專利名稱：：吲哚醌腫瘤放射增敏的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及通過(guò)施用一種或多種吲哚醌(indoloquinone)使腫瘤細(xì)胞對(duì)放射療法增敏。更特別地，本發(fā)明涉及通過(guò)施用一種或多種剛哚醌使含氧量低的腫瘤細(xì)胞對(duì)放射療法增敏。
背景技術(shù)：
：放射療法(輻射)是用于治療多種類型腫瘤的有效方法。所有癌癥患者中的一半在他們的癌癥治療過(guò)程中會(huì)接受放射療法。雖然放射療法是最廣泛使用的癌癥療法之一，但是當(dāng)用于治療含有低氧細(xì)胞的腫瘤時(shí)，其效力有所降低。低氧細(xì)胞是比其它細(xì)胞接受更少氧的細(xì)胞。典型地，由于它們的低含氧量，低氧細(xì)胞對(duì)放射療法或化學(xué)療法更具抗性。對(duì)放射療法或化學(xué)療法更具抗性的細(xì)胞可帶給癌癥患者更大的危險(xiǎn)，因?yàn)樗鼈兇婊詈蛿U(kuò)散至身體中其它位置的能力增強(qiáng)。目前用于治療含有低氧細(xì)胞腫瘤的常規(guī)藥劑有若干種。這些藥劑包括吲哚醌。一種吲哚醌阿帕茲醌(apaziquone)(E09)為絲裂霉素C的新穎類似物。一旦施用，E09被細(xì)胞內(nèi)還原酶生物還原為活性DNA破壞部分，人們相信其靶向低氧細(xì)胞。臨床試驗(yàn)已表明全身施用E09會(huì)導(dǎo)致到腫瘤的遞送較弱，而在多種異種移植模型中，其局部遞送顯示顯著的抗腫瘤活性。迄今為止，E09僅被用作單一治療劑。本發(fā)明利用了以下發(fā)現(xiàn)當(dāng)與放射療法一起使用時(shí)，E09和其它吲哚醌可以使低氧細(xì)胞對(duì)放射療法增敏，從而有助于治療多種癌癥。吲哚醌與放射療法組合的施用提供了比單獨(dú)施用放射療法或吲哚醌(包括E09)更好的優(yōu)點(diǎn)。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了通過(guò)施用吲哚醌使腫瘤細(xì)胞對(duì)放射療法增敏的方法。更特別地，本發(fā)明涉及通過(guò)施用吲哚醌使低氧腫瘤細(xì)胞對(duì)放射療法增敏的方法。特別地，根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案為下述方法，所述方法包含通過(guò)施用一種或多種吲哚醌使一種或多種腫瘤對(duì)放射療法增敏。在根據(jù)本發(fā)明方法的另一實(shí)施方案中，所述一種或多種腫瘤包含低氧細(xì)胞。在根據(jù)本發(fā)明方法的另一實(shí)施方案中，所述方法還包含向有需要的患者施用一種或多種吲哚醌，其中所述施用包含全身的和/或局部施用，且所述患者將接受至少兩次放射療法。在所述方法的另一實(shí)施方案中，通過(guò)口內(nèi)施用來(lái)施用一種或多種吲哚醌。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用通過(guò)腫瘤內(nèi)施用進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用通過(guò)靜脈內(nèi)施用進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用通過(guò)膀胱內(nèi)施用進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)施用進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種口引哚醌的施用通過(guò)選自下述施用途徑的任何組合中的一種或多種的途徑進(jìn)行，所述施用途徑為口內(nèi)施用、腫瘤內(nèi)施用、靜脈內(nèi)施用、膀胱內(nèi)施用和動(dòng)脈內(nèi)施用。在所述方法的另一實(shí)施方案中，所述一種或多種吲哚醌包含阿帕茲醌(apaziquone)(E09)。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用在所述患者的所有放射療法之前進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用在所述患者的部分所述放射療法之前進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用在所述患者的所有放射療法之后進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用在所述患者的部分所述放射療法之后進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用在所述患者的所有所述放射療法之前和之后進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用在所述患者的所有放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的全部放射療法之后進(jìn)行。