試液調(diào)節(jié)pH值至10～11，用等量的氯仿振搖提取3～5次，合并氯仿液，蒸干。殘?jiān)?.01mol/L鹽酸溶液分次溶解，并轉(zhuǎn)入10ml量瓶中，稀釋至刻度搖勻，即得；[2.1.4]測(cè)定法 精密量取上述供試品溶液2ml，分別置分液漏斗中，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得；[2.1.5]制備好的注射劑每支含烏頭類生物堿以烏頭堿(C24H47NO11)計(jì)，不得高于1.0mg；[3]含量測(cè)定[3.1]人參皂苷Rg1和Re的含量測(cè)定照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。[3.1.1]色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸溶液(17～23∶75～85)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；[3.1.2]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rg1及人參皂苷Re對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.3mg、人參皂苷Re0.2mg的溶液，即得；[3.1.3]供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，置5ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。[3.1.4]測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10～30μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[3.1.5]制備好的注射劑每支含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量之和應(yīng)為0.2～2.0mg；[3.2]人參總皂苷的含量測(cè)定[3.2.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rb10.3mg的溶液，即得；[3.2.2]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取上述人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液0.05～0.15ml，0.15～0.25ml，0.25～0.35ml，0.35～0.45ml，0.45～0.55ml，0.55～0.65ml，0.65～0.75ml，分別置具塞試管中，揮去溶劑，各加入5％香草醛—冰醋酸溶液(新鮮配制)0.15～0.25ml及高氯酸0.6～1.0ml，于55～65℃水浴上加熱12～18min，取出，迅速冷卻，加冰醋酸3～7ml，搖勻，同時(shí)以相應(yīng)的試劑作為空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄V A)于556nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；[3.2.3]樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加蒸餾水10ml溶解，置分液漏斗中，用氯仿振搖提取3～5次，每次8～12ml，棄去氯仿液，水液再以水飽和的正丁醇振搖提取3～5次，每次8～12ml，合并正丁醇液，再用正丁醇飽和的水洗滌2～3次，每次8～12ml，棄去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得；[3.2.4]測(cè)定法 精密量取樣品溶液0.1ml置具塞試管中，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”項(xiàng)下自“揮去溶劑”起依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得；[3.2.5]制備好的注射劑每支含人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)，應(yīng)為2.0～20.0mg；[3.3]人參中多糖類成分的含量測(cè)定[3.3.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1ml含葡萄糖0.2mg的溶液，即得；[3.3.2]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液0.05～0.15ml，0.15～0.25ml，0.25～0.35ml，0.35～0.45ml，0.45～0.55ml，0.55～0.65ml，0.65～0.75ml，0.75～0.85ml，分別置具塞試管中，分別加水使成1.0ml，各精密加入新鮮配制的0.2％蒽酮硫酸(硫酸濃度為80％)溶液6～10ml，搖勻，在100℃水浴中加熱8～12分鐘，迅速冷卻后，隨行空白，照分光光度法在620nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；[3.3.3]樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物3.5g，精密稱定，加水25～35ml溶解后，加入乙醇使含醇量達(dá)75～85％，離心，沉淀?yè)]干乙醇后加入蒸餾水溶解，并定容至100ml量瓶中。取上述溶液1～3ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得；[3.3.4]測(cè)定法 精密量取0.2ml于具塞試管中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下自“分別加蒸餾水至1.0ml”起依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得；[3.3.5]制備好的注射劑每支含人參中的多糖類成分以葡萄糖計(jì)，應(yīng)為4～60mg；[4]指紋圖譜參照高效液相色譜法，結(jié)合指紋圖譜的要求進(jìn)行測(cè)定[4.1]人參藥材指紋圖譜[4.1.1]藥材名稱和來(lái)源本人參藥材指紋圖譜中的人參選用紅參，紅參為五加科植物人參Panaxginseng C.A.Mey.的栽培品(習(xí)稱“園參”)經(jīng)蒸制后的干燥根及根莖；[4.1.2]人參藥材指紋圖譜的測(cè)定[4.1.2.1]色譜條件 色譜柱ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒徑5μm；流動(dòng)相乙腈與水為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件
