專利名稱：組合物在制備治療病毒性感染的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及治療哺乳動物中病毒性感染的方法和組合物，病毒性的感染包括逆轉(zhuǎn)錄酶病毒，如HIV和丙型肝炎。
背景技術(shù)：
目前被稱為獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)的疾病，最早被發(fā)現(xiàn)確認(rèn)于1979年。據(jù)疾病控制和預(yù)防中心(CDC)報(bào)道的病例數(shù)，從發(fā)現(xiàn)之日起每年呈急劇的增加，在1982年，CDC宣布AIDS為一種新的流行性疾病。同時(shí)估計(jì)有超過4000萬的人被確診為患上了AIDS。
逆轉(zhuǎn)錄病毒被提出是引起AIDS的病因體。最近，這種引起AIDS的病毒出現(xiàn)了一個(gè)比較貼切的名字人類免疫缺陷病毒1型(HIV)。在超過80％被診斷為患有AIDS或者前AIDS綜合征的病人身上存在著HIV抗體，且在確認(rèn)的危險(xiǎn)群體中發(fā)現(xiàn)該抗體的幾率也很高。
AIDS的特征為一種被破壞的免疫系統(tǒng)其源于CD4+T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)系統(tǒng)性的耗竭，并且剩余的CD4+T淋巴細(xì)胞反應(yīng)遲鈍且喪失機(jī)能。CD4+T細(xì)胞水平用作疾病程度的診斷指標(biāo)。已知受HIV感染的CD4+T細(xì)胞直接引起其他的CD4+T淋巴細(xì)胞病變，且此單細(xì)胞致死過程經(jīng)由HIV膜蛋白(gp120/41)與CD4分子相互作用開始。HIV的極為致命的分離物會引起多核體(定義為在一普通細(xì)胞膜內(nèi)含有4個(gè)以上細(xì)胞核)，此過程與CD4+T細(xì)胞的迅速減少以及疾病的快速惡化有關(guān)。
人類HIV-1感染引起整體性的免疫抑制且涉及其他的機(jī)能紊亂，如失明、脊髓病變或癡呆性神經(jīng)病，即AIDS癡呆綜合癥，其中后者是在感染晚期階段病人中發(fā)病的常見且重要的原因。HIV-1感染被記載發(fā)生于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的不同部位，包括大腦皮層、脊椎和視網(wǎng)膜。Price等(1988，科學(xué)Science239586)和Ho等(1989，內(nèi)科學(xué)年報(bào)Annals in Internal Medicine 111400)回顧了AIDS癡呆綜合癥的臨床學(xué)、流行病學(xué)、病理學(xué)方面的研究，提出神經(jīng)學(xué)上的機(jī)能障礙的機(jī)理在于由感染細(xì)胞釋放的病毒源或細(xì)胞源毒素引起的間接的組織損害。這些參考文獻(xiàn)的內(nèi)容在此綜合引入作為參考。
診斷AIDS發(fā)展的危險(xiǎn)性有相當(dāng)?shù)仉y度。幾乎所有感染HIV病毒的個(gè)體被認(rèn)為最終都將患上AIDS。
當(dāng)一個(gè)具有完整的免疫系統(tǒng)的原本健康的人被削弱了T細(xì)胞免疫性時(shí)，該病人通常被診斷為患上了AIDS。削弱的免疫性通常在18個(gè)月到3年的時(shí)間段內(nèi)顯現(xiàn)出來。削弱免疫性的結(jié)果，就是病人對任何偶遇的傳染病、不同種類的癌癥如卡波氏肉瘤、非何杰金氏淋巴瘤和其他與免疫系統(tǒng)衰退機(jī)能有關(guān)的疾病都易受感染。
HIV的復(fù)制通過DNA中間體進(jìn)行。每個(gè)病毒分子含有兩條相同的單鏈RNA分子，周圍環(huán)繞有病毒的核殼蛋白。病毒細(xì)胞核的剩余部分由衣殼蛋白和基質(zhì)蛋白組成。病毒遺傳物質(zhì)進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行復(fù)制和整合所需要的酶也包含在衣殼中。病毒粒子細(xì)胞被膜由病毒膜糖蛋白和源于宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜組成。
盡管HARRT(高活性抗-逆轉(zhuǎn)錄病毒療法)可以逆轉(zhuǎn)AIDS的免疫缺損，人們尚無法得到能夠預(yù)防該疾病的充分有效的治療方法?；旧纤邪殡S有偶遇感染的病人和大約半數(shù)的伴隨有卡波氏肉瘤的病人在診治的兩年內(nèi)死亡。迄今為止試圖恢復(fù)AIDS病人免疫系統(tǒng)機(jī)能的努力基本上都沒有成功。
