專利名稱：：一種穩(wěn)定的抗IgE人源化單抗制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，本發(fā)明公開了一種生物制劑。
背景技術(shù)：
：哮喘是一種常見病，僅在美國用于各種類型哮喘治療上的直接和間接的費(fèi)用總額為l40億美元。并且根據(jù)美國疾病控制中心(CDC)和衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)國家預(yù)防中心(PNCHS)的資料，哮喘每年至少引發(fā)了2百萬起的急診和超過5千人的死亡。IgE是導(dǎo)致哮喘過敏癥狀的主要原因，抗IgE人源化單抗是第一個(gè)用于治療哮喘的人源化的治療性抗體(Xolair)，也是第一個(gè)被認(rèn)可的針對(duì)IgE抗體設(shè)計(jì)的治療方法，它可以應(yīng)用于中到重度持續(xù)性哮喘的成人和青少年患者，作皮下使用，適用于患中到重度持續(xù)性哮喘的成人和青少年(12歲或者12歲以上)患者，他們對(duì)四季氣源性過敏源皮試反應(yīng)或者體外反應(yīng)為陽性，或使用吸入性皮質(zhì)激素制劑不能緩解癥狀。研究證實(shí)Xolair可以降低上述病人哮喘加重的發(fā)生率?？笽gE人源化單抗目前的制劑是以抗IgE人源化單抗為主藥，以蔗糖、L-組氨酸、L-組氨酸鹽酸鹽和吐溫-20為輔料制成的凍干制劑，此制劑穩(wěn)定性不高而且在溶解后液體的粘滯度較高，注射使用不方便，在使用過程中有不少患者表示有很強(qiáng)的疼痛感。無論是貯存還是臨床使用相對(duì)不便。
發(fā)明內(nèi)容為了解決上述問題，本發(fā)明的申請(qǐng)人進(jìn)行了大量的實(shí)驗(yàn)，對(duì)可以使用于抗IgE人源化單抗的輔料的類型和用量進(jìn)行了大量的篩選，得到了相對(duì)穩(wěn)定的方便于臨床使用的抗IgE人源化單抗制劑，從而達(dá)到了本發(fā)明的目的。具體地，本發(fā)明公開了一種穩(wěn)定的抗IgE人源化單抗制劑，由抗IgE人源化單抗、保護(hù)劑、緩沖劑、表面活性劑和等滲調(diào)節(jié)劑組成。本發(fā)明公開的制劑，為凍干制劑。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，其中保護(hù)劑是非還原性糖、谷氨酸單鈉、組氨酸、三元醇之一或其組合。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，其中非還原性糖為蔗糖或海藻糖。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，其中緩沖劑為組氨酸緩沖液、琥珀酸緩沖液、檸檬酸緩沖液之一。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，其中緩沖劑為組氨酸緩沖液。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，其中表面活性劑為吐溫-20或吐溫-80。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，其中表面活性劑為吐溫-20。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，其中抗IgE人源化單抗、保護(hù)劑、緩沖劑、表面活性劑和等滲調(diào)節(jié)劑的含量分別為抗IgE人源化單抗10~100mg/ml，保護(hù)劑520mg/ml，緩沖劑3~25mmol，表面活性劑0.05~0.2mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑0.53mg/ml。本發(fā)明公開的上述的抗IgE人源化單抗制劑，其中抗IgE人源化單抗、溶解保護(hù)劑、緩沖液、表面活性劑和等滲調(diào)節(jié)劑的含量分別為抗IgE人源化單抗40mg/ml，保護(hù)齊'j8mg/ml，緩沖劑4.9mmo1，表面活性劑0.099mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑1.28mg/ml。本發(fā)明公開的上述制劑，優(yōu)選凍干制劑，這些凍干制劑按照《中華人民共和國藥典》2005年版，二部附錄XIXC原料藥與藥物制劑穩(wěn)定性試驗(yàn)指導(dǎo)原則進(jìn)行了穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明公開的制劑在4。C保存3年，制劑的體外生物活性在95%以上，本發(fā)明公開的制劑在3(TC保存1年，制劑的體外生物活性在95%以上。本發(fā)明公開的制劑(凍干)進(jìn)行了BWFI重建，重建后各組分的含量為重建前的2.5倍，重建制劑在28。C保存三個(gè)月，制劑的體外生物活性保持在95%以上。本發(fā)明公開的制劑(凍干)溶解后粘滯度較低，注射使用方便，而且在注射過程中患者普遍反映沒有疼痛感。具體實(shí)施例方式以下結(jié)合實(shí)施例、實(shí)驗(yàn)例進(jìn)一步說明本發(fā)明，下述實(shí)施例、實(shí)驗(yàn)例不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制?？笽gE人源化單抗按照PrestaLG,LahrSJ,ShieldsRL,PorterJP,GormanCM,FendlyBM,JardieuPMJImmunol.1993Sepl;15l(5):2623-32.HumanizationofanantibodydirectedagainstIgE公開的方法制備，本發(fā)明所述的抗IgE人源化單抗不僅僅限于此，本領(lǐng)域的技術(shù)人員利用通用的基因工程技術(shù)得到的抗IgE人源化單抗也在本發(fā)明所述的抗IgE人源化單抗之列。除非特別說明，其它原輔料均為市售藥用輔料級(jí)別。