在所述方法的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌的施用在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后進(jìn)行。本發(fā)明還包括組合物。在根據(jù)本發(fā)明的一種組合物中，所述組合物包含一種或多種吲哚醌，其中所述一種或多種吲哚醌用于與放射療法組合施用用于治療腫瘤。在組合物的另一實(shí)施方案中，腫瘤包含低氧細(xì)胞。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌用于全身和/或局部施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌用于通過(guò)口內(nèi)施用施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌用于通過(guò)腫瘤內(nèi)施用而施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌用于靜脈內(nèi)施用而施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌用于通過(guò)膀胱內(nèi)施用而施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌用于為通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)施用而施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌用于通過(guò)選自以下下述施用途徑的任意組合中的一種或多種的途徑施用口內(nèi)施用、腫瘤內(nèi)施用、靜脈內(nèi)施用、膀胱內(nèi)施用和動(dòng)脈內(nèi)施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌包含阿帕茲醌(apaziquone)(E09)。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于施用給將接受至少兩次放射治療期的患者。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于在所述患者的所有放射療法之前施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于在所述患者的部分所述放射療法之前施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于在所述患者的所有放射療法之后施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于在所述患者的部分所述放射療法之后施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于在所述患者的所有所述放射療法之前和之后施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于在所述患者的所有放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的全部放射療法之后施用。在組合物的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌被用于在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后施用。本發(fā)明還包括給藥方案。根據(jù)本發(fā)明的給藥方案的一個(gè)實(shí)施方案包含一種或多種吲哚醌和下述指導(dǎo)信息，所述指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌與放射療法組合用于治療腫瘤的施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，腫瘤包含低氧細(xì)胞。