當(dāng)3′-疊氮基-3′-脫氧胸苷(AZT)被最廣泛的用于治療HIV感染和AIDS時(shí)，其表現(xiàn)出相當(dāng)大的副作用，如可逆的骨髓毒性和病人病毒對AZT的耐藥性的提高。因此非常需要有其他的治療方法。
病毒通常不對抗生素療法產(chǎn)生反應(yīng)。因此，在病毒治療中使用其他的治療方法。最近發(fā)現(xiàn)的一種上述療法，其涉及使用蛋白酶抑制劑以中斷病毒復(fù)制循環(huán)。蛋白酶抑制劑療法潛在的可用于多種疾病的治療，包括諸如由逆轉(zhuǎn)錄病毒(如HIV)、嗜肝DNA病毒(如丙肝病毒)、皰疹病毒(如單純皰疹病毒和巨細(xì)胞病毒)和粘液病毒(如流感病毒)引起的病毒感染，寄生原生動物(如cryptosporidium和瘧疾)引起的疾病，及用于癌癥化療和不同的病理上的失調(diào)癥。然而，在HAART中使用的酶蛋白抑制劑引起了不可忽視的并發(fā)癥，如脂肪營養(yǎng)不良、肝失活、冠狀動脈疾病。
相應(yīng)的，人們需要提供改進(jìn)的組合物和方法用于病毒感染的治療，包括逆轉(zhuǎn)錄病毒感染如HIV和丙型肝炎。

發(fā)明內(nèi)容
總的來說，本發(fā)明涉及對病人施予治療有效量的一種藥物組合物，該組合物的本身，由治療有效比例和量的與喹啉、喹啉-醌，或其中間體或衍生物(如氯喹)相組合的鈣通道阻斷劑(或其代謝物)組成。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步的含有槲皮素或其一種活性成分。該組分通過降低感染細(xì)胞內(nèi)病毒活性而與之結(jié)合及發(fā)生作用，從而有效的對付逆轉(zhuǎn)錄病毒。
相應(yīng)的，本發(fā)明的目的是提供一種安全且有效的治療病毒(如HIV)的方法。


為了能夠完全的理解本發(fā)明，以下與附圖相應(yīng)的詳細(xì)說明中，給出了本發(fā)明的參考內(nèi)容，其中圖1描述的是從100例本發(fā)明組合物對感染了實(shí)驗(yàn)室變種HIV病毒(H9)的末梢血液淋巴細(xì)胞內(nèi)的病毒負(fù)荷(通過P24ICD測量)的影響的試驗(yàn)中所得出的結(jié)果。
圖2描述的是從20例本發(fā)明實(shí)施方案的組合物對感染了耐HAART的臨床病毒分離株的末梢血液淋巴細(xì)胞內(nèi)的病毒負(fù)荷(通過P24ICD測量)的影響的試驗(yàn)中所得出的結(jié)果。
圖3描述在一個(gè)拒絕使用抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療的高血壓病人身上使用維拉帕米和槲皮素對CD4計(jì)數(shù)和病毒負(fù)載的影響。
具體實(shí)施例方式
已經(jīng)確信，向病人施予組合了喹啉、喹啉-醌或中間體或衍生物(如氯喹)的鈣通道阻斷劑，可有效地治療病毒性的感染。在優(yōu)選的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步的包含給予槲皮素或者一種其活性成分。包含前述性活性成分的組合物能有效降低哺乳動物中病毒活性。優(yōu)選的組分重量比例是10-20份的鈣通道阻斷劑比約3-8份喹啉、喹啉/醌或中間體比約1-4份槲皮素。正如此文所使用的，藥物或者其他治療化合物延伸的定義同樣也指藥物在藥學(xué)上有效的形式，如鹽類、氯化物、螯合物，進(jìn)一步的，當(dāng)其用于藥物給藥時(shí)，也可建立起一種或多種活性成分緩慢釋放的方式。
在真核細(xì)胞周期控制和編程性細(xì)胞死亡方面進(jìn)行的研究發(fā)現(xiàn)這兩項(xiàng)過程間有非常密切的關(guān)聯(lián)。此外，許多促進(jìn)細(xì)胞生長的酶及轉(zhuǎn)錄因子也顯示出參與了細(xì)胞的死亡。這些物質(zhì)包括Nkfb，TAR，c-Myc，p53，依賴于細(xì)胞周期蛋白的蛋白激酶，和細(xì)胞周期蛋白，Bcl-2，和Bax.。正如早已提及的，HIV-誘導(dǎo)的細(xì)胞病變同樣顯示出能引起磷酸化狀態(tài)和/或CDK1和細(xì)胞周期蛋白B.的表達(dá)發(fā)生變化。其他激活程序細(xì)胞死亡的促進(jìn)因素同樣也能引起依賴于細(xì)胞周期蛋白的蛋白激酶表達(dá)和活化的異常。
已經(jīng)確信，鈣通道阻斷劑對于感染AIDS的病人具有積極的治療效果。鈣通道阻斷劑對HIV適應(yīng)性細(xì)胞鏈(HUT/H9)和急性感染的外周血淋巴細(xì)胞中發(fā)生的HIV感染的影響的體外研究已開始展開?？偟膩碚f，這些試驗(yàn)表明在藥理學(xué)上可得的濃度下，其降低了50-60％的HIV產(chǎn)生(HIV聚合酶鏈反應(yīng)RNA)和ICDP24抗原。
