專利名稱：用于治療癌癥的抗-ctla4抗體和吲哚酮組合治療的制作方法
用于治療癌癥的抗-CTLA4抗體和W咮酮組合治療發(fā)明背景癌癥目前是在美國(guó)造成死亡的主要原因。目前，癌癥是通過一種 或三種類型的治療方法的組合治療的手術(shù)，放射和化學(xué)療法?；瘜W(xué) 療法涉及破壞細(xì)胞復(fù)制或細(xì)胞代謝。用于腫瘤性疾病的治療的系統(tǒng)性 化學(xué)療法的負(fù)面作用可能是威脅生命的，并且成為了癌癥患者臨床管 理的主要任務(wù)。定向治療的發(fā)展集中在對(duì)肺瘤細(xì)胞的特異性靶定，同時(shí)不傷害正 常組織，以便減輕副作用方面。定向治療集中在血管發(fā)生方面，因?yàn)?隨著腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，它們需要營(yíng)養(yǎng)來源。由腫瘤細(xì)胞特別產(chǎn)生的生長(zhǎng) 因子(例如，VEGF和PDGF)能刺激血管發(fā)生，以便形成新的血管提供 重要的養(yǎng)分，并且提供腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的手段(Klagsburn and D'Amore， 1996, Cytokine & Growth Factor Reviews 7: 259-270)。另夕卜， 由于它們?cè)谘馨l(fā)生中的作用，治療方法還集中在受體型酪氨酸激酶 (RTK)和它的抑制劑(RTKIs)方面。細(xì)胞培養(yǎng)和基因剔除實(shí)驗(yàn)表明，每一個(gè)受體影響血管發(fā)生的不同 的方面。另外，業(yè)已表明腫瘤生長(zhǎng)容易受到VEGF受體拮抗劑的抗血管 生成作用的影響(例如，參見，Kimet al. , 1993， Nature 362: 841-844; Weidner et al. , 1991， N. Engl. J. Med. 324: 1-8 )。另外，PDGF 在血管發(fā)生中起著重要作用，它能支持正常血管發(fā)育所必需的周皮細(xì) 胞的生長(zhǎng)和存活。因此，實(shí)體腫瘤可以通過酪氨酸激酶抑制劑治療，因?yàn)樗瞿[瘤 依賴于血管發(fā)生，以便形成支持它們生長(zhǎng)所需要的血管。所述實(shí)體腫 瘤包括組織細(xì)胞性淋巴瘤，腦，泌尿生殖道，淋巴系統(tǒng)，胃，咽喉和 肺的癌癥，包括肺腺癌和小細(xì)胞肺癌，結(jié)腸直腸，乳腺和胰腺癌，以 及神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤(NET)。其他例子包括出現(xiàn)Raf-激活的癌基因(例
如，K-ras, erb-B)的超量表達(dá)或激活的癌癥。所述癌癥包括胰腺和 乳腺癌。因此，所述酪氨酸激酶的抑制劑可用于預(yù)防和治療依賴于所 述酶的增殖性疾病。因此，需要開發(fā)用于抑制，調(diào)節(jié)和/或控制酪氨酸 激酶信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的治療方法。癌癥治療的替代和/或補(bǔ)充方法是靶定免疫系統(tǒng)("免疫療法") 而不是和/或作為靶定腫瘤本身的補(bǔ)充。 一種癌癥免疫療法靶定細(xì)胞毒 性T淋巴細(xì)胞-相關(guān)的抗原4 (CTLA4; CD152)，它是在激活的T細(xì)胞 上表達(dá)的細(xì)胞表面受體。CTLA4與它的天然配體，B7. 1(CD80)和B7. 2 (CD86)的結(jié)合向T細(xì)胞發(fā)送負(fù)調(diào)控信號(hào)，并且阻斷該負(fù)信號(hào)會(huì)導(dǎo)致 在動(dòng)物模型內(nèi)產(chǎn)生增強(qiáng)的T細(xì)胞免疫功能和抗胂瘤活性(Thompson and Al 1 ison/層w/7/0^7: 445-450 ( 1997 ); McCoy and LeGros /層w"o/.》 77: 1-10 ( 1999 ))。若干研究業(yè)已證實(shí)使用抗體的CTLA4 阻斷能顯著增強(qiáng)T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷作用，并且可以誘導(dǎo)抗腫瘤免 疫(Leach et al. ， 5We腳271: 1734-1736 ( 1996 ) ; Kwon et al. 尸roc. ScA94: 8099-8103 ( 1997 ) ; Kwon et al.，JcaJ. i"c/. ^S^ 96: 15074-15079 ( 1999 ))。盡管使用抗-CTLA4抗體誘導(dǎo)抗腫瘤反應(yīng)給癌癥治療帶來了很大 希望，但長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)仍然需要開發(fā)使用所述抗體治療腫瘤，特別是實(shí)體 腫瘤的新型療法。類似地，盡管現(xiàn)有的抗癌治療方法取得了成功，但 對(duì)所述治療的完全反應(yīng)很少發(fā)生，并且患者群體對(duì)這些治療方法的抵 觸仍然較大。因此，有必要開發(fā)新的治療方案，特別是能夠增強(qiáng)或加 強(qiáng)其他抗肺瘤制劑，優(yōu)選RTKIs的抗腫瘤活性，同時(shí)減輕現(xiàn)有化學(xué)療 法的細(xì)胞毒性副作用的方法。本發(fā)明滿足了上述要求。發(fā)明概述本發(fā)明包括用于治療需要這種治療的患者的癌癥的方法。該方法 包括給患者組合施用治療有效量的抗-CTLA4抗體或它的抗原結(jié)合部 分，和治療有效量的吲哚酮受體酪氨酸激酶抑制劑(RTKI)。一方面，所述吲味酮RTKI是選自下列一組的至少一種化合物 N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z) - ( 5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H--引咮-3-亞基)甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰，N-[2-(乙氨基)乙 基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)曱基]-2， 4-二甲基-1H-吡咯-3-氨曱酰，和5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫 -3H-吲哚-3-亞基)甲基]-N-[ (2S) -2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2, 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰，或其可以藥用的鹽。另一方面，所述RTKI是N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-。引咮-3-亞基)曱基]-2， 4-二曱基-111-吡咯-3-氨曱酰.另一方面，所述N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[(Z)-(5-氟-2-氧-l, 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨甲酰的治 療有效量為大約25 mg-87. 5 mg/天，而所述N-[2-二乙氨基]乙 基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰是口服的。另一方面，所述治療有效量的N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z)-(5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)曱基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨甲酰的施用量為大約37.5 mg-50 mg/天。另一方面，所述N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[(Z)-(5-氟-2-氧-l， 2-二氬-3H-p引味-3-亞基)甲基]-2， 4-二甲基-lH-吡咯-3-氨曱酰是按照選自下列一組的給藥方案施用的每天施用；每天施用，持續(xù)大約 4周；每天施用，持續(xù)大約4周，然后停藥大約2周；每天施用，持 續(xù)大約3周，然后停藥大約l周；和每天施用，持續(xù)大約2周，然后 停藥大約1周。另一方面，所述治療是選自下列一組的治療方法新輔助治療， 輔助治療，第一線治療和第二線治療。另一方面，所述人抗-CTLA4抗體的治療有效量為大約0.1 mg/kg-50 mg/kg。 另一方面，所述人抗-CTLA4抗體的治療有效量為大約0.3 mg/kg-20 mg/kg。另一方面，所述治療有效量的人抗-CTLA4抗體選自下列一組 至少1 mg/kg，至少3 mg/kg，至少6 mg/kg，至少10 mg/kg，和至 少15 mg/kg。另一方面，所述抗體是按照選自下列一組的給藥方案施用的每 28天施用大約6 mg/kg，每三個(gè)月施用大約6 mg/kg，每28天施用大 約10mg/kg,每三個(gè)月施用大約10mg/kg,每28天施用大約15 mg/kg， 和每三個(gè)月施用大約15 mg/kg。一方面，所述N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-丐l咮-3-亞基)甲基]-2， 4-二甲基-lH-吡咯-3-氨甲酰是以 大約37. 5 mg/天的用量施用的，而所述抗-CTLA4抗體是按照選自下列 一組的給藥方案施用的每三個(gè)月施用大約10mg/kg和每三個(gè)月施用 大約15 mg/kg。另一方面，所述癌癥選自下列一組乳腺癌，前列腺癌，卵巢 癌，胰腺癌，肺癌，急性髓細(xì)胞性白血病，結(jié)腸直腸癌，腎細(xì)胞癌， 胃腸道基質(zhì)癌，和肉瘤。另一方面，所述抗-CTLA4抗體或它的抗原結(jié)合部分，是選自下列 一組的至少一種抗體(a)對(duì)CTLA4的結(jié)合親和力為大約10_8或以上的人抗體，并且它 抑制在CTLA4和B7-l之間的結(jié)合，和抑制在CTLA4和B7-2之間的結(jié)合；(b) 具有以下氨基酸序列的人抗體，包括至少一個(gè)人CDR序 列，它相當(dāng)于選自下列一組的抗體的CDR序列4. 1. 1， 4. 8. 1， 4. 10. 2, 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilimumab (也稱作抗體11.2.1或 CP-675, 206 )， 11. 6. 1， 11. 7. 1. ， 12. 3. 1. 1, 12. 9. 1. 1，和ipilim蘭b;(c) 具有選自下列一組的抗體的重和輕鏈的氨基酸序列的人抗 體4.1.1, 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilim觀b， 11.6.1， 11.7.1.， 12.3.1.1， 12.9.1,1，和ipili瞧ab; (d)抗體或它的抗原結(jié)合部分，它與CTLA4竟?fàn)幗Y(jié)合具有選自 下列一組的抗體的重和輕鏈的氨基酸序列的至少一種抗體4. 1. 1, 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1, ticilim畫b， 11.6.1， 11.7.1., 12.3.1.1， 12.9.1.1，和ipilim腿b;和(e)抗體或它的抗原結(jié)合部分，它與CTLA4交叉竟?fàn)幗Y(jié)合具有 選自下列一組的抗體的重和輕鏈的氨基酸序列的至少一種抗體 4. 1. 1, 4. 8. 1， 4. 10. 2， 4. 13. 1， 4. 14. 3, 6. 1. 1, ticilim腿b, 11. 6. 1， 11.7.1.， 12.3.1.1， 12.9.1.1，和ipilim醒b。一方面，所述抗體是具有選自下列一組的抗體的重和輕鏈的氨基 酸序歹'J的人抗體4.1.1， 4.13.1， ticilimumab和ipilimumab。更優(yōu)選的是，所述抗體是ticilim畫b。另一方面，所述抗體或它的抗原結(jié)合部分，包括重鏈和輕鏈， 其中，所述重鏈的重鏈可變結(jié)構(gòu)域和所述輕鏈的輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的氨 基酸序列選自下列一組(a) SEQ ID NO: 3的氨基酸序列和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列；(b) SEQ ID NO: 15的氨基酸序列和SEQ ID NO: 21的氨基酸序列；(c) SEQ ID NO: 27的氨基酸序列和SEQ ID NO: 33的氨基酸序列；(d) 由核酸序列SEQ ID NO: 1編碼的氨基酸序列和由核酸序 列SEQ ID NO: 7編碼的氨基酸序列；(e) 由核酸序列SEQ ID NO: 13編碼的氨基酸序列和由核酸序 列SEQ ID NO: 19編碼的氨基酸序列；(f) 由核酸序列SEQ ID NO: 25編碼的氨基酸序列和由核酸序 列SEQ ID NO: 31編碼的氨基酸序列；和(g) ipilimumab的重和輕鏈的氨基酸序列。另一方面，所述抗體或它的抗原結(jié)合部分是選自下列一組的抗體 (a) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 4， SEQ ID NO: 5， SEQ ID NO: 6， SEQ ID NO: 10， SEQ ID NO: 11和 SEQ ID NO: 12;(b) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 16， SEQ ID NO: 17， SEQ ID NO: 18， SEQ ID NO: 22， SEQ ID NO: 23和 SEQ ID NO: 24;和(c) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 28， SEQ ID NO: 29， SEQ ID NO: 30， SEQ ID NO: 34， SEQ ID NO: 35和 SEQ ID NO: 36.另一方面，所述抗體或它的抗原結(jié)合部分，包括具有SEQIDNO: 27所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)和具有SEQ ID NO: 33所示氨基酸序 列的輕鏈可變區(qū)。另一方面，所述抗體選自下列一組(a) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 2和 SEQ ID NO: 8;(b) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 14 和SEQ ID NO: 20;和(c) 包括以下序列所示的氨基酸序列的抗體SEQ ID NO: 26 和SEQ ID NO: 32。另一方面，所述抗體是施用p引咮酮RTKI結(jié)束之后施用的，最優(yōu) 選的是，其中，所述患者的免疫反應(yīng)水平大于所述患者在吲哚酮RTKI 施用期間或之后不久的免疫反應(yīng)水平。一方面，所述抗體是在施用吲哚酮RTKI之后大約1-100天施用的。本發(fā)明包括用于治療癌癥的藥用組合物。所述組合物包括治療有 效量的抗-CTLA4抗體或它的抗原結(jié)合部分，和治療有效量的吲哚酮 RTKI，和可以藥用的載體。一方面，所述吲哚酮RTKI是選自下列一組的至少一種化合物 N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ (Z) -(5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3- 亞基)甲基]-2, 4-二甲基-lH-吡咯-3-氨曱酰，N-[2-(乙氨基)乙 基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-1, 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰，和5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-1, 2-二氫 -3H-吲哚-3-亞基)曱基〗-N-[ (2S) -2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2, 4-二甲基-lH-吡咯-3-氨甲酰，或其可以藥用的鹽。附圖的簡(jiǎn)要說明通過結(jié)合附圖閱讀能夠更好地理解本發(fā)明的以上概述和以下詳 細(xì)說明。為了說明本發(fā)明，在附圖中示出了目前優(yōu)選的實(shí)施方案。不 過，應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明并不局限于所示出的確切的結(jié)構(gòu)和手段。在附圖中圖l，包括

