專利名稱：：復(fù)合脂質(zhì)體在制備治療腦缺血藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種從動物腦組織中提取的復(fù)合脂質(zhì)體的新用途。
背景技術(shù)：
：所說的復(fù)合脂質(zhì)體，指的是從動物腦組織中提取的復(fù)合脂質(zhì)體。目前腦卒中(中風(fēng))己成為全世界人口死亡的三大原因之一。根據(jù)資料顯示，1998年全球腦血管死亡人數(shù)達(dá)510萬，美國每年新增中風(fēng)人數(shù)達(dá)5075萬，其中16萬人死亡，英國每年新增發(fā)病人數(shù)10~17萬，全球每年用于中風(fēng)一線治療的費(fèi)用高達(dá)IO億美元。在我國據(jù)保守統(tǒng)計(jì)，中風(fēng)患者有一千五百萬到二千萬人，且每年新增中風(fēng)患者120~150萬，死亡80100萬人，殘廢率達(dá)75%，五年內(nèi)復(fù)發(fā)率達(dá)41%，腦血管病己成為我國主要的病死原因之一，其發(fā)病率、死亡率和致殘率均很高，在我國，腦血管病是繼惡性腫瘤后的第二位死因。目前，國內(nèi)外治療急性缺血性腦卒中藥物可分為兩大類，即改善腦血流量藥物和腦神經(jīng)保護(hù)藥。腦缺血是一種以微循環(huán)血流量下降和葡萄糖/能量代謝障礙為特征的神經(jīng)系統(tǒng)疾病。它在我國的發(fā)病率高，是致殘、致死的重要原因之一。隨著老年社會的到來，腦血管病的發(fā)病率將繼續(xù)攀升，構(gòu)成一個嚴(yán)重的社會問題。缺血性腦病是一類高死亡率和高致殘率的常見病，根據(jù)世界衛(wèi)生組織的一項(xiàng)調(diào)査，其死亡率占57個國家死亡總?cè)藬?shù)的11.3%，僅次于癌癥和心肌梗塞，在我國其死亡率占第一位或第二位，嚴(yán)重危害人類健康，對國民經(jīng)濟(jì)發(fā)展同樣構(gòu)成威脅。腦血管意外的患者約有1/3在發(fā)病后不久死亡，幸存者則由于偏癱、失語等后遺癥而致殘，喪失工作能力甚至生活自理能力。市場上常用的藥物以中藥為主，如醫(yī)藥市場上銷售的絡(luò)寧氯化鈉注射液、二維三七桂利嗪膠囊和癱復(fù)康膠囊等。但是，由于種種原因，其治療效果都不盡人意，因此，臨床治療需要提供一種更為有效安全的藥物。中國專利，專利號CN93112578.2和CN95111569.3公開了一種從動物腦組織中提取復(fù)合脂質(zhì)體的方法，提供了,一個改善中老年記憶的保健營養(yǎng)產(chǎn)品，能否進(jìn)一歩拓展該方法提取的復(fù)合脂質(zhì)體的新用途，并將其用于治療腦缺血，是人們所十分關(guān)注的課題。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種復(fù)合脂質(zhì)體在制備治療腦缺血藥物中的應(yīng)用。發(fā)明人通過大量的試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，從動物腦組織中提取的復(fù)合脂質(zhì)體，對于治療腦缺血，具有十分顯著的效果，能夠用于制備治療腦缺血的藥物。所說的動物腦最好是哺乳動物的腦。所說的復(fù)合脂質(zhì)體，是采用中國專利，專利號CN93112578.2和CN95111569.3公開的方法進(jìn)行制備的。所說的復(fù)合脂質(zhì)體，可以以組合物的形式，通過口服的施加于需要進(jìn)行腦缺血治療的患者，所說的組合物包括所說的復(fù)合脂質(zhì)體和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體，如稀釋劑水、甜味劑蔗糖、防腐劑、抗氧化劑等，一般劑量為200400mg/人天，具體可根據(jù)患者的病情、年齡等情況由醫(yī)師決定。試驗(yàn)證明，從動物腦組織中提取復(fù)合脂質(zhì)體，對于腦缺血的治療，效果十分顯著，同時毒性較小，即使大量服用，也不會引起副作用，因此為拓展從動物腦組織中提取的復(fù)合脂質(zhì)體的醫(yī)藥用途，開拓了一個新的領(lǐng)域，也為腦缺血的臨床治療，提供了一個新的治療方法。具體實(shí)施例方式實(shí)施例1復(fù)合脂質(zhì)體的提取-將新鮮或冷凍的豬腦1Kg，除去雜物，漂去血污后瀝干，加入體積濃度為75%的食用酒精3Kg，在轉(zhuǎn)速1500轉(zhuǎn)/分和室溫下，搗碎機(jī)搗碎3分鐘，再加入3Kg石油醚，攪拌2小時，過濾，濾液用7Kg石油醚提取，有機(jī)相經(jīng)減壓濃縮和/或冷凍干燥分別得到復(fù)合脂質(zhì)體濃縮液或粉末的精制品。實(shí)施例2口服液實(shí)施例1提取的復(fù)合脂質(zhì)體濃縮液1重量份，水3重量份，苯甲酸為總重量的0.3%0。將上述組分混合，即獲得口服液。