這些結(jié)果被另一項(xiàng)關(guān)于鈣通道阻斷劑的研究所證實(shí)。該試驗(yàn)證明在細(xì)胞激活時(shí)，通過阻斷由電位控制的Ca通道以抑制鈣(Ca)的流動，將使被免疫系統(tǒng)亢進(jìn)所折磨的病人的癥狀有所減輕。它也表明了電位控制的Ca++通道的阻斷能顯著的減緩CFIDS中日益衰弱的癥狀。另外，在免疫效果或機(jī)制(NK細(xì)胞毒性，IgG水平)沒有任何變化的情況下，T細(xì)胞的活化作用也相應(yīng)的降低。這種降低的活化作用，與白介素合成的降低及促細(xì)胞分裂劑反應(yīng)活性的降低有關(guān)。
喹啉喹啉的衍生物，如喹啉-醌或其中間體，如氯喹，在和鈣通道阻斷劑聯(lián)用時(shí)，顯示出協(xié)同的作用。
氯喹及其類似物，包括羥基氯喹，顯示出能抑制多種病毒性的感染，同樣也能降低免疫的應(yīng)答性。所有的作用都由抑制病毒及與活化作用有關(guān)的酶的細(xì)胞內(nèi)pH的變化來介導(dǎo)。羥基氯喹(HCQ)，一種抗瘧疾藥物，通過抑制病毒的轉(zhuǎn)錄后修飾，可治療患自身免疫疾病的患者，也可在體外抑制T細(xì)胞和單核細(xì)胞中人類免疫系統(tǒng)缺陷病毒1型(HIV-1)的復(fù)制。
氯喹通常被選擇用于治療由敏感菌株引起的急性瘧疾。氯喹能殺死裂殖子，因此能降低寄生物血癥，但是并不影響肝臟中P vivax和P ovale休眠子。這些寄生蟲必須使用伯氨喹啉來殺死，以防止疾病復(fù)發(fā)。
以固體或者液體的形式給藥的氯喹，與公知的藥學(xué)上有效的載體結(jié)合，是一種合成的4-氨基喹啉，典型的是制成用于口服的磷酸鹽和制成用于非腸道服用的鹽酸鹽。這些鹽類，鹽酸鹽、螯合物和文中描述的其他形式的活性成分都包括在術(shù)語“衍生物”中。這樣，本發(fā)明的組合物也包括氯喹和其衍生物。
氯喹在胃腸道中快速且?guī)缀跬耆?，在大約3小時(shí)內(nèi)達(dá)到最高血漿濃度(50-65％)蛋白結(jié)合，且很快的在組織內(nèi)達(dá)到分布。由于濃度集中在組織中，其具有非常大的的表觀分布體積，約為13000L。從這些位點(diǎn)開始，氯喹的釋放和代謝變得非常緩慢。該藥極易通過胎盤，其以3-5天的半衰期在尿液中排泄。酸化尿液可增加腎排泄。
由于氯喹的分布體積很大，在治療急性疾病時(shí)又迫切需要有效的能殺死裂殖子的血藥濃度，因而在此時(shí)給予填充劑量是必須的。為了避免氯喹經(jīng)非腸道給藥時(shí)產(chǎn)生威脅生命的毒性，其必須通過緩慢地靜脈輸注或者肌內(nèi)緩慢增加藥量的方式給藥?？姑舾行詐瘧原蟲的治療上有效的血藥濃度大約為30μg/L，抗P vivax大約為15μg/L。
氯喹在口服給藥之后的吸收快速且完全。通常4天時(shí)間能足夠的治愈疾病。藥物可濃集于紅血球、肝臟、脾臟、腎臟、肺及白細(xì)胞，因此其有非常巨大的分布體積。其在紅血球中能持續(xù)一定時(shí)間。藥物同樣也能穿過中樞神經(jīng)系統(tǒng)及胎盤。氯喹可被肝臟內(nèi)的混合功能氧化酶脫去烷基，但是其某些代謝產(chǎn)物依然保持有抗瘧活性。原藥和其代謝產(chǎn)物主要都隨尿液排泄。當(dāng)尿液被酸化時(shí)其排泄速度將加快。
氯喹是高效的血液裂殖體殺滅劑，且4-氨基喹啉是使用最廣泛的vivax、ovale和瘧疾導(dǎo)致的疾病的化學(xué)預(yù)防和治療劑。氯喹對紅細(xì)胞前環(huán)瘧原蟲沒有作用活性，且對p vivax或P ovale感染也沒有明顯的治愈效果，因?yàn)樗荒艹舻母闻K階段的寄生蟲。
氯喹抗瘧活性精確的機(jī)理尚未定論。它可能是通過以下方式起作用阻斷哺乳動物和原生動物體內(nèi)酶作用的DNA和RNA合成，且與DNA形成復(fù)合物以阻止復(fù)制或轉(zhuǎn)錄成RNA。在寄生蟲內(nèi)，藥物濃集在液泡中且升高這些細(xì)胞器的pH值，阻斷寄生蟲新陳代謝和利用紅血球血紅蛋白的能力。該藥物也可能通過瓦解核酸的三級結(jié)構(gòu)來降低寄生蟲體內(nèi)DNA的合成。也有人提出其能阻斷寄生蟲體內(nèi)的磷脂代謝。對瘧疾寄生蟲選擇性的毒性決定于寄生細(xì)胞內(nèi)的氯喹濃集機(jī)制。氯喹在正常紅血球中的濃度是在血漿中的10-20倍；在寄生的紅血球內(nèi)，其濃度約是正常紅血球的25倍。
當(dāng)用于瘧疾的預(yù)防(包括延長使用)或治療時(shí)，病人通常對氯喹有很好的承受力。胃腸道反應(yīng)、輕度頭痛、瘙癢、食欲不振、不適、視力模糊、和蕁麻疹并不常見。飯后服用此藥能降低某些副作用。罕見的反應(yīng)包括發(fā)生于G6PD-缺陷病人的溶血現(xiàn)象，及聽力損傷、精神混亂、精神病、大笑、血質(zhì)不調(diào)、皮膚反應(yīng)、脫發(fā)、毛發(fā)退色和血壓下降。
