專利名稱：用作為脂酶抑制劑的源自植物提取物的藥物制劑的制作方法
用作為脂酶抑制劑的源自植物提取物的藥物制劑過量攝取脂肪可引起多種疾病，例如作為代謝綜合征的主要表征 的肥胖(肥胖癥)、高血脂和II型糖尿病。食物才聶取后，血液中增加 的甘油三酯和葡萄糖值與胰島素拮抗性相關(guān)，其在代謝綜合征的發(fā)展 中起主要作用。降低食后甘油三酯水平的一種可能性是降低將食物脂肪水解的酶的活性。胰腺酶(e. c. 3.1.1.3)在腸道主要作用于經(jīng)食 物攝取提供的脂肪的分解和吸收。基于此，用胰腺酶的減少來避免或 至少延遲食物脂肪的腸道消化并因此而減少血液中的甘油三酯。肥胖 癥對于II型糖尿病是重要的風(fēng)險因素。普遍公認，減輕體重可改善血 糖的控制并有助于降低心血管的風(fēng)險因素。通常認為實現(xiàn)體重減輕并 保持減少后的體重是困難的。Tetrahydrolipstatin(THL，奧利斯特， 賽尼可)是商購可得的脂酶抑制劑，其獲自產(chǎn)毒鏈霉菌(streptomyces toxystricini) 。 口服后，奧利斯特通過阻斷胰脂肪酶(胰腺-脂酶) 的活性片段來抑制脂肪分解。在臨床試驗中，奧利斯特導(dǎo)致體重減輕 并改善食后(食物攝取后)脂肪表征(減少食后甘油三酯，以及空腹 -LDL-膽固醇和膽固醇總量以及LDL與HDL的比例)。也可以通過奧利 斯特減少II型糖尿病的發(fā)生。奧利斯特的應(yīng)用導(dǎo)致不希望的副作用如 油狀和油性糞便。通過導(dǎo)致時間延遲的而不是完全抑制的脂肪吸收的 植物提取物及其活性物質(zhì)可以實現(xiàn)較為溫和的脂酶抑制，并以這種方 式可以避免油狀和油性糞便。全身性地可以通過活性物質(zhì)實現(xiàn)脂酶的自行再吸收或在使其在消 化過程中失活，并由此從脂酶-共脂肪酶-脂肪-復(fù)合物反應(yīng)平衡中 將其抽除。脂酶抑制劑的服用被認為是用于具有代謝綜合征癥狀的患者的有 用藥物。另外，可以使用脂酶抑制性植物提取物或從中分離的組分作 為食品添加劑。多項專利中提到了植物提取物作為在消化道中可能的脂酶抑制劑的應(yīng)用。在此涉及以下申請?zhí)柕娜毡旧暾圝P 2003 026 585， JP 2002 275 077， JP 2002 047 194。在多項公開中表述了植物提取物對于食后脂肪表征的積極效果， 即涉及以下物質(zhì)如青錢柳(zylokaria paliurus )、葡萄核、鼠尾草、 含羞草決明變種(Cassia mimosoides， L. var. Nomame Makine)和 高良姜(Alpinia officinarum)。在此之外，本發(fā)明的任務(wù)是介紹其它可用作為脂酶抑制劑的植物。提出以下物質(zhì)的提取物或精油以及它們的混合物用于解決所述任務(wù)。豆蔻(Cardamom) 墨角蘭(Majoran) 麝香草(Thymian)辣椒(小米椒(Capsicum frutescens))月見草(Abendprimel)俄力岡(0regano) ( oreganum vugare)葉甘菊葉(Kamilleblatter ) (Chamomilla recutica)肉豆蔻(Muskatnuss ) (Myristica fragrans)蘋果渣(Apf elmus ) (pomace)玉米胚(Kornkeim)杏仁歐洲榛子(Haselnuss ) 胡桃(Walnuss ) 南瓜軒(Kti rbiskeim)Cuphea wrightii (e) 月見草油亞麻(6lflachs) (Linum usitatissimum) 牛蒡(Grope Klette) (Arctium lappa L) (e) 亞麻(Flachs ) (e)葵花籽(Keime des Helianthus annuus)(向曰葵)(e)金蓋花(Ringelblu邁e) (Calendula officinalis) (e， h)Echinops banaticus粗糠柴(Mailotus philippinensis ) (e)油菜籽(Raps， ) (e)芝麻(Sesam) (d)黑種草(Schwarzer Kttmmel) (m)紅花琉璃草(Cynoglossum officinale)Lapachotea (e)熊果(Arctostaphylos uva-ursi )小石花(Steinblume) (Flor de piedra)蜂膠(Propolis )黃花九輪草(Primula Veris)厚樸(Magnolia officinalis)旱芽(Sellerie) (Apium graveolens)制備所述提取物的描述 a ) C02提取物用超臨界二氧化碳高壓提取。不包含水、糖和蛋白。 豆蔻植物的使用部分小豆蔻(Elettaria cardamomum)的帶莢包的 種子。原料來自于危地馬拉。提取稠度油狀液體 提取物包含72%精油其它成份ot-蒗烯、蒎烯、月桂烯、1，8桉油醇、沉香醇、oc-松油 醇、醋酸沉香醇酯、松油醇乙酸酯墨角蘭植物的使用部分Oregano Majorana的葉 提取稠度油狀液體 提取物包含80%精油其它成份Sabinen、順式和反式氫化檜烯、松油烯-4-醇、氫化檜烯乙酸酯 麕香草植物的4吏用部分Thymus vulgaris的葉，原料來自于德國。其 它參見上述豆蔻辣椒(小米椒) 植物的使用部分長角果。 原料來自于印度。 提取物用葵花油標準化提取稠度其它如上 月見草植物的使用部分種子 提取物用維生素E標準化提取物稠度油狀液體俄力岡葉提取物稠度油狀液體成份O. 18%松油醇，2.6%對國聚傘花素，0.07%檸檬烯,62%香芽酚， 1.5%丁香烯，0. 33%麝香草酚，0.49%1. 8桉樹腦，0.17%廠松油烯，0.2% p-松油烯，1.5%4-松油醇，0. 58% a-松油醇，23. 2%麝香草醌。甘菊葉提取物稠度油狀液體 20-25 %沒藥醇(Bisabolol) 5-20%沒藥醇氧化物 1. 0-3. 0%母菊素肉豆蔻原料來自于印度尼西亞 提取物稠度油狀液體 成份19-24%肉豆蔻醚 1-3%黃樟醚b)以下提取物如下制備將10g原料粉末溶于e) 50ffll純乙醇于37匸w)水于h)水于95'Cm) 60%乙醇于37"且隨即在搖動水浴中溫育2小時，之后將提取物在磁力攪拌器中 攪拌30分鐘并以6000轉(zhuǎn)每分離心IO分鐘。隨后通過Speedrac濃縮 器將溶劑去除。蘋果渣(pomace ) (e):提取物稠度粘性液體 玉米胚(e):提取物稠度粘性液體 杏仁(e):提取物稠度粘性液體歐洲榛子(e): 提取物稠度粘性液體胡桃，S類(e): 提取物稠度粘性液體南瓜籽(e):提取物稠度粘性液體Cuphea wrightii (e): 提取物稠度粘性液體月見草(e):植物的使用部分種子 提取物稠度粘性液體油亞麻(165) (e) 提取物稠度粘性液體油亞麻(162) (e) 提取物稠度粘性液體牛蒡(e)植物的使用部分根 提取物稠度粘性液體亞麻(e)提取物稠度粘性液體葵花籽(向日葵)(e) 提取物稠度粘性液體金盞花(Calendula officinalis) (e， h) 提取物稠度粘性液體Echinops banaticus (154: e，152: e) 提取物稠度粘性液體粗糠柴(e)提取物稠度粘性液體 油菜籽(e)提取物稠度粘性液體 芝麻(e)提取物稠度粘性液體 黑種草(m)紅花琉璃草(157， e)Lapachotea (e)植物的使用部分Taheebo樹的內(nèi)皮(Tabebuia impetiginosa) 提取物稠度粘性液體c)其它提取 熊果植物的使用部分熊果葉 提取液水 提取物稠度粉末 內(nèi)容物熊果酚甙小石花 (Flor de piedra) 植物的使用部分 提取液69%乙醇(v/v) 提取物稠度液態(tài) 干燥殘留物1.0%蜂膠蜂膠是不同物質(zhì)的混合產(chǎn)物，其由蜂類從花粉和樹皮采集以及蜂 類自身的分泌。