專利名稱：：與整聯(lián)蛋白相互作用的幾類化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供了以藥學(xué)上顯著的方式與整聯(lián)蛋白受體相互作用的幾類生物活性化合物。
背景技術(shù)：
：基因組學(xué)革命已改變了藥物發(fā)現(xiàn)的前景。在對(duì)生物分子途徑及它們?cè)诩膊≈兴鸬淖饔玫睦斫夥矫娴倪M(jìn)步將導(dǎo)致巨大數(shù)目的治療干預(yù)的耙。整聯(lián)蛋白是一類細(xì)胞表面受體家族，其介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的相互作用，一些整聯(lián)蛋白也涉及關(guān)鍵的細(xì)胞-細(xì)胞粘附。整聯(lián)蛋白由選自18a和8|3亞基中的a和卩跨膜亞基組成。這些亞基異二聚化以產(chǎn)生至少24種不同的受體。該a和P亞基也經(jīng)歷可變剪接和翻譯后修飾，進(jìn)一步提供結(jié)構(gòu)多樣性'。整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的粘附相互作用與許多細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)密切相關(guān)，包括胚胎發(fā)育、腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移、血管發(fā)生、程序性細(xì)胞死亡、止血、白細(xì)胞歸巢與活化、骨吸收、血塊凝縮、以及細(xì)胞對(duì)機(jī)械應(yīng)激的響應(yīng)2?？紤]目前正被生物學(xué)家解巻曲(deconvolute)的靶的產(chǎn)生速率及性質(zhì)，需要開(kāi)發(fā)以合理的方式設(shè)計(jì)以特意地與所選的靶例如整聯(lián)蛋白相互作用的候選藥物。從藥物開(kāi)發(fā)前景而言，糖類吡喃糖環(huán)和呋喃糖環(huán)及它們的衍生物很適于作為模板。各種糖代表一種三維骨架(scaffold)，其可連接許多取代基，通常經(jīng)由骨架羥基連接，但偶爾骨架羰基或氨基可存在以進(jìn)行取代。通過(guò)改變所述取代基，它們?cè)谔枪羌苌系南鄬?duì)位置，以及所述取代基偶聯(lián)到的糖的類型，可獲得許多非常不同的結(jié)構(gòu)。要注意糖類的一個(gè)重要特征是不僅在取代基的類型中，而且在三維表達(dá)中實(shí)現(xiàn)分子多樣性。天然存在的糖類的不同立體異構(gòu)體呈現(xiàn)出提供取代基的備選表達(dá)的固有的結(jié)構(gòu)優(yōu)勢(shì)。Nicolaou等人(Tetrahedron,1997,53,8751-8778)已報(bào)道了一系列化合物的合成和生物評(píng)價(jià)，聲稱其結(jié)合整聯(lián)蛋白受體。本發(fā)明的化合物在兩個(gè)明顯的方面與Nicolaou出版物中報(bào)道的化合物不同。首先，本發(fā)明的化合物含有直接與糖骨架環(huán)連接的氮，而Nicolaou的化合物僅含氧。此外，Nicolou出版物在8760頁(yè)說(shuō)明，該出版物中的化合物不與av|33或aubP3整聯(lián)蛋白受體結(jié)合，這與本發(fā)明的化合物所表明的親和力與選擇性完全相反。最近，Kessler等人(Angew.Chemie.，Int.Ed.Engl.,2000，39pp2761-2764)己使用糖類，特別是葡糖醛酸作為用于抑制整聯(lián)蛋白的擬環(huán)肽的合成中的氨基酸代用品。該工作采用十分不同的方法獲得本發(fā)明的化合物，因?yàn)樗鎏穷惐灰腚逆?。Kessler等人(Angew.Chem.，2001，113，pp.3988-3991)也已報(bào)道使用甘露糖作為制備整聯(lián)蛋白抑制劑的骨架。該工作類似于Nicolaou等人的，同上，且與本發(fā)明的不同在于沒(méi)有氮原子連接至糖環(huán)且化合物的活性非常低，其在5毫摩爾濃度下被測(cè)試(3991頁(yè)表1〉，相比而言，本發(fā)明的化合物在250微摩爾濃度下測(cè)試。Moitessier等人(Bioorg.Med.Chem.，2001，9，pp511-523)已報(bào)道了與Nicolaou的和Kessler的類似的方法，這次使用木糖作為用于化合物制備的骨架。此外，所述化合物不含有直接連接至糖環(huán)的氮且在4微摩爾濃度下才顯示不大的活性(515頁(yè))。在Kunz等人(WO99/07718)的專利申請(qǐng)中，與本發(fā)明的化合物有些重疊，特別是當(dāng)糖骨架的2位被氮取代時(shí)。然而，該專利申請(qǐng)中沒(méi)有碳環(huán)直接被氮取代(甚至在2位)的任何化合物的具體的或一般的例證。