專利名稱：一種含有多西他賽的脂質(zhì)微球、凍干脂質(zhì)微球及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬醫(yī)藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體地說，本發(fā)明涉及一種含有多西他賽的脂質(zhì)微球、凍干脂質(zhì)微球及制備方法。
背景技術(shù)：
多西他賽(Docetaxel/Taxotere，多烯紫杉醇)由法國羅納普朗克·樂安公司(RhonePoulencRorer，即現(xiàn)Sanofi-Aventis公司)研制開發(fā)，目前已先后在包括中國和美、日等國在內(nèi)的世界近百個(gè)國家相繼上市。
多西他賽是紫杉烷類化合物中的一種，它能通過實(shí)質(zhì)上“凍結(jié)”細(xì)胞內(nèi)在骨架而抑制腫瘤細(xì)胞分化。細(xì)胞骨架由微管組成，而微管在細(xì)胞周期中會(huì)適時(shí)發(fā)生裝配和分拆現(xiàn)象。多西他賽可以促進(jìn)微管裝配并阻止微管分拆，由此抑制腫瘤細(xì)胞分化，最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡(Fulton B.Spencer CM.DocetaxelA review of its pharmacodynamic and pharmacokineticproperties and therapeutic efficacy in the management of metastatic breast cancer.Drugs，199651(6)1075)。
多西他賽目前已經(jīng)在全球各主要國家獲得了用于治療現(xiàn)今世界最為常見的三種腫瘤即乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌和前列腺癌的多種適應(yīng)癥，并已或正在成為這些癌種治療的最常用或標(biāo)準(zhǔn)療法之一。多西他賽及其并用方案還在進(jìn)行廣泛的用作早期乳腺癌新輔助療法及治療胃癌、頭頸部腫瘤、食管癌，卵巢癌等。2006年3月美國FDA的批準(zhǔn)多西他賽用于治療晚期胃癌。臨床藥理學(xué)研究證實(shí)，多西他賽的抗瘤活性強(qiáng)于紫杉醇(體外研究顯示，其抗腫瘤作用是紫杉醇的1.9～9.3倍)，并和紫杉醇沒有交叉耐藥性。近幾年的臨床隨機(jī)研究表明，作為治療卵巢上皮癌的一線化療藥物，多西他賽加卡鉑的治療療效與紫杉醇加卡鉑相同，但是其神經(jīng)毒性明顯低于紫杉醇加卡鉑。(Burger R A，Disaia P J，Roberts J A，et al.Phase II trial ofvinorelbine in recurrent and progressive epithelial ovarian cancer[J].Gynecol Oncol，1999，72(2)148-153.Ray coquard I.Docetaxel and ovarian cancerEJ].Bull Cancer，2004，91(2)159-165.)多西他賽分子式為C43H53NO14結(jié)構(gòu)式如下
多西他賽屬于紫杉烷類化合物，其單獨(dú)用藥口服生物利用度僅為8％，將其制成注射制劑是提高其生物利用度手段之一。但多西他賽在水中的溶解度極低約1μg/ml，嚴(yán)重地限制了其在臨床上的使用。
目前臨床應(yīng)用的多西他賽注射液制劑有凍干粉針和小針劑。臨床用的注射用多西他賽均為注射用濃縮溶液，為2只西林瓶包裝，其中一瓶為多西他賽的吐溫溶液，另一瓶為乙醇水溶液，臨床應(yīng)用非常不方便，必須在稀釋后靜脈滴注，臨床應(yīng)用時(shí)先將乙醇水溶液注入多西他賽的吐溫溶液中，充分搖晃，5分鐘后觀察澄明后才能應(yīng)用于患者，且可能因藥物溶解或稀釋過程產(chǎn)生二次污染；由于多西他賽不溶于水，稀釋后的不穩(wěn)定性，制劑稀釋后有可能析出結(jié)晶，并且在輸液時(shí)發(fā)生外滲，會(huì)引起局部紅腫、硬化。
此外，多西他賽制劑在臨床應(yīng)用中還存在較大的不良反應(yīng)及毒副作用。多西他賽主要的不良反應(yīng)表現(xiàn)為血管性水腫、過敏反應(yīng)、皮膚毒性反應(yīng)、血管外滲導(dǎo)致外滲區(qū)域皮膚壞死。血管和局部組織壞死是多西他賽臨床用藥中主要的不良反應(yīng)之一。
在中國專利《一種含有多西他賽的脂肪乳劑及其制備方法》(申請?zhí)?00510084055.6，申請日2005年07月18日，
公開日2005年12月21日)中公開了多西他賽脂肪乳，其含多西他賽的質(zhì)量體積濃度范圍是0.1～1.0mg/ml，規(guī)格為1～500mg。多西他賽臨床以用量為100mg/m2，以人體表面積1.5m2計(jì)算，則其制劑體積為150～1500ml。因?yàn)槠錆舛容^低，造成制劑體積較大，不方便于患者用藥，同時(shí)也不能滿足運(yùn)輸和貯存的需要。
脂質(zhì)微球劑(Lipid Microsphere，LM)，是新型藥物靶向治療載體，常采用的方法是將藥物包裹于脂質(zhì)微球的脂質(zhì)核心部分，由于該結(jié)構(gòu)亦類似于微球，是一種以油脂性成分為軟基質(zhì)而被界面膜如磷脂膜包封的微粒體分散系。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是克服現(xiàn)有技術(shù)不足，解決多西他賽不穩(wěn)定、溶解度極低、用藥中不良反應(yīng)大而使病人順應(yīng)性差的技術(shù)問題，同時(shí)也解決現(xiàn)有技術(shù)中多西他賽制劑的濃度低，在臨床中的用藥不方便以及貯運(yùn)不便的問題。
