專利名稱：一種由苦參素、靈芝和黃芪制成的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種主要由苦參素、靈芝或其提取物和黃芪或其提取物制成的藥物組合物，及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
肝炎是一種常見病和多發(fā)病，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，我國肝炎患者和病毒攜帶者占總?cè)丝诘?0％。其中以病毒性肝炎為主，病毒性肝炎又可分為急性肝炎、慢性肝炎、重癥肝炎和膽型肝炎。慢性肝炎又可分為遷延性肝炎和活動性肝炎。肝炎是一種傳染性疾病，由于其流行性廣、危害性大、發(fā)病率高，是目前國內(nèi)外公認(rèn)的疑難病癥之一，以乙型肝炎為例，治愈率僅為10％，絕大部分轉(zhuǎn)為慢性肝炎，嚴(yán)重的轉(zhuǎn)化為肝腹水、肝癌。其中肝纖維化的形成和發(fā)展是影響預(yù)后和病情轉(zhuǎn)危的關(guān)鍵病理變化之一，也是臨床慢性肝病治療中最為復(fù)雜的疑難問題。目前治療慢性乙型肝炎的療法主要有抗病毒藥物療法、免疫調(diào)控藥物療法、改善肝微循環(huán)療法、保護(hù)療法、中醫(yī)辨證論治等。國內(nèi)外近年來治療肝炎的藥物雖然有許多，但大多沒有十分公認(rèn)的療效，并且療效并不理想，另外治療后病情易反復(fù)，且價格又十分昂貴。至今，市場上仍缺少抗肝炎療效確切又副作用較小的藥物。
苦參素是從豆科植物苦豆子、苦參中提取的生物堿，主要成份是氧化苦參堿和極少量的氧化槐果堿?？鄥⑺匾咽蛰d入國家藥品監(jiān)督管理局國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥品地方標(biāo)準(zhǔn)上升國家標(biāo)準(zhǔn)第16冊363頁(國家藥典委員會編)，其中規(guī)定含氧化苦參堿(C15H24N2O2)不得少于98.0％。苦參素主要用于慢性乙肝的治療及腫瘤放療、化療引起的白細(xì)胞低下及其他原因引起的白細(xì)胞減少癥?？鄥⑺鼐哂辛己玫目垢窝鬃饔脩?yīng)用苦參素治療慢性乙型肝炎的臨床癥狀，如乏力、納減和腹脹等，有效率在90％左右。氧化苦參堿的結(jié)構(gòu)式如下 氧化苦參堿靈芝為多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Ley-ss.ex Fr.)Karst.或紫芝Ganodermasinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子實(shí)體。性甘，平，歸心、肺、肝、腎經(jīng)。具有補(bǔ)氣安神，止咳平喘之功效，主要用于眩暈不眠，心悸氣短，虛勞咳嗽。靈芝是家喻戶曉的中藥，俗稱“仙草”。始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，被認(rèn)為能“益心氣”“安精魂”“補(bǔ)肝益氣”“堅(jiān)筋骨”，列為上品?！侗静菥V目》認(rèn)為靈芝有“滋補(bǔ)強(qiáng)壯”“延年益壽”“利關(guān)節(jié)”“治耳聾”等功效。靈芝能夠扶正固本，增強(qiáng)免疫功能，提高機(jī)體免疫力，在整體上雙向調(diào)節(jié)人體機(jī)能平衡，調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)部活力，調(diào)節(jié)人體新陳代謝機(jī)能，提高自身免疫力，促進(jìn)內(nèi)臟或器官機(jī)能正?；ｌ`芝的主要有效成分為靈芝多糖，靈芝多糖有顯著的增強(qiáng)免疫的作用。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)的干燥根。甘，溫，歸肺、脾經(jīng)，具有補(bǔ)氣固表、利尿脫毒、排膿、斂瘡生肌之功效，主要用于氣虛乏力，食少便溏，中氣下陷，久瀉脫肛，便血崩漏，表虛自汗，氣虛水腫，癰疽難潰，久潰不斂，血虛痿黃，內(nèi)熱消渴；慢性腎炎蛋白病，糖尿病?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)表明黃芪可促進(jìn)免疫功能，主要有效成分為多糖和皂苷。黃芪多糖可顯著提高機(jī)體的免疫力，增強(qiáng)人體細(xì)胞的生理代謝作用，顯著促進(jìn)骨髓造血細(xì)胞DNA合成，加快有核細(xì)胞分裂過程，對體內(nèi)血糖水平有雙向調(diào)節(jié)作用。黃芪皂苷具有抗肝損傷的作用，能減輕肝中毒引起的病變。
目前利用苦參素、靈芝或其提取物和黃芪或其提取物的相互作用，配伍組方用于制備治療肝臟疾病的藥物中的應(yīng)用還未見報道。

發(fā)明內(nèi)容為了滿足臨床需要，本發(fā)明提供了一種新的主要用于制備治療肝臟疾病的藥物的藥物組合物，并提供了其制備方法。
本發(fā)明藥物組合物主要由苦參素、靈芝和黃芪制成，其重量份數(shù)為苦參素100～1600份、靈芝500～24000份、黃芪1000～80000份；優(yōu)選為苦參素200～800份、靈芝1000～12000份、黃芪10000～40000份；最佳為苦參素400份、靈芝3000～9000份、黃芪20000份。
上述藥物組合物中靈芝、黃芪可以用適宜的溶劑分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，總提取物再與苦參素和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型?！皢为?dú)提取”是指，靈芝、黃芪每一味藥材分別通過不同的工藝單獨(dú)提取得到提取物，再將各提取物混合得到總提取物?！盎旌咸崛　笔侵?，靈芝、黃芪兩味藥材一起提取得到總提取物?？偺崛∥镏兴闹饕行С煞譃槎嗵腔蚨嗵呛涂傇碥?，總提取物中主要有效成分的含量不低于30％。
靈芝可以用適宜的溶劑經(jīng)過提取加工得到靈芝多糖，其中的溶劑優(yōu)選酸水或乙醇，靈芝多糖的提取方法可以為浸漬法、滲漉法、煎煮法、回流提取法、連續(xù)提取法中的一種或幾種，也可參照文獻(xiàn)方法制備。
本發(fā)明提供了靈芝的優(yōu)選的提取方法如下取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水4倍量潤濕24h后煎煮三次，第一次加12倍量水煎煮3小時，第二次加10倍量水煎煮2小時，第三次加10倍量水煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.15，濾過，濾液用Sevage法除蛋白，濾過，濾液加乙醇至含醇量為60％，攪勻，冷藏靜置24小時，濾過，收集濾餅，加適量的水?dāng)嚢枞芙?，濾過，濾液加乙醇至含醇量為85％，攪勻，冷藏靜置24小時，濾過，收集濾餅，加入適量丙酮、乙醇洗滌反復(fù)洗滌多次，抽濾，沉淀加適量水使溶解，超濾，收集分子量大于50000道爾頓的部分，濃縮，真空干燥，即得。
通過本工藝制備的靈芝多糖的得率為0.5～3％，靈芝多糖中多糖的含量不低于80％。
除采用上述方法外，靈芝還可通過以下方法制備，但不僅限于下述方法方法一取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水3倍量潤濕24h后加水煎煮三次，第一次加12倍量水提取3小時，第二、三次加10倍量水提取2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.03～1.08，濾過，濾液用Sevage法除蛋白，濾過，濾液加乙醇使含醇量為70％，攪勻，冷藏放置24小時，濾過，收集濾餅，加適量的水?dāng)嚢枞芙?，濾過，濾液加乙醇使含醇量為85％，攪勻，冷藏放置24小時，濾過，收集濾餅，加入適量丙酮、乙醇洗滌反復(fù)洗滌多次，抽濾，沉淀加適量水使溶解，冷藏放置24小時，濾過收集濾液，濃縮，真空干燥，即得。
通過本工藝制備的靈芝多糖的得率為2～4％，靈芝多糖的含量不低于60％。
方法二取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水3倍量潤濕24h后煎煮二次，第一次3小時加水12倍量，第二次2小時加水10倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.02～1.06，濾過，濾液用Sevage法除蛋白，濾過，濾液加乙醇使含醇量為65％，攪勻，冷藏放置24小時，濾過，收集濾餅，加適量水使溶解，濾過，濾液加乙醇使含醇量為80％，攪勻，冷藏放置24小時，濾過，收集濾餅，加適量水使溶解，冷藏放置48小時，濾過，濾液濃縮，真空干燥，即得。
通過本工藝制備的靈芝多糖的得率為3～5％，靈芝多糖的含量不低于50％。
現(xiàn)代藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，黃芪中的黃芪多糖具有提高免疫力活性，黃芪總皂苷具有保肝活性，因此黃芪的“單獨(dú)提取”方法因其活性成分的不同可采用不同的提取方法，分別如下本發(fā)明組合物中以多糖為主要有效成分的黃芪的制備方法如下取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
通過本工藝制備的黃芪提取物的得率為0.5～2％，其中多糖的含量不低于50％。
