專利名稱：一種采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從植物中分離純化藥用活性成分的綠色化學(xué)制備方法，更具體涉及一種采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法。
背景技術(shù)：
梔子為梔子屬(Gardenia)茜草科(Rubiaceae)常綠灌木梔子的果實，為我國大宗傳統(tǒng)中藥材，入選中國衛(wèi)生部首批藥食兩用中藥材名錄，為國家中藥保護(hù)品種清開靈注射液、龍膽瀉肝片和茵膽平肝膠囊的主要藥效成分，是中醫(yī)臨床治療黃疸型肝炎的首選藥物和提取梔子天然色素的原料，盛產(chǎn)于閩、浙、贛、徽、湘等省山區(qū)。
梔子從《本草綱目》到《中國藥典》等歷代醫(yī)藥名著均有記載。梔子內(nèi)服具有瀉火除煩、清熱利尿、涼血解毒等功用，外用能治療扭傷、挫傷，在我國臨床用藥史長達(dá)1600年。
梔子含有環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和有機酸等藥用活性成分。其中，以梔子苷為主要組成成分的環(huán)烯醚萜苷類化合物和綠原酸，具有利膽護(hù)肝、清熱解毒功能，是市場前景廣闊的中藥提取物，廣泛用于中醫(yī)臨床治療黃疸型肝炎。
梔子黃色素是從梔子果實中提取的自然界唯一存在的水溶性類胡蘿卜素類天然色素，主要成分是藏花素和藏花酸等類胡蘿卜素類化合物，成品中還可能存有熊果酸、梔子苷和綠原酸。。
梔子黃色素具有著色力強、色澤鮮艷、色調(diào)自然柔和、穩(wěn)定性好、溶解性強、無異味、無毒副作用、安全性能高等優(yōu)點，廣泛用于食品、果酒、飲料、醫(yī)藥、日用化工、化妝品等，是目前國際上流行的天然食品添加劑，是中草藥行業(yè)、飲料食品工業(yè)、化妝品工業(yè)、藥品工業(yè)不可缺少的天然色素原料。
以梔子苷為原料，采用微生物轉(zhuǎn)化技術(shù)還可以生產(chǎn)梔子京尼平。在此基礎(chǔ)上，利用梔子京尼平與氨基酸反應(yīng)，還可生產(chǎn)梔子藍(lán)色素。梔子藍(lán)色素溶解性好，著色力強，屬于水溶性天然色素。在生產(chǎn)天然梔子藍(lán)色素的過程中，控制不同的轉(zhuǎn)化條件還可生產(chǎn)出天然梔子紅色素。由梔子黃、藍(lán)、紅三元色，可以調(diào)制出諸如梔子綠、梔子紫等色素。因此，進(jìn)行天然色素原料梔子的精深加工開發(fā)，制備含有環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物或有機酸等成分的梔子提取物，具有廣闊的市場前景。
梔子為豐產(chǎn)速生型植物，適應(yīng)性極強，即可人工種植、也可野生于山間。通常，種植第2～3年即可掛果，鮮果畝產(chǎn)可達(dá)200～250Kg，種植第4～5年即進(jìn)入豐產(chǎn)期，鮮果畝產(chǎn)可達(dá)1500～2000Kg。
在中國，梔子資源豐富，價廉易得，藥效明確，民間廣泛用于食物和藥物中，為不可多得的大宗天然藥用植物資源。但每年全國有數(shù)以萬噸的梔子未加以合理利用，浪費了寶貴的資源。為切實實現(xiàn)梔子資源的高效利用和生產(chǎn)的可持續(xù)發(fā)展，研究以梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物或有機酸為主要成分的梔子提取物的制備方法與用途，對于梔子的綜合利用和系列產(chǎn)品開發(fā)具有一定的指導(dǎo)意義。
本發(fā)明將提供一種設(shè)備簡單、樹脂使用壽命長、分離純化效果好、產(chǎn)品收率高、生產(chǎn)成本低的梔子提取物制備方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，該方法不僅有利于梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物或有機酸等活性成分的進(jìn)一步純化、極大提高產(chǎn)品的收率和品質(zhì)，而且能夠明顯延長大孔吸附樹脂的使用壽命、降低制備成本。
本發(fā)明的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法是這樣實現(xiàn)的包括采用親水性溶劑提取梔子粗提物和梔子粗提物的膜分離除雜步驟，其特征在于以梔子粗提物或者經(jīng)膜分離純化的梔子提取物為原料，加水成懸浮液，采用大孔吸附樹脂吸附至飽和，用水洗去極性雜質(zhì)，再用親水性溶劑洗脫目標(biāo)物質(zhì)，濾液經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。
本發(fā)明制備方法的主要優(yōu)點在于一是通過膜分離技術(shù)能有效去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)，從而使含有梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物或有機酸等主要藥用活性成分的梔子粗提物得到進(jìn)一步的純化，并有利于該制品的保存。
二是通過膜分離技術(shù)能有效去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)，從而有利于后續(xù)工藝采用大孔吸附樹脂或聚酰胺進(jìn)一步分離純化梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物或有機酸等主要藥用活性成分，將明顯提高大孔吸附樹脂或聚酰胺對主要藥用活性成分的分離純化效率，將明顯提高單位樹脂或聚酰胺的飽和吸附量，將顯著延長大孔吸附樹脂或聚酰胺的使用壽命，能極大提高產(chǎn)品的收率和品質(zhì)，顯著降低產(chǎn)品的制備成本。
