專利名稱：麥胚芽油在防治皮膚衰老及保健美容的藥物制劑中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及幾種植物油麥胚芽油、月見草油、紫蘇仔油、核桃油、紅花油在制備用于防治皮膚衰老及保健美容的藥物制劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
健康和長(zhǎng)壽是生命科學(xué)永恒的主題。隨著世界人口的加速老齡化，抗衰老研究已成為迅速崛起的一門應(yīng)用科學(xué)。人體衰老的最早部位是骨組織和皮膚。醫(yī)學(xué)研究證明人在20歲以后骨的衰老就慢慢開始了，直到50歲以后，骨質(zhì)疏松癥大大加快，并容易造成骨折。骨質(zhì)疏松癥使衰老的重要標(biāo)志之一，另一個(gè)就是皮膚衰老，皮膚老化是機(jī)體老化的一部分，機(jī)體的老化在皮膚上表現(xiàn)得最為清楚。防治骨質(zhì)疏松癥與皮膚老化已成為醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的熱點(diǎn)，但很少有人把這兩者聯(lián)系起來。我們?cè)诳顾ダ霞翱构琴|(zhì)疏松的研究過程中，發(fā)現(xiàn)幾種植物油具有良好的預(yù)防骨質(zhì)疏松的作用，同時(shí)也有很好的預(yù)防皮膚衰老的功能，這幾種植物油是麥胚芽油、月見草油、紫蘇仔油、核桃油、紅花油。

發(fā)明內(nèi)容
本項(xiàng)目研究組發(fā)現(xiàn)幾種植物油麥胚芽油、月見草油、紫蘇仔油、核桃油、紅花油具有防治骨質(zhì)疏松癥的作用，同時(shí)，又具有預(yù)防皮膚衰老的作用，可用于制備防治骨質(zhì)疏松癥的藥物制劑，也可用于制備預(yù)防皮膚衰老的制劑。
此外，進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，花生油，芝麻油，山茶油，大豆油，沙棘油，紫草油也有一定的抗骨質(zhì)疏松及防治皮膚衰老的作用。
上述植物油可制成片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑，口服液，外用制劑，注射劑和任何可供臨床應(yīng)用的的藥物制劑。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例一1.實(shí)驗(yàn)方法1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)條件三月齡普通級(jí)Sprangue-Dawley(SD)雌性大鼠70只(廣東醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重225±12g。飼養(yǎng)條件飼養(yǎng)室內(nèi)溫度保持24℃~28℃，濕度在50％~60％。分籠普通喂養(yǎng)。每籠兩只，自由攝食攝水，專室飼養(yǎng)，專人負(fù)責(zé)，每周稱體重一次。動(dòng)物飼養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)共三個(gè)月。
1.2研究藥物及配制方法(1)己烯雌酚廣東彼迪藥業(yè)有限公司；配制方法己烯雌酚2mg，蒸餾水1000ml，加溫溶解即可。
(2)四種植物油精制月見草油，精制紫蘇仔油，精制麥胚芽油，精制核桃油均購于大連濃華生物工程有限公司，這幾種油的主要組成成分見表1表1幾種油的主要組成成分的含量

1.3.實(shí)驗(yàn)方法用卵巢切除法建立雌激素缺乏的老年性骨質(zhì)疏松與皮膚衰老的大鼠動(dòng)物模型，對(duì)照大鼠采用假手術(shù)方法，即實(shí)驗(yàn)時(shí)同樣做手術(shù)，但不切除卵巢，作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照。實(shí)驗(yàn)分組給藥情況見表1表1藥物抗骨質(zhì)疏松與皮膚衰老研究實(shí)驗(yàn)分組及給藥情況