柱溫25～35℃；分析時(shí)間60～120min；流速0.6～1.0ml/min；ELSD漂移管100～120℃，載氣流速2.0～4.0ml/min。理論板數(shù)以人參皂苷Rb1峰計(jì)應(yīng)不低于5000；[4.1.2.2]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品2mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得；[4.1.2.3]供試品溶液的制備 取紅參藥材粉末(過20目篩)2g，精密稱定，加70％乙醇回流提取2次，每次0.8～1.5小時(shí)，第一次加6～8倍量，第二次加5～7倍量；提取液濾過，濾液回收乙醇，濃縮，用等量水飽和的正丁醇振搖提取4～6次，合并正丁醇液，并用等量的氨試液洗滌；洗滌液棄去，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得；[4.1.2.4]測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[4.1.2.5]結(jié)果 將人參皂苷Rb1峰設(shè)定為參照物峰，并以其峰面積的對(duì)數(shù)作為1.000，根據(jù)人參皂苷Rb1峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％；并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相對(duì)峰面積比(峰面積對(duì)數(shù)比)為0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191；[4.2]附子藥材指紋圖譜[4.2.1]附子藥材的名稱和來(lái)源附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品。本附子藥材指紋圖譜中的附子選用黑順片；[4.2.2]附子藥材指紋圖譜的測(cè)定[4.2.2.1]色譜條件 色譜柱ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒徑5μm；流動(dòng)相甲醇與0.1％磷酸-0.04％三乙胺-水溶液為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件
柱溫25～35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；分析時(shí)間60～120min；流速0.7～1.3ml/min；理論板數(shù)以新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；[4.2.2.2]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的新烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；[4.2.2.3]供試品溶液的制備 附子藥材粗粉10g，用氨試液3～5ml、乙醚40～60ml冷浸過夜，濾過；藥渣加乙醚∶氯仿(2.8～3.2∶0.8～1.2)混合溶液40～60ml，超聲處理25～40min，濾過，藥渣用混合溶液洗滌3～4次，每次14～16ml，洗液與濾液合并，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，用0.45μm的濾膜濾過，即可進(jìn)行測(cè)定；[4.2.2.4]測(cè)定法 分別精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液15～25μl和供試品溶液30～50μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[4.2.2.5]結(jié)果 將新烏頭堿峰設(shè)定為參照物峰，根據(jù)新烏頭堿峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出8個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.146±10％、0.254±10％、0.531±10％、0.630±10％、0.727±10％、0.833±10％、1.000、1.114±10％；并以峰面積最穩(wěn)定且較大的相對(duì)保留時(shí)間為0.531±10％的峰之峰面積作為1.000，并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.727±10％、1.114±10％的峰的相對(duì)峰面積比為0.182～0.272、0.373～0.552；[4.3]人參皂苷指紋圖譜[4.3.1]色譜條件 色譜柱ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒徑5μm；乙腈與水為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件
柱溫25～35℃；分析時(shí)間60～120min；流速0.6～1.0ml/min；ELSD參數(shù)漂移管100～120℃，載氣流速2.0～4.0ml/min。