專利名稱：一種抗輻射組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及保健食品領(lǐng)域，具體地說，涉及一種含有單核苷酸的抗輻射損傷的組合物。
背景技術(shù)：
由于經(jīng)濟的發(fā)展和城市的現(xiàn)代化，我國城市電磁環(huán)境日趨復(fù)雜。有專家指出城市空間人為電磁能量將以每年7-14％的速度增長，到2000年城市環(huán)境電磁能量密度最高比上個世紀70年代增長26倍。對每個家庭來說，家用電器的種類和數(shù)量在不斷增加，但是如電腦、電視、冰箱、微波爐、手機等家用電器在給人們帶來方便的同時也帶來大量的電磁輻射；另外，隨著醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的發(fā)展，放療治療及大型檢查儀器的頻繁應(yīng)用也給患者帶來了電磁輻射。
電離輻射作用于細胞時，經(jīng)過能量吸收與傳遞可由直接作用引起生物大分子的損傷。這些生物大分子與水分子同時存在于同一細胞環(huán)境中，故電離輻射也可引起水分子的電離與激發(fā)，水分子在電離和激發(fā)過程中均可產(chǎn)生自由基。自由基是在軌道外層具有不成對電子的不帶電的原子或分子，如H·或OH·等。自由基可造成細胞嚴重損傷，因為它具有很強的破壞分子結(jié)構(gòu)的反應(yīng)活性，可造成大分子的損傷。大約二分之一的輻射生物效應(yīng)是由水分子自由基引起的，其余一半的生物效應(yīng)則來自生物大分子的直接電離。
自由基性質(zhì)活潑，具有很強的氧化反應(yīng)能力，很容易與其他物質(zhì)生成新的自由基，自由基反應(yīng)往往可以連鎖方式進行下去。若反應(yīng)體系中有自由基清除劑(亦稱抗氧化劑)存在，它就能有效地阻擋自由基的連鎖反應(yīng)，從而起到清除自由基的作用。在正常情況下，人體內(nèi)的自由基是處于不斷產(chǎn)生與清除的動態(tài)平衡之中。如果自由基產(chǎn)生過多或清除過慢，它會對生物體產(chǎn)生一系列損害，加速機體的衰老過程并誘發(fā)各種疾病。據(jù)研究，氧自由基是基因突變、癌癥生成的元兇，人體細胞核內(nèi)有23對染色體，儲存著所有的遺傳基因。基因本身也是由分子組成，氧自由基也可能向它們借貸或奪取電子，從而使抗癌基因失去抗癌活性，潛伏的原癌基因被激活，成為癌基因，如此癌魔便乘機出籠。目前的研究結(jié)果表明，自由基幾乎和人類常見的幾種主要疾病都有關(guān)系1、自由基對核酸的損害脫氧核糖核酸(DNA)是生物遺傳信息的攜帶者，是生物的遺傳物質(zhì)，與生物的繁殖、遺傳和變異密切相關(guān)。生物幾乎所有的遺傳信息都貯存在DNA中，這些信息通過信使RNA(mRNA)表達出來，合成蛋白質(zhì)而顯示出生物的特異性。如果DNA的結(jié)構(gòu)或構(gòu)象發(fā)生變化，其功能亦隨之改變，這是造成癌癥以及各種疾病的導(dǎo)火線。引起DNA異常的物質(zhì)有多種，其中最主要的是氧自由基，特別是羥基自由基，香煙、致癌物質(zhì)、放射線、紫外線等能損傷DNA也是由于它們都能產(chǎn)生活性氧自由基。
而氧自由基的危害就在于能與堿基或五碳糖發(fā)生反應(yīng)，生成堿基自由基或在DNA的脫氧核糖部分形成自由基，最終使DNA鏈斷裂或堿基破壞、缺失，造成遺傳信息改變，使生物體發(fā)生突變或產(chǎn)生病變；嚴重損傷的DNA無法修復(fù)，以致造成細胞死亡。輻射作用于核酸環(huán)境中的水分子，使其電解產(chǎn)生羥基自由基和超氧化物自由基，大劑量的輻射可造成DNA斷裂，小劑量輻射可使DNA主鏈斷裂、堿基降解和氫鍵破壞。
