專(zhuān)利名稱(chēng)：：抗血管新生劑與阿地白介素的制作方法抗血管新生劑與阿地白介素相關(guān)申請(qǐng)的交叉參考根據(jù)35U.S.C.gl19(e)，本申請(qǐng)要求2005年2月18日提交的臨時(shí)申請(qǐng)60/654,341的優(yōu)先權(quán)，將該申請(qǐng)全文納入本文作參考。發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及與細(xì)胞增殖異常相關(guān)的疾病的治療方法。在一些實(shí)施方式中，重組IL-2與抗血管新生劑聯(lián)合用于治療癌癥。發(fā)明背景毛細(xì)血管伸入幾乎所有人體組織中，為組織提供氧氣和養(yǎng)料，并帶走廢產(chǎn)物。在一般條件下，內(nèi)襯毛細(xì)血管的內(nèi)皮細(xì)胞不分裂，因此，成人體內(nèi)毛細(xì)血管的數(shù)量或尺寸通常不會(huì)增加。然而，在某些條件下，如組織損傷或在月經(jīng)周期的某個(gè)階段，毛細(xì)血管開(kāi)始快速增殖。這種從現(xiàn)有血管形成新毛細(xì)血管的過(guò)程稱(chēng)為血管新生或新血管形成。參見(jiàn)Folkman，J.^證/ca"275，150-154(19%)。傷口愈合期間的血管新生是成年人病理生理性新血管形成的一個(gè)例子。在傷口愈合過(guò)程中，額外的毛細(xì)血管提供氧氣和養(yǎng)料，促進(jìn)肉芽組織，并幫助清除廢物。通常，愈合過(guò)程終止后，這些毛細(xì)血管就退化了。Lymboussaki，A."胚胎、成年人和腫瘤中的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子禾卩其受體"(VascularEndothelialGrowthFactorsandtheirRecepcorsinEmbryos,Adults,andinTumors),赫爾辛基大學(xué)學(xué)位論文，分子/癌癥生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室和病理系，HaartmanInstitute(1999)。血管新生也在癌細(xì)胞生長(zhǎng)中起重要作用。已知一旦癌細(xì)胞團(tuán)達(dá)到一定大小，直徑約l-2mm，癌細(xì)胞必須獲得血液供應(yīng)才能使腫瘤生長(zhǎng)得更大，因?yàn)閿U(kuò)散已經(jīng)不足以給癌細(xì)胞提供足夠的氧氣和養(yǎng)料。因此，預(yù)計(jì)抑制血管新生能中止癌細(xì)胞生長(zhǎng)。在鑒定到的血管新生因子中，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是最為有效和特異的，且己被鑒定為正常和病理性血管新生的重要調(diào)節(jié)物；雖然其它因子如表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)和血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)也參與了血管新生和癌細(xì)胞存活。CwrO//"/m^〃g/>wg&2001Feb;2(2):280-6。特異性抗腫瘤免疫包括活化免疫系統(tǒng)中的多種細(xì)胞類(lèi)型，最有效的是溶細(xì)胞性T淋巴細(xì)胞。為了誘導(dǎo)特異性抗腫瘤T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，不僅需要識(shí)別感興趣的腫瘤抗原，而且需要腫瘤細(xì)胞或抗原遞呈細(xì)胞上存在的特異性配體和目標(biāo)T淋巴細(xì)胞之間的共同刺激相互作用。可溶性因子，如結(jié)合于特定細(xì)胞表面受體并啟動(dòng)各種信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，導(dǎo)致效應(yīng)器功能增加的細(xì)胞因子或其它肽分子也可提供這第二種共同刺激信號(hào)。白介素-2(IL-2)是T淋巴細(xì)胞衍生的細(xì)胞因子，它能結(jié)合于T細(xì)胞和天然殺傷(NK)細(xì)胞上的特定受體，并能激活它們產(chǎn)生腫瘤細(xì)胞溶解、細(xì)胞因子分泌和其它效應(yīng)器功能。CD4和CD8T淋巴細(xì)胞都表達(dá)IL-2的受體，并在接觸生物物質(zhì)后提高溶細(xì)胞效應(yīng)器和細(xì)胞因子合成功能。IL-2的功能作用通過(guò)與IL-2受體(IL-2R)的作用介導(dǎo)，IL-2R在結(jié)構(gòu)上由以下三個(gè)亞基組成a、(3和與其它細(xì)胞因子受體共有的Y鏈(Caligiuri等，J.1990171(5):1509-1526;Bazan，J.F.，Sc/e"ce1992257(5068):410-413;Theze等，/mwwo/.7b^^199617(10):481-486)。激活I(lǐng)L-2受體和后續(xù)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)取決于細(xì)胞上的IL-2受體類(lèi)型(Caligiuri等，/MM.1990171(5):1509-1526;Voss等，《/Met/.1992176(2):531-541;Expinoza等，iewtoc.所o/.199557(1):13-29;Theze等，/mmw"o/.rodaj199617(10):481-486)。T細(xì)胞表達(dá)高親和IL-2Ra卩y，而NK細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞主要表達(dá)中等親和力的IL-2R(3Y形式(Caligiuri等，/￡xp.Med1990171(5):1509-1526;Voss等，JMed1992，176(2):531國(guó)541;Theze等，/mwzmo/.7b勿199617(10):481-486;Nagler等，五x/U1990171(5):1527-1533)。其核心機(jī)制是，IL-2激活JAK(JAK1、JAK3)，JAK磷酸化用作下游信號(hào)分子(包括She和Stat5)停靠位點(diǎn)的IL-2R(3上的關(guān)鍵酪氨酸，這些下游分子然后催化激活兩條不同的通路Shc/Ras/Raf/MAPK和JAK/STAT5，其隨后轉(zhuǎn)運(yùn)至核并直接調(diào)節(jié)基因調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄因子家族-STAT(O'Shea，J丄，/mwwm'/y19977(1):1-11)。She募集Grb-2/Sos復(fù)合物并活化Ras/Raf/MAPK通路，并募集Grb-2/Gab-2以活化磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)通路?？傊?，這些信號(hào)蛋白調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄因子，最終控制細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂、分化和免疫活性。此夕卜，IL-2也通過(guò)調(diào)節(jié)導(dǎo)致bcl-2、bd-xl、c-myb增加的促分裂基因誘導(dǎo)抗凋亡作用，這能通過(guò)激活cdk2、4、6和抑制p27kipl影響細(xì)胞周期控制，或者可被SOCS(細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的阻抑物)負(fù)調(diào)節(jié)(Smith，K.A.，&/證1988240(4856):1169-1176;Theze等，/mmw"o/.7b^^199617(10):481-486)。據(jù)報(bào)道，IL-2和IL-2R的相互作用引發(fā)下游的MAPK、PI-3K和JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑激活，導(dǎo)致細(xì)胞存活和增殖(Miyazaki等，Science1994266(5187):1045-1047;Beadling等，五wk/199615(8):1902-1913;Nakajima等，/mm"",19977(5):691-701;Moriggl等，/mwww'(y199911(2):225-230)。在各種小鼠腫瘤模型中進(jìn)行的臨床前研究證明，在10-14天的周期中給予荷瘤動(dòng)物重組人IL-2時(shí)，可導(dǎo)致腫瘤負(fù)擔(dān)消退、長(zhǎng)期存活并且對(duì)腫瘤再生長(zhǎng)的抗性增加。對(duì)獲自這些動(dòng)物的脾淋巴細(xì)胞的分析顯示，所述抗腫瘤作用至少部分由溶細(xì)胞性T細(xì)胞功能增加產(chǎn)生。這種作用包括由CTL激活腫瘤細(xì)胞的直接溶解以及其它T淋巴細(xì)胞衍生的細(xì)胞因子合成增加，這種增加可能也具有直接或間接的抗腫瘤作用。轉(zhuǎn)移性黑色素瘤和腎細(xì)胞癌(RCC)大部分是不治之癥，它們對(duì)大多數(shù)類(lèi)型的全身化療有抗性，因此仍然非常需要開(kāi)發(fā)出更有效的療法。近期的臨床數(shù)據(jù)支持對(duì)用于黑色素瘤和腎細(xì)胞癌的小分子受體酪氨酸激酶(RTK)抑制劑(尤其是BAY43-9006或SU11248)的開(kāi)發(fā)。BAY43-9006和SU11248都能抑制參與腫瘤生長(zhǎng)、增殖和抗血管新生的多種激酶。BAY43-9006是Raf/MEK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑成員Raf-l的有效抑制齊U(Richly等，/"A>/C〃".尸/zan^co/.777er.200341(12):620陽(yáng)621;Wilhelm等，C。"cw/"200464(19):7099-7109;Awada等，/Ca騰r200592(10):1855-函)，它能抑制野生型B-Raf和突變的V599EB-Raf。除了BAY43-9006對(duì)Raf的作用以外，認(rèn)為它的大部分活性是通過(guò)抑制其它RTK，尤其是VEGFR(VEGFR-2和VEGFR-3)、PDGFR卩和其它關(guān)鍵激酶FLT-3以及cKIT(Wilhelm等，Owc"i".200464(19):7099-7109)介導(dǎo)的。在早期實(shí)體瘤試驗(yàn)中用BAY43-9006的反應(yīng)已證明，每日一次或每日兩次給藥可導(dǎo)致疾病穩(wěn)定，包括一些部分反應(yīng)。迄今為止，I期研究表明，BAY43-9006在患者中通常耐受良好。Bay43-9006的最常見(jiàn)毒性包括胃腸道反應(yīng)(腹瀉、惡心、異常痙攣)或皮膚病反應(yīng)，包括皮膚搔癢癥或皮疹(Richly等，/尸/wrwaco/.T7^r200341(12):620陽(yáng)621;Ahmad和Eisen，C//w.Ca""ri"200410(18Pt2):6388S-92S;Awada等，/Ca騰r200592(10):1855-1861;Strumberg等，/C//".200523(5):%5-972)。相反，SU11248是VEGFR-l-3、PDGFRa、cKIT、FLT3和PDGFR卩的非常有效的選擇性RTK抑制劑(Abrams等，Mo/.Ca"cer77^.20032(5):471-478;Mendel等，Owcw/e&20039(1):327-337;O'Farrell等，C"".Ga"ceri^.20039(15):5465-5476)。SU11248已在許多晚期實(shí)體瘤(RCC、神經(jīng)內(nèi)分泌、基質(zhì)和腺癌)中顯示出抗腫瘤活性(Faivre等，J.C7/".200624(1):23-35;Motzer等，J.C//".0腳/.200624(1):16-24)。SU11248的臨床數(shù)據(jù)也表明，該藥物通常耐受，帶有易處理的毒性，包括疲勞、淋巴細(xì)胞減少、嗜中性白血球減少、脂酶過(guò)高(Faivre等，J.C//".Onco/.200624(1):23-35;Motzer等，乂C//".(9,/.200624(1):16-24)。對(duì)vonHippel-Lindau綜合征中出現(xiàn)的透明細(xì)胞腎癌的遺傳類(lèi)型的研究鑒定出vonHippel-Lindau腫瘤抑制基因(VHL)。在遺傳性腎細(xì)胞癌(其中一個(gè)突變是種系突變)和大多數(shù)散發(fā)性透明細(xì)胞腎癌(其中兩個(gè)等位獲得突變或缺失)中該基因發(fā)生突變。GnarraJR,DuanDR，WengY等。MolecularcloningofthevonHippel-Lindautumorsuppressorgeneanditsroleinrenalcarcinoma(vonHippel-Lindau月中瘤抑制基因的分子克隆和它在腎癌中的作用)，所oc/z/w/ca"所o;/z，/caKfl.1996;1242(3):201-10。這些突變的結(jié)果之一是通過(guò)涉及缺氧誘導(dǎo)因子的機(jī)制過(guò)度產(chǎn)生血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子。OIliopoulousAL，CJiang等，NegativeRegulationofHypoxia-inducablegenebytheVon-HippelLinduProtein(Von-HippelLindu蛋白下調(diào)缺氧誘導(dǎo)基因)，尸racA^ar/Jcfld1996;93:10595-10599。因此，通過(guò)其對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的調(diào)節(jié)，vonHippel-Lindau蛋白與血管新生緊密相關(guān)。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子刺激內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng)，并且(如上所述)似乎是血管新生中，特別是胚胎發(fā)育、排卵、傷口愈合和腫瘤生長(zhǎng)期間的核心因子。FerraraN.Molecularandbiologicalpropertiesofvascularendothelialgrowthfactor(血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子的分子和生物學(xué)特性)，/Mo/.MW.1999;77:527-543。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子是治療透明細(xì)胞腎癌的良好靶點(diǎn)，因?yàn)関onHippel-Lindau腫瘤抑制基因的突變導(dǎo)致腫瘤過(guò)度產(chǎn)生這種生長(zhǎng)因子。Yang等Arandomizedtrialofbevaciz讓ab，ananti-vascularendothelialgrowthfactorantibody,formetastaticrenalcancer(抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子抗體貝伐單抗用于轉(zhuǎn)移性腎癌的隨機(jī)試驗(yàn)),NewEnglandJournalofMedicine2003;349(5):427-34描述了在轉(zhuǎn)移性透明細(xì)胞腎癌患者中進(jìn)行人源化單克隆抗體(貝伐單抗)的隨機(jī)雙盲安慰劑對(duì)照研究。與安慰劑組患者相比，在每千克給予貝伐單抗(每?jī)芍?0mg/kg)的患者中，腫瘤進(jìn)展時(shí)間(timetotumorprogression)延長(zhǎng)了2.55倍。在該試驗(yàn)中存活不是主要終點(diǎn)，其使患者在疾病進(jìn)展時(shí)能從安慰劑組轉(zhuǎn)移到貝伐單抗治療組。通過(guò)除血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子介導(dǎo)途徑以外的途徑靶向血管新生機(jī)制治療腎癌也可能有效。在一些腫瘤的局部微環(huán)境中還有可促進(jìn)血管新生的其它蛋白。同樣，對(duì)在對(duì)腎細(xì)胞癌生物學(xué)機(jī)制的理解的指導(dǎo)下、采用合理組合抑制劑的抗血管新生治療法存在需求。根據(jù)對(duì)接受間歇性高劑量推注方案的255位患者進(jìn)行的幾項(xiàng)多中心試驗(yàn)的結(jié)果，F(xiàn)DA批準(zhǔn)將重組人白介素-2(阿地白介素訴于治療轉(zhuǎn)移性腎癌。在這些試驗(yàn)中，在15。/。患者中觀察到客觀反應(yīng)，存活期中值為16.3個(gè)月(Fisher和Rosenberg2000CancerJSciAm6Sl:S55-57)。由于這種方案產(chǎn)生顯著毒性，進(jìn)行了以不同劑量采用不同給藥途徑給予rlL-2的一系列臨床I期和II期試驗(yàn)。最近，一篇關(guān)于rlL-2作為單一藥物的效力的綜述表明，在用這一系列研究治療的1700多名轉(zhuǎn)移性RCC患者中總體反應(yīng)率為15%。在3-5%的患者中觀察到完全反應(yīng)。BukowskiRM.Naturalhistoryandtherapyofmetastaticrenalcellcarcinoma:theroleofinterleukin-2(轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌的天然歷史和治療白介素-2的作用)，C朋cer，1997;80(7):1198-220。在這些途徑中反應(yīng)率看起來(lái)沒(méi)有不同。高劑量靜脈內(nèi)(IV)推注方案和低劑量IV推注方案和對(duì)門(mén)診病人皮下給藥方案之間的隨機(jī)比較顯示，組間的存活期中值沒(méi)有差異，但低劑量和門(mén)診病人方案的毒性明顯較低。YangJC，SherryRM，SteinbergSM等，Randomizedstudyofhigh-doseandlow-doseinterleukin-2inpatientswithmetastaticrenalcancer(在轉(zhuǎn)移性腎癌患者中高劑量和低劑量白介素-2的隨機(jī)研究),/o"ma/o/C//m'cfl/0"co/ogy.2003;21(16):3127-32。除了具有直接的免疫調(diào)節(jié)作用，rlL-2也可通過(guò)引起活化NK細(xì)胞釋放二級(jí)細(xì)胞因子釋放(IFN力防止腫瘤增殖。SarayaKLA，BalkwillFR，Temporalsequenceandcellularoriginofinterleukin-2stimulatedcytokinegeneexpression(白介素-2朿l]激細(xì)胞因子基因表達(dá)的時(shí)間序列和細(xì)胞來(lái)源)，5n'to/zJowma/o/Ca"cer.1993;67(3):514-21?？商岣咄该骷?xì)胞腎癌患者的反應(yīng)率和治療結(jié)果。需要采用新型藥物組合的臨床試驗(yàn)。rlL2和抗血管新生劑如貝伐單抗的聯(lián)用可具有加成作用，這可轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌以及其它癌癥患者的更多的臨床獲益。這一令人稱(chēng)贊的方法對(duì)于消退癌癥的另一優(yōu)點(diǎn)是它提供了更不容易被抗性突變規(guī)避的平臺(tái)。當(dāng)治療靶點(diǎn)非常極化和特異(可能是避免靶向宿主細(xì)胞所必需的)，如靶向病毒復(fù)制子的特定底物或癌細(xì)胞系的激酶時(shí)，疾病狀態(tài)中的一個(gè)點(diǎn)突變即可使其不受藥物的作用，從而在后代中產(chǎn)生該疾病的更難對(duì)付的品系。需要利用靶向體內(nèi)免疫應(yīng)答機(jī)制和疾病狀態(tài)底物的藥物治療患有對(duì)常規(guī)方法有抗性或常規(guī)方法不足以治療的與異常增殖相關(guān)的疾病的患者的新方法和機(jī)制。本發(fā)明提供了這種治療劑，還提供了其它相關(guān)優(yōu)點(diǎn)。發(fā)明概述本發(fā)明部分基于采用具有非疊加毒性的小分子受體酪氨酸激酶抑制劑和rlL-2的獨(dú)特的聯(lián)合治療。由于黑色素瘤和RCC通常對(duì)免疫治療如rlL-2有反應(yīng)，所以本文根據(jù)單個(gè)藥物的藥理學(xué)評(píng)價(jià)了rlL-2與可能的受體酪氨酸激酶抑制劑的合理組合。本發(fā)明根據(jù)這些藥物的毒理學(xué)特性提供了臨床上可應(yīng)用的藥物方案，以規(guī)避可能的藥物相互作用。也闡述了不利的藥代動(dòng)力學(xué)/藥效學(xué)相互作用和不利的藥理學(xué)相互作用的可能性。描述了rlL-2和小分子受體酪氨酸激酶抑制劑如BAY43-9006對(duì)T細(xì)胞的作用和對(duì)IL-2-介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(MAPK和JAK/STAT5)的影響。因此，本發(fā)明擴(kuò)展了IL-2化合物如重組IL-2(rlL-2，也稱(chēng)為阿地白介素)對(duì)常規(guī)治療反應(yīng)差的癌細(xì)胞系的抗腫瘤效力的適應(yīng)癥，導(dǎo)致長(zhǎng)期存活增加和對(duì)腫瘤復(fù)發(fā)(rechallenge)的免疫力。而且，rlL-2的免疫刺激作用旨在減輕與其共同給予的抗血管新生性組合物引起的現(xiàn)有的副作用。提供了用IL-2化合物如rfL-2和至少一種抗血管新生劑聯(lián)合治療患有細(xì)胞增殖異常，尤其是腎細(xì)胞癌的對(duì)象的方法。而且，也提供了用IL-2化合物如rlL-2和小分子聯(lián)合治療患有細(xì)胞增殖異常，尤其是腎細(xì)胞癌的對(duì)象的方法。優(yōu)選的本發(fā)明小分子見(jiàn)表1-5。尤其優(yōu)選的分子是!^(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺(也稱(chēng)為SU11248)和l-(4《2—(甲基氨甲酰基)卩比啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲(也稱(chēng)為Bay43-9006)。阿地白介素和抗血管新生劑可以一起給藥或者作為單獨(dú)的藥物組合物分別給藥。如果分別給藥，可以在給予所述抗血管新生劑之前、同時(shí)或之后給予阿地白介素。提供的具體方案包括每天、每周和每月共同給予阿地白介素與抗血管新生劑的給藥方案(或其重復(fù))，所述抗血管新生劑例如6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹哇啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2，4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺和l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基傳基)脲。在一個(gè)實(shí)施方式中，優(yōu)選為6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-^(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺和l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)卩比啶-4-基氧基)苯基)_3_(4_氯_3_(三氟甲基)苯基)脲之一的抗血管新生劑與抗血管新生蛋白如能夠抑制VEGF的單克隆抗體共同給藥。在一個(gè)更具體的實(shí)施方式中，本發(fā)明抗血管新生蛋白是貝伐單抗或VEGF-Trap。在另一個(gè)更具體的實(shí)施方式中，所述蛋白是EGF抑制劑，如西妥昔單抗。在另一實(shí)施方式中，以本文所述方式一起給予阿地白介素和抗血管新生劑能增強(qiáng)所述抗血管新生劑的有效性，導(dǎo)致相對(duì)于單用所述抑制劑提高的陽(yáng)性/協(xié)同治療反其它實(shí)施方式提供了適合商業(yè)出售的治療癌癥患者的治療包裝，其包括容器、治療有效量的阿地白介素和治療有效量的抗血管新生劑和/或小分子，優(yōu)選表l-5所列物質(zhì)，如6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-1-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。在其它實(shí)施方式中，提供了一種藥盒。所述藥盒包括同時(shí)、依次或分別應(yīng)用的治療癌癥患者的藥物組合，包括(a)阿地白介素和(b)抗血管新生劑，所述抗血管新生劑選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。提供了制造本文所述組合物的方法，并認(rèn)為這種方法應(yīng)該落入本發(fā)明范圍，因?yàn)橹圃煊糜诒景l(fā)明方法的藥物的方法中采用了所述組合。本發(fā)明的其它實(shí)施方式包括詳細(xì)說(shuō)明中所述的實(shí)施方式。附圖簡(jiǎn)要說(shuō)明圖l顯示了在IL-2反應(yīng)性、T細(xì)胞有功能的小鼠腫瘤模型中rlL-2、BAY43-9006或SU11248的單一藥物活性。將B16-F10黑色素瘤(2x106)、CT26結(jié)腸(2xl()6)或RENCA腎癌(lxlO"細(xì)胞皮下植入雌性C57BL6或BALB/c小鼠的右側(cè)。腫瘤生長(zhǎng)至平均大小為50-225nin^時(shí)開(kāi)始治療，如方法部分所述。