氯喹禁用于有如下病史的病人肝損傷、酒精中毒或神經(jīng)病學(xué)或血液病學(xué)上的失調(diào)癥。某些抗酸藥和抗腹瀉藥(高嶺土、鈣、碳酸鹽和三硅酸鎂)能干擾氯喹的吸收，因此不能在服用氯喹的前后4小時(shí)內(nèi)服用這些藥物。
奎寧，一種帶苦味的生物堿，吸收非?？?，能在1-3小時(shí)內(nèi)達(dá)到血漿峰濃度，且廣泛的分布于體內(nèi)組織中。大約80％的血漿中的奎寧是與蛋白結(jié)合的；在紅細(xì)胞中的5水平大約為血漿濃度的20％，在腦脊液中的濃度是在血漿中的7％?？鼘幍臏缁畎胨テ谠谡Ｈ梭w內(nèi)是7-12小時(shí)，但在感染瘧疾的病人身上是8-21小時(shí)，按疾病的嚴(yán)重程度不同而不同。大約80％的藥物在肝臟中代謝，大部分隨尿液排泄。在酸性尿液中加速其排泄。
在每日固定的劑量下，血漿濃度通常在第三天到達(dá)坪濃度。在正?；蛘咻p微感染人體中，標(biāo)準(zhǔn)口服劑量下血漿濃度大約為7μg/mL；在嚴(yán)重瘧疾患者中能達(dá)到很高的血藥濃度。平均血藥濃度超過大約5μg/mL能有效的消除vivax瘧疾的無性寄生蟲，當(dāng)對付惡性瘧原蟲瘧疾時(shí)需要的濃度要稍高些。低于2μg/mL的濃度幾乎沒有作用，然而超過7μg/mL濃度時(shí)通常會伴隨有“金雞納中毒”的副反應(yīng)發(fā)生。由于其大約2-7μg/mL的狹窄的治療范圍，在使用奎寧治療惡性瘧原蟲瘧疾時(shí)副反應(yīng)的發(fā)生非常普遍。
奎寧是快速起效的，高效的，應(yīng)對四種瘧疾寄生蟲的血液裂殖體殺滅劑。該藥可殺滅P vivax和P ovale的配子體，但對惡性瘧原蟲的配子體不十分有效?？鼘帉ψ渔咦踊蚋闻K階段的任何寄生物都無能為力。
該藥物的分子學(xué)機(jī)理尚不清楚?？鼘幈徽J(rèn)為能抑制多種酶系。它也能和雙螺旋DNA形成氫鍵結(jié)合的復(fù)合物從而抑制鏈分離、轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)合成。
甲氟喹用于預(yù)防和治療耐氯喹和耐多種藥物的惡性瘧原蟲瘧疾。它也用于應(yīng)對P vivax的預(yù)防，可能也能對抗P ovale和P瘧疾。
甲氟喹鹽酸鹽是在化學(xué)上與喹啉相關(guān)的，合成的4-喹啉甲醇衍生物。它通常只口服給藥，因?yàn)樵诜悄c道使用時(shí)會產(chǎn)生強(qiáng)烈的局部刺激。它有很好的吸收，且在7-24小時(shí)內(nèi)能達(dá)到血藥峰濃度。250mg其鹽的單口服劑量能產(chǎn)生290-340ng/mL的血漿濃度。然而每日繼續(xù)給以此劑量產(chǎn)生平均不變狀態(tài)的560-1250ng/mL的血漿濃度。為了達(dá)到化學(xué)抑制P惡性瘧原蟲瘧疾的效果，必須達(dá)到200-300 ng/mL的血漿濃度。該藥物與血漿蛋白有很高的結(jié)合，在紅細(xì)胞中高度濃集，且廣泛的分布在組織中，包括中樞神經(jīng)系統(tǒng)。
甲氟喹在肝臟中清除。它的酸性代謝產(chǎn)物排泄緩慢，主要在糞便中。它的滅活半衰期從13天到33天不等，在急性瘧疾病人中有所縮短。在劑量停止后，能在血液中檢測到藥物。
伯氨喹啉磷酸鹽是合成的8-氨基喹啉衍生物?？诜o藥后該藥物通常很好的被吸收，在1-2小時(shí)那達(dá)到血漿峰濃度，然后幾乎完全代謝且在尿中排泄。伯氨喹啉的血漿半衰期是3-8小時(shí)，其血漿峰濃度為50-66 ng/mL；少量存在于組織中，但是只有很少量與之結(jié)合。
它的主要代謝產(chǎn)物是脫氨基衍生物、羧基伯氨喹啉，它們達(dá)到的血漿濃度超過10倍于原型化合物，滅活緩慢(半衰期22-30小時(shí))，且日劑量蓄積；14小時(shí)后達(dá)到的峰血漿濃度為432-1240ng/mL。伯氨喹啉或其某種代謝產(chǎn)物是否是活性化合物尚未定論。
伯氨喹啉的抗瘧作用機(jī)理尚不清楚。從伯氨喹啉衍生的喹啉-醌中間體是可用作氧化劑的帶電子具還原氧化作用的化合物。幾乎所有與使用伯氨氯喹有關(guān)的溶血和高鐵血紅蛋白現(xiàn)象很有可能是由這些中間體產(chǎn)生的。
槲皮素槲皮素[2-(3，4-二羥基苯基)-3，5，7-三羥基-4H-1-苯并吡喃-4-酮]，和其衍生物是天然的黃酮類物質(zhì)，其能用于消除存在于肝內(nèi)的有毒化合物。它具有抗肝毒性、抗病毒、抗炎和抗菌的性質(zhì)。它可通過Shakhova等Zh.Obsheh.Khim.，32，390(1962)所述的方法合成，在此引入作為參考。槲皮素能抑制HIV對CD4的結(jié)合，也能抑制病毒的整合酶和病毒迷轉(zhuǎn)錄酶，且同時(shí)顯示其有抑制HIV活性的能力。