本發(fā)明提供了一種的用于靜脈注射使用的多西他賽高載藥量脂質(zhì)微球制劑。其質(zhì)量濃度范圍為1～40mg/ml。
本發(fā)明所提供的多西他賽脂質(zhì)微球，包括活性組分多西他賽、油性成分、乳化劑及注射用水。
其中油性成分的質(zhì)量體積濃度是50～500mg/ml；乳化劑的質(zhì)量體積濃度是5～300mg/ml。
其中油性成分選自注射用大豆油、紅花油、中鏈甘油三酸脂、長鏈脂肪酸酯，分級(jí)油或改性油、橄欖油、棕櫚酸酯、椰子油、芝麻油、魚油、維生素E中的一種或多種；優(yōu)選大豆油、中鏈甘油三酸脂、維生素E等油性成分中的一種或多種，最優(yōu)選維生素E。
乳化劑是大豆磷脂、卵磷脂、泊洛沙姆、吐溫-80、聚乙二醇、膽固醇、油酸、苯甲醇、乳酸乙酯、油酸乙酯、苯甲酸芐酯、阿拉伯膠、皂甙及瓊脂中的一種或多種。優(yōu)選大豆磷脂、卵磷脂、泊洛沙姆、油酸中的一種或多種，最優(yōu)選卵磷脂。在乳化劑中，有相當(dāng)一部分同時(shí)可以也可以當(dāng)成助乳劑使用，以增強(qiáng)乳化膜的強(qiáng)度，防止乳滴合并，如泊洛沙姆、聚乙二醇、苯甲醇、乳酸乙酯、油酸、油酸乙酯、苯甲酸芐酯、阿拉伯膠、皂甙或瓊脂之中的一種或多種。
本發(fā)明還可以加入適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，比如無水亞硫酸鈉、VC、氮?dú)?、二丁基羥基甲苯、EDTA及二鈉、α-生育酚、α-醋酸生育酚、氫醌等中的一種或幾種。
本發(fā)明還可以加入等滲調(diào)節(jié)劑同時(shí)起助穩(wěn)定作用，等滲調(diào)節(jié)劑選自甘油、甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖等中的一種或幾種。
本發(fā)明所提供的多西他賽脂質(zhì)微球由下述組分組成多西他賽1--40g油性成分50--500g乳化劑 5--300g穩(wěn)定劑 0--200g滲透調(diào)節(jié)劑 0--200g注射用水加至1000ml本發(fā)明還提供了一種多西他賽脂質(zhì)微球制備方法，包括下列步驟(1)制備油相將油性成分、乳化劑、多西他賽加入到油性成分配制罐中，攪拌得油相；(2)制備水相將水溶性成分，加入水相配制罐中，攪拌，溶解，得水相；(3)制備粗乳液將油相溶液加入到水相中，攪拌，加入注射用水至溶液總體積為規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值到4～8.5，繼續(xù)攪拌，得粗乳液；(4)制備脂質(zhì)微球劑將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，均質(zhì)，直至達(dá)到合適的粒度要求；(5)除菌，灌裝；其中所述的制備油相水相、粗乳液時(shí)的溫度為20～80℃。
具體地說，本發(fā)明的制備方法為(1)制備油相精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽加到磷脂及注射油性成分中，調(diào)節(jié)溫度和pH，攪拌至全部溶解，得油相；(2)制備水相將注射用水等水溶性成分，加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在20～60℃，得水相；
(3)制備粗乳液將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為20～80℃，攪拌5～60分鐘，然后加入注射用水至溶液總體積為規(guī)定量，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到4～8.5，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液。
(4)制備脂質(zhì)微球劑將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度20～60℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求。
(5)除菌采用罐裝前無菌濾過或罐裝后濕熱滅菌。無菌濾過，將均質(zhì)后的的采用0.2的微孔濾膜無菌濾過；灌裝后120℃流通蒸汽滅菌15分鐘。灌裝按照所需的規(guī)格，在通氮?dú)獾臈l件下，分裝即得到本發(fā)明多西他賽脂質(zhì)微球。
本發(fā)明還提供了一種多西他賽凍干脂質(zhì)微球，按下述組分組成多西他賽1--40g油性成分50--500g乳化劑 5--300g穩(wěn)定劑 0--200g滲透調(diào)節(jié)劑 0--200g凍干支持劑 0--400g凍干保護(hù)劑 0--200g注射用水 加至 1000ml有不少輔料，如甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖，可以同時(shí)作為滲透調(diào)節(jié)劑、穩(wěn)定劑、凍干支持劑和凍干保護(hù)劑使用，所以當(dāng)選用某些滲透調(diào)節(jié)劑或穩(wěn)定劑時(shí)，可以只加很少量的凍干支持劑和/或凍干保護(hù)劑，甚至不加。
其中注射用油性成分選自注射用大豆油、紅花油、中鏈甘油三酸脂、長鏈脂肪酸酯，分級(jí)油或改性油、橄欖油、棕櫚酸酯、椰子油、芝麻油、魚油、維生素E中的一種或多種；優(yōu)選大豆油、中鏈甘油三酸脂、維生素E等油性成分中的一種或多種，最優(yōu)選維生素E。