此外，實(shí)施例中提出的方法不適用于當(dāng)2位或任何其他位置為氨基的情況。而且，沒(méi)有證明對(duì)整聯(lián)蛋白的或確實(shí)對(duì)其他生物受體的生物親和力。禾'J用相關(guān)的方法學(xué)，Hirschmann等人(Hirschmann,/^4附.CTie附.Soc.1992，〃《9217-9218;/爿w.Cfem.Soc.，1993，/"，12550-12568;Chem，1997，411382-1391)已設(shè)計(jì)并制備了針對(duì)生長(zhǎng)抑素受體的糖系化合物。這些化合物在生物分析中顯示相當(dāng)?shù)幕钚?。然而，公開(kāi)的這些化合物不含有直接連接至糖環(huán)的氨基宮能團(tuán)，且并非被設(shè)計(jì)或試驗(yàn)以抑制整聯(lián)蛋白受體。Hirschmarm等人已在引用的各個(gè)專利或?qū)＠暾?qǐng)中尋求專利保護(hù)(US5,552,534，US5,811,512;US6,030,942;WO97/28172;WO95/11686;WO93/17032)，所述化合物未公開(kāi)、例證或考慮氨基取代的糖類。此外，公開(kāi)的化合物被靶向至G蛋白偶聯(lián)受體且整聯(lián)蛋白未被考慮或例證。公開(kāi)的化合物和方法明顯不同于本發(fā)明。因此，需要有效地與整聯(lián)蛋白受體結(jié)合或相互作用的化合物。本發(fā)明克服或至少部分克服了現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷并提供了有效地與整聯(lián)蛋白受體結(jié)合或相互作用的化合物。利用藥物開(kāi)發(fā)方法學(xué)的原則，在致力于開(kāi)發(fā)針對(duì)整聯(lián)蛋白靶的候選藥物中，我們合成了幾類新穎的化學(xué)型(chemotype)。在各種情況下，化合物都是氨基取代的糖環(huán)的衍生物。相信在骨架的X位至少一個(gè)氮的存在增加了對(duì)附加基團(tuán)轉(zhuǎn)動(dòng)的限制，從而提高了所述化合物的生物活性。會(huì)被清楚理解的是，如果本文引用現(xiàn)有技術(shù)出版物，那么該參考文獻(xiàn)不構(gòu)成承認(rèn)該出版物形成在澳大利亞或任何其他國(guó)家的本領(lǐng)域公知常識(shí)部分。發(fā)明概述本發(fā)明一方面提供了一種抑制或?qū)崿F(xiàn)整聯(lián)蛋白受體活性的方法，其包括將整聯(lián)蛋白與式I的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽接觸；通式I<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>其中該環(huán)可具有任意構(gòu)型;Z為硫、氧、CH2、NH、NRA或氫，在Z為氫的情況下則R,不存在，RA選自針對(duì)R,至R5定義的組，X為氧或NRA，條件是通式I的至少一個(gè)X為NRA，X也可獨(dú)立地與R,至Rs之一結(jié)合以形成疊氮化物，R,至Rs獨(dú)立地選自H、-(CO)R6或1至20個(gè)原子的烷基、酰基、烯基、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基包括但不限于OH、NO、N02、NH2、N3、鹵素、CF3、CHF2、CH2F、腈、烷氧基、芳氧基、脒、胍鹽、羧酸、羧酸酯、羧酸酰胺、芳基、環(huán)烷基、雜烷基、雜芳基、氨烷基、氨基二烷基、氨基三烷基、氨?；Ⅳ驶?、取代或未取代的亞胺、硫酸鹽、磺酰胺、磷酸鹽、磷酰胺、酰肼、異羥肟酸鹽、異羥肟酸、雜芳氧基、氨烷基、氨基芳基、氨基雜芳基、硫代烷基、硫代芳基或硫代雜芳基，其還可任選地被取代，其中R6選自1至20個(gè)原子的烷基、?；⑾┗?、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基包括但不限于OH、NO、N02、NH2、N3、鹵素、CF3、CHF2、CH2F、腈、垸氧基、芳氧基、脒、胍鹽、羧酸、羧酸酯、羧酸酰胺、芳基、環(huán)垸基、雜烷基、雜芳基、氨烷基、氨基二烷基、氨基三烷基、氨酰基、羰基、取代或未取代的亞胺、硫酸鹽、磺酰胺、磷酸鹽、磷酰胺、酰肼、異羥肟酸鹽、異羥肟酸、雜芳氧基、氨烷基、氨基芳基、氨基雜芳基、硫代烷基、硫代芳基或硫代雜芳基，其還可任選地被取代，條件是XR2或XR3或XR4或XR5不為NH2，進(jìn)一步的條件是R2至R5中不超過(guò)一個(gè)為氫，當(dāng)基團(tuán)X為NRA且RA不為氫時(shí)，基團(tuán)RA和相應(yīng)的基團(tuán)R2至R5可結(jié)合以形成環(huán)。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及所述方法，其中所述化合物具有通式II:XR通式II其中R,、R2、R3、R5、Z和X如通式I中所定義。