專利名稱：：旋覆花總多糖制備、及其通便、排毒的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及旋覆花植物總多糖的制備方法，及其通便、排毒的用途。技術(shù)背景旋覆花(包括/nw/flysj//2/ca和Znw7a6r/fa/in/caJ屬菊科植物。具有消痰、下氣、軟堅(jiān)和行水之功效。文獻(xiàn)報道旋覆花含有倍半萜及其內(nèi)酯、二薛、三萜和黃酮類成分(天然產(chǎn)物研究和開發(fā)，2005,17(6):804-807;黃泰康，常用中藥成分與藥理手冊，p1608,1994)。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，旋覆花(//iz/a》/7//z/ca)水提物具有顯著降血糖和降血脂作用(5/o7.^/7/，2006，29(3):455—459)，并申請發(fā)明專利(專利申請?zhí)?00510069547.8)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明人采用水或含有機(jī)溶劑的水溶液提取旋覆花(包括/力Wa力;n'/z/ca和//7i//fl6W^/7//ca)植物(包括花序、莖和葉)獲得水提物，再經(jīng)有機(jī)溶劑沉淀獲得旋覆花總多糖。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)旋覆花總多糖無毒，具有明顯潤腸、通便、排毒的功效。在上述發(fā)現(xiàn)的基礎(chǔ)上完成了本發(fā)明。因此，在第一方面，本發(fā)明涉及制備旋覆花總多糖的方法，包括如下步驟(a)含水溶劑提取旋復(fù)花植物材料，獲得旋復(fù)花的水提取物，(b)將所得提取物用有機(jī)溶劑沉淀。在一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述旋復(fù)花植物材料是旋復(fù)花植物的地上部分，優(yōu)選花序。在具體實(shí)施方案中，步驟(a)所述含水溶劑是水或者舍有有機(jī)溶劑的水溶液，其中有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它們的任何組合。在另一個具體實(shí)施方案中，步驟(b)中沉淀旋覆花總多糖的有機(jī)溶劑可以是曱醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合。在一些實(shí)施方案中，在用含水溶劑提取旋復(fù)花植物材料之前用有機(jī)溶劑如乙醇如95%的乙醇提取該旋復(fù)花植物材料。不限于理論，先用有機(jī)溶劑提取可以去除旋覆花植物中脂溶性成分。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法還包括將步驟(b)的產(chǎn)物透析、離心和濃縮干燥。在一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法包括將旋覆花植物材料粉碎，用五倍重量以上的水浸泡1-2小時，常壓煎煮0.5-2小時，過濾，濾液用有機(jī)溶劑(例如曱醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合)沉淀24-48小時后離心，沉淀用2-10倍重量水溶解、離心，上清液透析，透析時間大于48小時(例如48-72小時)，透析后離心，上清液濃縮干燥獲得旋覆花總多糖。另一方面，本發(fā)明還涉及可通過本發(fā)明上述方法獲得的旋覆花總多糖。另一方面，本發(fā)明還涉及旋復(fù)花總多糖，其特征在于所述總多糖具有附圖l或2的特征。另一方面，本發(fā)明還涉及用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的組合物，其含有本發(fā)明的旋復(fù)花總多糖，任選地，還含有食用或藥用栽體或賦形劑。優(yōu)選地，所述組合物是藥物組合物、保健組合物、食品組合物、或者飲料組合物。另一方面，本發(fā)明還涉及本發(fā)明的旋復(fù)花總多糖或者含有旋復(fù)花總多糖的組合物在制備用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的產(chǎn)品中的用途。其中優(yōu)選的是，所述產(chǎn)品是藥物、保健品、食品、或者飲料。本發(fā)明旋覆花植物總多糖具有潤腸、通便和排毒之用途。實(shí)驗(yàn)表明，旋覆花總多糖能明顯促進(jìn)胃腸蠕動、減少食物在胃腸消化和吸收時間，加強(qiáng)毒素和糞便的排出，減少毒素吸收。