將小鼠隨機(jī)分成治療組(10只小鼠/組)。每天皮下給予rlL-2(0.2-3mg/kg/d)。通過(guò)管詞法每天給予溶液形式的BAY43-9006或SU11248(1-100mg/kg)。圖l說(shuō)明了在B16-F10、CT26和RENCA腫瘤模型中一種藥物處理后第10-14天的平均腫瘤生長(zhǎng)抑制(按照[l-(治療組的平均腫瘤體積/載體組的平均腫瘤體積)xlOO]計(jì)算)。這些數(shù)據(jù)由多次獨(dú)立研究匯編而來(lái)，各研究為10只小鼠/組。^旨相對(duì)于載體治療的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(p0.05，ANOVA)。圖2顯示了在B16-F10小鼠黑色素瘤模型中rlL-2和BAY43-9006同步治療的效力。將B16-F10細(xì)胞(2xl(^個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性C57BL6小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至50mm3時(shí)將小鼠隨機(jī)分組，從第0天開(kāi)始用載體(第0-6天)()、rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第0-6天)(A)或BAY43-9006(30mg/kg，p.o.第0-6天)(x)或組合的rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第0-6天)+BAY43-9006(30mg/kg，p.o.第0-6天)(—進(jìn)行治療。圖2說(shuō)明了與隨機(jī)分組后天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(mm&SE)(11=10只小鼠/組)。圖3A和3B顯示了在B16-F10小鼠黑色素瘤模型中rlL-2和BAY43-9006連續(xù)治療的效力。將B16-F10細(xì)胞(2xl(/個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性C57BL6小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至50rm^時(shí)將小鼠隨機(jī)分組，第O天開(kāi)始治療。圖3A顯示了首先給予rlL-2、然后給予BAY43-9006的連續(xù)方案的結(jié)果。圖中指出載體O)第0-6、7-13天；rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第0-6天)(A)或BAY43-9006(30mg/kg，p.o.第7-13天)(x)或聯(lián)合給予rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第0-6天)+BAY43-9006(30mg/kg，p.o.第7-13天)0)。圖3B顯示了首先給予BAY43-9006、然后給予rlL-2的連續(xù)方案的結(jié)果。圖中指出載體("第0-6、7-13天；BAY43-卯06(30mg/kg，p.o.第0-6天)(x);rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第7-13天)(口)或聯(lián)合給予BAY43-9006(30mg/kg，p.o.第0-6天)+rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第7-13天)(A)。曲線圖顯示了與隨機(jī)分組后天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(mm乜SE)(r^lO只小鼠/組)。圖4顯示了在B16-F10小鼠黑色素瘤模型中rlL-2和SU11248同步治療的效力。將B16-F10細(xì)胞(2xl(^個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性C57BL6小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至50mm3時(shí)將小鼠隨機(jī)分組，從第O天開(kāi)始用載體(第0-6天)()、rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第0-6天)(口)或SU11248(40mg/kg，p.o.第0-6天)(O)或組合的rlL-2(3,3mg/kg，s.c.第0-6天)+SU11248(40mg/kg，p.o.第0-6天)(A)進(jìn)行治療。圖4說(shuō)明了與隨機(jī)分組后天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(mm^SE)(i^lO只小鼠/組)。圖5A和5B顯示了在B16-F10小鼠黑色素瘤模型中rlL-2和SU11248連續(xù)治療的效力。將B16-F10細(xì)胞(2xl(^個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性C57BL6小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至50mn^時(shí)將小鼠隨機(jī)分組，第O天開(kāi)始治療。圖5A顯示了首先給予rlL-2、然后給予SU11248的連續(xù)方案的結(jié)果。圖中指出載體(0)第0-6、7-13天；rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第0-6天)(口)或SU11248(40mg/kg，p.o.第7-13天)(x)或聯(lián)合給予rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第0-6天)+SU11248(40mg/kg，p.o.第7-13天)0)。圖5B顯示了首先給予SU11248、然后給予rlL-2的連續(xù)方案的結(jié)果。圖中指出載體(0)第0-6、7-13天；SU11248(40mg/kg，p.o.第0-6天)(0);rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第7-13天)(厶)或聯(lián)合給予SU11248(40mg/kg，p.o.第0-6天)+rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第7-13天)(B)。曲線圖顯示了與隨機(jī)分組后天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(mm、SE)(r^10只小鼠/組)。圖6顯示了在CT26小鼠結(jié)腸腺癌模型中rlL-2和BAY43-卯06連續(xù)治療的效力。將CT26細(xì)胞(2xl(^個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性BALB/c小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至225mr^時(shí)將小鼠隨機(jī)分組，第0天開(kāi)始治療。圖中說(shuō)明首先給予rlL-2、然后給予BAY43-9006的連續(xù)方案載體("第0-6、7-13天；rlL-2(1mg/kg，s.c.第0-6天)(n)或BAY43-9006(40mg/kg，p.o.第7-13天)(A)或聯(lián)合給予rlL-2(1mg/kg，s.c.第0-6天)+BAY43-9006(40mg/kg，p.o.第7-13天)0)。圖7顯示了在CT26小鼠結(jié)腸腺癌模型中rlL-2和SU11248的同步治療的效力。將CT26細(xì)胞(2xl(^個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性BALB/c小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至225mm、寸將小鼠隨機(jī)分組，第O天開(kāi)始治療。圖中指出載體("第0-6天；rlL-2(1mg/kg，s.c.第0-6天)(口)或SU11248(40mg/kg，p.o.第0-6天)(0)或聯(lián)合給予rlL-2(1mg/kg，s.c.第0-6天)+SU11248(40mg/kg，p.o.第0-6天)()。圖8A和8B顯示了在CT26小鼠結(jié)腸腺癌模型中rlL-2和SU11248連續(xù)治療的效力。將CT26細(xì)胞(2xl(^個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性BALB/c小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至225mm3時(shí)將小鼠隨機(jī)分組，第O天開(kāi)始治療。圖中指出圖8A顯示了首先給予rlL-2、然后給予SU11248的連續(xù)方案的結(jié)果載體O)第0-6、7-13天；rlL-2(1mg/kg，s.c.第0-6天)(口)或SU11248(40mg/kg，p.o.第7-13天)(0)或聯(lián)合給予rlL-2(1mg/kg,s.c.第0-6天)+SU11248(40mg/kg，p.o.第7-13天)(翻)。圖8B顯示了首先給予SU11248、然后給予rlL-2的連續(xù)方案的結(jié)果。圖中指出載體("第0-6、7-13天；SU11248(40mg/kg，p.o.第0-6天)(O);rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第7-13天)(口)或聯(lián)合給予SUl1248(40mg/kg，p.o.第0-6天)+rlL-2(3.3mg/kg，s.c.第7-13天)(A)。曲線圖顯示了與隨機(jī)分組后天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(mm乜SE)(11=10只小鼠/組)。圖9顯示了在小鼠RCCRENCA腫瘤模型中rlL-2和BAY43-9006同步治療的效力。將RENCA細(xì)胞(lxl(^個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性BALB/c小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至50mr^時(shí)將小鼠隨機(jī)分組，從第O天開(kāi)始用載體(第0-8天)()、rlL-2(1mg/kg，s.c.第0-4、7-1l天)(A)或BAY43-9006(30mg/kg，p.o.第0-8天)(x)或組合的rlL-2(1mg/kg，s.c.第0-4、7-ll天)+BAY43-9006(30mg/kg,p.o.第0-8天)(園)進(jìn)行治療。圖9說(shuō)明了與隨機(jī)分組后天數(shù)相對(duì)的平均腫瘤體積(mm、SE)(『10只小鼠/組)。圖10顯示了在小鼠RCCRENCA腫瘤模型中rlL-2和SU11248同步治療的效力。將RENCA細(xì)胞(lxi(^個(gè)細(xì)胞)皮下植入雌性BALB/c小鼠右側(cè)。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至50mm、寸將小鼠隨機(jī)分組，從第O天開(kāi)始治療。圖中指出載體O)第0-6天；rIL-2(lmg/kg，s.c.第0-6天)(B)或SU11248(40mg/kg,p,o.第0-6天)(x)或聯(lián)合給予rlL-2(1mg/kg，s.c.第0-6天)+SU11248(40mg/kg，p.o.第0-6天)(A)。發(fā)明詳述利用檢測(cè)試驗(yàn)，幾種類(lèi)型的癌癥被表征為對(duì)采用抗血管新生劑/VEGF抑制劑和細(xì)胞因子給藥治療或用rlL-2調(diào)節(jié)敏感。這種癌癥包括例如CML、AML、乳腺癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌、唾液腺癌、腎上腺癌、非小細(xì)胞肺癌、胰腺癌、腎癌、直腸癌、皮膚癌、黑色素瘤、多發(fā)性骨髓瘤、腦/CNS癌、宮頸癌、鼻咽癌、惡性間皮瘤、喉咽癌、胃腸道良性腫瘤、腹膜癌、網(wǎng)膜癌、腸系膜癌、膽囊癌、睪丸癌、食道癌、肺癌、甲狀腺癌、卵巢癌、腹膜癌、前列腺癌、頭頸癌、膀胱癌、結(jié)腸癌、結(jié)直腸癌、淋巴瘤和成膠質(zhì)細(xì)胞瘤。本文所述方法可用于治療任何上述癌癥。阿地白介素和至少一種抗血管新生劑以本文所述方式聯(lián)合治療對(duì)于其未減少的增殖細(xì)胞高度依賴(lài)于血管形成(如VEGF)的癌癥的治療能引起有利的生理反應(yīng)。本發(fā)明的一種實(shí)施方式提供了治療因?yàn)榻o予阿地白介素而發(fā)生低血壓的癌癥患者的方法，所述方法包括將治療有效量的抗血管新生劑共同給予所述患者以減輕低血壓。本發(fā)明的另一更具體實(shí)施方式包括改善患者的癌癥。本發(fā)明的另一實(shí)施方式提供了治療因?yàn)榻o予抗血管新生劑而發(fā)生高血壓的癌癥患者的方法，所述方法包括，將治療有效量的阿地白介素共同給予所述患者以減輕高血壓。本發(fā)明的另一更具體實(shí)施方式包括改善患者的癌癥。在某些實(shí)施方式中，所述癌癥對(duì)血管新生抑制和/或免疫刺激敏感。在前述任一實(shí)施方式的更具體實(shí)施方式中，所述抗血管新生劑選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明的另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予所述患者阿地白介素和選自下組的化合物6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉_4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明的另一實(shí)施方式提供了提高阿地白介素在癌癥患者中的效力的方法，所述方法包括，首先給予能夠誘導(dǎo)患者缺氧的劑量的抗血管新生劑，然后給予阿地白介素。另一實(shí)施方式提供了提高抗血管新生劑在癌癥患者中的效力的方法，所述方法包括通過(guò)將阿地白介素給予該患者減少一氧化氮合酶。另一實(shí)施方式提供了提高抗血管新生劑在癌癥患者中的效力的方法，所述方法包括給予所述患者阿地白介素，從而通過(guò)將阿地白介素給予該患者使一氧化氮合酶減少。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述抗血管新生劑選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨萄乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明的另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括以下步驟首先將治療有效量的阿地白介素給予所述患者，然后給予選自下組的抗血管新生劑(如)6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)；甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明的另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括以下步驟首先將治療有效量的抗血管新生劑，如6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉_4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲給予所述患者，然后給予阿地白介素。本發(fā)明的另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，包括按照給藥方案分別給予所述患者治療有效量的抗血管新生劑和阿地白介素，其中在至少連續(xù)3天中每天以約9-130MIU/天的劑量給予阿地白介素l-3次，然后任選為至少連續(xù)3天的停藥期。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，每2-3周給予所述抗血管新生劑l-6次。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述抗血管新生劑是VEGF抑制劑。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述抗血管新生劑選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉_4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，靜脈內(nèi)給予阿地白介素，并存在所述停藥期。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，皮下給予阿地白介素，不存在所述停藥期。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，每天以約30-100MIU/天的劑量給予阿地白介素3次。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，連續(xù)給予阿地白介素5天，然后停藥9天。在更具體的實(shí)施方式中，將所述給藥方案重復(fù)至少兩個(gè)療程。在更具體的實(shí)施方式中，各療程由2-5天治療后接9-15天停藥期組成。在本發(fā)明另一更具體的實(shí)施方式中，在第一天給予阿地白介素3次，隨后每天給藥一次。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，將所述給藥方案重復(fù)至少兩個(gè)療程、或3個(gè)療程、或4個(gè)療程、或5個(gè)療程、或6個(gè)療程、或7個(gè)療程、或8個(gè)療程、或9個(gè)療程、或10個(gè)療程。在任何前述實(shí)施方式的更具體實(shí)施方式中，所述癌癥是結(jié)腸癌、腎細(xì)胞癌或惡性黑色素瘤。在任何前述實(shí)施方式的更具體實(shí)施方式中，給予阿地白介素后，也將選自下組的至少一種化合物給予所述患者對(duì)乙酰氨基酚、哌替啶、吲哚美辛、雷尼替丁、尼扎替丁、diast叩、洛哌丁胺、苯海拉明或呋塞米。在任何前述實(shí)施方式的優(yōu)選實(shí)施方式中，所述抗血管新生劑是6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2，4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-1-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶_4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明的另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予阿地白介素和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予阿地白介素和、、其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予阿地白介素和^、其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予阿地白介素和Q、其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予阿地i白介素和<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>、其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予阿地白介素和式I化合物或其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>式中R,是烷基、-芳基(Ri)p或雜環(huán)基；R2是H或烷基；或R,和R2結(jié)合在一起形成R,.2;R3是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、垸氧基、-NRaRb、-C(0)Rc、-S(0)nRd或雜環(huán)基；R4是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、-0-(CH2)q-Rg、-CHCHOq-O-R^-NR3Rb、-s(oyid或-雜環(huán)基-Rf;Rs是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、-0-(CH2)q-Rg、-0-(CH2)q-0-R^、-NRaRb、-S(O)nRd或雜環(huán)基；R6是H、-CN、-OH、鹵素、垸基、芳基、烷氧基、-NRaRb、-C(0)Rc、-S(0)nRd或雜環(huán)基；R是H、-OH、鹵素、烷基、芳基、烷氧基、-NRaRb、-S(Oyid或雜環(huán)基；Ra和Rb各自獨(dú)立地是H、垸基、-C(0)Re、芳基、雜環(huán)基或垸氧基；或者Ra和Rb結(jié)合在一起形成R,.2;Rc各自獨(dú)立地是H、垸基、垸氧基、-C(O)垸基、-C(O)芳基、-CHO、芳基或雜Rd各自獨(dú)立地是H、烷基、烯基、芳基或-NRaRb;Re各自獨(dú)立地是H或垸基；Rf是H、鹵素、曙OH、-CN、-(CH2)qNRaRh、烷氧基、-C(0)Rc、-(CH2)qCH3(Rg各自獨(dú)立地是H、鹵素、-C(O)Rc、芳基、雜環(huán)基或-NRaRb;Rh是H或陽(yáng)(CH2)qS(0)nRd;Ri各自獨(dú)立地是H、鹵素、垸基、烯基、炔基或-0(CH2)q-Rg;n各自獨(dú)立地是0、l或2;p各自獨(dú)立地是0、1、2或3;q各自獨(dú)立地是0、l或2;R^具有下示通用結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>式中，Rs各自獨(dú)立地是H、-OH、鹵素、垸基、垸氧基、-NRaRb或-S(O)nRd;如果X是O、S或不存在，R9各自獨(dú)立地是H、烷基、-C(O)Rc或不存在；X各自獨(dú)立地是O、S、N、CH或不存在，從而形成共價(jià)鍵；和m各自獨(dú)立地是0、l或2。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述化合物是其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。'在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述化合物是:c、其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予阿地白介素和式II化合物或其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽式中，Ru是垸基、芳基或雜環(huán)基；R12、R13、R，4和R,5各自獨(dú)立地是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、烷氧基、-NRaRb、-C(0)Rz、-S(O)Jld或雜環(huán)基；Ra和Rb各自獨(dú)立地是H、垸基、-C(0)Rz、芳基、雜環(huán)基或烷氧基；Rz各自獨(dú)立地是H、垸基、烷氧基、-NH2、-NH(烷基)、^(垸基)2、芳基或雜環(huán)Rd各自獨(dú)立地是H、垸基、烯基、芳基或-NR,Rb;n各自獨(dú)立地是0、l或2;和q各自獨(dú)立地是0、l或2。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，Rn是Rua:<formula>formulaseeoriginaldocumentpage20</formula>、式中:Rl6、Rn和R,8各自獨(dú)立地是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、烷氧基、-NRaRb、-C(0)Rz、-S(O)nRd或雜環(huán)基。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述化合物是、其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予阿地白介素和式III化合物或其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽-式中，虛線代表任選地安置另一個(gè)鍵；R20是H或二O;R2i、R22、R23和R24各自獨(dú)立地是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、垸氧基、-NRaRb、-C(0)Rz、-S(O)nRd或雜環(huán)基；R25是H、垸基或-C(O)Rz;R26和R27各自獨(dú)立地是H、-OH、鹵素、烷基、-NRaRb、-C(O)Rz或-S(O)Jld;R28是H、-0"13或鹵素；Ra和Rb各自獨(dú)立地是H、烷基、-C(0)Rz、芳基、雜環(huán)基或烷氧基；Rz各自獨(dú)立地是H、垸基、垸氧基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基)2、芳基或雜環(huán)基；Rd各自獨(dú)立地是H、垸基、烯基、芳基或-NRaRb,;n各自獨(dú)立地是O、l或2;和q各自獨(dú)立地是O、l或2。