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌的全身和/或局部施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌通過(guò)口內(nèi)施用的施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌通過(guò)腫瘤內(nèi)施用的施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌通過(guò)靜脈內(nèi)施用的施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌通過(guò)膀胱內(nèi)施用的施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌通過(guò)動(dòng)脈內(nèi)施用的施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌通過(guò)選自下述施用途徑的任意組合中的一種或多種的途徑施用的施用口內(nèi)施用、腫瘤內(nèi)施用、靜脈內(nèi)施用、膀胱內(nèi)施用和動(dòng)脈內(nèi)施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，一種或多種吲哚醌包含阿帕茲醌(apaziquone)(E09)。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌施用給會(huì)接受至少兩次放射治療期的患者。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌在所述患者的所有放射療法之前施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌在所述患者的部分所述放射療法之前施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌在所述患者的所有放射療法之后施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌在所述患者的部分所述放射療法之后施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌在所述患者的所有所述放射療法之前和之后施用；在所述患者的所有放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的全部放射療法之后施用。在給藥方案的另一實(shí)施方案中，指導(dǎo)信息指導(dǎo)一種或多種吲哚醌在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后施用。附圖概述圖1顯示了腫瘤體積對(duì)腫瘤氧張力的影響。圖2顯示低氧會(huì)下調(diào)U87腫瘤細(xì)胞中的NQOl。圖3顯示低氧腫瘤具有更高的、細(xì)胞色素P450還原酶對(duì)NQOl的比例。圖4顯示分次放射療法提高了腫瘤異種移植中細(xì)胞色素P450對(duì)NQOl的比例。圖5顯示放射療法和隨后的E09或運(yùn)載體施用后的平均腫瘤體積。圖6顯示放射療法和隨后的E09或運(yùn)載體施用后腫瘤生長(zhǎng)到2000mm3的線性回歸和所估計(jì)的時(shí)間。圖7顯示根據(jù)圖6描繪的趨勢(shì)線。圖8顯示放射療法和之前的E09或運(yùn)載體施用后的平均腫瘤體積。圖9顯示放射療法和之前的E09或運(yùn)載體施用后腫瘤生長(zhǎng)到2000mm3的線性回歸和所估計(jì)的時(shí)間。術(shù)語(yǔ)定義在展示本發(fā)明之前，提供下文會(huì)用到的某些術(shù)語(yǔ)定義的理解可能是有幫助的術(shù)語(yǔ)"患者"包括具有至少一個(gè)腫瘤的任何活的生物。活的生物可以是任何哺乳動(dòng)物、魚(yú)、爬行動(dòng)物或鳥(niǎo)。哺乳動(dòng)物包括但不限于靈長(zhǎng)類(包括人)、犬、貓、山羊、綿羊、兔、豬、馬和牛。術(shù)語(yǔ)"治療"或"有助于治療"包括預(yù)防實(shí)體瘤、延遲實(shí)體瘤發(fā)展或生長(zhǎng)、縮小或消除實(shí)體瘤。類似地，適當(dāng)時(shí)這些術(shù)語(yǔ)包括醫(yī)學(xué)治療和/或預(yù)防性施用。術(shù)語(yǔ)"指導(dǎo)信息"包括伴隨藥物產(chǎn)品的提供以下描述的信息醫(yī)生、藥劑師或患者做出與產(chǎn)品使用相關(guān)的通知決定所需的如何施用產(chǎn)品、產(chǎn)品的目的和/或安全性和效力的數(shù)據(jù)。指導(dǎo)信息通常稱為藥物產(chǎn)品的"標(biāo)簽"并可作為產(chǎn)品內(nèi)容物而包括在產(chǎn)品中。指導(dǎo)信息可以以許多不同的形式出現(xiàn)，包括但不僅限于紙內(nèi)容物、光盤或指向包含指導(dǎo)信息的網(wǎng)站的鏈接。術(shù)語(yǔ)"前藥"包括在體內(nèi)快速轉(zhuǎn)化(例如通過(guò)水解)為可用于本發(fā)明化合物的化合物。前藥的詳細(xì)討論在Higuchietal.，ProdrugsasNovelDeliverySystems,Vol.14，oftheA.C.S.D.SymposiumSeries禾口Roche(ed.)