除采用上述方法外，黃芪也可通過以下方法制備，但不僅限于下述方法方法一取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達(dá)80％，靜置24小時，濾過，沉淀加水溶解，濾過，再加乙醇使含醇量達(dá)85％，靜置24小時，濾過，收集沉淀，真空干燥即得。
通過本工藝制備的黃芪提取物的得率為2～4％，其中多糖的含量不低于40％。
方法二取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時，每次加水10倍量，提取液合并，過濾，濾液加乙醇使含醇量達(dá)85％，過濾，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。
通過本工藝制備的黃芪提取物的得率為3～4％，其中多糖的含量不低于30％。
本發(fā)明組合物中以總皂苷為主要有效成分的黃芪的制備方法如下取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱上，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。
通過本工藝制備的黃芪提取物的得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，其中黃芪甲苷含量不低于2.0％。
除采用上述方法外，黃芪也可通過以下方法制備，但不僅限于下述方法方法一取黃芪，加水煎煮三次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含乙醇量為60％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，減壓濃縮、真空干燥，即得。
通過本工藝制備的黃芪提取物的得率為3～5％，總皂苷含量不低于30％，其中黃芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理1次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。
通過本工藝制備的黃芪提取物的得率為2～4％，總皂苷含量為不低于40％，其中黃芪甲苷含量不低于1％。
本發(fā)明藥物組合物，可用靈芝多糖、黃芪多糖或黃芪總皂苷分別代替靈芝和黃芪投料制得，按照提取物相對于藥材的得率(靈芝多糖的得率為0.5～3％，黃芪多糖或總皂苷的得率均為0.5～2％)計(jì)算，可以有以下兩種不同配比，其重量份數(shù)分別為配比1苦參素100～1600份、靈芝多糖2.5～700份、黃芪多糖5～1600份；優(yōu)選為苦參素200～800份、靈芝多糖5～350份、黃芪多糖50～800份；最佳為苦參素400份、靈芝多糖15～250份、黃芪多糖100～400份。
配比2苦參素100～1600份、靈芝多糖2.5～700份、黃芪總皂苷5～1600份；優(yōu)選為苦參素200～800份、靈芝多糖5～350份、黃芪總皂苷50～800份；最佳為苦參素400份、靈芝多糖15～250份、黃芪總皂苷100～400份。
上述配比中，靈芝多糖中多糖的含量不低于50％，最好不低于80％；黃芪多糖中多糖的含量不低于30％，最好不低于50％；黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，其中的黃芪甲苷的含量不低于1.0％，最好不低于2.0％。靈芝多糖、黃芪多糖和黃芪總皂苷均可參照前述方法自制。
本發(fā)明藥物組合物具有保肝、抗病毒、提高免疫力、抗炎等作用，可以用于治療急慢性肝炎和活動性肝硬化。
本發(fā)明還進(jìn)一步要求保護(hù)包括上述藥物組合物作為必需的活性成分與藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，為臨床上或藥學(xué)上可接受的任一劑型；可以腸胃外、口服、經(jīng)皮給藥等方式施用于需要這種治療的患者，優(yōu)選為口服制劑、注射劑。
用于腸胃外給藥時，可制成注射劑。注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，注射劑可分為注射液、注射用無菌粉末與注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，可用于肌內(nèi)注射、靜脈注射、靜脈滴注等；其規(guī)格有1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，其中供靜脈滴注用的大體積(一般不小于100ml)注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，可用適宜的注射用溶劑配制后注射，也可用靜脈輸液配制后靜脈滴注；無菌粉末用溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。
制成注射劑時，可采用現(xiàn)有制藥領(lǐng)域中的常規(guī)方法生產(chǎn)，可選用水性溶劑或非水性溶劑。最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9％氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。配制注射劑時，可以不加入附加劑，也可根據(jù)藥物的性質(zhì)加入適宜的附加劑，如滲透壓調(diào)節(jié)劑、pH值調(diào)節(jié)劑、增溶劑、填充劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。常用的滲透壓調(diào)節(jié)劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優(yōu)選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調(diào)節(jié)劑包括醋酸-醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸-枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉-碳酸鈉等；常用的增溶劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的填充劑包括乳糖、甘露醇、山梨醇、右旋糖酐等；常用的抗氧劑有亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑為苯酚、甲酚、三氯叔丁醇等。注射劑常用容器有玻璃安瓿、玻璃瓶、塑料安瓿、塑料瓶等。
用于口服時，可制成常規(guī)的固體制劑，如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑等；也可制成口服液體制劑，如口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑，以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑，依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當(dāng)方法制成的球狀或類球狀固體制劑，包括滴丸、糖丸、小丸等。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑，可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等?？诜芤簞┫抵杆幬锶芙庥谶m宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑。口服混懸劑系指難溶性固體藥物，分散在液體介質(zhì)中，制成供口服的混懸液體制劑，也包括干混懸劑或濃混懸液。糖漿劑系指含有藥物的濃蔗糖水溶液。
制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。常用填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預(yù)膠化淀粉、甘露醇等；常用粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；常用崩解劑包括干淀粉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；常用潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于1、提供了一種新的制備治療肝臟疾病的藥物的中藥復(fù)方，滿足了臨床急需。
2、對本發(fā)明藥物組合物進(jìn)行了藥理學(xué)研究，結(jié)果表明本發(fā)明藥物組合物可極顯著降低免疫性肝損傷小鼠血清的ALT和AST，對小鼠免疫性肝損傷有顯著的保護(hù)作用；對鴨乙型肝炎病毒均有極顯著的抑制作用；對慢性肝炎有很好的改善作用；對四氯化碳誘導(dǎo)的肝纖維化大鼠血清TGFβ1水平顯著降低，大鼠肝組織膠原面積明顯減少。其效果明顯優(yōu)于靈芝、黃芪和苦參素單獨(dú)給藥，提示三者有協(xié)同增效的作用。
3、通過本發(fā)明組合物不同配比灌胃和注射給藥對小鼠免疫性肝損傷保護(hù)作用的研究，篩選出了本發(fā)明組合物的優(yōu)選配比。
