專利名稱：治療艾滋病的化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種具有抗HIV-1活性的化合物，及其藥物組合物和用途。
背景技術(shù)：
作為趨化因子受體家族一成員的CCR5，其內(nèi)源性激動劑有RANTES、MIP-1α和MIP-1β，它表達于外周血來源的樹突狀細胞，T淋巴細胞，單核細胞，巨噬細胞以及參與維持長期炎癥反應(yīng)的免疫細胞和炎癥細胞。因此，調(diào)節(jié)CCR5的功能可能調(diào)節(jié)T細胞向炎癥反應(yīng)損傷處的募集，從而為治療炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病提供了一個新的靶點。
盡管已經(jīng)公布CCR5受體拮抗劑具有潛在的抗HIV-1的活性，但是CCR5受體拮抗劑不一定都有抗HIV-1的活性。據(jù)文獻報道，國外幾個制藥公司在CCR5拮抗劑的開發(fā)過程中發(fā)現(xiàn)，一些化合物可高效地拮抗CCR5受體，但是卻不能有效地抵抗病毒進入[參見1.Kim，D.Discovery of human CCR5 antagonists containing hydantoins for the treatment ofHIV-1 infection.Bioorg.Med.Chem.Lett.2001，11，3099；2.Hale，J.1，3，4-Trisubstitutedpyrrolidine CCR5 receptor antagonists.Part 2lead optimization affording selective，orallybioavailable compounds with potent anti-HIV activity.Bioorg Med Chem Lett.2001 Oct22；11(20)2741-5]。還有一些公司的CCR5拮抗劑在發(fā)現(xiàn)后，一直未有后續(xù)的關(guān)于生物活性的報道[參見Wieslaw Kazmierski.Recent Progress in Discovery of Small-MoleculeCCR5 Chemokine Receptor Ligands as HIV-1 Inhibitors.Bioorganic & Medicinal Chemistry11(2003)2663-2676]。
然而，迄今為止還缺乏有效抑制HIV病毒生長的化合物。因此，本領(lǐng)域迫切需要開發(fā)有效抑制或抵抗HIV病毒(如HIV-1病毒)的化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的就是提供一類可顯著抑制HIV病毒(如HIV-1病毒)的化合物及其制法和用途。
在本發(fā)明的第一方面，提供了一種通式(I)所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽，
式中，R1為未取代的或被1-3個取代基取代的下列基團芐基、苯甲?；h(huán)己基甲?；?、環(huán)戊基甲?；?、苯磺?；?、或萘甲?；?，所述的取代基選自鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；R3為氫、C1-C4烷基，苯基或 所述基團中苯環(huán)可被1-3個選自下組的取代基取代鹵素和C1-C4烷基；R6為對硝基芐氧羰基、芐氧羰基、對鹵素芐氧羰基、對甲氧基芐氧羰基、對甲基芐氧羰基、對三氟甲基芐氧羰基、N-苯基甲酰胺基、苯氧乙酰基、3，4-二氧亞甲基芐氧羰基、對氨基芐氧羰基、苯磺?；谆交酋；?。
在另一優(yōu)選例中，所述的化合物選自下組烯丙基-{1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟)苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位}甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-芐基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-苯甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-[1-(2-碘)苯甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-萘甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)己基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-甲氧基芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-溴芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]-3-苯基脲；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]乙酰胺苯醚。
在另一優(yōu)選例中，所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式(II)所示結(jié)構(gòu) 式中，R1為未取代的或被1-3個取代基取代的下列基團芐基、苯甲酰基、環(huán)己基甲酰基、環(huán)戊基甲?；?、苯磺?；?、或萘甲?；?，所述的取代基選自鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；
R6為對硝基芐氧羰基、芐氧羰基、對鹵素芐氧羰基、對甲氧基芐氧羰基、對甲基芐氧羰基、對三氟甲基芐氧羰基、N-苯基甲酰胺基、苯氧乙?；?、3，4-二氧亞甲基芐氧羰基、對氨基芐氧羰基、苯磺?；?、對甲基苯磺?；?br> 在另一優(yōu)選例中，所述的化合物選自下組烯丙基-[1-((3R，4S)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-芐酯；烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲酰基)-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-甲氧基芐酯；烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-溴芐酯。
在另一優(yōu)選例中，所述化合物是TD0232，它具有以下結(jié)構(gòu)式(III)所示結(jié)構(gòu) 在本發(fā)明的第二方面，提供了一種藥物組合物，它含有安全有效量(如0.0001-99.99wt％，更佳地0.01-99wt％)本發(fā)明上述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分，以及藥學(xué)上可接受的載體。
在本發(fā)明的第三方面，提供了本發(fā)明上述化合物的用途，它們被用于制備抗HIV病毒的藥物。
本發(fā)明化合物還可用于選自下組的藥物(a)抑制HIV病毒感染人的外周血單核細胞的藥物；(b)抑制RANTES與CCR5的結(jié)合的藥物；(c)抑制RANTES、MIP-1α或MIP-1β引起的GTPγS與CCR5細胞膜的結(jié)合的藥物；(d)抑制RANTES引起的CCR5細胞內(nèi)鈣釋放的藥物；(e)抑制RANTES引起的CCR5細胞趨化運動的藥物。
在另一優(yōu)選例中，所述的HIV病毒是HIV-1病毒。
在另一優(yōu)選例中，所述的HIV-1病毒是A、B、C或O亞型或多重耐藥的HIV病毒株。
具體實施例方式
本發(fā)明人經(jīng)過廣泛而深入的研究，合成了一類高效的CCR5受體拮抗劑。在證明了該類拮抗劑的CCR5拮抗作用后，又深入研究了其抗病毒活性，意外地發(fā)現(xiàn)式(I)、(II)或(III)所示的CCR5拮抗劑在體外實驗中可非常顯著抵抗HIV-1病毒的進入，而且這些化合物不僅對多種病毒亞型均有效，而且還可作用于對多種臨床藥物耐藥的多重耐藥病毒株。
本文所用的術(shù)語“烷基”指直鏈或支鏈飽和的、含有1-8個碳原子(較佳地1-6個碳原子)的脂族烴類基團；“鏈烯基”包括含有至少一個碳碳雙鍵和2-8個碳原子(較佳地2-6個碳原子)的直鏈和支鏈烴基；“炔基”包括含有至少一個碳碳三鍵和2-8個碳原子(較佳地2-6個碳原子)的直鏈和支鏈烴基。
本文所用的術(shù)語“芳基”指芳族體系，可以是單環(huán)或原本稠合的或連接在一起的多芳環(huán)，從而使至少一部分稠合或連接的環(huán)形成共軛的芳系。芳基基團包括(但不限制于)苯基、萘基、四氫萘基。
本文所用的術(shù)語“雜環(huán)”指穩(wěn)定的4-7元單環(huán)或穩(wěn)定的多環(huán)雜環(huán)，該雜環(huán)可以是飽和的、部分不飽和的或不飽和的，且由碳原子和選自以下的1-4個雜原子構(gòu)成N、O和S原子。N和S原子可以被氧化。雜環(huán)還可包括任何多環(huán)，其中任一上述雜環(huán)可稠合于芳環(huán)。
術(shù)語“取代的芳基”或“取代的雜環(huán)”指被1-4個選自下組的基團所取代的芳基或雜環(huán)鹵素、CN、OH、NO2、氨基、烷基、環(huán)烷基、鏈烯基、炔基、烷氧基、芳氧基、取代的烷氧基、烷基羰基、烷基羧基、烷基氨基或芳硫基。較佳地，取代基是鹵素、C1-C4烷基。
“鹵素”指F、Cl、Br、或I。