旋覆花植物總多糖可用于通便、排毒的用途。圖1為實(shí)施例2制備的旋復(fù)花總多糖DEAE-纖維素柱層析圖，見實(shí)施例3。--曲線表示收集的洗脫液用苯酚-硫酸法顯色后，在490nm波長處檢測含有糖的吸收峰；--曲線表示收集的洗脫液在280nm波長處檢測的吸收峰。其中A處代表用水進(jìn)行洗脫得到的吸收峰；Bl和B2代表用0.25mol/L碳酸氫鈉進(jìn)行洗脫得到的吸收峰；C代表用0.50mol/L碳酸氫鈉進(jìn)行洗脫得到的吸收峰；D代表用0.1Omol/L氫氧化鈉進(jìn)行洗脫得到的吸收峰。圖2為圖1的局部放大圖。具體實(shí)施方案根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"總多糖"是指寡糖，多糖，及糖復(fù)合物。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"糖復(fù)合物"是指含有糖成分的復(fù)合分子，如糖和肽鏈共價結(jié)合形成的糖蛋白、蛋白聚糖和肽聚糖，糖與脂類共價結(jié)合形成的糖脂和脂多糖等。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"產(chǎn)品"包括功能性食品，保健品或藥品。本發(fā)明旋覆花總多糖通?？梢栽诓捎煤軇┑乃芤禾崛⌒?復(fù))花(包括J/w/aj'flp/zn'ca和//7i//fl6W"/7/z/ca)植物(包括花序、莖和葉)獲得水提物后，再經(jīng)有機(jī)溶劑沉淀獲得。旋復(fù)花水提物可通過如下方法獲得。典型地，制備旋復(fù)花的水提取物的方法包括獲得旋復(fù)花植物材料；用含水溶劑提取旋復(fù)花植物材料，獲得旋復(fù)花的水提取物?？赏ㄟ^煎煮法、浸漬法、滲漉法、或水蒸氣蒸鎦法等提取(或者浸出)旋復(fù)花植物材料。在一個具體實(shí)施方案中，用含水溶劑提取旋復(fù)花植物材料包括水溶劑浸泡旋復(fù)花植物材料；(2)分離液相和固相；(3)任選地，重復(fù)步驟(1)和(2)—次或多次(例如重復(fù)l-數(shù)次、l-5次、l-2次、2-5次、3次、4次)；(4)任選地，合并液相；和(5)任選地，將由步驟(2)或者步驟(4)得到的液相濃縮。在步驟(l)中，所述適當(dāng)條件可通過試驗(yàn)確定。溫度通常為大約0-100r，例如大約0-80X:,優(yōu)選大約0-60。C，例如大約4-5(TC，如大約15-40X:、大約20-30匸，方便的是大約室溫，也可以是大約60-100t;。壓力通常為大約0.1個大氣壓-5個大氣壓，例如大約0.5個大氣壓-3個大氣壓，例如大約1個大氣壓，方便的是大約常壓。漫泡時間通常是至少大約1小時，長至例如10天，例如大約6小時-5天，大約12-96小時，例如大約24、48、72小時，或者其中的任何時間，優(yōu)選不短于24小時。旋復(fù)花植物材料與含水溶劑的重量體積比通常為大約1:l到大約1:100(千克/升)，例如大約1:l到大約1:50、大約1:2到大約1:40，優(yōu)選大約1:5到大約1:20，更優(yōu)選大約1:5到大約1:15(千克/升)。優(yōu)選在浸泡時攪拌，例如多次攪拌或者連續(xù)攪拌。步驟(2)中的分離可通過本領(lǐng)域已知的任何方法來實(shí)現(xiàn)，包括但不限于，過濾、離心、自然沉降等。步驟(5)的濃縮可通過本領(lǐng)域已知的任何方法來實(shí)現(xiàn)。這種濃縮沒有特別的限制，前提是不破壞活性成分，例如，該濃縮可以是減壓濃縮。溫度可以在大約or到大約801C，例如大約室溫到大約80X:，優(yōu)選不超過大約60r，例如大約01C到大約60X:，例如大約50-601C，如大約55t:。步驟(5)的濃縮也可以是冷凍干燥。一種常見的濃縮方法是蒸發(fā)，例如常壓蒸發(fā)、減壓蒸發(fā)、薄膜蒸發(fā)等。濃縮之后可以進(jìn)行干燥，例如，常壓干燥、減壓干燥、噴霧干燥、冷凍干燥等。干燥不是必需的步驟，但在某些實(shí)施方案中是優(yōu)選的。在有些實(shí)施方案中，濃縮步驟也可以省略。例浸出液進(jìn)行后續(xù)步驟(沉淀等)。在本發(fā)明方法中，所述旋復(fù)花植物可以是""/a力pZ/2/ca或者^r/ra/2//ca或者它們的組合。在本發(fā)明方法中，所述旋復(fù)花植物材料可以是旋復(fù)花植物全株或其任何部分，例如其器官、組織、或細(xì)胞，包括花、果實(shí)、種子、莖、葉、根，優(yōu)選是旋復(fù)花植物的地上部分，例如花序。