三是組合采用親水性溶劑提取、膜分離除雜的工藝，不僅能工業(yè)化生產(chǎn)梔子粗提物或膜分離純化后的梔子提取物，而且富含蛋白質(zhì)和多糖等大分子雜質(zhì)的膜分離除雜后的濃縮液經(jīng)簡單發(fā)酵處理后可進(jìn)一步用于制備梔子肥料或梔子飼料添加劑產(chǎn)品，從而能真正地安全、簡便、合理、經(jīng)濟(jì)地實現(xiàn)梔子的全組分綜合利用和系列產(chǎn)品的工業(yè)化生產(chǎn)，充分體現(xiàn)出綠色化學(xué)生產(chǎn)的理念和循環(huán)經(jīng)濟(jì)的策略，具有理論新穎、技術(shù)合理、操作安全、工藝簡便、經(jīng)濟(jì)可行、環(huán)境友好等優(yōu)點。
本發(fā)明優(yōu)先選用甲醇或丙酮的優(yōu)點是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丙酮或不同pH值緩沖溶液等親水性溶劑的提取效果相當(dāng)，但相對于其它親水性溶劑而言，甲醇或丙酮的沸點更低、能耗更小，能顯著降低產(chǎn)品的制備成本。
本發(fā)明采用中藥現(xiàn)代化生產(chǎn)技術(shù)提取梔子的主要藥用活性成分制成國際通行的中藥提取物，具有現(xiàn)代中藥產(chǎn)品的“三高”、“三小”和“三便”等優(yōu)點，能適應(yīng)和滿足現(xiàn)代中醫(yī)臨床用藥需求，符合國家倡導(dǎo)的中藥現(xiàn)代化及國際化的產(chǎn)業(yè)政策。
具體實施例方式
本發(fā)明采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，包括梔子粗提物的親水性溶劑提取及其膜分離除雜步驟，其特征在于以梔子粗提物或者經(jīng)膜分離純化的梔子提取物為原料，加水?dāng)嚦蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.05～1.18，然后用大孔吸附樹脂吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4～8倍樹脂量的30～60％終濃度的親水性溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑，真空濃縮成經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。
上述大孔吸附樹脂的骨架的化學(xué)組成可以是聚苯乙烯、聚丙烯酸或酚醛中的一種或幾種，優(yōu)先選用聚苯乙烯或聚丙烯酸。
上述大孔吸附樹脂可以是聚苯乙烯骨架的HZ801、HZ802、HZ803、HZ806、HZ816、HZ818中的一種或幾種。也可以是聚丙烯酸骨架的D101、DK110、D113中的一種或幾種。
本發(fā)明的采用膜分離技術(shù)制備梔子提取物的方法是這樣實現(xiàn)的以親水性溶劑提取的梔子粗提物為原料，加水成懸浮液，使懸浮液比重達(dá)到1.03～1.22，在0.25～0.75MPa下經(jīng)膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。
上述膜分離除雜過程可選用6000截留分子量～0.22μm膜孔徑的分離膜。
上述膜分離除雜過程的分離膜材料可以是無機類、聚砜類、含氟高分子材料類、聚烯烴類、聚酰胺類、甲殼素類或纖維素類膜材料中的一種或幾種混合膜材料，優(yōu)先選用無機陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
本發(fā)明所述的采用親水性溶劑提取梔子粗提物的方法是以鮮梔子或梔子粉末為原料，采用5～15倍梔子干重(W/W)的25～75％親水性溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。
上述親水性溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇或丙酮的一種或幾種混合溶劑，其中優(yōu)先選用甲醇或丙酮，親水性溶劑也可以是不同pH值緩沖溶液。
本發(fā)明各制備物的理化參數(shù)測定方法如下(1)梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的含量采用紫外-可見三波長同時檢測的高效液相色譜儀測定。測定條件Agilent 1100型高效液相色譜儀(DAD二極管陣列檢測器)，Waters Nova-Pak C18色譜柱(Φ3.9×150mm，5μm)，甲醇-0.2％磷酸水溶液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，在60min內(nèi)甲醇比例從15％線性梯度升至100％，然后保持2min。流速1.0mL/min，柱溫34℃，進(jìn)樣量20μL。類胡蘿卜素類化合物、綠原酸和梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的檢測波長分別為440nm、320nm和238nm。
標(biāo)準(zhǔn)品梔子苷、異梔子苷、梔子酸、京尼平龍膽二糖苷購于Yoneyama公司(日本)，藏紅花酸購于Sigma公司，綠原酸、藏紅花素購于中國藥品生物制品檢定所。
經(jīng)測定，實驗所用的福建產(chǎn)梔子(含水量5.3％)中梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸等主要藥用活性成分的含量分別為69.8～77.3g/kg、2.1～3.9g/kg和12.3～15.6g/kg。
(2)多糖含量的測定采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖或D-半乳糖為對照。
(3)蛋白質(zhì)含量的測定采用FoLin-酚法測定，以小牛血清白蛋白為對照。
本發(fā)明制備方法的實施例陳述如下實施例1以福建產(chǎn)梔子為原料，將鮮梔子水洗、干燥(風(fēng)干、烘干或曬干均可)、粉碎、過20～30目篩得梔子粉末，將2.9kg梔子粉末放入提取罐中，用梔子粉末10倍干重(W/W)的40％的甲醇-丙酮(1∶1)水溶液，于68℃條件下回流提取3次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為93.2％、96.3％和93.1％。
