專利名稱：亞麻根總黃酮在制備預(yù)防和/或治療肝炎藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明公開了一種亞麻(Linum usitatissimum L.)根總黃酮，這種亞 麻根總黃酮的制備方法，含有這種亞麻根總黃酮的藥物組合物和保健 品，這種亞麻根總黃酮在制備預(yù)防和/或治療肝炎藥物和保健品中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
亞麻(LinumusitatissimumL.)為亞麻科亞麻屬植物，廣布全國各地。 該植物為一年生草本，莖光潔平滑，株高0.75 1.20m。頂端有分枝， 呈傘形；莖桿橫截面呈圓形，呈灰綠色；亞麻葉灰綠色，互生，邊緣 呈線狀披針形，葉密集、表面平坦，長2 3. 5cm，寬2 4cm，葉基 部漸窄，呈藍(lán)綠色；花散生在花梗頂端，花梗直立，長2 7mm，總狀 花序或開放聚傘花序；萼片5枚，狹長或長卵形，長5 7rnm，全緣， 無蜜腺，邊緣呈鋸齒狀，總萼片長為花瓣的1/2;花瓣藍(lán)色、白色或淡 紅色，長約lcm以上，呈倒卵形；柱頭呈線形，向下延伸至花柱的內(nèi) 側(cè)；果實為具有5室的蒴果，卵球形，7 10mm長，由宿存粵包圍， 果皮不分裂；每個果實內(nèi)種子不超過10粒，黃色或淺褐色到深褐色， 有光澤，大小不等，千粒重3 12g。種子扁平，卵形， 一端圓滑，另 一端尖銳。
亞麻既是一種優(yōu)良的紡織和油料作物，又具有多種藥用功能。在紡 織工業(yè)中，雖然與棉花、羊毛相比，亞麻纖維柔軟性和彈性不足，但 強力高，在麻類作物中強力僅次于苧麻。用特殊的紡織技術(shù)可將亞麻 纖維紡成高支紗并織成精美的織物。亞麻種子含有20% — 30%的蛋白 質(zhì)，用它可以搾出亞麻油。80%的亞麻油用于生產(chǎn)油漆。亞麻籽榨出油 后，殘留物可壓制成亞麻餅，亞麻餅仍含3%_6%的亞麻油。因為蛋 白質(zhì)含量高，亞麻餅被認(rèn)為是一種極好的牲畜飼料。在藥用方面，主 要使用其種子，具有潤腸通便、養(yǎng)血祛風(fēng)之功效，用于治療腸燥便秘、
過敏性皮炎、皮膚瘙癢等。
盡管文獻記載亞麻根也可藥用，但是，目前綜合利用亞麻的實際情 況仍然是將亞麻根作為廢棄物處理。有關(guān)的科學(xué)研究，特別是有關(guān)亞 麻根的具體藥用價值至今未見任何正式研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
為了充分利用亞麻的資源，發(fā)明人對亞麻根進行了系統(tǒng)研究，獲得 了亞麻根總黃酮，并通過通過廣泛的藥理篩選，證明了亞麻根總黃酮 對急性肝損傷有明顯保護作用。
本發(fā)明要解決的 一 個技術(shù)問題是提供 一 種亞麻(Linum usitatissimum L.)根總黃酮。
本發(fā)明要解決的另一個技術(shù)問題是提供這種亞麻根總黃酮的制備方法。
本發(fā)明要解決的再一個技術(shù)問題是提供含有這種亞麻根總黃酮的 藥物組合物。
本發(fā)明要解決的又一個技術(shù)問題是提供含有這種亞麻根總黃酮在 制備預(yù)防和/或治療肝炎藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明亞麻根總黃酮的制備方法，包括如下步驟
(A) 以亞麻(LinumusitatissimumL.)的植株地下部分作為原料，使用 溶劑提取，回收溶劑得粗浸膏；
(B) 粗浸膏用水溶解，然后用低級性的有機溶劑萃取，萃取完成后 棄去低級性有機溶劑部分；
(C) 剩余的水溶液再用有機溶劑萃取，保留有機溶劑層，棄去水層；
(D) 有機溶劑萃取液先洗滌再濃縮有黃色沉淀析出，濾出此沉淀， 即得亞麻根總黃酮。
具體而言，取亞麻(Linum usitatissimum L.)的植株地下部分作為原 料，原料適度干燥。
為提高提取的效率可以適當(dāng)粉碎，以利于增大與溶劑的接觸面積，
提高效率。
原藥材的提取溶劑可以使用水和/或有機溶劑及它們的混合物。 優(yōu)選的有機溶劑包括丙酮、醇類。優(yōu)選的醇類包括甲醇、乙醇、異丙 醇、丁醇等。水和有機溶劑混合物優(yōu)選是水與醇類的混合物，例如含
有醇l- (95) % (體積比)的水。
提取時溶劑量為原藥重量的5-14倍。每次加入提取溶劑的量最好 沒過藥材原料。提取可以在靜態(tài)或動態(tài)下，優(yōu)選在動態(tài)條件下。為了 提高提取的效率，可以使用蒸汽加熱、電加熱等。提取的溫度是從室 溫(例如2(TC)到溶劑回流溫度的范圍內(nèi)，優(yōu)選在回流的溫度下。提 取可連續(xù)或間歇進行，間歇提取時可重復(fù)l-4次，
提取結(jié)束后，回收溶劑得粗浸膏。粗浸膏用水溶解。然后用低級 性的有機溶劑萃取，優(yōu)選的低級性有機溶劑有氯仿、苯、環(huán)己烷、 石油醚、溶劑油、或醋酸乙酯，更優(yōu)選的是醋酸乙酯。所用的低級性 有機溶劑可以是粗浸膏醇溶液的1-6倍。萃取的次數(shù)為2-5遍，優(yōu)選是 3-4次。萃取完成后棄去低級性有機溶劑部分，以除去粗浸膏中的低級 性成分。
