專利名稱：金絲桃素注射液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥劑制備領(lǐng)域，尤其是注射液的制備方法。
背景技術(shù)：
金絲桃素(hypericin 4，4，5，5，7，7-六羥基-2，2-二甲基-中位-萘并二蒽酮)分子式為C30H16O8，分子量為504.43，是貫葉連翹Hypericum perforatumL.中最具有生物活性的物質(zhì)，具有抗抑郁、鎮(zhèn)靜、抗菌消炎、光敏活性，尤其是抗病毒作用突出，能抗DNA、RNA病毒。研究表明，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所從貫葉連翹中提取分離并合成的金絲桃素具有很強(qiáng)的抗病毒作用。目前金絲桃素是以貫葉連翹的中藥制劑的形式生產(chǎn)的，這限制了療效的發(fā)揮，使用也不便。本發(fā)明對注射劑進(jìn)行了研究，對金絲桃素注射液的制備工藝進(jìn)行了比較，從中選擇一種最佳制備工藝，并按照中國藥典要求對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了研究，以便將金絲桃素注射液進(jìn)一步推廣到臨床應(yīng)用研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的為提供一種工藝簡單，含量穩(wěn)定的金絲桃素注射液的制備方法。
實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下金絲桃素注射液的制備方法，水劑注射液是在金絲桃素浸膏400-500mg中加入復(fù)合溶劑15-73ml，調(diào)節(jié)PH7-7.5，再加水定容到100ml。復(fù)合溶劑的組成為吐溫-80(或司盤)∶1，2丙二醇∶無水乙醇∶苯甲醇＝5∶45∶8∶1。在復(fù)合溶劑中還可以加入緩釋劑N，N-二甲基乙酰胺2-8ml。微乳注射液是在金絲桃素浸膏400-500mg中加入油性復(fù)合溶劑5-15ml，再加水定容到100ml。油性復(fù)合溶劑的組成為吐溫-80∶1，2-丙二醇∶植物油＝0.5-2.5∶1.5-3.5∶30-50。植物油是蓖麻油或亞麻酸油。
由上述方案制備的金絲桃素注射液進(jìn)行含量測定。
供試品溶液的制備吸取注射液1ml，加10％鹽酸調(diào)PH至4.5，加乙酸乙酯提取六次，收集提取液揮干，加甲醇轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中并定容到刻度。用0.45μm濾器過濾后避光保存?zhèn)溆谩?br> 對照品溶液的配制精密稱取金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)品0.1mg，置10ml的容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度搖勻，用0.45μm濾器過濾即配得濃度為0.01mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
薄層鑒定吸取注射液1ml，加10％鹽酸調(diào)PH至4.5，加乙酸乙酯提取六次，收集提取液濃縮，加甲醇轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中并定容到刻度，作為供試品溶液。取金絲桃素0.04g，加甲醇轉(zhuǎn)入10ml容量瓶中并定容到刻度，作為對照藥材溶液。同時(shí)取金絲桃素對照品，加甲醇制成每ml含0.01mg金絲桃素溶液，作為對照品溶液。吸取上述3種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠板上，待溶劑完全揮發(fā)后，把薄層板放入加有以石油醚-乙酸乙酯-甲醇(1∶4∶3)為展開劑的層析缸(或標(biāo)本缸)內(nèi)，密閉容器，溶劑將上行展開，溶劑展開的距離一般應(yīng)為薄層色譜板的3/4處即可，取出晾干，在365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上顯示相同的橙紅色熒光斑點(diǎn)。
檢查
PH值應(yīng)為7.0-8.0。
樹脂檢查取樣品5ml加鹽酸1d，半小時(shí)后觀察無樹脂狀物析出(按2005版《中國藥典》附錄檢查法檢查)，符合規(guī)定。
溶血試驗(yàn)按2005版《中國藥典》附錄檢查法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
其它應(yīng)符合2005版《中國藥典》附錄I肌肉注射劑項(xiàng)下各項(xiàng)規(guī)定。
含量的測定色譜條件利用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)測定樣品的含量。色譜柱為Chromsphere C18(4.6×150mm，5μm)不銹鋼柱(美國VARIAN公司生產(chǎn))，流動(dòng)相為甲醇-乙腈-1％磷酸鹽緩沖液(v/v/v＝170∶10∶10)，流速為0.8ml/min，檢測波長588nm，在本色譜條件下，金絲桃素色譜峰峰形對稱，無干擾。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制取金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)品溶液4μl、8μl、12μl、16μl、20μl分別進(jìn)樣。在588nm處測定峰面積。以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，以對應(yīng)的金絲桃素的質(zhì)量(X)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果在0.04μg-0.2μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，回歸方程為y＝7E+07x，r＝0.9991，結(jié)果見圖1穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精密吸取對照品溶液20μl，于24h內(nèi)每隔2h進(jìn)樣，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下測定6次。結(jié)果6次測得峰面積基本不變RSD＝1.44％(n＝6)。
精密度實(shí)驗(yàn)取金絲桃素對照品溶液，分別進(jìn)樣6次，測得金絲桃素的含量RSD＝1.06％。精密度在允許范圍內(nèi)。
回收率實(shí)驗(yàn)取0.01mg/ml對照品溶液0.01ml，分別加入三批樣品中，按“標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制”項(xiàng)下測定，結(jié)果見表1表1金絲桃素注射劑加樣回收率