1.4.動(dòng)物的去勢(shì)和給藥動(dòng)物的去勢(shì)除假手術(shù)組大鼠外，余各組大鼠用3％戊巴比妥麻醉(0.12ml/kg)，在嚴(yán)格消毒條件下，行大鼠去卵巢手術(shù)，一星期后拆線。假手術(shù)組大鼠在相同部位(兩側(cè)腹部)打開腹腔不摘除卵巢立即縫合。
給藥假手術(shù)組和卵巢切除組每天經(jīng)口灌喂生理鹽水5ml*kg-1*d-1，己烯雌酚組每天經(jīng)口灌喂己烯雌酚10ug kg-1*d-1；月見草油組、紫蘇仔油組、麥胚芽油組、核桃油組每天經(jīng)口分別灌喂月見草油、紫蘇仔油、麥胚芽油、核桃油5ml*kg-1*d-1。連續(xù)給藥三個(gè)月。
1.5.取材連續(xù)給藥三個(gè)月后，在3％戊巴比妥麻醉下，右心室抽血處死大鼠，分離血清作血清Ca測(cè)定。取左側(cè)尺骨，除凈肌肉和軟組織，80℃烘烤48h至恒重得骨干重，然后于6mol·L-1HCl，108℃溫度下消化16h后過濾取過濾液，用ICP(電感偶合等離子體直讀光譜儀)測(cè)定骨中鈣(Ca)、磷(P)含量，以及骨羥脯氨酸(Hyp)含量(羥脯氨酸試劑盒為南京建成生物工程公司產(chǎn)品)。分離右側(cè)脛骨，用慢速鋸在近端作矢狀打開髓腔，放入10％福爾馬林緩沖液固定，然后脫水，脫脂作塑料包埋。用硬組織切片機(jī)分別切下不脫鈣4μm和8μm切片，4μm切片用Goldner’s Trichrome染色封片，進(jìn)行骨計(jì)量學(xué)靜態(tài)參數(shù)(static parameters)測(cè)量。8μm切片不染色封片作熒光觀察進(jìn)行骨計(jì)量學(xué)動(dòng)態(tài)參數(shù)(dynamic parameters)測(cè)量。此外，動(dòng)物處死當(dāng)時(shí)即取背部正中皮膚，用脫毛劑脫去鼠毛，取一1cm×1cm大小皮膚迅速放入10％中性甲醛液中固定，擬作組織切片進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察及定量分析；另取余部位背部皮膚迅速冰凍保存，擬作皮膚組織勻漿測(cè)皮膚SOD、羥脯氨酸及MDA含量。
1.6.皮膚組織制備(1)10％皮膚勻漿的制備①取脫毛后的皮膚組織塊0.5g左右，經(jīng)冷生理鹽水漂洗，除去皮下脂肪和其它結(jié)締組織，濾紙拭干，稱重，放入10ml的小燒杯中。
②用量筒取該組織塊重量9倍的預(yù)冷的生理鹽水，取2/3倒入裝有組織塊的燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊，然后倒入勻漿管中將剩余的1/3生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的組織塊，一起倒入勻漿管，用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)攪拌制成10％組織勻漿(勻漿時(shí)間10次/秒，間歇3秒，連續(xù)7~10次，在冰水中進(jìn)行)。
③取少量組織勻漿直接涂片，在顯微鏡下觀察細(xì)胞的破碎情況，若破碎不全，則反復(fù)凍溶三次，使其完全破碎，使胞內(nèi)容物完全游離在液相中。
(2)組織切片染色彈力纖維染色 采用Weigert間苯二酚-堿性品紅染色法操作方法①石蠟切片，脫蠟至水，蒸餾水洗。
②0.25％高錳酸鉀氧化10分鐘。
③0.5％草酸漂白為止。
④蒸餾水洗后95％酒精洗一次。
⑤直接浸入Weigert溶液20~60分鐘。
⑥0.5％鹽酸酒精分化，觀察背景無色彈力纖維清楚為好。
⑦水洗，快洗后進(jìn)二甲苯透明，中性樹膠封固。
(結(jié)果彈力纖維呈黑藍(lán)色。)膠原纖維染色采用Van Gieson染色法，操作方法如下①組織固定10％福爾馬林液，常規(guī)脫水包埋。
②切片脫落至蒸餾水。
③用Weigert鐵蘇木素液染10~20分鐘。
④流水稍沖洗。
⑤1％鹽酸酒精迅速分化。
⑥流水沖洗后蒸餾水沖洗。
⑦用Van Gieson液染3~5分鐘。
⑧傾去染液，直接用95％酒精分化和脫水。
⑨無水酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。
(結(jié)果膠原纖維呈紅色，肌纖維、胞質(zhì)及紅細(xì)胞呈黃色，細(xì)胞核呈藍(lán)黑色。)表皮細(xì)胞染色采用HE染色法染色。操作方法略。
1.7、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析運(yùn)用SAS軟件進(jìn)行單因素分析，先采用SAS中的UNIVARIATE過程檢驗(yàn)方差齊性，若方差相等采用方差分析，組間比較再采用SNK-q檢驗(yàn)；若方差不齊則采用Kruskal-Wallis秩和檢驗(yàn)，再用Nemenyi檢驗(yàn)比較兩組間差別。
2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果2.1去卵巢大鼠皮膚衰老的結(jié)果2.1.1去卵巢大鼠皮膚組織病理學(xué)形態(tài)變化及計(jì)算機(jī)圖像定量分析(1)表皮結(jié)構(gòu)的變化去卵巢大鼠與假手術(shù)大鼠表皮結(jié)構(gòu)的皮膚組織病理學(xué)形態(tài)變化具有明顯的不同特點(diǎn)，卵巢切除大鼠的皮膚表皮厚度明顯變薄，細(xì)胞層數(shù)減少，基底細(xì)胞排列散亂，細(xì)胞大小不一。對(duì)照組(假手術(shù)組)表皮厚度較厚，由3～5層細(xì)胞組成，棘細(xì)胞散在分布，基底細(xì)胞呈立方形，排列整齊。大鼠皮膚表皮厚度計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)定量分析結(jié)果見表2表2大鼠皮膚表皮厚度計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)定量分析結(jié)果