水溶液再用有機溶劑萃取，優(yōu)選的有機溶劑是正丁醇。每次萃取 使用的有機溶劑的量是水體積的0.1—5倍，優(yōu)選是0.2-1.5倍?？梢暂?取l-6次，優(yōu)選是2-5次，更優(yōu)選是3次。保留有機溶劑層，棄去水層 以除去水溶性成分。
合并有機溶劑萃取液并選用NaHC03水溶液萃取、再用H20洗滌 至中性。將水洗后的有機溶劑萃取物回收溶劑，有黃色沉淀析出，濾 出此沉淀，即得亞麻根總黃酮，此總黃酮具有鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽性(黃色 變?yōu)樽霞t色)的黃酮類特征性質(zhì)。
根據(jù)本發(fā)明還涉及含有作為活性成份的本發(fā)明的提取物和常規(guī)藥 物賦形劑或輔劑的藥物組合物。通常本發(fā)明藥物組合物含有0.1-95重 量％的本發(fā)明提取物。
本發(fā)明的提取物的藥物組合物可根據(jù)本領(lǐng)域公知的方法制備。用 于此目的時，如果需要，可將本發(fā)明提取物與一種或多種固體或液體
藥物賦形劑和/或輔劑結(jié)合，制成可作為人藥或獸藥使用的適當(dāng)?shù)氖┯?形式或劑量形式。
本發(fā)明提取物或含有它的藥物組合物可以單位劑量形式給藥，給 藥途徑可為腸道或非腸道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、 皮膚、腹膜或直腸等，優(yōu)選口服。
本發(fā)明提取物或含有它的藥物組合物的給藥途徑可為注射給藥。 注射包括靜脈注射、肌肉注射、皮下注射和皮內(nèi)注射等。
給藥劑型可以是液體劑型、固體劑型。如液體劑型可以是真溶液 類、膠體類、微粒劑型、乳劑劑型、混懸劑型。其他劑型例如片劑、 膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、 栓劑、凍干粉針劑等。
本發(fā)明提取物可以制成普通制劑、也可以是緩釋制劑、控釋制劑、 靶向制劑及各種微粒給藥系統(tǒng)。
為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種 載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫 酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶 土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二 醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯 膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙 烯吡咯垸酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀 粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二 烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、 三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十 二垸基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂 酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。其它載體如聚丙烯酸樹脂類、 脂質(zhì)體，水溶性載體如PEG4000和PEG6000、 PVP等。還可以將片劑 進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙 層片和多層片。
例如為了將給藥單元制成丸劑，可以廣泛使用本領(lǐng)域公知的各種 載體。關(guān)于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、
淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、Gelucire、高嶺土、滑 石粉等；粘合劑，如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、 米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二垸基 磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。