，BioreversibleCarriersinDrugDesign,AmericanPharmaceuticalAssociationandPergamonPress,1987中提供。術(shù)語(yǔ)"增敏"是指對(duì)一種效應(yīng)更加敏感。短語(yǔ)"放射療法"包括被一段時(shí)間間隔開(kāi)的施用給患者的放射治療。將放射療法間隔開(kāi)的時(shí)間段可由治療醫(yī)生或獸醫(yī)確定，其可包括但不僅限于分鐘、小時(shí)、天、周、月或年。給定的放射療法可與緊接著的之前或之后的放射療法相同或不同。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及下述發(fā)現(xiàn)吲哚醌可以使腫瘤對(duì)放射療法增敏，從而有助于治療多種癌癥。更特別地，吲哚醌可以通過(guò)靶向腫瘤內(nèi)的低氧細(xì)胞并破壞其DNA使得其對(duì)放射療法增敏。重要的是吲哚醌以最小的正常細(xì)胞和組織毒性達(dá)到這些效應(yīng)。阿帕茲醌(apaziquone)("E09";3-羥甲基-5-氮丙啶基-1-甲基-2-(111-卩引哚_4,7-二酮)-丙-/3-烯-"-醇；IUPAC:3-羥甲基-5-氮丙啶基-l-甲基-2-(1H-口引哚_4,7-二酮)-丙烯醇)為一種n引哚醌，其為絲裂霉素C的新穎類似物。人們相信E09激活的主要機(jī)制與其它吲哚醌類似，其涉及通過(guò)轉(zhuǎn)移一個(gè)或兩個(gè)電子的細(xì)胞酶還原、分別形成半醌和氫醌。半醌在好氣條件下的氧化產(chǎn)生氧化還原循環(huán)，其可通過(guò)形成活性氧簇(ROS)、引起DNA鏈斷裂而引起細(xì)胞死亡。半醌/氫醌可(特別是在低氧條件下)烷基化DNA及其它大分子或與之交聯(lián)，引起細(xì)胞死亡。在腫瘤中表達(dá)的還原酶可在E09的選擇性中起重要作用。一種兩電子還原酶NQOl(NAD(P)H:醌氧化還原酶)可選擇性地耙向經(jīng)充氧的細(xì)胞，而一電子還原酶如細(xì)胞色素P450還原酶可以更有效地靶向低氧細(xì)胞。Loadmanetal.,137Br.J.Pharmacol.701-709，2002。根據(jù)本發(fā)明的多種實(shí)施方案描述于以下實(shí)施例中。實(shí)施例l:腫瘤體積對(duì)腫瘤氧張力的影響將U-87人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞(美國(guó)模式培養(yǎng)物保藏所)維持在含10X胎牛血清(AtlantaBiologicals)的aMEM培養(yǎng)基(Sigma)中。將U-87人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞(100^PBS中5x105細(xì)胞)皮下注射進(jìn)無(wú)胸腺NCRNUM裸鼠(TaconicFarms)的右后肢內(nèi)，并使其生長(zhǎng)為550mm3的低氧體積。使用OxfordOxylite纖維光學(xué)探針(Oxford,England)測(cè)量腫瘤氧張力。檢測(cè)體系以纖維光學(xué)探針末端的釕色素藍(lán)光激發(fā)為基礎(chǔ)，所述藍(lán)光激發(fā)由氧淬滅。對(duì)經(jīng)麻醉的小鼠(75mg/kg氯胺酮和0.3mg/kg乙酰丙嗪)進(jìn)行測(cè)量，同時(shí)用加熱板將體溫維持在37°C。使用25號(hào)針穿刺腫瘤囊以便于插入光學(xué)纖維探針。探針進(jìn)入腫瘤2-4mm深度。圖1顯示多個(gè)小腫瘤(圈，N=5)和多個(gè)大腫瘤(方形，N=6)的中位腫瘤p02值。結(jié)果指出小腫瘤比大腫瘤具有更高的腫瘤氧張力。實(shí)施例2:低氧腫瘤中NOOl和細(xì)胞色素P450還原酶水平如所述的，將U-87人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞皮下注射進(jìn)無(wú)胸腺NCRNUM小鼠的右后肢內(nèi)，并使其生長(zhǎng)到550mi^直徑以誘導(dǎo)低氧。在含有40mM二硫蘇糖醇、14mg/L抑肽酶、0.7mg/L胃蛋白酶抑制劑和5mM4-(2-氨乙基)-苯磺酰氟化物的LDS樣品緩沖液(Invitrogen,Carlsbad,CA)中制備腫瘤樣品。將樣品溶解于NuPage10%bis-Tris凝膠(Invitrogen,Carlsbad,CA)中。使用半干轉(zhuǎn)移裝置(Pharmacia-LKBmultiphorII)將蛋白質(zhì)移至聚偏二氟乙烯斷AmershamPharmaciaBiotech,Piscataway,NJ)上。使用單克隆和多克隆抗體進(jìn)行免疫印跡抗人NQOl、抗人細(xì)胞色素P450還原酶和抗GAPDH。