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及所述方法，其中所述化合物具有通式III:通式III其中A被定義為H、SR,或OR，，其中R,如通式I中所定義，且X和112至R5如通式I中所定義。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及所述方法，其中所述化合物具有通式IV:通式IV其中RrR3和R5如通式I中所定義。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及所述方法，其中所述化合物具有通式V:通式V其中R,-R3和Rs選自如通式I中所定義的基團(tuán)，條件是基團(tuán)R,、R2、R3或R5之一含有酸性取代基，包括但不限于羧酸鹽、磺酸鹽、磷酸鹽、異羥肟酸鹽、酚；或擬酸取代基(adicicmimeticsubstituent)，包括但不限于四唑、酰胺、酯、磺酰胺、磷酰胺；并且任意的其余基團(tuán)R卜R2、R3或Rs含有堿性取代基，包括但不限于伯胺、仲胺、叔胺、季胺、脒、胍鹽基、咪唑基、三唑基。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I、II、III、IV和V中任一個(gè)的化合物，其用于治療疾病。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)式I、II、m、IV和V中任一個(gè)的化合物，其用作藥物。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種治療由整聯(lián)蛋白抑制所影響的疾病或病癥的方法，其包括向有需要的受試者給藥有效量的選自式I、II、III、IV或V的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種使用選自式I、II、III、IV或V的化合物的治療方法，其中所述疾病或病癥選自糖尿病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、年齡相關(guān)的黃斑變性、多發(fā)性硬化癥、哮喘、關(guān)節(jié)炎、克隆氏病和結(jié)腸炎、癌癥、腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤生長(zhǎng)、血管發(fā)生、新血管形成、心血管病癥、傷口愈合、血栓形成和骨質(zhì)疏松癥，以及相關(guān)的疾病或病癥o在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種根據(jù)該方法使用的化合物，其中所述化合物具有式VI:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>其中R,選自垸基、羥基、垸氧基、芳氧基、芳烷氧基、雜芳氧基或芐氧基；R6為烷基、芳基、雜芳基；R3為垸基、芳基或芳垸基；^為芳基或芳垸基；且其中R,、R3、R4和R6各自還可任選地被取代。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種根據(jù)該方法使用的化合物，其中R,為甲氧基、乙氧基、羥基、芐氧基和苯氧基。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種根據(jù)該方法使用的化合物，其中基團(tuán)R,、R3、R4或R6之一被羧酸或羧酸酯或羧酸根陰離子或羧酸鹽取代。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種根據(jù)該方法使用的化合物，其中基團(tuán)R3或R4或R6之一選自羥基、甲基、乙基、苯基、芐基、哌啶、三唑、四唑、咪唑、4-氨甲基環(huán)己烷、羧苯基、羧芐基、氯苯基、溴芐基、氨基苯基、羧亞甲基、羧亞乙基、乙胍(ethylguinidine)、4-胍基甲苯基、3，5-二氨基苯基和(3，5-二氨基苯基)雙甲酰胺。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供一種用于治療疾病的化合物，其中所述化合物選自發(fā)明詳述將參考下列實(shí)施例描述本發(fā)明的實(shí)施方案。在適當(dāng)時(shí)，使用下列縮寫(xiě)。Ac乙酰基DTPM5-?；?l,3-二甲基巴比妥酸鹽Ph苯基TBDMS叔丁基二甲基甲硅烷基TBDPS叔丁基二苯基甲硅烷基Bn芐基Bz苯甲酰基Me甲基DCE1，2-二氯乙綜DCM二氯甲烷，亞甲基氯Tf三氟甲磺?；鵗s4-甲基苯磺?；?