槲皮素是天然存在的黃酮物質(zhì)，通常存在于動物(包括人類)日用的植物材料中。槲皮素，植物中的常見成分，其從TCM提取物中鑒別得到，被認(rèn)為是一種Ah受體拮抗劑。和大多數(shù)的黃酮類相似，槲皮素的化學(xué)結(jié)構(gòu)由兩個(gè)通過雜環(huán)吡喃環(huán)相連的苯環(huán)組成。槲皮素表現(xiàn)為基因毒性化合物，當(dāng)超長時(shí)間段內(nèi)持續(xù)給予高劑量時(shí)，它可能會啟動某些組織內(nèi)的致癌物質(zhì)(Dunnick，J.K.和Hailey，J.R.1992，在此引入作為參考)。已有人提出當(dāng)存在于已發(fā)生轉(zhuǎn)變的細(xì)胞時(shí)，槲皮素對這些發(fā)生轉(zhuǎn)變的癌性的細(xì)胞具有一種抗-增殖作用(Scambiaet al.，1993，在此引入作為參考)。
與本發(fā)明具體實(shí)施方案相應(yīng)的物質(zhì)組合物，可包括以下混合物一種鈣通道阻斷劑、喹啉、槲皮素、這些化合物的衍生物(如藥學(xué)上可接受的鹽類、它們的鹽酸鹽螯合物和代謝產(chǎn)物)和用于口服給藥的可藥用系統(tǒng)載體。本發(fā)明也包括這三種成分的代謝產(chǎn)物的組合。此組合可制成固體或液體形式，如顆?；鞈乙夯蛞运蚓凭珵榛A(chǔ)的溶液。雖優(yōu)選口服的形式，該組合物仍可以口服或者非腸道的方式給藥。組合物中的成分必須給予治療上有效的量來對付病毒，如HIV。重量/濃度比例為大約10-20Ca通道阻斷劑(或代謝產(chǎn)物)大約3-8氯喹，喹啉，喹啉/醌大約1-4槲皮素。
本發(fā)明還包括向患有如HIV病毒感染的哺乳動物施以足夠劑量的與本發(fā)明具體實(shí)施方案相應(yīng)的組合物以減輕和治療這樣的感染。
有人闡明，在細(xì)胞激活時(shí)通過阻斷電位控制的Ca通道以抑制鈣(Ca)的流入，能緩解受亢進(jìn)免疫系統(tǒng)困擾的病人的癥狀。此降低的活化作用涉及白介素合成的減少和促細(xì)胞分裂活性的降低。體外研究鈣通道阻斷劑對HIV適應(yīng)病毒鏈(HUT/H9)和急性感染的周邊血淋巴細(xì)胞的HIV感染產(chǎn)生的影響表明，當(dāng)在其藥理學(xué)上可達(dá)到的濃度下，HIV的產(chǎn)生(HIV聚合酶鏈反應(yīng)RNA)和ICDP24抗原減少了50-60％。其次，需要尋找能提供附加或引起協(xié)同效果的非競爭性的補(bǔ)充藥物。
在與上述相似的試驗(yàn)中，向H4T感染的細(xì)胞和急性感染的PBMC中加入有效量的氯喹，氯喹使病毒活性(復(fù)制)降低了20-40％。在具有藥理學(xué)上可得到的濃度相似的維拉帕米、Ca通道阻斷劑、和氯喹的培養(yǎng)基中，病毒活性降低了75-85％。與鈣通道阻斷劑相一致，其產(chǎn)生的凈效果能降低細(xì)胞的NKFB激活和HIV TAT啟動，且使未包被病毒處于惡劣的細(xì)胞質(zhì)環(huán)境中。在多項(xiàng)試驗(yàn)中顯示，那些未翻譯的，未整合的病毒最易受影響而降解，且病毒處于這種易損害狀態(tài)的時(shí)間越長，其復(fù)制的能力就越弱。
在與以上描述相似的試驗(yàn)中，一種槲皮素的標(biāo)準(zhǔn)提取物(含有從SigmaAlcrich得到的1-10μg/ml槲皮素)顯示出能使HIV活性降低5-20％。當(dāng)加入優(yōu)選的濃度時(shí)(30μg/ml維拉帕米和10μg/ml氯喹)組合物能使HIV活性降低85-95％。槲皮素被確認(rèn)為能通過抑制CO4的結(jié)合和阻止病毒DNA在基因組中的整合以抑制RNA向DNA的轉(zhuǎn)變的方式降低病毒的活性。此試驗(yàn)以體內(nèi)容易達(dá)到的體外濃度以無細(xì)胞毒性的方式發(fā)生，結(jié)果至少有兩項(xiàng)病毒活性呈對數(shù)下降。與R橫向抑制劑，如病毒活性下降.4-.7 log的AZT，D4T，DDI相比，這種下降明顯得多。
鈣通道阻斷劑和氯喹及其類似物之間意義重大的交互作用的發(fā)現(xiàn)和槲皮素良性副作用特性的發(fā)現(xiàn)向全世界沒有能力接受現(xiàn)行HAART療法的病人提供了另一種安全，效果潛在，廉價(jià)的選擇。
對成人的初步研究顯示以下每一成分的單位劑量的范圍是較為適合的。
維拉帕米5到500mg，優(yōu)選20到240mg氯喹5到1200mg，優(yōu)選20到1200mg槲皮素5到500mg，優(yōu)選10to 500mg。