使用TropixWestern-Star蛋白質(zhì)檢測(cè)試劑盒(AppliedBiosystems;FosterCity,CA)通過(guò)增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光進(jìn)行免疫檢測(cè)。圖2顯示了對(duì)含氧正常的U87細(xì)胞和在低氧下處理遞增長(zhǎng)度時(shí)間的U87細(xì)胞的Western印跡分析。該圖2顯示了低氧下調(diào)U87腫瘤細(xì)胞中的NQOl。圖3顯示了來(lái)自三個(gè)小腫瘤(圖1;平均=143mm3)和三個(gè)遞增尺寸的低氧腫瘤(圖2、3和4;平均=693mm3)的合并的腫瘤樣品。該圖3顯示低氧腫瘤具有更高的細(xì)胞色素P450還原酶對(duì)NQOl的比例。圖4顯示了對(duì)三個(gè)未處理腫瘤(對(duì)照1、2、3)和三個(gè)用每天三次7.5Gy分級(jí)輻射過(guò)的腫瘤(RTl、2、3)的Western印跡分析。在最后一次輻射后24小時(shí)收集樣品。該圖4顯示了分級(jí)的放射療法提高腫瘤異種移植體內(nèi)細(xì)胞色素P450還原酶對(duì)NQO1的比例。如前所述并不受任何理論束縛，NQOl和細(xì)胞色素P450還原酶水平的這些差異可為用于低氧腫瘤細(xì)胞的E09的選擇性提供基礎(chǔ)。實(shí)施例3:E09&放射療法對(duì)平均腫瘤體積的影響實(shí)施例3^短期研究將U-87人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞(美國(guó)模式培養(yǎng)物保藏所)維持在含10X胎牛血清(AtlantaBiologicals)的aMEMi咅養(yǎng)基(Sigma)中。將U-87人成膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞懸浮液皮下注射進(jìn)無(wú)胸腺NCRNUM小鼠(TaconicFarms)的右后肢(100^PBS中5x105細(xì)胞)內(nèi)，并在處理前使其生長(zhǎng)為550mmS的低氧體積。用E09和分次放射療法時(shí)間表處理腫瘤，以檢測(cè)E09會(huì)使腫瘤細(xì)胞對(duì)放射療法增敏的假設(shè)。在第1、2和3天，在每次放射療法部分后30分鐘施用E09或運(yùn)載體。該研究使用4個(gè)處理組運(yùn)載體(DMSO)、單獨(dú)放射療法(3天x7.5Gy)、E09(3天x2mg/kg)和E09十放射療法(3天x7.5Gyx2mg/kg)。通過(guò)腫瘤內(nèi)注射局部施用E09以達(dá)到最佳遞送。使用在250kV、10mA下用2-mm鋁過(guò)濾運(yùn)行的X射線機(jī)器(Pantak)對(duì)經(jīng)麻醉的小鼠進(jìn)行輻射。有效光子能量為SOkeV。用分別為75mg/kg和0.30mg/kg濃度的氯胺酮和乙酰丙嗪的組合麻醉小鼠。各小鼠被限制在鉛盒中，其帶有腫瘤的腿通過(guò)側(cè)面的開(kāi)口伸出，使得腫瘤被局部輻射。圖5顯示了所觀察到的4個(gè)治療組的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。使用混合效應(yīng)回歸建立腫瘤體積以十為底對(duì)數(shù)作為時(shí)間和處理的函數(shù)(腫瘤生長(zhǎng)分析)的模型。使用對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)化的輸出是因?yàn)樵摮叽绲哪[瘤大約為指數(shù)生長(zhǎng)，以及因此腫瘤體積的對(duì)數(shù)對(duì)于時(shí)間大約為線性。該方法恰當(dāng)?shù)靥幚砹瞬黄胶獾臄?shù)據(jù)(例如對(duì)于不同動(dòng)物的不同測(cè)量數(shù)量)，并考慮到了各動(dòng)物的測(cè)量對(duì)時(shí)間的相關(guān)性。這些分析用SAS8.2(SASInstituteInc.,Cary,NC,1999-2001)來(lái)進(jìn)行。圖6顯示了在第1、2和3天放射療法后30分鐘接受E09或運(yùn)載體的動(dòng)物中腫瘤生長(zhǎng)到2000mm3的線性回歸和估計(jì)的時(shí)間。圖7顯示了根據(jù)圖6—起描繪的趨勢(shì)線。如從這些圖中可看出的，接受E09和放射療法的動(dòng)物顯示了最慢的腫瘤生長(zhǎng)速率。如下表所示，運(yùn)載體處理組中平均腫瘤生長(zhǎng)符合3.2天的倍增時(shí)間。E09單獨(dú)或放射療法單獨(dú)施用時(shí)分別將腫瘤倍增時(shí)間提高至約4.6天(pO.OOl對(duì)對(duì)照)或8.4天(p<0.001與對(duì)照比較)。E09和放射療法的組合將倍增時(shí)間提高至11.7天，是比E09單獨(dú)(pO.001)或放射療法單獨(dú)(比較第1-7天p=0.027)的相當(dāng)用藥法所觀察到的更強(qiáng)的效應(yīng)。