圖1A-1D,表示抗-CTLA4抗體4. 1. l的核苷酸和氨基酸 序列。圖1A表示4.1.1重鏈的完整長(zhǎng)度的核苷酸序列(SEQ ID NO: 1)。圖1B表示4.1.1重鏈的完整長(zhǎng)度的氨基酸序列(SEQ IDN0: 2)， 而4.1.1重鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQ ID NO: 3)在括號(hào)"[]" 之間示出。在每一個(gè)4. 1.1重鏈CDR的氨基酸序列下面劃線。所述CDR 序列如下CDR1: GFTFSSHGMH( SEQ ID NO: 4 ); CDR2: VIWYDGRNKYYADSV (SEQ ID NO: 5);和CDR3:GGHFGPFDY (SEQ ID NO: 6)。圖IC表 示4. 1.1輕鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO: 7)。圖ID表示完整長(zhǎng)度的 4.1.1輕鏈的氨基酸序列(SEQ IDN0: 8)，而所述可變區(qū)在括號(hào)"[]" 之間示出(SEQ ID NO: 9)。每一個(gè)CDR的氨基酸序列如下CDR1: RASQSISSSFLA (SEQ IDN0: 10); CDR2: GASSRAT ( SEQ ID NO: 11); 和CDR3:QQYGTSPWT (SEQ ID NO: 12)。圖2，包括圖2A-2D，表示抗-CTLA4抗體4. 13. l的核苷酸和氨基酸 序列。圖2A表示完整長(zhǎng)度的4. 13. 1重鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO:13) 。圖2B表示完整長(zhǎng)度的4. 13. 1重鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO:14) ，而4. 13. 1重鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQ ID NO: 15)在括號(hào) "[]"之間示出。在每一個(gè)4. 13. 1重鏈CDR的氨基酸序列下面劃線。所述CDR序列如下CDR1: GFTFSSHGIH (SEQ ID NO: 16) ; CDR2: VIWYDGRNKDYADSV ( SEQ ID NO: 12);和CDR3:VAPLGPLDY ( SEQ ID NO: 18)。圖2C表示4. 13. 1輕鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO: 19)。 圖2D表示完整長(zhǎng)度的4. 13. 1輕鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 20)， 而所述可變區(qū)在括號(hào)"[]"之間示出(SEQ ID NO: 21)。每一個(gè)CDR 的氨基酸序列如下 CDR1: RASQSVSSYLA ( SEQ ID NO: 22); CDR2: GASSRAT (SEQ IDNO: 23);和CDR3:QQYGRSPFT ( SEQ ID NO: 24)。 圖3，包括圖3A-3D，表示抗-CTLA4抗體ticilimumab的核苷酸和 氨基酸序列。圖3A表示完整長(zhǎng)度的ticilimumab重鏈的核苷酸序列(SEQ ID NO: 25)。圖3B表示完整長(zhǎng)度的t ici 1 imumab重鏈的氨基 酸序列(SEQ ID NO: 26)，而tici 1 imumab重鏈可變區(qū)的氨基酸序列(SEQ IDNO: 27 )在括號(hào)"[]，，之間示出。在每個(gè)t ici 1 imumab重鏈 CDR的氨基酸序列下面劃線。所述CDR序列如下CDR1: GFTFSSYGMH(SEQ ID NO: 28) ; CDR2:VIWYDGSNKYYADSV (SEQ ID NO: 29); 和CDR3: DPRGATLYYYYYGMDV( SEQ IDNO: 30)。圖3C表示tici 1 imumab 輕鏈的核苷酸序列(SEQ IDNO: 31)。圖3D表示完整長(zhǎng)度的tici 1 imumab 輕鏈的氨基酸序列(SEQ ID NO: 32),而所述可變區(qū)在括號(hào)"[]" 之間示出(SEQ ID NO: 33)。每一個(gè)CDR的氨基酸序列如下CDR1: RASQSINSYLD (SEQ IDNO: 34); CDR2:AASSLQS ( SEQ ID NO: 35); 和CDR3:QQYYSTPFT (SEQ ID NO: 36)。發(fā)明的詳細(xì)說明本發(fā)明涉及將抗-CTLA4抗體與至少一種吲哚酮(例如，化合物1， 化合物2和化合物3等)組合用于治療需要所述治療的患者的癌癥。 化合物1或它的L-蘋果酸鹽又被稱為SU11248, SU011248, sunitinib 蘋果酸鹽(USAN/WHO名稱)或SUTENTTM ( L-蘋果酸鹽)。本發(fā)明還 涉及通過組合抗體-吲哚酮的組合與至少 一種其他制劑治療癌癥?？捎糜诒景l(fā)明的抗體和用于生產(chǎn)它們的方法披露于以下文獻(xiàn)中 國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US99/30895，
公開日為2000年6月29日，公開號(hào)為 WO 00/37504(例如，ticilim謹(jǐn)b，又被稱作11. 2. 1和CP-675, 206 )，歐洲專利申請(qǐng)?zhí)朎P 1262193 Al，
公開日為2002年4月12日，美國(guó) 專利申請(qǐng)?zhí)?9/472, 087，目前已被授權(quán)為美國(guó)專利號(hào)6， 682， 736， 美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?9/948, 939，目前公開為美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào) 2002/0086014(例如，ipi 1 imumab,又被稱作10D1和MDX-010，Medarex， Princeton, NJ )，以上每一份文獻(xiàn)都被收作本文參考。盡管本文提供 了與所述抗體相關(guān)的氨基酸和核酸序列的信息，但其他信息可以參見 美國(guó)專利號(hào)6, 682, 736，以及公開號(hào)W0 00/37504， EP 1262193， 和US2002/0086014;在所述申請(qǐng)中提供的序列被收作本文參考。所述抗體用于治療各種癌癥的某些用途披露于美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?10/153, 382，目前公開為美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2003/0086930中，它 被以全文形式收作本文參考。除非在本文中另有說明，本發(fā)明所使用的科技術(shù)語(yǔ)應(yīng)當(dāng)具有本領(lǐng) 域普通技術(shù)人員普遍了解的含義。另外，除非本文另有需要，單數(shù)名 詞應(yīng)當(dāng)包括復(fù)數(shù)形式，并且復(fù)數(shù)形式應(yīng)當(dāng)包括單數(shù)形式。 一般，本文 所披露的用于與細(xì)胞和組織培養(yǎng)，分子生物學(xué)，免疫學(xué)，微生物學(xué)，知的和常用的。本發(fā)明的方法和技術(shù)一般是按照本領(lǐng)域眾所周知的方法操作的， 并且在各種一般性和更專業(yè)的參考文獻(xiàn)中公開，這些文獻(xiàn)是本說明書 中引用和討論的，除非另有說明。所述文獻(xiàn)包括，例如，Sambrookand Russell, #o7ecw7<2r C7oo//7g, J Za6orato/y^PProacA, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY ( 2001 ) ， Ausubel et al.， Cwrre/7f r"oco/s // #o/ecw7ar W/o/o《7， John Wiley & Sons, NY ( 2002 )，以及Harlow and Lane爿Z由r"or/ Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1990 ),以上文獻(xiàn)被收做本文參考。酶促反應(yīng)和純化技術(shù)是按照生 產(chǎn)商的說明進(jìn)行的，正如本領(lǐng)域所常用的或本文所披露的。用于本文 所披露的分析化學(xué)，合成有機(jī)化學(xué)以及醫(yī)學(xué)和藥物化學(xué)相關(guān)的名詞和 實(shí)驗(yàn)室方法和技術(shù)是本領(lǐng)域眾所周知的和常用的。將標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用于化
學(xué)合成，化學(xué)分析，藥物制備，配制和輸送，以及用于化學(xué)治療。 定義在本文中，下面每一個(gè)術(shù)語(yǔ)具有與在該部分相關(guān)的含義。冠詞"一"和"一個(gè)"在本文中用于表示一個(gè)或一個(gè)以上(即，至少一個(gè))所述冠詞的語(yǔ)法賓語(yǔ)。舉例來說，"一個(gè)因子"表示一種因子或一種以上因子。在本文中，二十種常用氨基酸和它們的縮寫遵循常規(guī)用法。參見/卿W3o7og7一~^外/^力e51/.51( 2nd Edi t ion， E. S. GolubandD. R. Gren， Eds. ， Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))， 以上 文獻(xiàn)被收做本文參考。"保守性氨基酸取代"是這樣的取代，其中， 一個(gè)氨基酸殘基被具 有類似化學(xué)性質(zhì)(例如，電荷或疏水性的)側(cè)鏈R基團(tuán)的另一個(gè)氨基 酸殘基取代。 一般，保守性氨基酸取代大體上不會(huì)改變蛋白的功能特 性。當(dāng)兩種或兩種以上氨基酸序列彼此之間的差別是保守性取代時(shí)， 百分序列相同性或相似程度可以上調(diào)，以便校正所述取代的保守性質(zhì)。 實(shí)現(xiàn)這種調(diào)整的方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。例如，參見，Pearson, "/o厶243: 307-31 ( 1994 )。具有類似化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈的氨基酸基因的例子包括1)脂肪族側(cè) 鏈甘氨酸，丙氨酸，纈氨酸，亮氨酸，和異亮氨酸；2)脂肪族-羥基側(cè)鏈絲氨酸和蘇氨酸；3)含酰胺的側(cè)鏈天冬酰胺和谷氦酰 胺；4)芳香族側(cè)鏈苯丙氨酸，酪氨酸，和色氨酸；5)堿性側(cè)鏈 賴氨酸，精氨酸，和組氨酸；6)酸性側(cè)鏈天冬氨酸和谷氨酸；和 7)含硫的側(cè)鏈半胱氨酸和曱硫氨酸。優(yōu)選的保守性氨基酸取代基 團(tuán)是纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸，苯丙氨酸-酪氨酸，賴氨酸-精氨酸， 丙氨酸-纈氨酸，谷氨酸-天冬氨酸，和天冬酰胺-谷氨酰胺。另外，保守性取代是在PAM25G log-相似形矩陣中具有正值的任 何變化，參見Gonnet et al. ， Sc/e/2ce 256: 1443-45 ( 1992 )，,皮 收做本文參考。"適當(dāng)保守性"取代是在PAM250 log-相似形矩陣中具
有非負(fù)值的任何變化。優(yōu)選的氨基酸取代是以下取代(1 )降低對(duì)蛋白水解的敏感性， (2)降低對(duì)氧化作用的敏感性，(3)改變形成蛋白復(fù)合物的結(jié)合親 和力，和(4)產(chǎn)生或改變所述類似物的其他物理化學(xué)或功能特性。包列的各種突變型蛋白。例如，可以在天然存在的序列(優(yōu)選在形成分 子間接觸的結(jié)構(gòu)域以外的多肽部分)上形成一個(gè)或多個(gè)氨基酸取代(優(yōu) 選保守性氨基酸取代)。保守性氨基酸取代應(yīng)當(dāng)不會(huì)顯著改變親本序 列的結(jié)構(gòu)特征(例如，氨基酸置換應(yīng)當(dāng)不會(huì)破壞在親本序列上出現(xiàn)的 螺旋，或破壞親本序列所特有的其他類型的二級(jí)結(jié)構(gòu))。本領(lǐng)域公認(rèn) 的多肽的二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的例子可以參見戶rote/"s, i7rwct"res a/2d #o7eci//<2_r尸r/z c/p7es( Creighton, Ed. ， W. H. Freeman and Company ， New York ( 1984 ) ); //zfrof/z;cf 2'0/7 f<9 ^Profe//3 57rwcti/re( C. Branden and J. Tooze， eds. ， Garland Publishing, New York, N. Y. ( 1991 )); 和Thornton et al. , 354: 105 ( 1991 )，以上文獻(xiàn)分別-陂收做本文參考。多肽的序列相似形，又被稱為序列相同性，通常是使用序列分析 軟件測(cè)定的。蛋白分析軟件使用指定給各種取代，缺失和其他修飾， 包括保守性氨基酸取代的相似性參數(shù)比較相似序列。例如，GCG包括 諸如"Gap"和"Bestfit"的程序，它可以與缺省參數(shù)一起用于測(cè)定密切 相關(guān)的多肽之間的序列同源性或序列相同性，如來自不同生物物種的 同源多肽或野生型蛋白和它的突變型蛋白之間的比較。例如，參見， GCG Version 6.1。還可以使用FASTA利用缺省或推薦的參數(shù)比較多肽 序列，GCG Version 6.1. FASTA中的程序(例如,FASTA2和FASTA3 )提供了查詢序列和檢索序列之間最佳重疊部分的比對(duì)和百分序列相同 性(Pearson, #"Ao& 183: 63-98 ( 1990 ) ; Pearson,#eMocr;y "/o厶132: 185-219 ( 2000 ))。比較本發(fā)明的序列和包括來自不同生物的大量序列的數(shù)據(jù)庫(kù)的另 一種優(yōu)選算法是計(jì)算機(jī) 程序BLAST,特別是blastp或tblastn，使用缺省參數(shù)。例如，參見，Altschul et al.， /. 215: 403—410 ( 1990 ) ; Altschulet al. ， #"c/e2'c Jc/^ 25: 3389-402 ( 1997 );,皮收j故本文參考。完整的"抗體"包括至少兩個(gè)通過二硫鍵連接的至少兩個(gè)重(H) 鏈和兩個(gè)輕(L)鏈。 一般參見，/^//2t/3/z7e/2rs/ /yzw7i//70/0《/, Ch. 7(Paul, W. ， ed. ， 2nd ed. Raven Press, N. Y. ( 1989 ))(在各方面都以它 的全文形式收作本文參考)。每一個(gè)重鏈由重鏈可變區(qū)(HCVR或Vh) 和重鏈恒定區(qū)(Ch)組成。所述重鏈恒定區(qū)由三個(gè)結(jié)構(gòu)域，CHl， CH2和 CH3組成。每一個(gè)輕鏈由輕鏈可變區(qū)(LCVR或Vl)和輕鏈恒定區(qū)組成。 所述輕鏈恒定區(qū)由一個(gè)結(jié)構(gòu)域Cj且成。所述Vh和Vl區(qū)還可以進(jìn)一步 細(xì)分成超變區(qū)，被稱為互補(bǔ)性決定區(qū)(CDR)，在它們之間分布有更保 守的被稱為框架區(qū)(FR)的區(qū)域。每一個(gè)Vh和Vl由三個(gè)CDRs和四個(gè) FRs組成，從氨基末端到羧基末端按以下順序排列FRl， CDR1, FR2， CDR2， FR3， CDR3， FR4。每一個(gè)結(jié)構(gòu)域的氨基酸排列符合以下定義Institutes of Health, Bethesda, MD ( 1987 and 1991 ))，或Chothia & Lesk， /. "/o/. 196: 901-917 ( 1987) ; Chothia et al.,m"re 342: 878-883 ( 19890 。重和輕鏈的可變區(qū)包括與抗原相互作用的結(jié)合結(jié)構(gòu)域。