，對(duì)甲苯磺酰基DMFN，N-二甲基甲酰胺DMAPN,N-二甲基氨基吡啶aa-DMTaa-二甲氧基甲苯，苯甲醛二二甲基縮醛DMSO二甲亞砜DTT二硫蘇糖醇DMTST二甲基(甲硫基)锍三氟甲磺酉々(Dimethyl(methylthio)sulphoniumtrifluoro-methanesulphonate)TBAF四正丁基氟化銨根據(jù)在我們?cè)缦鹊膶＠暾?qǐng)包括PCT/AU03/001347、PCT/AU03/000384和PCT/AU03/001008中公開(kāi)的方法制備通式結(jié)構(gòu)的化合物，其說(shuō)明書(shū)被通過(guò)適當(dāng)?shù)南嗷⒖歼M(jìn)行引入。本文提供了在固相和液相中制備化合物的典型方法。A部分結(jié)構(gòu)單元的制備為了使本發(fā)明能夠完全實(shí)施，我們?cè)谝韵略斒隽擞糜谥苽淠承┙Y(jié)構(gòu)單元的方法，所述結(jié)構(gòu)單元用于制備本發(fā)明的化合物。所描述的結(jié)構(gòu)單元適于本發(fā)明的化合物的液相和固相合成。化合物在固相上的典型合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>C2'H32N408準(zhǔn)確質(zhì)量468.22分子量468.50C,53.84;H，6.88;N，H.96;0，27.32條伴..(i)a.Br2，DCM;b.乙醇，三氟甲磺酸銀(AgOTf),DCM;(ii)TCA-王樹(shù)脂，三氟化硼乙醚合物(BF3.Et20)，DCM，四氫呋喃(THF);(iii)NaOMe，THF，MeOH;(iv)a.KOBu1,DMF;b.溴乙醇酸叔丁酯，DMF;(v)HF."質(zhì)子海綿"，乙酸(AcOH),DMF,65°C;(vi)a.KOBu1，DMF;b.溴化節(jié)，DMF;(vii)1，4-二硫代-DL-蘇糖醇,KOBu1，DMF;(viii)HBTU，F(xiàn)moc-b-Ala-OH,二異丙基乙胺(DIPEA),DMF;(ix)哌啶/DMF(1/4);(x)3，5-二甲基吡唑基甲脒硝酸鹽，二異丙基乙胺(DIPEA)，DMF;(xi)TFA，Et3SiH,DCM。可在固相中制備的本發(fā)明的化合物的更多實(shí)例包括-C2,H3IC1N408準(zhǔn)確質(zhì)S:502.18分了.E:502.95C，50.15;H,6.21:CI,7.05:N，11.14;O,25.45根據(jù)如上文列出的條件，分別用在步驟(vi)中用作垸化劑的溴芐基溴和氯芐基溴制備以上顯示的溴芐基和氯芐基化合物。0八OHC:,H3,BrN4Og準(zhǔn)確質(zhì)盤546.13分7S:547.40C,46.08;H，5.71;Br,14.60;N，10.24;0,23.38化合物在液相中的典型合成<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>條伊；(i)4-甲氧基苯甲酸二甲基縮醛，對(duì)甲苯磺酸(TsOH),CH3CN;(ii)NaH(95%)，溴乙酸叔丁酯，DMF;(iii)BH3-THF，Bu2BOTf,DCM;(iv)KOBut，BnBr,DMF;(v)a.Zn，NH4CI,MeOH，H20;b.1-羥基苯并三唑-N，N,N，N，-四甲基脲六氟磷酸鹽HBTU，3-Boc-NH-苯甲酸，DIPEA,DMF;(vi)CH3CN，H20，TsOH。B部分固定至固體載體并糖基化本發(fā)明的化合物可在液相中或固體載體上方便地制備。因?yàn)樵诒景l(fā)明的化合物中總存在游離羥基，所以方便地經(jīng)由羥基官能團(tuán)固定結(jié)構(gòu)單元至固體載體上，所述羥基官能團(tuán)會(huì)成為最終化合物中的游離羥基。上述的許多結(jié)構(gòu)單元在4位具有游離羥基，其適于固定化。當(dāng)期望游離羥基在不同位置時(shí)，要首先進(jìn)行保護(hù)/脫保護(hù)順序。至固相上的典型固定化將王樹(shù)脂(13.3g;0.85mmol/g，對(duì)芐氧基芐醇聚苯乙烯-二乙烯基苯樹(shù)脂)在500ml圓底燒瓶中在真空干燥箱中干燥過(guò)夜。將該燒瓶置于氮?dú)夥障?，接著加入干燥DCM(133ml)和三氯乙腈(20ml)。用冰浴冷卻該混合物，同時(shí)溫和攪拌。冷卻15分鐘后，在15分鐘內(nèi)滴加DBU(1.3ml)，在冰浴冷卻下攪拌得到的混合物1小時(shí)。通過(guò)過(guò)濾收集該樹(shù)脂，用DMF、THF和DCM(各3次)洗滌。在真空干燥箱中經(jīng)P20s持續(xù)24小時(shí)干燥該樹(shù)脂，以提供15g的三氯乙酰亞氨酯王樹(shù)脂(TriChloroAcetimidateWang，TCA-Wang)。在氮?dú)庀绿畛湓摌?shù)脂并儲(chǔ)存于4°C。收率100%;加載約0.754mmol/g。(可使用備選樹(shù)脂)。向TCA-王樹(shù)脂上固定化含有一個(gè)游離羥基的糖基化的結(jié)構(gòu)單元。在一典型的操作中，在真空干燥箱中干燥TCA王樹(shù)脂(3.6g)過(guò)夜，接著用無(wú)水THF(3x36ml)在氮?dú)夥障孪礈?。