例如為了將給藥單元制成膠囊，將有效成分，即本發(fā)明提取物與 上述的各種載體混合，并將由此得到的混合物置于硬的明膠膠囊或軟 膠囊中。也可將有效成分本發(fā)明提取物制成微囊劑，混懸于水性介質(zhì) 中形成混懸劑，亦可裝入硬膠囊中或制成注射劑應(yīng)用。
例如，將本發(fā)明提取物制成注射用制劑，如溶液劑、混懸劑溶液 劑、乳劑、凍干粉針劑，這種制劑可以是含水或非水的，可含一種和 /或多種藥效學(xué)上可接受的載體、稀釋劑、粘合劑、潤滑劑、防腐劑、 表面活性劑或分散劑。如稀釋劑可選自水、乙醇、聚乙二醇、1， 3-丙 二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂 肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適 量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規(guī)的助溶劑、緩沖 劑、pH調(diào)節(jié)劑等。這些輔料是本領(lǐng)域常用的。
此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、 矯味劑、甜味劑或其它材料。
為達(dá)到用藥目的，增強治療效果，本發(fā)明的藥物或藥物組合物可 用任何公知的給藥方法給藥。
本發(fā)明提取物、藥物組合物的給藥劑量取決于許多因素，例如所 要預(yù)防或治療疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，患者或動物的性別、年齡、體 重、性格及個體反應(yīng)，給藥途徑、給藥次數(shù)、治療目的，因此本發(fā)明 的治療劑量可以有大范圍的變化。 一般來講，本發(fā)明中藥學(xué)成分的使 用劑量是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。可以根據(jù)本發(fā)明提取物組合物中最 后的制劑中所含有的實際藥物數(shù)量，加以適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，以達(dá)到其治療 有效量的要求，完成本發(fā)明的預(yù)防或治療目的。本發(fā)明提取物的每天 的合適劑量范圍(本發(fā)明的提取物或提取物的用量)為 0.001—150mg/Kg體重，優(yōu)選為0.01—100mg/Kg體重，更優(yōu)選為 0.01—60mg/Kg體重，最優(yōu)選為0.1—10mg/Kg體重。上述劑量可以單
一劑量形式或分成幾個，例如二、三或四個劑量形式給藥，這受限于 給藥醫(yī)生的臨床經(jīng)驗以及包括運用其它治療手段的給藥方案。
具體實施例方式
下面的實施例進一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。 實施例1亞麻根總黃酮的制備
將200kg亞麻(Linum usitatissimum L.)根用85%乙醇回流提取3次， 合并提取液，減壓回收乙醇，得粗提取物。
此粗提取物用水溶解，然后依次用和水同體積的醋酸乙酯萃取3 次，棄去醋酸乙酯部分。
水層再用同體積的正丁醇萃取3次；將正丁醇層合并。
將正丁醇提取液先用同體積的5%碳酸氫鈉水溶液萃取3次，再用 水萃取至中性。
減壓回收溶劑得正丁醇提取物，得到亞麻根正丁醇提取物，有黃 色沉淀析出，過濾，得亞麻根總黃酮，該總黃酮具有鹽酸-鎂粉反應(yīng)陽 性(黃色變?yōu)樽霞t色)的特征黃酮類反應(yīng)。
實施例2、亞麻根總黃酮急性毒性研究
(1) 試驗動物
昆明種小鼠，雄性，體重18 22克，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院試驗動 物研究所提供，合格證號SCDK(京)2004-0001
(2) 受試藥物
亞麻根總黃酮，黃色粉末，2 5。C避光保存，由本所秦海林教 授提供，用時以0.5%CMC-Na配制成250mg/ml懸液。 (3)試驗方法
10只小鼠，口服亞麻根總黃酮，濃度為250mg/ml，每只小鼠灌 胃體積為l.Oml (即最高濃度、最大灌胃體積)。給藥后7天內(nèi)，觀察 小鼠體征及死亡情況。
(4) 試驗結(jié)果
小鼠口服亞麻根總黃酮后，體征未出現(xiàn)明顯變化。無死亡情況發(fā)生。
(5) 結(jié)論
小鼠口服亞麻根提取物12.5g/kg，未出現(xiàn)任何毒性反應(yīng)。
實施例3、亞麻根總黃酮對ConA引起小鼠急性肝損傷的作用
(1) 試驗動物
昆明種小鼠，雄性，體重18 22克，由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院試驗動 物研究所提供，合格證號SCDK(京)2004-0001
(2) 受試藥物
亞麻根總黃酮，黃色粉末，2 5t避光保存，由本所秦海林教 授提供，用時以0.5%CMC-Na配制成250mg/ml懸液。