所迷抗體 的恒定區(qū)可以介導(dǎo)免疫球蛋白與宿主組織或因子的結(jié)合，包括免疫系 統(tǒng)的各種細(xì)胞(例如，效應(yīng)細(xì)胞)，和典型補(bǔ)體系統(tǒng)的第一種成分(Clq )。術(shù)語(yǔ)"抗體"可以包括完整抗體的抗原結(jié)合部分，它保留了專一 性結(jié)合完整抗體的抗原，例如，CTLA4的能力?？乖Y(jié)合部分可以通 過重組DNA技術(shù)或通過完整抗體的酶促或化學(xué)裂解生產(chǎn)。抗原結(jié)合部分的例子包括(i)Fab片段，由VL， VH， CL和CH144 結(jié)構(gòu)域組成的一價(jià)片段；(ii) F (ab') 2片段，包括兩個(gè)通過二硫鍵 在鉸鏈區(qū)連接的Fab片段的二價(jià)片段；(iii)由VH和CHl結(jié)構(gòu)域組 成的Fd片段；(iv)由抗體的一個(gè)臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片 段，(v)單一結(jié)構(gòu)域抗體("dAb")，它由VH結(jié)構(gòu)域組成，參見Ward etal.， vVa/^re 341: 544-546 ( 1989 );和(vi)獨(dú)立的互補(bǔ) 決定區(qū)(CDR)。另外，盡管Fv片段的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域Vh和Vl是由獨(dú)立的 基因編碼的，但可以通過重組方法，用合成接頭將它們連接在一起， 使它們成為一個(gè)蛋白鏈，其中，Vh和Vl區(qū)配對(duì)，以便形成一價(jià)分子(被 稱作單鏈Fv( scFv);例如，參見，Birdetal. Sc/e/ ce 242: 423-426(1988 );和Huston et al.尸roc. yVa〃. Jcad. Sc人^S^ 85: 5879-5883(1988 ))。所述單鏈抗體屬于術(shù)語(yǔ)"抗體"的范圍。"雙特異性抗體"具有兩種不同的結(jié)合專一性，例如，參見，美 國(guó)專利號(hào)5, 922， 845和美國(guó)專利號(hào)5， 837, 243; Zeilder /. /邁邁w o入 163: 1246-1252 ( 1999 ); Somasundaram 腸.J/7〃6嶺9: 47-54(1999 ) ; Keler Ca/ cer 57: 4008-4014 ( 1997 )。例如，本發(fā)明提供了具有細(xì)胞表面抗原例如人CTLA4的一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，和效應(yīng) 細(xì)胞表面上的Fc受體的第二個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的雙特異性抗體。本發(fā)明還提 供了多特異性抗體，它具有至少三個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。術(shù)語(yǔ)"雙特異性抗體"還包括"雙抗體"。雙抗體是二價(jià)的， 雙特異性抗體，其中，Vh和1結(jié)構(gòu)域是在一個(gè)多肽鏈上表達(dá)的。不過， 使用太短的接頭可以在同一條鏈的兩個(gè)結(jié)構(gòu)域之間實(shí)現(xiàn)配對(duì)，以便強(qiáng) 制所述結(jié)構(gòu)域與另一條鏈上的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對(duì)，并且形成兩個(gè)抗原結(jié) 合4立點(diǎn)(例々口，參見，Holliger et al.，戶roc. ^a〃. Sc/. 90: 6444-6448 ( 1993 ) ; Poljak et al. , 5Y藩&re 2: 1121-1123(1994 ))。術(shù)語(yǔ)"人抗體"或"人序列抗體"在本文中可以交換使用，它包括 具有來自人種系免疫球蛋白序列的可變和恒定區(qū)(如果有的話)的抗的氨基酸殘基(例如，通:體外隨:或位點(diǎn)專二誘變或通過體內(nèi)體細(xì) 胞誘變引入的突變)。不過，在本文中，術(shù)語(yǔ)"人抗體"并不包括"嵌 合"抗體，其中，來自諸如小鼠的其他哺乳動(dòng)物物種或種系的CDR 序列業(yè)已嫁接到人類框架序列上(即，"人源化"或PRIMATIZED 抗體)。
在本文中，術(shù)語(yǔ)"嵌合抗體"表示包括來自兩個(gè)或兩個(gè)以上不同抗體的區(qū)域的抗體。在一種實(shí)施方案中，來自一個(gè)或一個(gè)以上CDRs 來自人抗-CTLA4抗體。在另一種實(shí)施方案中，所有CDRs來自人抗 -CTLA4抗體。在另一種實(shí)施方案中， 一個(gè)以上人抗-CTLA4抗體的CDRs 可以組合成嵌合人抗體。例如，嵌合抗體可以包括來自第一人抗-CD40 抗體輕鏈的CDR1，來自第二人抗-CTLA4抗體輕鏈的CDR2，以及CDR3 和來自第三種人抗-CTLA4抗體輕鏈的CDR3，而來自重鏈的CDRs可以 來自一種或一種以上其他抗-CD40抗體。另外，所述框架區(qū)可以來自 一種相同的抗-CTLA4抗體或一種或多種不同的人類抗體。另外，正如上文所討論的，嵌合抗體包括含有來自一個(gè)以上物種 的種系序列的一部分的抗體。在本文中，術(shù)語(yǔ)"有效量"，或"治療有效量"表示在給哺乳動(dòng) 物，優(yōu)選人類施用時(shí)，與在缺少該化合物時(shí)檢測(cè)到的反應(yīng)相比能介導(dǎo) 可檢測(cè)的治療反應(yīng)。治療反應(yīng)，例如，但不局限于抑制和/或減弱腫瘤 生長(zhǎng)，腫瘤大小，和轉(zhuǎn)移等，可以通過本領(lǐng)域公知的多種方法，例如， 包括本文所披露的方法方便地評(píng)估。技術(shù)人員可以理解的是，本文所使用的化合物或組合物的有效量 可以改變，并且可以才艮據(jù)多種因素方便地確定，如要治療的疾病或癥 狀，疾病階段，接受治療的哺乳動(dòng)物的年齡，健康和體能狀態(tài)，疾病 的嚴(yán)重性，和所施用的特定化合物等。"治療有效量"，或"有效量"是指用于將一種或多種腫瘤疾病癥 狀減輕到某種程度所需要的藥物數(shù)量，包括但不局限于l)癌細(xì)胞數(shù) 量的減少；2)肺瘤尺寸的縮??；3)抑制(即某種程度的延緩，優(yōu)選 阻止)癌細(xì)胞滲入外周器官；3)抑制(即，某種程度延緩，優(yōu)選阻止) 腫瘤轉(zhuǎn)移；4)在某種程度上抑制腫瘤生長(zhǎng)；5)在某種程度上緩解或 減輕與疾病相關(guān)的一種或多種癥狀；和/或6)緩解或減輕與施用抗癌 藥物相關(guān)的副作用。在本文中，術(shù)語(yǔ)"竟?fàn)?在針對(duì)抗體時(shí)，表示第一抗體，或其抗 原結(jié)合部分，與第二抗體，或抗原結(jié)合部分竟?fàn)幗Y(jié)合，其中，與在缺
少第二抗體時(shí)第一抗體的結(jié)合相比，在存在第二抗體時(shí)，第一抗體與 它的同源表位的結(jié)合可檢測(cè)地減弱。另外，在存在第一抗體時(shí)，第二 抗體與它的表位的結(jié)合也可能，但不一定可檢測(cè)地減弱。就是說，第 一抗體可以抑制第二抗體與它的表位結(jié)合，而第二抗體沒有抑制第一 抗體與它的相應(yīng)的表位的結(jié)合。不過，每一種抗體都可檢測(cè)地抑制其 他抗體與它的同源表位或配體結(jié)合，無(wú)論是以相同，更大或更小的程度，所述抗體被稱為彼此"交叉竟?fàn)?結(jié)合它們的相應(yīng)的表位。例如，交叉竟?fàn)幙贵w可以與本發(fā)明的抗體(例如，3.1.1， 4.1.1， 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1, 4.14.3， 6.1.1， ticilimumab， 11.6.1， 11.7.1， 12.3.1.1，和12. 9. 1. 1 )結(jié)合的所述表位或表位部分結(jié)合。本發(fā)明包括竟?fàn)幒徒徊婢範(fàn)幙贵w。無(wú)論發(fā)生所述竟?fàn)幓蚪徊婢範(fàn)幍臋C(jī)制如何(例 如，空間位阻，構(gòu)象變化，或與共同表位或它的部分結(jié)合等)，本領(lǐng) 域技術(shù)人員可以理解的是，根據(jù)本文所披露的內(nèi)容，所述竟?fàn)幒?或交 叉竟?fàn)幙贵w屬于本發(fā)明的范圍，包括并且可用于本文所披露的方法。術(shù)語(yǔ)"表位"包括能夠?qū)Ｒ恍越Y(jié)合免疫球蛋白或T-細(xì)胞受體的任 何蛋白決定子。表位決定子通常由諸如氨基酸或糖側(cè)鏈分子的化學(xué)活 性表面基團(tuán)組成，并且通常具有特殊的三維結(jié)構(gòu)特征，以及特殊的電 荷特征。構(gòu)象和非構(gòu)象表位的差別在于在存在變性溶劑情況下，與前 者的結(jié)合會(huì)消失，而與后者的結(jié)合則不會(huì)消失。在本文中，術(shù)語(yǔ)"引咮酮"或"p引味酮受體酪氨酸激酶抑制劑"， 表示具有包括2-吲哚酮核心的結(jié)構(gòu)的任何化合物，例如，化合物l， 它的任何代謝物，包括但不局限于下面所示出的化合物2，和化合物3。<formula>formula see original document page 21</formula><formula>formula see original document page 22</formula>化合物2所述化合物4皮露于以下文獻(xiàn)中國(guó)際乂>開號(hào)W0 2003/016305 (US 2003/0069298 )，WO 2005/033098(US 2005/0118255 )和WO 2004/024127 (US 2004/229229 )，以及美國(guó)專利號(hào)6， 573， 293和6, 653， 308， 上述每一份文獻(xiàn)都以它們的全文形式收作本文參考，并且，其中所述 化合物包括針對(duì)至少一種受體酪氨酸激酶，以及它們的任何可以藥用 的鹽的任何活性的可檢測(cè)的抑制活性。更優(yōu)選的是，所述化合物可檢 測(cè)地抑制KIT, FLT3, VEGFR，和/或PDGFR. 更優(yōu)選的是，所述化合 物可檢測(cè)地抑制KIT, FLT3， VEGFR和PDGFR，更優(yōu)選的是，所述化 合物是化合物1以及它的活性代謝物化合物2，和化合物3。在本文中，術(shù)語(yǔ)"說明材料"包括出版物，錄音，圖表，或任何 其他表達(dá)介質(zhì)，可將它用于傳達(dá)有關(guān)化合物，組合和/或本發(fā)明的組合 物在用于影響，緩解或治療本文所引用的各種疾病或失調(diào)的試劑盒中 的用途。選擇性地或可替代地是，所述說明材料可以描述緩解細(xì)胞， 組織或哺乳動(dòng)物的疾病或失調(diào)的一種或多種方法，正如在本文的其他 部分所披露的。
例如，所述試劑盒的說明材料可以貼在容納本發(fā)明的化合物和/ 或組合物的容器上或與容納所述化合物和/或組合物的容器一起運(yùn)送。 另外，所述說明材料可以與容器分開運(yùn)送，以便受體合作性地使用所 述說明材料和化合物。除非另有說明，術(shù)語(yǔ)"患者"或"對(duì)象"可以交換使用，并且表示諸 如人類患者和非人靈長(zhǎng)類的哺乳動(dòng)物，以及獸醫(yī)對(duì)象，如兔子，大鼠 和小鼠，以及其他動(dòng)物。優(yōu)選的是患者表示人類。在本文中，短語(yǔ)"可以藥用的鹽，，包括酸或堿基團(tuán)的鹽，它可 以存在于化合物中。堿性化合物能夠與各種無(wú)機(jī)和有機(jī)酸形成多種鹽。 可用于制備可以藥用的所述堿性化合物的酸加成鹽的酸是能夠形成無(wú) 毒的酸加成鹽的酸，即，含有可以藥用的陰離子的鹽，如乙酸鹽、苯 磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫鹽、二曱苯磺酸鹽、酒石酸氫 鹽、硼酸鹽、溴化物、乙二胺四乙酸鉤、右旋樟腦磺酸、碳酸鹽、氯化物、克拉維酸、檸檬酸鹽、二氫氯化物、乙二胺四乙酸鹽、edislyate、 丙酸酯月桂硫酸酯、乙磺酸鹽、乙基琥珀酸鹽、延胡索酸鹽、紅霉素、 葡糖酸鹽、谷氨酸、甘鉍胂、己基間苯二酚酸鹽、海巴青霉素、氫溴 化物、氫氯化物、碘化物、異硫代疏酸鹽、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂 酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、硫酸二曱酯、粘 液酸鹽、萘磺酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、雙羥萘酸鹽(embonate)、 棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、多聚半乳糖酪酸鹽、水楊酸鹽、 硬脂酸鹽、堿式乙酸鹽、琥珀酸鹽、丹寧酸鹽、酒石酸鹽、氯茶堿鹽、 甲苯磺酸鹽、thiethiodode、和戊酸鹽。化合物1-3的優(yōu)選的鹽披露 于PCT公開號(hào)2003/016305，美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/956， 420中，申請(qǐng) 曰為2004年9月30日，和PCT申請(qǐng)?zhí)朠CT/IB2004/003070，申請(qǐng)日 為2004年9月20日，以上文獻(xiàn)內(nèi)容4皮以它們的全文形式收作本文參 考?；衔?的特別優(yōu)選的鹽包括蘋果酸鹽，最優(yōu)選的是L-蘋果酸鹽。 化合物3的特別優(yōu)選的鹽是馬來酸鹽。在本文中，描述多肽序列的常用符號(hào)如下多肽序列的左端是氨 基末端；多肽序列的右端是羧基末端。在本文中，短語(yǔ)"特異性結(jié)合"表示化合物，例如，蛋白，核 酸和抗體等能識(shí)別并且結(jié)合特定分子，但基本上不能識(shí)別或結(jié)合樣品中的其他分子。例如，抗體或肽抑制劑能識(shí)別并且結(jié)合樣品中的同源配體(例如，抗-CTLA4抗體能與它的同源抗原CTLA4結(jié)合)，但是基 本上不能識(shí)別或結(jié)合樣品中的其他分子。因此，在指定的分析條件下， 特定的結(jié)合部分(例如，抗體或抗原結(jié)合部分)能優(yōu)選結(jié)合特定目標(biāo) 分子，但是不能大量結(jié)合存在于測(cè)試樣品中的其他成分。多種分析方 法可用于選擇能專一性地結(jié)合感興趣的分子的抗體。例如，固相ELISA 免疫測(cè)定，免疫沉淀反應(yīng)，BIAcore和Western印跡分析;故用于鑒定 能與CTLA4專一性起反應(yīng)的抗體。 一般，專一性或選擇性反應(yīng)至少是 背景信號(hào)或噪音的兩倍，更常用的是，是背景的10倍以上，更具體地 講，當(dāng)平衡離解常數(shù)(KJ < 1 ^M，優(yōu)選< 100 nM，最優(yōu)選《10nM 時(shí)，抗體就被稱為"專一性地結(jié)合"抗原。術(shù)語(yǔ)"K。"表示特定抗體-抗原相互作用的平衡離解常數(shù)。 在本文中，"大體上純的"表示目標(biāo)物質(zhì)是所存在的占優(yōu)勢(shì)的物質(zhì)(即，根據(jù)摩爾數(shù)計(jì)算，它比該組合物中的任何其他一種物質(zhì)的含量 更豐富)，優(yōu)選的是，大體上純化的部分是組合物，其中，目標(biāo)物質(zhì)(例如，抗-CTLA4抗體)至少占存在的所有大分子類型的大約50%(以 摩爾數(shù)計(jì)算)。 一般，大體上純的組合物占該組合物中所存在的所有 大分子物質(zhì)的大約80%以上，更優(yōu)選85%， 90%， 95%，和99°/。以上。最 優(yōu)選的是，所述目標(biāo)物質(zhì)被純化到大體上同質(zhì)(通過常規(guī)檢測(cè)方法不 能檢測(cè)到組合物中的污染物質(zhì))，其中，所述組合物大體上包括單一 的大分子物質(zhì)。在本文中，"治療"表示減少患者出現(xiàn)發(fā)病癥狀的頻率(即，腫 瘤生長(zhǎng)和/或轉(zhuǎn)移，或由免疫細(xì)胞的數(shù)量和/或活性介導(dǎo)的其他作用 等)。該術(shù)語(yǔ)包括施用本發(fā)明的化合物或制劑，以便預(yù)防或延緩一定 的癥狀，并發(fā)癥，或生物化學(xué)現(xiàn)象的出現(xiàn)(例如，PSA水平的升高)， 緩解所述癥狀或控制或抑制疾病，癥狀，或失調(diào)的進(jìn)一步發(fā)展。治療 可以是預(yù)防性(預(yù)防或推遲疾病發(fā)作，或預(yù)防臨床或亞臨床癥狀的出