4、本發(fā)明組合物中的靈芝和黃芪既可由靈芝、黃芪投料制得，也可由靈芝多糖、黃芪多糖或黃芪總皂苷直接投料，并提供了其制備方法，滿足了大生產(chǎn)的需要。
5、對本發(fā)明組合物提取物主要有效成分的含量分別進(jìn)行了限定，便于控制產(chǎn)品的質(zhì)量。
6、對本發(fā)明組合物進(jìn)行了急性毒性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明本發(fā)明組合物毒性小，安全范圍大。
7、對本發(fā)明藥物組合物進(jìn)行的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全。
以下通過實(shí)驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物的有益效果。苦參素、靈芝多糖和黃芪多糖的組合物以下簡稱KLH組合物I，苦參素、靈芝多糖和黃芪總皂苷的組合物以下簡稱KLH組合物II。實(shí)驗(yàn)例中所用的靈芝多糖取自實(shí)施例1，黃芪多糖取自實(shí)施例2，黃芪總皂苷取自實(shí)施例3。
實(shí)驗(yàn)例1 KLH組合物合并用藥藥效學(xué)研究供試品0.9％生理鹽水，自制；化學(xué)純CCl4，成都聯(lián)合化工試劑研究所；苦參素注射液，2ml∶0.2g，天津市生物化學(xué)制藥廠；靈芝注射液，自制，5ml，含靈芝多糖91.8mg(相當(dāng)于靈芝6g)；黃芪多糖注射液，自制，5ml，含黃芪多糖214.0mg(相當(dāng)于黃芪20g)；黃芪總皂苷注射液，自制，5ml，含黃芪總皂苷212.0mg(相當(dāng)于黃芪20g)；KLH組合物I注射液(苦參素+靈芝+黃芪)不同配比，自制，制備方法參照實(shí)施例4；KLH組合物II注射液(苦參素+靈芝+黃芪)不同配比，自制，制備方法參照實(shí)施例4。
試劑卡介苗(BCG)，上海生物制品研究所；脂多糖(LPS)，Sigma公司。
受試動物ICR種小鼠，體重16～20g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠240只，將小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對照組、模型組、苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組、KLH組合物I不同配比組和KLH組合物II不同配比組，每組10只。除對照組每鼠尾靜脈注射生理鹽水0.2ml外，其它各組每鼠尾靜脈注射0.2ml卡介苗(含5×107活菌)。次日起開始治療，對照組和模型組小鼠每天腹腔注射生理鹽水0.5ml，其它各組腹腔注射相應(yīng)藥物，給藥量見表1。12天后，除對照組給予生理鹽水0.2ml/只尾靜脈注射外，其余各鼠均由尾靜脈注射脂多糖0.2ml/7.5μg/只。12小時后，眼眶取血，常規(guī)分離血清，應(yīng)用IFCC推薦法測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。
表1 KLH組合物對免疫性肝損傷小鼠血清ALT和AST(n＝10)的影響
注與生理鹽水對照組相比，ΔΔp＜0.01；與模型組相比，**p＜0.01；與苦參素組相比，ap＜0.01；與靈芝組相比，bp＜0.01；與黃芪多糖組相比，cp＜0.01；與黃芪總皂苷組相比，dp＜0.01。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表1可知1)與生理鹽水對照組相比，模型組小鼠血清ALT和AST活性極顯著增高(p＜0.01)，說明造模成功。
2)與模型組相比，各給藥組均能極顯著降低免疫性肝損傷小鼠血清的ALT和AST(p＜0.01)。
3)與苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組單用藥物組相比，KLH組合物I各劑量組注射液效果更顯著(p＜0.01)；與苦參素組、靈芝組、黃芪總皂苷組單用藥物組相比，KLH組合物II各劑量組注射液效果更顯著(p＜0.01)，說明苦參素、靈芝與黃芪三者有協(xié)同增效的作用。
結(jié)論由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，苦參素、靈芝與黃芪三者合用有協(xié)同增效作用。尤其當(dāng)苦參素∶靈芝∶黃芪＝400∶6000∶20000時效果最好。
實(shí)驗(yàn)例2 KLH組合物對免疫性肝損傷小鼠血清ALT和AST活性的影響供試品0.9％生理鹽水，自制；化學(xué)純CCl4，成都聯(lián)合化工試劑研究所；苦參素膠囊，0.1g/粒，寧夏博爾泰力藥業(yè)股份有限公司；靈芝膠囊，自制，含靈芝多糖91.8mg/粒(相當(dāng)于靈芝6g)；黃芪多糖膠囊，自制，含黃芪多糖214.0mg/粒(相當(dāng)于黃芪20g)；黃芪總皂苷膠囊，自制，含黃芪總皂苷212.0mg粒(相當(dāng)于黃芪20g)；KLH組合物I膠囊(苦參素+靈芝+黃芪)不同配比，自制，制備方法參照實(shí)施例9；KLH組合物II膠囊(苦參素+靈芝+黃芪)不同配比，自制，制備方法參照實(shí)施例9。
試劑卡介苗(BCG)，上海生物制品研究所；脂多糖(LPS)，Sigma公司。
受試動物ICR種小鼠，體重16～20g，雌雄各半。
實(shí)驗(yàn)方法取小鼠360只，將小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對照組、模型組、苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組、KLH組合物I不同配比組和KLH組合物II不同配比組，每組10只。除生理鹽水對照組每鼠尾靜脈注射生理鹽水0.2ml外，其它各組每鼠尾靜脈注射0.2ml卡介苗(含5×107活菌)。次日起開始治療，對照組和模型組每鼠每天灌胃生理鹽水0.5ml，其它各組每天灌胃給藥相應(yīng)藥物，所給藥物給藥前用生理鹽水溶解稀釋成適宜的濃度，給藥量見表2。12天后，除對照組給予生理鹽水0.2ml/只尾靜脈注射外，其余各鼠均由尾靜脈注射脂多糖0.2ml/7.5μg/只。12小時后，眼眶取血，常規(guī)分離血清，應(yīng)用IFCC推薦法測定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表2結(jié)果可知1)與生理鹽水對照組相比，模型組小鼠血清ALT和AST活性極顯著增高(p＜0.01)，說明造模成功。
2)與模型組相比，各給藥組均能極顯著降低免疫性肝損傷小鼠血清的ALT和AST(p＜0.01)。
3)與苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組單用藥物組相比，KLH組合物I各劑量組注射液效果更顯著(p＜0.01)，與苦參素組、靈芝組、黃芪總皂苷組單用藥物組相比，KLH組合物II各劑量組注射液效果更顯著(p＜0.01)，說明苦參素、靈芝與黃芪三者有協(xié)同增效的作用。
表2 KLH組合物對免疫性肝損傷小鼠血清ALT和AST(n＝10)的影響
注與生理鹽水對照組相比，ΔΔp＜0.01；與模型組相比，**p＜0.01；與苦參素組相比，ap＜0.01；與靈芝組相比，bp＜0.01；與黃芪多糖組相比，cp＜0.01；與黃芪總皂苷組相比，dp＜0.01。
結(jié)論由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，苦參素、靈芝與黃芪三者合用有協(xié)同增效作用。尤其當(dāng)苦參素∶靈芝∶黃芪＝400∶6000∶20000時效果最好。
實(shí)驗(yàn)例3 KLH組合物抗乙肝病毒實(shí)驗(yàn)研究供試品0.9％生理鹽水，自制；注射用阿昔洛韋，石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司；苦參素膠囊，0.1g/粒，寧夏博爾泰力藥業(yè)股份有限公司；靈芝顆粒，自制，含靈芝多糖91.8mg/袋(相當(dāng)于靈芝6g)；黃芪多糖顆粒，自制，含黃芪多糖214.0mg/袋(相當(dāng)于黃芪20g)；黃芪總皂苷顆粒，自制，含黃芪總皂苷212.0mg/袋(相當(dāng)于黃芪20g)；KLH組合物I顆粒劑(苦參素+靈芝+黃芪400mg+6g+20g)，自制，制備方法參照實(shí)施例10；KLH組合物II顆粒劑(苦參素+靈芝+黃芪400mg+6g+20g)，自制，制備方法參照實(shí)施例10。
實(shí)驗(yàn)動物市售1日齡北京鴨DHBV(鴨乙型肝炎病毒)陽性血清，復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室。
動物模型北京鴨經(jīng)足靜脈注射0.2mlDHBV陽性血清，7d后取血，分離血清，-20℃保存待檢。
實(shí)驗(yàn)方法篩選出感染成功的陽性鴨72只，隨機(jī)分為12組，分別為空白對照組、陽性對照組、苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組、KLH組合物I低、中、高劑量組和KLH組合物II低、中、高劑量組，每組6只。空白對照組每日灌胃生理鹽水20ml/kg，每日2次，連續(xù)14d；給藥組灌胃給藥相應(yīng)藥物，所給藥物給藥前用生理鹽水溶解稀釋成適宜的濃度，每日2次，劑量見下表，連續(xù)14d。陽性藥物作為治療對照組，以(阿昔洛韋)ACV按100mg/kg灌胃，2次/d，給藥2周。分別于用藥前1d(T0)、用藥第7天(T7)，用藥第14天(T14)和停藥后第7天(P7)。自鴨腿脛靜脈取血，分離血清，-20℃保存待檢。