提取液丙二醇 提取物稠度液態(tài)黃花九輪草使用部分黃花九輪草的葉和根 提取液50%乙醇(v/v) 提取物稠度粉末厚樸使用部分皮 提取液醇和水 提取物稠度粉末旱芽(Apium graveolens) 使用部分塊莖 提取液不知 提取物稠度油狀液體 內(nèi)容物9%芹菜油在所述植物提取物中至今還沒有鑒定過脂肪抑制性物質(zhì)操作描述和用于確定酶活性的方法測試溶液的提供為了由提取的粉末和液體材料提供測試溶液，將200mg提取材料 溶解于lml適宜的溶劑并劇烈攪拌。于3400轉(zhuǎn)離心5分鐘后將所獲得 的液體成份用作為測試溶液。為了將固態(tài)成份的濃度和酶用量的比例 相匹配，將測試溶液以1: 200的比例稀釋以確定堿性磷酸酶。為了由C02抽取物和含油樹脂(6lharzen)配制測試溶液，將100Ml油狀液體提取物溶解于900 jul適宜的酶緩沖劑中并用超聲波于 100瓦處理5分鐘。胰脂肪酶(胰腺脂酶)進行兩種脂酶確定方法以測得離體胰脂肪酶的活性1.確定脂酶活性的分析由以下步驟組成- 200 |i 1的50mM/L BICIN-緩沖液(pH 8. 0 )，含有1 %工業(yè)阿 拉伯樹膠。-5Gpl植物提取液溶液和-25 ju 1的0. 35 mM/L胰脂肪酶溶液于371C溫育這種混合物20分鐘。胰脂肪酶活性的最后測量用臨床化學(xué)的自動分析儀(Konelab Kone)進行，其應(yīng)用脂酶光度計，以攜帶甲基9-羥基異吩噻唑 (Metylresorufin)的二?；视陀诘谌恢米鳛榈孜锴夜仓久负?膽酸鹽(Gallensalze)作為必需的輔助因子。該方法特別用于胰脂肪 酶并基于所述酶從底物切分甲基9-羥基異吩噢唑。用于在自動分析儀中確定胰脂肪酶活性選擇以下移液方案1. 60jil反應(yīng)試劑l:共脂肪酶和膽酸鹽2. 2 |u 1測試溶液+10 n 1洗液3. 180秒溫育4. 40jal反應(yīng)試劑2:比色底物和膽酸鹽5. 120秒溫育依據(jù)83秒后的12個測試點測定脂酶活性。于75納米光度計測量 甲基9-羥基異吩蓉唑。2.用第二種脂酶活性測試方法確定在植物提取物的影響下的脂酶 抑制，其通過測量所述酶在水解過程中從甘油三油酸酯中釋放的游離 脂肪酸。為了制備溫育混合物，使用即用溶液(反應(yīng)試劑Rl) 。 Rl由以下 組成26 mmol/L Tris緩沖液，pH 9.2 19 mmol/L去氧膽酸鈉 0. 1 mmol/L氯化鉀0. 3 mmol/L甘油三油酸酯 300 KU/L共脂肪酶溫育混合物如下組成50 26 mmol/L Tris緩沖液，pH 9.250|i 1于Rl中的9. 7 mmol/L甘油三油酸酯乳液50 n 1于26 mmol/L Tris緩沖液pH 9. 2的0. 134 mol/L胰脂肪50 m 1測試溶液于26 mmol/L Tris緩沖液pH 9. 2的1 %甲基纖維素用于檢測C02抽取物于37"C水浴中溫育時間30分鐘后，將所述反應(yīng)通過加入3ml的 氯仿-庚烷-甲醇-混合物(50: 49: 1 )終止。通過劇烈攪拌10分鐘從反 應(yīng)混合物中提取所釋放的游離脂肪酸。