接著，先將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫海箲腋∫罕戎剡_(dá)到1.03，然后采用截留分子量為6000聚砜膜，在0.75MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為94.2％、93.9％和97.5％，蛋白質(zhì)去除率為96.8％，多糖去除率為97.2％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用HZ806大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用8倍樹脂量的60％乙醇水溶液，以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率96.2％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率93.2％，梔子綠原酸的回收率95.8％。
實施例2將20～30目梔子粉末2.6kg放入提取罐中，用梔子粉末15倍干重(W/W)的25％甲醇水溶液，于50℃條件下提取2次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為92.3％、92.8％和91.8％。
將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.12，然后采用截留分子量為30000的聚偏氟乙烯膜，在0.60MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為95.3％、94.8％和96.8％，蛋白質(zhì)去除率為95.6％，多糖去除率為96.8％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用HZ801大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用6倍樹脂量的45％乙醇水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率97.2％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率94.5％，梔子綠原酸的回收率98.3％。
實施例3將20～30目梔子粉末2.7kg放入提取罐中，用梔子粉末5倍干重(W/W)的75％甲醇水溶液，于80℃條件下回流提取1小時，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為95.6％、95.0％和93.5％。
將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.03，然后采用膜孔徑為0.22μm的無機陶瓷膜，在0.25MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖等大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為97.0％、96.9％和97.8％，蛋白質(zhì)去除率為94.7％，多糖去除率為96.1％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用HZ816大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用8倍樹脂量的30％乙醇水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率95.4％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率％91.6，梔子綠原酸的回收率95.9％。
實施例4以福建產(chǎn)梔子為原料，將鮮梔子水洗、干燥(風(fēng)干、烘干或曬干均可)、粉碎、過20～30目篩得梔子粉末，將2.9kg梔子粉末放入提取罐中，用梔子粉末5倍干重(W/W)的75％乙醇水溶液，于80℃條件下提取1小時，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為94.8％、94.3％和93.6％。
先將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.13，然后采用截留分子量為60000聚偏氟乙烯膜，在0.50MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為96.7％、96.1％和96.6％，蛋白質(zhì)去除率為95.3％，多糖去除率為96.9％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用D101大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4倍樹脂量的40％甲醇水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率96.3％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率93.4％，梔子綠原酸的回收率96.4％。
實施例5將20～30目梔子粉末2.6kg放入提取罐中，用梔子粉末8倍干重(W/W)的45％甲醇-異丙醇(1∶1)水溶液，于73℃條件下提取2次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為94.3％、95.4％和93.7％。
將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.16，然后采用截留分子量為100000的無機陶瓷膜，在0.45MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為97.6％、96.8％和97.0％，蛋白質(zhì)去除率為94.1％，多糖去除率為96.4％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用DK110大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用6倍樹脂量的30％甲醇水溶液以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率93.9％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率90.1％，梔子綠原酸的回收率94.7％。