2、自由基對蛋白質(zhì)的損害自由基可直接作用于蛋白質(zhì)，或者通過脂質(zhì)過氧化物間接作用于蛋白質(zhì)，使蛋白質(zhì)的多肽鏈斷裂或個別氨基酸發(fā)生變化或使蛋白質(zhì)交聯(lián)而發(fā)生聚合作用，從而使蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，導(dǎo)致細胞功能紊亂。如老年人皮膚起皺、骨骼變脆等都與膠原蛋白破壞和功能改變有關(guān)。
3、自由基對碳水化合物的損害碳水化合物(糖類)是動物體內(nèi)的主要能源和碳源，在正常情況下，生物體內(nèi)70％的能量主要來自碳水化合物的分解；同時它們也是一些重要結(jié)構(gòu)的組成成分，如組成DNA及膜多糖，因此糖是生命活動所必須的。自由基可使組成核酸的核糖、脫氧核糖形成脫氫自由基，從而造成DNA主鏈斷裂或堿基破壞；自由基可使細胞膜中的糖分子羥基化，破壞細胞膜上的多糖結(jié)構(gòu)，影響細胞功能的發(fā)揮；還可通過氧化降解使多糖破壞，影響組織功能，譬如腦組織中的多糖遭到破壞就會影響大腦的正常功能。
4、自由基對脂類的損害多不飽和脂肪酸最易受到自由基的破壞發(fā)生過氧化反應(yīng)，生成脂質(zhì)過氧化物，脂質(zhì)過氧化物進一步分解產(chǎn)生醛類，尤其是丙二醛可與一些蛋白質(zhì)、核酸等反應(yīng)，導(dǎo)致分子間的交聯(lián)聚合，結(jié)果生成大分子的難溶物(即脂褐素)沉積在細胞內(nèi)，該色素在皮膚細胞堆積就形成老年斑，在腦組織中堆積會導(dǎo)致記憶力減退或智力障礙，因此，日本的著名醫(yī)學(xué)博士丹羽靳負認為活性氧對生物體的真正危害可能并非活性氧本身，而是活性氧與脂質(zhì)反應(yīng)后生成的脂質(zhì)過氧化物。另外，富含多不飽和脂肪酸的磷脂是構(gòu)成多種生物膜的重要成分，如果這些膜脂發(fā)生過氧化反應(yīng)，將導(dǎo)致膜中蛋白質(zhì)及酶的交聯(lián)和失活，使膜的通透性改變，從而影響細胞膜的生理功能，如線粒體膜受損將導(dǎo)致能量生成減少。
蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物和核酸是組成生物體的基本而重要的化合物，這些物質(zhì)一旦受損，生命活動將受到威脅，自由基對生物體的危害就在于能破壞這些生物大分子，使生物體患病、加速衰老，這已被越來越多的研究所證實。
近幾十年來，隨著生活水平的提高，人們越來越關(guān)注健康，并逐漸認識到核苷酸在生命中的重要作用。眾所周知，人體大約由60萬億個細胞組成，細胞中有細胞核和細胞質(zhì)，細胞內(nèi)的物質(zhì)之一核酸，它由四種單核苷酸組成，核苷酸作為機體的必要營養(yǎng)素，它調(diào)控生命體的生長、發(fā)育、衰老，使機體不斷地進行新陳代謝，維持生理狀態(tài)的平衡。市場上以核苷酸為功效成分的保健品，例如武漢生科的核苷酸膠囊，主要具有調(diào)節(jié)免疫力和輔助肝損傷的功能。到目前為止，核苷酸的抗輻射作用機理及動物實驗研究，在國內(nèi)外報道并不多見[1-4]，第四軍醫(yī)大學(xué)周元愷等作過核酸及其降解物的動物抗輻射實驗[1]。結(jié)果表明單獨一種嘌呤類或嘧啶類核苷酸、核苷和堿基，與小牛胸腺DNA一樣，同樣具有提高照射后腸腺存活率的作用。這一事實提示，外源核苷酸對輻射損傷細胞或機體的恢復(fù)效應(yīng)，并非由于其高聚狀態(tài)，而是其酶解產(chǎn)物作用所致。核苷酸是多不飽和脂肪酸合成的主要調(diào)節(jié)物。它可以提高血液中的多不飽和脂肪酸的含量，而長鏈不飽和脂肪酸就能夠增強肌體的抗氧化能力。核苷酸、堿基的氮原子能捕獲亞油酸氧化過程中形成的自由基。核苷酸及其相關(guān)物質(zhì)均可以作為內(nèi)源自由基清除劑和抗氧化劑。而腺苷酸和烏苷酸的代謝產(chǎn)物尿酸清除內(nèi)源自由基和抗氧化能最強。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供一種含有單核苷酸的抗輻射組合物，用于清除體內(nèi)自由基，從而降低輻射對人體的損傷。