注*P＜0.01從表2可見，卵巢切除組表皮厚度較假手術(shù)組減少了22％，差別有顯著性(P＜0.01)。
(2)去卵巢大鼠真皮彈力纖維形態(tài)學(xué)觀察去卵巢大鼠真皮彈力纖維Weigert間苯二酚-堿性品紅染色形態(tài)學(xué)觀察可見，卵巢切除組彈力纖維變短、減少，排列散亂。假手術(shù)組彈力纖維較細(xì)長(zhǎng)，有輕微彎曲度，排列相對(duì)有序，纏繞在膠原束中間，毛囊周圍呈環(huán)形排列。大鼠皮膚彈力纖維面積計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)定量分析結(jié)果見表3表3大鼠皮膚彈力纖維面積計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)定量分析結(jié)果


注*P＜0.01從表3可見，卵巢切除組彈力纖維面積較假手術(shù)組減少了29％，差別有顯著性(P＜0.01)。
(3)去卵巢大鼠真皮膠原纖維形態(tài)學(xué)觀察真皮膠原纖維Van Gieson染色法形態(tài)學(xué)觀察可見，卵巢切除組皮膚膠原層厚度變薄，膠原束斷裂甚至破碎，走向平直，排列疏松且紊亂。假手術(shù)組膠原纖維束細(xì)長(zhǎng)，胞體豐富，呈束狀排列，走向與皮面平行，呈波紋狀，在毛囊周圍纖維纖細(xì)且排列疏松。
(4)去卵巢大鼠皮膚生化指標(biāo)的檢測(cè)①大鼠皮膚組織MDA含量的檢測(cè)見表4表4大鼠皮膚組織MDA含量

