專利名稱：：治療脈管炎的納米乳劑及其制備方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種中藥納米乳劑，具體而言，是一種治療脈管炎的納米乳劑及其制備方法。
背景技術：
：脈絡寧注射液是在著名醫(yī)方"四妙勇安湯"的基礎上研制而成的中藥復方注射劑，由牛膝、玄參、石斛、金銀花四味中藥組成，廣泛應用于血栓閉塞性脈管炎、動脈硬化性閉塞癥、腦血栓形成及后遺癥、多發(fā)性大動脈炎、四肢急性動脈栓塞癥、糖尿病壞疽、靜脈血栓形成及血栓性靜脈炎等。中國專利CN1557398A公開了其還具有預防和治療心絞痛的作用。但是現(xiàn)有的脈絡寧注射液的制備工藝采用水提醇沉法將四種藥材同時提取，然后再用乙酸乙酯萃取得有效成分(見"脈絡寧注射液的工藝方法"，公開號CN1078148A)，然而方中含有綠原酸等對光照和空氣不穩(wěn)定性成分，在貯存過程中容易出現(xiàn)注射液色澤變化、有效成分含量降低等現(xiàn)象，方中存有有機酸與生物堿等成分，在水針狀態(tài)下這些成分極易發(fā)生絮凝沉淀，同時此種方法對鞣質去除不徹底，嚴重影響到脈絡寧注射液臨床應用的安全性和有效性。因此，將其制備成更加安全、有效、穩(wěn)定且制備工藝簡潔、實用的脈絡寧納米乳劑具有重要的現(xiàn)實意義。
發(fā)明內容本發(fā)明的目的之一是針對現(xiàn)有技術的不足，提供一種安全、有效、穩(wěn)定的治療脈管炎的納米乳劑。本發(fā)明的另一目的是提供該納米乳劑的制備方法。本發(fā)明是通過下面的技術方案實現(xiàn)的本發(fā)明的治療脈管炎的納米乳劑含有由牛膝、玄參、石斛和金銀花制備的有效成分，油，水，表面活性劑，等滲調節(jié)劑，其中有效成分油表面活性劑等滲調節(jié)劑的重量比為I:1-20:1-10:1-10。優(yōu)選地，有效成分油表面活性劑等滲調節(jié)劑的重量比為l:卜1():卜1():卜1()。最佳地，有效成分油表面活性劑等滲調節(jié)劑的重量比為l:卜10:卜5:卜5。在本發(fā)明的治療脈管炎的納米乳劑中，所述的油選自植物油或動物油，其中植物油選自大豆油、玉米油、花生油、橄欖油、蓖麻油、椰子油、菜籽油、棉籽油；所述的動物油選自油酸、三甘油酯、海狗油。優(yōu)選大豆油。所述的表面活性劑選自大豆磷脂，蛋黃卵磷脂，氫化卵磷脂；優(yōu)選蛋黃卵磷脂。所述的等滲調節(jié)劑選自甘油，山梨醇，甘露醇，葡萄糖；優(yōu)選甘油。本發(fā)明的治療脈管炎的納米乳劑中的有效成分以包括下述步驟的方法制備而成，其原料藥重量配比為石斛14份金銀花1~4份牛膝14份玄參1~4份(1)牛膝、玄參、石斛藥材水提，兩次醇沉，再水沉，過濾，得濾液A;(2)金銀花藥材水提醇沉，濾液濃縮，離心，調pH值至l4，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后調節(jié)pH值至58，得水溶液B;(3)合并A和B，過濾，濾液濃縮，即得。優(yōu)選地，所述步驟(l)中水提為水加熱回流，第一次醇沉使溶液中含乙醇量達到4065。/。，第二次醇沉使溶液中含乙醇量達到70~90%;更優(yōu)選地，所述步驟(l)中的水提為加熱回流提取1~3次，每次加水量為藥材重量的610倍；第一次醇沉使溶液中含乙醇量達到50~65%，第二次醇沉使溶液中含乙醇量達到70~85%。優(yōu)選地，所述步驟(2)中水提為水加熱回流，醇沉使溶液中含乙醇量達到6080%;更優(yōu)選地，所述步驟(2)中水提為加熱回流提取1~3次，每次加水量為藥材重量的610倍，乙酸乙酯萃取前調節(jié)pH值至13，萃取后調節(jié)pH值至5.57，所述酸為2~10%鹽酸。最佳地，本發(fā)明的治療脈管炎的納米乳劑中的有效成分以包括下述歩驟的方法制備而成，其原料藥重量配比為石斛1~4份金銀花1~4份牛膝14份玄參14份(1)牛膝、玄參、石斛藥材粗粉混合物，加水浸泡，加熱回流提取2次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次2h，過濾，合并提取液，并減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量達到60%，冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮到相對密度為1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量達到80%，冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，加水稀釋，冷藏過夜，過濾得濾液A;(2)金銀花粗粉用水回流提取2次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次2h，過濾，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為U5(5(TC)，加乙醇使含醇量達到70%，冷藏過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為U5(5(TC)，離心去除沉淀，調節(jié)PH值為1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5。/。鹽酸洗2次后用5。/。NaOH水溶液調節(jié)PH值為6.57.0，分層，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B,過濾，濾液濃縮，即得。