這些劑量應(yīng)當(dāng)每日服用1-4次，優(yōu)選1次。也可以想見，較低的劑量可適用于兒童。根據(jù)體重和代謝情況調(diào)整服藥劑量對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是顯而易見的。
通常神經(jīng)元的電壓依賴性Ca sup.++通道的任何適宜拮抗劑，在某種條件下也有效果。優(yōu)選為鈣通道拮抗劑，包括但不局限于以下藥物，其中最優(yōu)選的是那些能穿透血腦屏障的藥物，如尼莫地平(Miles Pharmceuticals，West Haven，CT)、史克藥物no.9512(Smith Kline，F(xiàn)rench Beecham，Philadelphia，PA)、和雙丙外林(Smith Kline，F(xiàn)rench-Beecham)。次優(yōu)選的拮抗劑是那些CNS穿透力較差的，如維拉帕米(Calan，G.D.Searle&Co.，Chicago，Ill.；Isoptin，Knoll，Whippany，NJ)、尼群地平和地爾硫(Cardizem，Marion，Kansas City，MO)。其他比較有效的Ca.sup.2+通道拮抗劑是苗扶來精，氟桂利嗪、芐普地爾、利多氟嗪、CERM-196、R58735、R-56865、拉洛來靜、尼索地平、尼卡地平、PN200-110、費(fèi)樂地平、氨氯地平，R-(-)-202-791、和R-(+)Bay K-8644(Miles，Bayer)，其結(jié)構(gòu)式記載于Boddeke等所著Trends in Pharmacologic Sciences(1989)10397和Triggle等所著Trends in Pharmacologic Sciences(1989)10370中，在此引入作為參考。
正如Inoue等(1993)、Hunter等(1993)、Hori等(1993)、Pourter-Manzanedo等(1992)、Boesch & Loor(1994)、Zacherlet等(1994)、Shirai等(1991)、Morris等(1991)、Muller等(1994)和Miyamoto等(1992)所描述的，維拉帕米是公知的Ca通道阻斷劑和P-糖蛋白競爭性抑制劑。Thalhamer等(1994)表明陽離子染料吖啶橙黃、穿過膽小管的P-糖蛋白-介導(dǎo)的轉(zhuǎn)運(yùn)能被環(huán)孢菌素A和維拉帕米所抑制。p糖蛋白參與的兩親陽離子穿過肝細(xì)胞小管膜的ATP-15依賴性轉(zhuǎn)運(yùn)同樣也被Muller等所(1994)研究。恒帶電的兩親的陽離子的轉(zhuǎn)運(yùn)被維拉帕米、奎尼丁和柔紅霉素(一種抗菌素)所抑制。Bear(1994)提出維拉帕米、秋水仙素、長春堿、柔紅霉素和(50M)阻斷向外-調(diào)整氯通道，它被認(rèn)為與p糖蛋白的表達(dá)有關(guān)。Ohi.等(1992)使用鈣-通道阻斷劑，維拉帕米，與柔紅霉素聯(lián)用于表面膀胱癌的化療。給予5安瓿(10ml)可注射的維拉帕米。維拉帕米鹽酸鹽是苯乙睛α-[3-[[2-(3，4-二甲氧苯基)乙基]-甲氨基]丙基]-3，-4二甲氧基-α-(1-甲基乙基)鹽酸鹽，也稱作CALAN(TM)和ISOPTIN(TM)，其可從Searle、Knoll和Parke-Davis購得。
其超過90％被吸收，但是由于廣泛的肝首過代謝作用，只有20到35％的劑量能到達(dá)系統(tǒng)中。其大約90％與血漿蛋白結(jié)合。它能很快的通過肝臟代謝成去甲維拉帕米和少部分的其他代謝產(chǎn)物。大約70％的劑量以代謝物的形式由尿液排出，16％的劑量在5天內(nèi)由糞便排出，低于5％的量以原型排出?？诜o藥的維拉帕米效果在30到60分鐘內(nèi)很明顯。靜脈給藥的維拉帕米峰效應(yīng)發(fā)生在15分鐘內(nèi)。在正常人中其半衰期為1.5到5小時(shí)，但是對于慢性治療會超過9小時(shí)。在患有肝硬化的病人中，半衰期會延長至14到16小時(shí)。在肝病病人中半衰期的延長歸結(jié)為藥物分布體積的增加。在重復(fù)給藥后將發(fā)現(xiàn)飽和動力學(xué)現(xiàn)象。
優(yōu)選的劑量包括靜脈注射，成人，初期，在超過2分鐘內(nèi)給予5到10mg(0.075到0.15mg/kg)(老年人為3分鐘)，如有需要，后續(xù)劑量為10mg(0.150mg/kg)30分鐘后；不滿1歲的兒童，初期在超過2分鐘內(nèi)給予0.1到0.2mg/kg(伴有ECG監(jiān)控)，如有需要，在30分鐘后重復(fù)給藥；1到15歲，初期給予0.1到0.3mg/kg，不超過5mg，如有需要，在30分鐘后重復(fù)給藥。口服，成人，80mg一天3或4次或者在緩釋形式下240 mg一天一次，逐漸增加至480mg一天(如有需要)?？傻玫木S拉帕米為5mg/2mL和10mg/4mL的注射劑；40mg、80mg和120mg的片劑和240mg的緩釋片劑。