DHBV-DNA檢測方法取上述鴨血清，每批同時點(diǎn)膜，測定鴨血清中DHBV-DNA水平的變化，按缺口翻譯試劑盒說明方法，用32p標(biāo)記DHBV-DNA探針，并作鴨血清斑點(diǎn)雜交，放射自顯影膜片斑點(diǎn)，在酶標(biāo)檢測儀上測定OD值(濾光片波長約490nm)，計(jì)算血清DHBV-DNA密度。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表3結(jié)果可見1)與生理鹽水對照組比較，陽性對照(阿昔洛韋)組在給藥后第7天和第14天，與給藥前的差異有顯著性(p＜0.01)，但停藥后有反跳現(xiàn)象，與給藥前比較差異無顯著性(p＞0.05)。
2)與生理鹽水對照組比較，苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組四個單獨(dú)給藥組在給藥后第7天和第14天，與給藥前的差異有顯著性(p＜0.05)，且停藥后無反跳現(xiàn)象。
3)與生理鹽水對照組比較，KLH組合物I三個不同劑量組、KLH組合物II三個不同劑量組在給藥后第7天和第14天，與給藥前的差異有顯著性(p＜0.01)，且停藥后無回升現(xiàn)象。
4)與苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組單獨(dú)給藥組比較，KLH組合物I三個不同劑量組在給藥后第7天和第14天，與給藥前的差異有顯著性(p＜0.05)，與苦參素組、靈芝組、黃芪總皂苷組單獨(dú)給藥組比較，KLH組合物II三個不同劑量組在給藥后第7天和第14天，與給藥前的差異有顯著性(p＜0.05)。
表3 KLH組合物對鴨體內(nèi)DHBV-DNA的抑制作用
注與空白對照組相比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與陽性對照組相比較，#p＜0.05；與苦參素組相比較，ap＜0.05；與靈芝組相比較，bp＜0.05；與黃芪多糖組相比較，cp＜0.05；與黃芪總皂苷組相比較，dp＜0.05。
結(jié)論各給藥組對鴨體內(nèi)DHBV-DNA的抑制作用在給藥后第7天和第14天與給藥前的差異與生理鹽水組比較均有顯著性，但陽性對照組停藥后有反跳現(xiàn)象。本發(fā)明藥物組合物療效均優(yōu)于單用苦參素、靈芝、黃芪多糖和黃芪總皂苷組，效果顯著，且無反跳現(xiàn)象，說明苦參素、靈芝和黃芪三藥合用，有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例4 對大鼠慢性肝損傷的防護(hù)作用實(shí)驗(yàn)動物雄性Wistar大鼠，鼠齡8周，體重(207±21)g供試品0.9％生理鹽水，自制；化學(xué)純CCl4，成都聯(lián)合化工試劑研究所；苦參素膠囊，0.1g/粒，寧夏博爾泰力藥業(yè)股份有限公司；靈芝片，自制，含靈芝多糖91.8mg/片(相當(dāng)于靈芝6g)；黃芪多糖片，自制，含黃芪多糖214.0mg/片(相當(dāng)于黃芪20g)；黃芪總皂苷片，自制，含黃芪總皂苷212.0mg/片(相當(dāng)于黃芪20g)；KLH組合物I注射液(苦參素+靈芝+黃芪400mg+6g+20g)，自制，制備方法參照實(shí)施例8；KLH組合物II注射液(苦參素+靈芝+黃芪400mg+6g+20g)，自制，制備方法參照實(shí)施例8。
實(shí)驗(yàn)方法將216只大鼠隨機(jī)分為正常對照組、模型組、苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組、KLH組合物I各劑量組和KLH組合物II各劑量組，每組大鼠均18只。除正常對照組外，其余各組均用50％CCl4-橄欖油1mL/kg后大腿皮下注射，每周2次，共12周，造成大鼠慢性肝損傷，同時分別灌胃給予相應(yīng)藥物，所給藥物給藥前用生理鹽水溶解稀釋成適宜的濃度，每日1次。正常對照組灌胃等量生理鹽水，每日1次。在實(shí)驗(yàn)的第4，9，12周各組隨機(jī)處死6只大鼠。
標(biāo)本的留取腹腔注射2.5％戊巴比妥溶液50mg/kg以麻醉，沿腹白線打開腹腔，從下腔靜脈取血，分離血清，-20℃保存；取肝臟10％甲醛固定。
血清學(xué)指標(biāo)檢測ALT用全自動生化測定儀檢測。
統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以 表示，用F檢驗(yàn)和t檢驗(yàn)處理相應(yīng)數(shù)據(jù)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與正常對照組比較，模型組大鼠第4，9，12周的ALT水平均顯著升高(p＜0.01)，說明造模成功；與模型組比較，苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組大鼠第4，9，12周的ALT水平均明顯降低(p＜0.05)；KLH組合物I各劑量組和KLH組合物II各劑量組大鼠第4，9，12周的ALT水平均顯著降低(p＜0.01)。
表4 KLH組合物對慢性肝損傷小鼠的保護(hù)作用
注與正常對照組相比，ΔΔp＜0.01；與模型組相比，*p＜0.05，**p＜0.01；與苦參素組相比，ap＜0.05；與靈芝組相比，bp＜0.05；與黃芪多糖組相比，cp＜0.05；與黃芪總皂苷組相比，dp＜0.05。
結(jié)論血清ALT活性被廣泛用作臨床診斷肝臟炎性損傷和判斷其臨床療效的敏感指標(biāo)。由以上結(jié)果表明，KLH組合物I和KLH組合物II能抑制肝組織內(nèi)炎癥活動和纖維組織增生，從而對CCl4造成的大鼠慢性干損傷具有防治作用。
實(shí)驗(yàn)例5 KLH組合物抗大鼠肝纖維化作用受試動物健康雄性SD大鼠，120只，體重140～160g，隨機(jī)分為12組，每組10只。
供試品0.9％生理鹽水，自制化學(xué)純CCl4，成都聯(lián)合化工試劑研究所；苦參素注射液，2ml∶0.2g，天津市生物化學(xué)制藥廠；靈芝注射液，自制，5ml，含靈芝多糖91.8mg(相當(dāng)于靈芝6g)；黃芪多糖注射液，自制，5ml，含黃芪多糖214.0mg(相當(dāng)于黃芪20g)；黃芪總皂苷注射液，自制，5m1，含黃芪總皂苷212.0mg(相當(dāng)于黃芪20g)；KLH組合物I注射液(苦參素+靈芝+黃芪400mg+6g+20g)，自制，制備方法參照實(shí)施例4；KLH組合物II注射液(苦參素+靈芝+黃芪400mg+6g+20g)，自制，制備方法參照實(shí)施例4。
實(shí)驗(yàn)方法將120只大鼠隨機(jī)分為12組，每組10只，分別為空白對照組、模型照組、苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組、KLH組合物I低、中、高劑量組和KLH組合物II低、中、高劑量組。用CCl4皮下注射法誘導(dǎo)大鼠肝纖維化模型，即用300ml/LCCl4石蠟油溶液，以3ml/kg做皮下注射，每周2次，共8周，空白對照組給予等量生理鹽水皮下注射。各給藥組在造模的同時腹腔注射給藥，給藥量見表5，CCl4模型組造模同時給予生理鹽水腹腔注射，空白對照組給予等體積的生理鹽水。各組動物在最后一次CCl4注射后48h處死，取血清和肝組織標(biāo)本待驗(yàn)。
檢測方法血清按照試劑說明書以酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)監(jiān)測TGFβ1水平，肝組織標(biāo)本以中性福爾馬林溶液固定、石蠟包埋，以多聚賴氨酸涂布的載玻片制作5μm組織切片，進(jìn)行HE染色和Massion三重膠原染色作組織病理學(xué)檢查；免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IH)方法檢測Smad 3蛋白表達(dá)水平，光學(xué)顯微鏡下觀察結(jié)果。
表5 各組大鼠肝組織檢查結(jié)果
注與空白對照組比較，##p＜0.01；與模型組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與苦參素組相比較，ap＜0.05；與靈芝組相比較，bp＜0.05；與黃芪多糖組相比較，cp＜0.05；與黃芪總皂苷組相比較，dp＜0.05。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果由表5結(jié)果可見1)與空白對照組比較，模型組大鼠血清TGFβ1水平顯著升高(p＜0.01)，說明肝纖維化的形成過程伴隨有TGFβ1合成的顯著增加，從而促進(jìn)肝臟膠原纖維的合成與沉積；HE染色光鏡下可見模型組大鼠肝細(xì)胞廣泛脂肪變性、壞死(p＜0.01)，Masson染色見藍(lán)色膠原纖維明顯增加(p＜0.01)；免疫組織化檢測表明模型組大鼠肝組織Smad3蛋白表達(dá)明顯增強(qiáng)(p＜0.01)；以上結(jié)果均說明造模成功。
