專利名稱：甲魚油中ω－3多不飽和脂肪酸的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物有效成分的制備，具體來說，涉及甲魚油中ω-3多不飽和脂肪酸的提取。
背景技術(shù)：
甲魚是我國傳統(tǒng)的上等中草藥村，具有極高的藥用價值，是滋陰補腎的佳品，有滋陰壯陽，軟堅散結(jié)、化淤和延年益壽的功能。甲魚油中富含人體必需脂肪酸ω-3多不飽和脂肪酸，尤其是其中的二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)，被稱為天然的血液凈化劑，具有減少血栓形成、預(yù)防中風(fēng)、預(yù)防動脈硬化及心肌梗死、降低血壓、減緩發(fā)炎、減輕并改善類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、改善并減輕結(jié)腸性結(jié)腸炎等作用。當(dāng)人體內(nèi)有足夠ω-3多不飽和脂肪酸時，可以預(yù)防腫瘤、智力障礙、記憶力下降以及自身免疫性疾病，并有效預(yù)防心血管疾病并提高運動的耐受力。
近年來對甲魚油提取的研究較多，如韓玉謙等(超臨界CO2萃取甲魚油的研究，《中國油脂》，2003，28(10))介紹了用超臨界CO2萃取技術(shù)從甲魚中提取分離甲魚油，探討了影響萃取率的主要因素，并確定了適宜工藝條件為20Mpa，45℃，CO2流量為1.8kg/(h*g)原料，萃取時間為6h，該方法得到的甲魚油中不飽和脂肪酸的含量高達70％以上，其中多不飽和脂肪酸含量大于26％。
由于甲魚油多不飽和脂肪酸中最有醫(yī)藥價值的是EPA和DHA，所以仍然需要對二者進一步提取純化。目前常用的方法均存在一定缺陷，如尿素包合法需先酯化處理，包合步驟復(fù)雜，并且包合過程中可形成致癌物氨基甲酸酯；分子蒸餾法的高溫和長時間會導(dǎo)致多烯酸的氧化和分解；吸附分離法中的洗脫劑易增加污染，不宜大規(guī)模制備。
所以仍需要提供一種操作簡便、效率高、產(chǎn)品穩(wěn)定的甲魚油中ω-3多不飽和脂肪酸的提取方法。

發(fā)明內(nèi)容[要解決的技術(shù)問題]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是如何高效、簡便地從甲魚油中提取ω-3多不飽和脂肪酸。為解決上述問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是利用超臨界CO2萃取與低溫結(jié)晶技術(shù)相結(jié)合，提取甲魚油中的ω-3多不飽和脂肪酸。
本發(fā)明的提取方法包括以下步驟(1)將干燥甲魚油粉碎為直徑為0.1-5.0mm的顆粒，然后在萃取壓力18-22Mpa、溫度40-60℃、以體積/重量計的CO2流量為1.5-3ml/g的條件下進行超臨界CO2萃取3-6h，再在壓力7-9Mpa、溫度35-55℃的條件下進行分離，得到萃取物；(2)往在步驟(1)得到的萃取物中按照體積比(g/ml)1∶4-16的比例加入丙酮，攪拌0.5-2h，再在溫度-60℃至-40℃下放置6-10h，棄去上清液，得ω-3多不飽和脂肪酸提取物。
其中，在步驟(1)中，優(yōu)選的提取條件為萃取壓力為20Mpa，溫度為50℃，CO2流量為1.5-2ml/g，分離壓力為8Mpa，溫度為45℃，萃取時間為5-6h；在步驟(2)中，優(yōu)選的提取條件為在步驟(1)所得提取物中按體積比1∶10-13的比例加入丙酮，攪拌1-2h后于溫度-50℃下放置8-10h。
在步驟(2)中，當(dāng)萃取物與丙酮的比例高于1∶4時，放置的溫度不能低于-50℃，否則混合物會凍結(jié)成膏狀，無上清液析出。當(dāng)萃取物與丙酮的比例低于1∶16時，并不能使最終的提取物中EPA和DHA的含量增加。當(dāng)放置溫度高于-40℃時，含兩個或兩個以上烯鍵的脂肪酸的提取率降低。
另外，在步驟(2)中，棄去的上清液為丙酮溶液，所剩下的沉淀物即為ω-3多不飽和脂肪酸提取物，其中含有的少量丙酮可以通過自然揮發(fā)除去，或者在溫度25-45℃下烘干至無丙酮味即可。
本發(fā)明所述的干燥甲魚油可以通過商品購買得到，如山東省臨清市甲魚養(yǎng)殖基地生產(chǎn)的干燥甲魚油。或者通過已知方法從甲魚中進行提取，如前述的韓玉謙等(超臨界CO2萃取甲魚油的研究，《中國油脂》，2003，28(10))介紹的方法。
所述的超臨界CO2萃取工藝中使用的設(shè)備及氣體均可通過商品購買得到，如美國Applied Separations(ASI)公司生產(chǎn)的超臨界萃取儀，上海德鄰儀器設(shè)備有限公司生產(chǎn)的R-401超臨界萃取系統(tǒng)，江蘇華安超臨界萃取公司生產(chǎn)的HA-221-50-06型超臨界萃取裝置等。在本發(fā)明中，對所涉及的儀器沒有特殊限定。
使用本發(fā)明的提取方法，甲魚油中ω-3多不飽和脂肪酸的提取率為60-75％。
提取物中的EPA和DHA含量可以通過氣相色譜法測定，其含量按重量計為所得提取物的25-30％。本發(fā)明將超臨界CO2萃取技術(shù)與低溫結(jié)晶技術(shù)相結(jié)合提取甲魚油中的有效成分EPA和DHA，操作簡便、萃取條件溫和、無溶劑污染，所得到的提取物無氧化、分解、異構(gòu)化等反應(yīng)，最終的產(chǎn)品無溶劑污染，性質(zhì)穩(wěn)定，適于制備藥品和營養(yǎng)品，具有較高的醫(yī)藥價值。