旋復(fù)花植物材料可以是藥材，也可以是生藥。旋復(fù)花植物材料可以是組織培養(yǎng)物、細(xì)胞培養(yǎng)物。旋復(fù)花植物可以是天然的或者轉(zhuǎn)基因的。旋復(fù)花植物材料可以是干燥的或者新鮮的。在本發(fā)明的提取方法中，所述旋復(fù)花植物材料可以是經(jīng)過預(yù)先處理的。這些處理包括物理處理、化學(xué)處理、生物處理等。例如，旋復(fù)花植物材料可以預(yù)先進(jìn)行簡單洗滌、粉碎。在一個實(shí)施方案中，在用含水溶劑提取旋復(fù)花植物材料之前可以預(yù)先用有機(jī)溶劑提取(例如簡單地提取)。有機(jī)溶劑包括但不限于石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮或正丁醇或它們的任何組合等，如乙醇如95%的乙醇。在本發(fā)明中，所述"含水溶劑"是任何含水的溶劑，它可以是水或者含有有機(jī)溶劑的水溶液；其中有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、丙酮或正丁醇或它們的任何組合。水可以是例如蒸餾水、離子交換水、或者自來水。含水溶劑還可以是添加適當(dāng)其它物質(zhì)的提取用水。其它物質(zhì)可以是例如有機(jī)溶刑、緩沖劑等。優(yōu)選地，所述含水溶劑是水或者含有有機(jī)溶劑的水溶液。含水溶劑中水的含量(體積比)可以是例如至少大約5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或者更高，優(yōu)選至少大約10%,更優(yōu)選至少大約20%、50%或者更多。在一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明旋復(fù)(覆)花植物水提取物的制備方法是將旋復(fù)(覆)花植物的地上部分在常溫、常壓下，用水或含有機(jī)溶劑的水溶液浸提獲得旋復(fù)(覆)花提取浸骨。生藥旋復(fù)(覆)花與漫泡用水或含有機(jī)溶劑的水溶液的重量體積比推薦為1:5-15(千克/升)。浸泡時間推薦大于24小時，浸泡溫度推薦ox:-60匸。所用有機(jī)溶劑包括但不限于甲醇、乙醇、丙醇、丙酮及正丁醇。濃縮可以是將萃取液減壓濃縮，溫度推薦等于或低于60'C進(jìn)行。在另一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明旋復(fù)(覆)花植物水提取物的制備方法是將旋覆花植物材料粉碎，用五倍重量以上的水浸泡l-2小時，常壓煎煮O.5-2小時，過濾，獲得濾液用于沉淀總多糖。獲得旋覆花水提物后，再經(jīng)有機(jī)溶劑沉淀獲得總多糖。沉淀旋覆花總多糖的有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合。一個例子是使用有機(jī)溶劑(例如95%乙醇或者無水乙醇)，使得終濃度為例如60%-95%,例如70%-90%，例如80%或者85%(例如80%或者85%乙醇)。沉淀時間為例如至少12小時，例如至少24小時，例如12-48小時。沉淀的條件可以通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)來確定，以獲得總多糖為準(zhǔn)。本發(fā)明的旋覆花總多糖制備方法還包括將步驟(b)的產(chǎn)物透析、離心和濃縮干燥。例如，將(b)的沉淀用2-10倍重量水溶解、離心，上清液透析，透析時間通常大于48小時(例如48-72小時)，透析后離心，上清液濃縮干燥獲得旋覆花總多糖。在一個具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的旋覆花總多糖制備方法包括將旋覆花植物材料粉碎，用五倍重量以上的水浸泡1—2小時，常壓煎煮O.5-2小時，過濾，濾液用有機(jī)溶劑(例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合)沉淀24-48小時后離心，沉淀用2-10倍重量水溶解、離心，上清液透析，透析時間大于48小時(例如48-72小時)，透析后離心，上清液濃縮千燥獲得旋覆花總多糖。所得總多糖可以進(jìn)一步配制成目的組合物，如藥物組合物、保健組合物、食品組合物、或者飲料組合物。在另一方面，本發(fā)明涉及含有本發(fā)明旋復(fù)花水總多糖的組合物。優(yōu)選地，該組合物還含有可食用或者藥用賦形刑或者栽體。在具體實(shí)施方案中，所述組合物是藥物組合物、保健組合物、食品組合物、或者飲料組合物。