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述化合物是o°、其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述化合物是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage21</formula>、其互變異構(gòu)體、其藥學(xué)上可接受的鹽或其互變異構(gòu)體的藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了降低將阿地白介素給予癌癥患者伴隨的毒性的方法，所述方法包括給予所述患者喹啉酮，優(yōu)選抗血管新生劑，優(yōu)選選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-^(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了降低將優(yōu)選選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-卩比咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲的抗血管新生劑給予癌癥患者伴隨的毒性的方法，所述方法包括給予所述患者阿地白介素。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了降低癌癥患者的IL-2抗性的方法，所述方法包括給予所述患者抗血管新生劑，優(yōu)選選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了治療癌癥患者的方法，所述方法包括以下步驟首先給予所述患者治療有效量的阿地白介素，然后給予抗血管新生劑，優(yōu)選選自6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了治療癌癥患者的方法，所述方法包括按照給藥方案分別給予所述患者治療有效量的抗血管新生劑和阿地白介素，所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)->^-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-^(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-1-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲?；?卩比啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲，其中在至少連續(xù)3天中每天以約9-130MIU/天的劑量給予阿地白介素l-3次，然后任選為至少連續(xù)3天的停藥期。更具體說(shuō)，所述劑量約為30-100MIU/天。更具體說(shuō)，所述劑量約為30-60MIU/天。更具體說(shuō)，所述劑量約為30-40MIU/天。更具體說(shuō)，所述劑量約為17-30MIU/天。更具體說(shuō)，所述劑量約為9-30MIU/天。在更具體的實(shí)施方式中，每2-3周給予所述抗血管新生劑l-9次，所述所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)->4-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、^(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、1^-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)批啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。在更具體的實(shí)施方式中，所述抗血管新生劑是VEGF抑制劑，優(yōu)選選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-^(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、^(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪小胺或1-(4-(2-(甲基氨甲酰基)卩比啶-4-基氧基)苯萄-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。在另一實(shí)施方式中，所述抗血管新生劑也與貝伐單抗或西妥昔單抗或VEGF-Tr叩一起給予，所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、^(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-1-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。更具體說(shuō)，所述貝伐單抗的給藥劑量為每12-16天一次l到12mg/kg之間。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-272小時(shí)內(nèi)給予所述抗血管新生劑；其中"內(nèi)"指之前或之后，如在給予rlL-272小時(shí)前或72小時(shí)后給予抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-214天內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-27天內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-26天內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-25天內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-24天內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-248小時(shí)內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-236小時(shí)內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-224小時(shí)內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-212時(shí)內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-26小時(shí)內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-2l小時(shí)內(nèi)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，在給予rlL-2的同時(shí)給予所述抗血管新生劑。在另一實(shí)施方式中，將抗血管新生劑與rlL-2聯(lián)合給藥。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，所述抗血管新生劑選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括共同給予阿地白介素和抗血管新生劑，所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉_4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪小胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了適合商業(yè)出售的治療癌癥患者的治療包裝，其包括容器、治療有效量的阿地白介素和治療有效量的抗血管新生劑，所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)—N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-1-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。一種本發(fā)明所述治療包裝，其中所述患者患有腎細(xì)胞癌。一種本發(fā)明所述治療包裝，還包括指導(dǎo)患者在接受抗血管新生劑治療之前接受阿地白介素的治療的書(shū)面材料，所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6，7-雙(2-甲氧基乙氧萄-N-(3-乙炔基苯基贈(zèng)唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2，4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。另一實(shí)施方式提供了含有抗血管新生劑和阿地白介素的藥物組合物，所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、忭(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌(RCC)與血管形成增加，尤其是VEGF表達(dá)有關(guān)。VEGF是在腫瘤血管新生(向腫瘤形成新血管)和維持已建立的腫瘤血管中起重要作用的蛋白。它結(jié)合于血管上的特定受體，刺激現(xiàn)有血管延伸。一些(而非所有)RCCa病例的血清VEGF水平升高。有證據(jù)顯示，VEGF增加與IL-2抗性有關(guān)(Lissoni等，^油rVmc"7^.2001;21:777-9)。VEGF對(duì)T細(xì)胞和樹(shù)突細(xì)胞的免疫抑制作用(Gabrilovich等，J丄ewtoc5/o/.2002;72:285-96)可能代表了VEGF誘導(dǎo)的對(duì)IL-2治療產(chǎn)生抗性的機(jī)制。此外，VEGF提高了血管通透性，用抗VEGF治療會(huì)導(dǎo)致一些患者的血壓升高。因此，如果本發(fā)明聯(lián)合用藥給予了癌癥如RCCa的患者，抗VEGF(如高血壓)和rlL-2(如低血壓)的一些主要毒性可能互相抵消，導(dǎo)致治療指數(shù)總體提高。與單獨(dú)給予藥物相比，本發(fā)明的其它聯(lián)合用藥，如阿地白介素與貝伐單抗或西妥昔單抗產(chǎn)生更高的反應(yīng)比例和/或更好的反應(yīng)持久性。本文所述的具體阿地白介素給藥方案提供了間歇性剌激天然殺傷(NK)細(xì)胞活性并降低了可能與長(zhǎng)期進(jìn)行rlL-2給藥有關(guān)的rlL-2-相關(guān)性副作用的風(fēng)險(xiǎn)。需要注意，通過(guò)給予本發(fā)明抗血管新生性組合物抵消了一般與rlL-2給藥有關(guān)的低血壓，因?yàn)檫@種組合物通常與高血壓相關(guān)。而且，一般與VEGF抑制劑相關(guān)的缺氧能提高rlL-2治療效力的敏感性，同時(shí)也提供了緩解效果。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了阿地白介素在制造用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，其中所述藥物與抗血管新生劑分別、同時(shí)或連續(xù)應(yīng)用，所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-111-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-1-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。在本發(fā)明的更具體實(shí)施方式中，優(yōu)選選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧萄-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2，4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-W-氯苯基M-((吡啶l基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲的所述抗血管新生劑是乳酸鹽。在另一實(shí)施方式中，所述癌癥是腎細(xì)胞癌。本發(fā)明另一實(shí)施方式提供了抗血管新生劑在制造用于治療癌癥的藥物中的應(yīng)用，所述抗血管新生劑優(yōu)選選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)->^-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2，4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-1-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基傳基)脲，其中所述藥物與阿地白介素分別、同時(shí)或連續(xù)應(yīng)用。與血管新生有關(guān)、受本發(fā)明組合物調(diào)節(jié)(如抑制)的優(yōu)選分子包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、白介素-8(IL-8)、血管生成素、促血管素、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a(TGF-ot)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子P(TGF-(3)或一氧化氮。本發(fā)明也考慮了由本發(fā)明組合物調(diào)節(jié)(如增強(qiáng))的血小板反應(yīng)蛋白、血管抑制素和內(nèi)皮抑制素。與rlL-2共同給予的通用組合物喹唑啉式I化合物具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage26</formula>式中，R,是垸基、-芳基(Rj)p或雜環(huán)基；R2是H或烷基；或R,和R2結(jié)合在一起形成Rw;R3是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、垸氧基、-NRaRb、-C(0)Rc、-S(0)nR(或雜環(huán)基；R4是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、-0-(CH2)q-Rg、-0-(CH2)q-0-Re、-NR3Rb--s(oyid或-雜環(huán)基-RnRs是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、-0-(CH2)q-Rg、-0-(CH2)q-0-Re、-NRaRb.-S(O)nRd或雜環(huán)基；Re是H、-CN、-OH、鹵素、垸基、芳基、垸氧基、-NRaRb、-C(O)Rc、-S(0)nR,或雜環(huán)基；R是H、-OH、鹵素、垸基、芳基、烷氧基、-NRaRb、-S(O)nRd或雜環(huán)基；Ra和Rb各自獨(dú)立地是H、烷基、-C(0)Re、芳基、雜環(huán)基或垸氧基；或者Ra和Rb結(jié)合在一起形成R,.2;Rc各自獨(dú)立地是H、烷基、烷氧基、-C(O)垸基、-C(O)芳基、-CHO、芳基或雜Rd各自獨(dú)立地是H、烷基、烯基、芳基或-NRaRb;Re各自獨(dú)立地是H或垸基；Rf是H、鹵素、-OH、-CN、-(CH2)qNRaRh、烷氧基、-C(0)Rc、-(CH2)qCH:Rg各自獨(dú)立地是H、鹵素、-C(O)R。芳基、雜環(huán)基或-NRaRb;Rh是H或-(CH2)qS(0)nRd;Ri各自獨(dú)立地是H、鹵素、烷基、烯基、炔基或-0(CH2)q-Rg;n各自獨(dú)立地是0、l或2;p各自獨(dú)立地是0、1、2或3;q各自獨(dú)立地是0、l或2;R,.2具有下示通用結(jié)構(gòu)式中，Rs各自獨(dú)立地是H、-OH、鹵素、烷基、垸氧基、-NRaRb或-S(O)nRd;如果X是O、S或不存在，R9各自獨(dú)立地是H、烷基、-C(O)Re或不存在；X各自獨(dú)立地是O、S、N、CH或不存在，從而形成共價(jià)鍵；和m各自獨(dú)立地是0、l或2。在本發(fā)明的更具體的實(shí)施方式中，R2是H。在更具體的實(shí)施方式中，R,是-芳基(Ri)p。在R,是-芳基(Ri)p的另一實(shí)施方式中，R沖的芳基是苯基，R,中的p是2，R,中的兩個(gè)Ri基團(tuán)都是鹵素。在R,是-芳基(Ri)p的另一實(shí)施方式中，R,中的芳基是苯基，R,中的p是l，R,中的Ri基團(tuán)是炔基，優(yōu)選乙炔基。在R,是-芳基(R,)p的另一實(shí)施方式中，R沖的芳基是苯基，R沖的p是2，R,中的一個(gè)Ri基團(tuán)是鹵素，R,中的另一個(gè)Ri基團(tuán)是-0(CH2)q-Rg。在其更具體實(shí)施方式中，R,中的q是l，R,中的Rg是鹵代苯基。環(huán)基;在R,是-芳基(Ri)p的另一實(shí)施方式中，R,中的p是l，R,中的Ri是炔基。提供了本發(fā)明的另一個(gè)更具體的實(shí)施方式，其中R,和R2結(jié)合在一起形成R其中，Rs是H，X是N，R9是-C(0)nHRb。在其更具體實(shí)施方式中，R9中的Rb是-苯基<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>在本發(fā)明的更具體的實(shí)施方式中，R3和R6是H。在本發(fā)明的更具體的實(shí)施方式中，R4是-0-(CH2)q-Rg。在其更具體實(shí)施方式中，R4中q是l，Rg是H。在R4是-0-(CH2)q-Rg的另一實(shí)施方式中，R4中的Rg是雜環(huán)基。在本發(fā)明的更具體的實(shí)施方式中，R4和R5各自是-0-(CH2)q-0-Re。在其更具體實(shí)施方式中，R4和R5中的q都是2，R4和R5中的Re都是甲基。在本發(fā)明的更具體的實(shí)施方式中，R4是-雜環(huán)基-Rf，Rs是H。在其更具體實(shí)施方式中，R4內(nèi)的所述雜環(huán)基是呋喃基。在更具體的實(shí)施方式中，R4中的Rf是-(CH》qNHRh。進(jìn)一步，Rh是-(CH2)qS(0)2CH3。在本發(fā)明的更具體的實(shí)施方式中，R#-0-(CH2)q-Rg。在其另一實(shí)施方式中，R5中的Rg是雜環(huán)基。本發(fā)明提供了另一實(shí)施方式，其中R7是H。本發(fā)明提供了另一實(shí)施方式，其中R3、R6和R7都是H。二氫噴哚酮式II化合物具有以下結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage28</formula>式中，Rn是垸基、芳基或雜環(huán)基；R12、R13、R,4和R,5各自獨(dú)立地是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、垸氧基、-NRaRb、-C(0)Rz、-S(O)nRd或雜環(huán)基；Ra和Rb各自獨(dú)立地是H、垸基、-C(0)Rz、芳基、雜環(huán)基或烷氧基；Rz各自獨(dú)立地是H、烷基、垸氧基、-NH2、-NH(烷基)、-風(fēng)烷基)2、芳基或雜環(huán)Rd各自獨(dú)立地是H、烷基、烯基、芳基或-NRaRb;n各自獨(dú)立地是0、l或2;和q各自獨(dú)立地是0、l或2。在更具體實(shí)施方式中，Rn是雜環(huán)基。在更具體的實(shí)施方式中，Rn是Rm:R16、Rn和R,8各自獨(dú)立地是H、-CN、-OH、鹵素、垸基、芳基、烷氧基、-NRaRb、-C(0)Rz、-S(O)nRd或雜環(huán)基。在R,是R,a的又一更具體的實(shí)施方式中，R7是-<:(0)-(012)1)^(印(2.。(垸基)"其中p是0、1、2、3、4或5，r是0、l或2。在Rh是R^的又一更具體的實(shí)施方式中，Rn是F。在Ru是Rua的又一更具體的實(shí)施方式中，R17是-(CH2)tCOOH，其中t是l、2、3或4。在Ru是Rua的又一更具體的實(shí)施方式中，R6和R8都是甲基。在Rn是Rm的又一更具體的實(shí)施方式中，Rn是H。在本發(fā)明另一更具體的實(shí)施方式中，Rn是芳基。更具體說(shuō)，Rn是取代或未取代的苯基。在另一實(shí)施方式中，R,3是碘。異二氫吲哚酮式III化合物具有以下結(jié)構(gòu)式中，虛線代表任選地安置另一個(gè)鍵；R20是H或二O;R21、R22、R23和R24各自獨(dú)立地是H、-CN、-OH、鹵素、烷基、芳基、烷氧基、-NRaRb、-C(0)Rz、-S(O)nRd或雜環(huán)基；式中，R25是H、烷基或-C(O)Rz;R26和R27各自獨(dú)立地是H、-OH、鹵素、烷基、-NRaRb、-C(O)Rz或-S(Oyid;R^是H、-13或鹵素；Ra和Rb各自獨(dú)立地是H、垸基、-C(0)Rz、芳基、雜環(huán)基或垸氧基；Rz各自獨(dú)立地是H、烷基、烷氧基、-NH2、-NH(烷基)、-N(垸基)2、芳基或雜環(huán)Rd各自獨(dú)立地是H、烷基、烯基、芳基或-NRJlb,;n各自獨(dú)立地是0、l或2;和q各自獨(dú)立地是0、l或2。定義AUC曲線下面積CR完全反應(yīng)DLT劑量限制毒性IL白介素IL-2白介素-2IU國(guó)際單位IV靜脈內(nèi)(作為給藥方式)LAK淋巴因子活化的殺傷細(xì)胞MTD最大耐受劑量MIU百萬(wàn)國(guó)際單位NK天然殺傷細(xì)胞PK藥代動(dòng)力學(xué)PR部分反應(yīng)RCC腎細(xì)胞癌RCCa透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌rlL-2重組白介素-2RTK受體酪氨酸激酶TNF腫瘤壞死因子VEGF血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子通常，提到某些元素如氫或H，旨在包括該元素的所有同位素。例如，如果將R基團(tuán)定義為包含氫或H，它也包含氘和氚。"抗血管新生劑"指己證明或?qū)⒈蛔C明能在系統(tǒng)中抑制血管新生的任何小分子，更具體說(shuō)，是分子量小于U00g/mol的任何化合物。與血管新生相關(guān)、受本發(fā)明組合物調(diào)節(jié)(如抑制)的優(yōu)選分子包括血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、白介素-8(IL-8)、血管生成素、促血管素、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、血小板衍生內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a(TGF-cx)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子P(TGF-P)或一氧化氮。本發(fā)明也考慮了由本發(fā)明組合物調(diào)節(jié)(如增強(qiáng))的血小板反應(yīng)蛋白、血管抑制素和內(nèi)皮抑制素。優(yōu)選的本發(fā)明抗血管新生組合物包括6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺和l-(4-(2-(甲基氨甲?；?卩比啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。術(shù)語(yǔ)"有效量"是實(shí)現(xiàn)所需生物學(xué)作用所必需的量或足以實(shí)現(xiàn)所需生物學(xué)作用的量。例如，治療腎細(xì)胞癌的化合物的有效量可以是引起腎細(xì)胞腫瘤生長(zhǎng)消退所必需的量。有效量可能取決于(例如)所治療疾病、對(duì)象體重和疾病的嚴(yán)重程度。本領(lǐng)域技術(shù)人員無(wú)需過(guò)度的實(shí)驗(yàn)就能憑經(jīng)驗(yàn)確定有效量。本文所用"治療有效量"指足以緩解、改善、穩(wěn)定、逆轉(zhuǎn)、減緩或延遲病癥進(jìn)展如疾病狀態(tài)的量。"對(duì)象"或"患者"指人或脊椎動(dòng)物，包括犬、貓、口袋寵物、狨、馬、牛、豬、綿羊、山羊、象、長(zhǎng)頸鹿、雞、獅子、猴、貓頭鷹、大鼠、松鼠、懶猴和小鼠。"口袋寵物"指能夠裝入寬大的外套口袋的脊椎動(dòng)物類(lèi)群，如倉(cāng)鼠、栗鼠、雪貂、大鼠、豚鼠、沙鼠、兔和蜜袋鼯。本文所用術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的酯"指在體內(nèi)水解的酯，包括那些在人體內(nèi)容易降解而留下母體化合物或其鹽的酯。合適的酯基包括例如衍生自藥學(xué)上可接受的脂族羧酸，尤其是鏈烷酸、鏈烯酸、環(huán)垸酸和鏈烷二羧酸的酯基，其中各烷基或烯基部分宜含有不多于6個(gè)碳原子。具體酯的代表性例子包括但不限于甲酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯?？梢喳}形式應(yīng)用本發(fā)明化合物，如衍生自無(wú)機(jī)或有機(jī)酸的"藥學(xué)上可接受的鹽"。這些鹽包括但不限于乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、檸檬酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、硫酸氫鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、二葡糖酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、葡糖庚酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、延胡索酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來(lái)酸鹽、甲磺酸鹽、煙酸鹽、2-萘磺酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽、果膠酸鹽、硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽和十一酸鹽。