專利名稱：：治療方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及以特定抗體劑量治療B細(xì)胞相關(guān)疾病。
背景技術(shù)：
：淋巴細(xì)胞是幾種白細(xì)胞群之一種；它們特異識別并應(yīng)答外來抗原。主要的3類淋巴細(xì)胞是B淋巴細(xì)胞(B細(xì)胞)、T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)和自然殺傷(NK)細(xì)胞。B淋巴細(xì)胞是產(chǎn)生抗體并帶來體液免疫的細(xì)胞。B細(xì)胞在骨髓內(nèi)成熟，在它們的細(xì)胞表面上表達(dá)出結(jié)合抗原的抗體離開骨髓。當(dāng)初始B細(xì)胞(naiveBcell)首次遇到與其膜結(jié)合的抗體特異的抗原時，細(xì)胞開始迅速分裂，使其后代細(xì)胞分化成記憶B細(xì)胞和稱為"漿細(xì)胞"的效應(yīng)細(xì)胞。記憶B細(xì)胞有較長的壽命并持續(xù)表達(dá)膜結(jié)合的抗體，該抗體具有與原始親本細(xì)胞相同的特異性。漿細(xì)胞不產(chǎn)生膜結(jié)合的抗體，代之以產(chǎn)生分泌型的抗體。分泌型的抗體是體液免疫的主要效應(yīng)分子。CD20抗原(也稱為人B-淋巴細(xì)胞限制性分化抗原，Bp35)是位于前B(pre-B)和成熟的B淋巴細(xì)胞上的疏水性跨膜蛋白質(zhì)，其分子量約為35kD(Valentine等.J.Biol.Chem.264(19):11282-11287(1989);和Einfeld等.EMBOJ.7(3):711-717(1988))。該抗原也在超過90°/。的B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL)上表達(dá)(Anderson等.Blood63(6):1424-1433(1984))，但在造血干細(xì)胞、原B細(xì)胞(pro-Bcells)、正常血漿細(xì)胞或其它正常組織上未發(fā)現(xiàn)(Tedder等.J.Immunol.135(2):973-979(1985))。CD20認(rèn)為能調(diào)節(jié)細(xì)胞周期啟動和分化的活化過程中的早期階段(Tedder等，同前)，并可能起到鈣離子通道(Tedder等.J.Cell.Biochem.14D:195(1990))的作用?？紤]到CD20在B細(xì)胞淋巴瘤中表達(dá)，該抗原已經(jīng)是有用的治療靶位以治療該淋巴瘤。美國有超過300，000人患有B細(xì)胞NHL，并且每年診斷出超過56，000個新病例。CD20也是用于治療自身免疫性疾病的耙抗原。rituximab(RITUXAN)抗體用于治療患有CD20陽性的復(fù)發(fā)性或頑固性低級或濾泡性B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤的患者，該抗體是抗人CD20抗原的基因工程嵌合鼠/人單克隆抗體(可從商業(yè)途徑得自Genentech，Inc.，SouthSanFrancisco,California,美國)。Rituximab在頒布于1998年4月7曰的美國專利第5,736,137號(Anderson等)和美國專利第5,776,456號中是稱為"C2B8"的抗體。在各種非惡性自身免疫病中也研究Rituximab,其中B細(xì)胞和自身抗體顯示出在疾病病理生理中起作用。Edwards等，BiochemSoc.Trans.30:824-828(2002)。有報道，Rituximab潛在地減輕以下疾病的體征和癥狀例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)(Leandro等，Ann.Rheum.Dis.61:883—888(2002);Edwards等，ArthritisRheum.，46(Suppl,9):S46(2002);Stahl等，Ann.Rheum.Dis.，62(SuppU):OP004(2003);Emery等，ArthritisRheum.48(9):S439(2003))、狼齊(Eisenberg,Arthritis.Res.Ther.5:157—159(2003);Leandro等，ArthritisRheum.46:2673—2677(2002);Gorman等，Lupus,13:312-316(2004))、免疫性血小板減少性紫瘋(D，Arena等，Leuk丄ymphoma44:561—562(2003);Stasi等，Blood,98:952-957(2001);Saleh等，Semin.Oncol.，27(Supp12):99-103(2000);Zaia等，Haematolgica,87:189-195(2002);Ratanatharathorn等，Ann.Int.Med.，133:275-279(2000))、純紅細(xì)胞再生障礙(pureredcellaplasia)(Auner等，Br.J.Haematol.，116:725-728(2002));自身免疫性貧血(Zaja等，Haematologica87:189-195(2002)(錯字勘誤表在Haematologica87:336(2002))、冷凝集素疾病(coldagglutinindisease)(Layios等，Leukemia,15:187-8(2001);Berentsen等，Blood,103:2925-2928(2004);Berentsen等，Br.J,Haematol.,115:79-83(2001);Bauduer,Br.J.Haematol.,112:1083畫10卯(2001);Damiani等，Br.J.Haematol.,114:229-234(2001》、嚴(yán)重胰島素抗性的B型綜合癥(Coll等,N.Engl.J.Med"350:310-311(2004)、混合性冷球蛋白血癥(DeVita等，ArthritisRheum.46Suppl.9:S206/S469(2002))、重癥肌無力(Zaja等，Neurology,55:1062-63(2000);Wylam等，J.Pediatr.,143:674-677(2003))、韋格納氏肉芽腫病(Wegener'sgranulomatosis)(Specks等，Arthritis&Rheumatism44:2836-2840(2001》、頑固性尋常性天皰齊(refractorypemphigusvulgaris)(Dupuy等，ArchDermatol"140:9-96(2004》、皮肌炎(Levine，ArthritisRheum.，46(Suppl.9):S1299(2002》，斯耶格倫氏綜合征(Sjogren'ssyndrome)(Somer等，Arthritis&Rheumatism,49:394-398(2003)),活躍性II型混合性冷球蛋白血癥(Zaja等，Blood,101:3827-3834(2003))、尋常性天皰齊(Dupay等，Arch.Dermatol.,140:91-95(2004))、自身免疫性神經(jīng)病(Pestronk等，J,Neurol.Neurosurg.Psychiatry74:485^489(2003))、腫瘤相關(guān)眼陣攣-肌陣攣綜合癥(paraneoplasticopsoclonus-myoclonussyndrome)(Pranzatelli等.Neurology60(Suppl.l)P05.128:A395(2003))、和復(fù)發(fā)-緩解性多發(fā)性硬化(relapsing-remittingmultiplesclerosis)(RRMS)。Cross等.(摘要)"PreliminaryresultsfromaphaseIItrialofRituximabinMS",美國多發(fā)性硬化研究和治療委員會的第八屆年會，20-21(2003)。在患有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的患者中進(jìn)行的II期臨床試驗，提供了關(guān)于Rituximab安全性和功效的持續(xù)48周的數(shù)據(jù)。Emery等.ArthritisRheum48(9):S439(2003);Szczepanski等.ArthritisRheum48(9):S121(2003)。將患者均勻地隨機分成4個治療組曱氨蝶呤、單獨用rituximab、rituximab加曱氨蝶呤、和rituximab加環(huán)磷酰胺(CTX)。Rituximab的治療方案是在第1和15天靜脈內(nèi)給藥1克。關(guān)于用rituximab治療的7>開文獻(xiàn)包^舌Perotta和Abuel，"ResponseofchronicrelapsingITPof10yearsdurationtorituximab"摘要#3360BloodIO(I)(1-2部分)p.88B(1998);Perotta等，"RituxaninthetreatmentofchronicidiopathicthrombocytopaenicpurpuRA(ITP)"，Blood,94:49(摘要)(1999);Matthews,R.，"MedicalHeretics"NewScientist(2001年4月7日)；Leandro等，"Clinicaloutcomein22patientswithrheumatoidarthritistreatedwithBLymphocytedepletion"AnnRheumDis，同前；Leandro等，"Lymphocytedepletioninrheumatoidarthritis:earlyevidenceforsafety,efficacyanddoseresponse"ArthritisandRheumatism44(9》S370(2001);Leandro等,"AnopenstudyofBLymphocytedepletioninsystemicLupuserythematosus",ArthritisandRheumatism,46:2673-2677(2002),盡管使用了不同的方案，在2周內(nèi)，每個患者接受2次500-mg的rituximab輸注、2次750mg的環(huán)磷酰胺輸注、和高劑量的口服皮質(zhì)類固醇，但其中2個治療的患者分別在第7和8個月復(fù)發(fā)并退出；"SuccessfulLong-termtreatmentofsystemicLupuserythematosuswithrituximabmaintenancetherapy"Weide等,Lupus，12:779-782(2003)，其中一個患者用rituximab治療(375mg/m2x4，每周間隔重復(fù)給藥)，并且每隔5-6個月再遞送rituximab,然后每隔3個月用rituximab375mg/m2進(jìn)行維持治療，而且第二個患有頑固性SLE的患者成功地用rituximab進(jìn)行了治療，他每隔3個月接受維持治療，兩個患者都對rituximab治療反應(yīng)良好；Edwards詳口Cambridge，"SustainedimprovementinrheumatoidarthritisfollowingaprotocoldesignedtodepleteBLymphocytes"Rheumatology40:205-211(2001);Cambridge等，"BLymphocytedepletioninpatientswithrheumatoidarthritis:serialstudiesofimmunologicalparameters"ArthritisRheum.,46(Suppl.9):SI350(2002);Edwards等，"B誦Lymphocytedepletiontherapyinrheumatoidarthritisandotherautoimmunedisorders"同前；Edwards等,"Efficacyandsafetyofrituximab,aBcelltargetedchimericmonoclonalantibody:Arandomized,placebocontrolledtrialinpatientswithrheumatoidarthritis.ArthritisandRheumatism46(9):S197(2002);Levine和Pestronk,"IgMantibody-relatedpolyneuropathies:B-celldepletionchemotherapyusingrituximab"Neurology52:1701-1704(1999);DeVita等，"EfficacyofselectiveBcellblockadeinthetreatmentofrheumatoidarthritis"Arthritis&Rheum46:2029-2033(2002);Hidashida等，"TreatmentofDMARD-refractoryrheumatoidarthritiswithrituximab."美國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)院科學(xué)年會上提交；10月24-29日；NewOrleans,LA2002;Tuscano,J."Successfultreatmentofinfliximab-refractoryrheumatoidarthritiswithrituximab"，美國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)院科學(xué)年會上提交；10月24-29日；NewOrleans,LA2002;"PathogenicrolesofBcellsin人autoimmunity;insightsfromtheclinic"Martin和Chan，Immunity20:517-527(2004);Silverman禾口Weisman，"RituximabTherapyandAutoimmuneDisorders,ProspectsforAnti-BCellTherapy",ArthritisandRheumatism,48:1484-1492(2003);Kazkaz和Isenberg，"AntiBcelltherapy(rituximab)inthetreatmentofautoimmunediseases",Currentopinioninpharmacology,4:398-402(2004);Virgolini和Vanda，"Rituximabinautoimmunediseases",Biomedicine&pharmacotherapy,58:299-309(2004);Klemmer等，"TreatmentofantibodymediatedautoimmunedisorderswithaAntiCD20monoclonalRituximab"，ArthritisandRheumatism，48:(9)9,S(SEP)，頁S624國S624(2003);Kneitz等，"EffectiveBcelldepletionwithrituximabinthetreatmentofautoimmunediseases",Immunobiology,206:519-527(2002》Arzoo等，"Treatmentofrefractoryantibodymediatedautoimmunedisorderswithananti-CD20monoclonalantibody(rituximab)"AnnalsoftheRheumaticDiseases,61(10)，p922-4(2002)CommentinAnnRheumDis.61:863-866(2002);"FutureStrategiesinImmunotherapy"，Lake和Dionne，見Burger'sMedicinalChemistryandDrugDiscovery(2003,JohnWiley&Sons,Inc出版)其文章網(wǎng)上發(fā)表日期2003年1月15日(見第2章"Antibody-DirectedImmunotherapy");Liang和Tedder,WileyEncyclopediaofMolecularMedicine,Section:CD20asanImmunotherapyTarget,文章網(wǎng)上發(fā)表日期2002年1月15日，名稱為"CD20";名為"MonoclonalAntibodiestoHumanCellSurfaceAntigens"的附錄4A，Stockinger等編Coligan等，見CurrentProtocolsinImmunology(2003JohnWiley&Sons,Inc),網(wǎng)上發(fā)表日期2003年5月；印刷版/>開日2003年2月；Penichet和Morrison,"CDAntibodies/molecules:Definition;AntibodyEngineering"，見WileyEncyclopediaofMolecularMedicineSection:Chimeric,HumanizedandHumanAntibodies;網(wǎng)上發(fā)布于2002年1月15日；Specks等."ResponseofWegener'sgranulomatosistoanti-CD20chimericmonoclonalantibodytherapy"Arthritis&Rheumatism44:2836-2840(2001);網(wǎng)上提交了摘要并發(fā)布的Koegh等，"RituximabforRemissionInductioninSevereANCA-AssociatedVasculitis:ReportofaProspectiveOpen-LabelPilotTrialin10Patients",AmericanCollegeofRheumatology,期號28-100,期名Vasculitis,期刊類型ACR協(xié)作期刊，主要目錄28Vasculitis,10/18/2004期(http:〃www.abstractsonline.com/viewer/SearchResults.asp);Eriksson,"Short-termoutcomeandsafetyin5patientswithANCA畫positivevasculitistreatedwithrituximab",KidneyandBloodPressureResearch,26:294(2003);Jayne等，"B-celldepletionwithrituximabforrefractoryvasculitis"KidneyandBloodPressureResearch,26:294(2003);Jayne，poster88(第11屆國際脈管炎和ANCA討論會)，2003,美國腎臟學(xué)學(xué)會；Stone和Specks,"RituximabTherapyfortheInductionofRemissionandToleranceinANCA-associatedVasculitis"，2002-2003免疫耐受網(wǎng)絡(luò)的臨床試驗研究概要，http:〃www.immunetolerance.org/research/autoimmune/trials/stone.html。