本發(fā)明的納米乳劑的制備方法包括以下步驟a)牛膝、玄參、石斛藥材水提，兩次醇沉，再水沉，過濾，得濾液A;(2)金銀花藥材水提醇沉，濾液濃縮，離心，調pH值至14，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后調節(jié)pH值至58，得水溶液B;(3)合并A和B，過濾，濾液濃縮，得有效成分；(4)將有效成分、表面活性劑溶于醇溶液中，將該溶液加到油中并攪拌至澄明，除去醉，得油相，將溶于水的表面活性劑和等滲調節(jié)劑溶于水中，得水相，將油相加入水相得初乳，再經(jīng)進一步乳化，即得。優(yōu)選地，所述步驟(l)中水提為水加熱回流，第一次醇沉使溶液中含乙醇量達到4065%，第二次醇沉使溶液中含乙醇量達到70~90%;更優(yōu)選地，所述步驟a)中的水提為加熱回流提取13次，每次加水量為藥材重量的610倍；第一次醇沉使溶液中含乙醇量達到5065%，第二次醇沉使溶液中含乙醇量達到7085%。優(yōu)選地，所述步驟(2)中水提為水加熱回流，醇沉使溶液中含乙醇量達到60~80%;更優(yōu)選地，所述步驟(2)中水提為加熱回流提取13次，每次加水量為藥材重量的610倍，乙酸乙酯萃取前調節(jié)pH值至13,萃取后調節(jié)pH值至5.57，所述酸為2~10%鹽酸。最佳地，本發(fā)明的治療脈管炎的納米乳劑的制備方法包括以下步驟(1)牛膝、玄參、石斛藥材粗粉混合物，加水浸泡，加熱回流提取2次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次2h，過濾，合并提取液，并減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量達到60%，冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮到相對密度為1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量達到80%，冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，加水稀釋，冷藏過夜，過濾得濾液A;(2)金銀花粗粉用水回流提取2次，第一次8倍量，第二次6倍量，每次2h，過濾，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為U5(5(TC)，加乙醇使含醇量達到70%，冷藏過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，離心去除沉淀，調節(jié)PH值為1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5%鹽酸洗2次后用5%NaOH水溶液調節(jié)PH值為6.5~7.0，分層，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B,過濾，濾液濃縮，得有效成分；(4)將有效成分、表面活性劑溶于醇溶液中，將該溶液加到油中并攪拌至澄明，除去醇，得油相，將溶于水的表面活性劑和等滲調節(jié)劑溶于水中，得水相，將油相加入水相用剪切乳化器乳化得初乳，再經(jīng)高壓勻質機均化，調pH,即得。本發(fā)明的治療脈管炎的納米乳劑采用簡潔、實用的生產(chǎn)工藝解決了現(xiàn)有脈絡寧注射液在貯存過程中容易出現(xiàn)色澤變化、有效成分含量降低，發(fā)生絮凝沉淀，對鞣質去除不徹底等問題，有效地提高了產(chǎn)品的安全性和有效性。為了更好的理解本發(fā)明，以下通過實驗例來進一步闡述本發(fā)明藥物(以下稱脈絡寧納米乳劑)的有益效果，實驗例為本發(fā)明藥物的藥效學動物試驗。下面試驗旨在進一步說明本發(fā)明藥物的作用，而非對本發(fā)明的限制。本實驗例采用的發(fā)明藥物是按實施例IO制備而成。藥效學試驗1.實驗材料1.1藥品受試藥物本發(fā)明藥物，由天津天士力制藥股份有限公司提供，規(guī)格10g生藥/ml，生產(chǎn)批號041203。陽性對照藥脈絡寧注射液，金陵藥業(yè)股份有限公司南京金陵制藥廠產(chǎn)品，生產(chǎn)批號200312072,國家準字Z32021102。陰性對照氯化鈉注射液，由江西制藥有限責任公司產(chǎn)品，批號030710-1。1.2動物清潔級昆明種小鼠，體重18-22g，雌雄各半，合格證號2001A030;清潔級SD大鼠，雄性體重240-280g，合格證號2001A029;新西蘭大白兔，體重1.5-2.5kg，雌雄不限，合格證號2001A033;以上均由中山大學實驗動物中心產(chǎn)品。1.3劑量設置通過本發(fā)明藥物對小鼠全腦缺血缺氧(小鼠斷頭呼吸時間和次數(shù))以及凝血時間的影響預試得出14.6g生藥/kg為較佳有效劑量，取其l/2為低劑量，2倍為高劑量，低、中、高劑量分別為7.3、14.6、29.2g生藥/kg。通過體表面積折算得，大鼠低、中、高劑量分別為5.0、10.0、20.0g生藥/kg。脈絡寧注射液，人用量為15ml沃，通過體表面積換算，小鼠約為1.95ml/kg,大鼠約為1.35ml/kg。藥物稀釋方法、給藥途徑及體積取同一批號的各實驗所用藥品，用生理鹽水配制，每日現(xiàn)配制現(xiàn)用。給藥途徑靜脈注射或腹腔注射。各種單位給藥容積分別為小鼠為0.15ml/l()g體重；大鼠為0.4ml/100g體重。1.4數(shù)據(jù)處理所有實驗數(shù)據(jù)以^士s表示。計量數(shù)據(jù)由SPSS11.0統(tǒng)計軟件進行方差分析及組間檢驗。