本發(fā)明同樣涉及用于系統(tǒng)性的給藥(口服、局部給藥、經(jīng)皮包括長期治療和預(yù)防的藥物控釋)的藥學(xué)劑量單位形式，其有效用于治療哺乳動物，包括人類。用于此說明書和權(quán)利要求書中的術(shù)語“劑量單位形式”指物理上分散的單位，適于給哺乳動物單個(gè)的服用，每一個(gè)單位含有預(yù)定量的足夠活性成分，通過為達(dá)到系統(tǒng)性給藥而調(diào)整所述成分的藥學(xué)方法，可計(jì)算得到所需的效果。
本發(fā)明相應(yīng)的劑量單位形式的實(shí)施例是片劑、膠囊、存在于液體載體中的口服液體制劑、栓劑和干制劑，干制劑用于制備即用即制的，存在于在液體載體中的制劑。固體口服藥物單位形式的固體稀釋劑或載體選自脂類、碳水化合物、蛋白質(zhì)、固體礦物質(zhì)；如淀粉、蔗糖、高嶺土、磷酸二鈣、明膠、阿拉伯膠、玉米漿、玉米淀粉、滑石粉等等。膠囊，無論硬的還是軟的，可使用常用的稀釋劑和賦形劑制成，如食用油，碳酸鈣、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等等。用于口服的液體藥物制劑可制成水溶液或者水性溶液，最好含有助懸劑，如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇等等。
上述制劑在制造和儲存時(shí)必須保持穩(wěn)定，通常在基本的溶劑或者混懸液之外還含有具有殺菌劑和殺真菌劑性質(zhì)的防腐劑，如羥苯烷基酯類、三氯叔丁醇、芐基醇、苯酚、乙基汞硫代水楊酸鈉等等。在很多情況下，優(yōu)選的含有等滲劑，如糖類、或氯化鈉。載體和賦形劑包括植物油、水、乙醇、和多元醇如甘油、丙二醇、液態(tài)聚乙二醇等等。
藥學(xué)上的劑量單位形式的制備是依據(jù)前面的一般描述，伴隨著適應(yīng)系統(tǒng)性給藥的方法，提供每一劑量單位形式中必要的活性成分的有效劑量。通常，單位劑量形式將含有3-73％(重量)的必要活性成分。
用于與本發(fā)明方法相應(yīng)的哺乳動物的治療，由必要活性物質(zhì)的精確劑量構(gòu)成的一種有效的劑量，其如能根據(jù)實(shí)施臨床治療的特性、病況的嚴(yán)重程度、哺乳動物的種類、年齡、體重和狀況施以與之相應(yīng)的給藥形式和確定的制劑，將會有很好效果。當(dāng)需要給予精確劑量的情況下，可事先給予一試驗(yàn)劑量，然后觀察臨床反應(yīng)以確定所需的精確劑量。總的來說，給藥的有效劑量在對受藥者體重大約每天～.1mg每千克到50mg每千克之間。優(yōu)選每日0.5mg./kg.到大約25mg./kg。大多數(shù)情況下，給藥一個(gè)月即得到顯著的反應(yīng)且?guī)硭璧闹委熃Y(jié)果。在進(jìn)行免疫學(xué)方面的治療的情況下，可能需要長時(shí)間的每日重復(fù)給予多次劑量以下實(shí)施例用于且僅用于描述而無限制性的延伸意義。
實(shí)施例1手工混合制備以下成分的混合物成分?jǐn)?shù)量維拉帕米20到240mg氯喹20到1200mg槲皮素 10到500mg口服給予一劑量一天1-4次，優(yōu)選1-2次，可有效減緩由病毒感染或者其他病源性原因引起的成年人免疫-缺陷癥。
當(dāng)給予感染HIV的成年人一日1-4劑量單位時(shí)，水平可升至正常范圍。
可見給予上述劑量單位混合物一天1-4次(優(yōu)選1或2次)，可有效減緩由病毒感染或者其他病源性原因引起的成年人免疫-缺陷癥。
實(shí)施例2制備如下物質(zhì)MP-1A 35μg/ml 維拉帕米(35ug)MP-1B 10μg/ml 氯喹(10ug)MP-1C 4μg/ml 槲皮素(4Rg)MP-1MIX 所有上述成分的組合物MP-11/2MIX上述成分1/2含量的組合物給藥4天后，上述藥物對被實(shí)驗(yàn)室改性的HIV病毒感染而導(dǎo)入病毒的外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的效果見諸圖1。從中可發(fā)現(xiàn)，MP-1MIX和MP-11/2MIX顯示出協(xié)同的治療效果且勝于AZT產(chǎn)生的效果。
實(shí)施例3給藥4天后，上述藥物對被耐HAART臨床病毒分離株感染的外周血淋巴細(xì)胞的病毒負(fù)荷產(chǎn)生的效果見諸圖2。其在此顯示了優(yōu)于AZT的協(xié)同治療效果。