也可參見Leandro等,"Bcellrepopulationoccursmainlyfromnai'veBcellsinpatientwithrheumatoidarthritisandsystemicLupuserythematosus"ArthritisRheum.，48(增刊9):SI160(2003)。關(guān)于CD20抗體的專利和專利公開包括，美國專利5,776,456、5，736，137、5,843,439、6,399,061和6,682,734、以及美國專利申請US2002/0197255A1、US2003/0021781A1、US2003/0082172A1、US2003/0095963A1、US2003/0147885Al(Anderson等)；美國專利6,455,043B1和WOOO/09160(Grillo畫Lopez,A.);WO00/27428(Grillo畫Lopez和White);WO00/27433(Grillo-Lopez和Leonard);WO00/44788(Braslawsky等)；WO01/10462(Rastetter，W.);WO01/10461(Rastetter和White);WOO1/10460(White和Grillo-Lopez);US2001/0018041A1，US2003/0180292A1,WO01/34194(Hanna和Hariharan);美國申請US2002/0006404和WO02/04021(Hanna和Hariharan);美國申請US2002/0012665Al和WO01/74388(Hanna,N.);美國申請US2002/0058029Al(Hanna，N.);美國申i青US2003/0103971Al(Hariharan和Hanna);美國申請US2002/0009444A1、和WOO1/80884(Grillo-Lopez，A.);WO01/97858(White,C.);美國申請第US2002/0128488A1號和WO02/34790(Reff，M.);WO02/060955(Braslawsky等)；WO2/096948(Braslawsky等)；WO02/079255(Reff和Davies);美國專利6,171,586B1、和W098/56418(Lam等)；W098/58964(Raju,S.);W099/22764(Raju，S.);W099/51642,美國專利6，194,551B1、美國專利6，242,195B1、美國專利6，528，624B1和美國專利6,538,124(Idusogie等)；WO00/42072(Presta，L.);WO00/67796(Curd等)；WO01/03734(Grillo-Lopez等)；美國申請US2002/0004587A1和WO01/77342(Miller和Presta);美國申請US2002/0197256(Grewal,I.);美國申請US2003/0157108Al(Presta，L.);美國專利6,565，827B1、6，090,365B1、6,287,537B1、6,015,542、5,843,398和5,595,721(Kaminski等)；美國專利5,500,362、5,677,180、5,721,108、6,120,767、6,652,852B1(Robinson等)；美國專利6'410，391B1(Raubitschek等)；美國專利6，224,陽B1和WO00/20864(Barbera畫Guillem,E.);WOO1/13945(Barbera-Guillem,E.);WOOO/67795(Goldenberg);美國申請US2003/0133930Al和WOOO/74718(Goldenberg和Hansen);WO00/76542(Golay等)；WO01/72333(Wolin和Rosenblatt);美國專利6，368,596B1(Ghetie等)；美國專利6,306,393和美國申請US2002/0041847A1(Goldenberg,D.);美國申請US2003/0026801A1(Weiner和Hartmann);WO02/102312(Engleman,E.);美國專利申請2003/0068664(Albitar等.)；WO03/002607(Leung，S.);WO03/049694、US2002/0009427A1、和US2003/0185796Al(Wolin等.)；WO03/061694(Sing和Siegall);US2003/0219818Al(Bohen等.)；US2003/0219433Al和WO03/068821(Hansen等)；US2002/0136719A1(Shenoy等)；WO2004/032828(Wahl等)；WO2004/035607(Teeling等)；US2004/0093621(ShitaR等)。也可參見美國專利5,849,898和EP申請330,191(Seed等)；美國專利4,861,579和EP332,865A2(Meyer和Weiss);WO95/03770(Bhat等)、US2001/0056066(Bugelski等)；WO2004/035607(Teeling等)；WO2004/056312(Lowman等)；US2004/009362l(ShitaRA等)；和WO2004/103404(Watkins等)。關(guān)于CD20抗體的公開文獻(xiàn)包括Teeling，J.等"Characterisationofnew人CD20monoclonalantibodieswithpotentcytolyticactivityagainstnon畫Hodgkin'sLymphomas"Blood,2004年6月；10.1182。在治療疾病時，能以最低有效劑量給藥藥物是有益的。經(jīng)過以下詳細(xì)說明可以顯而易見地看到，本發(fā)明滿足了這樣的用抗CD20抗體進(jìn)行治療的需求。發(fā)明簡述本發(fā)明提供了消除患有自身免疫性疾病的患者中B細(xì)胞的方法，其包括向患者給藥結(jié)合人CD20的抗體或其抗原結(jié)合片段，其以lmg至250mg范圍的劑量進(jìn)行。在一個具體實施方式中，相對于給藥抗體前的基線，患者的B細(xì)胞消除了至少80%。本發(fā)明也提供了減輕自身免疫性疾病的方法，其包括向患有自身免疫性疾病的患者以lmg至250mg范圍的劑量給藥結(jié)合人CD20的抗體。在前述方法的不同具體實施方式中，結(jié)合CD20的抗體以lmg至100mg范圍的劑量、或以200mg、100mg、50mg、25mg、10mg或5mg的平穩(wěn)劑量(flatdoses)給藥。典型地給藥患者至少2劑抗體，在一些情況下，給藥3、4或5劑。在一個具體實施方式中，所述2劑約隔2周給藥。在最初的2劑之后，如需要，再次每隔3、6或9個月給藥(additionaldoses)，用于維持治療。更特別地，在減輕RA的方法中，2劑抗體在第1和15天給藥。在消除B細(xì)胞和減輕自身免疫性疾病的方法中，在給藥治療劑量(therapeuticdose)前可給藥初始耐受劑量(toleratingdose)，其中耐受劑量低于治療劑量。在前述消除B細(xì)胞或減輕自身免疫性疾病的方法之任意的特定具體實施方式中，結(jié)合CD20的抗體配制劑通過靜脈內(nèi)或皮下途徑給藥。在前述B細(xì)胞消除和治療方法之任意的特定具體實施方式中，自身免疫性疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(juvenilerheumatoidarthritis)、系統(tǒng)性紅斑狼齊(SLE)、狼疳腎炎、韋格納氏病(Wegener'sdisease)、炎性腸病(inflammatoryboweldisease)、特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathicthrombocytopenicpurpura,ITP)、血栓性血小才反減少性紫瘋(thromboticthrombocytopenicpurpura,TTP)、自身免疫性血小板減少癥、多發(fā)性硬化、視神經(jīng)脊髓炎(neuromyelitisoptica,NMO)、4艮屑病(psoriasis)、IgA腎病、IgM多發(fā)性神經(jīng)病、重癥肌無力、ANCA相關(guān)的脈管炎(ANCAassociated-vasculitis,AAV)、糖尿病，雷諾氏綜合征(Reynaud，ssyndrome)、斯耶格倫氏綜合征(Sj6gren，ssyndrome)和腎小球腎炎。在更特定的具體實施方式中，自身免疫性疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。對于前述消除B細(xì)胞或減輕自身免疫性疾病的任意方法，在一個具體實施方式中，結(jié)合CD20的抗體是人源化抗體。在優(yōu)選的具體實施方式中，人源化抗體是人源化2H7抗體，優(yōu)選是如下表1所述的以下2H7變體型16、31、73、75、96、114、115、116、138、477、588、511和375之一。在不同實施方式中，人源化抗體包含以下這些VL和VH區(qū)對L鏈可變區(qū)序列SEQIDNO.l和H鏈可變區(qū)序列SEQIDNO.2;L鏈可變區(qū)序列SEQIDNO.15和H鏈可變區(qū)序列SEQIDNO.12;或L鏈可變區(qū)序列SEQIDNO.15和H鏈可變區(qū)序列SEQIDNO.23。人源化抗CD20抗體的其它具體實施方式是hA20(也稱為IMMU-106、或90Y-hLL2;US2003/0219433,Immunomedics);和AME-133(US2005/0025764;AppliedMolecularEvolution/EliLilly)。在不同的具體實施方式中，結(jié)合CD20的抗體是人抗體，優(yōu)選是HUMAX-CD2()TM(GenMab)。在另一個具體實施方式中，結(jié)合CD20的抗體是嵌合抗體，優(yōu)選的具體實施方式是rituximab(Genentech,Inc.)和嵌合cA20抗體(US2003/0219433中有描述，Immunomedics)。在治療RA的方法的一個具體實施方式中，利用選自非類固醇抗炎藥物(nonsteroidalanti-inflammatorydrug,NSAID)、曱氨蟲菜p令、鎮(zhèn)痛劑、4唐皮質(zhì)激素、環(huán)磷酰胺、阿達(dá)木單抗(adalimumab)、來氟米特(leflunomide)、英夫利昔單抗(infliximab)、依那西普(etanercept)、tocilizumab和COX-2抑制劑的藥物，與結(jié)合CD20的抗體聯(lián)合給藥治療。在一個具體實施方式中，用CD20抗體治療RA的方法進(jìn)一步包括向患者給藥第二治療劑。附圖簡述圖1A是序列比對圖，其比較了鼠2H7(SEQIDNO.25)、人源化2H7.v16變體(SEQIDNO.1)、和人kappa輕鏈亞型I(SEQIDNO.26)之每一個的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(VO的氨基酸序列。2H7和hu2H7.v16的VL的CDR如下CDR1(SEQIDNO,27)、CDR2(SEQIDN0.28)和CDR3(SEQIDNO,29)。圖IB是序列比對圖，其比較了鼠2H7(SEQIDNO.30)、人源化2H7.v16變體(SEQIDN0.2)、和重鏈亞型III的人共有序列(SEQIDNO.31)的Vh序列。2H7和hu2H7.v16的VH的CDR如下CDRl(SEQIDNO,32)、CDR2(SEQIDNO,33)和CDR3(SEQIDN0.34)。在圖IA和圖IB中，所示的每條鏈中的CDR1、CDR2和CDR3顯示在括號內(nèi)，其側(cè)翼是框架區(qū)FR1-FR4。2H7指鼠2H7抗體。兩排序列間的星號表示2個序列間不同的位置。殘基編號是根據(jù)Kabat等(SequencesofImmunologicalInterest.第5版.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth，Bethesda,Md.(1991))所述進(jìn)行的，其中插入如a、b、c、d、和e所示。圖2是如實施例2中所述的所有組(2H7研究組和Rituxan研究組的組合)中的平均絕對8細(xì)胞數(shù)『03-/。040+]的概要圖示。。圖3顯示了實施例4中所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎I/II期臨床試驗的劑量漸增方案(doseescalationscheme)。圖4顯示了實施例4中所述的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎i/n期臨床試驗的受試者的外周B細(xì)胞消除圖，其基于平均絕對CD19計數(shù)。LLN表示正常組的低限。ULN指正常組的高限。NOM—TM—DAY=距離治療的天數(shù)。圖5顯示了圖4中的外周B細(xì)胞消除圖，其基于平均絕對CD19計數(shù)，但其中Y軸延長了。圖6顯示了安慰劑組的外周B細(xì)胞消除圖，其基于平均絕對CD19計數(shù)。優(yōu)選的具體實施方式的詳述本文所用的"B細(xì)胞消除(Bcelldeletion)"指相對于治療前的水平，藥物或抗體治療后動物或人中B細(xì)胞水平的降低。利用公知的測試，如通過得到全血計數(shù)、通過FACS分析染色已知的B細(xì)胞標(biāo)記、和通過諸如實-瞼示例中所述的方法，來測量B細(xì)胞水平?？刹糠只蛲耆鼴細(xì)胞。在一個具體實施方式中，表達(dá)CD20的B細(xì)胞至少消除了25%。在接受B細(xì)胞消除藥物的患者中，B細(xì)胞通常在這樣的一段時間是消除的，所述一段時間指藥物在患者體內(nèi)循環(huán)的那段時間以及B細(xì)胞恢復(fù)所用的時間。"自身免疫病"在本文中指由個體自身組織引起的并針對個體自身組織的疾病或病癥或其共分離(co-segregate)或表現(xiàn)或由其產(chǎn)生的疾患。自身免疫炎:'慢(類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、痛、風(fēng)性關(guān)節(jié)炎:急性痛風(fēng)性關(guān)(炎、i性炎性關(guān)節(jié)炎、退行性關(guān)節(jié)炎、感染性關(guān)節(jié)炎、萊姆關(guān)節(jié)炎(Lyme-arthritis)、增生性關(guān)節(jié)炎、銀屑病性關(guān)節(jié)炎、脊推關(guān)節(jié)炎和幼年型類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、慢性進(jìn)行性關(guān)節(jié)炎、變形性關(guān)節(jié)炎、慢性原發(fā)性多關(guān)節(jié)炎、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎、和強直性脊柱炎)、炎性過度增殖性皮膚病、銀屑病諸如斑塊狀銀屑病、滴狀銀屑病(gutattepsoriasis)、膿皰性銀屑病、和指曱銀屑病、特應(yīng)性病變包括特應(yīng)性疾病諸如干草熱(hayfever)和喬布氏綜合征(Job，ssyndrome)、皮炎包括接觸性皮炎、慢性接觸性皮炎、變應(yīng)性皮炎、變應(yīng)性接觸性皮炎、皰滲樣皮炎和特應(yīng)性皮炎、x連鎖的高IgM綜合征、蕁麻滲諸如慢性變應(yīng)性蕁麻滲和慢性特發(fā)性蕁麻瘆，包括慢性自身免疫性蕁麻滲、多肌炎/皮肌炎、青少年型皮肌炎、中毒性表皮壞死松解癥、硬皮病(包括系統(tǒng)性硬皮病)、硬化諸如系統(tǒng)性硬化、多發(fā)性硬化(MS)諸如脊髓-眼MS(spino-opticalMS)、原發(fā)性進(jìn)行性MS(PPMS)、和復(fù)發(fā)、緩解性MS(RRMS)、進(jìn)行性系統(tǒng)性石更化、動脈粥樣石更化、動脈石更化、播散性硬化和共濟失調(diào)性硬化、炎性腸病(IBD)(例如克羅恩氏病、自身免疫介導(dǎo)的胃腸病、結(jié)腸炎i者如潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerativecolitis)、潰瘍性結(jié)腸炎(colitisulcerosa),微觀結(jié)腸炎(microscopiccolitis)、膠原性結(jié)腸炎、息肉狀結(jié)腸炎、壞死性小腸結(jié)腸炎、和透壁性結(jié)腸炎、和自身免疫性炎性腸病)、壞疽性膿皮癥、結(jié)節(jié)性紅斑、原發(fā)性硬化性膽管炎、episcleritis,呼吸窘迫綜合征，包括成人型或急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)、腦膜炎、整個或部分葡萄膜炎癥、虹膜炎、脈絡(luò)膜炎、自身免疫性血液學(xué)病癥、類風(fēng)濕性脊推炎、突發(fā)性聽覺喪失、IgE介導(dǎo)的疾病諸如過敏性和變應(yīng)性和特應(yīng)性鼻炎、腦炎諸如拉斯默森氏(Rasmussen，s)腦炎和邊緣系和/或腦干腦炎、葡萄膜炎，諸如前葡萄膜炎、急性前葡萄膜炎、肉芽腫性葡萄膜炎、非肉芽腫性葡萄膜炎、晶狀體抗原性葡萄膜炎、后葡萄膜炎、或自身免疫性葡萄膜炎、具有和沒有腎病綜合征的腎小球腎炎(GN)諸如慢性或急性腎小球腎炎諸如原發(fā)性GN、免疫介導(dǎo)的GN、膜性GN(膜性腎病)、特發(fā)性膜性GN或特發(fā)性膜性腎病、膜增殖性或膜性增殖性GN(MPGN),包括I型和II型、和快速發(fā)展的GN、變應(yīng)性狀況和反應(yīng)、變應(yīng)性反應(yīng)、濕滲包括變應(yīng)性或特應(yīng)性濕滲、譯喘諸如細(xì)支氣管。