因此，E09和放射療法的組合是累積的。另外，用E09處理后的任何組中未觀察到體重減輕或局部正常毒性的增加。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>%八:腫瘤體積增加的平均速率(每天增加％)95%C1:95%置信區(qū)間T^腫瘤體積平均倍增時(shí)間(天)實(shí)施例3b.長(zhǎng)期研究研究下述方案其中E09和放射療法在更長(zhǎng)的時(shí)間段內(nèi)施用。在該研究中，E09或放射療法每周在不連續(xù)的兩天單獨(dú)或組合遞送，持續(xù)3周。六組單獨(dú)接受運(yùn)載體(DMSO)、在放射療法之前30分鐘接受運(yùn)載體(2天x7.5Gy)、在放射療法后30分鐘接受運(yùn)載體(2天x7.5Gy)、只接受E09(2天x3mg/kg)、放射療法前30分鐘接受E09和放射療法后30分鐘接受E09。通過(guò)腫瘤內(nèi)注射局部施用E09以達(dá)到最佳遞送。圖8顯示了每周兩次放射療法持續(xù)三周之前或之后施用E09所觀察到的均值和SE。圖8將放射療法之前或之后接受E09的組組合為一組，顯示出總體而言，該組顯示出最慢的腫瘤體積生長(zhǎng)速率。未將放射療法之前或之后接受E09的兩組組合的下表顯示最有效的給藥時(shí)間表為在放射療法之前施用E09。該給藥時(shí)間表引起最長(zhǎng)的倍增時(shí)間。腫瘤達(dá)到3000mn^的估計(jì)時(shí)間包括<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>。/。A:腫瘤體積增加的平均速率(每天增加％)95%0:95%置信區(qū)間T2x:腫瘤體積平均倍增時(shí)間(天)當(dāng)E09以更長(zhǎng)期用藥法(每周兩次，持續(xù)3周)遞送時(shí)，與放射療法之前施用相比E09更為有效。這些研究驗(yàn)證了之前的發(fā)現(xiàn)E09作為單獨(dú)的劑具有抗腫瘤活性，更重要的是，說(shuō)明E09是重要的放射療法增敏劑。圖9顯示在放射療法(不連續(xù)的2天/周x7.5Gy)持續(xù)三周之前或之后30分鐘接受E09(3mg/kg)或運(yùn)載體的動(dòng)物中腫瘤生長(zhǎng)至2000mn^的線性回歸和估計(jì)的時(shí)間。實(shí)施例中所述結(jié)果概述平均為550mm3的腫瘤在放射生物學(xué)的低氧范圍內(nèi)(圖1)。低氧和分析分次放射療法提高細(xì)胞色素P450還原酶對(duì)NQ01的比例，這可發(fā)生作用，以增敏低氧腫瘤(圖2-4)。然而，NQOl的出現(xiàn)還可發(fā)生作用，以除了放射治療之外還消除充氧的腫瘤細(xì)胞。如圖5、6、7和表l所示，E09單獨(dú)或放射療法單獨(dú)分別使腫瘤倍增時(shí)間增加1.4天(pO.001與對(duì)照比較)或5.2天(pO.OOl與對(duì)照比較)。E09和放射療法的組合使平均倍增時(shí)間增加8.5天到11.7天，這是比通過(guò)E09單獨(dú)(pO.001)或放射療法單獨(dú)(p=0.027比較第1-7天)的相當(dāng)用藥法所觀察到的更強(qiáng)的效應(yīng)。在用E09處理后的任何組中均未觀察到顯著的體重減輕或局部正常毒性的增加。另外，進(jìn)行長(zhǎng)期處理試驗(yàn)(圖8、9和表2)。在對(duì)照組(運(yùn)載體)中，腫瘤具有3.6天的倍增時(shí)間(表2)。放射療法單獨(dú)將該生長(zhǎng)速率基本上降低至7.0天(p=0.001與對(duì)照比較)，而E09單獨(dú)降低至6.1天(p=0.006與對(duì)照比較)。放射療法與E09組合引起腫瘤生長(zhǎng)速率的進(jìn)一步降低。在E09之前進(jìn)行的放射療法將每日腫瘤倍增時(shí)間減緩到9.1天(與放射療法單獨(dú)比較p=0.25、與E09單獨(dú)比較為0.11和與對(duì)照比較為0.001)。然而，在E09后進(jìn)行的放射療法具有最強(qiáng)的效應(yīng)，將平均每日腫瘤倍增時(shí)間減緩到17.3天(與放射療法單獨(dú)比較p=0.007、與E09單獨(dú)比較為0.005和與對(duì)照比較為0.001)。這些結(jié)果第一次指出E09對(duì)放射療法分次用藥法可能是有利的，其應(yīng)作為放射療法增敏劑被進(jìn)一步研究。E09單獨(dú)或與放射療法組合均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著的抗腫瘤活性。含有本發(fā)明活性成分的藥物組合物適用于施用給人或其它哺乳動(dòng)物。典型地，所述藥物組合物是無(wú)菌的，并不含有施用時(shí)會(huì)引起有害反應(yīng)的有毒的、致癌的或致突變的化合物。