理論板數(shù)以人參皂苷Rb1峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；[4.3.2]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品2mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得；[4.3.3]供試品溶液的制備 取制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加水溶解至8～12ml，用等量的水飽和正丁醇振搖提取4～6次，合并正丁醇液，用等量的氨試液洗滌1～2次，分取正丁醇液，回收正丁醇，殘?jiān)谜麴s水溶解并定容至5ml量瓶中，搖勻，即得；[4.3.4]測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5～15μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[4.3.5]結(jié)果 將人參皂苷Rb1峰設(shè)定為參照物峰，并以其峰面積的對(duì)數(shù)作為1.000，根據(jù)人參皂苷Rb1峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.441±10％、0.632±10％、0.942±10％、1.000、1.042±10％、1.062±10％、1.089±10％、1.188±10％、1.701±10％、1.737±10％；并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.441±10％、0.632±10％、1.042±10％、1.089±10％的峰的相對(duì)峰面積比(峰面積對(duì)數(shù)比)分別為0.688～1.148、0.673～1.121、0.692～1.154、0.688～1.146；[4.4]生物堿指紋圖譜[4.4.1]色譜條件 色譜柱ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒徑5μm；甲醇與0.1％磷酸-0.04％三乙胺水溶液為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件
柱溫25～35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；分析時(shí)間60～120min；理論板數(shù)以新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；[4.4.2]內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的新烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加1％磷酸溶液3ml，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；[4.4.3]供試品溶液的制備 精密量取制備好的注射劑內(nèi)容物1.0g，加水溶解至8～12ml，置分液漏斗中，加氨試液調(diào)pH值至9～11，用等量的乙醚-氯仿(2.8～3.2∶0.8～1.2)的混合液振搖提取4～6次，合并萃取液，低溫?fù)]干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加入內(nèi)標(biāo)溶液40～60μl，濾過，作為供試品溶液；[4.4.4]測(cè)定法 分別精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液15～25μl和供試品溶液30～50μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[4.4.5]結(jié)果 將新烏頭堿峰設(shè)定為相對(duì)保留時(shí)間的參照物峰，根據(jù)新烏頭堿峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出5個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.259±10％、0.342±10％、0.532±10％、0.724±10％、1.000±10％；并以峰面積最穩(wěn)定且較大的相對(duì)保留時(shí)間為0.532±10％的峰之峰面積作為1.000，并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.724±10％的峰的相對(duì)峰面積比為0.455～0.683。
17.根據(jù)權(quán)利要求16所述的藥物制劑的質(zhì)量控制方法，其特征在于所述的一種原料中含有人參和附子的注射液、注射用凍干制劑、注射用無(wú)菌分裝制劑的質(zhì)量控制方法，其各具體步驟如下[1]鑒別[1.1]人參、人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的鑒別取制備好的注射劑內(nèi)容物1.0g，加水30ml溶解，加氯仿40ml，振搖，取水液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，加入水飽和的正丁醇10ml超聲處理30分鐘，取正丁醇液置分液漏斗中，加入3倍量的氨試液，洗滌，洗液棄去，取正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取人參藥材1g(過60目篩)，加乙醇30ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，濾過，濾液同法制成人參藥材溶液。再分別取人參皂苷Rg1、人參皂苷Re對(duì)照品適量，加甲醇分別制成每1ml含2mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述四種溶液各2.5～5μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與人參藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；[1.2]附子的鑒別取制備好的注射劑內(nèi)容物3.5g，加水30ml溶解，用氨試液調(diào)節(jié)pH值至10，加乙醚振搖提取3次，每次45ml，醚液低溫蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，做為供試品溶液。另取附子藥材粗粉20g，置具塞錐形瓶中，加乙醚150ml，振搖10分鐘，加氨試液10ml，振搖30分鐘，放置1～2小時(shí)，分取醚層，揮干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇2ml使溶解，作為附子藥材溶液。照薄層色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VIB)試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各12～30μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板(厚500μm)上，層析缸先以氨水飽和，以石油醚-乙醚-丙酮(5∶3∶3)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以碘化鉍鉀試液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與附子藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)；[2]檢查[2.1]烏頭類生物堿的限量檢查[2.1.