孝喘(asthmabronchiale)、支氣管哮喘(bronchialasthma)、和自身免疫性譯喘、涉及T細(xì)胞浸潤和慢性炎性應(yīng)答的狀況、針對外來抗原的免疫反應(yīng)諸如針對妊娠過程中的胎兒A-B-0血型的免疫反應(yīng)、慢性肺部炎性疾病、自身免疫性心肌炎、白細(xì)胞粘附缺陷、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)諸如皮膚SLE或亞急性皮膚SLE、新生兒狼瘡綜合征(NLE)、和播散性紅斑狼瘡、狼瘡(包括狼瘡腎炎、狼瘡腦炎、兒科狼瘡、非腎狼瘡、腎外狼掩、盤狀狼瘡和盤狀紅斑狼癡、脫發(fā)狼瘡)、幼年期發(fā)作的(I型)糖尿病，包括兒科胰島素依賴性糖尿病(IDDM)、成人期發(fā)作的糖尿病(II型糖尿病)、自身免疫性糖尿病、特發(fā)性糖尿病性尿崩癥(idiopathicdiabetesinsipidus),與細(xì)胞因子和T-淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的急性和延遲性超敏感有關(guān)的免疫應(yīng)答、結(jié)核病、結(jié)節(jié)病、肉芽腫病包括'淋巴瘤樣肉芽腫病、韋^f各納氏肉芽腫病、粒細(xì)月包缺乏、血管炎病，包括血管炎、大血管血管炎(包括風(fēng)濕性多肌痛和巨細(xì)胞(高安氏(Takayasu，s)動脈炎)、中血管血管炎(包括川崎病和結(jié)節(jié)性多動脈炎/結(jié)節(jié)性動脈周圍炎)、微觀(microscopic)多動脈炎、CNS血管炎、壞死性血管炎、皮膚性血管炎、超每文反應(yīng)性血管炎、系統(tǒng)性壞死性血管炎、ANCA相關(guān)血管炎(AAV)，諸如丘-施二氏(Churg-Strauss)血管炎或綜合征(CSS)和ANCA負(fù)性血管炎(ANCA-negativevasculitis)、顳動脈炎、再生障礙性貧血、自身免疫性再生障礙性貧血、庫姆斯陽性貧血(Coombspositiveanemia)、戴-布二氏(DiamondBlackfan)貧血、溶血性貧血或免疫性溶血性貧血包括自身免疫性溶血性貧血(AIHA)、惡性貧血(anemiaperniciosa)、阿狄森氏病、純紅細(xì)胞性貧血或再生障礙(PRCA)、因子VIII缺乏、血友病A、自身免疫性嗜中性粒細(xì)胞減少癥、全血細(xì)胞減少癥、白細(xì)J包減少癥、白細(xì)月包'滲出有關(guān)的疾病、CNS炎性病癥、多器官損傷綜合征諸如敗血癥、外傷或出血繼發(fā)的、抗原-抗體復(fù)合物介導(dǎo)的疾病、抗腎小球基底膜病、抗磷脂抗體綜合征、變應(yīng)性神經(jīng)炎、貝切特氏(Behset's)病/綜合征、卡斯?fàn)柭?Castleman，s)綜合征、古德帕斯丘氏綜合征、雷諾氏(Reynaud's)綜合征、斯耶格倫氏(Sj6gren's)綜合征、史-約二氏(Stevens-Johnson)綜合征、類天皰瘠諸如大皰性類天皰瘉和皮膚類天皰瘡、天皰瘡(包括尋常型天皰瘡、落葉型天皰瘡、粘膜類天皰瘡型天皰瘡(pemphigusmucus-membranepemphigoid)、和紅斑性天皰齊)、自身免疫性多內(nèi)分泌腺病、萊特氏(Reiter's)病或綜合征、免疫復(fù)合物性腎炎、抗體介導(dǎo)的腎炎、視神經(jīng)脊髓炎(NMO;也稱為Devic，ssyndrome)、多神經(jīng)病、慢性神經(jīng)病諸如IgM多神經(jīng)病或IgM介導(dǎo)的神經(jīng)病、血小板減少癥(例如心肌梗死患者發(fā)生的)，包括血栓性血小板減少性紫瘋(TTP)、輸血后紫癜(PTP)、肝素誘發(fā)的血小板減少癥、和自身免疫或免疫介導(dǎo)的血小板減少癥諸如特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)包括慢性或急性ITP、睪丸和卵巢的自身免疫病包括自身免疫性睪丸炎和卵巢炎、原發(fā)性曱狀腺功能減退癥、曱狀旁腺功能減退、自身免疫性內(nèi)分泌病包括曱狀腺炎諸如自身免疫性曱狀腺炎、橋本氏病、慢性曱狀腺炎(橋本曱狀腺炎)、或亞急性曱狀腺炎、自身免疫性曱狀腺疾病、特發(fā)性曱狀腺功能減退癥、格雷夫斯氏病、多腺體綜合征諸如自身免疫性多腺體綜合征(或多腺體內(nèi)分泌病綜合征)、瘤外綜合征(paraneoplasticsyndrome)，包括神經(jīng)學(xué)瘤夕卜綜合征諸如蘭伯特國伊頓(Lambert-Eaton)肌無力綜合征或伊頓-蘭伯特綜合征、僵人(stiff-man)或僵體綜合征、腦脊髓炎諸如變應(yīng)性腦脊髓炎(allergicencephalomyelitis)或變應(yīng)性腦脊髓炎(encephalomyelitisallergica)和實-驗性變應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)、重癥肌無力諸如胸腺瘤相關(guān)重癥肌無力、小腦變性、神經(jīng)性肌強直、視性眼陣攣或視性眼陣攣肌陣攣綜合征(OMS)、和感覺神經(jīng)病、多病灶運動神經(jīng)病、席漢氏(Sheehan，s)綜合征、自身免疫性肝炎、慢性肝炎、類狼瘡肝炎、巨細(xì)胞性肝炎、慢性活動性肝炎或自身免疫性慢性活動性肝炎、淋巴樣間質(zhì)性肺炎(LIP)、梗阻性細(xì)支氣管炎(非移植)對NSIP、格-巴二氏綜合征、貝格爾氏病(IgA腎病)、特發(fā)性IgA腎病、線性IgA皮膚病、原發(fā)性膽汁性肝硬化和肺硬變、自身免疫性腸病綜合征、腹腔或腹部疾病、口炎性腹瀉(麩質(zhì)腸病)、難治的口炎性腹瀉、特發(fā)性口炎性腹瀉、冷球蛋白血癥、肌萎縮側(cè)索硬化(ALS;盧格里克氏(LouGehrig's)病)、冠狀動脈病、自身免疫性耳病諸如自身免疫性內(nèi)耳病(AIED)、自身免疫性聽覺喪失、眼陣攣肌陣攣綜合征(opsoclonusmyoclonussyndrome,OMS)、多軟骨炎諸如難治的或復(fù)發(fā)的或復(fù)發(fā)性多軟骨炎、肺泡蛋白沉著癥、淀粉樣變、鞏膜炎、非癌性淋巴細(xì)胞增多、原發(fā)性淋巴細(xì)胞增多，包括單克隆B細(xì)胞淋巴細(xì)胞增多(如良性單克隆丙種球蛋白病和性質(zhì)未確定的單克隆丙種球蛋白病，MGUS)、周圍神經(jīng)病、瘤外綜合征、通道病諸如癲癇、偏頭痛、心率失常、月幾肉病癥、耳聾、盲、周期性癱瘓、和CNS的通道病、孤獨癥、炎性肌病、局灶性節(jié)段性腎小球硬化(FSGS)、內(nèi)分泌性眼病、葡萄膜^L網(wǎng)膜炎、脈絡(luò)膜^L網(wǎng)膜炎、自身免疫性肝臟病學(xué)病癥、纖維肌痛、多發(fā)性內(nèi)分泌衰竭(multipleendocrinefailure)、施密特氏(Schmidt，s)綜合征、腎上腺炎、胃萎縮、早老性癡呆、脫髓鞘病諸如自身免疫性脫髓鞘病和慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病、糖尿病性腎病、德雷斯勒氏(Dressler，s)綜合征、斑禿、CREST綜合征(鈣質(zhì)沉著、雷諾氏現(xiàn)象、食道運動功能障礙、指端硬化、和毛細(xì)管擴張)、男性和女性自身免疫性不孕不育、混合性結(jié)締組織病、恰加斯氏(Chagas，)病、風(fēng)濕熱、習(xí)慣性流產(chǎn)、農(nóng)民肺、多形紅斑、心切開術(shù)后綜合征、柯興氏綜合征、鳥愛好者肺、變應(yīng)性肉芽腫性血管炎、良性淋巴細(xì)胞性血管炎、阿爾波特氏(Alport，s)綜合征、肺泡炎諸如變應(yīng)性肺泡炎和纖維化肺泡炎、間質(zhì)性肺病、輸血反應(yīng)、麻風(fēng)、疾疾、利什曼病、錐蟲病(kypanosomiasis)、血吸蟲病、蛔蟲病、曲霉病、Sampter氏綜合征、卡普蘭氏(Caplan，s)綜合征、登革熱、心內(nèi)膜炎、心內(nèi)膜心肌纖維化、彌漫性肺間質(zhì)纖維化、肺間質(zhì)纖維化、肺纖維化、特發(fā)性肺纖維化、嚢性纖維化、眼內(nèi)炎、持久隆起性紅斑、胎兒成紅細(xì)胞增多癥、嗜酸性筋膜炎(eosinophilicfaciitis)、舒爾曼氏(Shulman，s)綜合征、費耳提氏(Felty，s)綜合征、flariasis、睫狀體炎諸如慢性睫狀體炎、異時性睫狀體炎、虹膜睫狀體炎(急性或慢性)、或?？怂故?Fuch，s)睫狀體炎、亨諾-許蘭二氏(Henoch-Schonlein)紫癥、人免疫缺陷病毒(HIV)感染、艾柯病毒感染(echovirusinfection),細(xì)小病毒感染、風(fēng)滲病毒感染、種痘后綜合征、先天性風(fēng)滲感染、愛潑斯坦-巴爾(Epstein-Barr)病毒感染、腮腺炎、埃文斯(Evan，s)綜合征、自身免疫性性腺衰竭、西登哈姆氏(Sydenham，s)舞蹈病、鏈球菌后腎炎、閉塞性血栓脈管炎(thromboangitisubiterans)、曱狀腺毒癥、脊髓癆、脈絡(luò)膜炎、巨細(xì)胞性多肌痛、慢性超敏性肺炎、干燥性角膜結(jié)膜炎、流行性角膜結(jié)膜炎、特發(fā)性腎炎綜合征、微小病變腎病、良性家族性和缺血-再灌注損傷、視網(wǎng)膜自身免疫、關(guān)節(jié)炎癥、支氣管炎、慢性阻塞性氣道疾病、硅沉著病、口瘙、口瘡性口炎、動脈硬化性病癥、無精子形成(aspermiogenese)、自身免疫性溶血、伯克氏(Boeck，s)病、冷球蛋白血癥、杜普伊特倫氏(Dupuytren，s)攣縮、晶體過敏性眼內(nèi)炎(endophthalmiaphacoanaphylactica)、變應(yīng)性小腸炎(enteritisallergica)、麻風(fēng)結(jié)節(jié)性紅斑、特發(fā)性面癱、慢性疲乏綜合征、風(fēng)濕熱(febrisrheumatica)、哈-里二氏(Hamman-Rich，s)病、感覺神經(jīng)性聽覺缺失、陣發(fā)性血紅蛋白尿(haemoglobinuriaparoxysmatica)、'性&夂功能減退、局P艮'1"生回腸炎、白細(xì)月包減少癥、傳染性單核細(xì)胞增多癥、橫貫性脊髓炎(tmversemyelitis)、原發(fā)性特發(fā)性粘液水腫、腎病、交感性眼炎(ophthalmiasymphatica)、肉芽腫性睪丸炎(orchitisgranulomatosa)、胰腺炎、急性多神經(jīng)根炎、壞疽性膿皮癥、查爾萬氏(Quervain，s)曱狀腺炎、獲得性脾萎縮(acquiredspenicatrophy)、由于抗精子蛋白抗體(antispermatozoanantibody)導(dǎo)致的不育癥、非惡性胸腺瘤、白瘋風(fēng)、SCID和EB病毒相關(guān)疾病(Epstein畫Barrvirus-associateddisease)、獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)、寄生蟲病例如利什曼病(lesihmania)、中毒性休克綜合征、食物中毒、T細(xì)胞浸潤有關(guān)的病癥、白細(xì)胞粘附缺陷、與細(xì)胞因子和T-淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的急性和遲發(fā)性超敏感性有關(guān)的免疫應(yīng)答、白細(xì)胞滲出有關(guān)的疾病、多器官損傷綜合征、抗原-抗體復(fù)合物介導(dǎo)的疾病、抗腎小球基底膜病、變應(yīng)性神經(jīng)炎、自身免疫性多內(nèi)分泌腺病、卵巢炎、原發(fā)性粘液水腫、自身免疫性萎縮性胃炎、交感性眼炎、風(fēng)濕病、混合性結(jié)締組織病、腎病綜合征、胰島炎、多內(nèi)分泌衰竭(polyendocrinefailure)、外周神經(jīng)病、自身免疫性多腺綜合征I型、成人期發(fā)作的特發(fā)性曱狀旁腺功能減退(AOIH)、全部脫發(fā)(alopeciatotalis)、擴張型心肌病、獲得性大皰性表皮松解(epidermolisisbullosaacquisita)(EBA)、血色素沉著、心月幾炎、腎病綜合征、原發(fā)性硬化性膽管炎、化膿性或非化膿性鼻竇炎、急性或慢性鼻竇炎、篩竇炎、額竇炎、上頜竇炎、或蝶竇炎、嗜曙紅細(xì)胞相關(guān)病癥諸如嗜曙紅細(xì)胞增多癥、肺嗜曙紅細(xì)胞增多性浸潤、嗜曙紅細(xì)胞增多-肌痛綜合征、呂弗勒氏(Loffler，s)綜合征、慢性嗜酸性肺炎、熱帶肺嗜曙紅細(xì)胞增多、支氣管肺曲霉病、曲霉腫、或含有嗜曙紅細(xì)胞的肉芽腫、過敏反應(yīng)、血清陰性脊推關(guān)節(jié)炎病(spondyloarthritides)、多內(nèi)分泌自身免疫病、硬化性膽管炎、鞏膜、鞏膜外層、慢性粘膜皮膚假絲酵母病、布魯頓氏(Bmton，s)綜合征、嬰兒期一過性低丙種球蛋白血癥、威斯科特-奧爾德里齊(Wiskott-Aldrich)綜合征、共濟失調(diào)性毛細(xì)管擴張、與膠原病有關(guān)的自身免疫性病癥、風(fēng)濕病、神經(jīng)病學(xué)疾病、淋巴結(jié)炎、缺血再灌注損傷、血壓應(yīng)答降低、血管功能障礙、血管擴張癥(antgiectasis)、組織損傷、心血管缺血、痛覺過敏、腦缺血、和伴隨血管化的疾病、變應(yīng)性超敏性病癥、腎小球腎炎病(glomemlonephritides)、再灌注損傷、心肌或其它組織的再灌注損傷、具有急性炎性成分的皮膚病、急性化膿性腦膜炎或其它中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性病癥、眼和眶炎性病癥、粒細(xì)胞輸血相關(guān)綜合征、細(xì)胞因子誘發(fā)的毒性、急性重度炎癥、慢性頑固性炎癥、腎盂炎、肺硬變、糖尿病性腎病、糖尿病性大動脈疾病、動脈內(nèi)增生、消化性潰瘍、心瓣炎、和子宮內(nèi)膜異位癥。如本文所使用的術(shù)語"非何杰金氏淋巴瘤(non-Hodgkin，sLymphoma)"或"NHL"是指除何杰金氏淋巴瘤之外的淋巴系統(tǒng)的癌癥。根據(jù)何杰金氏淋巴瘤中存在里-施(Reed-Sternberg)細(xì)胞而非何杰金氏淋巴瘤中沒有所述細(xì)胞通常可將何杰金氏淋巴瘤與非何杰金氏淋巴瘤區(qū)分開來。如本文所使用的術(shù)語所涵蓋的非何杰金氏淋巴瘤的實例包括本領(lǐng)域技術(shù)人員(例如腫瘤學(xué)家或病理學(xué)家)根據(jù)本領(lǐng)域已知的分類方案能夠鑒定的任何淋巴瘤，所述分類方案諸如修訂的歐洲美國淋巴瘤(REAL)方案，如ColorAtlasofClinicalHematology(3rdedition)，A.VictorHoffbrandandJohnE.Pettit(eds.)(HarcourtPublishersLtd.,2000)中所述。尤其參見圖11.57、11.58和11.59中的列表。更具體的實例包括(但不限于)復(fù)發(fā)或難治的NHL，前線低級NHL(frontLineLowgradeNHL)，HI/IV階段NHL，化療耐受性NHL,前體B成淋巴細(xì)胞性白血病(precursorBLymphoblasticLeukemia)和/或淋巴瘤，小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤，B細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病和/或幼淋巴細(xì)胞性白血病和/或小淋巴細(xì)胞性淋巴瘤，B細(xì)胞幼淋巴細(xì)胞性淋巴瘤，免疫細(xì)胞瘤和/或淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤，淋巴漿細(xì)胞性淋巴瘤，邊緣區(qū)B細(xì)胞淋巴瘤，脾邊緣區(qū)淋巴瘤，結(jié)節(jié)外邊緣區(qū)MALT淋巴瘤，結(jié)節(jié)邊緣區(qū)淋巴瘤，毛細(xì)胞性白血病，漿細(xì)胞瘤和/或漿細(xì)胞性骨髓瘤，低級/濾泡淋巴瘤，中級/濾泡NHL,套細(xì)胞淋巴瘤，濾泡中心淋巴瘤(濾泡性)，中級彌漫性NHL,彌漫性大B細(xì)月包〉林巴瘤，攻擊性(aggressive)NHL(包4舌攻擊性前線NHL(aggressivefront-lineNHL)和攻擊性復(fù)發(fā)NHL),自體干細(xì)胞移植后復(fù)發(fā)或難治的NHL,原發(fā)縱隔大B細(xì)胞淋巴瘤，原發(fā)彌漫性淋巴瘤，高級成免疫細(xì)胞NHL,高級成淋巴細(xì)胞NHL，高級小無裂細(xì)胞(highgradesmallnon-cleavedcell)NHL,貯積病(bulkydisease)NHL,伯基特(Burkitt，s)淋巴瘤，前體(外周)T細(xì)胞成淋巴細(xì)胞性白血病和/或淋巴瘤，成人T細(xì)胞淋巴瘤和/或白血病，T細(xì)胞慢性淋巴細(xì)胞性白血病和/或幼淋巴細(xì)胞白血病，大顆粒狀淋巴細(xì)胞性白血病，蕈樣肉芽腫病和/或塞扎里綜合征(Sezarysyndrome),淋巴結(jié)外(extranodal)天然殺傷細(xì)胞/T細(xì)胞(鼻型)淋巴瘤，腸病型T細(xì)胞淋巴瘤，肝脾T細(xì)胞淋巴瘤，皮下脂膜炎樣T細(xì)胞淋巴瘤，皮膚(表皮)淋巴瘤，間變性大細(xì)胞淋巴瘤，血管中心性淋巴瘤，腸型T細(xì)胞淋巴瘤，外周T細(xì)胞(未有特殊說明)淋巴瘤和血管免疫母細(xì)胞性T細(xì)月包淋巴瘤(angioimmunoblasticT誦cellLymphoma)。"