乳化劑是大豆磷脂、卵磷脂、泊洛沙姆、吐溫-80、聚乙二醇、膽固醇、油酸、苯甲醇、乳酸乙酯、油酸乙酯、苯甲酸芐酯、阿拉伯膠、皂甙及瓊脂中的一種或多種。優(yōu)選大豆磷脂、卵磷脂、泊洛沙姆、油酸中的一種或多種，最優(yōu)選卵磷脂。在乳化劑中，有相當(dāng)一部分同時(shí)可以也可以當(dāng)成助乳劑使用，以增強(qiáng)乳化膜的強(qiáng)度，防止乳滴合并，如泊洛沙姆、聚乙二醇、苯甲醇、乳酸乙酯、油酸、油酸乙酯、苯甲酸芐酯、阿拉伯膠、皂甙或瓊脂之中的一種或多種。
本發(fā)明還可以加入適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑，比如無水亞硫酸鈉、VC、氮?dú)?、二丁基羥基甲苯、EDTA及二鈉、α-生育酚、α-醋酸生育酚、氫醌等中的一種或幾種。
本發(fā)明還可以加入等滲調(diào)節(jié)劑同時(shí)起助穩(wěn)定作用，等滲調(diào)節(jié)劑選自甘油、甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖等中的一種或幾種。
其中所述的支持劑和凍干保護(hù)劑為甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、甘氨酸、氯化鈉、乳糖、枸櫞酸、水解蛋白中的一種或多種混合物，優(yōu)選甘露醇和甘氨酸。
本發(fā)明還提供了一種多西他賽脂質(zhì)微球制備方法，包括下列步驟(1)制備油相將油性成分、乳化劑、多西他賽加入到油性成分配制罐中，調(diào)節(jié)溫度，攪拌得油相；(2)制備水相將水溶性成分，加入水相配制罐中，攪拌，溶解，得水相；(3)制備粗乳液將油相溶液加入到水相中，攪拌，加入注射用水至溶液總體積為規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值到4～8.5，繼續(xù)攪拌，得粗乳液；(4)制備脂質(zhì)微球劑將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，均質(zhì)，直至達(dá)到合適的粒度要求；(5)除菌，加入支持劑、凍干保護(hù)劑，冷凍干燥，灌裝；其中所述的制備油相、水相、粗乳液時(shí)的溫度為20～80℃。
具體地說，本發(fā)明的制備方法為(1)制備油相精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽加到磷脂及注射油性成分中，調(diào)節(jié)溫度和pH，攪拌至全部溶解，得油相；(2)制備水相將注射用水等水溶性成分，加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在20～60℃，得水相；(3)制備粗乳液將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為20～80℃，攪拌5～60分鐘，然后加入注射用水至溶液總體積為規(guī)定量，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到4～8.5，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液。
(4)制備脂質(zhì)微球劑將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度20～60℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求。
(5)除菌采用罐裝前無菌濾過或罐裝后濕熱滅菌。無菌濾過，將均質(zhì)后的的采用0.2的微孔濾膜無菌濾過；灌裝后120℃流通蒸汽滅菌15分鐘，加入支持劑、凍干保護(hù)劑，冷凍干燥，灌裝按照所需的規(guī)格，在通氮?dú)獾臈l件下，分裝即得到本發(fā)明多西他賽脂質(zhì)微球。
其中所述的支持劑、凍干保護(hù)劑也可在水相配制中加入。
本發(fā)明提供的多西他賽脂質(zhì)微球或凍干多西他賽脂質(zhì)微球具有以下優(yōu)點(diǎn)1.突破性地提高了多西他賽在注射制劑中的溶解度，使得本來只有質(zhì)量體積濃度只有0.1--1.0mg/ml上升到了1--40mg/ml，從而很大程度上方便臨床應(yīng)用，既避免了普通注射液和普通凍干制劑臨床使用時(shí)的繁瑣也避免了多西他賽脂肪乳體積大的不足。以多西他賽用量為100mg/m2人體表面積1.5m2計(jì)算，多西他賽脂肪乳其制劑體積為150～1500ml，而以本發(fā)明的濃度范圍1～40mg/ml中的中間濃度20mg/ml計(jì)算，僅需7.5ml，克服了因?yàn)殡y以輸入如此大量體積的脂肪乳，而沒能達(dá)到治療濃度的弊病。本發(fā)明既方便了患者使用，同時(shí)也方便貯存，運(yùn)輸。
2、大大提高物理和化學(xué)穩(wěn)定性，不易析出和氧化，避免了在儲(chǔ)存中有關(guān)物質(zhì)容易超標(biāo)，臨床上使用時(shí)容易出現(xiàn)的溶液澄明度不夠和晶析等缺點(diǎn)。
因?yàn)槎辔魉惐话谥|(zhì)微球制劑中，物理和化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定得到了提高，不易析出和氧化。產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定解決了在使用和貯存不會(huì)出現(xiàn)析晶現(xiàn)象，其貯藏期在2年以上。尤其經(jīng)冷凍干燥制備成注射用多西他賽脂質(zhì)微球，其穩(wěn)定性將會(huì)得到更大程度的提高。