具體實施方式通過下面給出的本發(fā)明具體實施例可以進一步清楚地理解本發(fā)明，但這些實施例不是對本發(fā)明保護范圍的限制。
實施例1(1)將3.3kg干燥甲魚油粉碎為直徑為2.0mm的顆粒后裝入萃取釜內(nèi)，進行超臨界CO2萃取，萃取壓力為22Mpa，溫度為40℃，CO2流量為1.8ml/g，萃取時間為4h，分離壓力為8Mpa，溫度為45℃，得萃取物；(2)將步驟(1)所得萃取物中按體積比1∶10的比例加入丙酮，攪拌1h后于溫度-60℃下放置8h，棄去上清液，得提取物2.16kg。
本實施例中使用的儀器為江蘇華安超臨界萃取公司生產(chǎn)的HA-221-50-06型超臨界萃取裝置，使用的萃取氣體為北京普萊克斯氣體公司生產(chǎn)的CO2(食品級，純度為99.99％)。
實施例2(1)將4kg干燥甲魚油粉碎后裝入萃取釜內(nèi)，進行超臨界CO2萃取，萃取壓力為20Mpa，溫度為50℃，CO2流量為2ml/g，萃取時間為6h，分離壓力為10Mpa，溫度為40℃，得萃取物；(2)將步驟(1)所得萃取物中按體積比1∶12的比例加入丙酮，攪拌1h后于溫度-50℃下放置10h，棄去上清液，所得沉淀物于35℃烘箱內(nèi)至無丙酮味，得提取物2.99kg。
其他條件同實施例1。
實施例3提取物中EPA和DHA的含量測定按照《中華人民共和國標(biāo)準》中關(guān)于“食品中二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸的測定”(GB/75009.168-2003)的方法，對本發(fā)明提取物中EPA和DHA的含量進行測定，具體操作如下1、供試品溶液的制備取實施例2所得ω-3多不飽和脂肪酸提取物1g，按下列步驟進行處理后作為供試品溶液(1)、皂化將提取物置于50ml具塞容量瓶中，加入正己烷使其充分溶解并定容至10ml，取所得溶液2ml置于10ml具塞試管中，并加入2mol/l氫氧化鉀-甲醇溶液1ml，充分振蕩10min，放入60℃的水浴中加熱2min，然后冷卻至室溫；(2)、甲酯化向上述試管中加入2mol/l鹽酸-甲醇溶液2ml，充分振蕩10min，放入50℃的水浴中加熱2min，棄去下層溶液，再以2ml蒸餾水洗滌上層正己烷溶液并棄去水層；(3)、用無水硫酸鈉對正己烷溶液進行脫水，然后將脫水后的溶液于60℃下濃縮，定容至1ml，作為供試品溶液。
2、對照品溶液的制備取EPA和DHA兩種脂肪酸甲酯標(biāo)準品(美國Nu Chek Prep公司生產(chǎn)，公司貨號分別為U-84-M和U-99-M)，每種標(biāo)準品分別用正己烷配制成0.5、1.0和2.5mg/ml三個濃度的溶液，作為對照品溶液。
3、色譜條件Stabilwax空心石英毛細管柱(30m×0.25mm×0.25μl)(美國Restek公司)；AUTOSYSTEM XL型GC氣譜儀(美國PE公司)；載氣為He，其流量為1.0ml/min；程序升溫從230℃以5℃/min的速度降至225℃，維持5min，再以5℃/min的速度升至250℃；進樣口溫度為250℃，檢測器溫度為260℃，分流比為10∶1，線速30cm/min，衰減16。
4、測定結(jié)果取上述供試品溶液和對照品溶液各1μl，分別進樣，重復(fù)3次，結(jié)果顯示使用本發(fā)明方法得到的提取物中，EPA+DHA的含量為28.92％，其中EPA的含量為11.73％，DHA的含量為17.19％。
權(quán)利要求
1.一種甲魚油中ω-3多不飽和脂肪酸的提取方法，該方法包括以下步驟(1)將干燥甲魚油粉碎為直徑為0.1-5.0mm的顆粒，然后在萃取壓力18-22Mpa、溫度40-60℃、以體積/重量計的CO2流量1.5-3的條件下進行超臨界CO2萃取3-6h，再在壓力7-9Mpa、溫度35-55℃的條件下進行分離，得到萃取物；(2)往在步驟(1)得到的萃取物中按照體積比1∶4-16的比例加入丙酮，攪拌0.5-2h，再在溫度-60℃至-40℃下放置6-10h，棄去上清液，得ω-3多不飽和脂肪酸提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于步驟(1)中萃取壓力為20Mpa，溫度為50℃，CO2流量為1.5-2ml/g，分離壓力為8Mpa，溫度為45℃。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于在步驟(2)中往步驟(1)得到的萃取物中按體積比1∶10-13的比例加入丙酮，攪拌1-2h，再在溫度-50℃下放置8-10h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項權(quán)利要求所述提取方法得到的ω-3多不飽和脂肪酸提取物，其特征在于它的EPA和DHA含量按重量計為25-30％。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種甲魚油中ω－3多不飽和脂肪酸的提取方法，該方法是將超臨界CO
文檔編號A61K35/56GK1986515SQ20061017227
公開日2007年6月27日 申請日期2006年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月30日
發(fā)明者田亞平, 白晶, 汪德清, 鄧心新 申請人:中國人民解放軍總醫(yī)院