加入結(jié)構(gòu)單元(3當(dāng)量)，繼之以加入無(wú)水DCM(18ml)。振搖該反應(yīng)混合物5分鐘(直至全部醇溶解),再加入BF3.Et20(0.35ml,1當(dāng)量)。劇烈振搖該反應(yīng)混合物10分鐘并排出液體；用DCM(3x30ml)、DMF(3x30ml)、THF(3x30ml)洗滌該樹(shù)脂并干燥。C部分庫(kù)的制備通過(guò)順序脫保護(hù)和連接化學(xué)(ligationchemistry)在固體載體上或在液相中制備本發(fā)明的化合物。可根據(jù)需要使用下列典型的化學(xué)方法。叔丁基二苯基甲硅烷基的除去將樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元懸浮在含有10當(dāng)量的四正丁基氟化銨的干燥THF/甲醇(20/1v/v)混合物中。在65匸攪拌該混合物24小時(shí)，排出液體；過(guò)濾該樹(shù)脂，用二甲基甲酰胺洗滌，繼之以THF洗滌并最后用二氯甲烷洗滌。在可替換的操作中，TBAF可方便地由HF.吡啶替代，且該反應(yīng)在塑料器皿中進(jìn)行。TBAF也可由HF."質(zhì)子海綿"復(fù)合物替代，具有良好結(jié)果。苯甲酸酯、對(duì)氯苯甲酸酯或其他酯保護(hù)基的除去-將樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元懸浮在干燥THF和甲醇(3/1v/v)混合物中，加入甲醇鈉(0.5當(dāng)量)。振搖該混合物24小時(shí)，排出液體并用新制試劑另外再處理24小時(shí)。過(guò)濾該樹(shù)脂，用二甲基甲酰胺洗滌，繼之以THF洗滌并最后用二氯甲烷洗滌。對(duì)甲氧基芐基的除去將樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元懸浮在DCM中，加入少量水(約1%),繼之以2,3-二氯-5,6-二氰基苯醌(10當(dāng)量)。振搖該混合物3小時(shí)，排出液體并用新制試劑另外再處理3小時(shí)。過(guò)濾該樹(shù)脂，用THF洗滌，繼之以甲醇洗滌并最后用二氯甲垸洗滌。羥基位的酯化先前羥基已脫保護(hù)的樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元被洗滌三次并接著懸浮在無(wú)水DMF中，加入3當(dāng)量的叔丁醇鉀(可應(yīng)用可替換的堿)，振搖并在5分鐘后排出液體，繼之以加入DMF中的烷化劑(3當(dāng)量)。振搖該混合物10分鐘，排出液體并用新制試劑如上再處理兩次。過(guò)濾該樹(shù)脂，用二甲基甲酰胺洗滌，繼之以THF洗滌并最后用二氯甲烷洗滌。疊氮化物的還原將樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元懸浮在干燥DMF中；加入5當(dāng)量的DTT(1,4-二硫代-DL-蘇糖醇)和3當(dāng)量的叔丁醇鉀(可應(yīng)用可替換的堿)。將該混合物在氮?dú)夥障聰嚢?4小時(shí)，排出液體并用二甲基甲酰胺洗滌該樹(shù)脂，繼之以THF洗滌并最后用二氯甲烷洗滌。DTPM基團(tuán)的除去將樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元懸浮在DMF和水合肼(50/1v/v)混合物中，攪拌2小時(shí)，排出液體并用二甲基甲酰胺洗滌該樹(shù)脂，繼之以THF洗滌并最后用二氯甲烷洗滌。酰胺的形成在干燥DMF中，用HBTU(10當(dāng)量)和二異丙基乙胺(IO當(dāng)量)處理合適的羧酸(IO當(dāng)量)溶液，并振搖5分鐘。該溶液接著加至先前氨基己脫保護(hù)的樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元在DMF中的懸浮液中，振搖該混合物30分鐘。在這之后排出該樹(shù)脂的液體并再一次用新制試劑處理30分鐘。過(guò)濾該樹(shù)脂，用DMF洗滌，繼之以甲醇洗滌并最后用二氯甲烷洗滌。如果需要，可進(jìn)行定量水合茚三酮分析以確定反應(yīng)完成?？蓱?yīng)用可替換的偶聯(lián)系統(tǒng)包括HOAT、EDC/NHS或酸酐，得到類似的效果。Fmoc的除去將樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元懸浮在哌啶/DMF(1/4，v/v)混合物中，并攪拌1小時(shí)，排出液體并再重復(fù)一次；過(guò)濾該樹(shù)脂，用二甲基甲酰胺洗滌該樹(shù)脂，繼之以THF洗滌并最后用二氯甲垸洗滌。胍的形成將樹(shù)脂結(jié)合的結(jié)構(gòu)單元懸浮在含有3當(dāng)量的3，5-二甲基吡唑基甲脒硝酸鹽和15當(dāng)量的DIPEA的干燥DMF中。