實施例6將20～30目梔子粉末2.4kg放入提取罐中，用梔子粉末15倍干重(W/W)的38％乙醇水溶液，于50℃條件下提取3次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為92.5％、92.7％和91.2％。
將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫海箲腋∫罕戎剡_(dá)到1.06，然后采用截留分子量為20000的聚砜膜，在0.75MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為94.5％、93.8％和96.4％，蛋白質(zhì)去除率為95.8％，多糖去除率為97.0％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用AB-8大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用6倍樹脂量的60％甲醇水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率95.7％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率91.8％，梔子綠原酸的回收率96.4％。
實施例7以福建產(chǎn)梔子為原料，將鮮梔子水洗、干燥(風(fēng)干、烘干或曬干均可)、粉碎、過20～30目篩得梔子粉末，將2.6kg梔子粉末放入提取罐中，用梔子粉末15倍干重(W/W)的25％丙酮水溶液，于50℃條件下提取3次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為93.8％、91.5％和91.8％。
將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫海箲腋∫罕戎剡_(dá)到1.22，然后采用膜孔徑為0.22μm的聚偏氟乙烯膜，在0.38MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為97.6％、96.6％和97.2％，蛋白質(zhì)去除率為94.2％，多糖去除率為96.1％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用D113大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4倍樹脂量的30％丙酮水溶液以1倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率95.8％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率92.4％，梔子綠原酸的回收率96.1％。
實施例8將20～30目梔子粉末2.5kg放入提取罐中，用梔子粉5倍干重(W/W)的75％丙酮水溶液，于80℃條件下回流提取2次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為93.9％、93.2％和93.5％。
將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫海箲腋∫罕戎剡_(dá)到1.08，然后采用截留分子量為50000的聚砜膜，在0.50MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為95.8％、97.7％和96.1％，蛋白質(zhì)去除率為95.9％，多糖去除率為96.7％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用HZ802大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4倍樹脂量的60％丙酮水溶液以2倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率93.6％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率89.6％，梔子綠原酸的回收率94.3％。
實施例9將20～30目梔子粉末2.3kg放入提取罐中，用梔子粉末15倍干重(W/W)的pH 8.0的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鉀緩沖溶液，于80℃條件下提取3次，每次2小時，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、65～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸提取率分別為90.1％、82.6％和88.9％。
將梔子粗提物加適量水?dāng)嚢璩蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.16，然后采用膜孔徑為0.22μm的無機陶瓷膜，在0.35MPa下進(jìn)行膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得膜分離純化后的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物和綠原酸的回收率分別為98.3％、96.5％和97.2％，蛋白質(zhì)去除率為94.3％，多糖去除率為95.9％。
對經(jīng)膜分離純化的梔子提取物，采用HZ803大孔吸附樹脂，富集吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用8倍樹脂量的45％丙酮水溶液以3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，回收溶劑后即得經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。經(jīng)測定，梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物的回收率93.8％，梔子類胡蘿卜素類化合物的回收率88.5％，梔子綠原酸的回收率94.2％。