現(xiàn))或治療性抑制或緩解發(fā)病之后的癥狀。"組合治療"包括施用蛋白激酶抑制劑，優(yōu)選化合物l，化合物2， 和化合物3，更優(yōu)選的是，化合物l，和化合物2，最優(yōu)選的是，化合 物1,和CTLA4抗體作為特定治療方案的一部分，以便通過上述治療 制劑的協(xié)同作用提供有益效果。所述組合的有益效果包括但不局限于 來自所述治療劑組合的藥物動(dòng)力學(xué)或藥效協(xié)同作用。組合施用所述治 療劑通常是在特定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行的(根據(jù)所選擇的組合，通常以分鐘， 小時(shí)，天或周計(jì)算)。 一般，"組合治療"不包括施用兩種或兩種以上 所述治療劑作為獨(dú)立的單一療法的部分，所述方案能偶爾和任意地導(dǎo) 致本發(fā)明的組合。"組合治療"包括按順序施用所述治療劑，就是說， 其中，每一種治療劑是在不同的時(shí)間施用的，并且大體上同時(shí)施用所 述治療劑或至少兩種所述治療劑。例如，大體上同時(shí)施用可以通過給 對(duì)象施用具有固定比例的每一種治療劑的單一的膠嚢或每一種治療劑 的多個(gè)單一膠嚢的組合。依次或大體上同時(shí)施用每一種治療劑可以通過任何合適的途徑實(shí)現(xiàn)，包括但不局限于口服途徑，靜脈內(nèi)途徑，肌 內(nèi)途徑，通過黏膜組織直接吸收。所述治療劑可以通過相同的途徑或 不同的途徑施用。例如，特定組合的第一種治療劑可以通過靜脈注射 施用，而所述組合的其他治療劑可以口服。另外，例如，兩種治療劑 都可以口服或兩種治療劑都可以通過靜脈注射施用。施用所述治療劑 的順序不受狹隘的限制。"組合治療"還包括施用進(jìn)一步與其他生物活 性成分(如，但不局限于第二種和不同的抗腫瘤藥)和非藥物治療(如， 但不局限于手術(shù)或放射治療)組合的上述治療劑的施用。其中，所述 組合治療還包括放射治療，所述放射治療可以在任何合適的時(shí)間進(jìn)行， 只要可以獲得所述治療劑和放射治療的協(xié)同作用的有益效果就行。例 如，在適當(dāng)場(chǎng)合下，當(dāng)施用治療劑時(shí)臨時(shí)取消放射治療幾天或幾周時(shí)， 仍然能獲得所述有益效果。說明本發(fā)明涉及新的治療方法，包括給需要治療的患者同時(shí)-組合施
用抗-CTLA4抗體和p引咮酮，優(yōu)選化合物1,化合物2或化合物3用于 治療癌癥，例如，腎細(xì)胞癌，乳腺癌，前列腺癌，胃腸基質(zhì)癌，結(jié)腸 直腸癌，肺癌，非-何杰金氏淋巴瘤，曱狀腺癌，腦瘤，卵巢癌，膀胱 癌，肝細(xì)胞癌，子宮頸癌，頭頸癌，急性和慢性白血病，骨髓和淋巴 性白血病，胰腺癌，何杰金氏病，黑素瘤，皮膚扁平細(xì)胞癌，卡波濟(jì) 氏肉瘤，其他類型的肉瘤(例如，脂肉瘤，骨肉瘤)等。
在一種實(shí)施方案中，所述方法包括與抗體組合施用p引味酮RTKI。 一方面，所述方法提供了癌癥的新輔助，輔助，第一線，和笫二線治 療。在另一種實(shí)施方案中，所述抗體-巧l味酮RTKI組合與至少一種其 他治療劑一起施用，例如，但不局限于不針對(duì)CTLA4的其他單克隆抗 體(例如，AVASTIN (貝伐單抗)，MYELOTARG (吉妥單抗)，BEXXAR (托西莫單抗),RIT狙N(rituximab)，腿CEPTIN( trastuz畫b))， 包括能增強(qiáng)免疫反應(yīng)的抗體(例如，抗-CD40刺激劑抗體)，或具有 類似作用的蛋白配體，能激活抗原呈遞細(xì)胞(樹突細(xì)胞，巨嗟細(xì)胞，B 細(xì)胞，單核細(xì)胞)的制劑，包括1型干擾素(例如，干擾素oc和P); 干擾素Y; BCG;能以任何和所有形式提供腫瘤抗原的制劑，包括蛋 白抗原，肽抗原，全細(xì)胞裂解物及其衍生物，遺傳編碼的抗原(例如， 腺病毒編碼的抗原)；免疫系統(tǒng)的細(xì)胞組分，它在體內(nèi)或體外進(jìn)行過 改變，以便增強(qiáng)它們的免疫特性(例如，自體樹突細(xì)胞，淋巴細(xì)胞， 熱休克蛋白等)；化學(xué)治療劑，例如，但不局限于，環(huán)磷酰胺，曱氨 蝶呤，依托泊苷，阿霉素，紫杉烷，氟尿嘧啶，阿糖胞苷(AraC), 以及含鉑制劑等。
I.抗-CTLA4抗體
正如本文上面所指出的，優(yōu)選的抗-CTLA4抗體是能專一性結(jié)合人 CTLA4的人抗體。典型的人抗-CTLA4抗體詳細(xì)披露于以下文獻(xiàn)中國(guó) 際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US99/30895，
公開日為2000年6月29日，公開號(hào)為W0 00/37504，歐洲專利申請(qǐng)?zhí)朎P 1262193 Al，
公開日為2002年4月 12日，和美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?9/472, 087，現(xiàn)在已授權(quán)給Hanson等，
美國(guó)專利號(hào)6， 682， 736，以及美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?9/948， 939，公開號(hào) 為US2002/0086014，以上文獻(xiàn)的完整內(nèi)容被收作本文參考。所述抗體 包括但不局限于，3.1.1， 4.1.1， 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1, ticilim腿b， 11.6.1， 11.7.1， 12.3.1.1，和12. 9. 1.1,以 及ipilimumab。人抗體提供了本發(fā)明治療方法的顯著優(yōu)點(diǎn)，因?yàn)椋A(yù)反應(yīng)。
本發(fā)明的有用的人抗-CTLA4抗體的特征在以下文獻(xiàn)中有充分的 介紹W0 00/37504， EP 1262193，和美國(guó)專利號(hào)6， 682， 736,以及 美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)US2002/0086014和US2003/0086930，以及上述 文獻(xiàn)中所提供的氨基酸和核酸序列，以它們的全文形式收作本文參考。 簡(jiǎn)單地講，本發(fā)明的抗體包括具有抗體的重和輕鏈的氨基酸序列的抗 體，例如，但不局限于，抗體3. 1. 1， 4. 1. 1， 4. 8. 1, 4. 10. 2， 4. 13. 1， 4. 14. 3， 6. 1. 1， ticilimumab, 11. 6. 1, 11. 7. 1, 12. 3. 1. 1， 12. 9. 1. 1， 和ipilimumab。本發(fā)明還涉及具有所述抗體的重和輕鏈的CDRs的氨 基酸序列的抗體，以及在CDR區(qū)具有變化的抗體，參見上述申請(qǐng)和專 利。本發(fā)明還涉及具有所述抗體的重和輕鏈的可變區(qū)的抗體。在另一 種實(shí)施方案中，所述抗體選自具有以下抗體的重和輕鏈的完整長(zhǎng)度， 可變區(qū)，或CDR，氨基酸序列的抗體3. 1. 1， 4. 1. 1， 4. 8. 1， 4. 10. 2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1, ticilimumab， 11.6.1， 11.7.1, 12.3.1.1， 和12. 9.1. 1, 和ipilimumab。
在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明包括抗體-治療劑組合，包括在以下 文獻(xiàn)中披露的人抗-CTLA4抗體美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?9/948, "9,公開 號(hào)為美國(guó)專利申請(qǐng)/>開號(hào)2002/0086014和2003/0086930，以及所述 文獻(xiàn)所引用的參考文獻(xiàn)，包括但不局限于，MAb 10D1 (ipilimumab, Medarex, Princeton, NJ )。更優(yōu)選的是，抗-CTLA4抗體是ipilim醒b。
在另一種實(shí)施方案中，vh的氨基酸序列包括SEQ ID N0s: 3， l5 和27所示氨基酸序列。在另一種實(shí)施方案中，所述Vl包括SEQ IDN0s: 9， 21和33所示氨基酸序列。更優(yōu)選的是，Vh和Vl包括SEQ ID NO:
3(VH 4. 1.1)和SEQ ID NO: 9 ( VL 4. 1. 1 )分別所示的氨基酸序列； SEQ ID NO: 15 (VH 4.13. 1)和SEQ ID NO: 21 ( VL 4.13.1)分別 所示的氨基酸序列；以及EQIDNO: 27 (VH 11. 2. 1 )和SEQ ID NO: 33 (VL11.2. 1)分別所示的氨基酸序列。
在另一種實(shí)施方案中，所述重鏈的氨基酸序列包括由包括SEQ ID NOs: 1， 13，和25所示核酸序列的核酸編碼的氨基酸序列。在另一種 實(shí)施方案中，所述輕鏈包括SEQ IDNOs: 7， 19和31所示核酸序列的 核酸編碼的氨基酸序列。更優(yōu)選的是，所述重和輕鏈包括由SEQ ID NO: 1 (重鏈 4. 1. 1)和SEQ ID NO: 7 (輕鏈4.1.1)分別所示核酸序列 的核酸編碼的氨基酸序列；由SEQ ID NO: 13(重鏈 4. 13. l)和SEQ ID NO: 19(輕鏈 4. 13. 1 )分別示出的核酸序列編碼的氨基酸序列； 以及由SEQ ID NO: 25 (重鏈11. 2. 1 )和SEQ ID NO: 31 (輕鏈11. 2. 1 ) 分別示出的核酸序列編碼的氨基酸序列。
另外，所述抗體可以包括重鏈氨基酸序列，包括來自VH 3-30或 3-33基因的人CDR氨基酸序列，或其中的保守性取代或體細(xì)胞突變。 所述抗體還可以在它的輕鏈上包括來自A27或012基因的CDR區(qū)，即， 少于五個(gè)，或少于十個(gè)所述突變。所述抗體還可以包括來自所述基因 的框架區(qū)，包括由少于五個(gè)，或少于十個(gè)氨基酸差異的框架區(qū)。所述 抗體還包括本文所披露的框架區(qū)，它被突變成能體現(xiàn)原始種系序列。
在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，所述抗體能抑制CTLA4和B7-1, B7-2，或這兩者之間的結(jié)合。優(yōu)選的是，所述抗體可以抑制與ICs。為 大約100 nM或以下，更優(yōu)選的是，大約10nM或以下，例如，大約5 nM或以下，或更優(yōu)選的是，大約2 nM或以下，更優(yōu)選的是，例如， 大約1 nM或以下的B7-l結(jié)合。同樣，所述抗體可以抑制與ICs。為大 約100 nM或以下，更優(yōu)選的是，10 nM或以下，例如，更優(yōu)選的是， 大約5 nM或以下，更優(yōu)選的是，大約2 nM或以下，或更優(yōu)選的是， 大約1 nM或以下的B7-2結(jié)合。
另外，在另一種實(shí)施方案中，抗-CTLA4抗體對(duì)CTLA4的結(jié)合親和 力為大約l(T或以上的親和力，更優(yōu)選的是，大約10—9或以上的親和
力，更優(yōu)選的是，大約10_1°或以上的親和力，更優(yōu)選的是，大約1011
或以上的親和力。
所述抗-CTLA4抗體可以與具有選自下列一組的抗體的重和輕鏈 氨基酸序列的抗體竟?fàn)幗Y(jié)合4.1.1, 6.1.1, ticilimumab, 4.13.1 和4.14.3。另外，所述抗-CTIjU抗體可以與ipilimumab抗體竟?fàn)幗Y(jié) 合。
在另一種實(shí)施方案中，所述抗體優(yōu)選與具有抗體4. 1. 1， 4.13.1， 4.14.3, 6. 1. l.或ticilimumab的重和輕鏈序列，可變重和可變輕鏈 序列，和/或重和輕CDR序列的抗體交叉竟?fàn)帯＠?，所述抗體可以 與特定表位結(jié)合，具有選自下列一組的抗體的重和輕鏈氨基酸序列， 可變序列和/或CDR序列的抗體可以結(jié)合所述表位4.1.1， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1，或ticilimumab。在另一種實(shí)施方案中，所述抗體能 夠與具有MDX-D010重和輕鏈序列，或抗原結(jié)合序列的抗體交叉竟?fàn)帯?br> 在另一種實(shí)施方案中，本發(fā)明是使用抗-CTLA4抗體實(shí)施的，它包 括含有抗體的CDR-l, CDR-2，和CDR-3的氨基酸序列的重鏈，和含有 抗體的CDR-l, CDR-2，和CDR-3的氨基酸序列的輕鏈，所述抗體選自 下列一組3.1.1， 4.1.1, 4.8.1, 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilimumab, 11.6.1, 11.7.1, 12.3.1.1，和12.9.1.1，或具有選 自下列一組的變化的CDR序列保守性變化，其中，所述保守性變化 選自下列一組非極性殘基被其他非極性殘基取代，極性帶電荷的殘 基被其他極性不帶電荷的殘基取代，極性帶電荷的殘基被其他極性帶 電荷的殘基取代，以及結(jié)構(gòu)相似殘基的取代；非-保守性取代，其中， 所述非-保守性取代選自下列 一組極性不帶電荷的殘基取代極性帶電 荷的殘基，以及極性殘基取代非極性殘基，添加和缺失。
在本發(fā)明的其他實(shí)施方案中，所述抗體包括相對(duì)所述種系序列在 框架或CDR區(qū)包括少于10, 7， 5，或3個(gè)氨基酸變化。在另一種實(shí)施 方案中，所述抗體在框架區(qū)包括少于5個(gè)氨基酸變化和在所述CDR區(qū) 包括少于IO個(gè)氨基酸變化。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述抗體在框架 區(qū)包括少于3個(gè)氨基酸變化，在CDR區(qū)包括少于7個(gè)氨基酸變化。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述框架區(qū)的變化是保守性的，而CDR區(qū)的變 化是體細(xì)胞突變。
在另一種實(shí)施方案中，所述抗體與抗體3.1.1， 4.1.1， 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilimumab， 11.6.1， 11.7.1， 12. 3. 1. l,和12. 9. 1. 1的CDR序列在重和輕鏈CDR-l，CDR-2和CDR-3 序列上具有至少80°/。，更優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選至少90%,更優(yōu)選至少 95%,更優(yōu)選至少99%的序列相同性。更優(yōu)選的是，所述抗體與抗體 3. 1. 1， 4. 1. 1， 4. 8. 1， 4. 10. 2， 4. 13. 1， 4. 14. 3， 6. 1. 1， ticili隱ab， 11.6.1， 11.7.1， 12.3.1.1，和12. 9. 1. 1的序列在重和輕鏈CDR-1， CDR-2和CDR-3部分擁有100%的序列相同性。
在另一種實(shí)施方案中，所述抗體與抗體3.1.1， 4.1.1, 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1， 4.14.3, 6.1.1， ticilimumab， 11.6.1， 11.7.1， 12. 3. 1. l，和12. 9. 1. 1的可變區(qū)序列上與重和輕鏈可變區(qū)序列具有至 少80%,更優(yōu)選至少85%，更優(yōu)選至少90%，更優(yōu)選至少95%,更優(yōu)選 至少99%的序列相同性。更優(yōu)選的是，所述抗體與抗體3. 1. 1, 4. 1. 1， 4.8.1， 4.10.2, 4.13.1， 4.14.3， 6.1.1， ticilim腿b, 11.6.1， 11.7.1， 12.3.1.1，和12.9.1.1的序列的重和輕鏈可變區(qū)序列擁有 100%的序列相同性。
盡管上文所討論的抗-CTLA4抗體可能是優(yōu)選的，但技術(shù)人員根據(jù) 本文所提供的說明可以理解的是，本發(fā)明涉及多種抗-CTLA4抗體，并 且不局限于上述特定抗體。更具體地講，盡管人抗體是優(yōu)選的，本發(fā) 明絕非要局限于人抗體；相反，本發(fā)明涉及有用的抗體，無(wú)論它的物 種起源是什么，并且包括嵌合人源化和/或靈長(zhǎng)類化抗體。另外，盡管 本文所披露的抗體是使用轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物，例如，包括人免疫所有組 成成分的小鼠的轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物，但技術(shù)人員根據(jù)本文所披露的內(nèi)容 可以理解的是，本發(fā)明不局限于通過這種或任何其他特定方法生產(chǎn)的 抗體。相反，本發(fā)明包括通過任何方法生產(chǎn)的抗-CTLA4抗體，包括但 不局限于本領(lǐng)域公知的方法(例如，篩選噬菌體展示文庫(kù)等)或在未 來開發(fā)，以便生產(chǎn)本發(fā)明的抗-CTLA4抗體的方法。根據(jù)本文所提供的