樣品中金絲桃素的含量測定精密吸取樣品液20μl進(jìn)樣，按照標(biāo)準(zhǔn)品的測定條件測定樣品的峰面積，計(jì)算含量。結(jié)果見表2，表2金絲桃素注射劑含量測定

以上采用的高效液相色譜法測定注射液中金絲桃素的含量是穩(wěn)定的，準(zhǔn)確可靠的。從以上數(shù)據(jù)得出本發(fā)明制備的金絲桃素注射液是成功的，這將進(jìn)一步促進(jìn)金絲桃素的開發(fā)和臨床應(yīng)用。
本發(fā)明提供的制備金絲桃素注射液的方法具有工藝簡單，含量穩(wěn)定，操作容易，易于推廣的有益效果。


圖1為本發(fā)明金絲桃素色譜分析圖bi-金絲桃素標(biāo)準(zhǔn)曲線A-金絲桃素浸膏樣品B、C-金絲桃素樣品具體實(shí)施方式
實(shí)施例1水劑注射液，取金絲桃素浸膏400mg，加入復(fù)合溶劑15ml，調(diào)節(jié)PH7-7.5，加水定容到100ml。
實(shí)施例2水劑注射液，取金絲桃素浸膏450mg，加入復(fù)合溶劑45ml，調(diào)節(jié)PH7-7.5，加水定容到100ml。
實(shí)施例3水劑注射液，取金絲桃素浸膏500mg，加入復(fù)合溶劑73ml，調(diào)節(jié)PH7-7.5，加水定容到100ml。
實(shí)施例4水劑注射液，取金絲桃素浸膏480mg，加入復(fù)合溶劑80mg，緩釋劑N，N-二甲基乙酰胺2ml，調(diào)節(jié)PH7-7.5，加水定容到100ml。
實(shí)施例5水劑注射液，取金絲桃素浸膏480mg，加入復(fù)合溶劑80mg，緩釋劑N，N-二甲基乙酰胺8ml，調(diào)節(jié)PH7-7.5，加水定容到100ml。
實(shí)施例6微乳注射液，取金絲桃素浸膏500mg，加入由蓖麻油組成的油性復(fù)合溶劑15ml，加水定容到100ml，油性復(fù)合溶劑的組成為吐溫-80∶1，2丙二醇∶蓖麻油＝0.5∶1.5∶30。
實(shí)施例7微乳注射液，取金絲桃素浸膏400mg，加入由亞麻酸油組成的油性復(fù)合溶劑5ml，加水定容到100ml，油性復(fù)合溶劑的組成為吐溫-80∶1，2丙二醇∶蓖麻油＝2.5∶3.5∶50。
權(quán)利要求
1.金絲桃素注射液的制備方法，其特征為水劑注射液是在金絲桃素浸膏400-500mg中加入復(fù)合溶劑15-73ml，調(diào)節(jié)PH7-7.5，在加入水定容到100ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所屬的金絲桃素的制備方法，其特征為復(fù)合溶劑的組成為吐溫-80(或司盤)∶1，2丙二醇∶無水乙醇∶苯甲醇＝5∶45∶8∶1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的金絲桃素的制備方法，其特征為在復(fù)方溶劑中還可以加入緩釋劑N，N-二甲基乙酰胺2-8ml。
4.金絲桃素注射液的制備方法，其特征為微乳注射液是在金絲桃素浸膏400-500mg中加入油性復(fù)合溶劑5-15ml，在加水定溶到100ml。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的金絲桃素注射液的制備方法，其特征為油性復(fù)合溶劑的組成為吐溫-80∶1，2丙二醇∶植物油＝0.5-2.5∶1.5-3.5∶30-50。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的金絲桃素注射液的制備方法，其特征為植物油是蓖麻油或亞麻酸油。
全文摘要
本發(fā)明為金絲桃素注射液的制備方法，涉及藥劑制備領(lǐng)域，目前金絲桃素是以貫葉連翹炮制的中藥制劑的形式生產(chǎn)的，這限制了藥效的發(fā)揮，使用也不方便，本發(fā)明是在中藥浸膏的基礎(chǔ)上經(jīng)過復(fù)合溶劑溶解，再將其加水定容制成，經(jīng)高效液相色譜法測定注射液中金絲桃素的含量是穩(wěn)定的，準(zhǔn)確可靠，本發(fā)明具有工藝簡單，含量穩(wěn)定，易于推廣的有益效果。
文檔編號(hào)A61K47/44GK1985811SQ20061015635
公開日2007年6月27日 申請日期2006年12月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月31日
發(fā)明者梁劍平, 王曙陽, 謝等龍, 王學(xué)紅, 崔穎, 尚若峰, 華蘭英 申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所