實(shí)施例3以下將通過藥效試驗(yàn)，對本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容做進(jìn)一步的陳述。試驗(yàn)藥物實(shí)施例1提取的復(fù)合脂質(zhì)體濃縮液。1、復(fù)合脂質(zhì)體抗大鼠腦缺血的最低有效劑量及半數(shù)有效量(ED50)的研究為確定口服復(fù)合脂質(zhì)體后對大鼠腦缺血保護(hù)作用的最低有效劑量及ED50，利用線栓法致大鼠局灶性腦缺血模型，采用劑量3.46，5.38，8.33，12.82和19.87mg/kg的復(fù)合脂質(zhì)體經(jīng)口灌胃，于腦缺血24h后先行Longa神經(jīng)功能評分，然后取缺血側(cè)腦組織切成5片用2。/。TTC溶液染色，計(jì)算腦梗塞面積、梗塞面積百分比和梗塞重量、梗塞重量百分比。以降低動物神經(jīng)功能評分、降低梗塞重量百分比和梗塞面積百分比為評價依據(jù)，結(jié)果表明復(fù)合脂質(zhì)體對線栓法所致大鼠局灶性腦梗塞的最低有效劑量范圍在8.3312.82mg/kg之間。以降低腦梗塞重量19.5%為評價依據(jù)，結(jié)果表明復(fù)合脂質(zhì)體對線栓法所致大鼠局灶性腦梗塞的ED50為8.90mg/kg。具體見表l，表2和表3。表1Longa神經(jīng)功能評分標(biāo)準(zhǔn)<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>表2不同劑量復(fù)合脂質(zhì)體對線栓法所致大鼠腦梗塞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>注*P<0.05，**P<0.01與模型對照組比較。表3復(fù)合脂質(zhì)體降低大鼠腦梗塞重量的ED50<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注組間比較為1:0.652、復(fù)合脂質(zhì)體對線栓法所致大鼠局灶性腦梗塞的保護(hù)作用采用線栓法所致大鼠局灶性腦梗塞為動物模型，觀察口服復(fù)合脂質(zhì)體對大鼠局灶性腦梗塞的保護(hù)作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，口服劑量為12.8mg/kg、38.4mg/kg和128mg/kg的復(fù)合脂質(zhì)體后可降低大鼠腦梗塞重量和腦梗塞面積，也可降低腦梗塞重量百分比和腦梗塞面積百分比，還可降低腦梗塞的神經(jīng)功能評分。低劑量組動物的腦含水量低于模型對照組，不同劑量復(fù)合脂質(zhì)體口服后，還可提高腦組織勻漿液中的超氧化物歧化酶(SOD)活性、降低丙二醛(MDA)及乳酸含量，尤以38.4mg/kg組效果最為明顯；病理組織學(xué)檢查亦顯示可減輕腦梗塞的病變程度。表明復(fù)合脂質(zhì)體對大鼠局灶性腦梗塞具有一定的保護(hù)作用。具體見表4，表5，表6和表7。表4復(fù)合脂質(zhì)體對線栓法所致大鼠腦梗塞后神經(jīng)功能評分、腦梗塞重量百分比、面積百分比的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>注與模型對照組比較*P<0.05，**P<0.01。表5復(fù)合脂質(zhì)體對線栓法所致大鼠腦梗塞后腦指數(shù)及腦含水量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注與模型對照組比較，*P<0.05,**P<0.01。表6復(fù)合脂質(zhì)體對線栓法所致大鼠腦梗塞后腦均漿液SOD、MDA及乳酸含量的變化<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>注*P<0.05，**P<0.01，與模型對照組比較。表7復(fù)合脂質(zhì)體對腦缺血大鼠水迷宮平均逃避潛伏期的影響<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>注**P<0.01，與模型對照組比較。3、大鼠腦缺血后不同時間給予復(fù)合脂質(zhì)體對腦梗塞的治療作用為研究于腦缺血后不同時間口服復(fù)合脂質(zhì)體對腦梗塞的治療作用，利用線栓法致大鼠局灶性腦缺血模型，分別于腦缺血后l，3，6，12，24h經(jīng)口灌胃劑量為38.4mg/kg的復(fù)合脂質(zhì)體，其中腦缺血l，3，6，12h后給予復(fù)合脂質(zhì)體組大鼠于腦缺血24h后進(jìn)行Longa神經(jīng)功能評分，然后取缺血腦組織切成5片用2。/。TTC溶液染色，計(jì)算腦梗塞面積百分比和梗塞重量百分比；腦缺血24h后給予復(fù)合脂質(zhì)體組大鼠于腦缺血48h后進(jìn)行Longa神經(jīng)功能評分，并測定腦梗塞面積百分比和梗塞重量百分比。