同時(shí)，可用一些物質(zhì)使堿性含氮基團(tuán)季銨化，這種物質(zhì)有低級(jí)垸基鹵化物，如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；二垸基硫酸酯如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；長(zhǎng)鏈鹵化物如癸基、十二烷基、十四烷基和硬脂基的氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基鹵化物，如芐基和苯乙基溴等。從而獲得可溶于或可分散于水或油的產(chǎn)物。本文所用術(shù)語(yǔ)"藥學(xué)上可接受的前藥"指那些根據(jù)合理的醫(yī)學(xué)判斷，適用于接觸人和低等動(dòng)物的組織的、具有過(guò)度毒性、刺激性、過(guò)敏反應(yīng)等、具有合理的獲益/風(fēng)險(xiǎn)比、并能有效用于其所需應(yīng)用的本發(fā)明化合物的前藥，以及在可能情況下本發(fā)明化合物的兩性離子形式。術(shù)語(yǔ)"前藥"指在體內(nèi)快速轉(zhuǎn)化產(chǎn)生上式母體化合物(如通過(guò)在血液中水解)的化合物。T.Higuchi和V.Stella,Pro-drugsasNovelDeliverySystems(作為新型遞送系統(tǒng)的前藥)，A.C.S.研討會(huì)系列第14巻和EdwardB.Roche編，BioreversibleCarrierinDrugDesign(藥物設(shè)計(jì)中的生物可逆性運(yùn)載體)，AmericanPharmaceuticalAssociationandPergamonPress,1987中進(jìn)行了充分討論?？刹捎美缛缑绹?guó)專(zhuān)利6,284,772所述的前藥。"鹵"、"鹵化物"或"鹵素"指F、Cl、Br或I原子。術(shù)語(yǔ)"垸基"指取代或未取代的烷基，如甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、庚基、辛基，壬基、癸基、十一烷基、十二烷基等。該術(shù)語(yǔ)也包括直鏈垸基的支鏈異構(gòu)體，包括但不限于(例如)-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)3、-C(CH2CH3)3)-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH(CH2CH3)2、-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH2CH3)2、-CH2CH2C(CH3)3、-CH2CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2、-0^((:112013)(:1^013)(:11((:113)((:112(:113)等。該術(shù)語(yǔ)也包括環(huán)烷基如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基和環(huán)辛基，以及用上述直鏈和支鏈烷基取代的這些環(huán)。該術(shù)語(yǔ)也包括聚環(huán)垸基，例如但不限于金剛烷基降冰片基和雙環(huán)[2.2.2]辛基以及用上述直鏈和支鏈烷基取代的這些環(huán)。術(shù)語(yǔ)烷基也包括連接于碳或氫的一個(gè)或多個(gè)鍵被連接于非氫和非碳原子的鍵取代的基團(tuán)，所述非氫和非碳原子例如但不限于鹵化物中的鹵素原子如F、Cl、Br和I;和諸如羥基、垸氧基、芳氧基和酯基等基團(tuán)中的氧原子；諸如巰基、烷硫基和芳硫基、砜基、磺酰基和亞砜基團(tuán)等基團(tuán)中的硫原子；諸如胺、酰胺、烷基胺、二垸基胺、芳基胺、垸基芳基胺、二芳基胺、N-氧化物、亞酰胺和烯胺等基團(tuán)中的氮原子；諸如三垸基甲硅烷基、二烷基芳基甲硅烷基、烷基二芳基甲硅烷基和三芳基甲硅烷基等基團(tuán)中的硅原子；和各種其它基團(tuán)中的其它雜原子。烷基是限于含有l(wèi)-20個(gè)碳原子和至多5個(gè)上述其它雜原子的基團(tuán)。更優(yōu)選的烷基含有l(wèi)-5個(gè)碳原子和至多2個(gè)雜原子。術(shù)語(yǔ)"芳基"指不含雜原子的取代和未取代的芳基。因此，該術(shù)語(yǔ)包括但不限于(例如)苯基、聯(lián)苯基、蒽基、萘基。芳基也包括一個(gè)芳香碳與上述(垸基定義中)非碳或非氫原子鍵合的芳基，也包括芳基的一個(gè)或多個(gè)芳香碳與取代和/或未取代的如本文所述的垸基、烯基或炔基鍵合的芳基。這包括芳基的兩個(gè)碳原子與烷基、烯基或炔基的兩個(gè)原子鍵合的鍵合形式，以形成稠合環(huán)系統(tǒng)(如二氫萘基或四氫萘基)。因此，術(shù)語(yǔ)"芳基"包括但不限于甲苯基和羥基苯基等。術(shù)語(yǔ)"烯基"指如上述垸基所述的直鏈和支鏈和環(huán)狀基團(tuán)，不同之處在于至少存在一個(gè)兩個(gè)碳原子之間的雙鍵。例子包括但不限于乙烯基、-CH=C(H)(CH3)、-ch=c(ch3)2、-c(ch3)=c(h)2、-c(ch3)=c(h)(ch3)、-c(ch2ch3)=ch2、環(huán)己烯基、環(huán)戊烯基、環(huán)己二烯基、丁間二烯基、戊二烯基和己二烯基等。也包括非碳或非氫原子鍵合于與另一個(gè)碳形成雙鍵的碳的基團(tuán)和一個(gè)非碳或非氫原子鍵合于未與另一個(gè)碳形成雙鍵的碳的基團(tuán)。烯基是限于含有2-15個(gè)碳原子和至多4個(gè)上述其它雜原子的基團(tuán)。更優(yōu)選的烯基含有2-5個(gè)碳原子和至多2個(gè)雜原子。術(shù)語(yǔ)"垸氧基"指具有式-O-垸基的取代或未取代的烷氧基，其中連接點(diǎn)是氧基，烷基的定義如上所述。烷氧基是限于含有l(wèi)-20個(gè)碳原子和至多5個(gè)上述其它雜原子(包括該氧原子)的基團(tuán)。更優(yōu)選的烷氧基含有l(wèi)-5個(gè)碳原子和至多2個(gè)雜原子，包括該氧原子。術(shù)語(yǔ)"炔基"指如上述烷基所述的直鏈和支鏈基團(tuán)，不同之處在于至少存在一個(gè)兩個(gè)碳原子之間的三鍵。例子包括但不限于-C三C(H)、-C=C(CH3)、-C^c(ch2ch3)、-c(h2)c=c(h)、-(3(11)2(:三(:(0"13)和-(:(印2(:三(:(012013)等。也包括非碳或非氫原子鍵合于與另一個(gè)碳形成三鍵的碳的炔基和非碳或非氫原子鍵合于未與另一個(gè)碳形成三鍵的碳的炔基。炔基是限于含有2-15個(gè)碳原子和至多4個(gè)上述其它雜原子的基團(tuán)。更優(yōu)選的炔基含有2-5個(gè)碳原子和至多2個(gè)雜原子。術(shù)語(yǔ)"雜環(huán)基"指芳族和非芳族環(huán)化合物，包括含有3個(gè)或多個(gè)環(huán)原子的單環(huán)、雙環(huán)和多環(huán)化合物，例如但不限于奎寧環(huán)基，其中一個(gè)或多個(gè)環(huán)原子是雜原子，例如但不限于N、O和S。雜環(huán)基的例子包括但不限于含有l(wèi)-4個(gè)氮原子的3-8元不飽和環(huán)，例如但不限于吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、二氫吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、噠嗪基、三唑基(如4H-l,2,4-三唑基、m-l,2,3-三唑基、2H-1,2,3隱三唑基等)、四唑基(如lH-四唑基、2H四唑基等)；含有l(wèi)-4個(gè)氮原子的3-8元飽和環(huán)，例如但不限于吡咯垸基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基；含有l(wèi)-4個(gè)氮原子的稠合不飽和雜環(huán)基團(tuán)，例如但不限于剛哚基、異。引哚基、二氫吲哚基、中氮茚基、苯并咪唑基、喹啉基、異喹啉基、B引唑基、苯并三唑基；含有l(wèi)-2個(gè)氧原子的3-8元不飽和環(huán)，例如但不限于呋喃基；含有l(wèi)-2個(gè)氧原子和l-3個(gè)氮原子的3-8元不飽和環(huán)，例如但不限于噁唑基、異噁唑基、嗯二唑基(如l,2,4-嗎二唑基、1,3,4-噁二唑基、1，2，5-嗯二唑基等)；含有l(wèi)-2個(gè)氧原子和l-3個(gè)氮原子的3-8元飽和環(huán)，例如但不限于嗎啉基；含有l(wèi)-2個(gè)氧原子和l-3個(gè)氮原子的不飽和稠合雜環(huán)基團(tuán)，例如，苯并嗯唑基、苯并嗯二唑基、苯并嗯嗪基(如2H-l,4-苯并嗯嗪基等)；含有l(wèi)-3個(gè)硫原子和l-3個(gè)氮原子的3-8元不飽和環(huán)，例如但不限于噻唑基、異噻唑基、噻二唑基(如l，2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基等)；含有l(wèi)-2個(gè)硫原子和l-3個(gè)氮原子的3-8元飽和環(huán)，例如但不限于噻唑烷基；含有l(wèi)-2個(gè)硫原子的3-8元飽和和不飽和環(huán)，例如但不限于噻吩基、二氫二硫雜環(huán)己二烯基、二氫二硫酮基、四氫噻吩、四氫噻喃；含有l(wèi)-2個(gè)硫原子和l-3個(gè)氮原子的不飽和稠合雜環(huán)，例如但不限于苯并噻唑基、苯并噻二唑基、苯并噻嗪基(如2H-l,4-苯并噻嗪基等)、二氫苯并噻嗪基(如2H-3,4-二氫苯并噻嗪基等)，含有l(wèi)-2個(gè)氧原子的不飽和稠合雜環(huán)，如苯并間二氧雜環(huán)戊烯基(如l,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯基等)；含有氧原子和l-2個(gè)硫原子的3-8元不飽和環(huán)，例如但不限于二氫氧硫雜環(huán)己二烯基；含有l(wèi)-2個(gè)氧原子和l-2個(gè)硫原子的3-8元飽和環(huán)，如l，4-氧硫雜環(huán)己烷；含有l(wèi)-2個(gè)硫原子的不飽和稠合環(huán)，如苯并噻吩基、苯并二硫雜環(huán)己二烯基；以及含有氧原子和l-2個(gè)氧原子的不飽和稠合雜環(huán)如苯并氧硫雜環(huán)己二烯基。雜環(huán)基也包括環(huán)中一個(gè)或多個(gè)S原子與一個(gè)或兩個(gè)氧原子形成雙鍵的上述基團(tuán)(亞砜和砜)。例如，雜環(huán)基包括四氫噻吩、四氫噻吩氧和四氫噻吩l，l-二氧。優(yōu)選的雜環(huán)基含有5或6個(gè)環(huán)原子。更優(yōu)選的雜環(huán)基包括嗎啉、哌嗪、哌啶、吡咯烷、咪唑、吡唑、1,2,3-三唑、1，2，4-三唑、四唑、硫代嗎啉、硫代嗎啉(硫代嗎啉的S原子鍵合于一個(gè)或多個(gè)O原子)、吡咯、高哌嗪、嗎唑烷-2-酮、吡咯烷-2-酮、f德唑、奎寧環(huán)、噻唑、異嗯唑、呋喃和四氫呋喃。"雜環(huán)基"也指環(huán)原子之一與非氫原子如上述取代垸基和取代芳基中的非氫原子鍵合的上述基團(tuán)。例子包括但不限于2-甲基苯并咪唑基、5-甲基苯并咪唑基、5-氯苯并噻唑基、l-甲基哌嗪基和2-氯吡啶基等。雜環(huán)基是限于含有2-15個(gè)碳原子和至多6個(gè)上述其它雜原子的基團(tuán)。更優(yōu)選的雜環(huán)基含有3-5個(gè)碳原子和至多2個(gè)雜原子。術(shù)語(yǔ)"取代"應(yīng)用于未限定、但本領(lǐng)域熟知的基團(tuán)如苯基時(shí)，與垸基定義中所述的任選附加物含義相同。在本發(fā)明內(nèi)，應(yīng)理解，本文所述化合物可能具有本發(fā)明互變異構(gòu)現(xiàn)象，本說(shuō)明書(shū)中的化學(xué)式可能僅代表一種可能的互變異構(gòu)體形式。應(yīng)理解，本發(fā)明包括具有抗血管新生活性的任何互變異構(gòu)體形式，而不僅限于所附化學(xué)式中利用的任何一種互變異構(gòu)體形式。也應(yīng)理解，本發(fā)明的某些化合物和實(shí)施方式可以溶劑合物以及非溶劑合物形式如水合形式存在。應(yīng)理解，本發(fā)明包括具有抗血管新生活性的所有這種溶劑合物形式。本發(fā)明也包括與上述化合物結(jié)構(gòu)相同、但一個(gè)或多個(gè)原子被原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)不同于通常所用天然原子質(zhì)量或質(zhì)量數(shù)的原子取代的同位素標(biāo)記的化合物。可摻入本發(fā)明化合物的同位素的例子包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，分別如2h、3h、13c、i4c、i5n、18o、17o、31p、32p、35s、18fW36ci。含有上述同位素和/或其它原子的同位素的本發(fā)明化合物、其前藥以及所述化合物和所述前藥的藥學(xué)上可接受的鹽落入本發(fā)明范圍。某些同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物，如摻入了放射性同位素如sh和"c的本發(fā)明化合物，可用于藥物和/或底物組織分布試驗(yàn)。尤其優(yōu)選氖即^和碳14即"c同位素，因?yàn)樗鼈円子谥苽浜蜋z測(cè)。而且，用較重同位素如氖即211取代可產(chǎn)生某些治療益處，因?yàn)樗鼈兊拇x穩(wěn)定性更高，如體內(nèi)半衰期增加或劑量需求降低，因此在某些情況下優(yōu)選用較重同位素取代。通?？赏ㄟ^(guò)進(jìn)行已知或參考的方法并用容易獲得的同位素標(biāo)記的試劑代替非同位素標(biāo)記的試劑來(lái)制備同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物及其前藥。"IL-2"或"白介素-2"指由正常的外周血淋巴細(xì)胞產(chǎn)生并且以低濃度存在于體內(nèi)的淋巴細(xì)胞。IL-2首先由Morgan等.(1976)Science193:1007-1008描述，起初稱(chēng)為T(mén)-細(xì)胞生長(zhǎng)因子，因?yàn)樗苷T導(dǎo)經(jīng)刺激的T淋巴細(xì)胞增殖。它是報(bào)道分子量為13,000-17，000的蛋白質(zhì)(Gillis和Watson(1980)J￡x/7.159:1709)，它的等電點(diǎn)為6-8.5。出于本發(fā)明目的，術(shù)語(yǔ)"IL-2"旨在包括任何來(lái)源的IL-2，包括哺乳動(dòng)物來(lái)源如小鼠、大鼠、兔、靈長(zhǎng)動(dòng)物、豬、口袋寵物和人，并且可以是天然蛋白或由重組技術(shù)獲得的蛋白，如由微生物宿主產(chǎn)生的重組IL-2多肽。IL-2可以是天然多肽序列，或者可以是天然IL-2多肽的變體(如下所述)，只要該變異IL-2多肽保持了本文所述感興趣的IL-2生物學(xué)活性。IL-2多肽或其變體優(yōu)選衍生自人來(lái)源，包括重組產(chǎn)生的人IL-2例如由微生物宿主產(chǎn)生的重組人IL-2多肽以及保持了感興趣的IL-2生物學(xué)活性的它的變體。含有IL-2作為治療活性成分的任何藥物組合物均可用于實(shí)施本發(fā)明。拔艦.本發(fā)明組合物可與其它抗癌劑聯(lián)合給藥。具體說(shuō)，組合物可配制在一起形成聯(lián)合治療劑或分別給藥。用于本發(fā)明的抗癌劑包括但不限于以下一種或多種物質(zhì)丄纖滯腳用作與本發(fā)明組合物聯(lián)用的抗癌劑的激酶抑制劑包括表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)激酶抑制劑如小分子喹唑啉，如吉非替尼(gefitinib)(US5457105、US5616582和US5770599)、ZD-6474(WO01/32651)、埃羅替尼(erlotinib)(Tarceva、US5,747'498禾口WO96/30347)和拉帕替尼(lapatinib)(US6，727，256和WO02/02552);血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體(VEGFR)激酶抑制劑，包括SU-11248(WO01/608M)、SU5416(US5,883，113和W099/61422)、SU6668(US5,883,113和W099/61422)、CHIR-258(US6,605,617和US6,774,237)、伐他拉尼(vatalanib)或PTK-787(US6，258,812)、VEGF-Trap(WO02/57423)、B43-染料木素(B43-Genistein)(WO-09606116)、芬維A胺(fenretinide)(視黃酸對(duì)羥基苯胺)(US4,323,581)、IM-862(WO02/62826)、貝伐單抗(bevacizumab)或Avastin②(W094/10202)、KRN-951、3-[5-(甲磺?；咄郊谆?』引哚基]-喹諾酮、AG-13736和AG-13925、吡咯并[2,l-f][l,2,4]三嗪、ZK-304709、Veglin、VMDA-3601、EG-004、CEP-701(US5,621,100)、Cand5(WO04/09769);Erb2酪氨酸激酶抑制劑如帕妥珠單抗(pertuzumab)(WO01/00245)、曲妥珠單抗(trastuzumab)和利妥昔單抗(rituximab);AKT蛋白激酶抑制劑如RX-0201;蛋白激酶C(PKC)抑制劑，如LY-317615(W095/17182)和哌立福新(perifosine)(US2003171303);磷酸肌醇3-激酶(PI3K)抑制劑，包括SF-1126和PI-103、PI-509、Pl-516和PI-540(PIramed生產(chǎn))；Raf/Map/MEK/Ras激酶抑制劑，包括索拉非尼(somfenib)(BAY43-9006)、ARQ-350RP、LErafAON、BMS-354825AMG-548和WO03/82272公開(kāi)的其它物質(zhì)；成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(FGFR)激酶抑制劑；細(xì)胞依賴(lài)性激酶(CDK)抑制劑，包括CYC-202或roscovitine(WO97/20842和WO99/02162);血小板衍生生長(zhǎng)因子受體(PGFR)激酶抑制劑如CHIR-258、3G3mAb、AG-13736、SU-11248和SU6668;以及Bcr-Abl激酶抑制劑和融合蛋白如STI-571或格列衛(wèi)⑧(Gleevec)。5.微激素i與本發(fā)明組合物聯(lián)合用于抗癌治療的雌激素靶向藥物包括選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERM)，包括他莫昔芬(tamoxifen)、托瑞米芬(toremifene)、雷洛昔芬(raloxifene);芳香酶抑制劑，包括八111^(^乂@或阿那曲唑(anastrozole);雌激素受體下調(diào)劑(ERD)，包括Faslodex或氟維司群(fulvestrant)。C.拔潛激蘇與本發(fā)明組合物聯(lián)合用于抗癌治療的雄激素靶向藥物包括氟他胺(flutamide)、比卡魯胺(bicalutamide)、非那雄胺(finasteride)、氨魯米特(aminoglutethamide)、酮康唑和皮質(zhì)類(lèi)固醇。D.真&滯劍效作為抗癌劑與本發(fā)明組合物聯(lián)合用藥的其它抑制劑包括蛋白質(zhì)法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，包括替匹法來(lái)(tipifamib)或R-115777(US2003134846和WO97/21701)、BMS-214662、AZD-3409和FTI-277;拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，包括硫巴妥苯胺(merbarone)和二氟替康(BN-80915);有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白(kinesin)紡錘體蛋白(KSP)抑制劑，包括SB-743921和MKI-833;蛋白酶調(diào)節(jié)劑如硼替佐米(bortezomib)或Velcade②(US5,780,454)、XL-784;和環(huán)加氧酶2(COX-2)抑制劑，包括非固醇抗炎藥I(NSAID)。五.鰣/抓秀作為抗癌劑與本發(fā)明組合物聯(lián)合用藥的具體癌癥化療藥包括阿那曲唑(Arimidex)、比卡魯胺(0&50(16乂@)、硫酸博來(lái)霉素(Blenoxane戀)、白消安(Mylerar^)、白消安注射劑(Busulfex，卡培他濱(Xdoda，N4-戊氧基羰基-5-脫氧-5-氟胞苷、卡鉑(Paraplatir^)、卡莫司汀(BiCNL^)、苯丁酸氮芥(Leukerai^)、順鉬(Platinof)、克拉屈濱(Leustatin"、環(huán)磷酰胺(Cytoxar^或Neosa,)、阿糖胞苷、胞嘧啶阿糖胞苷(Cytosar-lf)、阿糖胞苷脂質(zhì)體注射劑(0印(^丫1@)、達(dá)卡巴嗪(DTIC-Don^)、放線菌素d(放線菌素D、Cosmegan)、鹽酸道諾霉素(Cerubidine)、檸檬酸道諾霉素脂質(zhì)體注射劑(0&1111(^011^*)、地塞米松、多西他賽0^^^*、US2004073044)、鹽酸多柔比星(阿霉素@、Rubex)、依托泊甙(Vepesicf)、磷酸氟達(dá)拉濱(Fludara"、5-氟尿嘧啶(Adrucil、Efudex)、氟他胺(Eulexin⑧)、tezac她ine、吉西他濱(difluorodeoxycitidine)、羥基脲(1^^^*)、黃膽素(Idamycir^)、異環(huán)磷酰胺(1￡乂@)、伊立替康(Camptosa,)、L-天冬酰胺酶(ELSPAR③)、甲酰四氫葉酸鈣、美法侖(Alkerar^)、6-巰基嘌呤(Purinethof)、甲氨蝶呤(Fole,)、米托蒽醌(二羥基蒽醌"、麥羅塔、紫杉醇(泰素^、phoenix(釔90/MX-DTPA)、噴司他丁、具有卡莫司汀植入物的聚苯丙生20(polifeprosan20wHhcarmustineimplant)(Gliadel)、檸檬酸他莫昔芬(Nolvadex⑧)、替尼泊苷(Vumon)、6-硫鳥(niǎo)嘌呤、硫替派、替拉扎明(Tirazo1^)、注射用鹽酸拓?fù)涮婵?Hycamptin)、長(zhǎng)春堿(Velbar^)、長(zhǎng)春新堿(0^0^^)和長(zhǎng)春瑞濱(諾維本@)。尸.箱眾刺與本發(fā)明組合物聯(lián)合用于抗癌治療的烷化劑包括VNP-40101M或氯乙肼脲、奧沙利鉬(US4,169,846、WO03/24978和WO03/04505)、葡磷酰胺、馬磷酰胺、凡畢復(fù)(US5，041,424)、潑尼莫司?。磺鷬W舒凡；白消安；伊洛福芬(acylfulvene);本可麥定；吡唑并吖啶(PD-115934);06-芐基鳥(niǎo)嘌呤；地西他濱(5-氮雜-2-脫氧胞苷)；溴他利新；絲裂霉素C(MitoExtra);TLK-286(Telcyta);替莫唑胺；曲貝替定(US5,478,932);AP-5280(順鉬的鉬酸鹽制劑)；泊非霉素；和clearazide(meclorethamine)。G.齡效與本發(fā)明組合物聯(lián)合用于抗癌治療的螯合劑包括四硫鉬酸酯(WO01/60814);RP-697;嵌合T84.66(cT84.66);釓膦維司(Vasovist⑧)；去鐵胺；和任選與電穿孔(EPT)聯(lián)用的博來(lái)霉素。//.生激應(yīng)^俊像顏'與本發(fā)明組合物聯(lián)合用于抗癌治療的生物應(yīng)答修飾劑如免疫調(diào)節(jié)劑包括星孢素和其大環(huán)類(lèi)似物，包括UCN-Ol、CEP-701和米哚妥林(參見(jiàn)WO02/30941、WO97/07081、WO89/07105、US5,621,100、WO93/07153、WO01/04125、WO02/30941、WO93/08809、WO94/06799、WO00/27422、WO96/13506和WO88/07045);角鯊胺(WO01/79255);DA-9601(WO98/04541和US6,025,387);阿來(lái)組單抗；干擾素(如IFN-a、IFN-p等)；白介素，具體是IL-2或阿地白介素以及IL-I、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-ll、IL-12和具有超過(guò)70。/。天然人序列的氨基酸序列的它們的生物活性變體；六甲蜜胺(Hexaler^);SU101或來(lái)氟米特(WO04/06834和US6,331,555);咪唑并喹啉如瑞喹莫德和咪喹莫特(US4,689,338、5,389,640、5,268,376、4,929,624、5,266,575、5,352,784、5,494,916、5，482，936、5,346,905、5,395,937、5,238,944和5，525,612);和SMIP，包括B引哚、蒽醌、縮氨基硫脲和色胺酮(WO04/87153、WO04/64759和WO04/60308)。與本發(fā)明組合物聯(lián)合用于抗癌治療的抗癌疫苗包括Avicine(TetrahedronLetters26，19742269-70);oregovomab(OvaRex);Theratope(STn-KLH);黑色素瘤疫苗；GI-4000系列(GI-4014、GI-4015和GI-4016)，它們針對(duì)Ras蛋白中的五種突變；GlioVax-l;MelaVax;Advexh^或INGN-201(WO95/12660);Sig/E7/LAMP-1，其編碼HPV-16E7;MAGE-3疫苗或M3TK(WO94/05304);HER-2VAX;ACTIVE,其刺激腫瘤特異性T細(xì)胞；GM-CSF癌癥疫苗；和基于單核細(xì)胞增生李斯特菌(i:/Wen'flwo"oc;^oge"e5)的疫苗。丄0抓.