藥物組合物的施用可在實(shí)體瘤發(fā)生之前、之中或之后進(jìn)行。本發(fā)明的方法可使用如上所述的活性成分或其生理學(xué)可接受的鹽、衍生物、前藥或溶劑化物完成?；钚猿煞挚勺鳛榧兓衔锸┯茫蜃鳛楹我环N或所有實(shí)體的藥學(xué)組合物施用。藥學(xué)組合物包括下述組合物，其中以達(dá)到其期望目的的有效數(shù)量施用活性成分。更特別地，"治療有效數(shù)量"是指有效預(yù)防實(shí)體瘤發(fā)生、使其消退、延緩其發(fā)展或減小其大小的數(shù)量。治療有效數(shù)量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力內(nèi)，特別是按照本文所提供的詳細(xì)公開(kāi)內(nèi)容。"治療有效劑量"是指引起達(dá)到所期望效果的活性成分?jǐn)?shù)量。這類活性成分的毒性和治療效力可在細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)操作確定，例如確定LD50(群體50%致死的劑量)和ED50(群體50%治療有效的劑量)。有毒效應(yīng)和治療效應(yīng)之間的劑量比例為治療指數(shù)，其被表示為L(zhǎng)D50和ED50之間的比例。高治療指數(shù)是優(yōu)選的。獲得的數(shù)據(jù)可用于闡明用于人的劑量范圍?；钚猿煞值膭┝?jī)?yōu)選位于包括有一點(diǎn)毒性或沒(méi)有毒性的ED50的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。劑量可在該范圍內(nèi)根據(jù)所使用的劑型和所使用的施用途徑改變。精確的配方和劑量由個(gè)體醫(yī)生考慮患者的條件決定。給藥數(shù)量和間隔可被單獨(dú)調(diào)整，以提供足夠維持治療或預(yù)防效果的活性成分水平。如所述的，根據(jù)本發(fā)明的方法、組合物和給藥方案可如下應(yīng)用或施用在所述患者的所有放射療法之前；在所述患者的部分所述放射療法之前；在所述患者的所有放射療法之后；在所述患者的部分所述放射療法之后；在所述患者的所有所述放射療法之前和之后；在所述患者的所有放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后；在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的全部放射療法之后；和在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后。所施用的藥學(xué)組合物的數(shù)量可取決于被治療的患者、患者的體重、痛苦的嚴(yán)重性、施用的方式和開(kāi)處方的醫(yī)生的判斷?；钚猿煞挚蓡为?dú)施用，或與根據(jù)預(yù)期的施用途徑和標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)實(shí)踐選擇的藥學(xué)載體混合施用。因此，可以使用一種或多種生理學(xué)可接受載體(包括賦形劑和輔料)以常規(guī)方式配制用于本發(fā)明用途的藥學(xué)組合物，所述載體是便于將活性成分加工為可藥學(xué)使用的制劑的。當(dāng)施用治療有效數(shù)量的活性成分時(shí)，組合物可以是無(wú)熱原的、腸胃外可接受的水性溶液。這類腸胃外可接受的溶液根據(jù)pH、等滲性、穩(wěn)定性等的配制屬于本
技術(shù)領(lǐng)域：
。對(duì)獸醫(yī)用途而言，活性成分作為合適的可接受配方根據(jù)正常獸醫(yī)實(shí)踐施用。獸醫(yī)師可容易地確定最適合特定動(dòng)物的給藥方案?？蓪?duì)實(shí)施方案進(jìn)行多種改變和修飾，而不偏離本發(fā)明的范圍和精神使用，所述適應(yīng)和修飾可按照不同于本文特定描述的方式來(lái)實(shí)踐。上述描述旨在用于說(shuō)明而非限制。本發(fā)明的范圍僅由權(quán)利要求書(shū)確定。本文已使用的術(shù)語(yǔ)和表達(dá)作為術(shù)語(yǔ)的描述而非限制使用，并且在這類術(shù)語(yǔ)和表達(dá)的使用中不意欲排除所示和所述特征的等同或其部分，承認(rèn)多種修飾可能在本發(fā)明所要求的范圍內(nèi)。另外，本發(fā)明任何實(shí)施方案的任意一種或多種特征可以與本發(fā)明任意其它實(shí)施方案的任意一種或多種特征組合，而不偏離本發(fā)明的范圍。除非另有說(shuō)明，用于說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求書(shū)中的表達(dá)成分?jǐn)?shù)量、如分子量的性質(zhì)、反應(yīng)條件的所有數(shù)字等應(yīng)理解為在所有情況下由術(shù)語(yǔ)"約"修飾。