3、減小了毒性和不良反應(yīng)少，減輕了對血管的刺激性，增加了臨床用藥的安全，并提高了病人用藥的順應(yīng)性等優(yōu)點(diǎn)。在現(xiàn)有技術(shù)中因大量使用吐溫-80而易引起過敏反應(yīng)，本發(fā)明所公開的多西他賽脂質(zhì)微球的組分中可以不含或只含極少量的吐溫-80，從而可以減少了吐溫-80而產(chǎn)生的過敏反應(yīng)，增加了藥物的安全性；多西他賽包裹于脂質(zhì)微球制劑中，充分發(fā)揮劑型的優(yōu)越性，避免了與血管的直接接觸，減輕了對血管的刺激性，避免了多西他賽用藥過程中血管和局部組織壞死等不良反應(yīng)。
4、本制劑具有局部靶向作用。脂質(zhì)微球有體內(nèi)靶向分布特征，既降低血液及其他組織中的藥物濃度，又提高了療效。因?yàn)橐欢降奈⒘Ｔ谧⑸溥M(jìn)入人體后會(huì)隨血液循環(huán)濃集于網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)豐富的肝臟及肺部，因此粒徑在該范圍的載藥脂質(zhì)微球?qū)W(wǎng)狀組織細(xì)胞系統(tǒng)具有相對靶向性的導(dǎo)向分布性能，這對于提高抗癌藥物的療效、減小其對正常細(xì)胞的損害非常有利，進(jìn)一步地可減低全身性的不良反應(yīng)，增加藥物的有效作用。乳化劑種類、荷電性、粒徑等對靶器官和靶向性均有影響。
5、藥物能達(dá)到緩釋，維持藥效。脂質(zhì)微球能延長藥物在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間，較長時(shí)間保持藥效。影響脂質(zhì)微球中藥物釋放的因素包括藥物性質(zhì)(如溶解度、分配系數(shù)、分子大小、電離常數(shù)等)、pH值、油脂性成分乳化劑和添加劑的種類、粘度、界面膜及乳滴粒度等。
6、本發(fā)明所提供的制備方法，是可實(shí)現(xiàn)規(guī)?；笊a(chǎn)，生產(chǎn)工藝穩(wěn)定、參數(shù)可控、重現(xiàn)性好的制備工藝。
經(jīng)過藥品檢驗(yàn)，本發(fā)明提供的多西他賽脂質(zhì)微球及凍干多西他賽脂質(zhì)微球各項(xiàng)指標(biāo)均符合藥品標(biāo)準(zhǔn)。


圖1實(shí)施例1的粒徑分布2實(shí)施例2的粒徑分布3實(shí)施例1的含量測定色譜4實(shí)施例1的有關(guān)物質(zhì)色譜圖具體實(shí)施方式
實(shí)施例1處方組成多西他賽 10gVE 100g磷脂 25g油酸 50gPEG400 25g
蔗糖 50gEDTA二鈉 0.05g注射用水 加至1000ml精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽、PEG400、油酸、VE、磷脂、加入到油性成分配制罐中，攪拌至全部溶解，溶液溫度保持在50℃，得油相；將處方量的蔗糖和EDTA二鈉、一定量的注射用水加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在50℃，得為水相；將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為45℃，攪拌剪切15分鐘，然后加入注射用水至溶液的規(guī)定量總體積，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到6，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液；將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度30℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求；采用0.2的微孔濾膜無菌濾過；在通氮?dú)獾臈l件下，分裝即得到多西他賽脂質(zhì)微球。
根據(jù)本實(shí)施例制得成品理化特征如下[成品性狀]乳白色均勻乳濁液；[粒徑分布]用5％葡萄糖作為稀釋溶劑，按照臨床劑量稀釋后，激光衍射粒子測定儀Nicomt-380，美國Patrticle Sizing Systems(PSS)公司]的樣品管中，測定粒徑大小，平均粒徑為103.6nm，粒徑分布圖見圖1。
分別在注射用溶劑如5％葡萄糖注射液中，經(jīng)振搖分散即可在30秒內(nèi)自行分散形成透明溶液。
取本品加5％葡萄糖注射液。分別測定藥物含量和粒徑大小。分別將于室溫放置2，4，6，12，18，24小時(shí)后，測定平均粒徑，與0時(shí)比較，粒徑增加小于5％。將放置24小時(shí)后的過0.22μm濾膜后，測定藥物含量，與24小時(shí)前比較，應(yīng)為原藥量的99.57％(n＝3)。
照高效液相色譜法(中國藥典2000版二部附錄VD)測定，液相條件如下島津高效液相分析儀色譜柱Diamonsil C18(200mm×4.6mm×5um)；流動(dòng)相甲醇-0.02mol/L醋酸鈉溶液(用醋酸調(diào)節(jié)pH值5.0)(75∶25)檢測波長232nm；柱溫30℃；流速1ml/min；進(jìn)樣量20ul。
照高效液相色譜法(中國藥典2000版二部附錄V D)測定，液相條件如下島津高效液相分析儀色譜柱Diamonsil C18(200mm×4.6mm×5um)；流動(dòng)相甲醇-0.02mol/L醋酸鈉溶液(用醋酸調(diào)pH值5.0)(65∶35)檢測波長232nm；
柱溫30℃；流速1ml/min；進(jìn)樣量20ul。
脂質(zhì)微球制劑中藥物含量測定方法將脂質(zhì)微球處理后按照[含量測定]項(xiàng)中條件進(jìn)樣分析；包封率測定方法取本品加水制成藥物濃度為1mg/mL的混懸液。