2)與模型組相比，苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組四個單獨(dú)給藥組TGFβ1水平、組織學(xué)積分和肝組織Smad3蛋白表達(dá)均明顯降低(p＜0.05)，膠原面積顯著降低(p＜0.01)；KLH組合物I各劑量組、KLH組合物II各劑量組TGFβ1水平、組織學(xué)積分、肝組織Smad3蛋白表達(dá)和膠原面積均顯著降低(p＜0.01)。
3)與苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組單獨(dú)給藥組比較，KLH組合物I各劑量組TGFβ1水平、組織學(xué)積分、肝組織Smad3蛋白表達(dá)和膠原面積均明顯降低(p＜0.05)，與苦參素組、靈芝組、黃芪總皂苷組單獨(dú)給藥組比較，KLH組合物II各劑量組TGFβ1水平、組織學(xué)積分、肝組織Smad3蛋白表達(dá)和膠原面積均明顯降低(p＜0.05)。
結(jié)論與模型組相比，各給藥組預(yù)防性治療的大鼠血清TGFβ1水平顯著減少，大鼠肝組織膠原面積明顯減少，Smad3表達(dá)陽性率明顯減少；且KLH組合物I各劑量組、KLH組合物II各劑量組的效果優(yōu)于苦參素組、靈芝組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組四個單獨(dú)給藥組。
實(shí)驗(yàn)例6 小鼠注射給藥急性毒性實(shí)驗(yàn)(1)實(shí)驗(yàn)方法供試品KLH組合物注射液I，劑型水針，規(guī)格10ml，來源于實(shí)施例4；KLH組合物注射液II，劑型水針，規(guī)格10ml，來源于實(shí)施例4。
受試動物小鼠，每組雌雄各5只，雄性體重25～28g，雌性體重21～24g。
給藥途徑靜脈注射、腹腔注射。
觀察專案死亡數(shù)、一般狀態(tài)、體重、剖檢、半數(shù)致死劑量。
(2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照急性毒性實(shí)驗(yàn)要求進(jìn)行預(yù)試，腹腔注射及靜脈注射兩給藥途徑皆無法測出藥物的半數(shù)致死量，也未見明顯的毒性反應(yīng)，故進(jìn)行日最大給藥量實(shí)驗(yàn)。給藥劑量尾靜脈注射0.2ml/10g，腹腔注射0.2ml/10g，一日2次。
死亡數(shù)未出現(xiàn)死亡。
一般狀態(tài)未見異常變化。
體重于給藥前1天，給藥日，給藥后2、4、6、8、10、12、14天測量；未見異常變化。
剖檢心、肝、肺、腎等組織未見異常變化。
(3)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)中未出現(xiàn)死亡，KLH組合物注射液I、KLH組合物注射液II對雌雄小鼠靜脈和腹腔注射給藥的最大耐受量為0.4ml/10g，相當(dāng)于50kg體重人日最大用量20ml的100倍。表明本品低毒，安全性高。
實(shí)驗(yàn)例7 KLH組合物注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)供試品KLH組合物注射液I，劑型水針，規(guī)格10ml，來源于實(shí)施例4；KLH組合物注射液II，劑型水針，規(guī)格10ml，來源于實(shí)施例4。
考察項(xiàng)目性狀、pH值、澄明度、有關(guān)物質(zhì)、標(biāo)示含量；并在加速實(shí)驗(yàn)6個月和長期實(shí)驗(yàn)期末增加無菌和熱原檢查。
1、影響因素實(shí)驗(yàn)強(qiáng)光照射實(shí)驗(yàn)取供試品，置照度為4500Lx的光照箱內(nèi)放置10天。
高溫實(shí)驗(yàn)取供試品，分別置于40℃、60℃條件下放置10天。
低溫實(shí)驗(yàn)取供試品，在4℃冰箱中放置10天。
上述實(shí)驗(yàn)，分別于第5、10天取樣測定。比較性狀后測試各項(xiàng)指標(biāo)，并將結(jié)果與0天比較。
結(jié)果光照4500Lx條件下放置10天，除有關(guān)物質(zhì)略有升高外，其它各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化。高溫60℃條件下放置10天，外觀變?yōu)榈S色澄明液體，標(biāo)示含量下降，有關(guān)物質(zhì)略有升高。高溫40℃、低溫4℃條件下放置10天，各項(xiàng)指標(biāo)無明顯變化。
2、加速實(shí)驗(yàn)方法置溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月。在實(shí)驗(yàn)期間分別于第1個月、2個月、3個月、6個月末取樣，比較外觀后，測試各項(xiàng)指標(biāo)，將結(jié)果與0個月比較；并在6個月末增加無菌和熱原檢查。
結(jié)果溫度40℃±2℃、相對濕度75％±5％的條件下放置6個月，除有關(guān)物質(zhì)略有增加，標(biāo)示含量略有下降外，其它各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，加速實(shí)驗(yàn)6個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
3、長期實(shí)驗(yàn)方法置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月。分別于第3個月、6個月、9個月、12個月、18個月，比較外觀后，測試各項(xiàng)指標(biāo)，將結(jié)果與0個月比較；并在18個月末增加無菌和熱原檢查。
結(jié)果溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置18個月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，長期實(shí)驗(yàn)18個月末，熱原、無菌檢查均符合規(guī)定。
結(jié)論由上述考察結(jié)果得出結(jié)論，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中，本發(fā)明藥物組合物注射液比較穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物組合物的制備方法，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)施例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。以下實(shí)施例中各劑型的輔料可以用藥學(xué)上可接受的輔料替換，或者減少、增加。以下實(shí)施例4～11中的靈芝多糖取自實(shí)施例1，黃芪多糖取自實(shí)施例2，黃芪總皂苷取自實(shí)施例3。
實(shí)施例1 靈芝多糖的制備取靈芝藥材，粉碎成粗粒，加水4倍量潤濕過夜，次日煎煮三次，第一次加12倍量水煎煮3小時，第二次加10倍量水煎煮2小時，第三次加10倍量水煎煮1小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.10～1.15，濾過，濾液用Sevage法除蛋白，濾過，濾液加乙醇至含醇量為60％，攪勻，冷藏靜置24小時，濾過，收集濾餅，加適量的水?dāng)嚢枞芙?，濾過，濾液加乙醇至含醇量為85％，攪勻，冷藏靜置24小時，濾過，收集濾餅，加入適量丙酮、乙醇洗滌反復(fù)洗滌多次，抽濾，沉淀加適量水使溶解，超濾，收集分子量大于50000道爾頓的部分，濃縮，真空干燥，即得。
鑒別取本品50mg，加乙醇25ml，加熱回流30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取靈芝對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以石油醚(60～90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。
含量測定對照品溶液的制備精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品適量，加水制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別靜密吸取對照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml、1.2ml，置10ml具塞試管中，加水至2.0ml，精密加入硫酸蒽酮溶液(靜密稱取蒽酮0.1g，加80％硫酸溶液100ml使溶解，搖勻)6ml，搖勻，置水浴中加熱15分鐘，取出，放入水浴中冷卻15分鐘，以相應(yīng)的溶劑為空白，在625nm下測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備取本品20mg，置50ml量瓶中，加水溶解，稀釋至刻度，搖勻即得。
測定法精密吸取供試品溶液2ml，置10ml具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線下測定方法，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液的葡萄糖的重量，計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得靈芝多糖三批樣品，其得率和含量見下表。