本發(fā)明的化合物可以以由藥學(xué)上或生理學(xué)可接受的酸或堿衍生的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)與如下無機酸形成的鹽如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及與有機酸形成的鹽，而有機酸則指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和馬來酸。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以酯、氨基甲酸酯或其他常規(guī)的“前體藥物”的形式(當以這種形式給藥時，在體內(nèi)可轉(zhuǎn)化成活性部分)。
本發(fā)明還包括藥物組合物以及治療方法，它包括給哺乳動物施用藥物有效量的式I化合物。本發(fā)明的化合物可用于治療HIV感染、哮喘和局部紊亂(如局部性皮炎、局部過敏)、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動脈硬化、牛皮癬、肉狀瘤癥和其它纖維化疾病、自身免疫性疾病(如多發(fā)性硬化癥、炎癥性腸炎)、慢性梗阻性肺病(COPD)。
當化合物用于上述用途時，它們可與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑混合，如溶劑、稀釋劑等，而且可以用如下形式口服給藥片劑、膠囊、可分散的粉末、顆?；驊腋∫?含有如約0.05-5％懸浮劑)、糖漿(含有如約10-50％糖)、和酏劑(含有約20-50％乙醇)，或者以無菌可注射溶液或懸浮液形式(在等滲介質(zhì)中含有約0.05-5％懸浮劑)進行非腸胃給藥。例如，這些藥物制劑可含有與載體混合的約25-90％，通常約為25-60％(重量)的活性成分。
所用的活性成分的有效劑量可隨所用的化合物、給藥的模式和待治療的疾病的嚴重程度而變化。然而，通常當本發(fā)明的化合物每天以約0.5-500mg/kg動物體重的劑量給予時，能得到令人滿意的效果，較佳地每天以2-4次分開的劑量給予，或以緩釋形式給藥。對大部分大型哺乳動物而言，每天的總劑量約為1-100mg，較佳地約為2-80mg。適用于內(nèi)服的劑量形式，包含與固態(tài)或液態(tài)藥學(xué)上可接受的載體密切混合的約0.5-500mg的活性化合物。可調(diào)節(jié)此劑量方案以提供最佳治療應(yīng)答。例如，由治療狀況的迫切要求，可每天給予若干次分開的劑量，或?qū)┝堪幢壤販p少。
這些活性化合物可通過口服以及靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下等途徑給藥。固態(tài)載體包括淀粉、乳糖、磷酸二鈣、微晶纖維素、蔗糖和白陶土，而液態(tài)載體包括無菌水、聚乙二醇、非離子型表面活性劑和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要適合活性成分的特性和所需的特定給藥方式。在制備藥物組合物中通常使用的佐劑也可有利地被包括，例如調(diào)味劑、色素、防腐劑和抗氧化劑如維生素E、維生素C、BHT和BHA。
從易于制備和給藥的立場看，優(yōu)選的藥物組合物是固態(tài)組合物，尤其是片劑和固體填充或液體填充的膠囊?；衔锏目诜o藥是優(yōu)選的。
這些活性化合物也可腸胃外或腹腔內(nèi)給藥。也可在適當混合有表面活性劑(如羥丙基纖維素)的水中制備這些活性化合物(作為游離堿或藥學(xué)上可接受的鹽)的溶液或懸浮液。還可在甘油、液體、聚乙二醇及其在油中的混合物中制備分散液。在常規(guī)儲存和使用條件下，這些制劑中含有防腐劑以防止微生物的生長。
適應(yīng)于注射的藥物形式包括無菌水溶液或分散液和無菌粉(用于臨時制備無菌注射溶液或分散液)。在所有情況中，這些形式必須是無菌的且必須是流體以易于注射器排出流體。在制造和儲存條件下必須是穩(wěn)定的，且必須能防止微生物(如細菌和真菌)的污染影響。載體可以是溶劑或分散介質(zhì)，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液態(tài)聚乙二醇)、它們的適當混合物和植物油。
本發(fā)明人針對包括式(I)化合物在內(nèi)的眾多化合物進行了深入的抗HIV-1活性研究，發(fā)現(xiàn)一些優(yōu)選的具有抗HIV-1活性的化合物，尤其是式(I)、(II)和(III)所示的化合物。
一種特別優(yōu)選的化合物是烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯基吡咯烷-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯(下文簡稱TD0232)或其藥學(xué)上可接受的鹽。TD0232是CCR5特異性的拮抗劑，同時在體外實驗中還表現(xiàn)出高效的抗R5嗜性HIV-1的生物活性。
試驗研究結(jié)果顯示，TD0232可顯著地抑制不同的HIV-1病毒株感染人的外周血單核細胞(PBMC)，證明了此化合物在體外具有高效的抗HIV-1作用。在對三種R5嗜性的B亞型HIV-1病毒株的測試中，TD0232都明顯抑制了HIV-1對人PBMC細胞的感染，其IC50值的范圍在2.6nM到18.1nM之間，與以前報道過的一種CCR5的特異性拮抗劑SCH-C相比，TD0232在所測試的病毒株上至少有與之相當?shù)目共《净钚?，在某些病毒株上甚至?yōu)于SCH-C。
為進一步確證TD0232的抗病毒活性，用來源于三個不同個體的PBMC細胞進行了抗病毒試驗，結(jié)果證明TD0232確實有抗HIV-1病毒的活性。同時，對于利用另一個共受體CXCR4的HIV-1病毒株(即X4嗜性的病毒株)，HIV-1NL4-3，TD0232不能有效抑制其對人PBMC細胞的感染，說明TD0232可特異性地拮抗R5嗜性HIV-1病毒株。
為進一步確證TD0232是一種R5特異性的進入抑制劑，本發(fā)明人利用表達CCR5或CXCR4受體的U87.CD4細胞對TD0232進行了病毒進入實驗。研究結(jié)果再一次表明，TD0232對于R5嗜性的B亞型毒株JR-FL和ADA具有進入抑制作用，而對作為對照的X4嗜性的B亞型毒株HXB2或amphotropic AmLV則不具有進入抑制作用。這一結(jié)果確證了該藥物的抑制作用發(fā)生在病毒的進入階段，并從機理上驗證了TD0232作用的特異性。
在對多種亞型(A，B，C和O亞型)的HIV-1病毒株的抗病毒實驗中，TD0232都顯著地抑制了病毒對人PBMC細胞的感染，證明了TD0232對R5嗜性的HIV-1抗病毒譜廣，具有廣泛的抗多種亞型(A、B、C和O亞型)的R5嗜性HIV-1病毒株的活性。
針對目前抗艾滋病藥物在臨床上出現(xiàn)的耐藥現(xiàn)象，本發(fā)明人選用了一種B亞型的HIV-1多重耐藥株J18進行抗病毒實驗，此病毒株對目前臨床上廣泛使用的多種抗病毒藥物耐藥。結(jié)果顯示，TD0232可高效抑制J18病毒株對人PBMC細胞的感染，說明TD0232具有抗R5嗜性的多重耐藥病毒株的能力。
本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，TD0232的細胞毒性小，MTT實驗結(jié)果表明，TD0232對CHO/CCR5、Jurkat和人的肝細胞L02的細胞毒性的半數(shù)致死量(CC50)均大于10μM。
本發(fā)明的化合物可用下列所示流程進行制備流程Iβ-丙胺酸化合物1在甲醇和二氯亞砜中回流上甲酯，再用兩分子芐溴在碳酸鉀作堿乙腈中保護氨基得化合物2。保護的β-丙氨酸酯2與酮酸酯3進行Aldol縮合得到兩組對映異構(gòu)體4。

得到的縮合產(chǎn)物催化氫化掉一個芐基后關(guān)五元內(nèi)酰胺環(huán)得到兩組順反異構(gòu)體5。接下來用強堿(氫氧化鈉或氫氧化鉀)皂化分子中的甲酯為反式酸6。
酸6在縮合試劑存在下與水合哌啶酮鹽酸鹽縮合得酮化合物7，鋰鋁氫還原得醇化合物8，Swern氧化醇為酮化合物9，再與丙烯胺在醋酸鈉硼氫存在下縮合得化合物10，最后與R6Cl反應(yīng)得到化合物11。

流程II流程I中得到的化合物8用乙酯保護得化合物12，催化氫化掉分子中的芐基，得到化合物13，再與R1Cl反應(yīng)得化合物14，化合物14在碳酸鉀甲醇中脫去仲醇上的保護基得到化合物15，Swern氧化仲醇為酮16，再與丙烯胺在醋酸鈉硼氫存在下縮合得化合物17，最后與R6Cl反應(yīng)得到化合物18。

流程III 流程IV當R1為環(huán)戊基甲?；鶗r， 流程V當R1為環(huán)戊基甲?；鶗r，
流程VI當R1為環(huán)戊基甲?；鶗r， 本發(fā)明的主要優(yōu)點在于(a)本發(fā)明化合物可有效地抑制HIV病毒感染和進入人體細胞。
(b)本發(fā)明化合物對于多種亞型和多重耐藥株有效。
(c)本發(fā)明化合物的毒副作用小。
下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件或按照制造廠商所建議的條件。
實施例1化合物III-a-a烯丙基-[1-(1-芐基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯N，N-二芐基β-丙氨酸甲酯按照流程I，冰浴下將SOCl2(10ml)滴入β-丙氨酸鹽酸鹽(7.05g)的甲醇(40ml)溶液后升溫回流3h，冷卻后旋干溶劑，抽干，加入K2CO3(38g)和150ml乙氰溶液攪拌，加入22ml芐溴室溫攪拌20h，加水把碳酸鉀溶解，乙酸乙酯萃取兩次，食鹽水洗，Na2SO4干燥，過濾濃縮，柱層析，得到N，N-二芐基β-丙氨酸甲酯(14.9g)，收率93.6％。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.27(m，10H)，3.56(s，3H)，3.51(s，4H)，2.74(t，J＝6.9Hz，2H)，2.45(t，2H).