2.方法與結果2.1脈絡寧納米乳劑對小鼠急性腦缺氧的影響昆明種小鼠70只，體重18-22g，隨機分成7組，每組10只。受試藥組分別為脈絡寧納米乳劑7.3g/kg、14.6g/kg、29.2g/kg，58.4g/kg組；陽性對照藥脈絡寧注射液1.95ml/kg;陰性對照組(給予等容量的生理鹽水)。腹腔注射給藥，共3次，每天1次，末次給藥后15mh將小鼠逐只斷頭，立即按秒表記錄小鼠斷頭后至張口喘氣停止時間及張口次數(shù)作為耐缺氧指標。結果表明，脈絡寧納米乳劑M.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg組和脈絡寧注射液靜脈給藥后均能明顯延長小鼠斷頭張口次數(shù)及喘息時間，與對照組比較呈顯著差異(PO.05或P4).01)。詳見表1。表1脈絡寧納米乳劑對小鼠急性腦缺氧的影響(^土S,t^10)<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>與生理鹽水組比較，'P<0.05，2.2脈絡寧納米乳劑對凝血時間、血小板聚集和血栓形成的影響2.2.1對小鼠凝血時間的影響昆明種小鼠84只，體重18-22g,雌雄兼用，按體重和性別隨機分成12組，給藥容積為0.15ml/10g體重。分別給予靜脈注射生理鹽水溶液，脈絡寧納米乳劑7.3g/kg、M.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg，脈絡寧注射液1.95ml/kg。給藥后15min，眼球取血，玻片法測定凝血時間。由表2可見，脈絡寧納米乳劑14.6g/kg、29.2g/kg、58.4g/kg均有明顯的延長小鼠凝血時間的作用(pO.05或PO.01)。脈絡寧注射液組凝血時間明顯延長(p<0.05)。表2脈絡寧納米乳劑對小鼠凝血時間的影響(；±*，n=10)<table>complextableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2.2.2對體外血小板聚集的影響家兔頸總動脈放血，用硅化試管取血，以3.8%枸櫞酸鈉(1/10血量)抗凝，800r/min離心IO分鐘，吸出上層富血小板血漿(PRP)，再以3000r/min離心，取出貧血小板血槳(l)PP)。用PPP將透光度調到100，然后以PRP調零，加攪拌棒、加生理鹽水或脈絡寧納米乳劑(0.1g、0.2g、0.4g/ml)及脈絡寧注射液(0.02ml/ml)，37。C溫育。將PRP移至測定孔，加入ADP(終濃度為35pmol/L)，觀察5min最大聚集程度，儀器為TYXN—91型智能血小板聚集儀。計算血小板聚集百分率(Plateletaggregation,PAG))與抑制聚集百分率。由下表3可見，脈絡寧納米乳劑對ADP誘導的家兔血小板聚集有明顯的抑制作用，隨著劑量的增大抑制作用逐漸增強，即其對ADP誘導的家兔血小板聚集的抑制作用有明顯的劑量依賴性。表3脈絡寧納米乳劑對ADP誘導的體外家兔血小板聚集的影響(x土.s，n=10)<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>與緩沖液對照組比較，*為卩<0.05，"為PO.OI2.2.3對大鼠動-靜脈旁路血栓形成的影響SD大鼠50只，隨機分為5組，每組10只，10。/。水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射Op)麻醉固定，分別從舌下靜脈給予脈絡寧納米乳劑5.0g/kg、10.0g/kg、20.0g/kg和脈絡寧注射液1.95ml/kg組；對照組給予等容積的生理鹽水。于給藥后20min，分離右側頸總動脈和左側頸外靜脈。在聚乙烯管中段放入一根長6cm4號絲線，用肝素生理鹽水溶液(50ul/ml)充滿聚乙烯管。當聚乙烯管的一端插入左頸外靜脈后，另一端塑料管注入肝素(50yl/m)0.2ml抗凝，然后再將此端插入右側頸總動脈。打開動脈夾，讓血液從右側頸總動脈流入管內，返回左側頸外靜脈，開放血液15min后，中斷血流，迅速取出聚乙烯管中的血栓在分析天平上稱重，求出血栓抑制率。血栓抑制率=[(對照組血栓濕重-給藥組血栓濕重)XI00。/。]/對照組血栓濕重由下表4可見，脈絡寧納米乳劑10.0g/kg、20.0g/kg組與模型組比較均能明顯抑制大鼠血栓形成(PO.05或P〈0.01),脈絡寧納米乳劑5.0g/kg組有一定抑制作用，但沒有顯著差異?？?整^寧辨生孚L劑對大鼠頸總動、靜脈搭橋形成血輇寧響(S±a，n=l0)<table>complextableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>與模型組比較*尸<0.05,**尸<0.01結論脈絡寧納米乳劑可有效延長小鼠斷頭呼吸的時間,增加呼吸的次數(shù)；抑制血小板聚集，延長凝血時間，對大鼠血栓形成具有明顯的抑制作用.表明脈絡寧納米乳劑對腦中風具有明顯的防治作用。穩(wěn)定性試驗1.方法三批脈絡寧納米乳劑樣品(批號分別為050212、050215、050218)以臨床試驗用包裝(在包裝材料質地與結構上相當于上市藥品的包裝)室溫放置，連續(xù)考察12個月，觀察其變異情況，取其平均值。2.結果結果見表5。表5三批樣品穩(wěn)定性研究結果<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>下面通過具體實施例來解釋本發(fā)明，旨在進一歩說明本發(fā)明，不以任何形式對本發(fā)明構成限制。