本發(fā)明所述的組合物含有下列重量百分比的組分5’-核苷酸10-30％，維生素c5-15％，大豆低聚糖20-40％。
優(yōu)選為，5’-核苷酸15-20％，維生素c5-10％，大豆低聚糖30-40％。
進一步優(yōu)選的為，5’-核苷酸17％，維生素c8％，大豆低聚糖35％。
本發(fā)明所述的主要原料為5’-核苷酸，它可以作為內(nèi)源自由基清除劑和抗氧化劑，它也是合成生命大分子核酸的基本原料。本發(fā)明所述的5’-核苷酸可以是5’-腺嘌呤核苷一磷酸，5’-鳥嘌呤核苷一磷酸，5’-胞嘧啶核苷一磷酸，5’-尿嘧啶核苷一磷酸；或它們的任意組合，也可以為，5’-腺嘌呤核苷一磷酸和/或5’-烏嘌呤核苷一磷酸。
維生素c作為功效成分也是人們熟悉的一種強抗氧化劑，試驗證明，添加了維生素c的DNA經(jīng)紫外輻射后幾乎沒有受到損傷[5]。維生素c能有效的捕獲單氧、超氧化物、過氧化氫和水溶性過氧化自由基，清除自由基并阻斷了自由基對DNA的損傷，起到了抗輻射的作用。
輻射對機體的損傷主要由于在照射過程中產(chǎn)生自由基，而服用大豆低聚糖可提高腸雙歧桿菌的數(shù)量。雙歧桿菌能明顯增加血中SOD活性和含量，SOD是抗氧化劑，自由基的清除主要靠抗氧化劑完成[6]。
還可以在本發(fā)明組合物中添加輔料，輔料可以是醫(yī)學(xué)上或者是食品中可接受的載體物質(zhì)。通過它們可以將本發(fā)明組合物制備成不同的劑型。
本發(fā)明組合物中含有的5’-核苷酸與維生素c、大豆低聚糖等組分，具有良好的互相促進和協(xié)同作用，對機體發(fā)揮出抗輻射的功能。
經(jīng)口給予小鼠不同劑量的本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天后，Co60-γ1Gy照射后經(jīng)過一定的時間測定血清溶血素HC50提高20-50％(p＜0.05)，Co60-γ7Gy照射后經(jīng)過一定的時間測定超氧化物歧化酶活性提高10-30％(p＜0.05)。小鼠體重?zé)o顯著性差異p＞0.05，其它各項指標無顯著性差異p＞0.05，按照《保健食品的功能檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》規(guī)定，判定本發(fā)明組合物對輻射危害有輔助保護作用，使用安全。
具體實施例方式
下面實施例用于對本發(fā)明的進一步說明，但不用于限制本發(fā)明。
實施例1本發(fā)明組合物的組成表1是本發(fā)明組合物按重量百分比的配方，其中5’-核苷酸為可以為5’-腺嘌呤核苷一磷酸，5’-鳥嘌呤核苷一磷酸，5’-胞嘧啶核苷一磷酸，5’-尿嘧啶核苷一磷酸，或它們的任意組合。
表1本發(fā)明組合物的配方

所述組合物含上述重量百分比的三種成分，余下的為可以與醫(yī)學(xué)上或者是食品中可接受的載體物質(zhì)，并可混合在一起制備成各種劑型，如加入適量淀粉充分混合，制備成干粉劑。
實施例2功能鑒定1實驗操作步驟①抗輻射組合物配方為實施例1中的配方1。小鼠的使用低劑量組為200mg/kg.bw組合物，高劑量組為400mg/kg.bw。