4-苯-1-芐基-4-羥基-5-氧基吡咯-3-羧酸先將反應(yīng)體系無水操作，氮氣保護下0℃向1.09ml(iPr)2NH的7ml THF溶液中滴加4.5ml 1.6M的丁基鋰正己烷溶液，攪拌10min冷至-78℃，滴加N，N-二芐基β-丙氨酸甲酯(1.00g，3.53mmol)的40ml THF溶液后攪拌1h，再滴加反應(yīng)物苯乙酮酸乙酯的5ml THF溶液，-78℃反應(yīng)4h。用飽和NH4Cl水溶液淬滅，用(60×2)乙酸乙酯萃取，水洗，食鹽水洗，Na2SO4干燥，過濾濃縮后柱層析，用(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶13)過柱得一固體化合物(0.654g)和一液體化合物(0.653g)，總收率73.3％。液體化合物(3.197g)溶于250ml MeOH中，加入0.32g Pd/C，室溫一個氣壓氫氣下反應(yīng)3h，過濾，旋干甲醇，先用(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶4)過下未反應(yīng)的原料1.065g，再用(乙酸乙酯∶石油醚＝1∶2)過柱得到白色固體0.935g，轉(zhuǎn)化率59.8％。
向上面得到的甲酯化合物的甲醇溶液中加入1.4當量1N的NaOH水溶液，室溫反應(yīng)到原料消失，旋干甲醇，加水用1N的HCl水溶液中和至pH＝3，用乙酸乙酯萃取兩次，水洗，食鹽水洗至中性，Na2SO4干燥，過濾濃縮得到固體化合物。
IR(KBr)3267，2887，1713，1688，1501，1487，1254，1299cm-1；1H NMR(DMSO d6，300MHz)δ12.45(s，1H)7.41-7.30(m，5H)，6.94-6.86(m，3H)，6.44(s，1H)，4.46(d，JAB＝15.3Hz，1H)，4.44(d，JAB＝15.0Hz，1H)，3.58(m，1H)，3.37(m，2H)。
烯丙基-[1-(1-芐基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯將前述獲得的4-苯-1-芐基-4-羥基-5-氧基吡咯-3-羧酸中間體與DCC(1.1eq)和HOSu(1.1eq)溶于四氫呋喃中，室溫反應(yīng)6小時后過濾，加入三乙胺(2.0eq)和水合哌啶酮鹽酸鹽(1.1eq)并攪拌過夜。旋干四氫呋喃后加水和乙酸乙酯震蕩分液，有機相用食鹽水洗后干燥，過濾并旋干溶劑得到白色固體。
將固體溶于四氫呋喃中并加入鋰鋁氫(8eq)，升溫回流24小時后用10％氫氧化鈉淬滅，過濾并旋干溶劑得到固體泡沫仲醇化合物。
-78℃下，草酰氯(1.3eq)的二氯甲烷溶液滴加到二甲亞砜的二氯甲烷溶液中并攪拌10分鐘，將上面的白色泡沫化合物(1eq)的二氯甲烷溶液加入上述體系中反應(yīng)30分鐘后加入三乙胺(3eq)并升溫到室溫，加水和乙酸乙酯震蕩分液，有機相用食鹽水洗后干燥，柱層析得到酮化合物。
向上面的酮化合物(1eq)和NaBH(OAc)3(1.5eq)的混合物中加入1，2-二氯乙烷，再向體系中加入烯丙胺(1eq)和醋酸(1eq)，反應(yīng)過夜后加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯萃取兩次后合并有機相，食鹽水洗后干燥，過濾旋干溶劑得到白色泡沫化合物。
將上面的固體泡沫溶于二氯甲烷，加入三乙胺(1.5eq)和對硝基苯氧羰基氯(1.2eq)并室溫反應(yīng)4小時，水洗分液后干燥，柱層析后得到化合物III-a-a。
IR(kBr)2938，2806，1751，1710，1608，1523，1496，1448，1378，1348，1261cm-1；
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.27-8.22(m，2H)，7.55-7.25(m，12H)，5.97-5.82(m，1H)，5.36-5.07(m，4H)，4.39(m，1H)，3.68(m，2H)，3.25(m，2H)，2.80-2.22(m，6H)，1.79(m，4H)；ESI-MS m/z 585(M++1)；HRMS計算值C34H41N4O5(M++1)585.3071，測量值585.3070.
實施例2 化合物III-a-b烯丙基-[1-(1-苯甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照流程II，將制備化合物III-a-a時得到的中間體仲醇化合物(1eq)溶于二氯甲烷中，向體系中加入催化量的DMAP(0.1eq)，三乙胺(5.0eq)和醋干(3.0eq)，零度反應(yīng)2小時后加水震蕩分液，有機相用食鹽水洗并干燥，柱層析后得到固體泡沫。
上面的固體泡沫溶于甲醇中，加入5％的Pd/C在一大氣壓氫氣下氫化過夜，濾除催化劑并旋干溶劑得到泡沫化合物。產(chǎn)物溶于二氯甲烷中并加入三乙胺(1.5eq)和苯甲酰氯(1.2eq)攪拌2小時，水洗并干燥后柱層析得到泡沫化合物。
得到的化合物(1eq)溶于甲醇∶水為5∶1溶劑中，加入碳酸鉀(2.0eq)并攪拌4小時后旋干甲醇，用乙酸乙酯萃取兩次后合并有機相，食鹽水洗，干燥后過濾并旋干溶劑得到白色泡沫化合物。
-78℃下，草酰氯(1.3eq)的二氯甲烷溶液滴加到二甲亞砜的二氯甲烷溶液中并攪拌10分鐘，將上面的白色泡沫化合物(1eq)的二氯甲烷溶液加入上述體系中反應(yīng)30分鐘后加入三乙胺(3eq)并升溫到室溫，加水和乙酸乙酯震蕩分液，有機相用食鹽水洗后干燥，柱層析得到酮化合物。
向上面的酮化合物(1eq)和NaBH(OAc)3(1.5eq)的混合物中加入1，2-二氯乙烷，再向體系中加入烯丙胺(1eq)和醋酸(1eq)，反應(yīng)過夜后加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯萃取兩次后合并有機相，食鹽水洗后干燥，過濾旋干溶劑得到白色泡沫化合物。
上面得到的泡沫化合物(1eq)溶于二氯甲烷中，加入三乙胺(2eq)和對硝基芐氧羰基氯(1.5eq)后攪拌2小時。加水和乙酸乙酯震蕩后分液，有機相用食鹽水洗后干燥，過濾后柱層析得到化合物III-a-b。
IR(KBr)3375，3063，2943，1701，1627，1608，1577，1522，1496，1421，1346，1250cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.24-8.19(m，2H)，7.61-7.21(m，12H)，5.82-5.77(m，1H)，5.22-5.11(m，4H)，4.14-3.61(m，8H)，3.17-3.07(m，1H)，2.98-2.40(m，4H)，2.20(m，1H)，1.82-1.50(m，4H)；ESI-MS m/z 599(M++1)；HRMS計算值C34H39N4O6(M++1)599.2864，測量值599.2879。
實施例3化合物III-a-c烯丙基-[1-[1-(2-碘)苯甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-b相同的方法，將苯甲酰氯換成鄰碘苯甲酰氯即可以得到化合物III-a-c。
IR(KBr)3375，2941，1701，1637，1522，1467，1421，1345，1249cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.24-8.20(m，2H)，7.86-7.80(m，1H)，7.55-7.06(m，10H)，5.95-5.76(m，1H)，5.23-5.12(m，4H)，4.16-4.04(m，2H)，3.96-3.85(m，3H)，3.70-3.13(m，3H)，3.03(m，1H)，2.80(m，2H)，2.57(m，1H)，2.18-2.02(m，2H)，1.87-1.64(m，4H)；ESI-MS m/z 725(M++1)；HRMS計算值C34H38N4O6I(M++1)725.1831，測量值725.1833。
實施例4III-a-d烯丙基-[1-(1-萘甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-b相同的方法，將苯甲酰氯換成1-萘甲酰氯即可以得到化合物III-a-d。
IR(KBr)3381，3060，2943，1701，1633，1522，1465，1428，1384，1346，1249cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.23-8.18(m，2H)，7.96-7.82(m，3H)，7.58-7.21(m，11H)，5.95-5.76(m，1H)，5.21-5.11(m，4H)，4.20-3.96(m，3H)，3.94-3.58(m，3H)，3.52-3.21(m，2H)，3.10(m，1H)，2.82-2.52(m，4H)，2.25-2.06(m，1H)，1.74-1.39(m，4H)；ESI-MS m/z 649(M++1)；HRMS計算值C38H41N4O6(M++1)649.3021，測量值649.3016。
實施例5III-a-e烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-b相同的方法，將苯甲酰氯換成環(huán)戊基甲酰氯即可以得到化合物III-a-eIR(KBr)3375，2948，1700，1637，1523，1467，1345，1249cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.23(d，2H)，7.54-7.23(m，8H)，5.83-5.77(m，1H)，5.23-5.12(m，4H)，4.10-3.67(m，7H)，3.58-3.40(m，1H)，3.06-2.60(m，4H)，2.59-2.40(m，1H)，2.14-2.03(m，1H)，2.00-1.48(m，13H)；ESI-MS m/z 591(M++1)；HRMS計算值C33H43N4O6(M++1)591.3177，測量值591.3168。
實施例6化合物III-a-f烯丙基-[1-(1-環(huán)己基甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-b相同的方法，將苯甲酰氯換成環(huán)己基甲酰氯即可以得到化合物III-a-f。
IR(KBr)3375，2933，2855，1701，1638，1523，1450，1346，1250cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.22(d，J＝7.8Hz)，7.60-7.52(m，3H)，7.42-7.11(m，4H)，5.92-5.76(m，1H)，5.22(s，2H)，5.16-5.10(m，2H)，4.15-3.62(m，7H)，3.58-3.37(m，1H)，3.11-2.60(m，4H)，2.58-2.00(m，2H)，2.00-1.44(m，15H)；ESI-MS m/z 605(M++1)；HRMS計算值C34H45N4O6(M++1)605.3334，測量值605.3333.