總藥量的測定(W1)精密移取0.5mL制劑于25mL容量瓶中，加無水乙醇破乳，得澄清溶液并稀釋至刻度，按藥物含量測定方法測得總藥量(W1)。
包封于脂質(zhì)微球內(nèi)的藥量(W2)移取1mL脂質(zhì)微球于微量離心管，1500r/min離心10min，精密移取0.5mL上清液于25mL容量瓶中，加無水乙醇破乳，得澄清溶液并稀釋至刻度，按藥物含量測定方法測得總藥量(W2)。
包封率計(jì)算W2/W1×100％試驗(yàn)結(jié)果本實(shí)施例所制得的多西他賽脂質(zhì)微球劑的包封率為99.21±0.71％(n＝3)[溶血性試驗(yàn)]一、試驗(yàn)材料藥物本實(shí)施例制得的多西他賽脂質(zhì)微球；艾素(多西他賽濃縮油注射劑，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)。給藥前用5％葡萄糖注射液稀釋成7.0mg/ml進(jìn)行試驗(yàn)。
動(dòng)物日本大耳白家兔二、試驗(yàn)方法2％紅細(xì)胞懸液制備選擇健康家兔，取新鮮血液，用玻璃棒攪動(dòng)血液以除去纖維蛋白使成脫纖血液，然后轉(zhuǎn)入刻度離心管內(nèi)，再用生理鹽水沖洗三次，每次加10ml生理鹽水，混勻后離心，除去上清液，直到上清液不顯紅色為止。然后按所得紅細(xì)胞的容積，用生理鹽水配制成2％的混懸液，供試驗(yàn)用。
取試管12支，按下表配比量依次加入各種溶液，混勻后，于37℃恒溫箱放置30分鐘，然后分別加入不同量的藥液。搖勻后，置37℃恒溫箱中觀察4小時(shí)，1小時(shí)內(nèi)每隔15分鐘觀察一次。2-4小時(shí)，每隔1小時(shí)觀察一次反應(yīng)結(jié)果，按如下標(biāo)準(zhǔn)判斷是否溶血，溶血(+)溶液澄明紅色，管底無紅細(xì)胞殘留。不溶血(-)紅細(xì)胞全部下沉，上清液無色澄明。凝血雖不溶血，但出現(xiàn)紅細(xì)胞凝聚，經(jīng)振搖后不能分散。一般以0.3ml注射劑(第3管)在2小時(shí)內(nèi)不產(chǎn)生溶血作用者認(rèn)為可供注射用。如有紅細(xì)胞凝聚的現(xiàn)象，可按下法進(jìn)一步判定是真凝聚還是假凝聚，若凝聚物在試管振搖后又能均勻分散或?qū)⒛畚锓旁谳d玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴生理鹽水，在顯微鏡下觀察凝聚紅細(xì)胞能被沖散者為假凝聚，供試品可供臨床應(yīng)用；若凝聚物不被搖散或在玻片上不被沖散者為真凝聚，供試品不宜供臨床使用。
表 溶血性試驗(yàn)結(jié)果(7mg/ml)


注各管加入的溶液單位為ml。第6管為陰性不溶血對照管，第7管為陽性完全溶血對照管。
三、試驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論多西他賽脂質(zhì)微球在7mg/ml濃度時(shí)，在試管0.1～0.4不會(huì)產(chǎn)生溶血作用，大于等于0.5ml時(shí)，長時(shí)間放置可產(chǎn)生極輕微溶血，艾素在0.1～0.2ml時(shí)不會(huì)產(chǎn)生溶血作用，大于等于0.3ml時(shí)，長時(shí)間放置可產(chǎn)生極輕微溶血，0.5ml時(shí)放置50min以上可產(chǎn)生溶血。多西他賽脂質(zhì)微球溶血性小于上市濃縮油注射劑。
一、試驗(yàn)材料藥物本實(shí)施例制得的多西他賽脂質(zhì)微球；艾素(多西他賽濃縮油注射劑，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司)。
給藥劑量設(shè)計(jì)給藥體積按10ml/kg，給藥前用5％葡萄糖注射液配制成濃度為1.8mg/ml(相當(dāng)于成人每次用量的3倍)。
動(dòng)物日本大耳白兔，體重2.0-3.0kg，雌、雄各半二、試驗(yàn)方法選擇健康家兔18只，體重2.0-3.0kg，雌、雄各半，隨機(jī)分為3組，每組6只，第一組為對照組，靜脈注射生理鹽水，第二組為靜脈注射多西他賽脂質(zhì)微球，第三組為陽性對照藥物組。給藥體積均按10ml/kg，連續(xù)給藥3天，每天一次，末次注射后24小時(shí)，先肉眼觀察注射部位的血管及周圍組織有無充血、水腫、變性及壞死等的變化，然后每組取3只家兔，以注射部位靠近心端，剪下兔耳(含血管)1.5-3cm，用10％甲醛溶液固定，常規(guī)組織切片，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。觀察注射部位兔耳緣靜脈血管有無血管擴(kuò)張充血，瘀血、血管壁炎癥、壞死，血管壁內(nèi)皮細(xì)胞松散、脫落、血管周圍組織炎癥細(xì)胞浸潤等改變。另3只家兔于末次靜脈注射給藥后7天，同法肉眼觀察注射部位的血管及周圍組織的變化，并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。
三、試驗(yàn)結(jié)果肉眼及病理組織檢查家兔靜脈注射脂質(zhì)微球及生理鹽水后，未發(fā)現(xiàn)與藥物相關(guān)的刺激反應(yīng)，所見變化系注射穿刺機(jī)械性刺激反應(yīng)。上市多西他賽濃縮油注射劑以同樣濃度及劑量給藥可引起兔耳出現(xiàn)輕-中度血管刺激反應(yīng)。
將本實(shí)施例制得的多西他賽脂質(zhì)微球與市售注射劑放在30℃加速試驗(yàn)條件和4℃長期存放條件下考察性狀、含量、有關(guān)物質(zhì)和粒度的穩(wěn)定性(結(jié)果見下表)。