與本發(fā)明組合物聯(lián)用的抗癌劑也包括反義組合物，如AEG-35156(GEM-640);AP-12009和AP-11014(TGF-卩2-特異性反義寡核苷酸)；AVI-4126;AVI-4557;AVI-4472;oblimersen(Genasense);JFS2;aprinocarsen(WO97/29780);GTI-2040(R2核糖核苷酸還原酶mRNA反義寡核苷酸)(WO98/05769);GTI-2501(WO98/05769);脂質(zhì)體封裝的c-Raf反義寡脫氧核苷酸(LErafAON)(WO98/43095);和Sirna-027(耙向VEGFR-1mRNA的基于RNAi的治療劑)。一種優(yōu)選的IL-2化合物是由加州EmeryvilIe的ChironCorporation生產(chǎn)的"阿地白介素"或"Proleukin"。這種制劑中的IL-2是重組產(chǎn)生的未糖基化的人IL-2突變蛋白，它與天然人IL-2氨基酸序列的不同之處在于消除了第一個(gè)丙氨酸殘基，位置125上的半胱氨酸殘基被絲氨酸殘基取代(稱(chēng)為脫丙氨酰-l、絲氨酸-125人白介素-2)。可以在大腸桿菌(Eco")中表達(dá)這種IL-2突變蛋白，然后用滲濾和陽(yáng)離子交換層析純化，如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4，931,543所述。在體外將阿地白介素與天然(Jurkat)IL-2相比。沒(méi)有觀察到顯著性差異，IV給藥后阿地白介素和天然(Jurkat)IL-2在小鼠中對(duì)溶細(xì)胞性細(xì)胞誘導(dǎo)作用和血清半衰期相等；但阿地白介素所含IL-2形式有有益屬性，因此提到"阿地白介素"僅包括該組合物，不包括IL-2蛋白的所有可能形式。1983年，在開(kāi)發(fā)Cetus淋巴細(xì)胞增殖生物試驗(yàn)時(shí)，沒(méi)有可用的正式IL-2參照制劑。將此制劑的一個(gè)Cetus單位定義為在孵育24小時(shí)后誘導(dǎo)IL-2依賴(lài)性小鼠T細(xì)胞摻入其最高水平500%的含氚胸苷的1mL中的IL-2的量。含有IL-2的產(chǎn)物被賦予具體活性3x1()6Cetus單位/mg。1988年，作為WHO在英國(guó)的生物標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室的NationalInstituteofBiologicalStandardsandControls(NIBSC)建立了IL-2國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)。也在1988年，改變了Cetus淋巴細(xì)胞增殖生物試驗(yàn)的測(cè)定步驟。在新生物試驗(yàn)方法中根據(jù)IL-2國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)校準(zhǔn)了Cetus的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)。建立以下校正因子國(guó)際單位Cetus單位x6根據(jù)lmg阿地白介素的標(biāo)稱(chēng)特定活性為18x1(^國(guó)際單位(18MIU)，將阿地白介素量表示為質(zhì)量單位。該方案引入了國(guó)際單位。用于本發(fā)明方法的藥物組合物可含有IL-2的生物活性變體。這種變體應(yīng)該保持天然多肽的所需生物學(xué)活性，以使含有該變異多肽的藥物組合物與含有天然多肽的藥物組合物給予對(duì)象時(shí)療效相同。就是說(shuō)，該變異多肽將以類(lèi)似于對(duì)天然多肽所觀察到的方式用作該藥物組合物的治療活性組分。本領(lǐng)域已知確定變異多肽是否保持所需生物學(xué)活性、從而用作該藥物組合物的治療活性組分的方法?？捎锰貏e為測(cè)定天然多肽或蛋白的活性設(shè)計(jì)的試驗(yàn)，包括本發(fā)明所述試驗(yàn)測(cè)定生物學(xué)活性。此外，可測(cè)試用生物活性天然多肽產(chǎn)生的抗體結(jié)合該變異多肽的能力，其中有效結(jié)合說(shuō)明該多肽的構(gòu)象類(lèi)似于天然多肽。出于本發(fā)明目的，感興趣的IL-2生物學(xué)活性是IL-2激活和/或擴(kuò)展天然殺傷(NK)細(xì)胞以介導(dǎo)淋巴因子活化的殺傷(LAK)活性和抗體依賴(lài)性細(xì)胞毒作用(ADCC)的能力。因此，用于本發(fā)明方法的IL-2變體(例如人IL-2的突變蛋白)將激活和/或擴(kuò)展NK細(xì)胞以介導(dǎo)LAK活性和ADCC。本領(lǐng)域熟知確定IL-2激活或擴(kuò)展NK細(xì)胞和介導(dǎo)LAC或ADCC活性的試驗(yàn)。天然或天然產(chǎn)生的IL-2的合適的生物活性變體可以是該多肽的片段、類(lèi)似物和衍生物。"片段"指僅由完整多肽序列和結(jié)構(gòu)的一部分組成的多肽，可以是C末端缺失或N末端缺失的天然多肽。"類(lèi)似物"指天然多肽或天然多肽的片段的類(lèi)似物，其中該類(lèi)似物含有具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代、插入或缺失的天然多肽序列和結(jié)構(gòu)。術(shù)語(yǔ)類(lèi)似物也包括本文所述"突變蛋白"和含有一種或多種類(lèi)肽(肽模擬物)的肽(參見(jiàn)國(guó)際公開(kāi)號(hào)WO91/04282)。"衍生物"指經(jīng)過(guò)任何合適修飾的感興趣天然多肽、天然多肽的片段或其各自的類(lèi)似物，合適修飾如糖基化、磷酸化、聚合物偶聯(lián)(如與聚乙二醇偶聯(lián))或添加其它外來(lái)部分，只要保持天然多肽的所需生物學(xué)活性。本領(lǐng)域通常知道制備多肽片段、類(lèi)似物和衍生物的方法。例如，可通過(guò)在編碼感興趣天然多肽的克隆DNA序列中進(jìn)行突變制備多肽的氨基酸序列變體。誘變和改變核苷酸序列的方法是本領(lǐng)域熟知的。參見(jiàn)例如，Walker和Gaastra編，(1983)《分子生物學(xué)技術(shù)》(TechniquesinMolecularBiology)(MacMilIanPublishingCompany,紐約)；Kunkel(1985)/Voc,Ato/.Sd.82:488-492;Kunkel等。(1987)M"to^五wzymoA154:367-382;Sambrook等(1989)《分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)》(MolecularCloning:ALaboratoryManual)(ColdSpringHarborLaboratoryPress,Plainview，紐約)；美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,873,192;和其中引用的參考文獻(xiàn)；將其納入本文作參考。不影響感興趣多肽的生物學(xué)活性的合適氨基酸取代的指南可參見(jiàn)Dayhof傅(1978)，AtlasofProteinSequenceandStructureC/Va〖/.5/ome<i.Foz^m.，華盛頓特區(qū))的模型，納入本文作參考?？蓛?yōu)選保守取代如用特性相似的一個(gè)氨基酸交換另一個(gè)氨基酸。保守取代的例子包括但不限于Gly:Ala、VaI:ILe:Leu、Asp:Glu、Lys:Arg、Asn:Gln和Phe:Trp:Tyr。在構(gòu)建感興趣IL-2多肽的變體的過(guò)程中，進(jìn)行修飾時(shí)應(yīng)使變體繼續(xù)具有所需活性。在編碼變異多肽的DNA中進(jìn)行的任何突變不得將該序列置于閱讀框之外，優(yōu)選不產(chǎn)生可產(chǎn)生二級(jí)mRNA結(jié)構(gòu)的互補(bǔ)區(qū)。IL-2的生物活性變體與用作比較基礎(chǔ)的參比多肽分子的氨基酸序列相同性通常為至少70%，優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選約90%-95%或更高，最優(yōu)選約98%或更高。因此，當(dāng)IL-2參比分子是人IL-2時(shí)，其生物活性變體與人IL-2的氨基酸序列的序列相同性為至少70。/。，優(yōu)選至少80%，更優(yōu)選約90%-95%或更高，最優(yōu)選約98%或更高。與感興趣天然多肽相比，該天然多肽的生物活性變體具有的不同氨基酸殘基少至1-15個(gè)氨基酸，少至1-10個(gè)如6-10個(gè)，少至5個(gè)，少至4、3、2或1個(gè)氨基酸殘基。"序列相同性"指比對(duì)變體的氨基酸序列的特定連續(xù)節(jié)段與參比分子的氨基酸序列對(duì)齊排列并作比較時(shí)，在變異多肽和用作參比的多肽分子中發(fā)現(xiàn)的相同的氨基酸殘基。兩個(gè)氨基酸序列之間的序列相同性百分?jǐn)?shù)的計(jì)算方法如下確定兩個(gè)序列中氨基酸殘基相同的位置的數(shù)量以產(chǎn)生匹配位置數(shù)，將匹配位置數(shù)除以與參比分子進(jìn)行比較的節(jié)段的總位置數(shù)，將該結(jié)果乘以100得到序列相同性百分?jǐn)?shù)。因此，可用數(shù)學(xué)算法測(cè)定任意兩個(gè)序列之間的相同性百分?jǐn)?shù)。優(yōu)選地，天然或非天然產(chǎn)生的IL-2變體的氨基酸序列與參比分子如天然人IL-2或參比IL-2分子的較短部分的氨基酸序列至少70%，優(yōu)選80%，更優(yōu)選85%、90%、91%、92%、93%、94%或95%相同。更優(yōu)選地，這些分子96%、97%、98%或99%相同。采用使用仿射缺口檢索的Smkh-Waterman同源檢索算法測(cè)定序列相同性百分?jǐn)?shù)，其中缺口開(kāi)放罰分12，缺口延伸罰分2，BLOSUM矩陣62。Smith-Waterman同源檢索算法參見(jiàn)Smith和Waterman,/Wv.4^/.Ma仇(1981)2:482-489。變體的差異可以是(例如)少至1-10個(gè)氨基酸殘基如6-10個(gè)，少至5個(gè)，少至4、3、2或1個(gè)氨基酸殘基。就兩個(gè)氨基酸序列的最優(yōu)比對(duì)而言，變異氨基酸序列的連續(xù)節(jié)段相對(duì)于參比氨基酸序列可以具有加入的氨基酸殘基或缺失的氨基酸殘基。用于與參比氨基酸序列作比較的連續(xù)節(jié)段包括至少二十(20)個(gè)連續(xù)氨基酸殘基，可以是30、40、50或更多個(gè)氨基酸殘基。可校正與保守性殘基取代或缺口相關(guān)的序列相同性(參見(jiàn)Smkh-Waterman同源性檢索算法)。具有IL-2活性的多肽的準(zhǔn)確化學(xué)結(jié)構(gòu)取決于許多因素。由于該分子中存在可離子化的氨基和羧基，所以可以獲得酸鹽或堿鹽、或中性形式的具體多肽。本文所用具有IL-2活性的多肽的定義包括放入合適環(huán)境條件中時(shí)保持其生物學(xué)活性的所有這些制劑。而且，通過(guò)用糖部分衍生(糖基化)或其它補(bǔ)充分子如脂質(zhì)、磷酸、乙?；妊苌稍黾釉摱嚯牡囊患?jí)氨基酸序列。也可通過(guò)與糖偶聯(lián)增加。這種增加的某些方面是通過(guò)生產(chǎn)宿主的翻譯后加工系統(tǒng)完成的；可在體外引入其它這種修飾。在任何情況下，本文所用IL-2多肽的定義都包括這種修飾，只要沒(méi)有破壞該多肽的IL-2活性。預(yù)計(jì)在不同試驗(yàn)中這種修飾可能定量或定性地影響活性，即提高或降低該多肽的活性。而且，可通過(guò)氧化、還原或其它衍生化方法修飾鏈中的單個(gè)氨基酸殘基，可切割該多肽以獲得保持活性的片段。不破壞活性的這種改變不會(huì)使該多肽序列被本文所用的感興趣IL-2多肽的定義排除。本領(lǐng)域提供了大量關(guān)于制備和使用多肽變體的指南。在制備IL-2變體的過(guò)程中，本領(lǐng)域技術(shù)人員不難確定對(duì)天然蛋白的核苷酸或氨基酸序列進(jìn)行何種修飾將產(chǎn)生適合用作本發(fā)明方法所用的藥物組合物中的治療活性組分的變體。用于本發(fā)明方法的IL-2或其變體可來(lái)自任何來(lái)源，但優(yōu)選為重組IL-2。"重組IL-2"指與天然序列的IL-2生物學(xué)活性相當(dāng)并通過(guò)重組DNA技術(shù)制備的白介素-2或者突變的IL-2(如Wang等(1984)Science224:1431-1433所述)，所述重組DNA技術(shù)如Taniguchi等(1983)Atowe302:305-310和Devos(1983)A^wc/e/c^c/c^ie化c^c/z11:4307-4323所述。通常，克隆IL-2的編碼基因，然后在轉(zhuǎn)化生物體、優(yōu)選微生物、最優(yōu)選大腸桿菌中表達(dá)，如本文所述。宿主生物在表達(dá)條件下表達(dá)該外來(lái)基因，以產(chǎn)生IL-2。也可在真核細(xì)胞，如酵母或人細(xì)胞中制備合成的重組IL-2。培養(yǎng)、收獲、裂解或提取細(xì)胞中的IL-2的方法主要如美國(guó)專(zhuān)利4,604,377;4,738,927;4,656,132;4,569，790;4,748,234;4,530,787;4,572,798;4,748,234;禾口4,931,543所述。變異IL-2蛋白的例子參見(jiàn)歐洲專(zhuān)利(EP)公開(kāi)號(hào)EP136,489(其公開(kāi)了天然產(chǎn)生IL-2的氨基酸序列中發(fā)生的一個(gè)或多個(gè)以下改變Asn26至Gln26;Trpl21至Phe121;Cys58至Ser58或Ala58、Cysl05至Serl05或Alal05;Cysl25至Serl25或Alal25;缺失Argl20之后的所有殘基；和其Met-l形式)；以及1983年10月13日提交的歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?3306221.9所述的重組IL-2突變蛋白(1984年5月30日公開(kāi)，公開(kāi)號(hào)為EP109,748)，其等效于比利時(shí)專(zhuān)利號(hào)893,016和共有的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,518,584(它公開(kāi)了位置125(按照天然人IL-2編號(hào))上的半胱氨酸缺失或被中性氨基酸取代的重組人IL-2突變蛋白；丙氨酰-serl25-IL-2;和脫丙氨酰-serl25-IL-2)。也參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,752,585(它公開(kāi)了以下變異IL-2蛋白:alal04serl25IL-2、alal04IL-2、alal04alal25IL-2、val104serl25IL-2、vall04IL-2、val104alal25IL-2、des-alalalal04serl25IL-2、des-alalalal04IL-2、10des-alalalal04alal25IL-2、des-alalval104serl25IL-2、des-alalval104IL-2、des-alalval104alal25IL-2、des-alaldes-pro2alal04serl25IL-2、des-alaldes陽(yáng)pro2alal04IL-2、des-alaldes-pro2alal04aial25IL-2、des-aaldes-pro2va104serl25IL-2、des-alaldespro2val104IL-2、des-alaldes-pro2va隨alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3alal04serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3alal04IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3alal0415alal25IL-2、des-alaldes-pro2des隱thr3val104serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3val104IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3val104alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3desser4alal04serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4alal04IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4alal04alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4val104serl25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4val104IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4val10420alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04serl25IL-2、des-alaldespro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5alal04alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des隱ser4des-ser5val104serl25IL-2、desalaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5val104IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5val104alal25IL-2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des隱ser5des國(guó)ser6alal0425alal25IL-2、des-alaldes-pro2des陽(yáng)thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04IL-2、des-alaldespro2des-thr3des-ser4des國(guó)ser5des陽(yáng)ser6alal04serl25IL-2、des-alaldes-pro2des國(guó)thr3desser4des-ser5des-ser6val104serl25IL匿2、des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5desser6val104IL-2禾卩des-alaldes陽(yáng)pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6val104alal25IL-2)和美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,931，543(它公開(kāi)了用于本文所述實(shí)施例的IL-2突變蛋白脫丙氨酰-l、絲氨酸30125人IL-2，以及其它IL-2突變蛋白)。也參見(jiàn)歐洲專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)EP200，280(1986年12月10日公開(kāi))，其公開(kāi)了位置104上的甲硫氨酸被保守性氨基酸取代的重組IL-2突變蛋白。例子包括以下突變蛋白ser4des-ser5alal04IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des隱ser4des-ser5alal04alal25IL-2;des-alaldes陽(yáng)pro2des-thr3des-ser4des-ser5glul04serl25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3desser4des-ser5glul04IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des誦ser5glul04alal25IL-2;des-alaldes-pro2des陽(yáng)thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04alal25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6alal04IL曙2;des-alaldes陽(yáng)pro2des-thr3des-ser4des-ser55des-ser6alal04serl25IL-2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6glul04serl25IL陽(yáng)2;des-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6glul04IL-2;禾Qdes-alaldes-pro2des-thr3des-ser4des-ser5des-ser6glul04alal25IL-2。也參見(jiàn)歐洲專(zhuān)利公開(kāi)號(hào)EP118,617和美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，700,913，它們公開(kāi)了用丙氨酸代替天然IL-2的甲硫氨酸作為N-末端氨基酸的未糖基化的人IL-2變體；缺失了第一個(gè)甲硫氨酸使得脯氨酸成為N末端氨基酸的未糖基化的人IL-2;和丙氨酸插入N-末端甲硫氨酸和脯氨酸之間的未糖基化的人IL-2。其它IL-2突變蛋白包括WO99/60128所述的突變蛋白(用組氨酸或異亮氨酸取代位置20上的天冬氨酸，用精氨酸、甘氨酸或異亮氨酸取代位置88上的天冬酰胺，或者用亮氨酸或谷氨酸取代位置126上的谷氨酰胺)，據(jù)報(bào)道，這些突變蛋白對(duì)表達(dá)T細(xì)胞受體的細(xì)胞表達(dá)的高親和IL-2受體有選擇性活性(優(yōu)先于NK細(xì)胞)，且IL-2毒性降低；美國(guó)專(zhuān)利5,229,109公開(kāi)的突變蛋白(用丙氨酸取代位置38上的精氨酸，或者用賴(lài)氨酸取代位置42上的苯丙氨酸)，與天然IL-2相比，它對(duì)高親和IL-2受體的結(jié)合力降低，但仍然能夠刺激LAK細(xì)胞；國(guó)際公開(kāi)號(hào)WO00/58456公開(kāi)的突變蛋白(改變或缺失了天然IL-2中天然產(chǎn)生的(x)D(y)序列，其中D是天冬氨酸，(x)是亮氨酸、異亮氨酸、甘氨酸或纈氨酸，(y)是纈氨酸、亮氨酸或絲氨酸)，聲稱(chēng)能減輕血管泄漏綜合征；國(guó)際公開(kāi)號(hào)WO00/04048公開(kāi)的IL-2pl-30肽(對(duì)應(yīng)于IL-2的前30個(gè)氨基酸，其含有IL-2的整個(gè)a-螺旋A，并與IL-2受體的p鏈相互作用)，據(jù)報(bào)道，它能刺激NK細(xì)胞并誘導(dǎo)LAK細(xì)胞；和WO00/04048公開(kāi)的IL-2pl-30肽的突變形式(用賴(lài)氨酸取代位置20上的天冬氨酸)，據(jù)報(bào)道，它不能誘導(dǎo)血管出血，但仍然能夠產(chǎn)生LAK細(xì)胞。此外，可用聚乙二醇修飾IL-2，以提高溶解度和改變藥代動(dòng)力學(xué)概況(參見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,766，106)。本文所用術(shù)語(yǔ)IL-2也包括IL-2融合于第二種蛋白質(zhì)或共價(jià)偶聯(lián)于聚脯氨酸或水溶性聚合物以減少給藥頻率或提高IL-2耐受性的IL-2融合物或偶聯(lián)物。例如，可用本領(lǐng)域已知方法將IL-2(或本文所述的它的變體)融合于人白蛋白或白蛋白片段(參見(jiàn)WO01/79258)。或者，采用本領(lǐng)域己知方法(參見(jiàn)例如美國(guó)專(zhuān)利4,766,106、5,206,344,和4，894,226)可將IL-2共價(jià)偶聯(lián)于聚脯氨酸或聚乙二醇均聚物和聚氧乙烯化多元醇，其中該均聚物未取代或用烷基在一端取代，該多元醇未取代。含有IL-2作為治療活性成分的任何藥物組合物均可用于本發(fā)明方法。本領(lǐng)域已知這種藥物組合物，包括但不限于美國(guó)專(zhuān)利4,745,180;4,766,106;4,816,440;4,894,226;4，931,544和5,078,997所述的藥物組合物。因此，本領(lǐng)域己知的含有IL-2或其變體的液體、凍干或噴霧干燥組合物可制備成水性或非水性的溶液或懸液，隨后按照本發(fā)明方法給予對(duì)象。這些組合物各自含有IL-2或其變體作為治療或預(yù)防活性成分。"治療或預(yù)防活性成分"指將所述IL-2或其變體特別摻入該組合物，以在該藥物組合物給予對(duì)象時(shí)對(duì)于該對(duì)象的疾病或病癥產(chǎn)生治療、預(yù)防或診斷等所需的治療或預(yù)防反應(yīng)。優(yōu)選地，該藥物組合物含有合適的穩(wěn)定劑、填充劑或穩(wěn)定劑和填充劑以最大程度減少在制備和儲(chǔ)存過(guò)程中損失蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和生物學(xué)活性帶來(lái)的問(wèn)題。在本發(fā)明優(yōu)選實(shí)施方式中，用于本發(fā)明方法的含有IL-2的藥物組合物是含有穩(wěn)定的單體IL-2或其變體的組合物、含有多聚IL-2或其變體的組合物以及含有穩(wěn)定的凍干或噴霧干燥IL-2或其變體的組合物。