實施例7化合物III-a-g烯丙基-{1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟)苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位}甲酰胺-4-硝基芐酯按照制備化合物III-a-a相同的方法，將中間體4-苯基-1-芐基-4-羥基-5-氧基吡咯-3-羧酸換成4-(4-氟)苯基-1-芐基-4-羥基-5-氧基吡咯-3-羧酸即可以得到化合物III-a-g。
IR(KBr)1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.21(m，2H)，7.64-7.47(m，3H)，7.40-7.20(m，6H)，7.05-6.96(m，2H)，5.89(m，1H)，5.18-5.06(m，4H)，3.68(m，3H)，3.28-3.21(m，3H)，2.95(d，1H)，2.86-2.74(m，3H)，2.60(m，1H)，2.53-2.25(m，5H)，1.85-1.75(m，4H).
ESI-MS m/z(M++1)603；HRMS計算值C34H39N4O5F(M++1)625.2797，測量值625.2808。
實施例8化合物III-a-h按照制備化合物III-a-e相同的方法，將對硝基芐氧羰基氯換為芐氧羰基氯，得到化合物III-a-h1H NMR(CDCl3，300MHz)7.52-7.26(m，10H)，5.85-5.77(m，1H)，5.21-5.08(m，4H)，4.05-3.88(m，1H)3.87-3.64(m，6H)，3.01-2.39(m，7H)，2.38-2.14(m，1H)，1.87-1.48(m，12H)；ESI-MS m/z 546.4(M++1)；實施例9化合物III-a-i按照制備化合物III-a-e相同的方法，將對硝基芐氧羰基氯換為對甲氧基芐氧羰基氯，得到化合物III-a-i1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.52-7.24(m，7H)，6.95-6.82(d，2H)，5.92-5.68(m，1H)，5.26-5.02(m，4H)，4.21-3.63(m，10H)，3.22-2.34(m，7H)，2.02-1.51(m，13H)；實施例10化合物III-a-j按照制備化合物III-a-e相同的方法，將對硝基芐氧羰基氯換為對溴芐氧羰基氯，得到化合物III-a-j1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.55-7.15(m，9H)，5.86-5.67(m，1H)，5.30-5.00(m，4H)，4.17-3.62(m，7H)，3.06-2.35(m，6H)，2.22-2.02(m，2H)，1.86-1.53(m，12H)；實施例11化合物III-a-k按照制備化合物III-a-e相同的方法，將對硝基芐氧羰基氯換為苯基異氰酸脂，得到化合物III-a-k1H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.58-7.26(m，8H)，7.08-6.98(m，2H)，6.60-6.52(d，1H)，6.00-5.86(m，1H)，5.48-5.32(m，2H)，4.44-4.32(m，1H)，3.91-3.50(m，5H)，3.11-2.02(m，9H)，1.96-1.49(m，12H)；ESI-MS m/z 531(M++1)；實施例12化合物III-a-l按照制備化合物III-a-e相同的方法，將對硝基芐氧羰基氯換為苯氧乙酰氯，得到化合物III-a-l1H NMR(CDCl3，300MHz)7.52-7.26(m，7H)，7.00-6.89(m，3H)5.86-5.77(m，1H)，5.30-5.21(m，2H)，4.70-4.66(d，2H)，4.58-4.40(m，1H)，4.00-3.69(m，6H)，3.02-2.38(m，6H)，2.38-2.05(m，2H)，1.87-1.45(m，12H)；ESI-MS m/z 546.5(M++1)；上述實施例所制備的各化合物總結(jié)于表1中表1化合物
實施例13旋光異構(gòu)化合物的制備參見流程III。
化合物19往苯甲酰甲酸乙酯中加入2N的NaOH和等體積的THF，室溫下攪拌反應(yīng)4小時；點板；反應(yīng)完全后加鹽酸淬滅；旋干THF；乙酸乙酯萃?。幌礈?；干燥。得到無色粘稠固體，即化合物19。
化合物20
將原料丙烯酸甲酯溶解在適量的甲醇中，攪拌下加入1.2當量的(R)-α-甲基芐胺，反應(yīng)體系在常溫下攪拌20小時，減壓(0.1Mpa，＜60℃)蒸去甲醇，得淡黃色粘稠狀產(chǎn)物，即化合物20。無需進一步提純即可直接向下做反應(yīng)。
化合物21將化合物19和化合物20按等當量混合溶解在適量的二氯甲烷中，冰浴下依次往里加入HOBt和DCC，反應(yīng)體系自然升至室溫反應(yīng)兩天。過濾，依次用水、飽和食鹽水洗滌，旋干溶劑后用乙酸乙酯重結(jié)晶得到淡黃色固體，即化合物21。
化合物22無水無氧條件下，將化合物21溶解在適量的無水四氫呋喃中，-78℃下緩慢滴加1.2當量的LDA，在該溫度下反應(yīng)8小時；點板跟蹤；反應(yīng)完后用乙酸淬滅；旋干；二氯甲烷萃??；干燥；濃縮即得化合物22。
拆分方法趁熱向所得的濃縮液中加入適量的乙酸乙酯混合攪拌后靜置析晶至少12小時，過濾，60℃烘干即得一白色晶體，經(jīng)單晶X-射線衍射證實為具有絕對構(gòu)型的單一化合物22″。
上述的母液繼續(xù)二次結(jié)晶12小時又可得到另一淡黃色的晶體，經(jīng)旋光測定后與上述的化合物4”的旋光度對比，確定為化合物4”的對映異構(gòu)體，定為化合物22′。
化合物23將14g化合物22”溶解在適量的甲醇中，強烈攪拌下加入2當量的2N的NaOH溶液，反應(yīng)體系在室溫下攪拌6小時，加入水稀釋后，減壓(0.1Mpa，＜60℃)下蒸去甲醇，用3N的鹽酸(36.5％的鹽酸配制)調(diào)節(jié)體系到酸性(pH＝4)，過濾得粗產(chǎn)物。粗品中再加入適量的乙酸乙酯和石油醚，加熱到50℃攪拌數(shù)小時，趁熱過濾得到白色濾餅，烘干后得到白色粉末12g，即化合物23”。產(chǎn)率87％。
化合物24將化合物23”(12g)和HOSu(5.1g)溶解在干燥的THF中，冰浴將體系的溫度冷卻到0℃，然后往反應(yīng)體系中緩慢加入DCC(9.12g)的無水THF溶液攪拌1小時后，慢慢升至室溫，在室溫下再攪拌約24小時。過濾，濾餅用干的THF快速洗滌，合并濾液，并向濾液中加入3當量的三乙胺(15mL)，將反應(yīng)體系降溫到0℃，再向反應(yīng)體系中緩慢加入1.1當量的哌啶酮的鹽酸鹽(6.24g)，約30分鐘加畢，慢慢升到室溫，攪拌20小時后，過濾，旋干濾液，得到的固體中加入50mL乙酸乙酯和20mL水萃取，食鹽水洗滌，干燥濃縮后靜置數(shù)小時，過濾，50℃常壓烘干得到白色粉末11g，即化合物24，產(chǎn)率73.3％。