表6 靈芝多糖得率和含量測定結(jié)果
實(shí)施例2 黃芪多糖的制備取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達(dá)到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達(dá)到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產(chǎn)生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調(diào)節(jié)pH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產(chǎn)生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環(huán)。
含量測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備稱取經(jīng)105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制精密量取標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1ml～0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置水浴中加熱15min，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對照，在490nm波長處測定吸收值，計(jì)算回歸方程。
測定方法取黃芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測定吸收值，依回歸方程計(jì)算多糖的含量。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，其得率和含量見下表。
表7 黃芪多糖的得率和含量測定結(jié)果
實(shí)施例3 黃芪總皂苷的制備取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當(dāng)于原藥材10g，用注射用水稀釋至每1ml相當(dāng)于原藥材1g，冷藏放置12小時，濾過，濾液減壓濃縮、真空干燥，即得。
分別制得三批黃芪總皂苷，提取物得率和含量結(jié)果見下表6。
鑒別一取本品0.01g，加甲醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內(nèi)徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)铀?0ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状?.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇—水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點(diǎn)；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點(diǎn)。
鑒別二取本品0.01g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至5～6，用乙酸乙酯15ml振搖提取，分取乙酸乙酯液，用鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干，殘?jiān)右宜嵋阴?ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷—甲醇(10∶1)作為展開劑，展開，取出，涼干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)。
含量測定總皂苷的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷干品0.1mg)。
供試品溶液的制備取本品0.1g，精密稱定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状既芙猓浦?5ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法精密量取對照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml納氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛—冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長處測定吸光度，計(jì)算，即得。
黃芪甲苷的含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙腈—水(32∶68)為流動相；蒸發(fā)光散射檢測器。理論板數(shù)以黃芪甲苷峰計(jì)算不低于4000。
對照品溶液的制備精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品0.04g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇40ml，冷浸過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘?jiān)铀?0ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀?ml使溶解，放冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內(nèi)徑1.5cm，長12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，以外標(biāo)兩點(diǎn)對數(shù)方程計(jì)算，即得。
根據(jù)上述工藝，制得黃芪提取物三批樣品，其得率和含量見下表。
表8 黃芪總皂苷的得率和含量測定結(jié)果
實(shí)施例4 KLH組合物水針劑的制備KLH組合物I處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 214.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g注射用水 加至10000ml
共制備 1000支
KLH組合物I處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 45.9g(相當(dāng)于靈芝3kg)黃芪多糖 428.0g(相當(dāng)于黃芪40kg)聚山梨酯80 20g注射用水 加至10000ml
共制備 1000支KLH組合物II處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 50g注射用水 加至10000ml
共制備 1000支KLH組合物II處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 137.7g(相當(dāng)于靈芝9kg)黃芪總皂苷 106.0g(相當(dāng)于黃芪10kg)聚山梨酯80 50g注射用水 加至10000ml
共制備 1000支制備工藝提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；將靈芝多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全；將苦參素和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解；合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量；加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾；檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；將溶液熔封于玻璃安瓿中；100℃流通蒸汽滅菌30分鐘；趁熱將樣品放入0.01％的亞甲藍(lán)溶液中檢漏；燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例5 KLH組合物粉針劑的制備KLH組合物I處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 214.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g甘露醇 400g無菌注射用水 加至5000ml
共制備 1000支
KLH合物I處方2苦參素 200.0g靈芝多糖 45.9g(相當(dāng)于靈芝3kg)黃芪多糖 428.0g(相當(dāng)于黃芪40kg)聚山梨酯80 20g甘露醇 400g無菌注射用水 加至5000ml
共制備 1000支KLH組合物II處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g甘露醇 400g無菌注射用水 加至5000ml