具體實施例方式實施例1提取物的制備及含量測定提取物的制備(1)取5000g石斛、5000g玄參、5000g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加熱回流提取兩次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次2h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為U5(50°C)，加乙醇使含醇量達到60%，冷藏，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(5()。C)，加乙醇使含醇量達到80%，冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，加水稀釋，冷藏過夜，過濾得濾液A;(2)5000g金銀花粗粉用水回流提取2次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次2h，過濾，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.15(50°C)，加乙醇使含醇量達到70%，冷藏過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為U5(5(TC)，離心去除沉淀，調節(jié)PH值為UK2.()，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5%鹽酸洗2次后用5%NaOH水溶液調節(jié)PH值為6.57.(>，分層，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，過濾，濾液濃縮干燥，得提取物365g。含量測定照《中國藥典》2000年版一部高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VID)測定。供試品溶液制備精密稱取提取物0.1g，加甲醇超聲溶解兩次，濾過，濾液轉移至100ml容量瓶中，補充甲醇至刻度作為供試品溶液。綠原酸含量測定色譜條件DiamonsilCl8，5nm，250x4.6mm;流動相乙腈-0.1。/。H3PO4水溶液(l1:89);柱溫3(TC;流速lml/min;檢測波長327nm。理論板數(shù)按綠原酸對照品峰計大于3000。綠原酸對照品溶液的配制精確稱取綠原酸對照品4.56mg，加甲醇定容到100ml，精密吸取lml至10ml容量瓶中，甲醇稀釋至刻度即得。瀾定法分別精密取對照品與供試品溶液各10ul注入高效液相色譜儀測定，提取物中綠原酸含量為15.2%。肉桂酸含量測定色譜條件DiamonsilCl8，5拜，250x4.6mm;流動相乙腈-0.1%14*04水溶液(28:72>:柱溫30'C;流速lml/min;檢測波長276nm。，理論板數(shù)按肉桂酸對照品峰計大于3000。肉桂酸對照品溶液的配制精密稱取肉桂酸對照品4.49mg，用甲醇定容到50ml，精密吸取lm侄10ml容量瓶中，甲醇稀釋至刻度即得。淵定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul注入高效液相色譜儀依法測定，提取物中肉桂酸的含量為0.05%。濱蒿內醮含量渕定色譜條件DiamonsilCl8，5pm，250x4.6mm(迪馬公司產(chǎn))；流動相:乙腈-水(30:70);柱溫30'C;流速lml/min;檢測波長290nm。理論板數(shù)按濱蒿內酯對照品峰計大于3000。濱蒿內酯對照品溶液的配制精密稱取濱蒿內酯對照品2.79mg，加甲醇定容到100ml即得。瀰定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul注入高效液相色譜儀依法測定，提取物中濱蒿內酯的含量為0.05%。實施例2提取物的制備(1)取6000g石斛、5000g玄參、4000g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加熱回流提取兩次，第一次加10倍量水，第二次加6倍量水，每次2h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.15(50°C)，加乙醉使含醇量達到50%，冷藏，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為U5(50°C)，加乙醇使含醇量達到70%，冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，加水稀釋，冷藏過夜，過濾得濾液A;(2)5000g金銀花粗粉用水回流提取2次，第一次加10倍量水，第二次加8倍量水，每次2h，過濾，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量達到80%，冷藏過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，離心去除沉淀，調節(jié)PH值為2.03.(>，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用8%鹽酸洗2次后用5%NaOH水溶液調節(jié)PH值為5.56.5,分層，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，過濾，濾液濃縮干燥得提取物332g。以實施例1的測定方法測定，其中綠原酸含量為12.3%，肉桂酸含量為0.10%，濱蒿內酯含量為0.08%。