②實驗動物選用中國軍事科學(xué)院實驗動物中心提供的昆明種1月齡二級雌性小鼠(SCXK(京)2002-001)體重18-22g共分二批，小鼠隨機分組。進行血清溶血素和超氧化物歧化酶活性兩項指標的實驗。
③試劑綿羊紅細胞(SRBC)，豚鼠血清，生理鹽水，SA緩沖液，乙醇，三氯甲烷，都氏試劑，超氧化物歧化酶試劑盒。
④輻射動物模型受試小鼠灌胃30天后，進行血清溶血素試驗的小鼠經(jīng)Co60-γ1Gy輻射，進行超氧化物歧化酶活性試驗的小鼠經(jīng)Co60-γ7Gy輻射。
⑤血清溶血素的測定按照《保健食品的功能檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的方法進行輻照后14天腹腔注射0.2ml 2％(v/v)SRBC免疫每只小鼠。4d后，眼眶取血于離心管內(nèi)，放置1h，3000r/min離心10min，收集血清。小鼠血清用SA液稀釋200倍，依次加入稀釋的小鼠血清1.00ml、10％(v/v)的SRBC 0.50ml，補體(用SA液1∶10稀釋)1.00ml。另設(shè)不加血清的對照管(用SA液替代)。置37.0℃水浴20min后冰水浴終止反應(yīng)。3000r/min離心10min，取上清液1.00ml，都氏試劑3.00ml于試管內(nèi)，同時取10％(v/v)的SRBC 0.25ml加都氏試劑4.00ml作為半數(shù)溶血管。放置10min后，540nm波長處測定光密度值。試驗結(jié)果以半數(shù)溶血值(HC50)表示。
⑥小鼠超氧化物歧化酶活性實驗按照《保健食品的功能檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》規(guī)定的方法進行輻照后7天后，眼眶取血20μl抽提紅細胞中的超氧化物岐化酶，眼眶取血10μl測定血紅蛋白。超氧化物岐化酶測定使用市售的南京建成生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的超氧化物岐化酶試劑盒(產(chǎn)品型號A001，采用亞硝酸鹽形成法)測定。各試劑及用量如表2所示表2超氧化物歧化酶活力測定所用試劑及用量


混勻，室溫放置10分鐘，于波長550nm處，1cm光徑比色杯，蒸餾水調(diào)零，比色。
血紅蛋白測定眼眶取血10μl加入到2.5ml都氏試劑，充分混合，靜置15分鐘。選用0.5cm光徑比色杯，于540nm波長下，用空白試劑調(diào)零點進行測定。

血紅蛋白濃度(g/100ml)＝A樣品*0.736*注實驗數(shù)據(jù)用微軟公司的Excel軟件進行方差分析統(tǒng)計。
2實驗結(jié)果①受試物對小鼠體重的影響表3受試物對小鼠體重的影響(X±SD)

由表3可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天后，與陰性對照組比較，各劑量組體重均無顯著性差異p＞0.05。
②受試物對小鼠血清溶血素的影響表4受試物對小鼠血清溶血素的影響(X±SD)

注*表不與陰性對照組比較，有顯著性差異p＜0.05。
由表4可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天，輻射14天后與陰性對照組比較，低劑量組的HC50有顯著性差異p＜0.05。
③受試物對小鼠超氧化物歧化酶活性的影響表5受試物對小鼠超氧化物歧化酶活性的影響(X±SD)

注*表不與陰性對照組比較，有顯著性差異p＜0.05。
由表5可見，經(jīng)口給予小鼠不同劑量本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天后，與陰性對照組比較，低劑量組的小鼠超氧化物歧化酶活性有顯著性差異p＜0.05。