共制備 1000支KLH組合物II處方2苦參素 200.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g甘露醇 400g無菌注射用水 加至5000ml
共制備 1000支制備工藝首先將配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，膠塞等進(jìn)行無菌處理；按照處方量稱取原、輔料；將靈芝多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全，將苦參素和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解，合并上述溶液，補(bǔ)加無菌注射用水至全量；加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；經(jīng)0.22um的微孔濾膜精濾；檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；分裝于抗生素玻璃瓶中，半壓塞。將樣品放入凍干機(jī)中冷凍干燥。預(yù)凍-45℃5小時，低溫真空干燥-45℃～0℃20小時，然后升溫至25℃真空干燥3小時；凍干結(jié)束，壓塞，軋蓋；成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例6 KLH組合物氯化鈉輸液的制備KLH組合物I處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 214.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶KLH組合物I處方2苦參素 200.0g靈芝多糖 137.7g(相當(dāng)于靈芝9kg)黃芪多糖 107.0g(相當(dāng)于黃芪10kg)聚山梨酯80 20g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶KLH組合物Ⅱ處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶KLH組合物II處方2苦參素 800.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶制備工藝前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；將靈芝多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全，將苦參素和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解，將氯化鈉用適量注射用水溶解完全，合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量；加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾；檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；灌裝于100ml的輸液瓶中；115℃熱壓滅菌30分鐘；燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例7 KLH組合物葡萄糖輸液的制備KLH組合物I處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 214.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶KLH組合物I處方2苦參素 800.0g靈芝多糖 45.9g(相當(dāng)于靈芝3kg)黃芪多糖 428.0g(相當(dāng)于黃芪40kg)聚山梨酯80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶KLH組合物II處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶KLH組合物II處方2苦參素 800.0g靈芝多糖 137.7g(相當(dāng)于靈芝9kg)黃芪總皂苷 106.0g(相當(dāng)于黃芪10kg)聚山梨酯80 20g葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml
共制備 1000瓶制備工藝提前一天處理配液用的管道及容器等，臨用前再用新鮮的注射用水沖洗；將靈芝多糖加入配液量30％的注射用水中加熱攪拌溶解完全，將苦參素和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量注射用水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解，合并上述溶液；將葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全，加熱煮沸15分鐘；合并上述溶液，補(bǔ)加注射用水至全量；加入配液量0.1％的針用活性炭，加熱攪拌15分鐘；經(jīng)砂濾棒過濾脫炭。測定并調(diào)節(jié)溶液的pH值；經(jīng)0.45um的微孔濾膜精濾；檢查溶液的澄明度，半成品化驗(yàn)；灌裝于100ml的輸液瓶中；115℃熱壓滅菌30分鐘；燈檢，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例8 KLH組合物片劑的制備KLH組合物I處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 214.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)淀粉 40g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 5.0g羧甲淀粉鈉 10.0g
.共制備 2000片KLH組合物I處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 107.0g(相當(dāng)于黃芪10kg)淀粉 40g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 5.0g羧甲淀粉鈉 10.0g
.共制備 2000片KLH組合物II處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)淀粉 40g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 5.0g羧甲淀粉鈉 10.0g
共制備 2000片KLH組合物II處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 424.0g(相當(dāng)于黃芪40kg)淀粉 40g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 5.0g羧甲淀粉鈉 10.0g
共制備 2000片制備工藝將靈芝多糖、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)和若參素分別粉碎過100目篩備用；按照處方量稱取原、輔料；將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；將黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、苦參素、靈芝多糖、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；過20目篩制顆粒；60℃的條件下烘干；干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂和羧甲淀粉鈉，過18目篩整粒，混合均勻；取樣，半成品化驗(yàn)；按照化驗(yàn)確定的片重壓片；成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例9 KLH組合物膠囊劑的制備KLH組合物I處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 214.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)淀粉 20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂5.0g
共制備 2000粒KLH組合物I處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 45.9g(相當(dāng)于靈芝3kg)黃芪多糖 107.0g(相當(dāng)于黃芪10kg)淀粉 20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 5.0g
共制備 2000粒KLH組合物II處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)淀粉 20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 5.0g
共制備 2000粒