以上實施例旨在進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，而不是以任何方式限制本發(fā)明。
本發(fā)明構(gòu)思新穎，工藝簡單，提取效率高，生產(chǎn)成本低，符合國家倡導(dǎo)的中藥現(xiàn)代化及國際化的產(chǎn)業(yè)政策，具有較大的推廣意義。
權(quán)利要求
1.一種采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，包括采用親水性溶劑提取梔子粗提物和梔子粗提物的膜分離除雜步驟，其特征在于以梔子粗提物或者經(jīng)膜分離純化的梔子提取物為原料，加水成懸浮液，采用大孔吸附樹脂吸附至飽和，用水洗去極性雜質(zhì)，再用親水性溶劑洗脫目標(biāo)物質(zhì)，濾液經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述采用親水性溶劑提取梔子粗提物的方法是以梔子為原料，采用5～15倍梔子干重(W/W)的25～75％親水性溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成梔子提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述親水性溶劑是甲醇、丙酮、乙醇、丙醇或異丙醇中的一種或幾種混合溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述親水性溶劑是不同pH值緩沖溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于親水性溶劑優(yōu)先選用甲醇或丙酮。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2或5所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述梔子提取物的主要成分為環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物或綠原酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述梔子提取物的主要成分為環(huán)烯醚萜苷類化合物、類胡蘿卜素類化合物或綠原酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述梔子環(huán)烯醚萜苷類化合物是梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽二糖苷或梔子酸中的一種或幾種化合物。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述類胡蘿卜素類化合物是藏紅花酸、藏紅花素1、藏紅花素2或藏紅花素3中的一種或幾種化合物。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述的膜分離除雜方法是以親水性溶劑提取的梔子粗提物為原料，加水成懸浮液，使懸浮液比重達(dá)到1.03～1.22，在0.25～0.75MPa下經(jīng)膜分離除雜，去除蛋白質(zhì)和多糖以及其它大分子雜質(zhì)后即得經(jīng)膜分離純化的梔子提取物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于膜分離除雜過程選用6000截留分子量～0.22μm膜孔徑的分離膜。
12.根據(jù)權(quán)利要求10或11所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于膜分離除雜過程的分離膜材料可以是無機類、聚砜類、含氟高分子材料類、聚烯烴類、聚酰胺類、甲殼素類或纖維素類膜材料中的一種或幾種混合膜材料。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于膜分離除雜過程的分離膜材料優(yōu)先選用無機陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂分離純化方法是以梔子粗提物或者經(jīng)膜分離純化的梔子提取物為原料，加水?dāng)嚦蓱腋∫?，使懸浮液比重達(dá)到1.05～1.18，采用大孔吸附樹脂吸附至飽和，先用不少于2倍樹脂量的水(V/V)洗去極性雜質(zhì)，再用4～8倍樹脂量的30～60％的親水性溶劑水溶液以1～3倍樹脂量/小時的流速(V/V)洗脫目標(biāo)物質(zhì)，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經(jīng)減壓回收溶劑、真空濃縮成經(jīng)樹脂分離純化的梔子提取物。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于大孔吸附樹脂骨架的化學(xué)組成可以是聚苯乙烯、聚丙烯酸或酚醛中的一種或幾種。
16.根據(jù)權(quán)利要求14或15所述的采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法，其特征在于大孔吸附樹脂骨架的化學(xué)組成優(yōu)先選用聚苯乙烯或聚丙烯酸。
全文摘要
本發(fā)明提供一種采用大孔吸附樹脂制備梔子提取物的方法。包括采用親水性溶劑提取梔子粗提物和梔子粗提物的膜分離除雜方法以梔子粗提物或經(jīng)膜分離純化的梔子提取物為原料，加水成懸浮液，大孔樹脂吸附至飽和，水洗極性雜質(zhì)、親水性溶劑水溶液洗脫，洗脫液減壓回收溶劑真空濃縮成經(jīng)樹脂純化的梔子提取物。本發(fā)明構(gòu)思新穎，工藝簡單，提取效率高，生產(chǎn)成本低，所制提取物具有現(xiàn)代中成藥“三高”、“三小”和“三便”等優(yōu)點，具有較大推廣性。
文檔編號A61P31/14GK1939458SQ20061020096
公開日2007年4月4日 申請日期2006年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年9月30日
發(fā)明者陳劍鋒, 郭養(yǎng)浩, 陳浩 申請人:福州大學(xué)