題為"含有穩(wěn)定的液體多肽的藥物組合物"的國(guó)際公開(kāi)WO01/24814公開(kāi)了含有穩(wěn)定的單體IL-2或其變體的藥物組合物。"單體"IL-2指在本文所述的藥物組合物中該蛋白分子主要以單體形式、而非聚集形式存在。因此，不存在共價(jià)或疏水的IL-2低聚物或聚集體。簡(jiǎn)要說(shuō)，這些液體組合物中的IL-2是與足以減少儲(chǔ)存期間的IL-2聚集體形成的氨基酸基料量配制的。氨基酸基料是氨基酸或氨基酸組合，其中任何給定氨基酸以其游離堿形式或鹽形式存在。優(yōu)選的氨基酸選自精氨酸、賴(lài)氨酸、天冬氨酸或谷氨酸。這些組合物還含有緩沖劑，以將該液體組合物的pH維持在IL-2穩(wěn)定性可接受的范圍內(nèi)，其中該緩沖劑是基本不含其鹽形式的酸、鹽形式的酸或酸和其鹽形式的混合物。優(yōu)選地，所述酸選自琥珀酸、檸檬酸、磷酸和谷氨酸。在本文中將這種組合物稱(chēng)為穩(wěn)定的單體IL-2藥物組合物。這些組合物中的氨基酸基料用于穩(wěn)定IL-2，使其不在液體藥物組合物的儲(chǔ)存期間形成聚集體，而將基本不含其鹽形式的酸、鹽形式的酸或酸和其鹽形式的混合物用作緩沖劑產(chǎn)生其滲透壓接近等滲的液體組合物。該液體藥物組合物還可摻入其它的穩(wěn)定劑，更具體是甲硫氨酸、非離子表面活性劑如聚山梨醇酯80和EDTA，以進(jìn)一步提高該多肽的穩(wěn)定性。據(jù)稱(chēng)，這種液體藥物組合物是穩(wěn)定的，因?yàn)榧尤氚被峄弦约盎静缓潲}形式的酸、鹽形式的酸或酸和其鹽形式的混合物導(dǎo)致相對(duì)于在沒(méi)有這兩種組分組合的情況下配制的液體藥物組合物，這種組合物的儲(chǔ)存穩(wěn)定性升高。含有穩(wěn)定的單體IL-2的這些液體藥物組合物可以水性液體形式使用，或以冷凍狀態(tài)儲(chǔ)存待用，或以干燥形式儲(chǔ)存，以備按照本發(fā)明方法給予對(duì)象時(shí)重建成合適的液體形式或其它形式。"干燥形式"指通過(guò)冷凍干燥(即凍干；參見(jiàn)例如，Williams和Polli(1984)J尸a""fera/Sc/.Tec/z"o/.38:4859)、噴霧干燥(參見(jiàn)Masters(1991)，《噴霧干燥手冊(cè)》(Spray-DryingHandbook)(Sth編；LongmanScientificandTechnical,Essez，英國(guó))，第491-676頁(yè)；Broadhead等(1992)Z)n^Z)eve/,/"dP/wrm.18:1169-1206;和Mumenthaler等(1994)i仏11:12-20)或空氣干燥(Carpenter和Crowe(1988)Cryobiology25:459-470;和Roser(1991)所o—4:47-53)使液體藥物組合物或制劑干燥。(1993)Drugs46(3):446-514所述制劑。這些制劑包括重組IL-2產(chǎn)物，其中重組IL-2突變蛋白Teceleukin(在氨基末端加入甲硫氨酸殘基的未糖基化的人IL-2)與0.25y。用等滲鹽水重建的凍干粉末形式的人血清白蛋白配制在一起，和配制重組IL-2突變蛋白Bioleukin(在氨基末端加入甲硫氨酸殘基、用丙氨酸取代人IL-2的位置125上的半胱氨酸殘基的人IL-2)使得0.1-1.0mg/mlIL-2突變蛋白與酸混合，其中該制劑的pH為3.0-4.0，宜不含緩沖液，電導(dǎo)率小于1000mmhos/cm(宜小于1500mmhos/cm)。參見(jiàn)EP373,679;Xhang等(1996)尸/za，"ceMA"13(4):643-644和Prestrelski等(1995)尸/w廠mflc麼12(9):1250-1258。共有美國(guó)專(zhuān)利4，604，377中公開(kāi)了含有多聚IL-2的藥物組合物的例子。"多聚"指蛋白質(zhì)分子以微聚集形式存在于藥物組合物中，平均分子結(jié)合度為10-50個(gè)分子。這些多聚體為松散結(jié)合的、物理結(jié)合的IL-2分子?？梢陨唐访鸓roleukin"L-2(ChironCorporation,Emeryville,力n州)購(gòu)得這些組合物的凍干形式。此處公開(kāi)的凍干制劑含有選擇性氧化的微生物產(chǎn)生的重組IL-2，其中重組IL-2與提供填充料的水溶性載體如甘露醇和能保證重組IL-2在水中溶解性的足量十二烷基硫酸鈉混合。這些組合物適用于重建成用于胃腸道外給藥的水性注射劑，它們穩(wěn)定且在人患者中耐受良好。重建時(shí)，IL-2保持了多聚狀態(tài)。本發(fā)明方法包括這種含有多聚IL-2的凍干或液體組合物。在本文中將這種組合物稱(chēng)為多聚IL-2藥物組合物。本發(fā)明方法也可采用含有IL-2的穩(wěn)定的凍干或噴霧干燥藥物組合物，它可重建成適合按照本發(fā)明方法給藥的液體或其它適當(dāng)形式。題為"MethodsforPulmonaryDeliveryofInterleukin-2"(經(jīng)肺遞送白介素-2的方法)的國(guó)際公開(kāi)號(hào)WO01/49274公開(kāi)了這種藥物組合物。這些組合物還可含有至少一種填充劑、至少一種其量足以在干燥過(guò)程中穩(wěn)定蛋白質(zhì)的物質(zhì)或二者皆含。"穩(wěn)定"指凍干或噴霧干燥獲得該組合物的固體或干燥粉末形式后，IL-2蛋白或其變體保持了其單體或多聚體形式以及質(zhì)量、純度和效力的其它關(guān)鍵特性。在這些組合物中，用作填充劑的優(yōu)選載體材料包括甘氨酸、甘露醇、丙氨酸、纈氨酸或其任意組合，最優(yōu)選甘氨酸。在制劑中所述填充劑的含量范圍是0。/。-約l(^/。(w/v)，取決于所用填充劑。用作穩(wěn)定劑的優(yōu)選載體材料包括任何糖和糖醇，或任何氨基酸。優(yōu)選糖包括蔗糖、海藻糖、棉子糖、水蘇糖、山梨糖醇、葡萄糖、乳糖、右旋糖或其任意組合，優(yōu)選蔗糖。所述穩(wěn)定劑是糖時(shí)，其含量范圍約為0-9.0G/o(w/v)，優(yōu)選約0.5-5.0%，更優(yōu)選約1.0-3.0%，最優(yōu)選約1.0%。所述穩(wěn)定劑是氨基酸時(shí)，其含量范圍約為0-1.0。/。(w/v)，優(yōu)選約0.3-0.7%，最優(yōu)選約0.5%。這些穩(wěn)定的凍干或噴霧干燥的組合物可任選地含有甲硫氨酸、乙二胺四乙酸(EDTA)或其鹽之一如EDTA二鈉或其它螯合劑，它能保護(hù)IL-2或其變體免受甲硫氨酸氧化。美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)09/677,643中描述了以這種方式使用這些物質(zhì)，納入本文作參考?？捎镁彌_劑配制穩(wěn)定的凍干或噴霧干燥組合物，在液相中時(shí)，如配制過(guò)程中或干燥形式的組合物重建后，所述緩沖劑能將藥物組合物的pH維持在可接受的范圍內(nèi)，優(yōu)選約pH4.0-pH8.5。選擇緩沖液，以使它們與干燥過(guò)程相容，并且在加工期間和儲(chǔ)存期間不影響該蛋白的質(zhì)量、純度、效力和穩(wěn)定性。上述穩(wěn)定的單體、多聚體和穩(wěn)定的凍干或噴霧干燥IL-2藥物組合物代表了適用于本發(fā)明方法的組合物。然而，本發(fā)明方法包括含有IL-2化合物作為治療活性成分的任何藥物組合物。本發(fā)明也提供了含有本發(fā)明組合物的至少一種組合并附有使用說(shuō)明書(shū)的藥盒或包裝。例如，在各藥物本身作為單個(gè)或單獨(dú)劑型給藥的情況下，該藥盒包括各個(gè)藥物，以及使用說(shuō)明書(shū)。可以適合給藥的任何方式包裝藥物組分，只要該包裝與給藥說(shuō)明書(shū)一起考慮時(shí)能明確表明各藥物組分給藥的方式。或者，可將該組合的各個(gè)藥物組分組合在一種給藥劑型如單一組合物中。例如，對(duì)于含有rlL-2和抗血管新生劑的說(shuō)明性藥盒，可通過(guò)任何合適的時(shí)間周期如按天來(lái)編制該藥盒。例如，對(duì)于第1天，代表性藥盒可含有單位劑量的rlL-2和單位劑量的抗血管新生劑。如果每種藥物每天給予兩次，那么該藥盒可含有(對(duì)應(yīng)于第l天)各自兩排rlL-2和抗血管新生劑的單位劑量形式，附有給藥時(shí)間說(shuō)明書(shū)?；蛘?，如果一種或多種藥物與該組合其它藥物成員的給藥時(shí)機(jī)和給藥量不同，那么應(yīng)該在包裝和說(shuō)明書(shū)中有所反應(yīng)。例如，如果rlL-2每天給予兩次，抗血管新生劑每天僅給予一次，第l天的示范性包裝可以是rlL-2的單位劑量形式對(duì)應(yīng)為"第1天，劑量l"，抗血管新生劑的劑量形式對(duì)應(yīng)于"第1天，劑量2"。如上所述，不難想像本發(fā)明的各種實(shí)施方式，當(dāng)然這些實(shí)施方式取決于用于治療的藥物的特定組合、它們的相應(yīng)劑型、推薦劑量、適應(yīng)的患者群等。包裝可以是通常用于藥物包裝的任何形式，并可利用多種特征如不同顏色、包裝材料、抗干擾包裝、起泡包裝、干燥劑等。實(shí)施例下面是實(shí)施本發(fā)明的特定實(shí)施方式的實(shí)施例。提供這些實(shí)施例僅為說(shuō)明性目的，不旨在以任何方式限制本發(fā)明范圍。我們努力保證所用數(shù)字(如量、溫度等)的準(zhǔn)確性，但當(dāng)然應(yīng)該允許一些實(shí)驗(yàn)誤差和偏差。實(shí)施例l與rlL-2共同給藥的組合物A.化合物表l:喹唑啉實(shí)施例<table>tableseeoriginaldocumentpage48</column></row><table>表2:二氫剛哚酮化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>表5:異二氫吲哚化合物<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>方案l:NHRR'TEA方案l描述了合成多種取代的喹唑啉化合物的模塊化方法。AG指活化基團(tuán)如鹵素、三氟甲磺酸酯或酮，其中可存在至多4個(gè)AG基團(tuán)。由于第三步所示的4-氯位置的活性高于芐基環(huán)上的位置5-8，NHRR'的取代不大可能同時(shí)取代位置5-8中任一位置的AG。隨后，最后一個(gè)步驟中用R"取代AG基團(tuán)可以在弱-中等強(qiáng)度的堿的存在下進(jìn)行?；蛘撸尚揎桝G基團(tuán)以產(chǎn)生所需產(chǎn)物，如可用Fe和AcOH的EtOH和H20溶液還原N02基團(tuán)產(chǎn)生氨基取代基，它可被進(jìn)一步取代，例如通過(guò)多聚甲醛的還原性胺化取代。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)明白，可購(gòu)得或不難用已知方法合成多種官能化的2-氨基苯甲酰胺原料。隨后，原料中的AG基團(tuán)可以是最終產(chǎn)物中需要的取代基(如R")，如垸氧基或取代垸基。而且，可獲得許多官能化的2-硝基苯甲酰胺原料，它們不難在還原劑如H2/Pd/C的EtOH溶液存在下轉(zhuǎn)化為2-氨基苯甲酰胺原料。制備本發(fā)明喹唑啉的其它方法參見(jiàn)WO04/24703、WO01/32651、US5,457,105、US5,616,582、US5,770,599、WO02/16351、US6,727,256、WO02/02552、US5,747,498和WO96/30347。二氫吲哚酮方案2a:以單罐方法的形式進(jìn)行方案2a，步驟a中的試劑是NH40H、CuCl的H20溶液。然后在步驟b中加入鹽酸水溶液。R2-Rs的定義如本文所述。方案2b:在方案2b中，在哌啶的存在下在EtOH中攪拌試劑(a)，以提供終產(chǎn)物。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所知，可加熱該反應(yīng)，以提高產(chǎn)率，這取決于具體原料的反應(yīng)性。方案2C:在方案2c中，在NaOBu-t的存在下在EtOH中回流試劑(a)，以提供終產(chǎn)物。方案2所示的R9是如本文所述的H、-OH、-CN、垸基、芳基、雜環(huán)基、垸氧基或-NRaRb?？紤]到上述結(jié)構(gòu)可取代式II以便在R9上取代，所以所有其它取代基的定義如本文所述。方案2d(合成化合物6):<formula>formulaseeoriginaldocumentpage53</formula>7伐酞嗪如化合物10中所述的取代酞嗪的制備如下所述，參見(jiàn)US6,258,812，其也包括可能有助于合成本發(fā)明化合物的其它反應(yīng)方案。方案3a:二鹽酸l-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪將15.22g(59.52mmol)l-氯-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪(其制備參見(jiàn)1959年7月23日公開(kāi)的德國(guó)專(zhuān)利(Auslegeschriftno)l061788])、7.73g(60.59mmol)4-氯苯胺和200ml1-丁醇的混合物加熱回流2小時(shí)。然后濾出混合物緩慢冷卻至5'C時(shí)獲得的結(jié)晶。用l-丁醇和醚洗滌。將濾渣溶解于約200ml熱甲醇中，用0.75g活性碳處理該溶液，并通過(guò)HyfioSuperCel過(guò)濾，用7ml3N甲醇HCl將濾出液的pH調(diào)整到約2.5。將濾出液蒸發(fā)至約為原始體積的一半，加入醚直到出現(xiàn)輕微混濁；然后冷卻導(dǎo)致結(jié)晶沉淀。濾出結(jié)晶，用甲醇/醚(l:2)的混合物以及醚洗滌，在HV下11(TC干燥8小時(shí)，在2(TC和常壓下平衡72小時(shí)。依此方式，獲得水含量為8.6。/。的標(biāo)題化合物；m.p.>270°C;'HNMR(DMSO-d6)11.05-12.20(br)，9.18-9.23(m，IH),8.88(d，2H)，8.35-8.40(m，1H)，8.18-8.29(m，2H)，8.02(d，2H)，7.73(d,2H)，7.61(d，2H)，5.02(s，2H);ESI-MS:(M+H)+=347。方案3b:鹽酸l-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪將0.972g(3.8mmol)l-氯-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪、0.656g(4mmol)鹽酸4-氯苯胺(ResearchOrganics,Inc.，美國(guó)俄亥俄州克利夫蘭)和20ml乙醇的混合物加熱回流2小時(shí)。在冰浴中冷卻該反應(yīng)混合物，過(guò)濾，用少量乙醇和醚洗滌結(jié)晶。HV下11(TC干燥8小時(shí)和15CTC干燥10小時(shí)后，由于加熱去除HC1而獲得標(biāo)題化合物；m.p.〉27(TC;'HNMR(DMSO-d6)9.80-11.40(br)，8.89-8.94(m，1H)，8.67(d，2H)，8.25-8.30(m，IH)，8.06-8.17(m，2H)，7.87(d，2H)，7.69(d，2H)，7.49(d，2H)，4.81(s，2H);ESI-MS:(M+H)+=347。方案3c:鹽酸l-(4-氯苯胺基)-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪將1.28g(5mmol)l-氯-4-(4-吡啶基甲基)酞嗪、0.67g(5.25mmol)4-氯苯胺和15mll-丁醇的混合物在10CTC加熱0.5小時(shí)，同時(shí)在氮?dú)庀聰嚢?。然后將該混合物冷卻至室溫，過(guò)濾，用l-丁醇和醚洗滌濾出液。為了純化，將該結(jié)晶溶解于40ml熱甲醇中，用活性碳處理該溶液，通過(guò)HyfloSuperCel過(guò)濾，將濾出液蒸發(fā)至約為原始體積的一半，形成結(jié)晶沉淀。冷卻至(TC后，過(guò)濾，用醚洗滌濾渣，在13(TC、HV下干燥8小時(shí)，獲得標(biāo)題化合物；m.p.〉270。C;'HNMR(DMSO-d6)9.80-11.40(br)，8.89-8.94(m，1H)，8.67(d，2H)，8.25-8.30(m，1H)，8.06-8.17(m，2H)，7.87(d，2H)，7.69(d，2H)，7.49(d，2H)，4.81(s，2H);ESI掘(M+H)+=347。實(shí)施例2rlL-2的制備阿地白介素、rIL-2(NSC3773364)(Proleukin,Chiron)的制備將人Jurkat細(xì)胞系的信使RNA用于產(chǎn)生雙鏈cDNA，將其雜交到pBR322質(zhì)粒中。用對(duì)應(yīng)于短IL-2基本序列的^P-標(biāo)記的寡核苷酸探針鑒定含有IL-2基因的克隆。將該基因插入具有方便的限制性位點(diǎn)的pBR322質(zhì)粒的一段區(qū)域中。將合適的啟動(dòng)子和核糖體結(jié)合位點(diǎn)插入IL-2基因之前，得到的表達(dá)克隆編碼修飾的重組rlL-2。通過(guò)克隆IL-2的體外誘變用絲氨酸保守取代位置125上的半胱氨酸。得到的分子在體外生物學(xué)活性上與天然IL-2無(wú)區(qū)別。在發(fā)酵罐中培養(yǎng)攜帶阿地白介素基因的大腸桿菌生產(chǎn)菌株。收獲培養(yǎng)物，提取阿地白介素。進(jìn)行一系列層析步驟以純化阿地白介素。將配方產(chǎn)品的pH調(diào)整到7.2-7.8。Proleukh^的分子量約為15，600道爾頓。通過(guò)氨基酸組成和N末端測(cè)序分析確認(rèn)，該阿地白介素具有預(yù)計(jì)的蛋白序列。重建和稀釋方法Proleukir^是以凍干餅的形式存放在含有1.3mg蛋白質(zhì)的5cc小瓶中。用1.2mL注射用無(wú)菌水(USP)重建Proleukir^用于注射。順瓶側(cè)導(dǎo)入稀釋劑以避免產(chǎn)生過(guò)多泡沫，溫和渦旋內(nèi)容物直到完全溶解，但應(yīng)避免振蕩。重建后，每mL含有l(wèi).lmg(l千8百萬(wàn)IU)Proleukh^。重建的Proleukir^適合直接靜脈內(nèi)注射，或者可根據(jù)需要用含有0.1Q/o人白蛋白(USP)的5o/o右旋糖注射液(USP)稀釋到50mL-500mL。稀釋時(shí)，在加入重建的Proleuki,之前將人白蛋白(USP)加入5M右旋糖注射液中。實(shí)施例3單用rlL-2組合物的治療與用rlL-2組合物和抗血管新生劑聯(lián)合治療的對(duì)比表6小結(jié)了高劑量rlL-2的結(jié)果。表6:單一藥物rlL-2推注方案的臨床試驗(yàn)<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>重組白介素-2;MRJ:百萬(wàn)國(guó)際單位；CR:完全反應(yīng)；PR:部分反應(yīng)；q:每；NS:未說(shuō)明宂全反應(yīng)+部分反應(yīng)=16.5%(95。/。置信區(qū)間，13.8%-19.2%)'由Bukowski(39)部分調(diào)整而來(lái)許多因素都促進(jìn)了與抗血管新生組合物聯(lián)合治療。與高劑量rlL-2有關(guān)的高發(fā)病率需要仔細(xì)迸行患者選擇，這顯著降低了可能從治療中獲益的患者的數(shù)量。不幸的是，在RCC發(fā)生率最高的患者中發(fā)現(xiàn)伴發(fā)性疾病的頻率最高。對(duì)仔細(xì)進(jìn)行患者監(jiān)測(cè)和偶爾進(jìn)行重癥監(jiān)護(hù)的要求使得單獨(dú)給予高劑量rlL-2的成本很高，并且限制了它在大型醫(yī)療中心中的應(yīng)用。其實(shí)際效果使其實(shí)用性僅限于一小部分患者。嚴(yán)格評(píng)價(jià)了更低劑量rlL-2，如表7所示。表7:單用rlL-2的II期臨床試驗(yàn)皮下方案作者方案rlL-2劑量范圍a(MIU)患者數(shù)CRPR反應(yīng)持續(xù)時(shí)間中值/存活率中值(mos)Schomburg等5天/周X8周4.8-14.4/巾2/天1500NSLissoni等第1天和第2天18她2沃14049+NS5天/周X6周3.6/m"天Lissoni等第1天和第2天18.0/1112/天5011313+/14+5天/周X6周6.0/012/天LopezHanninen等5天/周，第l-6周18.0/|112沃1601NSButer等第l-5天18.0/m:天472711.0/12.0第8-12天等9.0/1112/天Casamassima等第1天和第2天18.0/!112/天102NS第8-12天等3.6/m2/天deLena等第1天和第2天18.0/m2/天1001NS第8-12天等3.6/012/天Whitehead等毎兩周增加劑歐3.0-30.0/|712/天1500NSM3rum0等.v.(2小時(shí)，第l-28天)1.0/mV天然后每天1她2沃12031/NS總計(jì)(％)l卯6(3.2)28(14.7)l"IL-2:重組人白介素-2:MJU:百萬(wàn)國(guó)際單位；CR:完全反應(yīng)；PR:部分反應(yīng)；NS:未說(shuō)明i.V.:靜脈內(nèi)完全反應(yīng)+部分反應(yīng)=18.6%(95%置信區(qū)間，15.8-21.5%)a總劑量b學(xué)-位類(lèi)型未說(shuō)明1由Bukowski(39)部分調(diào)整而來(lái)Buter等公開(kāi)了最常用的皮下方案。在Buter的方案中，rlL-2每天給藥一次，每周5天，給藥6周。在第一個(gè)5天周期中，每天給予一次18xl0eiU(MIU);在接下來(lái)的周期中，頭兩天后將劑量降低到9MIU。反應(yīng)率和存活率數(shù)據(jù)可能與高劑量IV推注給予rlL-2所公開(kāi)的相似。最近，在前瞻性隨機(jī)試驗(yàn)中將Buter/Sleijfer方案與高劑量rlL-2作比較。隨機(jī)將96名患者分到高劑量IVrlL-2組，將92名患者分到SQrlL-2組(Buter/Sleijfer劑量方案)。先前，對(duì)高劑量rlL-2的反應(yīng)率是20。/。，對(duì)SQrlL-2的反應(yīng)率是10%。然而，總體存活率并未與高劑量組不同&=0.34)。同樣，存在針對(duì)與抗血管新生組合物聯(lián)合的催化劑，以提高效力和患者對(duì)較低劑量方案的總體反應(yīng)性。嚴(yán)格評(píng)價(jià)了阿地白介素與抗血管新生劑聯(lián)用方案，如表8所示。表8:治療、齊l.量和持續(xù)時(shí)間劑量水平在第-7、1、15、29和42天給予抗血管新生劑(mg/kg)阿地白介素(IU/kg/d;SC)第l周(dl-5)阿地白介素(IU/kg/d;SC)第2-6周(dl-5)-I5125,00065,000I5250,000125,000II10250,000125,000-在第-7天給予一個(gè)劑量的抗血管新生劑(等于對(duì)應(yīng)于劑量水平的計(jì)劃劑量)。.在第1天再次給予抗血管新生劑，然后在為期8周的連續(xù)治療周期中每2周給藥-一次。繼續(xù)用rlL-2連續(xù)治療6周(第l-42天，各周的周一-周五)，然后是2周停藥期，它們一起構(gòu)成8周治療周期。實(shí)施例4用rlL-2與小分子受體酪氨酸激酶抑制劑BAY43-9006和SU11248聯(lián)合治療A.材料和方法藥物用注射用無(wú)菌水重建重組人白介素-2(Proleuki^，阿地白介素/rlL-2;18MIU/ml，ChironCorporation,Emeryville,CA)，并用5%右旋糖配制，然后進(jìn)行給藥。長(zhǎng)春新堿(硫酸長(zhǎng)春新堿)得自MaynePharmaLtd(Mulgrave,澳大利亞)。(^111-258是4-氨基-5-氟-3-[5-(4-甲基哌嗪-l-基)-lH-苯并咪唑-2-基]喹啉-2(lH)-酮(Chiron)。按照公開(kāi)的方法和專(zhuān)利內(nèi)部(in-house)合成和純化BAY43-9006(Sorafanib/Nexavar)(Riedl等，尸rac.Jm.jmoc.Ca"cer200142(Abs4956);Lowinger等，Cwr.尸/7"nn.Z)e乂20028(25):2269-2278;WO9932455)和SU11248(Sunitinib/Sutent)(Sun等，J.MedC7ze肌200346(7):1116-1119;WO0160814)。在DMSO中制備BAY43-9006或SUl1248(20mM)的母液，將試樣量?jī)?chǔ)存于-2(TC待用。在體外試驗(yàn)中，用優(yōu)化培養(yǎng)基稀釋所有藥物。在體內(nèi)給藥時(shí)，用100%PEG400載體配制BAY43-9006，而用5mM檸檬酸緩沖液制備SU11248給藥溶液。所用的所有其它化學(xué)試劑都是研究級(jí)試劑。細(xì)胞系所有小鼠細(xì)胞系，CTLL-2(IL-2依賴(lài)性T細(xì)胞系)、B16-F10黑色素瘤、CT26結(jié)腸癌和腎癌RENCA都獲自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(Rockville，MD)。用補(bǔ)充有10。/。FBS(胎牛血清，GibcoLifeTechnologies,Gaithersburg，MD)、2mML-谷氨酰胺、1mM丙酮酸鈉、25mMHEPES、0.5nMrlL-2、2mM卩-巰基乙醇的RPMI1640培養(yǎng)ctll-2。用含有10。/qFBS、2%100X維生素、1%200mM谷氨酰胺、1%100mMNaPy、P/。非必需氨基酸的EMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)RENCA細(xì)胞。用含有EMEM、10%FBS、2%維生素、1。/。200mM谷氨酰胺、1。/。100mM丙酮酸鈉、1%非必需氨基酸的培養(yǎng)基培養(yǎng)CT26細(xì)胞。