結(jié)果表明本實(shí)施例制得的同上市注射用水針劑相比，更穩(wěn)定。實(shí)施例1制得的穩(wěn)定性考察試驗(yàn)結(jié)果表明多西他賽脂質(zhì)微球外觀、檢測pH值、乳粒以及游離脂肪酸均合格，表明在二年內(nèi)放置穩(wěn)定，說明本實(shí)施例制得的多西他賽脂質(zhì)微球具有較高的穩(wěn)定性。
多西他賽脂質(zhì)微球凍干制劑為固體狀態(tài)存在，穩(wěn)定性優(yōu)于液體狀態(tài)的多西他賽脂質(zhì)微球，多西他賽脂質(zhì)微球已經(jīng)具有良好的穩(wěn)定性，所以可多西他賽脂質(zhì)微球凍干制劑認(rèn)為也具有良好的穩(wěn)定性。
穩(wěn)定性考察結(jié)果

實(shí)施例2處方組成多西他賽 10gVE 100g磷脂 25g油酸 50gPEG400 25g蔗糖 50gEDTA二鈉 0.05g甘露醇 100g甘氨酸 20g注射用水 加至1000ml精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽、磷脂、PEG400、油酸、VE加入到油性成分配制罐中，攪拌至全部溶解，溶液溫度保持在50℃，得油相；將處方量的蔗糖和EDTA二鈉、一定量的注射用水加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在50℃，得為水相；將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為45℃，攪拌剪切15分鐘，然后加入注射用水至溶液的規(guī)定量總體積，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到6，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液；將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度30℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求；采用0.2的微孔濾膜無菌濾過，加入處方量的甘露醇和甘氨酸；在通氮?dú)獾臈l件下，分裝，-40℃下預(yù)凍，冷凍干燥，即得到本發(fā)明多西他賽凍干脂質(zhì)微球。
根據(jù)本實(shí)施例制得的多西他賽凍干脂質(zhì)微球?yàn)榘咨蛭ⅫS色凍干塊狀物或粉末。
實(shí)施例3處方組成多西他賽 2gVE 80g磷脂 20g聚氧乙烯蓖麻油 30g注射用水 加至1000ml制備方法與實(shí)施例1相同，制得多西他賽脂質(zhì)微球。
實(shí)施例4處方組成多西他賽 5gVE 80g磷脂 20g泊洛沙姆18840gPEG400 20g甘露醇 40g注射用水 加至1000ml制備方法與實(shí)施例1相同，制得多西他賽脂質(zhì)微球。
實(shí)施例5處方組成多西他賽 5g大豆油 50g
中鏈甘油三酸脂 50g吐溫-8020g泊洛沙姆18820g注射用水 加至1000ml精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽、大豆油、中鏈甘油三酸脂、吐溫-80加入到油性成分配制罐中，攪拌至全部溶解，溶液溫度保持在45℃，得油相；將處方量的泊洛沙姆188和一定量的注射用水加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在45℃，得為水相；將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為40℃，攪拌剪切20分鐘，然后加入注射用水至溶液的規(guī)定量總體積，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到6.2，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液；將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度30℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求；采用0.45的微孔濾膜無菌濾過；在通氮?dú)獾臈l件下，罐裝，置于旋轉(zhuǎn)式滅菌柜120℃流通蒸汽滅菌15分鐘裝即得到多西他賽脂質(zhì)微球。
實(shí)施例6處方組成多西他賽 10g大豆油50g中鏈甘油三酸脂50g油酸 20g泊洛沙姆188 20g乳糖 100g注射用水 加至1000ml精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽、大豆油、中鏈甘油三酸脂、油酸加入到油性成分配制罐中，攪拌至全部溶解，溶液溫度保持在50℃，得油相；將處方量的泊洛沙姆188和乳糖，以及一定量的注射用水加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在50℃，得為水相；將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為45℃，攪拌剪切20分鐘，然后加入注射用水至溶液的規(guī)定量總體積，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到6，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液；將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度30℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求；采用0.22的微孔濾膜無菌濾過；在通氮?dú)獾臈l件下，灌裝，-40℃下預(yù)凍，冷凍干燥，得中多西他賽凍干脂質(zhì)微球。