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加0.01mol/L鹽酸溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得；[2.1.2]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取上述對(duì)照品溶液0.25ml、0.50ml、0.75ml、1.00ml、1.50ml、1.75ml、2.00ml，分別置分液漏斗中，分別加入0.01mol/L鹽酸溶液1.75ml、1.50ml、1.25ml、1.00ml、0.50ml、0.25ml、0.00ml，分別精密加入醋酸-醋酸鈉緩沖液(取0.2mol/L醋酸溶液250ml，用0.2mol/L醋酸鈉溶液調(diào)pH值至3.1)10ml，溴甲酚綠液(取溴甲酚綠50mg，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液1.6ml研磨使溶解，加水至100ml，用氯仿振搖提取3次，每次30ml，棄去氯仿液)2ml，氯仿10ml，振搖3分鐘，靜置，分取氯仿液，隨行空白，照分光光度度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VA)在415nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；[2.1.3]供試品溶液的制備 取制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加水10ml溶解，轉(zhuǎn)移至分液漏斗中，加氨試液調(diào)節(jié)pH值至10～11，用等量的氯仿振搖提取4次，合并氯仿液，蒸干。殘?jiān)?.01mol/L鹽酸溶液分次溶解，并轉(zhuǎn)入10ml量瓶中，稀釋至刻度搖勻，即得；[2.1.4]測(cè)定法 精密量取上述供試品溶液2ml，分別置分液漏斗中，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下自“各精密加醋酸-醋酸鈉緩沖液10ml”起，依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得；[2.1.5]制備好的注射劑每支含烏頭類生物堿以烏頭堿(C24H47NO11)計(jì)，不得高于1.0mg；[3]含量測(cè)定[3.1]人參皂苷Rg1和Re的含量測(cè)定照高效液相色譜法測(cè)定；[3.1.1]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈-0.1％磷酸溶液(20∶80)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Re峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；[3.1.2]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rg1及人參皂苷Re對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇分別制成每1ml含人參皂苷Rg10.3mg、人參皂苷Re0.2mg的溶液，即得；[3.1.3]供試品溶液的制備 取 裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，置5ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。[3.1.4]測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[3.1.5]制備好的注射劑每支含人參皂苷Rg1、人參皂苷Re的含量之和應(yīng)為0.8～1.4mg；[3.2]人參總皂苷的含量測(cè)定[3.2.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rb10.3mg的溶液，即得；[3.2.2]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取上述人參皂苷Rb1對(duì)照品溶液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，分別置具塞試管中，揮去溶劑，各加入5％香草醛—冰醋酸溶液(新鮮配制)0.2ml及高氯酸0.8ml，于60℃水浴上加熱15min，取出，迅速冷卻，加冰醋酸5ml，搖勻，同時(shí)以相應(yīng)的試劑作為空白，照分光光度法于556nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，取樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；[3.2.3]樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加蒸餾水10ml溶解，置分液漏斗中，用氯仿振搖提取4次，每次10ml，棄去氯仿液，水液再以水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次10ml，合并正丁醇液，再用正丁醇飽和的水洗滌2次，每次10ml，棄去水液，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，即得；[3.2.4]測(cè)定法 精密量取樣品溶液0.1ml置具塞試管中，照“標(biāo)準(zhǔn)曲線制備”項(xiàng)下自“揮去溶劑”起依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得；[3.2.5]制備好的注射劑每支含人參總皂苷以人參皂苷Rb1(C54H92O23)計(jì)，應(yīng)為8.0～15.0mg；[3.3]人參中多糖類成分的含量測(cè)定[3.3.1]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，加蒸餾水制成每1ml含葡萄糖0.2mg的溶液，即得；[3.3.2]標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取葡萄糖對(duì)照品溶液0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml，0.6ml，0.7ml，0.8ml，分別置具塞試管中，分別加水使成1.0ml，各精密加入新鮮配制的0.2％蒽酮硫酸(硫酸濃度為80％)溶液8ml，搖勻，在100℃水浴中加熱10分鐘，迅速冷卻后，隨行空白，照分光光度法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄V A)在620nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；[3.3.3]樣品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的制備好的注射劑內(nèi)容物3.5g，精密稱定，加水30ml溶解后，加入乙醇使含醇量達(dá)80％，離心，沉淀?yè)]干乙醇后加入蒸餾水溶解，并定容至100ml量瓶中。