結(jié)果表明，分別于腦缺血后l，3，6，12，24h給予復(fù)合脂質(zhì)體均可降低由線栓法所致的大鼠腦梗塞面積百分比、腦梗塞重量百分比，并均降低大鼠腦梗塞后的神經(jīng)功能評分。顯示其在腦梗塞發(fā)生后仍有一定的保護(hù)作用。具體見表8，表9，表10，表ll，表12，表13。表8:Longa神經(jīng)功能評分標(biāo)準(zhǔn)<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>表9腦缺血lh后給予復(fù)合脂質(zhì)體治療對大鼠腦梗塞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注*P<0.05，與模型對照組比較。表10腦缺血3h后給予復(fù)合脂質(zhì)體治療對大鼠腦梗塞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注*P<0.05，與模型對照組比較表11腦缺血6h后給予復(fù)合脂質(zhì)體治療對大鼠腦梗塞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>注*P<0.05，與模型對照組比較。表12腦缺血12h后給予復(fù)合脂質(zhì)體治療對大鼠腦梗塞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注*P<0.05,與模型對照組比較。表13腦缺血24h后給予復(fù)合脂質(zhì)體治療對大鼠腦梗塞的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>注*P<0.05，與模型對照組比較。4、復(fù)合脂質(zhì)體對不同因素所致大鼠胎鼠皮層神經(jīng)細(xì)胞損傷的影響觀察復(fù)合脂質(zhì)體對撤血清和N-甲基-D-門冬氨酸(NMDA)致胎鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。采用原代培養(yǎng)胎鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞，以撤血清和NMDA造成損傷模型，檢測超氧化物歧化酶(SuperoxideDismutase，SOD)活性，丙二醛(Malondialdehyde，MDA)和乳酸(lacticacid，LA)含量，光鏡下觀察神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)變化并檢測神經(jīng)細(xì)胞活性以及細(xì)胞死亡率。結(jié)果顯示復(fù)合脂質(zhì)體可明顯抑制撤血清及NMDA所致神經(jīng)細(xì)胞MDA、乳酸含量的升高以及SOD活性降低，并減少細(xì)胞死亡率，提高神經(jīng)細(xì)胞的活性，光鏡下觀察復(fù)合脂質(zhì)體可抑制神經(jīng)細(xì)胞因撤血清及NMDA而引起的突起斷裂、細(xì)胞數(shù)目的減少，測其IC50分別為0.277和0.787mg/ml。但高濃度復(fù)合脂質(zhì)體的作用有所減弱。結(jié)果表明復(fù)合脂質(zhì)體可保護(hù)撤血清及NMDA誘導(dǎo)的胎鼠大腦皮層神經(jīng)細(xì)胞損傷，但高濃度復(fù)合脂質(zhì)體顯示出毒性和保護(hù)雙重作用。具體見表14~19。表14復(fù)合脂質(zhì)體對撤血清誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞MTT實(shí)驗(yàn)OD值的影響<table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注(1)*P<0.05,**P<0.01，與撤血清模型組比較；(2)##P<0.01，與正常對照組比較表15復(fù)合脂質(zhì)體對撤血清誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞死亡率的影響<table>complextableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>注(1)*P<0.05，**P<0.01，與撤血清模型組比較；(2)##P<0.01,與正常對照組比較表16復(fù)合脂質(zhì)體對撤血清誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞MDA、SOD和乳酸改變的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注(1)*P<0.05,**P<0.01，與撤血清模型組比較；(2)##P<0.01，與正常對照組比較表17復(fù)合脂質(zhì)體對NMDA誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞MTT實(shí)驗(yàn)OD值的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注(1)**P<0.01，與NMDA模型組比較；(2)##P<0.01，與正常對照培養(yǎng)比較表18復(fù)合脂質(zhì)體對NMDA誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞死亡率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注(1)*P<0.05，**P<0.01，與NMDA模型組比較；(2)##P<0.01，與正常對照組比較表19復(fù)合脂質(zhì)體對NMDA誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞MDA、SOD和乳酸改變的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注(1)**P<0.01與NMDA模型組比較；(2)##P<0.01,與正常對照培養(yǎng)比較5、復(fù)合脂質(zhì)體對小鼠腦缺血再灌注損傷的研究為了研究復(fù)合脂質(zhì)體對腦缺血的保護(hù)作用，本研究采用小鼠腦缺血再灌注模型，觀察了形態(tài)學(xué)、SOD活性、GSH-Px活性、CAT活性及MDA含量等指標(biāo)，結(jié)果顯示，不同劑量(1.8mg/10g、5.4mg/10g、18mg/10g)的復(fù)合脂質(zhì)體可以顯著降低小鼠腦缺血后的腦梗死范圍百分比；延長小鼠快速斷頭張口喘氣時間，提高小鼠的存活時間；研究結(jié)果還表明不同劑量的復(fù)合脂質(zhì)體(1.8mg/10g、5.4mg/10g、18mg/10g)可提高腦組織SOD、GSH-PX及CAT活性，降低MDA含量；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明復(fù)合脂質(zhì)體對小鼠急性腦缺血及缺血再灌注損傷具有一定的保護(hù)作用。具體見表20~24。表20復(fù)合脂質(zhì)體對小鼠腦梗死范圍百分比的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注*P<0.05，**P<0.01，與模型對照組比較。表21復(fù)合脂質(zhì)體對缺血再灌小鼠腦SOD活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注(1)*P<0.05，**P<0.01，與模型對照組比較。表22復(fù)合脂質(zhì)體對缺血再灌小鼠腦MDA含量的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>注*P<0.05，**P<0.01，與模型對照組比較。表23復(fù)合脂質(zhì)"s對缺血再灌小鼠腦GSH-PX,CAT活性的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注:(1)*P<0.05，**P<0.01，與模型對照組比較。表24復(fù)合脂質(zhì)體對斷頭小鼠喘氣持續(xù)時間的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>注**P<0.01，與模型對照組比較。權(quán)利要求1.復(fù)合脂質(zhì)體在制備治療腦缺血藥物中的應(yīng)用，所說的復(fù)合脂質(zhì)體是從動物腦組織中提取的。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所說的復(fù)合脂質(zhì)體是采用如下的方法提取的采用動物腦為原料，經(jīng)粉碎、溶劑提取、過濾，濾液經(jīng)第二次溶劑提取，提取液經(jīng)濃縮后可獲得復(fù)合脂質(zhì)體的精制品。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所說的治療腦缺血藥物包括所說的復(fù)合脂質(zhì)體和醫(yī)藥學(xué)上可接受的載體。全文摘要本發(fā)明公開了復(fù)合脂質(zhì)體在制備治療腦缺血藥物中的應(yīng)用。試驗(yàn)證明，從動物腦組織中提取復(fù)合脂質(zhì)體，對于腦缺血的治療，效果十分顯著，同時毒性較小，即使大量服用，也不會引起副作用，因此為拓展從動物腦組織中提取的復(fù)合脂質(zhì)體的醫(yī)藥用途，開拓了一個新的領(lǐng)域，也為腦缺血的臨床治療，提供了一個新的治療方法。文檔編號A61K35/30GK101199549SQ20061011958公開日2008年6月18日申請日期2006年12月13日優(yōu)先權(quán)日2006年12月13日發(fā)明者吳同新,杜士明,辰楊,翔高申請人:上海腦力鍵生物醫(yī)學(xué)有限公司