實(shí)施例7處方組成
多西他賽 10g大豆油 60g中鏈甘油三酸脂 60g吐溫-8030g泊洛沙姆18820g甘露醇 40g注射用水 加至1000ml其它步驟同實(shí)施例1，即得到多西他賽脂質(zhì)微球。
實(shí)施例8處方組成按下組分量準(zhǔn)備原料、輔料及其他組分多西他賽 15g大豆油 60g中鏈甘油三酸脂 60g油酸 60g泊洛沙姆18850g乳糖 120g注射用水 加至1000ml制備方法與實(shí)施例6相同，制得多西他賽凍干脂質(zhì)微球。
實(shí)施例9處方組成多西他賽 35g棉子油 100g磷脂 25g油酸 50g苯甲酸芐酯 0.15g甘油 20g注射用水 加至1000ml精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽、磷脂、棉子油、苯甲酸芐酯、油酸加入到油性成分配制罐中，攪拌至全部溶解，溶液溫度保持在45℃，得油相；將處方量的甘油和一定量的注射用水加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在45℃，得為水相；將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為40℃，攪拌剪切20分鐘，然后加入注射用水至溶液的規(guī)定量總體積，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到6，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液；將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度30℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求；采用0.2的微孔濾膜無菌濾過；在通氮?dú)獾臈l件下，分裝即得到多西他賽脂質(zhì)微球。
實(shí)施例10處方組成多西他賽 18g魚油 80g磷脂 25g油酸 50g葡萄糖120g注射用水 加至1000ml精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽、磷脂、油酸、魚油加入到油性成分配制罐中，攪拌至全部溶解，溶液溫度保持在40℃，得油相；將處方量的葡萄糖糖和一定量的注射用水加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在40℃，得為水相；將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為40℃，攪拌剪切20分鐘，然后加入注射用水至溶液的規(guī)定量總體積，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到6.2，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液；將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度30℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求；采用0.2的微孔濾膜無菌濾過；在通氮?dú)獾臈l件下，分裝，-40℃下預(yù)凍，冷凍干燥即得到多西他賽凍干脂質(zhì)微球。
實(shí)施例11處方組成多西他賽 12g中鏈脂肪酸酯 100g磷脂 25gPEG400 25g蔗糖 50注射用水 加至1000ml精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽、磷脂、PEG400、中鏈脂肪酸酯、VE加入到油性成分配制罐中，攪拌至全部溶解，溶液溫度保持在45℃，得油相；將處方量的蔗糖和一定量的注射用水加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在45℃，得為水相；將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為40℃，攪拌剪切20分鐘，然后加入注射用水至溶液的規(guī)定量總體積，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到6，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液；將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度30℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求；采用0.2的微孔濾膜無菌濾過；在通氮?dú)獾臈l件下，分裝即得到多西他賽脂質(zhì)微球。
實(shí)施例12處方組成多西他賽 10g橄欖油 100g磷脂 25g聚氧乙烯蓖麻油 50gEDTA二鈉 0.05g注射用水 加至1000ml精密稱取原輔料；在氮?dú)獗Ｗo(hù)的條件下，將多西他賽、磷脂、聚氧乙烯蓖麻油加入到油性成分配制罐中，攪拌至全部溶解，溶液溫度保持在50℃，得油相；將處方量的EDTA二鈉、一定量的注射用水加入水相配制罐中，攪拌，溶解將溶液溫度保持在50℃，得為水相；將水相溶液中加入到高速剪切設(shè)備中，將油相溶液緩慢地加入到正在攪拌的水相中，保持溫度為45℃，攪拌剪切20分鐘，然后加入注射用水至溶液的規(guī)定量總體積，用氫氧化鈉或鹽酸溶液溶液調(diào)節(jié)pH值到6，繼續(xù)攪拌15分鐘，得粗乳液；將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，調(diào)節(jié)合適的壓力，保持溫度30℃，反復(fù)均質(zhì)2～6遍，直至達(dá)到合適的粒度要求；采用0.2的微孔濾膜無菌濾過；在通氮?dú)獾臈l件下，分裝即得到多西他賽脂質(zhì)微球。