化合物25向反應(yīng)瓶中分別加入2g四氫鋁鋰和適量的THF，冰浴中冷卻至0℃。然后將化合物24(10g)溶解在適量的四氫呋喃中，將該溶液均分成兩份后分別緩慢滴加到上述的反應(yīng)瓶中，約1小時左右滴畢。反應(yīng)體系慢慢升溫至四氫呋喃開始回流，并保持回流狀態(tài)72小時，再次將反應(yīng)體系冷卻到0℃，分別向每個反應(yīng)瓶中依次緩慢滴加約2mL水，2mL15％的NaOH溶液和2mL水，常溫攪拌約過夜，過濾。濾餅用四氫呋喃洗滌，合并有機相，濃縮得無色粘稠狀液體9.38g，即化合物25，粗品收率100％。該化合物不用進一步純化可直接用于下一步反應(yīng)。
化合物26將得到的中間體仲醇化合物25(1eq)溶于適量的二氯甲烷中，向體系中加入催化量的DMAP(0.1eq)，三乙胺(5.0eq)和醋干(3.0eq)，在0℃下反應(yīng)2h后加水震蕩分液，有機相用食鹽水洗并干燥，柱層析后得到固體泡沫，即化合物26。
化合物27將上面的固體泡沫化合物26溶于適量的甲醇中，加入5％的Pd/C在一大氣壓氫氣下氫化過夜，濾除催化劑并旋干溶劑得到無色泡沫化合物，即化合物27。
化合物28上述化合物27溶于二氯甲烷中并加入三乙胺(1.5eq)和環(huán)戊甲酰氯(1.2eq)攪拌4h，水洗并干燥后柱層析得到淡黃色泡沫化合物，即化合物28。
化合物29將得到的上述化合物28(1eq)溶于甲醇∶水＝5∶1溶劑中，加入碳酸鉀(2.0eq)并攪拌4h后旋干甲醇，用乙酸乙酯萃取兩次后合并有機相，食鹽水洗，干燥后過濾并旋干溶劑得到白色泡沫化合物，即化合物29。
化合物30-78℃下，草酰氯(1.3eq)的二氯甲烷溶液滴加到二甲亞砜的二氯甲烷溶液中并攪拌10分鐘，將上面的白色泡沫化合物29(1eq)的二氯甲烷溶液加入上述體系中反應(yīng)30分鐘后加入三乙胺(3eq)并升溫到室溫繼續(xù)攪拌20分鐘，加水和乙酸乙酯震蕩分液，有機相用食鹽水洗后干燥，柱層析得到酮化合物，即化合物30。
化合物31向上面的酮化合物30(1eq)和NaBH(OAc)3(1.5eq)的混合物中加入1，2-二氯乙烷，再向體系中加入烯丙胺(1eq)和醋酸鈉硼氫(1eq)，反應(yīng)過夜后加入飽和碳酸氫鈉水溶液，用乙酸乙酯萃取兩次后合并有機相，食鹽水洗后干燥，過濾旋干溶劑得到白色泡沫化合物，即化合物31。
化合物32上面得到的泡沫化合物31(1eq)溶于二氯甲烷中，加入三乙胺(2eq)和對硝基芐氧羰基氯(1.5eq)后攪拌4小時。加水和乙酸乙酯震蕩后分液，有機相用食鹽水洗后干燥，過濾后柱層析得到化合物32，即TD0232，淡黃色泡沫。TD0232結(jié)構(gòu)表征IR(KBr)3375，2948，1700，1637，1523，1467，1345，1249cm-1；1H NMR(CDCl3，300MHz)δ8.23-8.20(d，2H)，7.52-7.27(m，8H)，5.85-5.77(m，1H)，5.22-5.11(m，4H)，4.04-3.66(m，8H)，3.06-2.83(m，1H)，2.82-2.60(m，3H)，2.59-2.40(m，2H)，2.30-2.03(m，2H)，2.00-1.48(m，13H)；13C NMR(CDCl3，300MHz)δ175.3，175.1，147.5，144.1，143.4，128.4，128.3，128.0，127.3，127.2，125.1，125.0，123.7，82.1，65.6，61.3，55.8，55.4，55.2，54.6，54.0，47.7，46.3，44.3，42.7，42.5，29.9，29.7，26.1，26.0；ESI-MS m/z 591(M++1)；HRMS計算值C33H43N4O6(M++1)591.3177，測量值591.3168。
其絕對構(gòu)型通過中間體化合物29的單晶X-射線衍射譜圖得到間接證實。
按照流程III的方法，同樣制備獲得TD0231，其合成路線從拆分后同TD0232。
按照流程IV，將化合物31溶解在CH2Cl2∶H2O＝1∶1的溶液中，冷至0℃，1.2eq的NaOH緩慢加入，然后開始滴加芐氧羰基氯。用1N的NaOH小心維持pH＝10，攪拌2小時。用水稀釋，二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，柱層析得到白色固體，命名為化合物TD02371H NMR(CDCl3，300MHz)7.52-7.26(m，10H)，5.85-5.77(m，1H)，5.21-5.08(m，4H)，4.05-3.88(m，1H)3.87-3.64(m，6H)，3.01-2.39(m，7H)，2.38-2.14(m，1H)，1.87-1.48(m，12H)；ESI-MS m/z 546.4(M++1).
按照流程V，固體光氣溶解在無水乙醚中，N2保護，冰鹽浴下滴加對溴芐醇和N，N-二甲基苯胺的無水乙醚溶液，攪拌1小時，過濾，低溫濃縮，乙醚洗滌，再低溫濃縮得到白色晶體。
將化合物31溶解在二氯甲烷中，加入催化量的DMAP和1.5eq的三乙胺，冰浴中，N2保護下滴加上述白色晶體的二氯甲烷溶液。自然升至室溫反應(yīng)過夜。加水淬滅，二氯甲烷萃取，飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，柱層析得到白色的固體TD02451H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.55-7.15(m，9H)，5.86-5.67(m，1H)，5.30-5.00(m，4H)，4.17-3.62(m，7H)，3.06-2.35(m，6H)，2.22-2.02(m，2H)，1.86-1.53(m，12H)按照流程VI，實驗操作同化合物TD0245，獲得化合物TD02401H NMR(CDCl3，300MHz)δ7.52-7.24(m，7H)，6.95-6.82(d，2H)，5.92-5.68(m，1H)，5.26-5.02(m，4H)，4.21-3.63(m，10H)，3.22-2.34(m，7H)，2.02-1.51(m，13H)；表2上述實施例所制備的各旋光異構(gòu)化合物
實施例14各化合物的體外抗HIV-1活性研究1.試驗材料細胞人PBMC細胞，購自武漢市中心血站，分別來自3個健康人。
HIV-1毒株HIV-1JR-FL、HIV-120678和HIV-1NL4-3，購自NIH AIDS Research andReference Reagent Program，HIV-1HNz2購自武漢大學(xué)現(xiàn)代病毒研究中心。
P24試劑盒HIV-1 p24 Antigen EIA，購自Beckman Coulter公司。
用RPMI1640配制不同濃度的溶液。將TD0232按照所需的濃度制備，分別為600nM、200nM、66.7nM、22.2nM、7.4nM、2.5nM、0.8nM。
病毒的稀釋用于藥物體外抑制實驗的病毒株，一般選用100TCID50/孔。用培養(yǎng)液稀釋成100TCID50/50ul/孔。
提前兩天從人血中制備PBMC(外周血單核細胞)，并在含PHA和IL-2的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
實驗當天1.提取PBMC并以105個細胞每孔置于96孔板培養(yǎng)，每孔100ul.
2.梯度稀釋藥物3.每孔加入50ul的(已稀釋)藥物4.每孔加入病毒50ul，終濃度100TCID50每孔.