在離心(3400轉(zhuǎn)，10分鐘)后 從氯仿相中獲得2ml殘留物并加入lml由銅反應(yīng)試劑(94ml純水、6ml 1N NaOH、 6.45 mmol/L每Cu(N03)2、 0. lmol/L三乙醇胺、33% (w/v)NaCl)。將該混合物劇烈攪拌10分鐘并于3400轉(zhuǎn)離心10分鐘。 由液態(tài)上清液中取出lml并加入到0. 1 %深視亞銅試劑 (Bathocuproin)和0. 05 (w/v) 3-叔-丁-4-羥基苯甲醚的lml氯仿 中。最后在標準光度計中于480nm下光度計測量油狀脂肪酸-銅-深視 亞銅試劑-復(fù)合物。為了確保脂酶活性降低不是由于非特異性酶抑制劑或酶復(fù)合物的 變性所導(dǎo)致的，額外測定oc-淀粉酶和堿性磷酸酶的活性。ot-淀粉酶 的抑制可以看作為引起食后血糖水平降低和額外地對于糖尿病患者的 積極作用。a -淀粉酶在植物提取物的影響下淀粉酶活性的測量是如下進行的 用于確定淀粉酶活性的溫育混合物由以下組成共250 n 1:-200 p 1具有1%阿拉伯樹膠的50mM/L MOPSO緩沖液(pH 8. 0 )-25 p 1植物提取物溶液和-25 ju 1 0. 35mM/L oc-淀粉酶溶液這種混合物于38t下溫育20分鐘。隨后在用于化學(xué)的自動分析 儀(Konelab， Kone )進行胰脂肪酶活性的測量?；瘜W(xué)反應(yīng)原理1. 亞乙基-p-硝基苯酚-(葡萄糖)7 —亞乙基-(葡萄糖)h + p-硝基苯酚-(葡萄糖)2-42. p-硝基苯酚-(葡萄糖)-殘基—p-硝基苯酚(入=405腿)+葡萄用于在自動分析儀中確定ot -淀粉酶活性的移液方法如下進行1. 120pl反應(yīng)試劑底物+ot-葡糖苷酶2. 300秒溫育3. 3 n 1測試溶液4. 180秒溫育通過在120秒內(nèi)測量5個點確定ct-葡糖苷酶的活性 堿性磷酸酶在植物提取物的影響下堿性磷酸酶活性的測量如下進行用于確定堿性磷酸酶活性的溫育混合物由以下組成-200 |i 1的50mM/L HEDTA緩沖液(pH 8. 0 )-25 ju 1植物提取物溶液和-25^1 0. 014mM/L堿性磷酸酶溶液這種混合物于22TC下溫育20分鐘。隨后在用于臨床化學(xué)的自動 分析儀(Konelab， Kone )進行堿性磷酸酶活性的測量?；瘜W(xué)反應(yīng)原理2-氨基-2-甲基-l-丙醇+ 4-硝基苯基磷酸酯—(2-氨基-2-甲基 -l-丙醇)磷酸+ 4-硝基苯氧基(A = 409mn)用于在自動分析儀中確定堿性磷酸酶活性的移液方法如下進行1. 150jnl反應(yīng)試劑2. 300秒溫育3. 3 ju 1測試溶液4. 120秒溫育通過在22秒內(nèi)測量5個點確定堿性磷酸酶的活性。 動物試驗證明進一步檢測和證實離體發(fā)現(xiàn)的結(jié)果，在動物試驗中檢測甘油三酯 的降低效果。為此對大鼠用Triton WR-1339抑制血液中甘油三酯的降解進行脂 質(zhì)負荷測試并進行4小時的食后血漿甘油三酯值升高的測量。在此使 用如下試驗物質(zhì)蛋白質(zhì)和多肽-魚精蛋白強堿性核蛋白(32氨基酸21x精氨酸)，獲自魚 精液，甘油三酯降低性的(Tsujita等人，1996 )- 肽(D4Globin Digest):源自牛紅細胞球蛋白的酶水解產(chǎn)物， 甘油三酯降低性的(Kagawa等人，1996， 1998 )- VVYP:牛血紅球蛋白的0-鏈的f32-35，甘油三酯降低性的 (Kagawa等人，1996， 1998 )-LVYP:牛P-酪蛋白的f73-76提取物- 乙醇提取物-Tabebuia impetiginosa ( Lapacho )葉 -牛蒡(Klette) -亞麻(Lein)籽-葵花(向日葵)籽 -金盞花(Ringelblume ) -含油樹脂-葛縷子(Carum carvi ) (Kiimmel)的種子- C02-提取物-小豆蔻(Kardamom)的帶莢包的果實-Thymus vulgaris的葉子(廉香草(Thymian))- 蜂膠(Bienenkittharz ) 奧利斯特作為陽性對照作為結(jié)果，在給予測試物質(zhì)后發(fā)現(xiàn)大鼠血漿中食后甘油三酯值的 升高。