充分說明，以及在下文披露的說明例如，授予Hanson等的美國(guó)專利 號(hào)6， 682, 736,和美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2002/0088014，本領(lǐng)域技術(shù) 人員可以使用本文所披露的新方法方便地生產(chǎn)和鑒定可用于與治療劑 組合治療乳腺癌的抗體。
本發(fā)明涉及使用轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物，即，XenoMouse (Abgenix, Inc., Fre麵t， CA)生產(chǎn)的人抗體，參見授予Ha謂n 等的U. S. 6， 682， 736。
用于生產(chǎn)"人"抗體的其他轉(zhuǎn)基因小鼠系統(tǒng)被稱作 "HuMAb-Mouse " (Medarex， Princeton, NJ)，它包括人免疫球蛋白 基因小基因座，它編碼未重組的人重(jLI和Y )和K輕鏈免疫球蛋白 序列，同時(shí)具有使內(nèi)源H和K鏈基因座失活的定向突變(Lonberg et al. 368: 856—859 ( 1994 ),和美國(guó)專利號(hào)5， 770, 429 )。
不過，本發(fā)明利用使用任何轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物生產(chǎn)的人抗-CTLA4抗 體，例如，但不局限于，Kirin TC Mouse (Kirin Beer Kabushiki Kaisha, Tokyo, Japan)， 例如,參見Tomizuka等，^Va 〃 icsc/ Sc/KS^ 97: 722 ( 2000 ); Kuroiwa等，#a f wre ^/0fec力/207 18: 1086 (2000 ); Mikay謹(jǐn)et al.的美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2004/0120948; 和HuMAb-Mouse ( Medarex,Princeton,NJ )和XenoMouse (Abgenix， Inc. ， Fremont, CA )，同上。因此，本發(fā)明涉及使用利用轉(zhuǎn)基因或其 他非人動(dòng)物生產(chǎn)的抗-CTLA4抗體。
另外，盡管生產(chǎn)人抗-CTLA-4抗體的優(yōu)選方法包括使用含有人類 免疫所有組成部分的非人轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物制備所述抗體，但本發(fā)明絕 非要局限于這種方法，相反，正如了解了本文所提供的知識(shí)的本領(lǐng)域 技術(shù)人員可以理解的，本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)對(duì)按照本領(lǐng)域任何公知方 法生產(chǎn)的對(duì)CTLA4專一的人或任何其他抗體的任何方法或未來開發(fā)生
產(chǎn)能專一性結(jié)合感興趣的抗原的抗體的方法。
可以通過一些方法，包括但不局限于使用噬菌體展示抗體文庫(kù)。 使用所述技術(shù)開發(fā)人抗體，可以在CTLA4表達(dá)細(xì)胞中產(chǎn)生抗體，CTLA4 本身，各種形式的CTLA4，它的表位或肽，以及它的表達(dá)文庫(kù)(例如，參見美國(guó)專利5， 703， 057 )，隨后可以篩選它的上述理想的活性。
在另一種實(shí)施方案中，在本發(fā)明的方法中使用的抗體不完全是人 的，而是"人源化的"。具體地講，鼠抗體或來自其他物種的抗體可 以使用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)"人源化，，或"靈長(zhǎng)類化"。例如，參 見，Winter和Harris /咖,人 7Wa/ 14: 43-46 ( 1993 ) ， Wright et al. i/ /卿謹(jǐn)/. 12: 125-168 ( 1992 )，和Cabilly
et al的美國(guó)專利號(hào)4, 816， 567，以及Mage和Lamoyi 卓義謦 爿/^/6of/y尸roducf2'o/ rec力/2/。wes a/ d爿； /772'cat/o/7s pp. 79—97 ， Marcel Dekker， Inc. ， New York, NY (1987)。
正如根據(jù)本文所提供的說明可以理解的，用于本發(fā)明的抗體可以 從轉(zhuǎn)基因非人哺乳動(dòng)物，以及由它產(chǎn)生的雜交瘤獲得，不過，還可以 在除了雜交瘤以外的細(xì)胞系中表達(dá)。
可用作表達(dá)宿主的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系為本領(lǐng)域所熟知，并且可以包 括可以從美國(guó)模式培養(yǎng)物保藏所(ATCC)獲得的任何永生化細(xì)胞系， 包括但不局限于中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞，NSO (又被稱為NSO)， HeLa細(xì)胞，幼倉(cāng)鼠腎(BHK)細(xì)胞，猴腎細(xì)胞(COS),和人肝細(xì)胞癌 細(xì)月包(例如，Hep G2)。還可以使用非哺乳動(dòng)物原核和真核細(xì)胞，包 括細(xì)菌，酵母，昆蟲和植物細(xì)胞。
正如本領(lǐng)域所乂/^知，可以使用各種表達(dá)系統(tǒng)，例如，但不局限于 在以下文獻(xiàn)中所才皮露的系統(tǒng)，例如，Sambrook和ussell， #o7ec"/ sr C7ao7/7《,^ Za6orafor/爿; ;7roac力，Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY ( 2001 )，和Ausubel et al. ， C"rre/7f戶rofoco/s #o/ec"/ar 5/。70《/， John Wiley & Sons, NY ( 2002 )。所述表 達(dá)系統(tǒng)包括二氫葉酸還原酶(DHFR )-型系統(tǒng)等。谷氨酰胺合成酶表達(dá) 系統(tǒng)在歐洲專利號(hào)EP 216 846， EP 256 055，和EP 323 997和歐洲 專利公開號(hào)89303964中作了全面或部分討論。在一種實(shí)施方案中，所 使用的抗體是在NSO細(xì)胞中利用谷氨酰胺合成酶系統(tǒng)(GS-NSO)制備 的。在另一種實(shí)施方案中，所述抗體是在CHO細(xì)胞中利用DHFR系統(tǒng)制 備的。這兩種系統(tǒng)都是本領(lǐng)域乂>知的，并且披露于Barnes et al.
A/Wec力》"2'oe"g2'/ eer//^ 73: 261-270 ( 2001 )中，以及它所引用 的文獻(xiàn)。對(duì)抗體CH2結(jié)構(gòu)域進(jìn)行位點(diǎn)定向誘變以消除糖基化是優(yōu)選的，以 便防止免疫原性，藥物動(dòng)力學(xué)和/或效應(yīng)子功能因?yàn)榉侨颂腔l(fā)生 改變。另外，可以通過酶促方法(例如，參見，Thotakura et al. ^7z//z7o/. 138: 350 ( 1987 ))和/或化學(xué)方法(例如，參見，Hakimuddin et al.，5/oc力e邁.259: 52 ( 1987 ))對(duì)抗體進(jìn)^f亍 去糖基化。另外，本發(fā)明涉及使用包括改變了的糖基化形式的抗-CTLA4抗 體。技術(shù)人員可以理解的是，根據(jù)本文所提供的方案，可以將抗-CTLA4 抗體修飾成包括與天然存在的抗體相比具有額外的，少數(shù)的，或不同 的糖基化位點(diǎn)。例如，所述修飾披露于以下文獻(xiàn)中美國(guó)專利申請(qǐng)公 開號(hào)2003/0207336，和2003/0157108，以及國(guó)際專利7>開號(hào)W0 01/81405和00/24893。另外，本發(fā)明包括使用抗-CTLA4抗體，無(wú)論抗體上存在的(如果 有的話)糖基化形式如何。另外，充分重新改造糖蛋白上的糖基形式 的方法為本領(lǐng)域所熟知，并且包括，例如，參見國(guó)際專利公開號(hào)W0 03/031464， W0 98/58964，和W0 99/22764，和授予Umafia等的美國(guó) 專利申請(qǐng)?zhí)?2004/0063911， 2004/0132640 , 2004/0142856， 2004/0072290，和美國(guó)專利號(hào)6， 602， 684。另外，本發(fā)明涉及使用具有任何本領(lǐng)域公知的共價(jià)和非共價(jià)修飾 的抗-CTLA4抗體，所述抗體包括但不局限于將多肽連接在多種非蛋白 類聚合物中的一種上，例如，聚乙二醇，聚丙二醇，或聚氧化烯，通 過下文所披露的方式連接，例如，美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)2003/0207346 和2004/0132640，以及美國(guó)專利號(hào)4， 640， 835; 4， 496， 689; 4， 301， 144; 4， 670， 417; 4， 791， 192; 4， 179， 337。另外，本發(fā)明涉及使用抗-CTLA4抗體或它的抗原結(jié)合部分，嵌合 蛋白質(zhì)，它包括，例如，人血清白蛋白多肽，或它的片段。無(wú)論所述 嵌合蛋白是使用重組方法生產(chǎn)的，例如，克隆編碼所述嵌合蛋白的嵌
合核酸，或通過兩種肽部分的化學(xué)連接生產(chǎn)的，技術(shù)人員一旦了解了 本文所披露的內(nèi)容就可以理解，所述嵌合蛋白質(zhì)是本領(lǐng)域所熟知的， 并且可以產(chǎn)生理想的生物學(xué)特性，例如，但不局限于提高本發(fā)明的抗 體的穩(wěn)定性和血清半衰期，并且，因此本發(fā)明包括所述分子。為了用于本發(fā)明而制備的抗體最初不需要具有特別需要的同種 型。相反，所制備的抗體可以具有任何同種型，并且可以在隨后使用 常規(guī)技術(shù)進(jìn)行同種型切換。其中，包括定向重組技術(shù)(例如，參見美國(guó)專利4， 816， 397 ),以及細(xì)胞-細(xì)胞融合技術(shù)(例如，參見美國(guó)專 利號(hào)5， 916， 771 )。本發(fā)明的抗體的效應(yīng)子功能為了各種治療用途可以通過同種型 切換而切換成IgGl， IgG2， IgG3， IgG4， IgD， IgA， IgE，或IgM而 改變。另外，根據(jù)補(bǔ)體，通過使用例如，雙特異性、免疫毒素或放射 性標(biāo)記可以避免細(xì)胞殺傷。因此，盡管用于本發(fā)明的優(yōu)選抗體是通過具有3.1.1, 4.1.1， 4.8.1， 4.10.2， 4.13.1, 4.14.3， 6.1.1， ticilim腿b， 11.6丄 11.7.1， 12.3.1.1， 12.9.1.1，和ipilimumab的氨基酸序列，或， 例如，它的V區(qū)或CDRs的序列的抗體進(jìn)行說明的，但本發(fā)明絕非要以 任何方式局限于使用上述，或任何其他特定抗體。本發(fā)明涉及組合施 用本發(fā)明的任何抗-CTLA4抗體和吲哚酮RTKI。優(yōu)選的是，所述抗體 是4.1.1， 4.13.1，ticilimumab， 和/或 ipilimumab。 不過，在本 文其他部分所披露的，或本領(lǐng)域公知的或未來開發(fā)的任何抗-CTLA4抗 體或它的抗原結(jié)合部分可用于本發(fā)明的方法中。更具體地講，來自任 何物種的人源化嵌合抗體，抗-CTLA4抗體(包括從駱駝體內(nèi)獲得的單 鏈抗體，例如，參見授予Casterman和Hamers的美國(guó)專利號(hào)5， "759， 808和6， 765， 087 )，以及任何人抗體可以與治療劑組合實(shí)施本文 所披露的新方法。本發(fā)明還涉及在文獻(xiàn)中公開的抗體，特別是參見國(guó)際專利公開號(hào) W0 00/37504 (
公開日為2000年6月29日)；WO 01/14424 (公開 日為2001年3月1日)；W0 93/00431 (
公開日為1993年1月7日)；
和WO 00/32231 (
公開日為2000年6月8日)等。盡管所述抗體4.1.1， 4. 13, 1和ticilimumab是IgG2抗體，在 本文中(圖1-3),以及在本文所引用和收作參考的專利申請(qǐng)和專利 中提供了所述抗體的可變區(qū)的序列，但可以理解的是，本發(fā)明涉及所 述抗體的完整長(zhǎng)度的序列，以及包括SEQ IDN0s: 1-36所示序列的>(壬 何抗體的用途，并且還包括任何恒定區(qū)，無(wú)論同種型是否在本文的其 他部分作了更全面的討論。同樣，包括ipilimumab的完整長(zhǎng)度序列， 或它的任何部分的4壬何抗體，包括編碼ipilimumab的抗原結(jié)合部分的 序列，它可以與吲哚酮RTKI，例如，sunitinib蘋果酸鹽組合施用， 以^更治療癌癥。因此，技術(shù)人員一旦具備了本文所提供的知識(shí)，就能夠方便地理 解，本發(fā)明的抗-CTLA4抗體-治療劑的組合可以包括多種抗-CTLA4抗 體。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法使用ticilimumab。在本發(fā)明 的另一種實(shí)施方案中，所述方法使用以下文獻(xiàn)描述的抗-CTLA4抗體， 例如參見以下申請(qǐng)和專利美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?9/472, 087，現(xiàn)在已授 權(quán)為美國(guó)專利號(hào)6， 682, 736;國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US99/30895 (
公開日
為2000年6月29日，公開號(hào)為WO00/37504 );美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/612， 497 (
公開日為2004年11月18日，公開號(hào)為US2004/0228858 );美 國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/776， 649 (
公開日為2004年11月18日，公開號(hào)為 US2004/0228861 );國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US00/23356 (
公開日為2001年 3月1日，公開號(hào)為WO01/14424 X例如，抗體IODI，又被稱作MDX-010， 和ipilimumab，Medarex，Princeton,NJ );國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US99/28739 (
公開日為2000年6月8日，公開號(hào)為WO00/32231 );授予Linsley 等的美國(guó)專利號(hào)5， 811， 097， 5， 855, 887， 6， 051， 227，和6, 207, 156;美國(guó)專利號(hào)5， 844， 095;國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US92/05202 (
公開日
為1993年1月7日，公開號(hào)為WO93/00431 );美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/153， 382 (
公開日為2003年5月8日，公開號(hào)為US2003/0086930 );美國(guó) 專利申請(qǐng)?zhí)?0/673， 738 (
公開日為2005年2月24日，公開號(hào)為 US2005/0042223 );美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?1/085， 368 (