實施例3提取物的制備(1)取8000g石斛、2000g玄參、5000g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加熱回流提取兩次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次2h，過濾，合并濾液，減壓濃縮至相對密度為1.15(50°C)，加乙醇使含醇量達到50%，冷藏，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(5()°C)，加乙醇使含醇量達到75%,冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，加水稀釋，冷藏過夜，過濾得濾液A;(2)5000g金銀花粗粉用水回流提取2次，第一次加8倍量水，第二次加6倍量水，每次2h,過濾，合并提取液，減壓濃縮至相對密度為U5(5(TC)，加乙醇使含醇量達到70%，冷藏過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，離心去除沉淀，調節(jié)PH值為1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用4%鹽酸洗2次后用5%NaOH水溶液調節(jié)PH值為6.0、6.5，分層，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，過濾，干燥得提取物360g。以實施例1的測定方法測定，其中綠原酸含量為10.8%,肉桂酸含量為0.14%，濱蒿內酯含量為0.07%。實施例4提取物的制備(1)取2500g石斛、6000g玄參、4500g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加8倍量水加熱回流提取2h，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量達到60%，冷藏，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量達到70%，冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，加水稀釋，冷藏過夜，過濾得濾液A;(2)4500g金銀花粗粉加8倍量水回流提取2h，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(50°C)，加乙醇使含醇量達到75%，冷藏過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15f5(>°C),離心去除沉淀，調節(jié)PH值為1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5%鹽酸洗2次后用5n/。NaOH水溶液調節(jié)PH值為6.57.0，分層，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，過濾，干燥得提取物342g。以實施例1的測定方法測定，其中綠原酸含量為18.6%，肉桂酸含量為0.18%，濱蒿內酯含量為0.08%。實施例5提取物的制備(1)取3500g石斛、5000g玄參、5500g牛膝粉碎成粗粉，加水浸泡，加6倍量水加熱回流提取2h，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(5(TC)，加乙醇使含醇量達到65%，冷藏，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(50°C)，加乙醇使含醇量達到80%，冷藏，過濾，濾液減壓回收乙醇并濃縮至無醇味，加水稀釋，冷藏過夜，過濾得濾液A;(2)2500g金銀花粗粉加8倍量水回流提取2h，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15(50'C)，加乙醇使含醇量達到75%，冷藏過夜，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15G()。C)，離心去除沉淀，調節(jié)PH值為1.02.0，乙酸乙酯萃取5次，乙酸乙酯相用5%鹽酸洗2次后用5。/。NaOH水溶液調節(jié)PH值為6.57.0，分層，分出水相，得水溶液B。(3)合并A和B，過濾，干燥得提取物345g。以實施例1的測定方法測定，其中綠原酸含量為19.1%，肉桂酸含量為0.08%，濱蒿內酯含量為0.10%。實施例6納米乳劑的制備將實施例1的提取物100g，大豆磷脂1000g加入乙醇溶解，然后加入到1900g大豆油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將1000g甘油分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為6.9，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115。C滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例7納米乳劑的制備將實施例1的提取物100g，蛋黃卵磷脂1000g加入乙醇溶解，然后加入到100()g大豆油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將1000g甘油分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為6.9，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115。C滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例8納米乳劑的制備將實施例2的提取物100g，蛋黃卵磷脂1000g加入乙醇溶解，然后加入到1500g花生油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將700g甘露醇分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為7.0，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115。C滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例9納米乳劑的制備將實施例1的提取物100g，蛋黃卵磷脂500g加入乙醇溶解，然后加入到1200g菜籽油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將1000g甘油分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化5分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為6.9，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115。C滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例IO納米乳劑的制備將實施例1的提取物100g，大豆磷脂550g加入乙醇溶解，然后加入到1000g大豆油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將500g甘油分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化5分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為7.0，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115。C滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例ll納米乳劑的制備將實施例3的提取物100g，氫化卵磷脂700g加入乙醇溶解，然后加入到1600g玉米油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將500g甘油分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化5分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為6.9，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115匸滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例12納米乳劑的制備將實施例5的提取物100g,氫化卵磷脂500g加入乙醇溶解，然后加入到1000g油酸中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將500g山梨醇分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為6.9，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115t滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例13納米乳劑的制備將實施例4的提取物100g，蛋黃卵磷脂700g加入乙醇溶解，然后加入到1000g大豆油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將500g甘露醇分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為7.0，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115。C滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例14納米乳劑的制備將實施例1的提取物100g，蛋黃卵磷脂800g加入乙醇溶解，然后加入到1000g海狗油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將500g甘露醇分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為6"，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，115"滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例15納米乳劑的制備將實施例1的提取物100g，蛋黃卵磷脂800g加入乙醇溶解，然后加入到1500g大豆油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將600g甘油分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化5分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為6.9，注射用水定容至1000ml,分裝，充氮，115。C滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。實施例16納米乳劑的制備將實施例1的提取物100g，蛋黃卵磷脂500g加入乙醇溶解，然后加入到1S00g大豆油中，攪拌混合至澄明，旋轉蒸發(fā)除去乙醇，得油相；將500g葡萄糖分散在注射用水中，得水相，將油相和水相混合，用剪切乳化器乳化6分鐘(轉速2600轉/分)，得初乳，將初乳用高壓均質機均化(壓力10000psi)三次，用氫氧化鈉溶液或鹽酸溶液調節(jié)其pH為7.0，注射用水定容至1000ml，分裝，充氮，U5'C滅菌30分鐘，分裝，得納米乳劑1000支。以上實施例并非窮舉，本領域普通技術人員可以理解，對本發(fā)明進行的任何同等的替代或改變，如工藝中常規(guī)參數(shù)的變化，根據(jù)需要將制劑的規(guī)格變化等均在本發(fā)明的保護范圍內。權利要求1.一種治療脈管炎的納米乳劑，其特征在于，含有由牛膝、玄參、石斛和金銀花制備的有效成分，油，水，表面活性劑，等滲調節(jié)劑，其中有效成分∶油∶表面活性劑∶等滲調節(jié)劑的重量比為1∶1-20∶1-10∶1-10。2.如權利要求1所述的納米乳劑，其特征在于，有效成分油表面活性劑等滲調節(jié)劑的重量比為1:1-10:1-10:1-10。3.如權利要求1所述的納米乳劑，其特征在于，有效成分油表面活性劑等滲調節(jié)劑的重量比為1:1-10:1-5:1-5。4.如權利要求l或2所述的納米乳劑，其特征在于，所述的油選自植物油，動物油；或/和所述的表面活性劑選自大豆磷脂，蛋黃卵磷脂，氫化卵磷脂；或/和所述的等滲調節(jié)劑選自甘油，山梨醇，甘露醇，葡萄糖。5.如權利要求4所述的納米乳劑，其特征在于，所述的油為大豆油；或/和所述的表面活性劑為蛋黃卵磷脂；或/和所述的等滲調節(jié)劑為甘油。6.如權利要求1或2所述的納米乳劑，其特征在于，所述的有效成分由包括下述步驟的方法制備而成，其中原料藥配比為石斛1~4份金銀花14份牛膝14份玄參14份(1)牛膝、玄參、石斛藥材水提，兩次醇沉，再水沉，過濾，得濾液A;(2)金銀花藥材水提醇沉，濾液濃縮，離心，調pH值至l-4，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后調節(jié)pH值至58，得水溶液B;(3)合并A和B，過濾，濾液濃縮，即得。7.如權利要求6所述的納米乳劑，其特征在于，所述步驟(l)中水提為水加熱回流提取13次，每次加水量為藥材重量的610倍；第一次醇沉使溶液中含乙醇量達到5065%，第二次醇沉使溶液中含乙醇量達到70~85%。8.如權利要求6所述的納米乳劑，其特征在于，所述步驟(2)中水提為加熱回流提取13次，每次加水量為藥材重量的6~10倍，乙酸乙酯萃取前調節(jié)pH值至13，萃取后調節(jié)pH值至5.57，所述酸為2~10%鹽酸。9.權利要求1或2所述的納米乳劑的制備方法，其特征在于，包括以下歩驟(1)牛膝、玄參、石斛藥材水提，兩次醇沉，再水沉，過濾，得濾液A;(2)金銀花藥材水提醇沉，濾液濃縮，離心，調pH值至l4，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后調節(jié)pH值至58，得水溶液B;(3)合并A和B，過濾，濾液濃縮，得有效成分；(4)將有效成分、表面活性劑溶于醇溶液中，將該溶液加到油中并攪拌至澄明，除去醇，得油相，將溶于水的表面活性劑和等滲調節(jié)劑溶于水中，得水相，將油相加入水相得初乳，再經(jīng)進一步乳化，即得。10.如權利要求9所述的制備方法，其特征在于，包括以下步驟(1)牛膝、玄參、石斛藥材加水回流提取13次，每次加水量為藥材重量的6~10倍，第一次醇沉使溶液中含醇量達到60%，第二次醇沉使溶液中含醇量達到80%,水沉，過濾，得濾液A;(2)金銀花藥材加水回流提取13次，每次加水量為藥材重量的610倍，加入乙醇使溶液屮含醇量為60~80%，濾液濃縮，離心，調pH值至l3，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后調節(jié)pH值至5.57，得水溶液B;(3)合并A和B,過濾，濾液濃縮，得有效成分；(4)將有效成分、表面活性劑溶于醇溶液中，將該溶液加到油中并攪拌至澄明，除去醇，得油相，將溶于水的表面活性劑和等滲調節(jié)劑溶于水中，得水相，將油相加入水相用剪切乳化器乳化得初乳，再經(jīng)高壓勻質機均化，調pH，即得。全文摘要本發(fā)明提供了一種治療脈管炎的納米乳劑及其制備方法。包括牛膝、玄參、石斛、金銀花提取的有效成分，水，油，等滲調節(jié)劑和表面活性劑。其有效成分制備工藝包括(1)牛膝、玄參、石斛藥材水提，兩次醇沉，再水沉，過濾，得濾液A；(2)金銀花藥材水提醇沉，濾液濃縮，離心，調pH值，乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯相酸洗后調節(jié)pH值至5～8，得水溶液B；(3)合并A和B，過濾，濾液濃縮，即得。本發(fā)明的納米乳劑無致敏性，副作用小，且有效成分提取工藝簡潔、合理、適合工業(yè)化大生產(chǎn)，尤其是去除了金銀花中容易致敏的鞣質等成分，更加安全、有效。文檔編號A61K36/88GK101194999SQ20061012994公開日2008年6月11日申請日期2006年12月8日優(yōu)先權日2006年12月8日發(fā)明者雨白,鄭永鋒申請人:天津天士力制藥股份有限公司