用含有10。/oFBS、1%非必需氨基酸、1。/。100mM丙酮酸鈉、2%維生素;2mMl-谷氨酰胺；2y。碳酸氫鈉的RPMI1640培養(yǎng)B16-F10細(xì)胞。用RPMI+10。/。FBS培養(yǎng)Yac-l細(xì)胞(ATCC)，并在測(cè)定前亞培養(yǎng)l-2天以保證對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)。在37°。和5%<:02的濕環(huán)境中將細(xì)胞維持為懸液或貼壁培養(yǎng)物。采用指數(shù)生長(zhǎng)期(不超過(guò)6-8代)、活力>98%(用臺(tái)盼藍(lán)染色評(píng)價(jià))并經(jīng)測(cè)定不含支原體的的細(xì)胞。體內(nèi)效力研究雌性BALB/c或C57BL6小鼠(4-6周齡，18-22g)獲自CharlesRiver(Wilmington,MA)，使其在無(wú)病原環(huán)境中適應(yīng)l周，然后開(kāi)始研究。動(dòng)物隨意接受無(wú)菌嚙齒動(dòng)物飼料和水，在頂部裝有無(wú)菌濾器的籠子中以12-小時(shí)明/暗周期飼養(yǎng)。按照國(guó)際實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物護(hù)理評(píng)價(jià)禾Q鑒定助、會(huì)(AssociationforAssessmentandAccreditationofLaboratoryAnimalCareInternational)的指南進(jìn)行所有實(shí)驗(yàn)。植入腫瘤時(shí)，收獲B16-F10(2x106)、CT26(2xl06)或RENCA(lxl()6)細(xì)胞，洗滌三次，重懸于PBS。在小鼠的體側(cè)剃毛，皮下(s.c.)植入(0.2ml)小鼠右側(cè)。對(duì)于B16-F10腫瘤模型，采用C57BL6小鼠，而將CT26和RENCA腫瘤植入BALB/c小鼠。腫瘤的平均尺寸達(dá)到50-250mm^寸開(kāi)始治療(第0天)，如具體研究設(shè)計(jì)所述。將小鼠隨機(jī)分成治療小組(一般是10只小鼠/組)。在第0-6或7-13天或者第0-4、7-ll天每天s.c.給予rlL-2(0.2-3mg/kg/天)。從第0天或第7天開(kāi)始通過(guò)管飼法每天給予溶液形式的BAY43-9006或SUl1248(1-100mg/kg)(5-12天)。單個(gè)研究中所述的所有選擇劑量的單獨(dú)治療和聯(lián)合用藥都耐受良好。腫瘤抑制和反應(yīng)的評(píng)價(jià)每周評(píng)價(jià)腫瘤體積和體重2-3次。用下式將游標(biāo)卡尺測(cè)定的腫瘤尺寸轉(zhuǎn)變成平均腫瘤體積(mm3》'/2(長(zhǎng)度(mm)x[寬(mm)]2)。腫瘤生長(zhǎng)抑制(TGI)計(jì)算為[l-(治療組的平均腫瘤體積/對(duì)照組的平均腫瘤體積)x100]。與開(kāi)始治療時(shí)各動(dòng)物的腫瘤體積相比，將反應(yīng)分為完全反應(yīng)(CR，無(wú)可測(cè)定腫瘤)或部分反應(yīng)(PR，腫瘤體積減小50-99%)。用下式進(jìn)行腫瘤生長(zhǎng)延遲(TGD)分析[(治療組的平均腫瘤體積達(dá)到1000mn^的天數(shù))-(對(duì)照組的平均腫瘤體積達(dá)到1000mmS的天數(shù))]。聯(lián)合治療組的預(yù)計(jì)腫瘤生長(zhǎng)抑制。/。(。/。T/C預(yù)計(jì)-n/。T/C治療lxy。T/C治療2)除以聯(lián)合治療組的。/。T/C觀察值(。/。T/C觀察)的比值M時(shí)，定義為協(xié)同作用。。/。T/C預(yù)計(jì)/。/。T/C觀察=1時(shí)定義為加成作用，。/。T/C預(yù)計(jì)/。/。T/C觀察〈l時(shí)定義為拮抗作用(Yokoyama等，Owcer/e5.200060(80):2190-2196)。藥代動(dòng)力學(xué)為了評(píng)價(jià)藥物的藥代動(dòng)力學(xué)，單用s.c.劑量的rlL-2(6mg/kg，0.2ml)或BAY43-9006(20mg/kg，p.o.，0.2ml)處理小鼠，在給藥后不同時(shí)間采血。用HPLC或ELISA生物試驗(yàn)測(cè)定BAY43-9006和rlL-2的血漿水平。Western印跡分析在所示條件下進(jìn)行藥物孵育后，收獲細(xì)胞，用冰冷的PBS洗滌，用含有蛋白酶抑制劑(RocheMolecularBiochemicals，印第安納州印第安納波利斯)和磷酸酶抑制劑(Sigma，密蘇里州圣路易斯)的RIPA緩沖液(用lX磷酸鹽緩沖鹽水(pH7.2)配制的l%NP-40、0.5%脫氧膽酸鈉、0.1。/。十二垸基硫酸鈉)裂解。用BCA試驗(yàn)(Bio-Rad，Hercules，力口州)測(cè)定裂解物的蛋白含量。在Western印跡分析中，電泳分析60嗎蛋白質(zhì)，用pERK的小鼠抗體(l:lOOO，CellSignaling,馬薩諸塞州貝弗禾U)檢測(cè)pERK，4"C孵育過(guò)夜。通過(guò)與合適的抗-磷酸化酪氨酸抗體在室溫下反應(yīng)2小時(shí)，用相同量的蛋白質(zhì)進(jìn)行pSTAT5抗體(l:1000Upstate)和pAKT(l:lOOOCellSignaling)的檢測(cè)。然后用l:5000辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的抗兔IgG(JacksonImmunoresearch，WestGrove,PA)在室溫下孵育膜l小時(shí)。為了驗(yàn)證上樣量相等，洗提印跡，并用抗ERK(CellSignaling)、抗STAT5(BDBiosciences)和抗AKT(CellSignaling)抗體再次檢測(cè)，以分別測(cè)定總ERK、STAT5和AKT蛋白。用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光(ECL;AmershamBiosciences,英格蘭白金漢郡)檢測(cè)蛋白質(zhì)，曝光至Kodak膠片后觀察。進(jìn)行掃描密度測(cè)定，以定量條帶強(qiáng)度。將pERK、pSTAT5或pAKT的量標(biāo)準(zhǔn)化至ERK、STAT5或AKT總蛋白水平，并與載體或未處理對(duì)照作比較。藥物處理后BALB/c裸小鼠中的細(xì)胞免疫表型分析在所示處理后不同時(shí)間收集血樣。將全血(IOOpl)轉(zhuǎn)移至ljFACS/TruCount試管(BDBiosciences)中，保持在冰上。用0.5嗎小鼠Fc部件(抗-小鼠CD16/CD32;BDBioSciences)處理樣品，在冰上孵育20分鐘。將如下所示的熒光染料偶聯(lián)抗體加入樣品中，冰上避光孵育20分鐘。渦旋血樣，同時(shí)加入2mllxFACS裂解溶液(BDBiosciences),然后室溫孵育10分鐘，然后1250rpm離心。將所有樣品洗滌兩次，懸浮于PBS和2。/oFBS中，儲(chǔ)存于4。C，然后上樣至BDFACScalibur上，隨后用CellQuestPro軟件分析。相對(duì)于TruCount珠參比測(cè)定絕對(duì)細(xì)胞數(shù)。鑒定細(xì)胞群體，根據(jù)FSC和SSC特性以及總淋巴細(xì)胞標(biāo)記物(CD45，BDBioSciences)進(jìn)行門(mén)控分析；根據(jù)CD3染色鑒定T細(xì)胞淋巴細(xì)胞群體，用CD4或CD8染色(BDBiosciences)鑒定亞群體。通過(guò)適當(dāng)門(mén)控事件鑒定單個(gè)細(xì)胞群體。組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)用10%福爾馬林中性緩沖液固定小鼠腫瘤，然后轉(zhuǎn)移至70%乙醇中，隨后用Excelsior組織處理器(ThermoElectronCorporation,美國(guó)賓西法尼亞州匹茲堡)處理，以進(jìn)行石蠟包埋。在輪轉(zhuǎn)切片機(jī)(RM2125，LeicaMicrosystems,Nussloch，德國(guó))上切出組織切片(4pm)。制備蘇木精和伊紅(H&E)染色的切片。然后用DiscoveryXT自動(dòng)玻片染色系統(tǒng)(VentanaMedicalSystems,美國(guó)亞利桑那州圖森)進(jìn)行免疫染色。用兔抗-CD3抗體(l:60稀釋?zhuān)珼akoNordenA/S，GlostrupDenmark)檢測(cè)小鼠T細(xì)胞，用F4/80(Serotec)檢測(cè)單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞。對(duì)于細(xì)胞增殖，用單克隆大鼠抗小鼠抗體(l:15稀釋?zhuān)珼AKO)染色小鼠腫瘤中的Ki-67。用CCl(VentanaMedicalSystems)進(jìn)行熱誘導(dǎo)表位恢復(fù)。然后用合適的第二抗體(山羊抗兔IgG生物素化抗體，1:100稀釋?zhuān)琂acksonImmunoResearchLaboratories)孵育樣品。含3-3'-二氨基聯(lián)苯胺色原(VentanaMedicalSystems)的辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素-生物素系統(tǒng)用于定位所述抗體。切片用核堅(jiān)牢紅(nuclearfastred)復(fù)染，以提高組織形態(tài)的觀察效果。對(duì)于B16-F10腫瘤，由于觀察到H&E組織中的黑色素沉積，采用VentanaBluemap試劑盒(另一種NBT/BCIP染色方法)，這有助于觀察腫瘤中的T細(xì)胞。CTLL-2T細(xì)胞增殖試驗(yàn)用或不用BAY43-9006(3pM)37'C預(yù)孵育CTLL-2T細(xì)胞2小時(shí)。然后洗滌細(xì)胞，接種于96孔微量滴定板，5,000個(gè)細(xì)胞/L，所用培養(yǎng)基含有連續(xù)稀釋的rhlL-2(1)iM-100nM)。孵育期(37'C72小時(shí))結(jié)束時(shí)，通過(guò)四唑鏡染料試驗(yàn)用細(xì)胞增殖試劑WST-1(RocheAppliedScience,印第安納州印第安納波利斯)測(cè)定細(xì)胞活力。體外細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)將細(xì)胞接種于96孔微量滴定板(CTLL-2:5000個(gè)細(xì)胞/L;RENCA:1500個(gè)/孔；B16-F10:1000個(gè)/孑L;MV4;11:5000個(gè)/孔)，用連續(xù)稀釋的BAY43-9006/SU11248或長(zhǎng)春新堿處理。CTLL-2是IL-2依賴(lài)性細(xì)胞系，因此對(duì)這些細(xì)胞而言，用含有5nMrlL-2的培養(yǎng)基進(jìn)行所述細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。孵育期(37'C72小時(shí))結(jié)束時(shí)，通過(guò)四唑鏡染料(WST-l)實(shí)驗(yàn)或化學(xué)發(fā)光(BrdU)實(shí)驗(yàn)(RocheAppliedScience,印第安納州印第安納波利斯)測(cè)定細(xì)胞活力。EC5o值定義為相對(duì)于未處理對(duì)照細(xì)胞處理組的吸光度降低5()。/0所需的濃度。離體脾細(xì)胞細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)在無(wú)菌條件下從藥物治療的BALB/c小鼠(n-3-5只/組)獲得脾細(xì)胞，在冰冷的PBS中勻漿。通過(guò)70nm尼龍細(xì)胞濾器后，4'C簡(jiǎn)短離心細(xì)胞。用RBC裂解緩沖液(Sigma，密蘇里州圣路易斯)裂解紅細(xì)胞。洗滌細(xì)胞，以不同的E:T比(100:1、50:1、25:1、12.5:1、6.25:1、3:l)與"Cr-標(biāo)記的Yac-l靶細(xì)胞一起種板，進(jìn)行4小時(shí)細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)。用Wallac平板閱讀器獲得數(shù)據(jù)，并以每分鐘計(jì)數(shù)(cpm)表示。定量結(jié)果表示為特定裂解百分?jǐn)?shù)，計(jì)算方法如下％特定裂解=100><((平均實(shí)驗(yàn)值-平均自發(fā)釋放值)/(平均最大釋放值-平均自發(fā)釋放值))。從含有標(biāo)記的靶細(xì)胞但不含效應(yīng)細(xì)胞的孔獲得自發(fā)釋放值，從含有標(biāo)記靶細(xì)胞和1%TritonX-100的孔測(cè)定最大釋放值。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用單向方差分析(ANOVA)進(jìn)行多重比較；用Student-NewmanKeuls檢驗(yàn)(SigmaStat)完成事后檢驗(yàn)，以比較不同治療方式。pO.05時(shí)認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。5.r/U浙5/iF"-卯06抓欲應(yīng)浙#盧潘應(yīng)^號(hào)存導(dǎo)途徑游伴研秀。rlL-2在體外激活CTLL-2細(xì)胞的JAK/STAT和MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)為了闡明T細(xì)胞中IL-2/IL-2R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的啟動(dòng)、時(shí)程和持續(xù)期間，血清饑餓CTLL-2細(xì)胞(lxl0M"細(xì)胞)24小時(shí)，然后用不同濃度的rlL-2(1pM-100nM)處理2小時(shí)，用Western印跡分析評(píng)價(jià)關(guān)鍵信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑MAPK、STAT5、AKT。在體外用不同濃度的rlL-2(1pM-100nM)處理血清饑餓的CTLL-2細(xì)胞，以描述這兩種主要IL-2R復(fù)合物高親和力(IL-2Ra卩YKo-l(r"M)和中等親和力(IL-2卩YKD-l(r9M)受體的相互作用。在一些實(shí)驗(yàn)中，使細(xì)胞接觸游離的抗IL-2a抗體(過(guò)量〉1000倍；10nM)，孵育l小時(shí)，然后加入rlL-2。為了評(píng)價(jià)IL-2/IL-2R激活的時(shí)程，用10nMrlL-2活化血清饑餓的CTLL-2細(xì)胞，在10分鐘至48小時(shí)的不同時(shí)間上檢測(cè)IL-2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。用Westem印跡分析以rlL-2處理的細(xì)胞評(píng)價(jià)了IL-2R下游ERK1/2、STAT5和AKT的磷酸化。分別將pERK、pSTAT5或pAKT的相對(duì)水平與ERK、STAT5或AKT總蛋白水平作比較。CTLL-2細(xì)胞與rlL-2接觸后觀察到pERKl/2的活化。1pM處理2小時(shí)能輕微激活磷酸化ERK，然而，在濃度^100pM時(shí)觀察到最大激活。在lpM濃度下最大激活JAK/STAT5通路；提高rlL-2的濃度不會(huì)改變pSTAT5水平(最高100nM)。在血清饑餓條件下的T細(xì)胞中，似乎激活了CTLL-2中的基本pAKT途徑。而且，在所測(cè)試的rlL-2濃度下pAKT水平基本保持不變(lpM-100nM;用磷酸化位點(diǎn)483的pAKT抗體)。用IL-2Ra的阻斷抗體驗(yàn)證IL-2信號(hào)通路由與IL-2R的結(jié)合特異性介導(dǎo)。用Western印跡分析CTLL-2細(xì)胞中的pSTAT5水平。血清饑餓CTLL細(xì)胞，用過(guò)量游離的抗IL-2Ra抗體(10nM，>1000倍)處理1小時(shí)，然后用rlL-2(0.1pM-10nM)處理。在沒(méi)有阻斷性IL-2Ra抗體的情況下，lpMrlL-2處理后能激活pSTAT5，然而，存在IL-2Ra抑制的情況下，pSTAT5信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)被終止(〉95。/o抑制)，這驗(yàn)證了STAT5信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中需要IL-2Ra。有趣的是，隨著rlL-2濃度的提高(^10pM)，CTLL-2細(xì)胞中的pSTAT5水平得到了恢復(fù)，這表明rlL-2競(jìng)爭(zhēng)性取代了抗IL-2Ra抗體和/或通過(guò)結(jié)合于低親和力IL-2RPy(Kd=10-9M)鏈激活了pSTAT5信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。在CTLL-2細(xì)胞中rlL-2快速和持續(xù)性激活pSTAT5為了評(píng)價(jià)CTLL-2細(xì)胞中IL-2R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)反應(yīng)的啟動(dòng)時(shí)間和持續(xù)時(shí)間，用rlL-2(10nM)體外處理血清饑餓的細(xì)胞，用Western印跡分析評(píng)價(jià)其對(duì)ERK1/2、STAT5和AKT的磷酸化的影響。將rlL-2加入CTLL-2細(xì)胞后數(shù)分鐘(〈10分鐘)內(nèi)就激活了STAT5的磷酸化，pSTAT5反應(yīng)的持續(xù)時(shí)間維持了長(zhǎng)達(dá)48小時(shí)。rlL-2對(duì)MAPK途徑的激活(pERK)似乎稍有延遲，至l小時(shí)后才激活。pERK的強(qiáng)度低于用PMA(50ng/ml)+伊屋諾霉素(0.4嗎/ml)刺激血清饑餓的CTLL-2細(xì)胞15分鐘獲得的最大反應(yīng)。此外，pERK水平保持了長(zhǎng)達(dá)24小時(shí)，到48小時(shí)恢復(fù)到背景水平。沒(méi)有觀察到對(duì)pAKT的影響，這表明在CTLL-2細(xì)胞中通過(guò)PI-3K/AKT途徑的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是持續(xù)活化的。在CTLL-2細(xì)胞中BAY43-9006處理抑制了pERK而不抑制。STAT5BAY-43-9006是Raf-l的有效抑制劑，它也抑制野生型和突變的BRAF。此外，BAY-43-9006抑制多種激酶，具體是VEGF2、3;PDGFR(5;FLT3和cKIT(Wilhelm，SM等，C^zce^es2004;和Chiron的激酶概況分析數(shù)據(jù))，并在某種程度上抑制Lck和Fyn，Lck和Fyn是參與T細(xì)胞功能反應(yīng)的兩種激酶。鑒于BAY43-9006的抑制激酶特性和對(duì)MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)/T細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的潛在影響，認(rèn)為BAY43-9006可能干擾T細(xì)胞中的IL-2/IL-2R信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。因此，在CTLL-2、B16-F10或RENCA細(xì)胞中體外評(píng)價(jià)了BAY43-9006對(duì)IL-2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的可能作用。為了檢測(cè)BAY43-9006對(duì)CTLL-2、B16-F10或RENCA模式細(xì)胞的影響，用不同濃度的BAY43-9006(0.01-20^M)處理血清饑餓的細(xì)胞。作為合適的對(duì)照，用PMA(50ng/ml)和伊屋諾霉素(0.4嗎/ml)刺激細(xì)胞15分鐘。為了檢測(cè)用rlL-2和BAY43-9006在體外同步和連續(xù)處理CTLL-2細(xì)胞的作用，在存在或不存在BAY43-9006(3^M)的情況下用rlL-2(10nM)處理血清饑餓的CTLL-2細(xì)胞2小時(shí)。對(duì)于連續(xù)處理，BAY43-9006處理2小時(shí)。然后洗滌細(xì)胞，然后用rlL-2處理，反之亦然。也通過(guò)或不通過(guò)PMA(50ng/ml)和伊屋諾霉素(0.4嗎/ml)刺激15分鐘檢測(cè)BAY43-9006(3^M)的抑制作用。由于在不同細(xì)胞類(lèi)型中用BAY43-9006抑制MAPK途徑所需的濃度差異相當(dāng)大，所以評(píng)價(jià)了不同濃度(0-20pM)BAY43-9006處理經(jīng)過(guò)或不經(jīng)過(guò)PMA+伊屋諾霉素刺激的血清饑餓CTLL-2細(xì)胞2小時(shí)的影響。孵育期結(jié)束時(shí)，裂解經(jīng)處理的CTLL-2細(xì)胞，將蛋白質(zhì)裂解物進(jìn)行Western印跡分析，以測(cè)定pERK水平。在小鼠CTLL-2細(xì)胞和人JurkatT細(xì)胞系中濃度^^M的BAY43-9006基本上抑制了pERK。BAY43-9006處理對(duì)CTLL-2細(xì)胞的影響沒(méi)有改變細(xì)胞的pSTAT5和pAKT水平，這表明T細(xì)胞中的JAK/STAT5途徑和PI-3K/AKT基本未受影響。為了研究rlL-2和BAY43-9006體外聯(lián)合處理的治療基礎(chǔ)，研究了rlL-2和BAY43-9006對(duì)T細(xì)胞的影響和對(duì)CTLL-2細(xì)胞中兩種IL-2介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑(MAPK和JAK/STAT5)的影響。在CTLL-2細(xì)胞中研究了這兩種藥物的同步或連續(xù)給藥方案對(duì)IL-2介導(dǎo)的T細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響。用BAY43-9006(3^M)處理血清饑餓的CTLL-2細(xì)胞2小時(shí)，然后用載體、rlL-2(10nM)或PMA+伊屋諾霉素處理?；蛘?，也研究了rlL-2(10nM，2小時(shí))處理后接BAY43-9006處理(3iLiM，2小時(shí))。藥物接觸和/或PMA+伊屋諾霉素刺激后，用Western印跡分析細(xì)胞裂解物中的pERK和pSTAT5(如前所述)。BAY43-9006(3^M)處理抑制了pERK水平，然而，rlL-2激活了血清饑餓的CTLL-2細(xì)胞中的pERK水平(相對(duì)于基線pERK水平)，這驗(yàn)證了這兩種藥物對(duì)MAPK途徑的相反作用。所有用BAY43-9006的聯(lián)合處理(同步和連續(xù)接觸藥物)都基本上抑制了CTLL-2細(xì)胞中的pERK。沒(méi)有觀察到所測(cè)試的所有聯(lián)合處理(如方法部分所述)對(duì)STAT5途徑或AKT途徑的影響。高濃度的BAY43-9006抑制腫瘤細(xì)胞系中的pERK水平測(cè)定了BAY43-9006處理對(duì)小鼠腫瘤細(xì)胞系-B16-F10黑色素瘤、CT26結(jié)腸癌和RCCRENCA模型的影響。根據(jù)免疫活性模型aVNK-/單核細(xì)胞-/巨噬細(xì)胞-有活性的小鼠)中小鼠細(xì)胞系對(duì)體內(nèi)rlL-2治療的反應(yīng)選擇小鼠細(xì)胞系，其中可研究rlL-2和BAY43-9006聯(lián)合治療的影響。使血清饑餓的B16-F10黑色素瘤和RENCA細(xì)胞接觸不同濃度(0-20nM)的BAY43-9006。用Western印跡分析測(cè)定藥物處理后細(xì)胞裂解物中的磷酸化-ERK水平。在兩種測(cè)試細(xì)胞系(B16-F10和RENCA)中非常高濃度O5^M)的BAY43-9006抑制了pERK水平，20pM時(shí)觀察到幾乎完全抑制了pERK。C.5/ly"-卯06對(duì)/丄-2^導(dǎo)游潘應(yīng)潛潛游伴-伊^為了檢測(cè)BAY43-9006引起的pERK抑制是否影響CTLL-2細(xì)胞中IL-2介導(dǎo)的增殖反應(yīng)，通過(guò)能抑制pERK的濃度的BAY43-9006預(yù)孵育CTLL-2細(xì)胞(5000個(gè)細(xì)胞/孔)(3pM,2小時(shí))，以進(jìn)行增殖試驗(yàn)。用BAY43-9006(3pM)孵育細(xì)胞2小時(shí)后，將細(xì)胞接種于96孔板，并接觸不同濃度的rlL-2(0-100nM)72小時(shí)。對(duì)未處理細(xì)胞進(jìn)行假處理，然后用rlL-2(相同濃度)孵育。用WST-l試驗(yàn)評(píng)價(jià)BAY43-9006處理和未處理的CTLL-2細(xì)胞的增殖反應(yīng)。在CTLL-2細(xì)胞系中，用BAY43-卯06(3^M)預(yù)孵育細(xì)胞能抑制pERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，但不影響IL-2誘導(dǎo)的增殖反應(yīng)。D.BAY43-9006或SU11248對(duì)CTLL-2和腫瘤細(xì)胞的體外抗增殖活性為了評(píng)價(jià)BAY43-9006或SU11248在這些細(xì)胞類(lèi)型(CTLL-2、B16-F10、RENCA、CT26)中的體外細(xì)胞毒活性，將細(xì)胞接種于96孔微量滴定板中，用連續(xù)稀釋的BAY43-9006(0-50^M)37。C處理72小時(shí)。