治療"或"減輕"指治療性處理和預(yù)防或防止性的措施，其中目的是防止或減緩(降低)靶病理狀況或疾病。如果接受了根據(jù)本發(fā)明方法的治療量的結(jié)合CD20的本發(fā)明抗體之后，受試者顯示出具體疾病的一種或多種體征和癥狀的可觀察或可測量的降低或缺少，則受試者自身免疫性疾病或CD20陽性B細(xì)胞惡性腫瘤得到了成功的"治療"。例如，對于癌癥是癌細(xì)胞數(shù)減少或癌細(xì)胞消失；胂瘤體積減小；抑制(即，以某種程度減緩并優(yōu)選停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；以某種程度抑制腫瘤生長；增加癥狀緩解時長和/或某種程度地減輕與特定癌癥相關(guān)的一種或多種癥狀；減少發(fā)病率和死亡率，并改善生活質(zhì)量。疾病體征或癥狀的減輕也可憑患者的感覺。治療可達(dá)到完全響應(yīng)，其定義為所有癌癥征候消失，或達(dá)到部分響應(yīng)，其中腫瘤大小減小了，優(yōu)選減小超過百分之50，更優(yōu)選75%。如果患者經(jīng)歷著穩(wěn)定的病情，這時也可認(rèn)為患者得到了治療。在優(yōu)選的具體實施方式中，癌癥患者在一年后，優(yōu)選在15個月后，癌癥無進(jìn)展(progression-free)。這些評估治療成功和改善疾病的參數(shù)可通過所屬領(lǐng)域合適的醫(yī)生所熟悉的常規(guī)過程來迅速地測量。"治療有效量"指抗體或藥物的量，其能有效"治療"受試者中的疾病或病癥。在癌癥病例中，治療有效量的藥物減少了癌細(xì)胞的數(shù)量；減小了腫瘤大??；抑制(即，以某種程度減緩并優(yōu)選停止)癌細(xì)胞浸潤外周器官；抑制(即，以某種程度減緩并優(yōu)選停止)腫瘤轉(zhuǎn)移；以某種程度抑制腫瘤生長；和/或以某種程度減輕與癌癥相關(guān)的一種過多種癥狀。可參見前述"治療"的定義。"CD20"抗原是非糖基化的穿膜磷蛋白，其分子量約為35kD，其可在超過90%的外周血或淋巴器官的B細(xì)胞表面上發(fā)現(xiàn)。在早期前B細(xì)胞發(fā)育期間表達(dá)CD20,直到漿細(xì)胞分化；人干細(xì)胞、原祖淋巴細(xì)胞(lymphoidprogenitorcell)或正常漿細(xì)胞上沒有發(fā)現(xiàn)它。CD20出現(xiàn)在正常B細(xì)胞以及惡性B細(xì)胞上。文獻(xiàn)中CD20的其它名稱包括"B-淋巴細(xì)胞限制性分化抗原"和"Bp35"。例如，CD20抗原在Clark和Ledbetter(Adv.Can.Res.52:81-149(1989))和Valentine等(J.Biol.Chem.264(19):11282-11287(1989))中有描述。術(shù)語"抗體"以其最廣意義使用，并具體涵蓋了單克隆抗體(包括全長的單克隆抗體)、多特異性抗體(如，雙特異性抗體)、和抗體片段，只要它們顯示出所希望的生物活性或功能即可。本發(fā)明的CD20結(jié)合抗體的生物活性包括抗體與人CD20的結(jié)合，更優(yōu)選是與人和其他靈長類(包括獼猴、恒河猴、黑猩猩、狒狒)的CD20結(jié)合?？贵w結(jié)合CD20的Kd值不高于1xl(T8，優(yōu)選Kd值不高于約1xl(T9，并能殺死或清除體內(nèi)的B細(xì)胞，優(yōu)選其相對于不用該抗體處理的合適的陰性對照相比，清除至少20%。B細(xì)胞消除可以是ADCC、CDC、凋亡、或其它機制之一種或多種所造成的。在本文治療疾病的一些具體實施方式中，特異性效應(yīng)器功能或機制是所希望的，并且人源化2H7的某些變體或某些人CD20結(jié)合抗體優(yōu)選實現(xiàn)那些生物功能，如ADCC。"抗體片段"包含一部分全長抗體，一般是其抗原結(jié)合或可變的區(qū)域?？贵w片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2、和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；和抗體片段所形成的多特異性抗體。"Fv"是最小的抗體片段，其包含完整的抗原識別和結(jié)合位點。該片段由一個重鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域和一個輕鏈可變區(qū)結(jié)構(gòu)域緊密地非共價連接成的二聚體組成。通過這兩個結(jié)構(gòu)域的折疊得到了6個高變環(huán)(H和L鏈各3個)，其帶有用于結(jié)合抗原的氨基酸殘基并將抗原結(jié)合特異性賦予了抗體。即使單可變結(jié)構(gòu)域(或Fv的一半，其僅包含3個特異針對抗原的CDR)仍具有識別和結(jié)合抗原的能力，但親和力比完整結(jié)合位點低。本文所用的術(shù)語"單克隆抗體，，指來自實質(zhì)均一的抗體群的抗體，即，包含在該群中的抗體個體是相同的和/或結(jié)合相同的表位，除了在生產(chǎn)單克隆抗體期間可能產(chǎn)生極少量的變體。該單克隆抗體典型地包括含能結(jié)合靶的多肽序列的抗體，其中靶結(jié)合多肽序列通過以下方法獲得其包括從多個多肽序列中選擇出單靶位結(jié)合多肽序列。例如，選擇過程可以從多個克隆中選擇出獨特的克隆，如從一組雜交瘤克隆、噬菌體克隆或重組DNA克隆中選擇。例如，應(yīng)當(dāng)理解的是，可以進(jìn)一步改變所選的靶結(jié)合序列，從而改善針對靶的親和力，使靶結(jié)合序列人源化，改善其在細(xì)胞培養(yǎng)基中的產(chǎn)量，減少其體內(nèi)免疫原性，創(chuàng)建多特異性抗體，等，而且包含改變的靶結(jié)合序列的抗體也是本發(fā)明的單克隆抗體。與通常包括抗不同決定簇(表位)的抗體的多克隆抗體制品相反，單克隆抗體制品中的每個單克隆抗體只針對抗原上單個決定蔟。除了它們的特異性，單克隆抗體制品的優(yōu)點還在于它們通常未被其它免疫球蛋白污染。修飾語"單克隆"表示抗體得自實質(zhì)均一的抗體群的特征，并不解釋成需要以任何特定的方式產(chǎn)生的抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明使用的單克隆抗體可通過各種技術(shù)制備，例如，雜交瘤技術(shù)(如，Kohler等，Nature,256:495(1975);Harlow等，Antibodies:ALaboratoryManual,(ColdSpringHarborLaboratoryPress,第2版.1988);Hammerling等，參見MonoclonalAntibodiesandT-cellHybridomas563-681,(Elsevier,N.Y.，1981)),重組DNA技術(shù)(參見如，美國專利4,816,567),噬菌體展示技術(shù)(參見如，Clackson等，Nature,352:624-628(1991);Marks等，J.Mol.Biol.，222:581-597(1991);Sidhu等，J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004);Lee等，J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,Proc.Nat.Acad.Sci.USA101(34):12467-12472(2004);和Lee等.J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004)，以及在具有人免疫球蛋白基因座位或編碼人免疫球蛋白序W01998/24893;WO1996/34096;W01996/33735;WO1991/10741;Jakobovits等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:2551(1993);Jakobovits等，Nature,362:255-258(1993);Bruggemann等，YearinImmuno.，7:33(1993);美國專利5,545,806;5,569,825;5,591,669(GenPharm);5,545,807;WO1997/17852;美國專利5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;和5,661,016;Marks等，Bio/Technology,779-783(1992);Lonberg等，Nature,368:856-859(1994);Morrison,Nature,368:812-813(1994);Fishwild等，NatureBiotechnology,14:845-851(1996);Neuberger,NatureBiotechnology,826(1996);和Lonberg和Huszar，Intern.Rev.Immunol.，11:65-93(1995)。本發(fā)明的CD20結(jié)合抗體的"功能片段"是那些保持與CD20結(jié)合的片段，其親和性與衍生它們的全長的完整分子的相同，并且，通過諸如本文所述的那些體外或體內(nèi)測試所測，其能顯示出包括消除B細(xì)胞的生物活性。術(shù)語"可變"指可變結(jié)構(gòu)域的某些片段可在抗體間的序列中存在大量差異的事實。V結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)抗原結(jié)合并限定了特定抗體針對其特定抗原的特異性?？墒?，可變性并不是在可變結(jié)構(gòu)域的110個氨基酸的范圍內(nèi)平均分布的。事實上，V區(qū)由相對不變的15-30氨基酸個區(qū)段(稱為框架區(qū)(FR))和分隔它的較短的分別為9-12個氨基酸長度的極度可變的區(qū)域(稱為"高變區(qū)")組成。天然重和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域分別包含4個FR,其大致采用p折疊構(gòu)象，其由3個高變區(qū)相連，形成了環(huán)狀連結(jié)，并在一些情況下形成了部分(3折疊結(jié)構(gòu)。每個鏈中的高變區(qū)通過FR緊密連結(jié)在一起，和其它鏈的高變區(qū)一起，用以形成抗體的抗原結(jié)合位點(參見Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。恒定結(jié)構(gòu)域不直接參與抗體與抗原的結(jié)合，但顯示出各種效應(yīng)器功能，如參與抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用(ADCC)。術(shù)語"高變區(qū)"在用于本文時，指起抗原結(jié)合作用的抗體氨基酸殘基。高變區(qū)一般包含來自"互補決定區(qū)"或"CDR"(如約在VL中殘基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97(L3)，和約在VH中31-35B(H1)、50隱65(H2)和95-102(H3)附近(Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth，Bethesda,MD.(1991》的氨基酸殘基和/或來自"高變環(huán)，，(如VL中殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)，和VH中26-32(Hl)、52A國55(H2)和96-101(H3)(Chothia和LeskLMol.Biol.196:901-917(1987))的那些殘基。如本文所述的，"共有序列，，或共有V結(jié)構(gòu)域序列是人工序列，其源于對已知人免疫球蛋白可變區(qū)序列的氨基酸序列的比較。根據(jù)這些比較，制備編碼V結(jié)構(gòu)域氨基酸的重組核酸序列，其是源于人K和人H鏈亞型IIIV結(jié)構(gòu)域的共有序列。共有V序列不具有任何已知的抗體結(jié)合特異性或親和性。本文中的單克隆抗體尤其包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與來自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類型或亞類之抗體的相應(yīng)序列相同或同源，而鏈的其余部分同源或相同于來源于另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類型或亞類的抗體的相應(yīng)序列，以及這類抗體的片段，只要它們表現(xiàn)所需生物學(xué)活性(美國專利4，816，567;和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。制備嵌合抗體的方法是本領(lǐng)域已知的。非人(例如鼠)抗體的"人源化，，形式是包含來源于非人免疫球蛋白最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(諸如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗體的其它抗原結(jié)合亞序列)。大多數(shù)情況下，人源化抗體是人免疫球蛋白(受者抗體)，其中來自受者的互補決定區(qū)(CDR)的殘基被來自非人物種(供者抗體)，例如小鼠、大鼠、兔的具有所需特異性、親和力和能力的CDR的殘基取代。在一些實例中，人免疫球蛋白Fv框架區(qū)(FR)的殘基被相應(yīng)的非人類殘基代替。而且，人源化抗體可以包括在受者抗體或引入的CDR或框架序列中沒有的殘基。這些修飾用于進(jìn)一步改進(jìn)或最大化抗體性能。通常，人源化抗體包含至少一個，通常兩個基本上全部的可變區(qū)，其中所有或基本上所有的超變環(huán)均對應(yīng)于非人免疫球蛋白的超變環(huán)，而且所有或基本上所有的FR區(qū)是人免疫球蛋白序列的FR區(qū)，盡管所述FR區(qū)可包括一個或多個能夠提高結(jié)合親和力的氨基酸取代。FR中的這些氨基酸取代的數(shù)目通常在H鏈中不多于6個，而在L鏈中，不多于3個。人源化抗體還任選至少包括免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)的一部分，通常是人免疫球蛋白的一部分。更多纟田節(jié)參見Jones^a/.，Nature321:522-525(1986);Riechma皿aa/.，Nature332:323-329(1988);及Presta，Curr.Op.Struct.Biol.2:593-596(1992)?？贵w"效應(yīng)器功能"指那些歸因于抗體Fc區(qū)(天然序列Fc區(qū)或氨基酸序列變體Fc區(qū))的生物活性，并可隨抗體同種型(isotype)而變化?？贵w效應(yīng)器功能的例子包括Clq結(jié)合和補體依賴性細(xì)胞毒性；Fc受體結(jié)合性；抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性(ADCC);吞噬作用；下調(diào)細(xì)胞表面受體(如B細(xì)胞受體)和B細(xì)胞活化。"抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性"或"ADCC"指細(xì)胞毒性的形式，其中分泌的Ig結(jié)合在某些細(xì)胞毒性細(xì)胞(如自然殺傷(NK)細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、和巨嗟細(xì)胞)的Fc受體(FcR)上，其能使這些細(xì)胞毒性效應(yīng)器細(xì)胞特異結(jié)合于含抗原的靶細(xì)胞上，隨后用細(xì)胞毒性殺死靶細(xì)胞?？贵w"武裝"細(xì)胞毒性細(xì)胞，而且為了有該殺傷作用而絕對需要這樣。用于介導(dǎo)ADCC的主要細(xì)胞，NK細(xì)胞，僅表達(dá)FcyRin,而單核細(xì)胞表達(dá)FcyRI、FcyRII和FcyRIII。造血細(xì)月包上的FcR表達(dá)在Ravetch和Kinet(Annu.Rev.Immunol9:457-92(1991))的第464頁的表3中有概述。如美國專利5,500,362或5,821,337號所述的，為了評估感興趣的分子的ADCC活性，可進(jìn)行體外ADCC測試。用于該測試的效應(yīng)器細(xì)胞包括外周血單個核細(xì)胞(PBMC)和自然殺傷(NK)細(xì)胞?？蛇x地，或另外，感興趣的分子的ADCC活性可在體內(nèi)進(jìn)行評估，如在動物模型中進(jìn)行，如Clynes等.PNAS(USA)95:652-656(1998)所述的。"Fc受體"或"FcR"描述了結(jié)合抗體的Fc區(qū)的受體。優(yōu)選的FcR是具有天然序列的人FcR。