公開日為2005 年10月13日，公開號(hào)為US2005/0226875 );美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/624， 856 (申請(qǐng)日為2004年11月4日)；美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/664， 364 (申 請(qǐng)日為2005年3月23日)；美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/664， 653 (申請(qǐng)日 為2005年3月23日)；美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/697, 082 (申請(qǐng)日為2005 年7月7日)；美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/711， 707 (申請(qǐng)日為2005年8月 26曰)。另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本文披露的方案可以理解的是，本發(fā) 明并不局限于僅施用一種抗體；相反，本發(fā)明涉及施用至少一種抗 -CTLA4抗體，例如，4.1.1， 4.13.1， ticilim畫b，和ipilimumab， 與治療劑組合施用。另外，本發(fā)明涉及組合施用任何已知的抗-CTLA4 抗體，包括但不局限于組合施用治療劑和，例如，4.1.1， 4.13.1, ticilimumab和ipilimumab。因此，抗-CTLA4抗體的任意組合可以 與至少 一種治療劑組合，并且本發(fā)明涉及任何這樣的組合和它們的置 換形式。II. 抗體-"l咮酮組合治療 A.丐l咮酮RTKI可用于本發(fā)明的組合和方法中的典型的吲哚酮RTKIs特別是披 露于以下文獻(xiàn)中國(guó)際公開號(hào)WO 2003/016305 ，
公開日為"03年2 月27日，(US 2003/0069298，
公開日為2003年4月10日)，W0 2005/033098, 7〉開日為2005年4月14日，(US 2005/0118255, 乂〉 開日為2005年6月2日)和WO 2004/024127，
公開日為2004年3月 25日，(US 2004/0229930，
公開日為2004年11月18日)，和美國(guó) 專利號(hào)6， 573， 293和6, 653, 308,以上文獻(xiàn)的內(nèi)容^L以它們的全 文形式收作本文參考。因此，正如掌握了本文所披露的方法的技術(shù)人 員所能理解的，盡管在一種實(shí)施方案中，本文所披露的化合物l是優(yōu) 選的巧l味酮，但本發(fā)明并不局限于這種化合物，或任何其他特定的吲 咮酮RTKI。在一種實(shí)施方案中，用于本發(fā)明的吲哚酮在抑制至少一種受體酪 氨酸激酶，包括但不局限于，KIT， FLT3， VEGFR，和PDGFR。更優(yōu)選 的是，所述P引哚酮可檢測(cè)地抑制KIT， FLT3， VEGFR,和PDGFR方面具 有可檢測(cè)的活性。與抗-CTLA4抗體組合使用的吲哚酮RTKI包括化合 物l和它的任意代謝物(例如，化合物2)，或化合物3。優(yōu)選的是， 吲哚酮RTKI是化合物1和化合物2。更優(yōu)選的是，所述丐l咮酮RTKI 是化合物l。本發(fā)明的抗體--引咮酮RTKI包括所述化合物的任何可以 藥用的鹽。優(yōu)選的是，化合物1的鹽是蘋果酸鹽，更優(yōu)選L-蘋果酸鹽。 化合物3的鹽優(yōu)選是馬來酸鹽。用于本發(fā)明的典型的吲哚酮RTKIs披露于以下文獻(xiàn)中國(guó)際公開 號(hào)W0 2003/01630
公開日為2003年2月27日，國(guó)際乂>開號(hào)WO 2004/02412
公開日為2004年3月25日，國(guó)際公開號(hào)WO 2004/045523，
公開日為2004年6月3日，美國(guó)專利號(hào)6, 573， 293， 和6， 653， 308，以及美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/991， 244 (公開號(hào)為 US2005/0182122,
公開日2005年8月18日)，上述每一份文獻(xiàn)都以 它們的全文形式收作本文參考。上述化合物的用途披露于前面所提到 的文獻(xiàn)中，還可以參見國(guó)際公開號(hào)WO 2003/015608，
公開日為2003 年2月27日(US 2003/0216410,
公開日為2003年11月20日)和國(guó) 際公開號(hào)WO 2004/04552
公開日為2004年6月3日，(US 2004/0152759
公開日為2004年8月5日)，美國(guó)專利申請(qǐng)公開號(hào)US 2005/0182122 (
公開日為2005年8月18日)，和美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?60/719， 119 (申請(qǐng)日為2005年9月20日)，60/680， 837 (申請(qǐng)日 為2005年5月12日)和60/753， 797(申請(qǐng)?jiān)粸?005年12月23日)，上述所有文獻(xiàn)都以它們的全文形式收作本文參考。在一種實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI是化合物l,被稱作N-[2-二乙氨基]乙基]-5-[ ( Z ) - ( 5-氟-2-氧-l ， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基) 甲基]-2， 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨甲酰，并且由上文所示出的結(jié)構(gòu)式 1表示(以前被稱作sunitinib蘋果酸鹽，SU11248, SU011248和 SUTENT)。本發(fā)明涉及化合物1的活性代謝物(以前被稱作SU12662， 其代謝物被稱作N-[2-(乙氨基)乙基]-5-[ (Z) - (5-氟-2-氧-l， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-2, 4-二曱基-lH-吡咯-3-氨曱酰，并 且由上文所示出的結(jié)構(gòu)式2表示。在另一種實(shí)施方案中，所使用的p引 哚酮RTKI是化合物3，被稱作5-[(Z)-(5-氟-2-氧-1， 2-二氫-3H-吲哚-3-亞基)甲基]-N-[ (2S) -2-羥基-3-嗎啉-4-基丙基]-2, 4-二 甲基-lH-吡咯-3-氨甲酰，并且由結(jié)構(gòu)式3表示。正如技術(shù)人員根據(jù)本 文所提供的方法所能理解的，可以使用吲味酮RTKI的任何可以藥用 的鹽。用于本發(fā)明的吲哚酮化合物是蛋白激酶(PKs)的泛抑制劑，并 且因此可用于治療癌癥，因?yàn)橐阎狿Ks能介導(dǎo)和/或在癌形成中發(fā)揮作 用。用于本發(fā)明的它的催化活性通過所述吲哚酮調(diào)節(jié)的PKs包括蛋白 酪氨酸激酶，如受體酪氨酸激酶(RTKs ),細(xì)胞酪氨酸激酶(CTKs )， 和絲氨酸-蘇氨酸激酶(STKs ) 。 RTK-介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)是通過與特殊 生長(zhǎng)因子(配體)的細(xì)胞外相互作用啟動(dòng)的，然后進(jìn)行受體二聚體化， 瞬時(shí)刺激內(nèi)在性蛋白酪氨酸激酶活性和磷酸化。因此，產(chǎn)生了細(xì)胞內(nèi) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子的結(jié)合位點(diǎn)，并且導(dǎo)致與多種細(xì)胞質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)分子形成 復(fù)合物，這有利于適當(dāng)?shù)募?xì)胞反應(yīng)(例如，細(xì)胞分裂，對(duì)細(xì)胞外微環(huán) 境的代謝影響等，例如，參見Schlessinger和Ullrich, 1992， Neuron 9: 303-391。業(yè)已證實(shí)生長(zhǎng)因子受體上的酪氨酸磷酸化位點(diǎn)起著信號(hào)傳導(dǎo)分子的SH2 ( src同源性)結(jié)構(gòu)域的高親和力結(jié)合位點(diǎn)的作用。Fantl etal.， 1992, Cell 69: 413-423， Songyang et al. ， 1994， Mol.Cell.Biol. 14: 2777—2785 )， Songyang et al. ， 1993， Cell 72: 767-778，和Koch et al. ， 1991， Science 252: 668-678。業(yè)已鑒定了與RTKs相關(guān)的若干細(xì)胞內(nèi)底物蛋白，并且受體和它們的底物的SH2結(jié)構(gòu)域之間相互作用的專一性是由磷酸化的酪氨酸殘基周圍的氨基酸殘基決定的(Songyang et al. ， 1993， Cell 72: 767-778 ) 。 SH2結(jié)構(gòu)域和環(huán)繞特定受體上的磷酸酪氨酸殘基的氨基酸序列之間的結(jié)合親和力的 差異與觀察到的它們的底物磷酸化特征方面的差異吻合。以上發(fā)現(xiàn)表明，每一種RTK的作用不僅是由它的表達(dá)形式和配體的可利用性
決定的，而且還由一系列下游信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑?jīng)Q定，這些途徑是通過特 殊受體激活的。因此，磷酸化提供了重要的調(diào)控步驟，該步驟決定了 通過特殊生長(zhǎng)因子受體，以及分化因子受體恢復(fù)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑的選 擇性。PK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)導(dǎo)致了細(xì)胞增殖，分化，生長(zhǎng)和代謝等其他反應(yīng)。 異常的細(xì)胞增殖可能導(dǎo)致多種疾病和失調(diào)，包括腫瘤形成，如癌，肉 瘤，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤和血管瘤，疾病，如白血病，牛皮痺，動(dòng)脈硬化， 關(guān)節(jié)炎和糖尿病視網(wǎng)膜病以及與不受控制的血管發(fā)生和/或脈管生成 相關(guān)的其他疾病。對(duì)用于本發(fā)明的吲哚酮化合物作用機(jī)制的了解并不是實(shí)現(xiàn)本發(fā) 明所必需的。不過，并不希望受任何特殊理論的制約，用于本發(fā)明的 吲咮酮化合物可以與PKs的催化區(qū)域的氨基酸相互作用。就是說，PKs 通常具有二裂片結(jié)構(gòu)，其中，ATP似乎結(jié)合在一個(gè)區(qū)域的兩個(gè)裂片之 間的裂縫上，其中，所述氨基酸在PKs之間是保守的。PKs抑制劑， 如p引哚酮RTKI被認(rèn)為通過非共價(jià)相互作用，如氫鍵，范德華力和/或 離子相互作用在相同的總體區(qū)域結(jié)合，其中，ATP還與PKs結(jié)合。更 具體地講，用于本發(fā)明的化合物的2-吲哚酮成分被認(rèn)為結(jié)合通常情況 下由ATP的腺噤呤環(huán)占據(jù)的總的空間。特定PK的特定分子的專一性可 能因?yàn)?-吲哚酮核心上的各種取代基和對(duì)特定PKs專一的氨基酸結(jié)構(gòu) 域之間的額外相互作用而產(chǎn)生。因此，不同的吲哚酮取代基可能造成 與特定PKs的優(yōu)勢(shì)結(jié)合。選擇對(duì)不同ATP (或其他核苷酸)結(jié)合位點(diǎn) 起作用的化合物的能力使得本發(fā)明的吲哚酮化合物特別適用于靶定具 有所述位點(diǎn)的任何蛋白。因此，用于本發(fā)明的化合物可用于通過與PKs 的相互作用在體內(nèi)介導(dǎo)治療作用。用于本發(fā)明的吲哚酮化合物與抗-CTLA4抗體組合，提供了治療多 種實(shí)體腫瘤的有效的治療方法，所述腫瘤包括但不局限于癌，肉瘤， 包括Kaposi's肉瘤，成紅細(xì)胞瘤，成膠質(zhì)細(xì)胞瘤，腦膜瘤，星形細(xì)胞 瘤，黑素瘤和成肌細(xì)胞瘤。本發(fā)明還涉及治療或預(yù)防非實(shí)體腫瘤癌癥， 如白血病。其代表可以包括但不局限于腦癌，膀胱癌，卵巢癌，胃癌，
胰腺癌，結(jié)腸癌，腎癌，腸癌，乳腺癌，前列腺癌，血癌，肺癌和骨 癌。另外，但不局限于與不適當(dāng)?shù)腜K活性相關(guān)的疾病的類型是當(dāng)用 于本發(fā)明的吲哚酮化合物與抗-CTLA4抗體組合時(shí)，可用于預(yù)防，治療 和研究的細(xì)胞增殖疾病，纖維化疾病和代謝疾病。另外，可以通過本 發(fā)明預(yù)防治療或進(jìn)一步研究的細(xì)胞增殖疾病包括癌癥，血管增殖性疾 病和膜細(xì)胞增殖性疾病。B.巧l咮酮RTKI和抗-CTLA4抗體組合本發(fā)明涉及組合治療，包括同時(shí)施用吲哚酮PK抑制劑，優(yōu)選p引 咮酮RTKI,更優(yōu)選的是，所述p引咮酮RTKI是化合物l,化合物2, 或化合物3，和抗-CTLA4抗體，優(yōu)選包括抗體4.1.1， 4.13.1,和 ticilimumab, ipilimumab等的抗原結(jié)合部分的抗體。對(duì)于本發(fā)明來 說，所提到的吲味酮RTKIs，包括化合物l，化合物2，或化合物3, 包括它們的可以藥用的鹽，例如，但不局限于本文所披露的優(yōu)選的鹽。在一種實(shí)施方案中，抗-CTLA卩抗體和吲哚酮PK抑制劑的組合是 同時(shí)給患者施用的，以便治療癌癥，其中，所述吲哚酮是化合物1。 化合物1可用于治療的疾病包括前列腺癌，卵巢癌，曱狀腺癌，黑素 瘤，肉瘤，乳腺癌，GIST (伊馬替尼-抗性或非抗性)，NSCLC,胰腺 癌，結(jié)腸直腸癌，和腎細(xì)胞癌等。因此，抗-CTLA4抗體和吲哚酮RTKI 的組合可用于治療所述癌癥。更具體地講，很多潛在的治療選項(xiàng)包括 p引哚酮RTKI和抗-CTLA4組合治療可用于治療伊馬替尼-抗性GIST， 轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌，轉(zhuǎn)移性乳腺癌，結(jié)腸直腸癌，卵巢癌，非-小細(xì)胞肺 癌，轉(zhuǎn)移性乳腺癌，和神經(jīng)內(nèi)分泌癌(例如，胰島細(xì)胞癌)等。盡管 所述癌癥是優(yōu)選的，本發(fā)明涉及治療多種惡性細(xì)胞增殖疾病，包括但 不局限于間皮瘤，肝膽(肝和膽管)，原發(fā)性和繼發(fā)性CNS腫瘤，原 發(fā)性和繼發(fā)性腦瘤，肺癌(NSCLC和SCLC)，骨癌，皮膚癌，頭頸癌， 皮膚或眼內(nèi)黑素瘤，肛門區(qū)癌癥，胃癌，胃腸(胃，結(jié)腸直腸，和十 二指腸)癌，乳腺癌，子宮癌，輸卵管癌，子宮內(nèi)膜癌，子宮頸癌，