由于CTLL-2細(xì)胞系的增殖依賴(lài)IL-2，所以在含有5nMrlL-2的培養(yǎng)基中進(jìn)行針對(duì)這些細(xì)胞的細(xì)胞毒研究。在72小時(shí)孵育期結(jié)束時(shí)，通過(guò)四唑鏡染料(WST-l)試驗(yàn)或化學(xué)發(fā)光(BrdU)試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞活力。作為對(duì)照，用BAY43-9006(0-501^M)處理MV4;11(人FLT3ITDAML細(xì)胞系)，或用長(zhǎng)春新堿(O-l^M)處理B16-F10細(xì)胞，以確認(rèn)藥物的細(xì)胞毒性和試驗(yàn)的有效性。藥物的抑制濃度表示為EQ()值，EC5Q值定義為根據(jù)相對(duì)于未處理/載體對(duì)照的藥物處理細(xì)胞的吸光度測(cè)定的使增殖反應(yīng)降低50%所需的濃度。BAY43-9006或SU11248的相對(duì)EC5o見(jiàn)表9。表9.BAY43-卯06或SU11248對(duì)不同細(xì)胞系的抗增殖活性。EC50,a<table>tableseeoriginaldocumentpage64</column></row><table>MV4;llb人FLT3ITDAML0.01/0.006。0.02d將細(xì)胞接種于96孔微量滴定板(CTLL-2:5000個(gè)細(xì)胞/L;RENCA:1500個(gè)/孔；B16-F10:1000個(gè)/孔；CT26:1000個(gè)/孔;MV4;11:5000個(gè)/孔)，用連續(xù)稀釋的BAY43-卯06、SU11248或長(zhǎng)春新堿處理。CTLL-2是IL-2依賴(lài)性細(xì)胞系，因此在含有5nMrlL-2的培養(yǎng)基中進(jìn)行細(xì)胞毒試驗(yàn)。在孵育期結(jié)束時(shí)(37'C72小時(shí))，用四唑鏡染料(WST-1)試驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞活力。^<:5。=根據(jù)相對(duì)于未處理/載體對(duì)照的藥物處理細(xì)胞的吸光度測(cè)定的使增殖反應(yīng)降低50%所需的濃度。bMV4;11是表達(dá)FLT3內(nèi)部串聯(lián)重復(fù)(ITD)的人急性成髓細(xì)胞性白血病(AML)細(xì)胞系。BAY43-9006(有效的FLT3激酶抑制劑；IC5。=58nM)對(duì)MV4;ll細(xì)胞有顯著的體外抗增殖活性。d叫測(cè)定細(xì)胞的ATP含量的PromegaCell-TiterGk)TM試驗(yàn)評(píng)價(jià)細(xì)胞活力。通常，與抗有絲分裂劑長(zhǎng)春新堿相比(由相對(duì)EC5o確定；見(jiàn)表9)，需要相對(duì)高濃度的BAY43-9006(或SU11248)來(lái)抑制CTLL-2細(xì)胞以及各種細(xì)胞系(B16-F10、RENCA、CT26)增殖。也用評(píng)價(jià)對(duì)DNA合成影響的BrdU試驗(yàn)檢測(cè)BAY43-9006對(duì)RENCA細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用(相對(duì)于用線粒體四唑鎩染料試驗(yàn)檢測(cè)的抗增殖活性)。用BrdU方法獲得的BAY43-卯06對(duì)RENCA細(xì)胞的ECso(5pM)與用WST-1試驗(yàn)觀察到的相似。RENCA腫瘤細(xì)胞接觸不同濃度的rlL-2(0-lnM)時(shí)，沒(méi)有觀察到直接的增殖反應(yīng)(或細(xì)胞毒性)，這驗(yàn)證了rlL-2的機(jī)制依賴(lài)于免疫效應(yīng)細(xì)胞組分的活化。伴艦力研秀rlL-2和BAY43-9006在小鼠中的藥代動(dòng)力學(xué)在公開(kāi)的BAY43-9006(劑量400mg)的I期報(bào)道中，在患者中實(shí)現(xiàn)了10-20pM的高C,麗和約24小時(shí)的長(zhǎng)藥物半衰期(Strumberg，等，乂C//".0"co/.200523(5):965-972)。為了確定血漿藥物接觸可否影響體內(nèi)T細(xì)胞活力和增殖反應(yīng)，測(cè)定了rlL-2和BAY43-9006在小鼠中的單劑量藥代動(dòng)力學(xué)。單劑量口服30mg/kgBAY43-9006在tm狄為2小時(shí)時(shí)在小鼠中達(dá)到的C,約為5500-8000ng/ml(~10pM)。BAY43-9006的血漿清除相當(dāng)緩慢，其半衰期約為4小時(shí)。相反，皮下給予6mg/kg的rlL-2后PK圖譜顯示，在t匪約為30分鐘時(shí)的C,約為550-850ng/ml。rlL-2在小鼠中的f/2約為l小時(shí)，在4小時(shí)內(nèi)其接觸量S0ng/ml。有趣的是，單一給藥治療和不同給藥途徑治療都顯示出非重疊的C^x(在tmax時(shí))，表明如PK結(jié)果所支持的，同步和連續(xù)治療都可以是可行的。鑒于BAY43-9006在血液中大部分結(jié)合于蛋白質(zhì)，所以這些藥物接觸量在體內(nèi)對(duì)T細(xì)胞活力的影響仍然有待研究。rlL-2和BAY43-9006處理能降低離體的免疫效應(yīng)器功能由于抑制一種或多種T淋巴細(xì)胞激酶(Lck、Fyn、Syk、Btk、Src、Tck2、MAPK、JAK)可能抑制T細(xì)胞擴(kuò)展和免疫效應(yīng)器功能，所以研究了rlL-2和BAY43-9006在體內(nèi)對(duì)T細(xì)胞增殖和功能反應(yīng)的影響。在這些實(shí)驗(yàn)中，用rlL-2(1mg/kg/天，s.c.第6-10天)、BAY43-9006(30mg/kg/天，p.o,，第6-10天)或rlL-2和BAY43-卯06的組合同步或連續(xù)給藥(rlL-2，1mg/kg/天，s.c.第l-5天+BAY43-9006,30mg/kg/天，p.o.，第6-10天；或BAY43-9006，30mg/kg/天，p.o.，第l-5天+rlL-2，1mg/kg/天，s.c.第6-10天)處理荷有RENCA腫瘤的BALB/c小鼠。然后以不同的效應(yīng)器:靶點(diǎn)(E:T)比對(duì)分離自治療小鼠的脾細(xì)胞進(jìn)行針對(duì)Yac-l靶細(xì)胞的離體殺傷試驗(yàn)，湖淀"Cr-標(biāo)記的Yac-l細(xì)胞的特定裂解百分?jǐn)?shù)。與載體治療相比，用rlL-2(1mg/kg)處理的小鼠脾細(xì)胞介導(dǎo)的Yac-l靶點(diǎn)殺傷作用顯著增強(qiáng)(用rlL-2為23。/。，用載體治療為0%)。用BAY43-9006治療觀察到的特定殺傷作用(1%)可以忽略，與載體治療無(wú)區(qū)別。用rlL-2和BAY43-9006進(jìn)行的所有治療導(dǎo)致脾細(xì)胞介導(dǎo)的裂解活性降低(同步治療=16%;連續(xù)治療^9%，相對(duì)于1"1]^2單獨(dú)治療=23%)。rlL-2和BAY43-9006治療對(duì)循環(huán)的免疫效應(yīng)細(xì)胞群體的影響檢測(cè)了rlL-2和/或BAY-43-9006治療對(duì)BALB/c荷瘤小鼠中循環(huán)的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞群體的藥效學(xué)影響。在這些研究中，單藥物或rlL-2和BAY43-9006聯(lián)合治療(如前所述的同步或連續(xù)治療)后采血。用TruCountTM試管和合適的免疫染色定量全血中淋巴細(xì)胞和T細(xì)胞亞群體(CD4+或CD8+)的絕對(duì)計(jì)數(shù)。rlL-2治療降低了荷瘤小鼠中循環(huán)的淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞(CD45+細(xì)胞2387個(gè)細(xì)胞&1，相對(duì)于載體為1575個(gè)細(xì)胞/Vl)和T細(xì)胞(1550個(gè)細(xì)胞/pl，相對(duì)于載體為664個(gè)細(xì)胞4il)的絕對(duì)數(shù)量。與載體治療相比，rlL-2治療顯著提高了CD4:CD8細(xì)胞比率(5:3;rlL-2:載體，即1.7倍)，這表明了rlL-2的作用機(jī)制是擴(kuò)增T細(xì)胞數(shù)量的作用。rlL-2治療后非T和單核細(xì)胞(CD45+CD3-)的相對(duì)數(shù)量與載體治療組相似(837個(gè)細(xì)胞/pl，相對(duì)于載體為911個(gè)細(xì)胞4U)。相反，單一藥物BAY43-9006或BAY43-9006與rlL-2聯(lián)用對(duì)淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量影響很小或能增加該數(shù)量(在2417-3577個(gè)細(xì)胞/nl范圍內(nèi)，相對(duì)于載體為2387個(gè)細(xì)胞&1)，也增加了非T細(xì)胞和單核細(xì)胞群體(1241-1563個(gè)細(xì)胞4U，相對(duì)于載體為837個(gè)細(xì)胞&1)。BAY43-9006治療對(duì)T細(xì)胞總數(shù)的影響與載體治療組相似(1827個(gè)細(xì)胞4U，相對(duì)于載體為1550個(gè)細(xì)胞/nl)。以rlL-2開(kāi)始進(jìn)行rlL-2和BAY43-9006的連續(xù)方案能少量增加總T細(xì)胞數(shù)(包括CD4+和CD8+群體)(2081個(gè)T細(xì)胞1,相對(duì)于載體為1550個(gè)細(xì)胞/pl)。當(dāng)rlL-2和BAY43-9006同步給藥或先給予BAY43-9006再給予rlL-2時(shí)，與載體治療組相比總T細(xì)胞數(shù)稍有降低(1170-1244個(gè)T細(xì)胞/1^1，相對(duì)于載體為1550個(gè)細(xì)胞/pl)。在單獨(dú)的CD4+和CD8+T細(xì)胞群體中觀察到的趨勢(shì)相似。此外，用rlL-2和BAY43-9006或SU11248治療(如前所述)后，測(cè)定了腫瘤的組織學(xué)。為了檢測(cè)體內(nèi)T細(xì)胞的藥效學(xué)，用小鼠抗-CD3抗體檢測(cè)腫瘤浸潤(rùn)性T細(xì)胞。用Ki67染色評(píng)價(jià)藥物治療后對(duì)腫瘤的抗增殖作用。與載體治療相比，rlL-2治療后，觀察到浸潤(rùn)RENCA腫瘤(和B16-F10腫瘤)的T細(xì)胞數(shù)增加。通常，在RENCA模型中，Bayer43-9006治療組中檢測(cè)到的T細(xì)胞較少。在B16-F10腫瘤中rlL-2和BAY43-9006或SU11248治療對(duì)浸潤(rùn)性T細(xì)胞的影響模棱兩可，因?yàn)樵谒兄委熃M中都檢測(cè)到一些T細(xì)胞。顯示出壞死增加的腫瘤(腫瘤抑制)通常顯示，腫瘤細(xì)胞之間分散的T細(xì)胞數(shù)量較多?？傊?，數(shù)據(jù)表明，rlL-2能活化循環(huán)中的T細(xì)胞，并將細(xì)胞運(yùn)輸?shù)桨[瘤在內(nèi)的血管外位點(diǎn)，BAY43-9006或SU11248治療可部分抑制T細(xì)胞增殖反應(yīng)和運(yùn)輸。rlL-2和BAY43-9006治療提高了IL-2反應(yīng)性小鼠腫瘤模型的效力檢測(cè)了rlL-2與BAY43-9006或SU11248的藥物相互作用(見(jiàn)圖l-10和表10-12)。在三種T細(xì)胞有活性的實(shí)驗(yàn)小鼠IL-2反應(yīng)性腫瘤模型(B16-F10黑色素瘤、CT26結(jié)腸癌、RCCRENCA模型)中評(píng)價(jià)了聯(lián)合治療(圖l-lO)。在這些研究中，腫瘤大小達(dá)到50-225mn^時(shí)將小鼠隨機(jī)分組，每天口服給予BAY43-9006或SUl1248或每天皮下給予rlL-2(如方法所示)后用游標(biāo)卡尺監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)。用多種劑量和治療方案研究rlL-2、BAY43-9006和SU11248的單一藥物效力和耐受性(圖1)。在所有模型中，rlL-2顯示出強(qiáng)大效力，有效劑量下的腫瘤抑制通常為40-60%(相對(duì)于載體治療組)(圖1)。BAY43-9006的最小有效劑量為230mg/kg/天(相對(duì)于載體治療組)。除了B16-F10腫瘤模型，SU11248的有效劑量通常為^40mg/kg/天(圖l)。根據(jù)單獨(dú)用藥的效力和耐受性，隨后將rlL-2與能耐受并對(duì)體重沒(méi)有任何不利影響也沒(méi)有臨床不利癥狀的劑量的BAY43-卯06或SU11248聯(lián)用。在B16-F10和CT26腫瘤模型中檢測(cè)連續(xù)和同步治療方案(圖2-8，表10和ll)。在B16-F10和CT26腫瘤模型中，相對(duì)于單一治療或載體治療，幾乎所有用rlL-2和BAY43-9006或rlL-2和SU12248研究的聯(lián)合治療(同步或連續(xù)方案)都提高了抗腫瘤活性(圖2-5)。表10和11中小結(jié)了各種聯(lián)合治療的藥物相互作用。表IO.C57BL6小鼠中小鼠黑色素瘤B16-F10腫瘤模型中rlL-2、BAY43-9006、<table>tableseeoriginaldocumentpage68</column></row><table>200680009316.0說(shuō)明書(shū)第65/66頁(yè)表ll.BALB/C小鼠中小鼠CT26腫瘤模型中rlL-2、BAY43-9006、<table>tableseeoriginaldocumentpage69</column></row><table>a『各研究中10只BALB/C小鼠湖。當(dāng)腫瘤生長(zhǎng)至平均尺寸約為225mm、寸治療CT26荷瘤小鼠。bT/C(0)=%T/CCT/C^w(E"Q/。T/C治療1X。/。T/C治療2d聯(lián)合治療組的預(yù)計(jì)腫瘤生長(zhǎng)抑制。/。(。/。T/C預(yù)計(jì)-。/。T/C治療lX。/。T/C治療2)除以聯(lián)合治療組的。/。T/C觀察值(Q/。T/C觀察)的比值>1吋，定義為協(xié)同作用。e。/。T/C預(yù)il/。/。T/C觀察H時(shí)，將藥物相互作用定義為加成作用，。/。T/C預(yù)計(jì)/Q/。T/C觀察〈1時(shí)定義為拮抗作用。N/A,無(wú)在CT26模型中僅有一種情況，在rlL-2(lmg/kg/天，s.c.，第8-13天)之前給予BAY43-9006(40mg/kg/天，p.o.，第l-7天)時(shí)，聯(lián)合治療的效果不是最優(yōu)的。在RENCA模型中，只評(píng)價(jià)了同步方案(圖9-10;表12)，rlL-2與BAY43-9006或SU11248聯(lián)合治療的腫瘤抑制作用高于單一藥物治療。表12.BALB/C小鼠中小鼠RCCRENCA腫瘤模型中rlL-2、BAY43-9006、SU11248單獨(dú)用藥以及rlL-2和BAY43-9006/SU11248聯(lián)合用藥的效力<<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>一n-介剛.九'rlU廣、tSALts/L/j、眠/5H。3/JT溜土TJC王扁T"J八、j5'、j,j〕u-/ummftjm"rainL/vinj7苗/j、眠T失'"ii。業(yè)了同步方案，由于RENCA腫瘤模型產(chǎn)生嚴(yán)重的惡病質(zhì)(動(dòng)物浪費(fèi))，以致不可能進(jìn)行連續(xù)給藥，也無(wú)法評(píng)價(jià)bT/C,(0)=°/。T/Cn7C、i德(E"。/。T/C治療1X%1/C治療2d聯(lián)合治療組的預(yù)計(jì)腫瘤生長(zhǎng)抑制。/。(。/。T/C預(yù)計(jì)-。/。T/C治療lXo/。T/C治療2)除以聯(lián)合治療組的。/。T/C觀察值(%丁/<:觀察)的比值>1時(shí)，定義為協(xié)同作用。e。/oT/C預(yù)計(jì)嚴(yán)/。T/C觀察H時(shí)，將藥物相互作用定義為加成作用，e/。T/C預(yù)計(jì)/c/。T/C觀察^時(shí)定義為拮抗作用。N/A，無(wú)由于RENCA模型持續(xù)期間短和小鼠惡病質(zhì)(動(dòng)物浪費(fèi)/體重?fù)p失)，在RENCA模型中采用連續(xù)治療不可行。總之，數(shù)據(jù)顯示，在臨床前模型中rlL-2與靶向小分子治療如BAY43-9006和SU11248聯(lián)用時(shí)活性提高，這表明可將這種治療方案轉(zhuǎn)移到臨床上。雖然根據(jù)具體實(shí)施例(包括目前優(yōu)選的本發(fā)明實(shí)施方式)描述了本發(fā)明，但本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，上述系統(tǒng)和技術(shù)有多種改變和替換形式，它們都落入本發(fā)明的構(gòu)思和范圍。納入本文作參考將上面引用的所有專(zhuān)利、專(zhuān)利申請(qǐng)和期刊文章的內(nèi)容納入本文作參考，就像它們?cè)诒疚闹型暾谐龅哪菢印?quán)利要求1.一種治療癌癥患者的方法，所述方法包括給予所述患者治療有效量的阿地白介素和一種抗血管新生劑，所述抗血管新生劑選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲酰基)卩比啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。2.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在給予所述抗血管新生劑之前給予阿地白介素。3.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在給予所述抗血管新生劑之后給予阿地白介素。4.如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，在給予所述抗血管新生劑的同時(shí)給予阿地白介素。5.如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，在與所述抗血管新生劑不同的組合物中給予阿地白介素。6.如權(quán)利要求l-5中任一項(xiàng)所述的方法，包括按照給藥方案單獨(dú)給予所述患者治療有效量的阿地白介素和抗血管新生劑，其中在至少連續(xù)3天的周期中每天以約9-130MIU/天的劑量給予阿地白介素l-3次，任選地后接至少連續(xù)3天的停藥期。7.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，每2-3周給予所述抗血管新生劑l-6次。8.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，靜脈內(nèi)給予阿地白介素，存在所述停藥期。9.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，皮下給予阿地白介素，不存在所述停藥期。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，每天以約9-30MIU/天的劑量給予阿地白介素l-3次。11.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，每天以約30-130MIU/天的劑量給予阿地白介素3次。12.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在連續(xù)5天的周期中給予阿地白介素，后接為期9天的停藥期。13.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將所述給藥方案重復(fù)至少兩個(gè)療程。14.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將所述給藥方案重復(fù)3個(gè)療程。15.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，將所述給藥方案重復(fù)4個(gè)療程。16.如權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，在第一天給予阿地白介素3次，隨后每天給藥一次。17.如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述癌癥是腎細(xì)胞癌、黑色素瘤或結(jié)腸癌。18.如權(quán)利要求17所述的方法，還包括在給予阿地白介素之后或同時(shí)給予所述患者選自下組的至少一種化合物對(duì)乙酰氨基酚、哌替啶、n引哚美辛、雷尼替丁、尼扎替丁、diastop、洛哌丁胺、苯海拉明或呋塞米。19.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法導(dǎo)致所述患者的癌癥改善。20.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法導(dǎo)致所述患者的低血壓減輕。21.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法導(dǎo)致所述患者的高血壓減輕。22.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述方法導(dǎo)致所述患者的一氧化氮合酶減少。23.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述癌癥對(duì)血管新生抑制和/或免疫刺激敏感。24.如權(quán)利要求l-23中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述抗血管新生劑是N-P-(:Z甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2，4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺。25.如權(quán)利要求l-23中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述抗血管新生劑是1-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。26.—種組合物，其含有(a)治療有效量的阿地白介素；(b)治療有效量的一種抗血管新生劑，所述抗血管新生劑選自6，7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉_4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶-4-基)甲基)酞嗪-l-胺、l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基傳基)脲；和(C)藥學(xué)上可接受的賦形劑。27.—種藥盒，其包括同時(shí)、依次或分別應(yīng)用的治療癌癥患者的藥物組合，包括(a)阿地白介素和(b)—種抗血管新生劑，所述抗血管新生劑選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)-N-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-(3-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基]喹唑啉-4-胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2，4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡啶l基)甲基)酞嗪-l-胺或1-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基傳基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。28.如權(quán)利要求26所述的藥盒，其特征在于，所述藥物各自分開(kāi)包裝。29.阿地白介素和一種抗血管新生劑在制造治療癌癥患者的一種或多種藥物中的應(yīng)用，所述抗血管新生劑選自6,7-雙(2-甲氧基乙氧基)->4-(3-乙炔基苯基)喹唑啉-4-胺、6-(3-嗎啉代丙氧基)-N-0-氯-4-氟苯基)-7-甲氧基喹唑啉-^胺、N-(2-(二甲基氨基)乙基)-5-((5-氟-2-氧代二氫吲哚-3-亞基)甲基)-2,4-二乙基-lH-吡咯-3-羧酰胺、N-(4-氯苯基)-4-((吡淀-4-基)甲基)酞嗪-l-胺或l-(4-(2-(甲基氨甲?；?吡啶-4-基氧基)苯基)-3-(4-氯-3-(三氟甲基)苯基)脲。30.如權(quán)利要求29所述的應(yīng)用，其特征在于，配制在所述抗血管新生劑之前給藥的阿地白介素。31.如權(quán)利要求29所述的應(yīng)用，其特征在于，配制在所述抗血管新生劑之后給藥的阿地白介素。32.如權(quán)利要求29所述的應(yīng)用，其特征在于，配制與所述抗血管新生劑同時(shí)給藥的阿地白介素。全文摘要本發(fā)明涉及用于治療癌癥的IL-2組合物和抗血管新生劑聯(lián)合療法。本發(fā)明還提供了減輕與給予IL-2組合物或抗血管新生組合物相關(guān)的毒性和提高與給予IL-2組合物或抗血管新生組合物相關(guān)的效力的方法。文檔編號(hào)A61K38/20GK101146549SQ200680009316公開(kāi)日2008年3月19日申請(qǐng)日期2006年2月17日優(yōu)先權(quán)日2005年2月18日發(fā)明者B·加萊,D·梅內(nèi)賽斯,G·W·威瑟雷爾,K·丹尼-麥斯,L·埃利亞斯,S·L·奧科曼申請(qǐng)人:諾華疫苗和診斷公司