第一天1.用普通培養(yǎng)基清洗被感染細胞三次；
2.最后一次清洗后，加入新配的含藥物生長培養(yǎng)基200ul；第七天收集病毒上清，進行p24檢測結(jié)果可根據(jù)p24檢測結(jié)果，利用計算公式計算出該藥物抑制病毒率。
公式藥物抑制率＝((對照孔-檢測孔)/對照孔)×100％結(jié)果顯示，化合物TD0232與陽性對照藥SHC-C均可明顯抑制三種B亞型R5嗜性HIV-1毒株對人PBMC的感染，TD0232的IC50值范圍在2.6nM到18.1nM之間，其抗病毒活性稍好于陽性對照藥SHC-C。在三個不同個體的PBMC細胞上進一步驗證TD0232的抗病毒活性，結(jié)果顯示TD0232可在體外顯著抵抗HIV-1對PBMC細胞的感染。在對B亞型X4嗜性HIV-1毒株NL4-3的實驗中，TD0232與陽性對照藥SHC-C都沒有表現(xiàn)出明顯的抗病毒作用，說明TD0232具有特異性的抗R5嗜性HIV-1的活性。結(jié)果見表3。
表3.各化合物及SCH-C抑制B亞型R5嗜性HIV-1病毒株在人PBMC中復(fù)制的IC50(IC90)及對PBMC的CC50值

實施例15TD0232體外抗HIV-1作用的特異性研究1.實驗材料細胞表達CCR5或CXCR4受體的U87.CD4細胞，購自NIH AIDS Research andReference Reagent Program。
毒株HIV-1JR-FL、HIV-1ADA、HIV-1HXB2和HIV-1Amlv，購自NIH AIDSResearch and Reference Reagent Program。
熒光素酶檢測試劑盒Promega公司熒光儀DYNEX Technologies，Inc公司2.實驗方法和評價A.將TD0232用DMEM培養(yǎng)基配制不同濃度的藥物溶液。按藥物試驗所需的濃度制備，實驗終濃度為600nM、200nM、66.7nM、22.2nM、7.4nM、2.5nM、0.8nM。
B.病毒的稀釋用于藥物體外抑制實驗的病毒株，一般選用100TCID50/孔。
用DMEM培養(yǎng)液稀釋成100TCID50/50ul/孔C.實驗程序
提前一天準備U87.CD4.CCR5和U87.CD4.CXCR4(來源)，并在96孔板中，用含10％FBS的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)。細胞數(shù)目為4×104/孔。
實驗當天1.梯度稀釋藥物2.每孔加入50ul的(已稀釋)藥物3.每孔加入病毒50ul，終濃度為相當于10ng/每孔的p24值的病毒72小時后收集被感染的細胞，用Promega公司的試劑盒檢測熒光素值，酶標儀是DYNEXTechnologies，Inc 公司生產(chǎn)。
結(jié)果可根據(jù)熒光素的檢測結(jié)果，利用計算公式計算出該藥物抑制病毒率。
公式藥物抑制率＝((對照孔-檢測孔)/對照孔)×100％CCR5和CXCR4是目前已發(fā)現(xiàn)的HIV-1進入細胞的兩種共受體，CCR5受體主要在感染早期介導(dǎo)R5嗜性HIV-1病毒進入PBMC細胞，而CXCR4受體主要在感染晚期介導(dǎo)X4嗜性HIV-1病毒的進入。實驗結(jié)果表明，TD0232對于R5嗜性的B亞型毒株JR-FL和ADA具有進入抑制作用，而對作為對照的X4嗜性的B亞型毒株HXB2或amphotropic AmLV則不具有進入抑制作用。同時，此實驗也驗證了TD0232是在病毒的進入階段發(fā)揮抑制作用，并且對輔助受體CCR5有高度的選擇性。
實施例16.TD0232抗多種亞型的R5嗜性HIV-1病毒株的活性研究1.實驗材料細胞人PBMC細胞，購自武漢市中心血站，分別來自3個健康人HIV-1毒株三個亞型(A，C and O)R5嗜性的原始HIV-1病毒株，購自NIH AIDSResearch and Reference Reagent Program。
2.實驗方法和評價A.將TD0232用RPMI1640配制不同濃度的溶液。按藥物試驗所需的濃度制備，實驗終濃度為600nM、200nM、66.7nM、22.2nM、7.4nM、2.5nM、0.8nM。
B.病毒的稀釋用于藥物體外抑制實驗的病毒株，一般選用100TCID50/孔。
用培養(yǎng)液稀釋成100TCID50/50ul/孔C.實驗程序提前兩天從人血中制備PBMC(外周血單核細胞)，并在含PHA和IL-2的培養(yǎng)基中培養(yǎng).
實驗當天1.提取PBMC并以105個細胞每孔置于96孔板培養(yǎng)，每孔100ul.
2.梯度稀釋藥物3.每孔加入50ul的(已稀釋)藥物
4.每孔加入病毒50ul，終濃度100TCID50每孔.
第一天1.用普通培養(yǎng)基清洗被感染細胞三次；2.最后一次清洗后，加入新配的含藥物生長培養(yǎng)基200ul；第七天收集病毒上清，進行p24檢測結(jié)果可根據(jù)p24檢測結(jié)果，利用計算公式計算出該藥物抑制病毒率。
公式藥物抑制率＝((對照孔-檢測孔)/對照孔)×100％實驗結(jié)果見表4?；衔颰D0232能有效抑制4種亞型的R5嗜性毒株感染人PBMC的作用，說明TD0232具有廣泛的抗多種亞型(A、B、C和O)的R5嗜性HIV-1病毒株的活性。
表4.TD0232抑制A、C和O亞型的R5嗜性HIV-1毒株在人PBMC中復(fù)制的IC50(IC90)

實施例17TD0232的抗R5嗜性的多重耐藥病毒株的能力1.實驗材料細胞人PBMC細胞，購自武漢市中心血站，分別來自3個健康人HIV-1毒株R5嗜性多重耐藥株HIV-1J18，購自美國洛克菲勒大學(xué)Aaron Diamond艾滋病研究中心2.實驗方法和評價A.將TD023用RPMI1640配制不同濃度的溶液。按藥物試驗所需的濃度制備，實驗終濃度為600nM、200nM、66.7nM、22.2nM、7.4nM、2.5nM、0.8nM。
B.病毒的稀釋用于藥物體外抑制實驗的病毒株，一般選用100TCID50/孔。
用培養(yǎng)液稀釋成100TCID50/50ul/孔。
C.實驗程序提前兩天從人血中制備PBMC(外周血單核細胞)，并在含PHA和IL-2的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
實驗當天1.提取PBMC并以105個細胞每孔置于96孔板培養(yǎng)，每孔100ul。
2.梯度稀釋藥物3.每孔加入50ul的(已稀釋)藥物4.每孔加入病毒50ul，終濃度100TCID50每孔。
第一天1.用普通培養(yǎng)基清洗被感染細胞三次；2.最后一次清洗后，加入新配的含藥物生長培養(yǎng)基200ul；第七天收集病毒上清，進行p24檢測結(jié)果可根據(jù)p24檢測結(jié)果，利用計算公式計算出該藥物抑制病毒率。
公式藥物抑制率＝((對照孔-檢測孔)/對照孔)×100％J18是一種已知的R5嗜性B亞型多重耐藥的HIV-1病毒株，對多種蛋白酶抑制劑和數(shù)種逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑耐藥。結(jié)果顯示，化合物TD0232在體外實驗中顯著抑制了HIV-1J18對人PBMC細胞的感染，具有高效的抗多重耐藥病毒株的活性，見表5。
表5.TD0232抑制HIV-1J18耐藥株在PBMC中復(fù)制的IC50(IC90)值

實施例18TD0232在PBMC細胞上的細胞毒性1.實驗材料細胞人PBMC細胞，購自武漢市中心血站，分別來自3個健康人2.實驗方法和評價A.將TD0232用RPMI1640配制不同濃度的溶液。按藥物試驗所需的濃度制備，實驗終濃度為100uM、20uM、4uM。
B.實驗程序第0天在細胞上加入稀釋藥物第3天用來自Beckman Courter的Vi-CELLTMCell Viability Analyzer檢測細胞存活率。相同濃度藥物下的細胞的存活率的監(jiān)測重復(fù)進行了3次，每次試驗重復(fù)檢測兩個培養(yǎng)孔的細胞，所以獲得的是一個平均值。
實驗結(jié)果見表6，可見化合物TD0232對人PBMC的細胞毒性較低。
表6.TD0232對人PBMC的細胞毒性作用

實施例19TD0232的作用機理研究——TD0232與[125I]-RANTES競爭性地結(jié)合CCR5
實驗方法如下A.用檸檬酸鈉消化液(15mM Na3Citrate，134mM KCl)消化細胞，加入1ml0.2％BSA-PBS溶液，用1ml的槍反復(fù)吹打30次，形成單細胞懸液。1,200rpm，離心4min棄上清。
B.加4ml 0.2％BSA-PBS溶液，吹散，1,200rpm，離心4min棄上清。
C.加入500μl裂解緩沖液(5mM Tris-Cl，5mM EDTA，5mM EGTA，pH7.5)，充分吹勻，12,000rpm，4℃離心15min，棄上清。
D.加入1ml結(jié)合緩沖液(50mM HEPES，125mM NaCl，1mM CaCl2，5mM MgCl2，0.2％BSA，pH7.4)懸浮細胞膜，充分混勻，待用。
E.向每只5ml離心管中加入79μl細胞膜懸液，每組平行做2只離心管。加入1μl的藥物溶液或DMSO，4℃操作，充分混勻。
F.向上述體系中加入0.5nM[125I]-RANTES 10μl，充分混勻，25℃放置45分鐘。加入10μl 30mg/ml懸浮的Wheatgerm Agglutinin SPA Beads，充分混勻，每管實驗體系總體積為100μl，25℃反應(yīng)15分鐘。