在65'C攪拌該混合物24小時(shí)，排出液體；過(guò)濾該樹(shù)脂，用二甲基甲酰胺洗滌，繼之以THF洗滌并最后用二氯甲烷洗滌。樹(shù)脂結(jié)合的產(chǎn)物的裂解將樹(shù)脂結(jié)合的化合物懸浮在含有20%TFA和20%Et3SiH的干燥DCM中。在室溫?cái)嚢柙摶旌衔?小時(shí)，并收集等分部分(aliquot);用干燥DCM洗滌該樹(shù)脂并合并全部DCM溶液，減壓濃縮至干，以提供期望的產(chǎn)物。針對(duì)兩種整聯(lián)蛋白測(cè)試所述化合物，相對(duì)抑制在下表中給出。根據(jù)下列分類(category)指明抑制在250微摩爾下0%至35%抑制=在250微摩爾下36%至60%抑制="+";在250微摩爾下61%至80°/。抑制="++";在250微摩爾下81%至100%抑制="+++"。生物分析使用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISAassay)，其基于Bethert等人，2000,JBiolChem275，33308-23發(fā)表的方法。簡(jiǎn)言之，用血纖蛋白原(Fibrinogen)或玻連蛋白(Vitronectin)(lO嗎/孔)涂鋪合適的微滴定板。這些細(xì)胞外基質(zhì)蛋白含有由aubj33整聯(lián)蛋白識(shí)別的RGD氨基酸序列。人類血小板膜制品被用作aIIbp3整聯(lián)蛋白的來(lái)源，細(xì)胞系WM-115被用作avJ33整聯(lián)蛋白的來(lái)源。含有aubp3整聯(lián)蛋白的膜制品與細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的結(jié)合的抑制通過(guò)預(yù)培養(yǎng)測(cè)試或?qū)φ栈衔锏难“迥ぶ破反_定。通過(guò)使用兔抗整聯(lián)蛋白p3抗體、辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的第二抗體和標(biāo)準(zhǔn)比色檢測(cè)系統(tǒng)定量含有aIIbp3整聯(lián)蛋白的膜的結(jié)合。測(cè)試的化合物在下文表l中表示，且具有通式<formula>formulaseeoriginaldocumentpage24</formula>注意分離了單個(gè)異構(gòu)體并作為單獨(dú)的實(shí)體進(jìn)行測(cè)試(表l:化合物的整聯(lián)蛋白結(jié)合活性<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>除非上下文另外要求，在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求各處(如果存在)，術(shù)語(yǔ)"包括"或變體如"包含"會(huì)被理解為適合包含所說(shuō)明的整數(shù)或整數(shù)的組，但不排除任何其他整數(shù)或整數(shù)的組。除非上下文另外要求，在本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求各處(如果存在)，術(shù)語(yǔ)"基本上"或"大約"會(huì)被理解為不限于針對(duì)所述術(shù)語(yǔ)限定范圍的值。應(yīng)理解的是不背離本發(fā)明的主旨和范圍，可對(duì)任意所描述的實(shí)施方案作出多種其他改變和修飾。權(quán)利要求1.一種抑制或?qū)崿F(xiàn)整聯(lián)蛋白受體活性的方法，其包括將整聯(lián)蛋白與通式I的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽接觸；通式I其中該環(huán)可具有任意構(gòu)型；Z為硫、氧、CH2、NH、NRA或氫，在Z為氫的情況下則R1不存在，RA選自針對(duì)R1至R5定義的組，X為氧或NRA，條件是通式I的至少一個(gè)X為NRA，X也可獨(dú)立地與R1至R5之一結(jié)合以形成疊氮化物，R1至R5獨(dú)立地選自H、-(CO)R6或1至20個(gè)原子的烷基、?；⑾┗?、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基選自O(shè)H、NO、NO2、NH2、N3、鹵素、CF3、CHF2、CH2F、腈、烷氧基、芳氧基、脒、胍鹽、羧酸、羧酸酯、羧酸酰胺、芳基、環(huán)烷基、雜烷基、雜芳基、氨烷基、氨基二烷基、氨基三烷基、氨?；Ⅳ驶?、取代或未取代的亞胺、硫酸鹽、磺酰胺、磷酸鹽、磷酰胺、酰肼、異羥肟酸鹽、異羥肟酸、雜芳氧基、氨烷基、氨基芳基、氨基雜芳基、硫代烷基、硫代芳基或硫代雜芳基，其還可任選地被取代，其中R6選自1至20個(gè)原子的烷基、?；⑾┗?