在此表明，針對魚精蛋白、肽D4和四-肽均沒有發(fā)現(xiàn)甘油三酯 降低性效果。同樣在該試驗中也可以確定一些提取物沒有所希望的效 果。這包括亞麻籽、葵花、金盞花和蜂膠。在其它提取物的情況下部分卻可以很明顯地觀察到甘油三酯的降 低；對此包括葛縷子具有3% ±9%的降低，麝香草具有7% ±7%的減 少，牛蒡具有12% ±6%的減少，小豆蔻具有13% ±7%的減少，且特 別突出的是Lapachotee提取物具有顯著的16% ±7%的降低。在試驗 中沒有區(qū)分，提取物的哪一種內(nèi)容物賦予所觀察到的效果。在動物領(lǐng) 域進行進一 步的實驗仍是一 個主題空間，且提供人體研究所要求的啟示。通?？梢杂眠@種動物試驗證明，作為本發(fā)明有效表征的活性物質(zhì) 確實也離體表現(xiàn)出一些相同的效果。同樣明確了的是，所述效果不是 線形適用的并在個別情況下甚至被其它影響疊加，在極端的情況下可 以導(dǎo)致倒置的效果。從該試驗卻可以得出，在此作為有保護價值的在 特異性脂酶抑制的意義上列舉的物質(zhì)的進一步的測試是有意義的，并 可期待很具體的結(jié)果。以下依據(jù)兩個實施例進一步闡明本發(fā)明進一步 的細節(jié)和特征，但它們不應(yīng)當(dāng)構(gòu)成對本發(fā)明的限制而僅僅是闡明。示意性地表述附

圖1在給予試驗物質(zhì)后大鼠血漿中食后甘油三酯值的升高 附圖2在脂質(zhì)功效測試后大鼠血漿中的食后甘油三酯值 分別描述附圖在附圖1中表格化圖示大鼠在食物攝取后約0. 05小時所服用的與 甘油三酯值相關(guān)的物質(zhì)的作用。在此區(qū)別蛋白和肽以及天然活性物質(zhì) 提取物。明顯的是蛋白質(zhì)和肽在這種試驗構(gòu)建中沒有導(dǎo)致所希望的甘 油三酯的降低而是部分導(dǎo)致明顯升高。某些天然活性物質(zhì)也如此表現(xiàn)。 在此特另'J顯著的是源自Taheebo樹(Tabebuia impetiginosa )的內(nèi) 皮的Lapachotees的作用。在附圖2中展示取決于食物攝取后的作用時間的甘油三酯值曲 線。根據(jù)所期待的在給予奧利斯特的情況下甘油三酯值是最低的。對 于已經(jīng)在附圖1中列出的陽性作用的提取物還可以在4小時所述試驗 時間內(nèi)達到所希望的甘油三酯的降低。證明牛蒡、Lapachotees和小 豆蔻是有效的。在賦予奧利斯特的情況下相對特別少的甘油三酯值的 升高符合期待值且證明在申請文件中的動物試驗對于本發(fā)明是相關(guān) 的。
權(quán)利要求
1.以下物質(zhì)、物質(zhì)提取物或物質(zhì)精油作為單一組分或作為混合物用于制備口服藥物制劑的應(yīng)用，所述藥物制劑作為脂酶抑制劑起作用豆蔻和/或墨角蘭和/或麝香草和/或辣椒(小米椒(Capsicum frutescens))和/或月見草和/或俄力岡(oreganum vugare)葉和/或甘菊葉(Chamomilla recutica)肉豆蔻(Myristica fragrans)和/或蘋果渣(pomace)和/或玉米胚和/或杏仁和/或歐洲榛子和/或胡桃和/或南瓜籽和/或Cuphea wrightii和/或月見草和/或亞麻(Linum