實(shí)施例4維拉帕米SR 180和槲皮素150mg對拒絕抗逆轉(zhuǎn)錄病毒療法的高血壓病人的CD4計(jì)數(shù)和病毒負(fù)荷產(chǎn)生的效果見諸圖3，從中可看出本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。
顯然，藥物的含量和成分應(yīng)根據(jù)疾病的程度和病人對單個(gè)藥物成分的容納能力而進(jìn)行調(diào)整。更深一步的，須知鈣通道拮抗劑或喹啉的代謝產(chǎn)物應(yīng)以適當(dāng)?shù)匦问绞褂谩Ｔ龠M(jìn)一步的，槲皮素的活性成分，如多元酚類、糖甙類、黃酮類、和生物黃酮類應(yīng)以適宜的含量提取及使用，以得到所需的效果。
這樣，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)能得以實(shí)現(xiàn)，且優(yōu)選的具體實(shí)施方案已被公開。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，包括可降低哺乳動物體內(nèi)病毒活性的治療有效量及比例的至少一種鈣通道阻斷劑，至少一種喹啉或其衍生物或其中間體或其鹽類的組合。
2.權(quán)利要求1的組合物，含有槲皮素或其衍生物。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中鈣通道阻斷劑成分與喹啉成分和槲皮素成分的重量比例為大約10-20∶大約3-8∶大約1-4。
4.權(quán)利要求1的組合物，其中喹啉成分包括氯喹或其衍生物。
5.權(quán)利要求1的組合物，其中的喹啉成分包括至少一種4-氨基喹啉或其衍生物。
6.權(quán)利要求1的組合物，其中的喹啉成分包括奎寧或其衍生物。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中的喹啉成分包括至少一種選自甲氟喹、甲氟喹鹽酸鹽、伯氨喹啉、伯氨喹啉磷酸鹽、羧基伯氨喹啉，和其衍生物的成分。
8.權(quán)利要求1的組合物，其中的鈣通道阻斷劑成分包括維拉帕米或其衍生物。
9.權(quán)利要求1的組合物，其中的鈣通道阻斷劑成分包括至少一種選自尼莫地平、雙丙外林、史克藥物no.9512及其衍生物的成分。
10.權(quán)利要求1的組合物，其中的鈣通道阻斷劑成分由至少一種選自維拉帕米、尼群地平、地爾硫和其衍生物的成員形成。
11.權(quán)利要求1的組合物，其中的鈣通道阻斷劑成分含有至少一種選自苗扶來精、氟桂利嗪、芐普地爾、利多氟嗪、CERM-196、R58735、R-56865、拉洛來靜、尼索地平、尼卡地平、PN200-110、費(fèi)樂地平、氨氯地平，R-(-)-202-791、R-(+)Bay K-8644和其衍生物的成分。
12.權(quán)利要求1的組合物，其中的成分呈顆粒形式且與藥學(xué)上可接受的載體或制片劑制成片劑。
13.權(quán)利要求1的組合物，其中的成分結(jié)合有一種藥學(xué)上可接受的液體載體。
14.權(quán)利要求11的組合物，含有大約5到500mg鈣通道阻斷劑，和大約5到1200mg喹啉成分。
15.用于降低感染的哺乳動物體內(nèi)的病毒活性的一種藥物組合物，含有有效量的維拉帕米和氯喹或其藥學(xué)上等效的衍生物，。
16.權(quán)利要求15的組合物，包括含5到500mg維拉帕米或其藥學(xué)上等價(jià)的衍生物的單位劑型。
17.權(quán)利要求15的組合物，包括在與維拉帕米和氯喹聯(lián)用時(shí)抑制受感染哺乳動體內(nèi)的病毒活性的有效量的槲皮素或其藥學(xué)上等價(jià)的衍生物。
18.權(quán)利要求15的組合物，包括含大約5到500mg維拉帕米、大約5到1200mg氯喹和大約5到500mg槲皮素或其藥學(xué)上等效的衍生物的單位劑型。
19.權(quán)利要求15的組合物，包括含大約20到240mg維拉帕米、大約20到1200mg氯喹和大約10到500mg槲皮素或其藥學(xué)上等效的衍生物的單位劑型。
全文摘要
一種藥物組合物，含有治療有效量的與喹啉相結(jié)合的鈣通道阻斷劑。在具體地實(shí)施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步的包含有槲皮素。這些成分結(jié)合及聯(lián)合作用以有效的治療病毒性的感染。
文檔編號A61K31/4706GK1994466SQ20061016048
公開日2007年7月11日 申請日期2000年8月23日 優(yōu)先權(quán)日1999年8月23日
發(fā)明者R·H·凱勒 申請人:鳳凰生物科學(xué)有限公司