而且，優(yōu)選的FcR是結(jié)合IgG抗體(gamma受體)的受體，并包含F(xiàn)cyRI、FcyRII、和FcyRIII亞型的受體，其包括等位基因變體并可選地包括這些受體的不同剪接形式。FcyRII受體包括FcyRHA("活化受體")和FcyRIIB("抑制受體")，其具有相似的氨基酸序列，主要區(qū)別在其細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域?；罨荏wFcyRIIA在其細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含基于免疫受體酪氨酸的活化基序(ITAM)。抑制受體FcyRIIB在其細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域中包含基于免疫受體酪氨酸的抑制基序(ITIM)。(參見綜述M.inDaSron，Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR的綜述可見Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol9:457-92(1991);Capel等，Immunomethods4:25-34(1994);和deHaas等，J丄ab.Clin.Med.126:330-41(1995)。其它FcR，包括將來鑒定出的那些，都涵蓋在本文術(shù)語"FcR"內(nèi)。該術(shù)語也包括新生受體(FcRn)，其負(fù)責(zé)將母體IgG轉(zhuǎn)移到胎兒(Guyer等，J.Immunol.117:587(1976)和Kim等，J.Immunol.24:249(1994))。WO00/42072(Presta)和WO2004/056312(Lowman等.)描述了具有改善的或減弱的與FcR結(jié)合的抗體變體。這些專利公開的內(nèi)容明確納入本文參考。也可參見，Shields等.J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。"補體依賴的細(xì)胞毒性"或"CDC"指在補體存在的條件下溶解靶細(xì)胞。補體系統(tǒng)的第一成分(Clq)與(合適亞型的)抗體的結(jié)合啟動了經(jīng)典補體途徑的活化，所述抗體與它們識別的抗原結(jié)合。為了評估補體活化，如Gazzano-Santoro等，J.Immunol.Methods202:163(1996)所述，可進(jìn)行CDC測試。帶有可變的Fc區(qū)氨基酸序列并具有增加或減少的Clq結(jié)合能力的多肽變體在美國專利6,194，551B1、W099/51642中有描述。那些專利公開的內(nèi)容明確納入本文參考。也可參見，Idusogie等.J.Immunol.164:4178-4184(2000)。組合物CD20抗體包括"C2B8"，其現(xiàn)在稱為"rituximab"("RITUXAN⑧")(美國專利第5，736,137號)；釔-[90]-標(biāo)記的2B8鼠抗體，其命名為"Y2B8"或"IbritumomabTiuxetan，，(ZEVALIN⑧)，其可通過商業(yè)渠道從IDECPharmaceuticals,Inc.獲得(美國專利5,736,137;2B8在1993年6月22日以登錄號HB11388保藏于ATCC);鼠lgG2a"Bl"，也稱為"Tositumomab"，任選其可用1311標(biāo)記以產(chǎn)生"131I-B1"或"碘1131tositumomab"抗體(BEXXARTM)，其可通過商業(yè)渠道從Corixa獲得(也可參見，美國專利5,595,721);鼠單克隆抗體"lF5，，(Press等.Blood69(2):584-591(1987)和其變體，包括"框架修補的(frameworkpatched)"或人源化1F5(WO2003/002607，Leung，S.;ATCC保藏號HB-96450);鼠2H7和嵌合2H7抗體(美國專利5,677,180);人源化2H7(WO2004/056312Lowman等)和如下所述的)；HUMAX-CD2()TM完整人抗體(Genmab，Denmark;參見如，Glennie和vandeWinkel，DrugDiscoveryToday8:503-510(2003)和Cragg等，Blood101:1045-1052(2003));WO2004/035607(Teeling等)提及的人單克隆抗體；US2004/0093621(ShitaRA等.)所述的具有復(fù)雜N-糖香鍵的與糖鏈結(jié)合的Fc區(qū)的抗體；CD20結(jié)合分子，如AME系列的抗體，如，WO2004/103404^是及的AME-133抗體(Watkins等，AppliedMolecularEvolution);A20抗體或其變體如嵌合或人源化A20抗體(分別為cA20、hA20)(US2003/0219433，Immunomedics);和單克隆抗體L27、G28-2、93-lB3、B隱C1或NU-B2，其可得自國際白細(xì)胞分型研討會(Valentine等，參見LeukocyteTypingIII(McMichael,編，p.440,OxfordUniversityPress(1987))。本文優(yōu)選的CD20抗體是人源化的、嵌合的、或人的CD20抗體，更優(yōu)選是人源化2H7抗體、rituximab、嵌合的或人源化的A20抗體(Immunomedics)、和HUMAX-CD20人CD20抗體(Genmab)。人源化抗體結(jié)合人CD20并優(yōu)選還結(jié)合其它靈長類CD20,它包含H《連，或所有的CDR和人抗體(作為受體抗體)基本上所有的共有框架殘基。供體抗體可以是各種非人物種，包括小鼠、大鼠、豚鼠、山羊、兔、馬、靈長類等的抗體，但最常見的是鼠抗體。上下文中的"基本所有"是指人源化抗體中的受體FR區(qū)可包含一個或多個最初不出現(xiàn)在人共有FR序列中的氨基酸。這些FR變化可包括未在受體或供體抗體中發(fā)現(xiàn)的殘基。在一個具體實施方式中，供體抗體是鼠2H7抗體，其如圖1A和1B所示，V區(qū)包括H和L鏈之每一個的CDR和FR序列。在一個特定的具體實施方式中，用于人Fab框架的殘基對應(yīng)于人VK亞型I和Vw亞型III的共有序列，這些共有序列分別如圖1A和圖1B所示。本發(fā)明的人源化2H7抗體具有鼠供體抗體H鏈中的至少一個CDR。在一個具體實施方式中，結(jié)合人CD20的人源化2H7抗體包含供體抗體H和L鏈的CDR。蛋白C結(jié)構(gòu)域上的人源化V結(jié)構(gòu)域。在優(yōu)選的具體實施方式中，H鏈C區(qū)來源于人IgG，優(yōu)選來源于IgGl或lgG3。L鏈C結(jié)構(gòu)域優(yōu)選來源于人K鏈。為了本文中的目的，"人源化2H7"指完整的抗體或抗體片段，其包含可變輕鏈(VO序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKR(SEQEDNO:l);和可變重鏈(VH)序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLBWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYEDVWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:2)其中人源化2H7抗體是完整的抗體，優(yōu)選它包含v16輕鏈氨基酸序列DIQMTQSPSSLSASVGDRVnTCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAPSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(SEQIDNO:3);和重鏈氨基S臾序列EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTSYNMHWVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPBPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAP正KTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQIDNO:4)斷出超過56，000個新病例。CD20也是用于治療自身免疫性疾病的耙抗原。rituximab(RITUXAN)抗體用于治療患有CD20陽性的復(fù)發(fā)性或頑固性低級或濾泡性B細(xì)胞非何杰金氏淋巴瘤的患者，該抗體是抗人CD20抗原的基因工程嵌合鼠/人單克隆抗體(可從商業(yè)途徑得自Genentech，Inc.，SouthSanFrancisco,California,美國)。Rituximab在頒布于1998年4月7曰的美國專利第5,736,137號(Anderson等)和美國專利第5,776,456號中是稱為"C2B8"的抗體。在各種非惡性自身免疫病中也研究Rituximab,其中B細(xì)胞和自身抗體顯示出在疾病病理生理中起作用。Edwards等，BiochemSoc.Trans.30:824-828(2002)。有報道，Rituximab潛在地減輕以下疾病的體征和癥狀例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)(Leandro等，Ann.Rheum.Dis.61:883—888(2002);Edwards等，ArthritisRheum.，46(Suppl,9):S46(2002);Stahl等，Ann.Rheum.Dis.，62(SuppU):OP004(2003);Emery等，ArthritisRheum.48(9):S439(2003))、狼齊(Eisenberg,Arthritis.Res.Ther.5:157—159(2003);Leandro等，ArthritisRheum.46:2673—2677(2002);Gorman等，Lupus,13:312-316(2004))、免疫性血小板減少性紫瘋(D，Arena等，Leuk丄ymphoma44:561—562(2003);Stasi等，Blood,98:952-957(2001);Saleh等，Semin.Oncol.，27(Supp12):99-103(2000);Zaia等，Haematolgica,87:189-195(2002);Ratanatharathorn等，Ann.Int.Med.，133:275-279(2000))、純紅細(xì)胞再生障礙(pureredcellaplasia)(Auner等，Br.J.Haematol.，116:725-728(2002));自身免疫性貧血(Zaja等，Haematologica87:189-195(2002)(錯字勘誤表在Haematologica87:336(2002))、冷凝集素疾病(coldagglutinindisease)(Layios等，Leukemia,15:187-8(2001);Berentsen等，Blood,103:2925-2928(2004);Berentsen等，Br.J,Haematol.,115:79-83(2001);Bauduer,Br.J.Haematol.,112:1083畫10卯(2001);Damiani等，Br.J.Haematol.,114:229-234(2001》、嚴(yán)重胰島素抗性的B型綜合癥(Coll等,N.Engl.J.Med"350:310-311(2004)、混合性冷球蛋白血癥(DeVita等，ArthritisRheum.46Suppl.9:S206/S469(2002))、重癥肌無力(Zaja等，Neurology,55:1062-63(2000);Wylam等，J.Pediatr.,143:674-677(2003))、韋格納氏肉芽腫病(Wegener'sgranulomatosis)(Specks等，Arthritis&Rheumatism44:2836-2840(2001》、頑固性尋常性天皰齊(refractorypemphigusvulgaris)(Dupuy等，ArchDermatol"<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>殘基編號是才艮據(jù)Kabat等(SequencesofImmunologicalInterest.第5版.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth，Bethesda,Md.(1991))的，其中的插入位顯示為a、b、c、d、和e,而缺口在序列圖中顯示為破折號。例如，在純化Ab期間或通過重組工程制備編碼抗體多肽的核酸時，在包含F(xiàn)c區(qū)的CD20結(jié)合抗體中，可去除Fc區(qū)的C-末端賴氨酸(根據(jù)EU編號系統(tǒng)是殘基447)。因此，用于本發(fā)明的結(jié)合CD20的抗體組合物可包括帶有K447、去除所有K447的抗體、或帶有和不帶有K447殘基的抗體混合物。IgG中的N-糖基化位點是在CH2結(jié)構(gòu)域中的Asn297上。用于本發(fā)明治療方法的CD20結(jié)合抗體包括具有Fc區(qū)的任意前述CD20抗體的組合物，其中組合物中的約80-100%(并優(yōu)選約卯-99%)的抗體包含成熟的核心碳水化合物結(jié)構(gòu)，其缺少連于糖蛋白Fc區(qū)的海藻糖。本文證實該組合物顯示了出人意料的對FcYRIIIA(F158)的改善的結(jié)合，其在與人IgG相互作用中不如FcyRIIIA(V158)有效。在正常、健康非洲裔美國人和高加索人中，F(xiàn)cyRIIIA(F158)比Fc(RIIIA(V158)更常見?？蓞⒁奓ehrnbecher等.Blood94:4220(1999)。CD20結(jié)合抗體涵蓋了雙特異性的CD20結(jié)合抗體，其中抗體的一個臂具有能結(jié)合CD20的抗體的H和L鏈，如本發(fā)明人源化2H7抗體的H和L鏈，并且另一個臂具有針對第二抗原的V區(qū)結(jié)合特異性。在特定具體實施方式中，第二抗原選自CD3、CD64、CD32A、CD16、NKG2D或其它NK活^匕配體。治療方法Genentech和BiogenIdee的臨床調(diào)查評估了利用從低至10mg直至lg的劑量范圍的劑量的抗CD20抗體來治療自身免疫性疾病的治療效果(參見實施例4)。一般而言，在這些臨床調(diào)查中給藥抗體2劑，其間間隔約2周。臨床調(diào)查研究的方案的例子包括，對于人源化CD20抗體2H7，以2x10mg(對于70kg、67英寸高的患者，總劑量為10.1mg/m2)、2x50mg(對于70kg、67英寸高的患者，總劑量為55mg/m2)、2x200mg(對于70kg、67英寸高的患者，總劑量為220mg/m2)、2x500mg(對于70kg、67英寸高的患者，總劑量為550mg/m、和2x1000mg(對于70kg、67英寸高的患者，總劑量為1100mg/m2);而對于Rituxan,以2x500mg(對于70kg、67英寸高的患者，總劑量為550mg/m2)、2x1000mg(對于70kg、67英寸高的患者，總劑量為1100mg/m2)。在給藥第一劑抗體后，觀察到用了這些劑量之每一種，能實質(zhì)(基本)消除(substantialdeletion)循環(huán)的B-淋巴細(xì)胞。目前，用人源化2H7vl6以單次或雙次靜脈內(nèi)輸注來研究10mg至2000mg的劑量范圍。本發(fā)明提供了通過向患者以穩(wěn)定的O.lmg至1000mg劑量范圍(ataflatdoseintherangeofO.lmgtolOOOmg)給藥結(jié)合CD20的抗體來治療自身免疫性疾病和消除患有自身免疫性疾病的患者中B細(xì)胞的方法。有益的是，能將劑量減少到最小治療有效劑量。我們發(fā)現(xiàn)以少于300mg(甚至以lOmg)的劑量，都能達(dá)到對B細(xì)胞的實質(zhì)消除。所以，在本B細(xì)胞消除和治療方法的優(yōu)選的具體實施方式中，以O(shè),l、0.5、1、5、10、15、20、25、30、40、50、75、100、125、150、200或250mg的劑量給藥結(jié)合CD20的抗體。所希望的劑量取決于疾病和疾病的嚴(yán)重性、疾病的階段、所希望調(diào)節(jié)的B細(xì)胞水平、和其它所述領(lǐng)域醫(yī)師熟悉的因素。如果部分或短期B細(xì)胞消除是要達(dá)到的目的，則可用更低的劑量，如以20mg、lOmg或更低。50、75、100、125、150、200、或250mg的劑量也可用于針對B細(xì)胞惡性腫瘤的維持治療中，如用于治療NHL。所希望消除的B細(xì)胞水平取決于疾病。為了治療CD20陽性的癌癥，期望最大化地消除B細(xì)胞，所述細(xì)胞是本發(fā)明抗CD20抗體的靶標(biāo)。所以，為了治療CD20陽性的B細(xì)胞瘤，期望B細(xì)胞消除到至少足以阻止疾病進(jìn)展，這可由所屬領(lǐng)域醫(yī)師評估，如通過監(jiān)測腫瘤生長(大小)、癌細(xì)胞類型的增殖、轉(zhuǎn)移、特定癌的體征和癥狀。優(yōu)選B細(xì)胞消除到足以防止疾病進(jìn)展至少2個月，更優(yōu)選3個月，更加優(yōu)選4個月，更優(yōu)選5個月，更加優(yōu)選6或更多月。在更優(yōu)選的具體實施方式中，B細(xì)胞消除到足以增加緩解的時間至少6個月，更優(yōu)選9個月，更優(yōu)選1年，更優(yōu)選2年，更優(yōu)選3年，更加優(yōu)選5或更多年。在最優(yōu)選的具體實施方式中，B細(xì)胞消除到足以治愈疾病。在優(yōu)選的具體實施方式中，癌患者中的B細(xì)胞比治療前的基線水平至少消除了約75%、并更優(yōu)選80%、85%、90°/。、95%、99%,甚至達(dá)到100%。