、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基包括但不限于OH、NO、NO2、NH2、N3、鹵素、CF3、CHF2、CH2F、腈、烷氧基、芳氧基、脒、胍鹽、羧酸、羧酸酯、羧酸酰胺、芳基、環(huán)烷基、雜烷基、雜芳基、氨烷基、氨基二烷基、氨基三烷基、氨?；?、羰基、取代或未取代的亞胺、硫酸鹽、磺酰胺、磷酸鹽、磷酰胺、酰肼、異羥肟酸鹽、異羥肟酸、雜芳氧基、氨烷基、氨基芳基、氨基雜芳基、硫代烷基、硫代芳基或硫代雜芳基，其還可任選地被取代，條件是XR2或XR3或XR4或XR5不為NH2，進(jìn)一步的條件是R2至R5中不超過(guò)一個(gè)為氫，當(dāng)基團(tuán)X為NRA且RA不為氫時(shí)，基團(tuán)RA和相應(yīng)的基團(tuán)R2至R5可結(jié)合以形成環(huán)。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物具有通式II:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>通式II其中R、R2、R3、R5、Z和X如通式I中所定義。3.權(quán)利要求1的方法，其中所述化合物具有通式III:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>通式ni其中A被定義為H、SR!或OR,，其中R!如通式I中所定義，且X和112至Rs如通式I中所定義。4.權(quán)利要求l的方法，其中所述化合物具有通式IV:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>通式IV其中RrR3和Rs如通式I中所定義。5.權(quán)利要求l的方法，其中所述化合物具有通式V:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>通式V其中R,、R3、Rs和R6獨(dú)立地選自l至20個(gè)原子的烷基、烯基、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基包括但不限于OH、NO、N02、NH2、N3、鹵素、CF3、CHF2、CH2F、腈、垸氧基、芳氧基、脒、胍鹽、羧酸、羧酸酯、羧酸酰胺、芳基、環(huán)垸基、雜烷基、雜芳基、氨烷基、氨基二烷基、氨基三烷基、氨?；Ⅳ驶?、取代或未取代的亞胺、硫酸鹽、磺酸鹽、磺酰胺、磷酸鹽、磷酰胺、酰肼、異羥肟酸鹽、異羥肟酸、雜芳氧基、氨烷基、氨基芳基、氨基雜芳基、硫代烷基、硫代芳基或硫代雜芳基，其還可任選地被取代，條件是基團(tuán)R,、R3、R5或R6之一含有酸性取代基，包括但不限于羧酸鹽、磺酸鹽、磷酸鹽、異羥肟酸鹽、酚;或擬酸取代基，包括但不限于四唑、酰胺、酯、磺酰胺、磷酰胺；并且任意的其余基團(tuán)R,、R3、R5或R6含有堿性取代基，包括但不限于伯胺、仲胺、叔胺、季胺、脒、胍鹽基、咪唑基、三唑基。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物，其用于治療疾病。7.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)的化合物，其用作藥物。8.—種治療由整聯(lián)蛋白抑制所影響的疾病或病癥的方法,其包括向有需要的受試者給藥有效量的式I的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽。9.權(quán)利要求8的方法，其中所述化合物選自式II所定義的組。10.權(quán)利要求8的方法，其中所述化合物選自式III所定義的組。11.權(quán)利要求8的方法，其中所述化合物選自式IV所定義的組。12.權(quán)利要求8的方法，其中所述化合物選自式V所定義的組。13.根據(jù)權(quán)利要求8-12中任一項(xiàng)的方法，其中所述疾病或病癥選自糖尿病、糖尿病性視網(wǎng)膜病、年齡相關(guān)的黃斑變性、多發(fā)性硬化癥、哮喘、關(guān)節(jié)炎、克隆氏病和結(jié)腸炎、癌癥、腫瘤轉(zhuǎn)移、腫瘤生長(zhǎng)、血管發(fā)生、新血管形成、心血管病癥、傷口愈合、血栓形成和骨質(zhì)疏松癥，以及相關(guān)的疾病或病癥。14.根據(jù)權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)使用的化合物，其中所述化合物具有式VI:其中R,選自垸基、羥基、烷氧基、芳氧基、芳垸氧基、雜芳氧基或芐氧基；R6為烷基、芳基、雜芳基；R3為垸基、芳基或芳烷基；&為芳基、芳垸基；且其中R,、R3、R4和R6各自還可任選地被>取代。15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中R,為甲氧基、乙氧基、羥基、芐氧基和苯氧基。16.權(quán)利要求14或15的化合物，其中基團(tuán)Ri、R3、R4或R6之一被羧酸或羧酸酯或羧酸根陰離子或羧酸鹽取代。