usitatissimum)和/或牛蒡(Arctium lappa L)和/或亞麻和/或葵花籽(向日葵)和/或金盞花(Calendula officinalis)和/或Echinops banaticus和/或粗糠柴(Mallotus philippinensis)和/或油菜籽和/或芝麻和/或黑種草和/或紅花琉璃草(Cynoglossum officinale)和/或Lapachotea和/或熊果(Arctostaphylos uva-ursi)和/或小石花(Flor de piedra)和/或蜂膠和/或黃花九輪草(Primula Veris)和/或厚樸(Magnolia officinalis)和/或旱芹(Apium graveolens)。
2.以下物質(zhì)、物質(zhì)提取物或物質(zhì)精油作為單一組分或作為混 合物用作脂酶抑制劑的用途， 豆蔻和/或 墨角蘭和/或 麝香草和/或辣椒(小米椒(Capsicum frutescens))和/或 月見草和/或俄力岡(oreganum vugare)葉和/或 甘菊葉(Chamomilla recutica) 肉豆蔻 (Myristica fragrans) 和/或 蘋果渣(pomace)和/或 玉米胚和/或杏仁和/或歐洲榛子和/或胡桃和/或南瓜籽和/或Cuphea wrightii和/或月見草和/或亞麻(Linum usitatissimum)和/或 牛蒡(Arctium lappa U 和/或 亞麻和/或葵花籽(向日葵)和/或金盞花(Calendula officinalis) 和/或Echinops banaticus和/或粗糠柴(Mallotus philippinensis)和/或油菜籽和/或芝麻和/或黑種草和/或紅花琉璃草(Cynoglossum officinale)和/或 Lapachotea和/或熊果(Arctostaphylos uva-ursi)和/或 小石花(Flor de piedra) 和/或 蜂膠和/或黃花九輪草(Primula Veris)和/或 厚樸(Magnolia officinalis)和/或 旱芽(Apium graveolens)。
全文摘要
由以下組成的脂酶抑制劑豆蔻和/或墨角蘭和/或麝香草和/或辣椒(小米椒(Capsicumfrutescens))和/或月見草和/或俄力岡(oreganumvugare)葉和/或甘菊葉(Chamomillarecutica)肉豆蔻(Myristicafragrans)和/或蘋果渣(pomace)和/或玉米胚和/或杏仁和/或歐洲榛子和/或胡桃和/或南瓜籽和/或Cupheawrightii和/或月見草和/或亞麻(Linumusitatissimum)和/或牛蒡(ArctiumlappaL)和/或亞麻和/或葵花籽(向日葵)和/或金盞花(Calendulaofficinalis)和/或Echinopsbanaticus和/或粗糠柴(Mallotusphilippinensis)和/或油菜籽和/或芝麻和/或黑種草和/或紅花琉璃草(Cynoglossumofficinale)和/或Lapachotea和/或熊果(Arctostaphylosuva-ursi)和/或小石花(Flordepiedra)和/或蜂膠和/或黃花九輪草(PrimulaVeris)和/或厚樸(Magnoliaofficinalis)和/或旱芹(Apiumgraveolens)。
文檔編號A61K36/9064GK101151042SQ200680008581
公開日2008年3月26日 申請日期2006年3月9日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月17日
發(fā)明者于爾根·施賴岑米爾 申請人:于爾根·施賴岑米爾