為了治療自身免疫性疾病，期望通過調(diào)節(jié)結(jié)合CD20的抗體的劑量來調(diào)節(jié)B細(xì)胞消除的程度，這取決于患者個體中的疾病和/或病況的嚴(yán)重性。所以，B細(xì)胞消除可以是完全的，也可以是不完全的。或者，期望在最初的治療中完全消除B細(xì)胞，但在接下來的治療中，調(diào)節(jié)劑量使之僅達(dá)到部分消除。在一個具體實施方式中，B細(xì)胞至少消除了20%,即相對于治療前的基線水平，仍保留了80%或更少的CD20陽性的B細(xì)胞。在另外的具體實施方式中，B細(xì)胞消除了25%、30%、40%、50%、60%、70%或更多。優(yōu)選B細(xì)胞消除到足以阻斷疾病進(jìn)展，更優(yōu)選在治療下能減輕特定疾病的體4正和癥狀，更加優(yōu)選能治愈疾病。給藥頻率可根據(jù)幾個因素而變化?；颊呖山邮?-5劑、優(yōu)選至少2劑的結(jié)合CD20的抗體。例如，l個月內(nèi)給藥2劑，優(yōu)選在第一劑后約2周內(nèi)給藥第2劑。根據(jù)疾病改善或復(fù)發(fā)水平，在疾病或疾病維持治療的過程中可給藥另外的劑量。利用本發(fā)明的劑量方案可以治療對一種或多種當(dāng)前的治療是無效的、耐受差的(poolytolerated)、禁忌的(contraindicated)患有自身免疫性疾病或B細(xì)胞惡性腫瘤的患者。例如，本發(fā)明涉及針對RA患者的目前治療方法，所述患者對腫瘤壞死因子(TNF)抑制劑療法或?qū)徑饧膊〉目癸L(fēng)濕藥物(DMARD)療法沒有足夠的反應(yīng)(inad叫uateresponse)。在另一個具體實施方式中，本發(fā)明的低劑量治療可用于維持治療中。評估治療瘤的功效或成功程度的參數(shù)對有處理適當(dāng)疾病經(jīng)驗的醫(yī)師來說是已知的。一般來說，有經(jīng)驗的醫(yī)師將尋找特定疾病體征和癥狀的減輕'l"青況。參凄史可包4舌疾病進(jìn)展的平均日于間(mediantimetodeseaseprogression)、緩解的時間(timeinremission),穩(wěn)定的病情(stabledisease)。以下參考文獻(xiàn)描述了淋巴瘤和CLL、它們的診斷、治療和標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)療過程，用于測量治療功效。CanellosGP，Lister,TA,SklarJL:TheLymphomas.W.B.Saunders公司,Philadelphia,1998;vanBesienK禾口Cabanillas，F(xiàn):ClinicalManifestations,StagingandTreatmentofNon-Hodgkin'sLymphoma，第70章,pp1293-1338,參見Hematology,BasicPrinciplesandPractice，第三版.Hoffman等(編輯).ChurchillLivingstone,Philadelphia,2000;和Rai，K和Patel，D:ChronicLymphocyticLeukemia，第72章，pp1350-1362,參見Hematology，BasicPrinciplesandPractice,第三版.Hoffman等(編輯).ChurchillLivingstone,Philadelphia,2000。處理適當(dāng)疾病經(jīng)驗的醫(yī)師來說是已知的。一般來說，有經(jīng)驗的醫(yī)師將尋找特定疾病體征和癥狀的減輕情況。在一個具體實施方式中，本發(fā)明的劑量和給藥方案可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)。RA是衰老性的自身免疫性疾病，其影響了2百萬美國人，并干擾了受害者的日?；顒?。RA發(fā)生在自身免疫系統(tǒng)不適當(dāng)?shù)毓絷P(guān)節(jié)組織并造成破壞健康組織和損傷關(guān)節(jié)的慢性炎癥的時候。癥狀包括關(guān)節(jié)炎癥、腫脹、僵硬、和疼痛。另外，由于RA是全身性疾病，所以它對其它組織(如肺、眼和骨髓)也有影響。還沒有已知的治愈方法。治療包括各種類固醇和非類固醇抗炎藥物、免疫抑制劑、緩解疾病的抗風(fēng)濕藥物(DMARD)和生物制劑?？墒?，許多患者一直對治療無適當(dāng)?shù)姆磻?yīng)。抗體可在早期RA(即，未接觸曱氨蝶呤(MTX))的患者中用作第一線的治療劑，其可作為單獨的治療劑進(jìn)行治療或同諸如MTX或環(huán)磷酰胺聯(lián)合治療。或者，抗體可作為第二線治療來用于治療DMARD和/或MTX難治的患者，其可作為單獨的治療劑進(jìn)行治療或同諸如MTX聯(lián)合治療。人源化CD20結(jié)合抗體用于防止和控制關(guān)節(jié)損傷，延遲結(jié)構(gòu)性損傷，減輕與RA中炎癥有關(guān)的疼痛，并通常減輕中度至重度RA的體征和癥狀。在用其它用于治療RA的藥物治療前、后或同時(參見以下組合治療)，可用人源化CD20抗體治療RA患者。在一個具體實施方式中，以前用緩解疾病的抗風(fēng)濕藥物治療失敗的和/或未對單獨使用曱氨蝶呤作出適當(dāng)反應(yīng)的患者，用本發(fā)明的結(jié)合CD20的人源化抗體進(jìn)行治療。在本治療的一個具體實施方式中，患者在17天治療方案中單獨接受結(jié)合CD20的人源化抗體(在第l和15天靜脈輸注lg);結(jié)合CD20的抗體加環(huán)磷酰胺(在第3和17天靜脈輸注750mg);或結(jié)合CD20的抗體加曱氨蝶呤。評估對RA的治療功效的一個方法是基于美國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)院(ACR)標(biāo)準(zhǔn)的，其除了其它事項，還測量了觸痛和腫脹關(guān)節(jié)的改善百分比。對RA患者進(jìn)行評分，例如，相對于不用抗體治療的(如治療前的基線)或用安慰劑治療的有ACR20(百分之20改善)。評估抗體治療功效的其它方式包括X射線評分，如SharpX射線評分，將其用于為結(jié)構(gòu)性損傷評分，如骨侵蝕和關(guān)節(jié)間隙變窄。在治療期間或治療后，也可根據(jù)健康評估問巻[HAQ]得分、AIMS得分、SF-36，對患者殘疾的防止或改善程度進(jìn)行評估。ACR20標(biāo)準(zhǔn)可包括在觸痛(疼痛)關(guān)節(jié)計數(shù)和腫脹關(guān)節(jié)計數(shù)中有20%的改善，并在5個以下附加的測試中的至少三個中有20%改善1.通過可纟見類似測量(visualanalogscale)(VAS)得到的患者的疼痛評估，2.疾病活躍度的患者的全面評估(VAS)，3.疾病活躍度的醫(yī)師的全面評估(VAS)，4.健康評估問巻測得的患者的自我評價的殘疾程度，和5.急性期反應(yīng)物、CRP或ESR。ACR50和70的定義相似。優(yōu)選向患者給藥有效量的本發(fā)明結(jié)合CD20的抗體，其能有效得到至少ACR20的分?jǐn)?shù)，優(yōu)選至少ACR30，更優(yōu)選至少ACR50,更加優(yōu)選至少ACR70,最優(yōu)選至少ACR75并更高。銀屑病關(guān)節(jié)炎具有獨特和不同的放射影像特征。對于銀屑病關(guān)節(jié)炎，也可通過Sharp評分來評估關(guān)節(jié)侵蝕和關(guān)節(jié)間隙變窄。本發(fā)明的人源化CD20而本發(fā)明的另一方面是通過向患有SLE的患者給藥治療有效量的本發(fā)明結(jié)合CD20的人源化抗體來治療狼瘙或SLE的方法。SLE患者包括有腎外表現(xiàn)和狼瘡腎炎的患者。SLEDAI評分提供了對疾病活躍度的數(shù)字化定量。SLEDAI是24個已知與疾病活躍度相關(guān)的臨床和實驗室參數(shù)的加權(quán)指數(shù)，其數(shù)值范圍是0-103?？蓞⒁夿ryanGescuk&JohnDavis，"NoveltherapeuticagentforsystemicLupuserythematosus",CurrentOpinioninRheumatology2002，14:515-521。認(rèn)為雙鏈DNA的抗體能造成腎潮紅(renalflare)和其它狼瘡表現(xiàn)。經(jīng)受抗體治療的患者可監(jiān)測一段時間的腎潮紅(將其定義為重要指標(biāo))、血清肌酸酐反復(fù)升高、尿中有尿蛋白或血?？蛇x地或額外地，可監(jiān)測患者抗核抗體和針對雙鏈DNA的抗體水平。對SLE的治療包括高劑量的皮質(zhì)類固醇和/或環(huán)磷酰胺(HDCC)。對于脈管炎，約75%的患有全身性脈管病的患者帶有抗嗜中性粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)抗體，并可根據(jù)影響小/中脈管的情況確定為3種病癥中的一種韋格納肉芽月中(Wegener'sgranulomatosus,WG)、孩吏小多脈管炎(microscopicpolyangiitis，MPA)和ChurgStrauss綜合癥(CSS)，統(tǒng)稱為ANCA相關(guān)的脈管炎(AAV)。脊推關(guān)節(jié)病是一組關(guān)節(jié)病癥，包括強直性脊柱炎(ankylosingspondylitis),銀屑病關(guān)節(jié)炎和克羅恩病(Crohn，sdisease)。通過有效的患者和醫(yī)師全面評價測量工具可確定治療的成功程度。各種藥物可用于治療銀屑??；治療差異直接與疾病嚴(yán)重性有關(guān)?；加休^輕形式銀屑病的患者通常使用局部治療，如局部使用類固醇、蒽啉、calcipotriene、clobetasol、和tazarotene,從而治療疾病，而患有中度和嚴(yán)重銀屑病的患者更可能使用全身性(曱氨蝶呤、類維生素A、環(huán)孢霉素、PUVA和UVB)療法。也可用焦油(tars)。這些療法治療具有安全性問題、方案耗時、或過程不便問題。而且，一些需要昂貴的設(shè)備和專門的設(shè)施空間。全身性藥物可產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，包括高血壓、高脂血、骨髓抑制、肝病、腎病和腸胃紊亂。另外，使用光療法可增加皮膚癌的幾率。除了與使用局部治療相關(guān)的不便性和不適性，光療法和全身性治療需要讓患者循環(huán)接受和不接受治療，并需要終生監(jiān)測它們的副作用。4艮屑病的治療功效通過監(jiān)測疾病的臨床體征和癥狀的變化來評估，包括相對于基線狀態(tài)進(jìn)行醫(yī)師的全面評價(PGA)變化和銀屑病面積和嚴(yán)重指數(shù)(PASI)評分、銀屑病癥狀評價(PSA)。通過用于在特定時間點顯示出所經(jīng)受的瘙癢程度的可視類似測定處理方式，可周期性地對患者進(jìn)行測量?；颊呓邮苁状屋斪⒅委熜钥贵w，可遭受輸注反應(yīng)或輸注相關(guān)的癥狀。這些癥狀隨嚴(yán)重性而變化，一般通過醫(yī)療干預(yù)而可逆。這些癥狀包括而不限于流感樣發(fā)熱、受寒/寒戰(zhàn)、惡心、風(fēng)疹、頭疼、支氣管痙攣、血管性水肺。預(yù)期本發(fā)明的疾病治療方法可最小化輸注反應(yīng)。為了減輕或最小化該不利事件，患者可以4妄受初始適應(yīng)劑量(conditioningdose)或耐受劑量的抗體，然后再以治療有效劑量接受抗體。適應(yīng)劑量低于治療有效劑量，從而使患者適應(yīng)以接受更高劑量。給藥途徑根據(jù)已知方法向人患者給藥CD20結(jié)合抗體，如通過靜脈內(nèi)給藥(如，在一段時間用推注(bolus)或通過持續(xù)輸注)、通過皮下、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、腦脊髓內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑液內(nèi)、鞘內(nèi)、或吸入途徑進(jìn)行，一般通過靜脈內(nèi)或皮下給藥。在一個具體實施方式中，通過靜脈內(nèi)輸注給藥人源化2H7抗體，其中0.9%氯化鈉溶液作為輸注載體。聯(lián)合療法在治療上述B細(xì)胞瘤中，可用本發(fā)明的CD20結(jié)合抗體與一種或多種治療劑以多藥物方案來聯(lián)合治療患者，所述治療劑如化學(xué)治療劑?；瘜W(xué)治療劑可與結(jié)合CD20的抗體同時、順序或交替地進(jìn)行給藥，或在其它療法無反應(yīng)后再給藥。標(biāo)準(zhǔn)的治療淋巴瘤的化學(xué)療法可包括環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、美法侖和米托蒽醌加美法侖。CHOP是用于治療非何杰金氏淋巴瘤的最常用化療方案之一。以下是CHOP方案中所用的藥物環(huán)磷酰胺(商標(biāo)名為cytoxan、neosar);阿霉素(阿霉素/羥基阿霉素)；長春新-威(石危酸長春新堿)；和潑尼松龍(有時稱為Deltasone或Orasone)。在特定的具體實施方式中，將結(jié)合CD20的抗體與一種或多種以下化學(xué)治療劑聯(lián)合給藥給需要它的患者阿霉素、環(huán)磷酰胺、長春新堿和潑尼松龍。在特定的具體實施方式中，遭受淋巴瘤(如非何杰金氏淋巴瘤)的患者用本發(fā)明的抗CD20抗體與CHOP治療劑(環(huán)磷酰胺、阿霉素、長春新堿和潑尼松龍)聯(lián)合治療。在另一個具體實施方式中，癌癥患者用本發(fā)明結(jié)合CD20的人源化抗體與CVP治療劑(環(huán)磷酰胺、長春新堿和潑尼松龍)聯(lián)合治療。在特定的具體實施方式中，患CD20陽性NHL的患者用人源化2H7.vl6與CVP聯(lián)合治療。在治療CLL的特定具體實施方式中，結(jié)合CD20的抗體與氟達(dá)拉濱(fludarabine)和環(huán)磷酰胺之一或二者聯(lián)合給藥。"化療劑"為可用于治療癌癥的化學(xué)化合物?；焺┑膶嵗ㄍ榛瘎╊?alkylatingagents),諸如塞替派(thiotepa)和CYTOXAN環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);磺酸烷基酉旨類(alkylsulfonates),諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和p底泊舒凡(piposulfan);氮丙卩定類(aziridines),i者》口苯佐替〉泉(benzodepa)、卡;皮酉昆(carboquone)、美妥替;泉(meturedepa)秀口烏瑞替〉泉(uredepa);乙4掌亞胺類(ethylenimines)禾口曱基蜜胺類(methylamelamines)，包括六曱蜜胺(altretamine)、三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撐磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三乙4掌石克4戈石舞酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羥曱蜜胺(trimethylolomelamine);TLK286(TELCYTATM);番篇枝內(nèi)酯類(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));S-9-四氫大麻酚(delta-9-tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol),MARINOL);(3-拉帕醌(beta-lapachone);拉帕醇(lapachol);秋水仙素類(colchicines);白才華月旨酉臾(betulinicacid);喜杉于石咸(camptothecin)(包4舌合成類4以物托泊替康(topotecan)(HYCAMTIN⑧)、CPT-11(伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR)、乙酰喜樹堿(acetylcamptothecin)、東^菪亭(scopolectin)和9隱氨基喜杉于石威(9-aminocamptothecin));苔蘚承卩素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類4以物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酉吏(podophyllinicacid);替尼泊苷(teniposide);隱藻素類(cryptophycins)(特別是隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成類似物，KW-2189和CB1隱TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;海綿才卬素(spongistatin);氛齊類(nitrogenmustards)，i者^口苯丁酸氛芥(chlorambucil)、茶氮齊(chlomaphazine)、月旦石岸醜胺(cholophosphamide)、站,莫司汀(estramustine)、異環(huán)石粦酰胺(ifosfamide)、雙氯乙基曱胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxideHydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥月旦甾醇(phenesterine)、》發(fā)尼莫司汀(prednimustine)、曲石粦胺(trofosfamide)、尿嘧訂定氮齊(