取上述溶液2ml置25ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。[3.3.4]測(cè)定法 精密量取0.2ml于具塞試管中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備”項(xiàng)下自“分別加蒸餾水至1.0ml”起依法測(cè)定吸光度，計(jì)算，即得；[3.3.5]制備好的注射劑每支含人參中的多糖類成分以葡萄糖計(jì)，應(yīng)為27～47mg；[4]指紋圖譜參照高效液相色譜法(中國(guó)藥典2005年版一部附錄VID)，結(jié)合指紋圖譜的要求進(jìn)行測(cè)定[4.1]人參藥材指紋圖譜[4.1.1]藥材名稱和來(lái)源本人參藥材指紋圖譜中的人參選用紅參，紅參為五加科植物人參Panaxginseng C.A.Mey.的栽培品(習(xí)稱“園參”)經(jīng)蒸制后的干燥根及根莖；[4.1.2]人參藥材指紋圖譜的測(cè)定[4.1.2.1]色譜條件 色譜柱ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒徑5μm；流動(dòng)相乙腈與水為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件
柱溫30℃；分析時(shí)間60min；流速0.8ml/min；ELSD漂移管110℃，載氣流速3.0ml/min。理論板數(shù)以人參皂苷Rb1峰計(jì)應(yīng)不低于5000；[4.1.2.2]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品2mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得；[4.1.2.3]供試品溶液的制備 取紅參藥材粉末(過20目篩)2g，精密稱定，加70％乙醇回流提取兩次，每次1小時(shí)，第一次加7倍量，第二次加6倍量；提取液濾過，濾液回收乙醇，濃縮，用等量水飽和的正丁醇振搖提取5次，合并正丁醇液，并用等量的氨試液洗滌；洗滌液棄去，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀芙獠⑥D(zhuǎn)移至10ml量瓶中，定容至刻度，搖勻，即得；[4.1.2.4]測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[4.1.2.5]結(jié)果 將人參皂苷Rb1峰設(shè)定為參照物峰，并以其峰面積的對(duì)數(shù)作為1.000，根據(jù)人參皂苷Rb1峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.056±10％、0.102±10％、0.372±10％、0.632±10％、0.931±10％、1.000、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％、1.662±10％；并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.632±10％、1.040±10％、1.084±10％、1.181±10％的峰的相對(duì)峰面積比(峰面積對(duì)數(shù)比)為0.682～1.266、0.346～0.644、0.262～0.486、0.103～0.191；[4.2]附子藥材指紋圖譜[4.2.1]附子藥材的名稱和來(lái)源附子為毛茛科植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx.的子根的加工品；本附子藥材指紋圖譜中的附子選用黑順片；[4.2.2]附子藥材指紋圖譜的測(cè)定[4.2.2.1]色譜條件 色譜柱ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒徑5μm；流動(dòng)相甲醇與0.1％磷酸-0.04％三乙胺-水溶液為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件
柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；分析時(shí)間60min；流速1.0ml/min；理論板數(shù)以新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；[4.2.2.2]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的新烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；[4.2.2.3]供試品溶液的制備 附子藥材粗粉10g，用氨試液4ml、乙醚50ml冷浸過夜，濾過；藥渣加乙醚∶氯仿(3∶1)混合溶液50ml，超聲處理30min，濾過，藥渣用混合溶液洗滌3～4次，每次15ml，洗液與濾液合并，低溫蒸干，殘?jiān)蛹状?ml溶解，用0.45μm的濾膜濾過，即可進(jìn)行測(cè)定；[4.2.2.4]測(cè)定法 分別精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液20μl和供試品溶液40μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[4.2.2.5]結(jié)果 將新烏頭堿峰設(shè)定為參照物峰，根據(jù)新烏頭堿峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出8個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.146±10％、0.254±10％、0.531±10％、0.630±10％、0.727±10％、0.833±10％、1.000、1.114±10％；并以峰面積最穩(wěn)定且較大的相對(duì)保留時(shí)間為0.531±10％的峰之峰面積作為1.000，并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.727±10％、1.114±10％的峰的相對(duì)峰面積比為0.182～0.272、0.373～0.552；[4.3]人參皂苷指紋圖譜[4.3.1]色譜條件 色譜柱ODS HYPERSIL C18(Φ4.6mm×250mm)柱，填料粒徑5μm；乙腈與水為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件