KLH組合物II處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 45.9g(相當(dāng)于靈芝3kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)淀粉 20.0g微晶纖維素 60.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 5.0g
共制備 2000粒制備工藝將靈芝多糖、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)和苦參素分別粉碎過100目篩備用；按照處方量稱取原、輔料；將羥丙甲纖維素溶于水中制成2％的水溶液備用；將黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、苦參素、靈芝多糖、淀粉、微晶纖維素混合均勻，加入2％HPMC水溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材；過20目篩制顆粒；顆粒在60℃的條件下烘干；干燥好的顆粒加入硬脂酸鎂，過18目篩整粒，混合均勻；取樣，半成品化驗(yàn)；按照化驗(yàn)確定的裝量裝入膠囊；成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例10 KLH組合物顆粒劑的制備KLH組合物I處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 214.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)糖粉 900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包KLH組合物I處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 107.0g(相當(dāng)于黃芪10kg)糖粉 900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包KLH組合物II處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)糖粉 900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包
KLH組合物II處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 137.7g(相當(dāng)于靈芝9kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)糖粉 900.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包制備工藝將蔗糖粉碎過100目篩備用，將靈芝多糖、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)和苦參素分別粉碎過100目篩備用；按照處方量稱取原、輔料；將靈芝多糖、黃芪多糖(或黃芪總皂苷)、苦參素與糖粉以等量遞加的方法混合均勻，加入2％HPMC50％乙醇溶液適量，攪拌均勻，制成適宜軟材，過20目篩制顆粒；顆粒在60℃的條件下烘干；干顆粒過18目篩整粒；取樣，半成品化驗(yàn)顆粒中主藥的含量，確定裝量；包裝，成品全檢，包裝入庫。
實(shí)施例11 KLH組合物口服液體劑的制備KLH組合物I處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪多糖 214.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g苯甲酸鈉 15g甜菊甙 20g純化水 加至10000ml
共制備 1000支KLH組合物I處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 137.7g(相當(dāng)于靈芝9kg)黃芪多糖 107.0g(相當(dāng)于黃芪10kg)聚山梨酯80 20g苯甲酸鈉 15g甜菊甙 20g純化水 加至10000ml
共制備 1000支KLH組合物II處方1苦參素 400.0g靈芝多糖 91.8g(相當(dāng)于靈芝6kg)黃芪總皂苷 212.0g(相當(dāng)于黃芪20kg)聚山梨酯80 20g苯甲酸鈉 15g甜菊甙 20g純化水 加至10000ml
共制備 1000支
KLH組合物II處方2苦參素 400.0g靈芝多糖 137.7g(相當(dāng)于靈芝9kg)黃芪總皂苷 106.0g(相當(dāng)于黃芪10kg)聚山梨酯80 20g苯甲酸鈉 15g甜菊甙 20g純化水 加至10000ml
共制備 1000支制備工藝將靈芝多糖加入配液量30％的水中加熱攪拌溶解完全，將苦參素和黃芪多糖(或黃芪總皂苷)加入少量水，加入處方量的聚山梨酯80加熱攪拌溶解，合并上述溶液；將苯甲酸鈉和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全；合并上述兩個溶液，補(bǔ)加水至全量；過0.8um的微孔濾膜過濾；半成品化驗(yàn)；灌裝，成品全檢，包裝入庫。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，制成該組合物所含有效成分的原料藥的組成為苦參素100～1600份、靈芝500～24000份、黃芪1000～80000份。
2.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，原料藥的重量份數(shù)為苦參素200～800份、靈芝1000～12000份、黃芪10000～40000份。
3.如權(quán)利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，原料藥的重量份數(shù)為苦參素400份、靈芝3000～9000份、黃芪20000份。
4.如權(quán)利要求1～3所述的任一藥物組合物的制備方法，其特征在于，所述的靈芝和黃芪可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到總提取物，總提取物再與苦參素和藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任一制劑，總提取物中所含的主要有效成分為多糖或多糖和總皂苷，主要有效成分的總含量不低于30％。
5.如權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可以由下列原料藥制成苦參素、靈芝多糖和黃芪多糖或黃芪總皂苷，其重量配比為苦參素100～1600份、靈芝多糖2.5～700份、黃芪多糖5～1600份；或者為苦參素100～1600份、靈芝多糖2.5～700份、黃芪總皂苷5～1600份。
6.如權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，其原料藥的重量配比為苦參素200～800份、靈芝多糖5～350份、黃芪多糖50～800份；或者為苦參素200～800份、靈芝多糖5～350份、黃芪總皂苷50～800份。
7.如權(quán)利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，其原料藥的重量配比為苦參素400份、靈芝多糖15～250份、黃芪多糖100～400份；或者為苦參素400份、靈芝多糖15～250份、黃芪總皂苷100～400份。
8.如權(quán)利要求5～7所述的任一藥物組合物，其特征在于，所述的靈芝多糖中多糖的含量不低于50％；所述的黃芪多糖中多糖的含量不低于30％；所述的黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，其中黃芪甲苷的含量不低于1％。
9.如權(quán)利要求1～3、5～7所述的任一藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以與藥學(xué)上可接受的輔料混合制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
10.如權(quán)利要求1～3、5～7所述的任一藥物組合物在制備治療肝臟疾病的藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種新的藥物組合物及其制備方法，該藥物組合物主要由苦參素、靈芝和黃芪制成，其重量配比為苦參素100～1600份、靈芝500～24000份、黃芪1000～80000份?；蛘哂煽鄥⑺?、靈芝多糖、黃芪多糖或黃芪總皂苷制成，其重量配比為苦參素100～1600份、靈芝多糖2.5～700份、黃芪多糖5～1600份；或者為苦參素100～1600份、靈芝多糖2.5～700份、黃芪總皂苷5～1600份。該藥物組合物可以制成各種藥學(xué)上可接受的劑型，優(yōu)選注射劑或口服制劑。該藥物組合物具有保肝、抗病毒、提高免疫力、抗炎等作用，可以用于制備治療急慢性肝炎和活動性肝硬化的藥物。
文檔編號A61P31/20GK1977886SQ20061016345
公開日2007年6月13日 申請日期2006年12月4日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月5日
發(fā)明者黃振華 申請人:黃振華