G.取出管子，2000轉(zhuǎn)/分室溫離心10分鐘，用液閃儀測定cpm值。
H.[125I]-RANTS結(jié)合的量按以下公式計算％未處理＝100％×(cpmcompound/cpmnocompound)，用Sigmaplot8.0軟件處理數(shù)據(jù)，計算IC50值。
結(jié)果見表7，可見TD0232有效抑制[125I]-RANTES與CCR5的結(jié)合，并呈現(xiàn)濃度依賴性，TD0232的IC50為1.4nM，說明TD0232以較高的親和力與CCR5結(jié)合。
表7.TD0232抑制[125I]-RANTES與CCR5的結(jié)合情況

實施例20TD0232的作用機理研究——TD0232抑制RANTES、MIP-1α和MIP-1β引起的CCR5介導(dǎo)的G蛋白的激活實驗方法如下A.從培養(yǎng)箱中取出細胞，傾去培液，用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗兩次，加入0.04％EDTA-PBS室溫作用5分鐘，加入1ml PBS放入1.5ml離心管，3,000rpm離心2分鐘，棄上清。
B.用600μl裂解液緩沖液(5mM Tris-Cl，5mM EDTA，5mM EGTA，PH7.5)，并用胰島素注射器吸打6次，12,000rpm，4℃離心15min，棄上清。
C.根據(jù)沉淀量，用適當體積的反應(yīng)液(50mM Tris-Cl，5mM MgCl2，1mM EGTA，100mM NaCl，PH7.5)重懸，用胰島素注射器反復(fù)吸打6次至形成均勻的細胞膜懸液。
D.分別往4只1.5ml離心管中加入反應(yīng)液5μl，再分別加2、4、6和8μl的標準蛋白液(1.0μgBSA/μl)，再取一只新的1.5ml離心管，加入5μl待測膜懸液，分別往5只eppendorf管中加入800μl考馬斯亮藍溶液，搖勻。根據(jù)顏色對比，估計膜懸液的蛋白濃度，調(diào)至0.2μg/μl。
E.每只5ml離心管中反應(yīng)體系為100μl，體系中含0.5nM[35S]-GTPγS(1,200Ci/mmol)(購自Amersham)、40μM的GDP、0.01％BSA、蛋白濃度為0.1μg/μl的細胞膜懸液，10nM的激動劑(RANTES(購自Peprotech EC Ltd)，MIP-1α或MIP-1β(購自Peprotech ECLtd))，各反應(yīng)濃度下的TD0232(溶解于DMSO)?；靹?，30℃反應(yīng)1小時。
F.將玻璃纖維膜(GF/C膜)放入抽濾器上，加入4ml PBS于反應(yīng)體系，傾倒在GF/C膜上，再重復(fù)洗滌一次。
G.打開真空抽濾泵，升壓抽濾，待水分被完全抽走時，旋松抽濾器上的旋鈕，打開抽濾器，關(guān)閉抽濾泵。
H.將抽濾完畢的GF/C膜放入烘箱中烘干，放入1.5ml離心管中，加入1ml液閃液，放入液閃儀中測量。
I.數(shù)據(jù)處理將不加激動劑的體系作為本底結(jié)合的樣品(basal)，待測樣品記為sample，將既加入激動劑又加入待測化合物的樣品記為compound，將加入激動劑而沒有待測化合物的樣品記為agonist，則[35S]-GTPγS結(jié)合的量占最大刺激的百分比(％ofuntreated)按下列公式計算100％×(cpmcompound-cpmbasal)/(cpmagonist-cpmbasal)，用Sigmaplot8.0軟件處理數(shù)據(jù)，計算IC50值。
結(jié)果見表8，可見TD0232可高效拮抗RANTES、MIP-1α或MIP-1β引起的[35S]-GTPγS與CHO-CCR5細胞膜的結(jié)合，其IC50分別為2.9nM、0.6nM和0.7nM。
表8.TD0232抑制RANTES、MIP-1α或MIP-1β引起的[35S]-GTPγS與CHO-CCR5細胞膜的結(jié)合情況


注釋ND為未測的數(shù)據(jù)。
實施例21TD0232的作用機理研究——TD0232不能抑制在相應(yīng)激動劑作用下CCR1、CCR2b、CCR3、CCR4、CXCR1、CXCR2、CXCR3或CXCR4介導(dǎo)的G蛋白激活實驗方法同實施例22。
結(jié)果見表9，1pM至10μM的TD0232都不能降低在相應(yīng)激動劑(RANTES(購自Peprotech EC Ltd)、MCP-1(購自Peprotech EC Ltd)、Eotaxin(購自Peprotech EC Ltd)、MDC(購自Peprotech EC Ltd)和SDF-1(購自Peprotech EC Ltd))作用下[35S]-GTPγS與CHO細胞膜的結(jié)合水平，說明化合物TD0232無法拮抗受體CCR1、CCR2b、CCR3、CCR4、CXCR1、CXCR2、CXCR3和CXCR4偶聯(lián)激活G蛋白的功能。但是該化合物卻能拮抗CCR5的功能，說明該化合物為CCR5的特異性拮抗劑。
表9.TD0232對受體的選擇性研究



實施例22TD0232的作用機理研究—TD0232抑制RANTES引起的CHO/CCR5細胞內(nèi)鈣釋放實驗方法如下A.CHO/CCR5或CHO/CXCR4細胞以0.6×106個/ml的濃度種到96孔板里，100μl/孔，混勻后放入5％CO2培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。
B.取出FLEXstationTM Calcium Plus Assay Kit里的Assay Buffer(component B，ready to use)及染料(component A)，平衡到室溫。
C.稱取14.27mg的Probenecid(Sigma)，加入component A中，再加入10mlAssayBuffer，使component A及Probenecid徹底溶解。
D.從培養(yǎng)箱中取出過夜培養(yǎng)的96孔細胞培養(yǎng)板，按100μl/孔加入上述溶液，放入培養(yǎng)箱中孵育1小時。
E.取出孵育的96孔板，放入FlexStation II(Molecular Devices)，設(shè)定37℃，加入待測化合物，每1.6秒讀一次，讀100秒。先加25μl小分子化合物，再加25μl的25nMRANTES，體系中DMSO的終濃度為0.1％。
以加入待測試劑前后相對熒光單位(Relative Fluorescence Units)的最大差值(RFUchange)來代表細胞內(nèi)鈣離子濃度的變化。用Sigmaplot8.0軟件處理數(shù)據(jù)，計算IC50值。
結(jié)果見表10，TD0232能抑制5nM RANTES激活CHO/CCR5細胞內(nèi)鈣離子的釋放，其IC50為78.9±9.9nM。0.01μM TD0232對RANTES引起的鈣離子的釋放沒有影響，1μM的TD0232能夠完全抑制5nMRANTES引起的CHO/CCR5細胞內(nèi)鈣離子的釋放。結(jié)果表明化合物TD0232可在第二信使水平上高效拮抗CCR5受體。
表10.TD0232抑制CHO/CCR5細胞內(nèi)鈣離子的釋放情況

實施例23TD0232的作用機理研究—TD0232抑制RANTES引起的CHO/CCR5細胞趨化運動實驗方法如下A.用3.3μg/ml的Fibronectin浸泡聚碳酸酯趨化膜(NeuroProbe)，4℃過夜，取出晾干。
B.將CHO/CXCR4或CHO/CCR5細胞用0.02％EDTA-胰酶溶液消化下來后，加入趨化緩沖液(含0.1％BSA的無血清MEM-α)，500rmp離心2分鐘，棄上清，再重復(fù)洗兩次，用趨化緩沖液重懸細胞后計數(shù)，將細胞濃度調(diào)至1×106個/ml，將一定濃度的待測化合物和細胞孵育15分鐘。
C.取26μl激動劑或趨化緩沖液加入48孔趨化板(NeuroProbe)的下層板的小室，上層板加入50μl細胞懸液，放入培養(yǎng)箱，孵育4小時。
D.用鑷子取下膜，將膜放在4％多聚甲醛中固定2小時以上，將固定好的膜放在0.5％結(jié)晶紫中染色2-6小時(室溫)或過夜(4℃)。染好的膜用清水洗5遍，然后在玻璃上晾干。
E.在掃描儀上掃出圖像，用ScionImage系統(tǒng)統(tǒng)計與細胞接觸的圓形區(qū)域的灰度值計算。
F.數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法為待測孔穿過趨化膜的細胞的灰度值定義為該圓形區(qū)域的灰度值減去同樣大小面積的空白處的灰度值(G)。在測定化合物對激動劑誘導(dǎo)的細胞趨化作用的影響時，化合物對趨化指數(shù)的影響以趨化指數(shù)的百分比表示，按以下列公式計算100％×(Gcompound-Gcontrol)/(Gagonist-Gcontrol)。用Sigmaplot8.0軟件處理數(shù)據(jù)，計算IC50值。
結(jié)果見表11，TD0232可拮抗RANTES引起的CHO/CCR5細胞趨化作用，且呈劑量依賴性。在100nM濃度下TD0232可完全抑制細胞的趨化，IC50為3.0nM。實驗結(jié)果證明化合物TD0232可拮抗CCR5受體在細胞水平上的功能。
表11.TD0232抑制CHO/CCR5細胞趨化運動的情況