注*P＜0.01從表4可見，卵巢切除組MDA含量較假手術(shù)組升高了35％，差別有顯著性(P＜0.01)。
②大鼠皮膚組織中SOD活性的檢測(cè)見表5表5大鼠皮膚組織中SOD活性

注*P＜0.01從表5可見，卵巢切除組SOD活性較假手術(shù)組降低了18％，差別有顯著性(P＜0.01)。
③大鼠皮膚組織羥脯氨酸含量的檢測(cè)見表6表6大鼠皮膚組織羥脯氨酸含量檢測(cè)結(jié)果

注*P＜0.01從表6可見，卵巢切除組羥脯氨酸含量較假手術(shù)組降低了37％，差別有顯著性(P＜0.01)。
2.1.2小結(jié)正常3月齡大鼠行卵巢切除后，可造成雌性大鼠皮膚SOD活力降低、羥脯氨酸含量減少、MDA含量增加；表皮層厚度變薄，彈力纖維減少。說明了采用卵巢切除術(shù)建立雌激素缺乏大鼠皮膚衰老模型是可行的。
2.2五種藥物抗皮膚衰老的結(jié)果3.2.1藥物對(duì)大鼠皮膚組織病理形態(tài)學(xué)的影響及計(jì)算機(jī)圖像定量分析(1)表皮結(jié)構(gòu)的變化表皮結(jié)構(gòu)的皮膚組織病理學(xué)形態(tài)變化可見，己烯雌酚組表皮較假手術(shù)組和卵巢切除組明顯增厚，細(xì)胞層數(shù)增多，排列相對(duì)有序，基底細(xì)胞胞體大，排列規(guī)整。月見草油組、紫蘇仔油組、麥胚芽油組、核桃油組表皮較假手術(shù)組和卵巢切除組顯著增厚，細(xì)胞層數(shù)增多，排列有序，胞間基質(zhì)豐富，基底細(xì)胞胞體大，排列更加規(guī)整。計(jì)算機(jī)圖像定量分析見表7。
表7大鼠皮膚表皮厚度計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)定量分析結(jié)果

注(1)*P＜0.01；(2)變化比例1與假手術(shù)組比較，變化比例2與卵巢切除組比較，變化比例3與己烯雌酚組比較。
(2)真皮彈力纖維染色形態(tài)學(xué)觀察真皮彈力纖維Weigert間苯二酚-堿性品紅染色形態(tài)學(xué)觀察可見，己烯雌酚組彈力纖維較假手術(shù)組和卵巢切除組明顯增多，彈力纖維細(xì)長(zhǎng)。月見草油組、紫蘇仔油組、麥胚芽油組、核桃油組彈力纖維較假手術(shù)組和卵巢切除組顯著增多，彈力纖維細(xì)長(zhǎng)。計(jì)算機(jī)圖像定量分析見表8。
表8大鼠皮膚彈力纖維面積計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)定量分析結(jié)果

注(1)*P＜0.01；(2)變化比例1與假手術(shù)組比較，變化比例2與卵巢切除組比較，變化比例3與己烯雌酚組比較。
(3)真皮膠原纖維形態(tài)學(xué)觀察真皮膠原纖維Van Gieson染色法形態(tài)學(xué)觀察可見，己烯雌酚組膠原纖維較假手術(shù)組和卵巢切除組排列致密、規(guī)整，呈波浪狀，與皮面平行。月見草油組、紫蘇仔油組、麥胚芽油組、核桃油組較假手術(shù)組和卵巢切除組膠原纖維明顯增厚，膠原束排列規(guī)整、更為致密。
(4)皮膚生化指標(biāo)的檢測(cè)①大鼠皮膚組織MDA含量的檢測(cè)見表9表9大鼠皮膚組織MDA含量檢測(cè)結(jié)果