uracilmustard);亞硝脲類(nitrosoureas),諸^口卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);二膦酸鹽類(bisphosphonates),^者長口氯膦酸鹽(clodronate);4元生素類，諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(如加利車霉素(calicheamicin),尤其是加利車霉素yII和加利車霉素①11(參見例如Angew,Chem.Intl.Ed.Engl.33:183-186(1994))和蒽環(huán)類抗生素(anthracyclines)諸如annamycin、AD32、alcarubicin、柔紅霉素(daunorubicin)、右雷佐生(dexrazoxane)、DX-52-l、表柔比星(epirubicin)、GPX-IOO、伊達(dá)比星(idarubicin)、KRN5500、美諾立爾(menogaril)、蒽環(huán)類抗生素(dynemicin)，包括dynemicinA;埃斯波霉素(esperamicin);新制癌素(neocarzinostatin)發(fā)色團和相關(guān)色蛋白灘二炔類抗生素發(fā)色團)、阿克拉霉素(aclacinomycin)、放線菌素(actinomycin)、氨茴霉素(authramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來霉素(bleomycin)、ii線菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋紅霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、地托比星(detombicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、ADRIAMYCIN多柔比星(doxorubicin)(包括嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星，多柔比星脂質(zhì)體(liposomaldoxorubicin)和脫氧多柔比星)、依索比星(esorubicin)、麻西羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素類(mitomycins》者如絲裂霉素C、霉酚酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、嘌呤霉素(puromycin)、三鐵阿霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑菌素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結(jié)才亥菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)和佐柔比星(zorubicin);葉酸類似物，諸如二曱葉酸(denopterin)、±萊酰三谷氨酸(pteropterin)和三曱曲沙(trimetrexate);噤呤類似物，諸如氟達(dá)4立濱(fludarabine)、6-巰基噪呤(mercaptopurine)、硫咪噤呤(thiamiprine)和硫鳥嘌呤(thioguanine);嘧咬類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苦、卡莫氟(carmofiir)、阿斗唐月包香(cytarabine)、雙脫氧尿普(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)和氟尿香(floxuridine);雄激素類，i者如卡魯睪酉同(calusterone)、丙酸屈4也if酮(dromostanolonepropionate)、表石危名#酉享(epitiostanol)、美名,》完(mepitiostane)禾口睪內(nèi)酉旨(testolactone);抗腎上腺類，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)和曲洛司坦(trilostane);葉酸補充齊'J，i者如亞葉酸(folinicacid)(leucovorin);醋葡醛內(nèi)酉旨(aceglatone);抗葉酸抗瘤劑(anti-folateanti-neoplasticagents),如ALIMTA、LY231514培美曲塞(pemetrexed)、二氫葉酸還原酶抑制劑(如曱氨蝶呤(methotrexate))、抗代謝劑(如5-氟尿嗜啶(5-fluorouraci1)(5-FU))和其前藥如UFT、S-l和卡培他濱(capecitabine))、和胸苷酸合成酶抑制劑和甘氨酰胺核糖核苷酸曱酰轉(zhuǎn)移酶抑制劑如雷替曲塞(raltitrexed)(TOMUDEX目，TDX);二氫嘧咬脫氫酶抑制劑，如恩尿嘧。定(eniluracil);醛石粦酰胺#唐香(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid);安吖口定(amsacrine);bestrabucil;比生群(bisantrene);依達(dá)曲沙、(edatraxate);J也石舞酰胺(defosfamide);i也美可辛(demecolcine);;也p丫酉昆(diaziquone);elfornithine;依利醋4妄(elliptiniumacetate);epothilone;依托格魯(etoglucid);硝酸鎵；羥脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼達(dá)明(lonidamine);美登木素生物石咸類(maytansinoids)，諸如美登素(maytansine)和美登醇(maytansinol);安絲菌素(ansamitocin);米4乇胍月宗(mitoguazone);米4乇'藍(lán)、酉昆(mitoxantrone);莫口底達(dá)酉孚(mopidamol);二胺石肖口丫口定(nitracrine);噴司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);他柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(losoxantrone);2-乙基酰肼(ethylhydrazide);丙卡巴肼(procarbazine);PSK⑧多糖復(fù)合物(JHSNaturalProducts,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西索菲蘭(sizofiran);螺旋鍺(spirogermanium);纟田交鏈孑包菌酉同酸(tenuazonicacid);三亞胺酉昆(triaziquone);2，2'，2"-三氯三乙胺；單端孢菌素類(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疣孢菌素(verrucarin)A、桿孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin));烏拉坦(urethan);長春地辛(vindesine)(ELDISINE,FILDESIN);達(dá)卡巴。秦(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol);。底泊溴烷(pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)("Am-C，，)；環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);塞替派(thiotepa);類紫杉醇(taxoids)和紫杉烷類(taxanes),例如TAXOL⑧紫杉醇(paclitaxel)(Bristol國MyersSquibbOncology,Princeton,N丄)、ABRAXANEtm不含克列莫佛(Cremophor)、清蛋白改造的纟內(nèi)米顆粒劑型紫杉醇(AmericanPharmaceuticalPartners,Schaumberg,Illinois)和TAXOTERE多西他塞(doxetaxel)(Rh6ne-PoulencRorer,Antony,France);苯丁酸氮芥(chlorambucil);吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR);6-碌L鳥噤呤(thioguanine);巰基噪呤(mercaptopurine);柏；柏類似物或基于鉑的類似物，諸如順柏(cisplatin),奧沙利柏(oxaliplatin)和卡鉑(carboplatin);長春石威(vinblastine)(VELBAN);依托泊苷(etoposide)(VP-16);異環(huán)磷酰胺(ifosfamide);米托蒽醌(mitoxantrone);長春新堿(vincristine)(ONCOVIN⑧)；長春花生物堿(vincaalkaloid);長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE);能滅瘤(novantrone);依達(dá)曲沙(edatrexate);道諾霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);希羅達(dá)(xeloda);伊本膦酸鹽(ibandronate);拓樸異構(gòu)酶抑制劑RFS2000;二氟曱基鳥氨酸(DMFO);類維A酸(retinoids)，諸如維A酸(retinoicacid);任何上述物質(zhì)的藥學(xué)可接受鹽、酸或書f生物；以及兩種或多種上述物質(zhì)的組合，諸如CHOP(環(huán)磷酰胺、多柔比星、長春新堿和潑尼松龍(prednisolone)聯(lián)合療法的縮寫)和FOLFOX(奧沙利鉑(ELOXATINTM)聯(lián)合5-FU和亞葉酸(leucovorin)的治療方案的縮寫)。該定義還包括起調(diào)節(jié)或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素藥，諸如抗雌激素藥和選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX⑧他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)和FARESTON⑧托瑞米芬(toremifene);抑制在腎上腺中調(diào)節(jié)雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、MEGASE醋酸曱地孕酮(megestrolacetate)、AROMASIN⑧依西美坦(exemestane)、福美坦(formestane)、法倔唑(fadrozole)、RIVISOR伏羅唑(vorozole)、FEMARA來曲唑(letrozole)和ARIMIDEX阿那曲唑(anastrozole);抗雄激素類，諸如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)、比卡米特(bicalutamide)、亮丙瑞4木(Ieuprolide)和戈舍瑞林(goserelin);以及曲沙他濱(troxacitabine)(l,3-二氧戊環(huán)核苷胞嘧啶類似物)；反義寡核苷酸，特別是抑制牽涉粘著細(xì)胞增殖的信號途經(jīng)中的基因表達(dá)的反義寡核苷酸，諸如例如PKC-a、Raf、H-Ras和表皮生長因子受體(EGF-R);疫苗，諸如基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN⑧疫苗和VAXID⑧疫苗；PROLEUKINrIL-2;LURTOTECAN拓樸異構(gòu)酶l抑制劑；ABARELIXrmRH;及任何上述物質(zhì)的藥學(xué)可接受鹽、酸或書t生物。在治療上述自身免疫性疾病或自身免疫相關(guān)病癥中，可用一種或多種CD20結(jié)合抗體與第二治療劑以多藥物方案來聯(lián)合治療患者，所述第二治療劑如免疫抑制劑。結(jié)合CD20的抗體可與免疫抑制劑同時、順序或交替給藥，或用其它療法無反應(yīng)后進(jìn)行給藥。免疫抑制劑可以與現(xiàn)有技術(shù)提及的相同或更低的劑量來給藥。優(yōu)選的輔助免疫抑制劑取決于許多因素，包括要治療的病癥類型以及患者病史。本文所用的用于輔助治療的"免疫抑制劑"指物質(zhì)，其用以抑制或掩蔽患者的免疫系統(tǒng)。該制劑包括抑制細(xì)胞因子產(chǎn)生、下調(diào)或抑制自身抗原表達(dá)、或掩蔽MHC抗原的物質(zhì)。該制劑的例子包括類固醇，如糖皮質(zhì)激素，如強的+仝(prednisone)、曱潑尼龍(methylprednisolone)、和^也塞米*>;2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(參見美國專利4,665,077)、硫唑噤呤(或環(huán)磷酰胺，如果對硫唑嘌呤有副作用的話)；溴隱定；戊二醛(如美國專利4,120,649所述，其掩蔽MHC抗原)；針對MHC抗原和MHC片段的抗獨特型抗體；環(huán)孢霉素A;細(xì)胞因子或細(xì)胞因子受體拮抗劑，包括抗干擾素-丫、-p、或-a抗體；抗腫瘤壞死因子-a抗體；抗腫瘤壞死因子-P抗體；抗白細(xì)胞介素-2抗體和抗IL-2受體抗體；抗L3T4抗體；異源抗'淋巴細(xì)月包玉求蛋白；pan-T抗體，優(yōu)選抗CD3或抗CD4/CD4a抗體；可溶性肽，其包含LFA-3結(jié)合結(jié)構(gòu)域(公開于7/26/90的WO90/08187);鏈激酶；TGF-p;鏈道酶；來自宿主的RNA或DNA;FK506;RS-61443;脫氧精液蛋白；雷帕霉素；T細(xì)胞受體(美國專利5,114,721);T細(xì)胞受體片段(Offner等，Science251:430-432(1991);WO90/11294;和WO91/01133);和T細(xì)胞受體抗體(EP340,109)，如T10B9。為了治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，用結(jié)合CD20的抗體(如rituximab或ocrelizumab或其變體)和一種或多種以下藥物聯(lián)合治療患者DMARDS(緩解疾病的抗風(fēng)濕藥物(如，曱氨蝶呤)、NSAI或NSAID(非類固醇抗炎藥物)、免疫抑制劑(如，碌l哇嘌呤；麥考酚酸嗎乙酯(mycophenolatemofetil)(CellCept;Roche))、鎮(zhèn)痛劑、糖皮質(zhì)激素、環(huán)磷酰胺、HUMIRA(adalimumab;AbbottLaboratories)，ARAVA(來氟米特)、REMICADE(infliximab;CentocorInc.,Malvern,Pa)、ENBREL(依那西普；Immunex,WA)、ACTEMRA(tocilizumab;Roche，瑞士)、COX-2抑制劑。RA中常用的DMARD是羥氯醌(hydroxycloroquine)、柳氮磺胺吡啶、曱氨蝶呤、來氟米特、依那西普(etanercept)、英夫利昔單抗(infliximab)、硫唑嘌呤、D-青霉胺、Gold(口服)、GoW(肌肉注射)、米諾環(huán)素(minocycline)、環(huán)孢霉素、葡萄球菌蛋白A免疫吸附劑。阿達(dá)木單抗(Adalimumab)是與TNFa結(jié)合的人單克隆抗體。英夫利昔單抗是與TNFa結(jié)合的嵌合單克隆抗體。依那西普是"免疫粘附素，，的融合蛋白，其由與人IgGlFc部分相連的人75kD(p75)腫瘤壞死受體(TNFR)的胞外配體結(jié)合部分組成。ActemRA(tocilizumab)是人源化的抗人白細(xì)胞介素-6(IL-6)受體。對于傳統(tǒng)的RA治療，參見如,"Guidelinesforthemanagementofrheumatoidarthritis"Arthritis&Rheumatism46(2):328-346(2002年2月)。在特定的具體實施方式中，用本發(fā)明的CD20抗體與曱氨蝶呤(MTX)聯(lián)合治療RA患者。MTX的示例性的劑量約為7.5-25mg/kg/周。MTX可口服和皮下給藥。為了治療強直性脊柱炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎和克羅恩病(crohn'sdisease),用本發(fā)明的結(jié)合CD20的抗體與i者如Remicade(infliximab;fromCentocorInc.,ofMalvern,Pa.)、ENBREL(依那西普；Immunex,WA)聯(lián)合治療患者。SLE的療法包括將CD20抗體與高劑量的皮質(zhì)類固醇和/或環(huán)磷酰胺(HDCC)組合?；糞LE、AAV和NMO的患者可用本發(fā)明的結(jié)合CD20的抗體與以下之任何藥物聯(lián)合治療皮質(zhì)類固醇、NSAID、鎮(zhèn)痛劑、COX-2抑制劑、糖皮質(zhì)類固醇、傳統(tǒng)的DMARDS(如曱氨蝶呤、柳氮磺胺吡啶、羥氯醌、來氟米特)、DMARD生物制劑，如抗Blys(如，belimumab)、抗IL6R,^J口tocilizumab;CTLA4畫Ig(abatacept)、(才元CD22,3口epratuzumab)、免疫4卬制劑(如，硫唑噤呤；麥考酚酸嗎乙酯(mycophenolatemofetil)(CelICept⑧；Roche))、和細(xì)月包毒劑(如，環(huán)^岸酰胺)。