陰道癌，外陰癌，何杰金氏病，食管癌，小腸癌，內(nèi)分泌系統(tǒng)癌，曱 狀腺癌，副曱狀腺癌，腎上腺癌，軟組織肉瘤，尿道癌，陰莖癌，睪 丸癌，慢性或急性髓細(xì)胞性白血病，慢性或急性淋巴細(xì)胞性白血病，淋巴細(xì)胞性淋巴瘤，皮膚T細(xì)胞淋巴瘤，膀胱癌，腎或輸尿管癌，腎 細(xì)胞癌，腎盂癌，中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)腫瘤，原發(fā)性CNS淋巴瘤， 非何杰金氏淋巴瘤，脊柱腫瘤，腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤，垂體腺瘤，腎上腺 皮質(zhì)癌，膽嚢癌，多發(fā)性骨髓瘤，膽管上皮癌，纖維肉瘤，成神經(jīng)細(xì) 胞瘤，視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤，或上述一種或多種癌癥的組合。在所述抗 體-巧l咮酮RTKI組合的另一種實(shí)施方案中，所述組合可用于治療任何 異常細(xì)胞生長(zhǎng)，包括良性增殖性疾病，例如，但不局限于牛皮癬，良 性前列腺肥大和再狹窄。另外，本發(fā)明涉及將抗-CTLA4抗體與吲哚酮RTKI組合用于癌癥 的新輔助，輔助，笫一線治療，第二線和/或第三線治療(例如，乳腺 癌的輔助治療，轉(zhuǎn)移性肺癌的第一線治療，胚細(xì)胞腫瘤的第三線治療 等)。就是說，在一種實(shí)施方案中，所述抗體-吲哚酮RTKI的組合可 以作為新輔助治療同時(shí)施用，例如，在手術(shù)切除腫瘤(例如，前列腺 癌)之前。在另一種實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI-抗體組合可以作 為新輔助治療施用(即，在手術(shù)之前)，并且還可以在手術(shù)之后作為 輔助治療。在另一種實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI-抗體組合可以同 時(shí)施用，用于治療細(xì)胞因子-耐受患者的轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌。另外，所述 組合可以用作第一線治療取代其他制劑(例如，干擾素-ot )。本領(lǐng)域 技術(shù)人員根據(jù)本文所提供的說明可以方便地理解其他組合和治療方 案，包括但不局限于同時(shí)施用吲哚酮RTKI-抗-CTLA4抗體組合，以便 治療轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌，作為細(xì)胞因子-耐受患者的第二線治療，作為伊 馬替尼-抗性GIST患者的第二線治療等。本發(fā)明還涉及所述治療的組 合，其中吲哚酮RTKI-抗-CTLA4組合是同時(shí)施用的，例如，但不局限 于將所述組合用于新輔助，輔助，第一線，和第二線治療，或它們的 任意組合。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合進(jìn)一步與護(hù)理治療的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)一步組合之后使用，用于治療上述癌癥之一。在另一種實(shí)施方案中，所 述組合被用于對(duì)護(hù)理治療標(biāo)準(zhǔn)沒有反應(yīng)的患者。一旦掌握了本文所披露的方法，技術(shù)人員可以理解的是，本發(fā)明涉及吲哚酮RTKI治療與使用抗-CTLA4抗體的免疫療法組合，與手術(shù)， 放射療法，或這兩種方法同時(shí)或依次(之前或之后)治療癌癥。就是 說，各種治療可以與sunitib-抗-CTLA4組合治療組合，正如掌握了 本文所提供的方法的本領(lǐng)域技術(shù)人員所能理解的。在另一種實(shí)施方案中，將吲哚酮-RTKI，優(yōu)選化合物l，化合物2 和化合物3，和抗-CLTA-4抗體組合同時(shí)使用，以便增強(qiáng)，延長(zhǎng)，或同 時(shí)增強(qiáng)和延長(zhǎng)對(duì)肺瘤的免疫反應(yīng)。這是因?yàn)樵谶艈B酮RTKI和本發(fā)明的 抗-CTLA4抗體的抗-腫瘤效果之間存在相互作用，這種相互作用能導(dǎo)致 以任何制劑單獨(dú)更有效的抗-腫瘤效果。因此，不希望受任何特定理論 的約束，吲咮酮RTKI和抗-CTLA4抗體的組合可以在腫瘤內(nèi)誘導(dǎo)比預(yù)期 的更有效的免疫反應(yīng)。不希望受任何特定理論的約束，由RTKI，例如， 巧l咮酮RTKI的抗-腫瘤效果介導(dǎo)的腫瘤抗原的釋;^可以增強(qiáng)針對(duì)所述 抗原的抗-CTLA4的免疫治療效果。業(yè)已證實(shí)，這有可能是因?yàn)槭褂每?體的CTLA4阻斷，能破壞對(duì)腫瘤抗原的耐受性(例如，恢復(fù)或預(yù)防無(wú)反 應(yīng)性或?qū)δ[瘤抗原的耐受性)，從而使得腫瘤細(xì)胞更容易受到免疫攻 擊。因此，巧l咮酮RTKI與抗-CLTA-4抗體的組合可以提供有效的協(xié)同 效應(yīng)，從而提供對(duì)癌癥的重要的新的治療方法。在一種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了使用抗-CTLA4抗體-吲哚酮 RTKI組合產(chǎn)生或加強(qiáng)抗-腫瘤反應(yīng)的組合物和方法。其中，所述吲哚 酮RTKI通過一定數(shù)量的抗體增強(qiáng)抗-腫瘤反應(yīng)，而所述數(shù)量的抗體在 單獨(dú)使用時(shí)不是誘導(dǎo)相同水平的抗-腫瘤反應(yīng)的最佳用量。在某些實(shí)施 方案中，當(dāng)所述吲哚酮RTKI不是與誘導(dǎo)抗-腫瘤反應(yīng)的抗體組合使用 時(shí)，單獨(dú)施用吲哚酮RTKI不能產(chǎn)生或增強(qiáng)所述抗-腫瘤反應(yīng)。在其他 實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI和所述抗-CTLA4抗體能夠單獨(dú)和/或在 組合施用時(shí)誘導(dǎo)抗-腫瘤反應(yīng)。在某些實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI能夠以疊加方式增強(qiáng)所述抗-CTLA4抗體的效果。在一種優(yōu)選實(shí)施方案中，所述-引咪酮RTKI能 夠以協(xié)同方式增強(qiáng)所述抗-CTLA4抗體的效果。在另一種實(shí)施方案中， 所述抗-CTLA4抗體能夠以疊加方式增強(qiáng)吲咮酮RTKI的效果。優(yōu)選的 是，所述效果是以協(xié)同方式增強(qiáng)的。因此，在某些實(shí)施方案中，本發(fā) 明涉及疾病治療或預(yù)防方法，它能提供比單獨(dú)施用p引咮酮RTKI和/或 單獨(dú)施用抗-CTLA4抗體更好的治療效果。本發(fā)明涉及具有疊加效力或疊加治療效果的組合治療方法，同時(shí) 減輕或避免了有害的或不良影響。本發(fā)明還涉及協(xié)同組合，其中，治 療效果比疊加效果更好，同時(shí)減輕或避免了有害的或不良影響。在某 些實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法可以治療或預(yù)防疾病和失調(diào)，其中，通 過使用較低和/或較少次數(shù)的抗-CTLA4抗體和/或吲咮酮RTKIs的劑 量增強(qiáng)了抗-紳瘤反應(yīng)，以便降低由單獨(dú)施用抗-CTLA4抗體和/或吲哚 酮RTKIs所導(dǎo)致的有害的或不良影響的出現(xiàn)頻率，同時(shí)保持或增強(qiáng)了 治療效果，優(yōu)選增強(qiáng)了患者的順從性，改善了治療和/或減輕了有害的 或不良影響而改善了治療。本發(fā)明的方法和組合物不僅可用于未治療過的患者，而且還可用 于治療對(duì)單獨(dú)施用吲哚酮RTKIs或單獨(dú)施用抗-CTLA4抗體部分或完全沒有反應(yīng)的患者。在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了可用于治療患 者的疾病或失調(diào)的方法和組合物，所述患者業(yè)已被證實(shí)對(duì)包括單獨(dú)或 同時(shí)施用抗-CTLA4抗體和/或吲哚酮RTKIs有耐受性或無(wú)反應(yīng)的患 者，其中，通過增強(qiáng)免疫反應(yīng)改善了治療。在一種實(shí)施方案中，該方 法包括組合吲哚酮RTKI (優(yōu)選化合物1 )和抗-CTLA4抗體(優(yōu)選抗體 4.1.1，抗體4.13.1， ticilimumab， ipilim畫b，或它們的任意組 合)。丐l咮酮RTKI可以按照本領(lǐng)域眾所周知的標(biāo)準(zhǔn)給藥方案施用，例 如，但不局限于在以下文獻(xiàn)中披露的方法美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/991, 244 (公開號(hào)US2005/0182122，
公開日為2005年8月18日)。簡(jiǎn)單 地講，在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，吲哚酮RTKI，更優(yōu)選的是化合物 1是每天一次連續(xù)施用的。在另一種實(shí)施方案中，吲哚酮RTKI每天 連續(xù)每天施用持續(xù)大約4周，并且不施用額外的p引咮酮RTKI。在本發(fā) 明的一種實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI連續(xù)施用超過4周時(shí)間。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，吲哚酮RTKI是按照間歇給藥方案 施用的，包括至少一個(gè)服藥周期(或"治療")周期，隨后是"停藥" 期，此期不施用所述p引味酮RTKI。在另一種實(shí)施方案中，p引咮酮RTKI 施用大約4周，然后停藥大約2周，此時(shí)不施用藥物，并且，隨后再 進(jìn)行至少一個(gè)周期的服藥/停藥周期。在另一種實(shí)施方案中，巧l咮酮 RTKI施用大約2周，然后停藥大約l周，此期不施用藥物，然后進(jìn)行 至少一個(gè)額外的服藥/停藥周期。在另一種實(shí)施方案中，吲哚酮RTKI 施用大約3周，然后停藥大約l周，此期不施用藥物，隨后進(jìn)行至少 一個(gè)額外的服藥/停藥周期。然后可以重復(fù)所述服藥和停藥周期至少一 次，優(yōu)選重復(fù)服藥/停藥周期兩次。在另一種實(shí)施方案中，所述服藥/ 停藥周期進(jìn)行調(diào)整，以便釆用服藥/停藥周期的任意組合。例如，所述 丐l咮酮RTKI是按照4/2給藥方案施用的(即，服藥4周，然后停藥 兩周)，然后采用3/1周期。因此，本發(fā)明涉及間歇給藥方案的任意 組合，正如為患者所提供的方案。在一種實(shí)施方案中，吲哚酮RTKI 的施用，無(wú)論是按照連續(xù)或間歇給藥方案施用，都持續(xù)到直到疾病發(fā) 展停止，例如，治療可以持續(xù)至少兩年時(shí)間?；衔飈的優(yōu)選給藥方 案可以詳細(xì)參見美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/991, 244，申請(qǐng)日為2004年11 月17日，(公開號(hào)為US2005/0182122，2005年8月18日)，以上文獻(xiàn)的完整內(nèi)容被收做本文參考。在一種實(shí)施方案中，吲哚酮RTKI是每天一次施用的，施用數(shù)量 為大約25mg-87.5mg。更優(yōu)選的是，吲咮酮RTKI (例如，化合物1) 是每天一次施用的，施用量為大約37.5 mg-50 mg。在本文中，吲哚 酮RTKIs包括化合物l， 2和3的用量表示游離堿等效質(zhì)量。在一種實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI (例如，化合物1， 2，和 3)和所述抗體是同時(shí)施用的，其中，吲哚酮是每天施用的，持續(xù)4 周，隨后停藥2周，并且重復(fù)該循環(huán)，其中，所述抗體是在適當(dāng)?shù)耐?藥期之后施用的。更優(yōu)選的是，吲哚酮是口服的，施用量為大約50mg,
而所述抗體是通過靜脈輸液施用的，施用量為大約0.1 mg/kg-50 mg/kg，更優(yōu)選的是，大約0. 3mg/kg-20mg/kg，更優(yōu)選的是，大約1 mg/kg-15 mg/kg，更優(yōu)選的是，大約3 mg/kg-15 mg/kg，更優(yōu)選的是， 大約6 mg/kg-15 mg/kg。在另一種實(shí)施方案中，所述抗體的施用劑量為至少0.3mg/kg， 優(yōu)選至少1 mg/kg，更優(yōu)選至少3 mg/kg,更優(yōu)選至少5 mg/kg，優(yōu)選 至少6 mg/kg，更優(yōu)選至少10 mg/kg，更優(yōu)選至少15 mg/kg，更優(yōu)選 至少20 mg/kg。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述抗體是以每28天大約6mg/kg 的用量施用的。在另一種實(shí)施方案中，所述抗體是以每三個(gè)月大約6 mg/kg的用量施用的。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述抗體是以每 28天大約10 mg/kg的用量施用的。在另一種實(shí)施方案中，所述抗體 是以每三個(gè)月大約10rag/kg的用量施用的。在另一種實(shí)施方案中，所 述抗體是以每28天大約15 mg/kg的用量施用的。在另一種實(shí)施方案 中，所述抗體是以每三個(gè)月大約15 rag/kg的用量施用的。在一種實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI (例如，化合物1, 2，和 3)和所述抗體是同時(shí)施用的，其中，吲咮酮是每天施用的持續(xù)4周時(shí) 間，然后停藥2周，并且重復(fù)該循環(huán)，并且所述抗體是在施用所述吲 咮酮的第一天施用的，然后每隔28天再次施用抗體至少一個(gè)周期，其 中，所述抗體的施用量為10mg/kg。在另一種實(shí)施方案中，所述吲哚 酮RTKI是按照4/2的間歇給藥方案施用的，而所述抗體是以每三個(gè) 月10 mg/kg的用量施用的。在另一種實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI 是按照4/2的間歇給藥方案施用的，并且所述抗體是每28天施用 一次 的，施用量為15mg/kg。在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述吲哚酮RTKI 是按照4/2的間歇給藥方案施用的，而所述抗體是每三個(gè)月施用一次 的,施用量為15mg/kg。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，吲哚酮RTKI (例如，化合物1)是以大約37.5 mg的用量每天連續(xù)施用的，而所 述抗體是每三個(gè)月施用一次的，施用量為大約10mg/kg。在本發(fā)明的 另一種實(shí)施方案中，吲哚酮RTKI(例如，化合物l)是以大約5mg的用量每天連續(xù)施用的，而所述抗體是每三個(gè)月一次施用的，施用量為大約l5 mg/kg。在本發(fā)明的另一種實(shí)施方案中，丐|咪酮RTKI (例 如，化合物1)是以37.5 mg的用量每天連續(xù)施用的，而所述抗體是 每三個(gè)月一次施用的，施用量為大約10 mg/kg和/或15 mg/kg。就是 說，抗體的劑量是變化的，并且可以包括每三個(gè)月10或15 mg/kg， 正如所指出的。不希望受任何特定理論的約束，吲咮酮RTKI能夠在患者體內(nèi)有 效導(dǎo)致可檢測(cè)的免疫抑制作用，其中，在施用。引哚酮RTKI時(shí)可能出 現(xiàn)暫時(shí)淋巴細(xì)胞減少癥。因此，在本發(fā)明的一種實(shí)施方案中，所述抗 體能夠在施用最后一劑的-引咮酮RTKI后大約一至大約一百天施用。 就是說， 一旦用吲咪酮RTKI(例如，化合物l, 2，和3)進(jìn)行的治療 結(jié)束，就可以評(píng)估患者的免疫反應(yīng)性(例如，可以測(cè)定淋巴細(xì)胞減少 水平，如果有的話，包括很多其他測(cè)定)。所述免疫反應(yīng)如果減弱， 可以進(jìn)行評(píng)估，并且一旦所述免疫反應(yīng)與施用吲哚酮RTKI期間和/ 或之后不久的反應(yīng)相比出現(xiàn)了可檢測(cè)的增強(qiáng)，就可以施用抗-CTLA4抗 體。免疫反應(yīng)水平能夠，但不一定恢復(fù)到給患者施用吲哚酮RTKI之 前的水平。在一種實(shí)施方案中，給需要的患者施用吲哚酮RTKI，優(yōu)選化合 物1，在施用過程結(jié)束時(shí)，允許一段合適的停藥時(shí)間，然后施用抗 -CTLA4。合適的停藥時(shí)間包括任何時(shí)間，其中，通過本領(lǐng)域/>知的方 法評(píng)估的免疫反應(yīng)水平與患者在施用吲哚酮RTKI期間或之后不久的 免疫反應(yīng)水平相比可檢測(cè)地增強(qiáng)了 。典型的間歇給藥方案包括治療和 停藥時(shí)間，參見美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?0/991， 244 (公開號(hào)為 US2005/0182122，
公開日為2005年8月18日)，該文獻(xiàn)4皮以它的全 文形式收作本文參考。盡管可以使用任何合適的停藥時(shí)間以便在施用吲哚酮RTKI之后 增強(qiáng)免疫反應(yīng)，但本發(fā)明在施用所述吲哚酮RTKI和所述抗體之間不 需要任何停藥時(shí)間，因此，所述抗體和吲哚酮RTKI可以大體上同時(shí) 施用。施用吲咮酮RTKI的時(shí)間和施用所述抗體的時(shí)間屬于相關(guān)領(lǐng)域