(3) 陽性對照藥
雙環(huán)醇，白色粉狀，由北京協(xié)和藥廠提供，批號20030801，用時 以0.5MCMC-Na混懸。
(4) 試驗方法
將動物隨機分為6組，每組7只，分別為正常對照組，ConA模 型組、亞麻根總黃酮大劑量給藥組、亞麻根總黃酮中劑量給藥組、亞 麻根總黃酮小劑量給藥組、和雙環(huán)醇給藥組。亞麻根總黃酮和雙環(huán)醇 給藥組動物在給予ConA前24,8和1小時分別口服亞麻根總黃酮(0.5， 1， 2g/kg)和雙環(huán)醇(200mg/kg)，正常對照組和ConA模型組給予同 體積賦形劑。除正常對照組外，各組均靜脈注射ConA (購自Sigma公 司)，劑量為26mg/kg，體積20ml/kg。禁食過夜。給予ConA 16小時 后將動物斷頭處死，取血，測定血清中ALT和AST的含量。
(5) 試驗結(jié)果
正常動物尾靜脈注射ConA后，血清ALT和AST明顯升高。雙 環(huán)醇對ConA誘發(fā)的血清ALT和AST升高有顯著保護作用。動物提前 口服亞麻根總黃酮三個劑量對ConA引起的小鼠血清ALT和AST升高 都具有顯著的保護作用，并呈明顯的劑量-效應(yīng)關(guān)系。結(jié)果見表l。
表1.亞麻根總黃酮對ConA引起小鼠急性肝損傷的保護作用
組別劑量ALT(U/dL)AST(U/dL)
正常對照/28.56±6.98***116.35± 15.27***
ConA模型/693.42±338.99448.31 ±209.67
亞麻根總黃酮2g/kg67.72±32.01***169.26±24.88 **
lg/kg75.76±44.82***173.75 ±26.67**
0.5g/kg107.31 ±52.43***225.64 ±95.52*
雙環(huán)醇200mg/kg16.49±9.98***119.08±43.07***
*P<0.05 **P<0.01 ***P<0.001與模型組相比有顯著性差異。
(6)結(jié)論
小鼠提前口服亞麻根總黃酮對ConA引起小鼠急性肝損傷的有明 顯保護作用。
權(quán)利要求
1、一種亞麻根總黃酮的制備方法，其特征在于，包括如下步驟(A)以亞麻(Linum usitatissimum L.)的植株地下部分作為原料，使用溶劑提取，回收溶劑得粗浸膏；(B)粗浸膏用水溶解，然后用低級性的有機溶劑萃取，萃取完成后棄去低級性有機溶劑部分；(C)剩余的水溶液再用有機溶劑萃取，保留有機溶劑層，棄去水層；(D)有機溶劑萃取液先洗滌再濃縮有黃色沉淀析出，濾出此沉淀，即得亞麻根總黃酮。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于步驟(A)中所述的有機溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于步驟(A)中所述 的有機溶劑的量是原料重量的5-14倍。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于步驟(A)中所述的提取的溫度是溶劑回流的溫度。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于步驟(B)中所述的低級性有機溶劑選自氯仿、苯、環(huán)己烷、石油醚、溶劑油、醋酸乙酯。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1的制備方法，其特征在于步驟(C)中所述的有機溶劑是正丁醇。
7、 權(quán)利要求1—6的制備方法獲得的亞麻根總黃酮，其特征在于，所述的亞麻根總黃酮在鹽酸-鎂粉反應(yīng)中由黃色變?yōu)樽霞t色。
8、 一種藥物組合物，其特征在于，包括權(quán)利要求7的亞麻根亞麻 根總黃酮和制藥學(xué)上常用的載體。
9、 權(quán)利要求7的亞麻根亞麻根總黃酮在制備預(yù)防和/或治療肝炎 藥物中的應(yīng)用。
10、 一種保健品，其特征在于，包括權(quán)利要求7的亞麻根亞麻根 總黃酮。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種亞麻(Linum usitatissimum L.)根總黃酮，這種亞麻根總黃酮的制備方法，含有這種亞麻根總黃酮的藥物組合物和保健品，這種亞麻根總黃酮在制備預(yù)防和/或治療肝炎藥物和保健品中的應(yīng)用。
文檔編號A61K125/00GK101108204SQ20061010336
公開日2008年1月23日 申請日期2006年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月21日
發(fā)明者波 劉, 霞 張, 李志宏, 母海成, 鵬 王, 秦海林 申請人:龍井民康生物制品廠;中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所