將本發(fā)明旋復(fù)花總多糖配制成目的組合物的方法是本領(lǐng)域已知的。根據(jù)不同的需要，本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員可以選擇適當(dāng)?shù)奶砑游?、配制方法、劑型、單位劑量等。?dāng)本發(fā)明組合物是藥物組合物時，可以含有適當(dāng)?shù)乃幱觅x形劑、載體或者稀釋劑?？梢圆捎弥扑庮I(lǐng)域公知的技術(shù)進(jìn)行制劑。本發(fā)明藥物組合物可以采用多種劑型，這往往取決于給藥途徑。例如，本發(fā)明旋復(fù)花總多糖可用于制備治療糖尿病和高血脂的藥品，包括口服藥和腸胃外給藥用的制劑，如注射劑。本發(fā)明藥物組合物可以通過多種途徑給藥，例如口服、腸胃外給藥等。給藥方案和劑量取決于多種因素，如給藥途徑、患者健康狀況等，并且可由醫(yī)生確定。劑量范圍可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)實(shí)驗(yàn)確定。本發(fā)明藥物組合物可以用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥。另一方面，本發(fā)明還涉及旋復(fù)花植物材料或者其提取物(優(yōu)選總多糖)或者含有這種提取物的組合物在制備用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的產(chǎn)品中的用途。其中優(yōu)選的是，所述產(chǎn)品是藥物、保健品、食品、或者飲料。另一方面，本發(fā)明涉及一種潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的方法，包括向患者給予旋復(fù)花植物材料或者其提取物(優(yōu)選總多糖)或者含有這種提取物的組合物或者其它由旋復(fù)花植物材料加工后的產(chǎn)ff口o"患者"包括任何動物，優(yōu)選哺乳動物，特別是寵物、飼養(yǎng)動物。在一個優(yōu)選實(shí)施方案這，患者是人。本發(fā)明的旋復(fù)花植物材料或者其提取物(優(yōu)選總多糖)或者含有這種提取物的組合物或者其它由旋復(fù)花植物材料加工后的產(chǎn)品的用途不僅包括治療，也包括預(yù)防例如預(yù)防便秘。實(shí)施例下面的實(shí)施例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明，但其不意味著對本發(fā)明有任何限制。實(shí)施例1旋覆花1公斤用10升水室溫浸泡48小時，過濾。殘?jiān)儆?升水繼續(xù)浸泡24小時，過濾，合并濾液，60X:減壓濃縮至2-4升。然后用95%的乙醇沉淀，乙醇終濃度為80%，醇沉24小時。離心，沉淀用2.5升水溶解，離心，無離子水透析48-72小時。60t:減壓濃縮后冷凍干燥，即獲得旋覆花總多糖7.33克(得率0.733%)。實(shí)施例2旋覆花1公斤，加入IO升95%乙醇室溫浸泡72小時，過濾，殘?jiān)儆?升95%乙醇繼續(xù)浸泡48小時，過濾。殘?jiān)匀粵龈苫?0t:烘干后，用10升水室溫浸泡48小時，過濾。殘?jiān)儆?升水繼續(xù)浸泡24小時，過濾。合并濾液，60C減壓濃縮至2-4升。然后用95%的乙醇沉淀，乙醇終濃度為80%，醇沉24小時。離心，沉淀用2.5升水溶解，離心，無離子水透析48-72小時。60匸減壓濃縮后冷凍千燥，即獲得旋覆花總多糖5.51克(得率O.551%)。實(shí)施例3稱取實(shí)施例2制備的旋覆花總多糖1克，用10毫升水溶解，上DEAE-纖維素柱(4.5x32cm，050815)，依次采用水、0.1MNaHC(h、0.25MNa跳、0.5MNaHC03和0.1MNaOH洗脫液進(jìn)行洗脫，流速為10ml/min，同時采用苯酚-硫酸法和280nm紫外吸收法檢測多糖。收集洗脫峰，用蒸餾水透析，分別在6ox:減壓濃縮，冷凍干燥。柱層析圖謙見附圖1和2。實(shí)施例4昆明小鼠30只，雌雄各半，22±2克，禁食12小時(不禁水)后隨機(jī)分成3組，分別灌胃給予含有5%炭末的生理鹽水、旋覆花總多糖(實(shí)施例2制備的)(200mg/kg)和陽性藥溴吡啶斯的明(40mg/kg)。給藥30分鐘時脫臼處死小鼠，打開腹腔，將自胃賁門至直腸末端完整摘出。剪開腸系膜，不加牽引平鋪于加有生理鹽水的玻璃板上，測胃腸道全長，同時記錄前沿到賁門的距離，然后計算炭末推進(jìn)率。結(jié)果見表1。