實施例24TD0232的作用機理研究——TD0232抑制CCR5的內(nèi)吞但不抑制CXCR4的內(nèi)吞實驗方法如下A.0.02％EDTA-胰酶溶液消化CHO/CCR5或CHO/CXCR4細胞，加入無血清MEM-α收集細胞，500rmp離心2分鐘，棄上清，再重復(fù)洗一次，用無血清MEM-α重懸細胞，將細胞密度調(diào)至1×106個/ml，80μl/管分裝于5ml離心管中。
B.在細胞懸液中加入10μl待測化合物，37℃孵育15分鐘，DMSO的終濃度為0.1％。在CHO/CCR5或CHO/CXCR4細胞中分別加入2×10-6M的激動劑(SDF-1或RANTES)或無血清MEM-α10μl，37℃孵育1個小時。
C.放于冰上中止反應(yīng)，加入冰冷的0.1％BSA-PBS，4℃，1200rpm，離心4min，棄上清。重復(fù)洗滌一次。
D.加入10μg/ml CCR5或CXCR4的抗體10μl，混勻，4℃孵育40min。
E.加入冰冷的0.1％BSA-PBS，4℃，1200rpm，離心4min，棄上清。重復(fù)洗滌一次。
F.加入1100稀釋的FITC標記的羊抗小鼠的二抗100μl，混勻，4℃孵育40min。
G.加入0.1％BSA-PBS，4℃，1200rpm，離心4min，棄上清。重復(fù)洗滌一次。
H.加入300μlPBS重懸細胞，放于冰上，流式細胞儀檢測。
I.將與待測化合物或激動劑孵育的細胞的平均熒光強度為Meancompound，不加一抗的細胞的平均熒光強度為Meancontrol，加一抗但不與化合物或激動劑孵育的細胞的平均熒光強度為Meannocompound，細胞表面受體的表達量按下列公式計算100％×(Meancompound-Meancontrol)/(Meannocompound-Meancontrol)。用Sigmaplot8.0軟件處理數(shù)據(jù)。
TD0232拮抗CCR5或CXCR4內(nèi)吞的情況見表12。TD0232不能單獨誘導(dǎo)CCR5或CXCR4的內(nèi)吞，也不能抑制SDF-1引起CXCR4的內(nèi)吞，但是可以抑制RANTES引起的CCR5的內(nèi)吞，并且呈現(xiàn)劑量依賴性。0.01μM的TD0232對RANTES誘導(dǎo)的CCR5的內(nèi)吞沒有影響，0.1μM的TD0232部分抑制CCR5的內(nèi)吞，1μM的TD0232則可以完全抑制RANTES引起的CCR5的內(nèi)吞。該實驗結(jié)果表明化合物TD0232具有CCR5拮抗劑的特性，而非CXCR4的拮抗劑。
表12.TD0232拮抗CCR5或CXCR4內(nèi)吞的情況

在本發(fā)明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的上述講授內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對本發(fā)明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落于本申請所附權(quán)利要求書所限定的范圍。
權(quán)利要求
1.一種通式(I)所示的化合物，或其藥學(xué)上可接受的鹽， 式中，R1為未取代的或被1-3個取代基取代的下列基團芐基、苯甲?；?、環(huán)己基甲?；h(huán)戊基甲?；?、苯磺?；?、或萘甲酰基，所述的取代基選自鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；R3為氫、C1-C4烷基，苯基或 所述基團中苯環(huán)可被1-3個選自下組的取代基取代鹵素和C1-C4烷基；R6為對硝基芐氧羰基、芐氧羰基、對鹵素芐氧羰基、對甲氧基芐氧羰基、對甲基芐氧羰基、對三氟甲基芐氧羰基、N-苯基甲酰胺基、苯氧乙酰基、3，4-二氧亞甲基芐氧羰基、對氨基芐氧羰基、苯磺?；?、對甲基苯磺?；?br> 2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，選自下組烯丙基-{1-[1-芐基-4-羥基-4-(4-氟)苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位}甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-芐基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-苯甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-[1-(2-碘)苯甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基]哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-萘甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)己基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-甲氧基芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-溴芐酯；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲酰基-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]-3-苯基脲；烯丙基-[1-(1-環(huán)戊基甲?；?4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]乙酰胺苯醚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物具有以下結(jié)構(gòu)式(II)所示結(jié)構(gòu) 式中，R1為未取代的或被1-3個取代基取代的下列基團芐基、苯甲?；h(huán)己基甲?；h(huán)戊基甲?；⒈交酋；⒒蜉良柞；龅娜〈x自鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基；R6為對硝基芐氧羰基、芐氧羰基、對鹵素芐氧羰基、對甲氧基芐氧羰基、對甲基芐氧羰基、對三氟甲基芐氧羰基、N-苯基甲酰胺基、苯氧乙?；?、3，4-二氧亞甲基芐氧羰基、對氨基芐氧羰基、苯磺?；?、對甲基苯磺酰基。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其特征在于，選自下組烯丙基-[1-((3R，4S)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-硝基芐酯；烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-芐酯；烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲酰基)-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-甲氧基芐酯；烯丙基-[1-((3S，4R)-1-(環(huán)戊基甲?；?-4-羥基-4-苯吡咯-3-亞甲基)哌啶-4-位]甲酰胺-4-溴芐酯。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其特征在于，所述化合物具有以下結(jié)構(gòu)式(III)所示結(jié)構(gòu)
6.一種藥物組合物，含有權(quán)利要求1-5中任一所述的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為活性成分，以及藥學(xué)上可接受的載體。
7.如權(quán)利要求1-5任一所述的化合物的用途，其特征在于，可用于制備抗HIV病毒的藥物。
8.如權(quán)利要求1-5任一所述的化合物的用途，其特征在于，可用于制備藥物，所述藥物選自下組(a)抑制HIV病毒感染人的外周血單核細胞的藥物；(b)抑制RANTES與CCR5的結(jié)合的藥物；(c)抑制RANTES、MIP-1α或MIP-1β引起的GTPγS與CCR5細胞膜的結(jié)合的藥物；(d)抑制RANTES引起的CCR5細胞內(nèi)鈣釋放的藥物；(e)抑制RANTES引起的CCR5細胞趨化運動的藥物。
9.如權(quán)利要求8所述的用途，其特征在于，所述的HIV病毒是HIV-1病毒。
10.如權(quán)利要求9所述的用途，其特征在于，所述的HIV-1病毒是A、B、C或O亞型。
全文摘要
本發(fā)明提供了一類具有抗HIV－1活性的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明還公開了含有所述化合物的藥物組合物，以及所述化合物在抑制HIV病毒方面的用途。本發(fā)明的化合物可有效地抑制HIV病毒感染人體細胞，并且毒副作用小。
文檔編號A61K31/4439GK1939916SQ20061015168
公開日2007年4月4日 申請日期2006年9月4日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月5日
發(fā)明者陳力, 陳仁海, 李本, 翟培彬, 吳瑜, 黃立東, 張瑾, 馬大為, 裴鋼 申請人:上海靶點藥物有限公司