技術(shù)人員根據(jù)本文所披露的方法的技能范圍。因此，技術(shù)人員根據(jù)本文所提供的方法可以理解的是，劑量和給 藥方案可以按照治療領(lǐng)域眾所周知的方法調(diào)整。就是說，可以方便地 確定最大耐受劑量，并且，還可以測(cè)定給患者提供可檢測(cè)的治療效果 的有效量，例如，可能臨時(shí)需要施用每一種制劑，以便給患者提供可 檢測(cè)的治療效果。因此，盡管本文披露了某些劑量和服藥方案，但這 些例子并非要以任何方式限定可以給本發(fā)明治療方案的患者提供的劑 量和施用方案。另外，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本文所披露的方法可以理 解的是，治療效果，例如但不局限于腫瘤尺寸和/或轉(zhuǎn)移的可檢測(cè)的減少，前列腺癌PSA水平的降低，以及復(fù)發(fā)時(shí)間的延長(zhǎng)和很多其他參數(shù) 可以通過本領(lǐng)域所公知的多種方法評(píng)估，以便評(píng)估治療癌癥的效果， 并且，上述方法以及將來開發(fā)的方法都屬于本發(fā)明的范圍。盡管本發(fā)明以涉及輔助，第 一線和/或第二線治療的方法為例進(jìn) 行了說明，該方法包括同時(shí)施用吲哚酮RTKI，例如，化合物l,和抗 -CTLA4抗體的組合，但掌握了本文提供的方法的技術(shù)人員可以理解的 是，本發(fā)明并不局限于任何特定治療方法。相反，包括組合的吲哚酮 RTKI和抗-CTLA4抗體治療的方法涉及將所述組合用于整個(gè)疾病和治療 過程。更具體地講，本文所披露的新方法可以在轉(zhuǎn)移之前和之后，以 及在患者對(duì)化學(xué)治療劑產(chǎn)生耐受性之后提供治療效果，其中，所述抗 體可以增強(qiáng)免疫反應(yīng)，包括由治療引起的任何反應(yīng)和由吲哚酮RTKI 介導(dǎo)的任何反應(yīng)。因此，本發(fā)明不局限于將本發(fā)明的組合僅用于新輔助治療；相反， 本發(fā)明包括所有治療方案，包括但不局限于癌癥的輔助，第一線，和/ 或第二線治療。這是因?yàn)楸疚呐兜臄?shù)據(jù)表明，包括抗-CLTA-4抗體的 免疫療法可以單獨(dú)或與至少 一 種其他制劑組合在治療期間的任何時(shí)間 點(diǎn)提供治療效果。就是說，通過施用本發(fā)明的抗-CTLA4抗體可以增強(qiáng) 治療方法的效果，該方法能介導(dǎo)腫瘤特異性抗原的釋放，如細(xì)胞毒性 治療(例如，輻射，化學(xué)治療，和PKs的抑制作用等)，其中，所述抗 原要接觸免疫系統(tǒng)。實(shí)際上，本文披露的數(shù)據(jù)還表明，通過組合施用 用于治療癌癥，更具體地講，用于治療前列腺癌，乳腺癌，CRC，黑 素瘤，胰腺癌，肺癌，GIST, RCC等的所述抗體和RTKI療法，可以介導(dǎo) 協(xié)同效果。因此，本發(fā)明提供了用于治療癌癥的重要新型治療劑，以 便增強(qiáng)患者的免疫系統(tǒng)，提供抗肺瘤效果。III. 其他組合治療根據(jù)本文披露的說明，包括給患者施用抗-CTLA4抗體的免疫增強(qiáng) 作用，以及同時(shí)施用所述抗體與吲咮酮RTKI (優(yōu)選化合物1)的組合 的組合的疊加或協(xié)同作用，技術(shù)人員可以理解的是，本發(fā)明涉及多種 組合治療，其中，所述抗體-吲咮酮RTKI是與至少一種其他治療劑組 合之后給患者施用的，以便提供治療效果。盡管本領(lǐng)域技術(shù)人員在掌 握本發(fā)明的方法之后可以方便地了解很多這樣的組合，但下面還是要 討論若干種組合。不過，本發(fā)明并非要局限于這些組合，提供這些組 合僅僅是為了說明目的。同時(shí)施用抗體--引咮酮和其他治療劑(組合治療)包括同時(shí)施用 所述抗-CTLA4抗體，-引咮酮，和一種或多種其他治療劑，并且還包括 同時(shí)施用兩種或兩種以上獨(dú)立的藥用組合物， 一種組合物包括所述抗 -CTLA4抗體，而其他組合物包括所述吲哚酮，以及包括至少一種其他 治療劑的其他組合物。另外，盡管同時(shí)施用或組合(結(jié)合)治療一般 表示所述抗體，吲咮酮，和其他治療劑彼此同時(shí)施用的，但它還包括 同時(shí)，依次或分別施用所述治療的每一種成分。另外，當(dāng)抗體通過靜 脈內(nèi)途徑施用，而所述抗癌制劑(例如，吲哚酮RTKI等)是口服的， 或通過皮下或肌內(nèi)注射時(shí)，可以理解的是，所述組合優(yōu)選以兩個(gè)，三 個(gè)，或三個(gè)以上獨(dú)立的藥用組合物形式施用。在對(duì)哺乳動(dòng)物進(jìn)行額外的化學(xué)療法時(shí)，本領(lǐng)域眾所周知的化學(xué)治 療劑可以與抗-CTLA 4組合使用。另外，還可以使用生長(zhǎng)因子抑制劑， 生物反應(yīng)修飾劑，烷化劑，插入抗生素，長(zhǎng)春花屬生物堿，免疫調(diào)節(jié) 劑，紫杉烷，選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMs)，例如，但不局限于， 拉索昔芬，血管發(fā)生抑制劑，和很多治療劑，下面就討論其中的某些 治療劑。血管發(fā)生抑制劑本文前面業(yè)已討論了血管發(fā)生抑制劑與抗-CTLA4抗體組合使用。 另外，血管發(fā)生抑制劑包括但不局限于，貝伐單抗(AVASTIN; Genentech)， 針對(duì)VEGF的人源化抗體。它可以與5FU組合使用，并 且被證實(shí)是患有結(jié)腸或直腸轉(zhuǎn)移性癌癥的患者的第一線治療。直接針 對(duì)血管發(fā)生因子或它們的受體的制劑通過阻斷自分泌受體信號(hào)傳導(dǎo)提 供了受體-感受性血液學(xué)惡性腫瘤的更大的治療活性。貝伐單抗能產(chǎn)生 持續(xù)的對(duì)循環(huán)VEGF的中和作用，并且可用于治療骨髓發(fā)育異常綜合征(MDS)，淋巴瘤，急性髓細(xì)胞性白血病(AML),和實(shí)體腫瘤。除了 p引咮酮之外，本發(fā)明還涉及血管發(fā)生受體信號(hào)傳導(dǎo)的其他RTKI小分子 抑制劑，用于血液學(xué)惡性腫瘤臨床試驗(yàn)的第一種受體拮抗劑是SU5416(Sugen)，它能破壞VEGFR-1和VEGFR-2受體和c-Kit的配體誘導(dǎo) 的自體磷酸化。SU5416能在白血病細(xì)胞系中抑制VEGF-誘導(dǎo)的克隆源 性反應(yīng)，并且促進(jìn)來自AML患者的成髓細(xì)胞的細(xì)胞凋亡。評(píng)估了其他 RTKIs ，包4舌 PTK787/ZK222584 ( Novartis )， 和 AG-13736(Agouron/Pf izer )治療AML和其他受體-感受態(tài)血液學(xué)惡性腫瘤的作 用。本發(fā)明還包括癌癥，例如，腎癌，和胃腸道基質(zhì)癌等的治療，使 用抗-CTLA4抗體和丐l咮酮RTKI，例如，化合物1，化合物2，和化合 物3，以及至少一種其他血管發(fā)生抑制劑，例如，AG-13736, AG-26， 798等，以及本領(lǐng)域眾所周知的或?qū)黹_發(fā)的其他血管發(fā)生抑制劑的 組合。因此，抗-血管發(fā)生劑，如匪P-2 (基質(zhì)-金屬蛋白酶2)抑制劑， 匪P-9 (基質(zhì)-金屬蛋白酶9)抑制劑，和COX-II (環(huán)加氧酶II)抑 制劑可以與本發(fā)明的抗體-吲哚酮RTKI組合使用。有用的COX-II抑 制劑的例子包括CELEBREX (celecoxib)，伐地考昔，羅非昔布，帕 瑞考昔，德拉昔布，SD-8381 ， ABT-963 ，依托考昔，羅美昔布， BMS-347070, NS-398， RS 57067，美洛昔康。有用的基質(zhì)金屬蛋白酶 抑制劑的例子可以參見國(guó)際專利公開號(hào)W0 96/331"; W0 96/27583;WO 98/07697， WO 98/03516, WO 98/34918， WO 98/34915, WO 98/33768， WO 98/30566， WO 90/05719, WO 99/52910， WO 99/52889， WO 99/29667， 歐洲專利申請(qǐng)?zhí)?80386(
公開日為1997年6月25日，)，97304971. 1 (申請(qǐng)?jiān)粸?997年7月8日，)，99308617. 2 (申請(qǐng)日為1999年10 月29日，)，606046 (
公開日為1994年7月13日，)，931788 (公 開日為1999年7月28日，)，99302232. 1 (申請(qǐng)日為1999年3月 25日，)國(guó)際申請(qǐng)PCT/IB98/01113 (申請(qǐng)日為1998年7月21日)， 英國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?912961. 1 (申請(qǐng)日為1999年6月3日)，美國(guó)臨時(shí) 專利申請(qǐng)?zhí)?0/148, 464 (申請(qǐng)日為1999年8月12日)，和美國(guó)專 利號(hào)5， 863， 949，和5， 861, 510。優(yōu)選的MMP-2和醒P-9抑制劑是少有或沒有抑制MMP-1活性的抑 制劑。更優(yōu)選的是相對(duì)其他基質(zhì)-金屬蛋白酶(即MMP-l，MMP-3，MMP-4， MMP-5， MMP-6， MMP-7， MMP-8， MMP-IO， MMP-ll, MMP-12,和MMP-13) 而言能選擇性地抑制MMP-2和/或MMP-9的抑制劑。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑本文所披露的治療方法還可以與除了吲哚酮RTKI (例如，化合 物1)之外的其他信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑一起使用，如能夠抑制EGFR (上皮 生長(zhǎng)因子受體)反應(yīng)，如EGFR抗體，EGF抗體，和作為EGFR抑制劑 的分子；VEGF (血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子)抑制劑，如VEGF受體和能夠抑 制VEGF的分子；和erbB2受體抑制劑，如能夠結(jié)合erbB2受體的有 機(jī)分子或抗體，例如，HERCEPTIN ( Genentech， Inc. ， San Francisco， CA)。例如，EGFR抑制劑可以參見國(guó)際專利公開號(hào)W0 95/19970， W0 98/14451， W0 98/02434，和美國(guó)專利號(hào)5， 747, 498，并且，正如本 文所披露的，所述物質(zhì)可用于本發(fā)明。EGFR-抑制劑包括但不局限于單 克隆抗體C225 (ERBITUX),抗-EGFR 22Mab ( ImClone Systems Inc., New York, NY )，和ABX-EGF ( panitumumab， Abgenix Inc. ， Fremont, CA )，化合物ZD-1839 ( AstraZeneca ) , BIBX-1382 ( BoehringerIngelheim) ， MDX-447 (Medarex， Inc. ， A畫油le, NJ )，和0LX-103 (Merck & Co. ， Whitehouse Station, NJ ) ， VRCTC-310 ( Ventech Research )和EGF融合毒素(Seragen Inc. ， Hopkinton， MA )。 上 述和其他EGFR-抑制劑可用于本發(fā)明。導(dǎo)致抑制上皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)酪氨酸激酶(TK)的化合物 代表了可用于本發(fā)明的方法的抗腫瘤藥物的相對(duì)較新的類型。很多人 類癌癥在細(xì)胞表面上表達(dá)多種EGFR家族。當(dāng)配體與EGFR結(jié)合時(shí)，它 會(huì)啟動(dòng)一系列細(xì)胞反應(yīng)，導(dǎo)致增強(qiáng)了的細(xì)胞分裂并且影響癌癥發(fā)生和 發(fā)展的其他方面，包括血管發(fā)生，轉(zhuǎn)移性擴(kuò)散，和對(duì)細(xì)胞凋亡的抑制 作用。EGFR-TK抑制劑能選擇性地靶定EGFR家族的成員之一(EGFR(又 被稱作HER1或ErbB-1) ， HER2/neu (又被稱作ErbB-2 ) ， HER3 (又 被稱作ErbB-3)，或HER4 (又被稱作ErbB-4 )),或可以耙定它們 中的兩個(gè)或兩個(gè)以上。適用于本發(fā)明的EGFR-TK抑制劑包括易瑞沙 (IRESSA)，埃羅替尼(TARCEVA) ， CI-1033 (Pfizer) ， GW2016 (GlaxoSmithKline) ， EKB—569 (Wyeth) , PKI—166 (Novartis)， CP-724, 714 (Pfizer)，和BIBX-1382 ( Boeringer-Ingelheim)。 其他EGFR-TK抑制劑披露于申請(qǐng)日為2001年6月18日的美國(guó)專利申 請(qǐng)?zhí)?9/883， 752中。除了p引咮酮RTKI之外，VEGF抑制劑，例如SU-5416和SU-6668 (Sugen Inc., San Francisco, CA)也可用于與抗體和吲咮酮RTKI 的組合組合使用。VEGF抑制劑披露于，例如以下文獻(xiàn)中國(guó)際專利/> 開號(hào)PCT/IB99/00797 (申請(qǐng)日為1999年5月3日，)，國(guó)際專利^> 開號(hào)WO 99/24440; WO 95/21613; WO 99/61422; WO 98/50356; WO 99/10349; WO 97/32856; WO 97/22596; WO 98/54093; WO 98/02438; WO 99/16755; WO 98/02437;美國(guó)專利號(hào)5， 834， 504; 5， 883， 113; 5, 886， 020;和5， 792， 783?？捎糜诒景l(fā)明的某些特定VEGF抑制 劑的其他例子包括IM862 ( Cytran Inc. ， Kirkland， WA ) ; Genentech， Inc., San Francisco, CA的IMC-lCll Imclone抗體，抗-VEGF單克 隆抗體；和angiozyme,從Ribozyme ( Boulder， CO )和Chiron
(Emeryville, CA )購(gòu)買的合成核糖酶。ErbB2受體抑制劑，如GW-282974 (Glaxo Wellcome pic)，和 單克隆抗體AR-209 ( A醒ex Pharmaceuticals Inc., Woodlands, TX)和2B-1 (Chiron)也可以與抗體-丐l咮酮RTKI的組合組合使用， 例如，可以參見國(guó)際專利公開號(hào)W0 98/02434; W0 99/35146; W0 99/35132; W0 98/02437; W0 97/13760; W0 95/19970;美國(guó)專利號(hào)5， 587， 458，和5， 877， 305?？捎糜诒景l(fā)明的ErbB2受體抑制劑還拔: 露于EP1029853 (
公開日為2000年8月23日)和國(guó)際專利公開號(hào)WO 00/44728 (
公開日為2000年8月3日)中。erbB2受體抑制劑化合 物和披露于上述PCT申請(qǐng)，美國(guó)專利和美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)中的物質(zhì)，以及 能抑制erbB2受體的其他化合物和物質(zhì)可以與本發(fā)明的抗體組合使 用。本發(fā)明的治療還可與用于治療異常細(xì)胞生長(zhǎng)或癌的其他制劑一 起使用，包括但不局限于能夠增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)的其他制劑，如其 他的，不同的CTLA4抗體，并且其他制劑還能夠阻斷CTLA4;和抗-增 生制劑，如法呢基蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑(例如，BMS 214662 )，和ot v P3抑制劑，如ctvP 3抗體VITAXIN，ctvP5抑制劑，和p53抑制劑等。當(dāng)本發(fā)明的抗體與其他免疫調(diào)節(jié)劑組合施用時(shí)，所述免疫調(diào)節(jié)劑 可以從，例如下列一組中選擇樹突細(xì)胞激活劑，如CD40配體和抗 -CD40刺激劑抗體，以及抗原呈遞增強(qiáng)劑，T-細(xì)胞向性增強(qiáng)劑，腫瘤-相關(guān)的免疫抑制因子抑制劑，如TGF-P (轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子p )，和IL-10。 優(yōu)選的抗-CD4Q刺激劑抗體包括披露于以下文獻(xiàn)中的抗體國(guó)際專利
發(fā)明者C·M·鮑姆, J·格梅斯-納瓦羅 申請(qǐng)人:輝瑞產(chǎn)品公司