權(quán)利要求
1.一種多西他賽脂質(zhì)微球劑，其特征是多西他賽的質(zhì)量濃度范圍為1～40mg/ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的多西他賽脂質(zhì)微球，包括活性組分多西他賽、油性成分、乳化劑及注射用水。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多西他賽脂質(zhì)微球，其特征在于所述的脂質(zhì)微球中油性成分的質(zhì)量體積濃度是50～500mg/ml；乳化劑的質(zhì)量體積濃度是5～300mg/ml。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多西他賽脂質(zhì)微球，其特征在于油性成分選自注射用大豆油、紅花油、中鏈甘油三酸脂、長鏈脂肪酸酯，分級(jí)油或改性油、橄欖油、棕櫚酸酯、椰子油、芝麻油、魚油、維生素E中的一種或多種；乳化劑是大豆磷脂、卵磷脂、泊洛沙姆、吐溫-80、聚乙二醇、膽固醇、油酸、苯甲醇、乳酸乙酯、油酸乙酯、苯甲酸芐酯、阿拉伯膠、皂甙及瓊脂中的一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的多西他賽脂質(zhì)微球，其特征在于組分中含有穩(wěn)定劑、等滲調(diào)節(jié)劑。
6.一種如權(quán)利要求1所述的多西他賽脂質(zhì)微球的制備方法，包括下列步驟(1)制備油相將油性成分、乳化劑、多西他賽加入到油性成分配制罐中，調(diào)節(jié)溫度，攪拌得油相；(2)制備水相將水溶性成分，加入水相配制罐中，攪拌，溶解，得水相；(3)制備粗乳液將油相溶液加入到水相中，攪拌，加入注射用水至溶液總體積為規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值到4～8.5，繼續(xù)攪拌，得粗乳液；(4)制備脂質(zhì)微球劑將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，均質(zhì)，直至達(dá)到合適的粒度要求；(5)除菌，灌裝；其中所述的制備油相、水相、粗乳液時(shí)的溫度為20～80℃。
7.一種多西他賽凍干脂質(zhì)微球，按下述組分組成多西他賽1--40g油性成分50--500g乳化劑 5--300g穩(wěn)定劑 0--200g滲透調(diào)節(jié)劑 0--200g凍干支持劑 0--400g凍干保護(hù)劑 0-200g注射用水 加至 1000ml
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的多西他賽凍干脂質(zhì)微球，其特征在于油性成分選自注射用大豆油、紅花油、中鏈甘油三酸脂、長鏈脂肪酸酯，分級(jí)油或改性油、橄欖油、棕櫚酸酯、椰子油、芝麻油、魚油、維生素E中的一種或多種；乳化劑是大豆磷脂、卵磷脂、泊洛沙姆、吐溫-80、聚乙二醇、膽固醇、油酸、苯甲醇、乳酸乙酯、油酸乙酯、苯甲酸芐酯、阿拉伯膠、皂甙及瓊脂中的一種或多種。
9.一種制備如權(quán)利要求7所述的多西他賽凍干脂質(zhì)微球的方法，包括下列步驟(1)制備油相將油性成分、乳化劑、多西他賽加入到油性成分配制罐中，調(diào)節(jié)溫度，攪拌得油相；(2)制備水相將水溶性成分，加入水相配制罐中，攪拌，溶解，得水相；(3)制備粗乳液將油相溶液加入到水相中，攪拌，加入注射用水至溶液總體積為規(guī)定量，調(diào)節(jié)pH值到4～8.5，繼續(xù)攪拌，得粗乳液；(4)制備脂質(zhì)微球劑將粗乳液加入到高壓均質(zhì)設(shè)備中，均質(zhì)，直至達(dá)到合適的粒度要求；(5)除菌，加入支持劑、凍干保護(hù)劑，冷凍干燥，灌裝；其中所述的制備油相、水相、粗乳液時(shí)的溫度為20～80℃。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的多西他賽凍干脂質(zhì)微球，其特征在于支持劑和凍干保護(hù)劑為甘露醇、木糖醇、山梨醇、葡萄糖、蔗糖、甘氨酸、氯化鈉、乳糖、枸櫞酸、水解蛋白中的一種或多種混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含有高載藥量多西他賽的脂質(zhì)微球劑及凍干脂質(zhì)微球以及其制備方法。本發(fā)明含活性成分多西他賽的質(zhì)量濃度范圍是1－40mg/ml。該脂質(zhì)微球組分包含多西他賽、油性成分、乳化劑及注射用水，制成供靜脈注射用多西他賽脂質(zhì)微球劑。本發(fā)明還公開了一種高載藥量的多西他賽凍干脂質(zhì)微球劑。本發(fā)明所公開的多西他賽的脂質(zhì)微球劑及凍干脂質(zhì)微球具有高載藥量、高包封率、穩(wěn)定性好、毒性小、刺激性小、不良反應(yīng)少、方便生產(chǎn)貯存和運(yùn)輸、同時(shí)具有靶向性等特點(diǎn)，減輕了對血管的刺激性，保證了臨床用藥的安全，并提高了病人用藥的順應(yīng)性。本發(fā)明所公開的制備方法適宜于工業(yè)化大生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A61K47/34GK1965820SQ200610154710
公開日2007年5月23日 申請日期2006年11月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年11月21日
發(fā)明者金耀, 譚梓駿, 王昶 申請人:金耀