體夕卜活性檢領(lǐng)!j方法參見HumanizationofanAntibodyDirectedAgainstIgE.LeonardC.Presta,'*StevenJ.Lahr，*RobertShields,JamesP.Porter,*CorneliaM.Corman,§BrianM.Fendly,*andPaulaM.JardieutImmunol.1993Sep1;151(5):2623-32)實(shí)施例抗IgE人源化單抗的制劑的制備實(shí)施例1配方組分含量抗IgE人源化單抗40mg/ml蔗糖8mg/mlL-組氨酸0.356mg/mlL-組氨酸鹽酸鹽一水合物0.553mg/ml吐溫-200.099mg/ml氯化鈉1.28mg/ml制備過程重組抗IgE人源化單克隆抗體純化最后一步采用分子排阻層析，流動(dòng)相為:L-組氨酸0.356mg/mlL-組氨酸鹽酸鹽一水合物0.553mg/ml氯化鈉1.28mg/ml經(jīng)過該步驟純化獲得重組抗IgE人源化單克隆抗體的原液。原液中重組抗IgE人源化單克隆抗體的濃度應(yīng)大于40mg/ml。制劑的配制根據(jù)原液的體積計(jì)算所需的蔗糖及吐溫20的用量(終濃度分別為8mg/ml及0.099mg/ml)，并加入原液中。調(diào)整溶液中所有組分的濃度，使^組分抗IgE人源化單抗蔗糖L-組氨酸L-組氨酸鹽酸鹽一水合物吐溫-20氯化鈉獲得半成品，將半成品無菌分裝塑蓋，獲得成品。組分含量如下40mg/ml8mg/ml0.356mg/ml0.553mg/ml0.099mg/ml1.28mg/ml、西林瓶中，冷凍干燥并加蓋橡膠塞及鋁實(shí)施例2(Xolair)配方組分抗IgE人源化單抗L-組氨酸L-組氨酸鹽酸鹽一水合物吐溫-20制備方法同實(shí)施例1實(shí)施例3:40mg/ml28.736mg/ml0.356mg/ml0.553mg/ml0.099mg/ml配方組分含量抗IgE人源化單抗20mg/ml蔗糖4mg/ml琥珀酸0.283mg/ml琥珀酸二鈉六水合物1.08mg/ml吐溫-200.05mg/ml氯化鈉0.64mg/ml制備方法同實(shí)施例1。實(shí)施例4組分含量抗IgE人源化單抗80mg/ml蔗糖16mg/ml檸檬酸一水合物0.0768mg/ml擰檬酸鈉4.608mg/ml吐溫-800.198mg/ml氯化鈉2.56mg/ml制備方法同實(shí)施例1。實(shí)施例5組分含量抗IgE人源化單抗40mg/ml蔗糖6.4mg/mlL-組氨酸L-組氨酸鹽酸鹽一水合物制備方法同實(shí)施例1。組分抗IgE人源化單抗蔗糖L-組氨酸L-組氨酸鹽酸鹽一水合物吐溫-20氯化鈉制備方法同實(shí)施例1。實(shí)施例7組分抗IgE人源化單抗蔗糖L-組氨酸L-組氨酸鹽酸鹽一水合物吐溫-20氯化鈉制備方法同實(shí)施例1。0.356mg/ml0.553mg/ml60mg/ml9.6mg/ml0.534mg/ml0.830mg/ml0.1485mg/ml1.92mg/ml40mg/ml16mg/ml0.356mg/ml0.553mg/ml0.099mg/ml1.28mg/ml實(shí)驗(yàn)例實(shí)施例1-7所得到的樣品為N0.1-7進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表l:表l:體外生物活性結(jié)果<table>complextableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>從以上結(jié)果可以看出，本發(fā)明公開的制劑和其重建制劑具有很好的穩(wěn)定性，而且本發(fā)明公開的制劑在溶解后粘滯度較低，注射使用方便，而且在注射過程中患者普遍反映沒有疼痛感，從而達(dá)到了本發(fā)明的目的。權(quán)利要求1.一種含抗IgE人源化單抗的制劑，由抗IgE人源化單抗、保護(hù)劑、緩沖劑、表面活性劑和等滲調(diào)節(jié)劑組成。2.權(quán)利要求1所述的制劑，為凍干制劑。3.權(quán)利要求1所述的制劑，其中保護(hù)劑是非還原性糖、谷氨酸單鈉、組氨酸、三元醇之一或其組合。4.權(quán)利要求3所述的制劑，其中非還原性糖為蔗糖或海藻糖之一。5.權(quán)利要求1所述的制劑，其中緩沖劑為組氨酸緩沖液、琥珀酸緩沖液、檸檬酸緩沖液之一。6.權(quán)利要求5所述的制劑，其中緩沖劑為組氨酸緩沖液。7.權(quán)利要求l所述的制劑，其中表面活性劑為吐溫-20或吐溫-80。8.權(quán)利要求7所述的制劑，其中表面活性劑為吐溫-20。9.權(quán)利要求l所述的制劑，其中等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉。10.權(quán)利要求1所述的制劑，其中各組分的含量分別為抗IgE人源化單抗10~100mg/ml，保護(hù)劑520mg/ml，緩沖劑3~25mmol，表面活性劑0.05-0.2mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑0.5-3mg/ml。11.權(quán)利要求10所述的制劑，其中各組分的含量分別為抗IgE人源化單抗40mg/ml，保護(hù)劑8mg/ml，緩沖劑4.9mmo1，表面活性劑0.099mg/ml，等滲調(diào)節(jié)劑1.28mg/ml。全文摘要本發(fā)明公開了一種穩(wěn)定的抗IgE人源化單抗制劑，由抗IgE人源化單抗保護(hù)劑、緩沖劑、表面活性劑和等滲調(diào)節(jié)劑組成。本發(fā)明公開的制劑具有穩(wěn)定、便于使用的優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)A61K39/395GK101199845SQ20061014728公開日2008年6月18日申請(qǐng)日期2006年12月14日優(yōu)先權(quán)日2006年12月14日發(fā)明者盛侯,庚寇,晶李,皓王,郭亞軍申請(qǐng)人:上海國健生物技術(shù)研究院