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明旋覆花總多糖顯著促進(jìn)小鼠胃腸蠕動，加強(qiáng)糞便排出。"m*,0/、炭末前沿與賁門的距離，0/炭末推進(jìn)率(％)--胃腸道全長"~一xioo%表l旋覆花總多糖對小鼠胃腸推進(jìn)功能的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>實(shí)施例5昆明小鼠30只，雌雄各半，22±2克，禁食12小時(不禁水)后隨機(jī)分成3組，分別灌胃給予含有5%炭末的生理鹽水、旋覆花總多糖(實(shí)施例2制備的)(200mg/kg)和陽性藥溴吡啶斯的明(40mg/kg)。每只小鼠置于鋪有濾紙的塑料盒中，觀察小鼠出現(xiàn)黑便的時間、形狀，記錄給藥6小時內(nèi)每只小鼠排便次數(shù)。結(jié)果見表2。實(shí)驗(yàn)表明旋覆花總多糖能促進(jìn)排便，加快體內(nèi)廢毒物排泄，減少毒素吸收。表2旋復(fù)花總多糖對小鼠排便時間和次數(shù)的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注與生理鹽水組相比，*P<0.05，**P<0.01，"*P<0.001，n-10權(quán)利要求1.制備旋覆花總多糖的方法，包括如下步驟(a)含水溶劑提取旋復(fù)花植物材料，獲得旋復(fù)花的水提取物，(b)將所得提取物用有機(jī)溶劑沉淀。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述旋復(fù)花植物材料是旋復(fù)花植物的地上部分，優(yōu)選花序。3.權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)的方法，其中所述含水溶劑是水或者含有有機(jī)溶劑的水溶液，其中有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙酵、丙醇、丙酮或正丁醇或它們的任何組合；步驟(b)中沉淀旋覆花總多糖的有機(jī)溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合。4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的方法，其中在用含水溶劑提取旋復(fù)花植物材料之前用有機(jī)溶劑如乙醇如95%的乙醇提取該旋復(fù)花植物材料。先用有機(jī)溶劑提取旋覆花植物中脂溶性成分。5.權(quán)利要求l-4任一項(xiàng)的方法，還包括將步驟(b)的產(chǎn)物透析、離心和濃縮干燥。6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的方法，包括將旋覆花植物材料粉碎，用五倍重量以上的水浸泡1-2小時，常壓煎煮0.5-2小時，過濾，濾液用甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、丙酮或乙酸乙酯或它們的任何組合沉淀24-48小時后離心，沉淀用2-10倍重量水溶解、離心，上清液透析，透析時間大于48小時(例如48-72小時)，透析后離心，上清液濃縮干燥獲得旋復(fù)花總多糖。7.可通過權(quán)利要求l-6任一項(xiàng)的方法獲得的旋覆花總多糖。8.旋復(fù)花總多糖，其特征在于所述總多糖具有附圖1或2的特征。9.用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的組合物，其含有權(quán)利要求7或8的旋復(fù)花總多糖，任選地，還含有食用或藥用栽體或賦形劑。10.權(quán)利要求7或8的旋復(fù)花總多糖或者權(quán)利要求9的組合物或者用含水溶劑提取旋復(fù)花植物材料得到的提取物在制備用于潤便、治療便秘、排毒和/或減肥的產(chǎn)品中的用途。全文摘要本發(fā)明涉及旋覆花植物總多糖制備方法，及其潤腸、通便和排毒之用途。實(shí)驗(yàn)表明旋覆花總多糖能明顯促進(jìn)胃腸蠕動、減少食物在胃腸消化和吸收時間，加強(qiáng)毒素和糞便的排出。旋覆花植物總多糖可用于通便、排毒的用途。文檔編號A61K36/28GK101209273SQ20061017158公開日2008年7月2日申請日期2006年12月30日優(yōu)先權(quán)日2006年12月30日發(fā)明者單俊杰,林韶輝,趙毅民申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所;北京蘇里曼醫(yī)藥科技有限公司