為了治療銀屑病，患者用結(jié)合CD20的抗體與局部治療劑聯(lián)合給藥，所述局部治療劑如局部用類固醇、蒽啉(anthralin)、calcipotriene、clobetasol、和tazarotene,或和曱氨蝶呤、類維生素A、環(huán)孢霉素、PUVA和UVB治療劑給藥。在一個具體實施方式中，用結(jié)合CD20的抗體與環(huán)孢霉素順序或同時治療銀屑病患者。為了最小化毒性，傳統(tǒng)全身性治療劑可與結(jié)合CD20的抗體組合物以當(dāng)前劑量用輪流、順序、組合、或間歇的治療方案或以更低的劑量組合方案來進(jìn)行給藥。藥物配制劑制備依照本發(fā)明使用的抗體的治療用制劑，即將具有所需純化程度的抗體與任選的制藥學(xué)可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑混合's尸/zwmacew"ca/5Wewces,第16版，Osol,.Ed.(1980))，以凍干制劑或水溶液的形式貯存?？山邮艿妮d體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所采用的劑量和濃度對接受者是無毒的，還包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸的緩沖液；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲石危氨酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二曱基卡基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨、苯索氯銨；酚、丁醇或苯曱醇；對羥基苯曱酸烷基酯，諸如對羥基苯曱酸曱酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環(huán)己醇；3-戊醇；和間曱酚)；低分子量(少于約10個殘基)多肽；蛋白質(zhì)，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，諸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA;糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，諸如鈉；金屬復(fù)合物(如Zn-蛋白質(zhì)復(fù)合物)；和/或非離子表面活性劑，諸如tweentm、PLURONICStm或聚乙二醇(PEG)。例示性抗CD20抗體制劑描述于WO1998/56418，其明確地引入本文作為參考。另一制劑是液體多劑量(multidose)制劑，其中含有40mg/mL抗CD20抗體，25mM醋酸鹽，150mM海藻糖，0.9%苯曱醇，0.02%聚山梨酯20，pH5.0，它在2-8。C具有最少2年的保存期。另一種感興趣的抗CD20制劑在9.0mg/mL氯化鈉，7.35mg/mL二水合檸檬酸鈉，0.7mg/mL聚山梨酉旨80，和注射用無菌水，pH6.5中包含10mg/mL抗體。而另一種水性藥用制劑包含約pH4.8-約pH5.5,優(yōu)選pH5.5的10-30mM醋酸鈉，量約為0.01-0.1%v/v的聚山梨酯20作為表面活性劑，量約為2-10%w/v的海藻糖以及苯曱醇作為防腐劑(U.S.6,171,586)。WO97/04801中描述了適用于皮下給藥的凍干制劑。這種凍干制劑可用合適的稀釋液重建成高蛋白質(zhì)濃度，且重建后的制劑可皮下施用于本文中待治療的哺乳動物。人源化2H7變體的一種制劑是在10mM組氨酸，6%蔗糖，0.02%聚山梨酯20，pH5.8含12-14mg/mL的抗體。在具體的實施方案中，2H7變體且尤其是2H7.vl6的配制如下，在10mM組氨S臾硫酸鹽，60mg/ml蔗糖，0.2mg/ml聚山梨酯20,以及注射用無菌水，pH5.8中含20mg/mL的抗體。本文中的制劑還可包含治療特定適應(yīng)癥所需的一種以上的活性化合物，優(yōu)選那些活性互補且彼此沒有不利影響的化合物。例如，在所述制劑中還可以進(jìn)一步提供細(xì)胞毒劑、化療劑、細(xì)胞因子或免疫抑制劑(例如作用于T細(xì)胞的藥劑，諸如環(huán)孢菌素或結(jié)合T細(xì)胞的抗體，例如結(jié)合LFA-1的抗體)。此類其它試劑的有效量取決于制劑中存在的抗體的量、疾病或病癥或治療的類型、及上文討論的其它因素。這些通常以與上文所用相同的劑量和給藥路徑使用，或是迄今所用劑量的約1-99%?；钚猿煞诌€可包載于例如通過凝聚技術(shù)或通過界面聚合制備的微膠嚢中，例如羥曱基纖維素或明膠微膠嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微膠嚢中、在膠狀藥物傳遞系統(tǒng)中(例如脂質(zhì)體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米月交嚢)、或在粗滴乳狀液中。此類才支術(shù)^"開于i^附z'"gto"kP/wrw(3ceM"ca/5We"ces，第16版，Osol，A.Ed.(1980)?？芍苽涑掷m(xù)釋放制劑。持續(xù)釋放制劑的合適例子包括含有拮抗劑的固體疏水性聚合物半透性基質(zhì)，該基質(zhì)以定型產(chǎn)品的形式存在，如薄膜或微膠嚢。持續(xù)釋放基質(zhì)的例子包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-曱基丙烯酸酯)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利3,773,919)、L-谷氨酸和L-谷氨酸y-乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯共聚物、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRONDEPOTtm(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。用于體內(nèi)施用的制劑必須是無菌的。這可容易的通過使用無菌濾膜過濾來實現(xiàn)。實驗示例實施例1制備人源化2H7抗體變體并測試生物功能，包括人CD20結(jié)合親和力。效應(yīng)器功能和B細(xì)胞消除如WO04/056312所述，其全文納入本文參考。鼠2H7抗體可變區(qū)序列和帶有鼠V和人C的嵌合2H7已描述，如參見，美國專利5，846，818和6,204，023。實施例2在獼猴初步研究中的2H7變體的體內(nèi)效應(yīng)瞬間轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞制備的2H7變體在正常雄性獼猴(Macacafascicularis)中測試，以評估它們的體內(nèi)活性。其它抗CD20抗體，如C2B8(Rituxan⑧)，已經(jīng)證明了能清除正常靈長類的B細(xì)胞(Reff等，Blood83:435-445(1994))。在一個研究中，比較人源化2H7變體。在平行的研究中，也在獼猴中測試Rituxan⑧。5個劑量組中的每一組使用了4只猴子(1)載體，(2)0.05mg/kgHu2H7.v16,(3)10mg/kgHu2H7.v16,(4)0.05mg/kgHu2H7.v31,和(5)10mg/kgHu2H7.v31。以0、0,2、或20mg/mL的濃度靜脈內(nèi)給藥抗體，總共給藥2劑，研究第1天一劑，另一劑在第8天給予。給藥的第一天定為第1天，而前一天定為第-1天；恢復(fù)的第一天(對于每組中的2只動物)定為第11天。在第-19、-12、l(給藥前)天并在第一次給藥后6h、24h、和72h，收集血樣。其它樣品在第8天(給藥前)、第10天(宰殺2只動物/組前)、和第36和67天(對于恢復(fù)的動物)獲取。外周B細(xì)胞濃度用對CD3VCD40+細(xì)胞計數(shù)的FACS法確定。猴樣品中總淋巴細(xì)胞的CD3-CD40+B細(xì)胞百分比用以下門控策略來獲得。淋巴細(xì)胞群標(biāo)記在正向散射/側(cè)散射散點圖上從而定義出區(qū)域l(Rl)。利用R1中的事件，顯示出針對CD40和CD3標(biāo)記物的熒光強度點圖。焚光標(biāo)記的同種型(isotype)對照用于分別確定CD40和CD3陽性的截止點(cutoffpoint)。結(jié)果顯示，2H7.vl6和2H7.v31都能以10mg/kg的劑量產(chǎn)生完全外周B細(xì)胞消除，并以0.05mg/kg的劑量產(chǎn)生部分外周B細(xì)胞消除(圖2)。對于這2種抗體，給藥的第一個72h期間測量的B細(xì)胞消除的時間進(jìn)程和程度是相似的。接下來對恢復(fù)的動物分析顯示，相對于用2H7.vl6給藥的那些，用2H7.v31治療的動物顯示出延長的B細(xì)胞消除。特別是用10mg/kg2H7.v16治療的恢復(fù)動物，B細(xì)胞在第10天和第36天取樣之間的某個時間顯示出了實質(zhì)的B細(xì)胞恢復(fù)(substantialB-cellrecovery)?？墒牵瑢τ谟?0mg/kg2H7.v31治療的恢復(fù)動物，直到第36天和第67天之間的某個時間，B細(xì)胞才顯示出恢復(fù)(圖2)。這提示了相對于2H7.vl6,通過用2HTv31可有長出約一個月的持續(xù)完全消除時間。在猴子研究中以低或高劑量時沒有觀察到有毒性，而且宏觀病理也正常。在其它研究中，隔2周向這些猴子靜脈給藥2劑后，vl6能良好地耐受到所評估的最高劑量(100mg/kgx2=1200mg/m2x2)。比較用2H7.vl6處理的獼猴(cynomolgusmonkey)的凄t據(jù)和用Rituxan處理的獼猴的數(shù)據(jù)提示了，CDC活性降低5倍沒有不利地影響效力。對第一次輸注反應(yīng)而言，具有強ADCC活性但CDC活性降低的抗體比具有較大CDC活性的抗體，具有更良好的安全性。實施例3體內(nèi)抑制腫瘤生長在Balb/c棵(無胸腺的)鼠中評估rhuMAb2H7.v16抑制Raji人B細(xì)胞一淋巴瘤細(xì)胞系(ATCCCCL86)生長的能力。Raji細(xì)胞表達(dá)CD20,據(jù)報道其在棵鼠中生長，產(chǎn)生轉(zhuǎn)移性疾病；Rituxan⑧抑制腫瘤生長(Clynes等，NatureMedicine6，443-446(2000》。56只8-10周大的Balb/c棵鼠分成7組(A-G)，每組由8只鼠組成。在第0天，每只鼠在脅腹接受皮下注射5x1(^個RajiB-淋巴瘤細(xì)胞。從第O天開始，每只鼠接受lOOpl陰性對照溶液(PBS;磷酸緩沖鹽溶液)、Rituxan⑧或2H7.vl6。劑量取決于體重，而且由尾靜脈靜脈遞送藥物。組A的鼠接受PBS。組B-D分別以5.0mg/kg、0.5mg/kg、和0.05mg/kg接受Rituxan⑧。組E-G的鼠分別以5.0mg/kg、0.5mg/kg、和0.05mg/kg接受2H7v.16。每周重復(fù)進(jìn)行注射，進(jìn)行6周。治療期的每周間隔中，檢查每只鼠在其注射位點上出現(xiàn)的可觸及的腫瘤，如果存在腫瘤，測量并記錄腫瘤體積。在第8周(不進(jìn)行治療的2周間隔期后)進(jìn)行最后一次;險查。該研究結(jié)果顯示在棵鼠中，rhuMAb2H7.v16和Rituxan⑧都能有效地抑制皮下Raji細(xì)胞的胂瘤生長。從第4周開始，在PBS對照組中觀察到腫瘤生長?？墒?，在用5mg/kg或0.5mg/kgRituxan⑧或2H7.vl6治療8周的研究的組中沒有觀察到腫瘤生長。在0.05mg/kg的低劑量治療組中，在2H7組中的一只動物上和在Rituxan⑧組中的一只動物上觀察到了腫瘤。實施例4中度至重度類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的rhuMAb2H7(2H7.vl6)的I/II期研究^L程大綱隨機的、安慰劑對照的、多中心的、雙盲的I/II期安全性研究，研究患有中度至重度類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的受試者中逐步提高的PRO70769(rhuMAb2H7)劑量，其中受試者同時接受穩(wěn)定劑量的曱氨蝶呤。目的本研究的主要目的是在患有中度至重度類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的受試者中評估逐步提高的PRO70769(rhuMAb2H7)靜脈內(nèi)注射(IV)劑量的安全性和耐受性。研究設(shè)計這是隨機的、安慰劑對照的、多中心的、對調(diào)查人員和受試者雙盲的I/II期研究，其在患有中度至重度RA的受試者中研究劑量逐步提高的PRO70769與MTX組合治療的安全性。該研究由劑量遞增期和大量受試者參與的第二期組成。患有中度至重度RA的受試者參與進(jìn)來，所述受試者用一至五種緩解疾病的抗風(fēng)濕藥物或生物制劑治療失敗了，他們目前對用MTX治療未達(dá)到滿意的臨床反應(yīng)。受試者需要每周接受10-25mg的MTX，在開始研究前至少進(jìn)行12周，并在接受研究藥物(PR070769或安慰劑)的最初劑量之前以穩(wěn)定的劑量進(jìn)行至少4周。受試者也可接受穩(wěn)定劑量的口服皮質(zhì)類固醇(多至每天10mg或強的松等價物(equivalent))和穩(wěn)定劑量的非類固醇抗炎藥物(NSAID)。根據(jù)以下劑量遞增計劃，受試者在第1和15天以所示計量接受2次靜脈輸注PRO70769或安慰劑等價物(參見圖3)。劑量遞增將根據(jù)具體標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，而且它在由內(nèi)部安全性數(shù)據(jù)評判委員會評判安全性數(shù)據(jù)以及每組最后一個受試者進(jìn)行第二次輸注后72小時急性毒性評估之后進(jìn)行。如果在劑量遞增期證實了所述劑量水平是可耐受的，則劑量遞增期之后，40個額外的受試者(32個用活性劑和8個用安慰劑)隨才幾4妾受以下一種劑量水平2x50mg、2x200mg、2x500mg和2xl000mg。約205個受試者參與本研究。獲得并記錄B細(xì)胞數(shù)。在6個月的功效評估后48周的隨訪期內(nèi)，用流式細(xì)胞儀評估B細(xì)胞數(shù)。B細(xì)胞消除不視作劑量限制性毒性(dose-limitingtoxicity)(DLC),但視作PRO70769治療的預(yù)期藥效結(jié)果。在可選的子課題研究中，在各種時間點上從受試者中獲取用于血清和RNA分析的血樣以及尿樣。這些樣品用于在患有中度至重度RA的受試者中鑒定生物標(biāo)志物，所述標(biāo)志物可預(yù)報PR070769治療的響應(yīng)程度。測定結(jié)果用于本研究的主要測定結(jié)果(primaryoutcomemeasure)是患有中度至重度RA的受試者中PRO70769的安全性和耐受性。治療研究根據(jù)以下遞增計劃，受試者組以所示劑量在第1和15天接受2次靜脈輸注PRO70769或安慰劑等價物-10mgPRO70769或安慰劑等價物4個受試者接受活性藥物，1個接受對照-50mgPRO70769或安慰劑等價物8個受試者接受活性藥物，2個接受對照-200mgPRO70769或安慰劑等價物8個受試者接受活性藥物，2個接受對照腸500mgPRO70769或安慰劑等價物8個受試者接受活性藥物，2個接受對照-1000mgPRO70769或安慰劑等Y介物8個受試者4妄受活性藥物，2個接受對照功效通過ACR應(yīng)答測定PRO70769功效。達(dá)到ACR20、ACR50和ACR70應(yīng)答的受試者百分比按治療組以95%置信區(qū)間來總結(jié)，由此為每組得出受試者中的百分比。這些應(yīng)答的組分和它們相對于基線的改變按治療組和參照組來總結(jié)。結(jié)果在研究中，受試者的外周B細(xì)胞數(shù)的初步結(jié)果如圖4-6所示。結(jié)果顯示，包括最低的10mg劑量的所有劑量都造成了實質(zhì)的初始的B細(xì)胞消除。10mgx2的劑量誘導(dǎo)出了持續(xù)時間較短的B細(xì)胞消除，其趨勢是在第28和84天期間緩慢的恢復(fù)，并持續(xù)下去。實施例5中度至重度類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中rhuMab2H7的臨床研究基本如實施例4中所述的來設(shè)計。根據(jù)以下遞增計劃，受試者組以所示劑量在第1和15天接受靜脈輸注PRO70769或安慰劑等價物-0.111^11070769或安慰劑等價物80個受試者接受活性藥物，20個接受對照；對于以下劑量組也是一樣的-lmgPR070769或安慰劑等價物-10mgPRO70769或安慰劑等價物-25mgPRO70769或安慰劑等價物-100mgPRO70769或安慰劑等價物功效如上述所評估的。4權(quán)利要求1.消除患有自身免疫性疾病的患者中B細(xì)胞的方法，其包括向患者以1mg至250mg范圍的劑量給藥結(jié)合人CD20的抗體。14284256708498112126140154168NOMTMDAY-14<image>imageseeoriginaldocumentpage80</image><table>tableseeoriginaldocumentpage81</column></row><table>全文摘要本發(fā)明提供了利用能有效消除患者中B細(xì)胞的較低劑量的抗CD20抗體治療自身免疫性疾病的方法。文檔編號A61K39/395GK101102793SQ200680002282公開日2008年1月9日申請日期2006年1月12日優(yōu)先權(quán)日2005年1月13日發(fā)明者丹·庫姆斯,保羅·J·菲爾德,哈爾·V·巴倫,安德魯·C·錢,格溫德琳·法伊夫,沃爾夫?qū)み_(dá)默申請人:健泰科生物技術(shù)公司