結(jié)論經(jīng)口給予小鼠不同劑量本發(fā)明組合物，喂養(yǎng)30天后，與陰性對照組比較，低劑量組血清溶血素HC50提高30.69％(p＜0.05)，低劑量組超氧化物歧化酶活性提高16.84％(p＜0.05)。其它各項指標無顯著性差異p＞0.05，實驗前后小鼠體重?zé)o顯著性差異p＞0.05。依據(jù)《保健食品的功能檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》規(guī)定，可判定本發(fā)明組合物對輻射危害有顯著的保護功能。
參考文獻1.周元愷等，核酸前體對小鼠腸腺輻射損傷的恢復(fù)作用，輻射研究與輻射工藝學(xué)報，1994，(2)96～992.Sulabha S.Kulkarni，F(xiàn)unctional Impairment of T-lymphocytes inMouse Radiation Chimeras by a Nucleotide-free Diet Exp.Hematol，1984，(12)694～6993蔡文杰等，外源核苷酸的營養(yǎng)作用及其研究進展，養(yǎng)殖與飼料，2005，(4)20～404.曾桂英等，四種核酸前體對小鼠小腸輻射損傷的恢復(fù)作用，輻射研究與輻射工藝學(xué)報，1998，16(4)231-2335.周殿風(fēng)等，維生素c對紫外線誘發(fā)DNA損傷的保護作用，光學(xué)學(xué)報，2005，(5)643～6466.崔洪斌，大豆生物活性物質(zhì)的開發(fā)與應(yīng)用，中國輕工業(yè)出版社，2001，86～87.
權(quán)利要求
1.一種抗輻射組合物，其含有下列重量百分比的組分5’-核苷酸 10～30％維生素c 5～15％大豆低聚糖 20～40％
2.如權(quán)利要求1所述的組合物，其含有下列重量百分比的組分5’-核苷酸 15-20％維生素c 5-10％大豆低聚糖 30-40％
3.如權(quán)利要求1或2所述的組合物，其含有下列重量百分比的組分5’-核苷酸 17％維生素c 8％大豆低聚糖 35％
4.如權(quán)利要求1、2或3所述的組合物，其還含有按重量百分比為15～65％的輔料。
5.如權(quán)利要求4所述的組合物，其特征在于所述輔料按重量百分比為40％。
6.如權(quán)利要求1、2或5任一項所述的組合物，其特征在于所述的5’-核苷酸為5’-腺嘌呤核苷一磷酸，5’-鳥嘌呤核苷一磷酸，5’-胞嘧啶核苷一磷酸，5’-尿嘧啶核苷一磷酸，或它們的任意組合。
7.如權(quán)利要求6所述的組合物，其特征在于所述5’-核苷酸為任意兩種或三種5’-核苷酸的組合。
8.如權(quán)利要求1～7任一項所述的組合物，其為干粉劑、片劑、膠囊或口服液。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種抗輻射的組合物，該組合物含有下列重量百分比的組分5′－核苷酸10－30％，維生素C5－15％，大豆低聚糖20－40％。受試者經(jīng)口服施用不同劑量的本發(fā)明組合物后，其血清溶血素HC50和超氧化物歧化酶活性均有顯著提高(p＜0.05)，另外，受試者的體重和其它各項指標無顯著性差異p＞0.05。本發(fā)明的抗輻射組合物對輻射危害有輔助保護作用，且使用安全。
文檔編號A61K9/20GK1961891SQ20061011473
公開日2007年5月16日 申請日期2006年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月22日
發(fā)明者趙紅玲, 賈乃堃, 劉朵花, 黎高沃 申請人:北京燕京中科生物技術(shù)有限公司