注(1)*P＜0.01；(2)變化比例1與假手術(shù)組比較，變化比例2與卵巢切除組比較，變化比例3與己烯雌酚組比較。
②大鼠皮膚組織羥脯氨酸含量的檢測(cè)見表10表10大鼠皮膚組織羥脯氨酸含量檢測(cè)結(jié)果


注(1)*P＜0.01；(2)變化比例1與假手術(shù)組比較，變化比例2與卵巢切除組比較，變化比例3與己烯雌酚組比較。
③大鼠皮膚組織SOD含量的檢測(cè)見表11表11大鼠皮膚組織SOD含量檢測(cè)結(jié)果

注(1)*P＜0.01；(2)變化比例1與假手術(shù)組比較，變化比例2與卵巢切除組比較，變化比例3與己烯雌酚組比較。
2.2小結(jié)己烯雌酚組大鼠表皮層厚度增厚，彈力纖維明顯增多；己烯雌酚組皮膚SOD活性增強(qiáng)、皮膚羥脯氨酸含量增加及皮膚MDA含量下降。月見草油組、紫蘇仔油組、麥胚芽油組、核桃油組大鼠表皮層厚度增厚，彈力纖維明顯增多；月見草油組、紫蘇仔油組、麥胚芽油組、核桃油組皮膚SOD活性增強(qiáng)、皮膚羥脯氨酸含量增加及皮膚MDA含量下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示己烯雌酚、月見草油、麥胚芽油、紫蘇仔油及核桃油均具有抗卵巢切除引起的皮膚衰老的作用，且月見草油、麥胚芽油、紫蘇仔油及核桃油作用優(yōu)于己烯雌酚。
2.3骨計(jì)量學(xué)參數(shù)的測(cè)量骨計(jì)量學(xué)靜態(tài)參數(shù)的結(jié)果可見，去卵巢大鼠與對(duì)照大鼠相比，90天后骨量明顯丟失，骨小梁數(shù)目降低(P＜0.01)，骨小梁分離度增加(P＜0.01)，破骨細(xì)胞數(shù)目增加(P＜0.01)。己烯雌酚使去卵巢大鼠的骨量及骨小梁數(shù)目明顯增加(P＜0.01)、骨小梁分離度及破骨細(xì)胞數(shù)目明顯減少。月見草油，紫蘇仔油，麥胚芽油，核桃油均可使去卵巢大鼠的骨量有增加(P＜0.05)，但與己烯雌酚組無差別。
骨計(jì)量學(xué)動(dòng)態(tài)參數(shù)的結(jié)果可見，去卵巢組大鼠骨形成指標(biāo)明顯增加礦化沉積率增加(P＜0.05)、骨形成率BFR/BV增加(P＜0.05)。己烯雌酚能抑制去卵巢大鼠的骨形成率(BFR/BV，P＜0.05)。月見草油，紫蘇仔油，麥胚芽油，核桃油均對(duì)去卵巢大鼠骨形成指標(biāo)無明顯影響。
以上研究表明，月見草油，紫蘇仔油，麥胚芽油，核桃油對(duì)實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物骨質(zhì)疏松有明顯的防治作用。
權(quán)利要求
1.麥胚芽油在制備用于防治皮膚衰老的藥物制劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了麥胚芽油具有預(yù)防皮膚衰老的作用，可用于制備防治皮膚衰老及保健美容的制劑。麥胚芽油可在制備防治骨質(zhì)疏松癥及皮膚衰老的藥物制劑中應(yīng)用，可制成片劑，膠囊劑，顆粒劑，沖劑，口服液，外用制劑，注射劑和任何可供臨床應(yīng)用的藥物制劑。
文檔編號(hào)A61P17/00GK1927355SQ20061011056
公開日2007年3月14日 申請(qǐng)日期2005年6月8日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月8日
發(fā)明者吳鐵, 崔燎, 石麗君, 劉曉青, 劉鈺瑜 申請(qǐng)人:廣東醫(yī)學(xué)院