17.權(quán)利要求14或15的化合物，其中基團(tuán)R3或R4或R6之一選自羥基、甲基、乙基、苯基、芐基、哌啶、三唑、四唑、咪唑、4-氨甲基環(huán)己烷、羧苯基、羧芐基、氯苯基、溴芐基、氨基苯基、羧亞甲基、羧亞乙基、乙胍、4-胍基甲苯基、3,5-二氨基苯基和(3,5-二氨基苯基)雙甲酰胺。18.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中所述化合物選自下列化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>19.根據(jù)權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)使用的化合物，其中所述化合物選自表1。20.通式I的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽用于制備抑制或?qū)崿F(xiàn)整聯(lián)蛋白受體活性的藥物的用途，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>通式I其中該環(huán)可具有任意構(gòu)型；Z為硫、氧、CH2、NH、NRA或氫，在Z為氫的情況下則R,不存在，RA選自針對(duì)R，至R5定義的組，X為氧或NRA，條件是通式I的至少一個(gè)X為NRA，X也可獨(dú)立地與R,至Rs之一結(jié)合以形成疊氮化物，R,至Rs獨(dú)立地選自H、《CO)R6或1至20個(gè)原子的垸基、?；?、烯基、炔基、雜垸基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基選自O(shè)H、NO、N02、NH2、N3、鹵素、CF3、CHF2、CH2F、腈、垸氧基、芳氧基、脒、胍鹽、羧酸、羧酸酯、羧酸酰胺、芳基、環(huán)烷基、雜烷基、雜芳基、氨烷基、氨基二烷基、氨基三烷基、氨酰基、羰基、取代或未取代的亞胺、硫酸鹽、磺酰胺、磷酸鹽、磷酰胺、酰肼、異羥肟酸鹽、異羥肟酸、雜芳氧基、氨烷基、氨基芳基、氨基雜芳基、硫代垸基、硫代芳基或硫代雜芳基，其還可任選地被取代，其中R6選自l至20個(gè)原子的垸基、?；?、烯基、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳垸基或雜芳垸基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基包括但不限于OH、NO、N02、NH2、N3、鹵素、CF3、CHF2、CH2F、腈、垸氧基、芳氧基、脒、胍鹽、羧酸、羧酸酯、羧酸酰胺、芳基、環(huán)烷基、雜垸基、雜芳基、氨垸基、氨基二烷基、氨基三垸基、氨?；?、羰基、取代或未取代的亞胺、硫酸鹽、磺酰胺、磷酸鹽、磷酰胺、酰肼、異羥肟酸鹽、異羥肟酸、雜芳氧基、氨烷基、氨基芳基、氨基雜芳基、硫代垸基、硫代芳基或硫代雜芳基，其還可任選地被取代，條件是XR2或XR3或XR4或XR5不為NH2，進(jìn)一步的條件是R2至R5中不超過(guò)一個(gè)為氫，當(dāng)基團(tuán)X為NRA且RA不為氫時(shí)，基團(tuán)RA和相應(yīng)的基團(tuán)R2至R5可結(jié)合以形成環(huán)。全文摘要一種抑制或?qū)崿F(xiàn)整合受體活性的方法，其包括將整聯(lián)蛋白與式I的化合物或其藥學(xué)可接受的鹽接觸；其中環(huán)可具有任意構(gòu)型；Z為硫、氧、CH₂、NH、NR^A或氫，在Z為氫的情況下則R₁不存在，R^A選自針對(duì)R₁至R₅定義的組，X為氧或NR^A，條件是通式I的至少一個(gè)X為NR^A，X也可獨(dú)立地與R₁至R₅之一結(jié)合以形成疊氮化物，R1至R5獨(dú)立地選自H、-(CO)R₆或1至20個(gè)原子的烷基、?；⑾┗?、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基還可任選地被取代，其中R₆選自1至20個(gè)原子的烷基、?；⑾┗?、炔基、雜烷基、芳基、雜芳基、芳烷基或雜芳烷基取代基，其任選地被取代，且可為支鏈或直鏈的，其中取代基還可任選地被取代，條件是XR₂或XR₃或XR₄或XR₅不為NH₂，進(jìn)一步的條件是R₂至R₅中不超過(guò)一個(gè)為氫，當(dāng)基團(tuán)X為NR^A且R^A不為氫時(shí)，基團(tuán)R^A和相應(yīng)的基團(tuán)R₂至R₅可結(jié)合以形成環(huán)。文檔編號(hào)A61P11/06GK101111243SQ200680003935公開(kāi)日2008年1月23日申請(qǐng)日期2006年2月2日優(yōu)先權(quán)日2005年2月4日發(fā)明者C·克拉克,G·坦勒,J·哈利迪,M·L·韋斯特,W·莫伊特曼斯申請(qǐng)人:阿爾卡米亞有限公司