柱溫30℃；分析時(shí)間60min；流速0.8ml/min；ELSD參數(shù)漂移管110℃，載氣流速3.0ml/min。理論板數(shù)以人參皂苷Rb1峰計(jì)算應(yīng)不低于5000；[4.3.2]對(duì)照品溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的人參皂苷Rb1對(duì)照品2mg，精密稱定，置5ml量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得；[4.3.3]供試品溶液的制備 取制備好的注射劑內(nèi)容物0.35g，精密稱定，加水溶解至10ml，用等量的水飽和正丁醇振搖提取5次，合并正丁醇液，用等量的氨試液洗滌1次，分取正丁醇液，回收正丁醇，殘?jiān)谜麴s水溶解并定容至5ml量瓶中，搖勻，即得；[4.3.4]測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[4.3.5]結(jié)果 將人參皂苷Rb1峰設(shè)定為參照物峰，并以其峰面積的對(duì)數(shù)作為1.000，根據(jù)人參皂苷Rb1峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出10個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.441±10％、0.632±10％、0.942±10％、1.000、1.042±10％、1.062±10％、1.089±10％、1.188±10％、1.701±10％、1.737±10％；并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.441±10％、0.632±10％、1.042±10％、1.089±10％的峰的相對(duì)峰面積比(峰面積對(duì)數(shù)比)分別為0.688～1.148、0.673～1.121、0.692～1.154、0.688～1.146；[4.4]生物堿指紋圖譜[4.4.1]色譜條件 色譜柱ZORBAX SB C18(Φ4.6mm×150mm)柱，填料粒徑5μm；甲醇與0.1％磷酸-0.04％三乙胺水溶液為流動(dòng)相，梯度條件見下表梯度條件
柱溫30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)235nm；分析時(shí)間60min；理論板數(shù)以新烏頭堿峰計(jì)算應(yīng)不低于2000；[4.4.2]內(nèi)標(biāo)溶液的制備 取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥至恒重的新烏頭堿對(duì)照品5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加1％磷酸溶液3ml，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；[4.4.3]供試品溶液的制備 精密量取制備好的注射劑內(nèi)容物1.0g，加水溶解至10ml，置分液漏斗中，加氨試液調(diào)pH值至10，用等量的乙醚-氯仿(3∶1)的混合液振搖提取5次，合并萃取液，低溫?fù)]干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，加入內(nèi)標(biāo)溶液50μl，濾過，作為供試品溶液；[4.4.4]測(cè)定法 分別精密吸取內(nèi)標(biāo)溶液20μl和供試品溶液40μl，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得；[4.4.5]結(jié)果 將新烏頭堿峰設(shè)定為相對(duì)保留時(shí)間的參照物峰，根據(jù)新烏頭堿峰的保留時(shí)間計(jì)算，共標(biāo)定出5個(gè)共有峰，其相對(duì)保留時(shí)間分別為0.259±10％、0.342±10％、0.532±10％、0.724±10％、1.000±10％；并以峰面積最穩(wěn)定且較大的相對(duì)保留時(shí)間為0.532±10％的峰之峰面積作為1.000，并規(guī)定相對(duì)保留時(shí)間為0.724±10％的峰的相對(duì)峰面積比為0.455～0.683。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種原料中含有人參和附子的藥物制劑及其制備方法和質(zhì)量控制方法。該藥物制劑中含有人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分。在每一單位劑量的制劑中，含有人參總皂苷1mg～90mg，人參總多糖2mg～282mg，附子總生物堿0.02mg～22mg。該藥物制劑中可以添加或不添加起協(xié)同作用的藥物。該藥物制劑的制備方法為提取人參和附子中的人參的皂苷類成分、人參的多糖類成分、附子的生物堿類成分，添加或不添加起協(xié)同作用的藥物，添加或不添加輔料，制成口服固體制劑、口服半固體制劑、口服液體制劑、注射劑。本發(fā)明還提供了該藥物制劑的質(zhì)量控制方法。
文檔編號(hào)A61P1/14GK1899400SQ20061010323
公開日2007年1月24日 申請(qǐng)日期2006年7月14日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月14日
發(fā)明者孫明珍, 艾劼, 劉路, 瞿冰 申請(qǐng)人:天津市軒宏醫(yī)藥技術(shù)有限公司, 深圳市資福藥業(yè)有限公司