因此，除非指出反例，以下說(shuō)明書(shū)和附加的權(quán)利要求書(shū)中公開(kāi)的數(shù)量參數(shù)是近似值，其可根據(jù)本發(fā)明想要獲得的所需性質(zhì)而變化。至少，并不企圖限制將等同原則應(yīng)用于權(quán)利要求書(shū)的范圍，每個(gè)數(shù)量參數(shù)至少應(yīng)按照經(jīng)報(bào)導(dǎo)的有效數(shù)字的位數(shù)并通過(guò)應(yīng)用常規(guī)約數(shù)技術(shù)解釋。不反對(duì)公開(kāi)本發(fā)明廣大范圍的數(shù)量范圍和參數(shù)為約數(shù)，而特定實(shí)施例中公開(kāi)的數(shù)量值則是盡可能精確地報(bào)導(dǎo)的。然而，任何數(shù)量值固有地包含誤差，這是從它們各自檢測(cè)測(cè)量中發(fā)現(xiàn)的標(biāo)準(zhǔn)差必然地產(chǎn)生的。除非在本文另有說(shuō)明或同上下文明顯抵觸，描述本發(fā)明的上下文中(特別是在以下的權(quán)利要求書(shū)上下文中)使用的術(shù)語(yǔ)"一個(gè)"("a"，"an")和"這個(gè)"("the")和類似的指代被解釋為包括單數(shù)和復(fù)數(shù)。對(duì)本文數(shù)值范圍的敘述僅意圖用作為引用落入該范圍的每個(gè)單獨(dú)的值的速記方法(shorthandmethod)。除非本文另有說(shuō)明，每個(gè)單獨(dú)的值都被并入說(shuō)明書(shū)，就像其被單獨(dú)地并入本文一樣。除非在本文另有說(shuō)明或與上下文明顯抵觸，本文所述的所有方法可以以任何合適的順序進(jìn)行。本文所提供的任何和所有實(shí)例或舉例文字(例如"例如")的使用僅意欲用來(lái)更好地闡述本發(fā)明，而非對(duì)本發(fā)明所要求保護(hù)的范圍設(shè)定限制。說(shuō)明書(shū)中沒(méi)有提及的文字應(yīng)被解釋為指代實(shí)施本發(fā)明必需的任何不要求保護(hù)的元素。本文公開(kāi)的備選元素或?qū)嵤┓桨傅姆纸M不應(yīng)解釋為限制。各組成員可被單獨(dú)提到或要求保護(hù)，或與本文發(fā)現(xiàn)的組的其它成員或其它元素任意組合。應(yīng)當(dāng)理解，由于便利和/或?qū)＠脑?，一組的一個(gè)或多個(gè)成員可以被包括進(jìn)一組中或從該組刪除。當(dāng)任何這類包括或刪除發(fā)生時(shí)，本申請(qǐng)文件被認(rèn)為含有經(jīng)改寫的組，以滿足對(duì)附加的權(quán)利要求書(shū)中所用的所有馬庫(kù)什組的書(shū)面描述。本文描述了根據(jù)本發(fā)明的某些實(shí)施方案，包括本發(fā)明的發(fā)明人已知的實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的最佳模式。當(dāng)然，本領(lǐng)域常規(guī)技術(shù)人員閱讀上述描述后會(huì)明白這些實(shí)施方案的變更。本發(fā)明人預(yù)期熟練的技術(shù)人員能適當(dāng)?shù)夭捎眠@類變更，且本發(fā)明者意欲使得本發(fā)明以與本文特定描述不同的方式應(yīng)用。因此，至少可適用的法律允許，本發(fā)明包括附加的權(quán)利要求書(shū)中所述的主體內(nèi)容的所有修飾和等價(jià)物。另外，除非本文另有說(shuō)明或與上下文明顯抵觸，在其所有可能變化中，上述元件的任何組合由本發(fā)明所包括。另外，在本申請(qǐng)文件中，引用了大量專利和印刷出版物作為參考文獻(xiàn)。上述各參考文獻(xiàn)和印刷出版物通過(guò)引用其整體并入本文。最后，應(yīng)理解本文公開(kāi)的本發(fā)明的實(shí)施方案僅用于闡述本發(fā)明的原則。其它可使用的修飾也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。因此，通過(guò)示例而非限制的方式，可根據(jù)本文的教導(dǎo)利用本發(fā)明的備選形式。因此，本發(fā)明并非被限制為如精確地所示和所述的。權(quán)利要求1.一種方法，其包括通過(guò)施用一種或多種吲哚醌而使一種或多種腫瘤對(duì)放射療法增敏。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一種或多種腫瘤包含低氧細(xì)胞。3.如權(quán)利要求1所述的方法，其還包括向有需要的患者施用所述一種或多種吲哚醌，其中所述施用包含全身的和/或局部的施用，且所述患者將接受至少兩種放射療法。4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述一種或多種吲哚醌的所述施用通過(guò)選自以下組中的一種或多種途徑發(fā)生，所述組由口內(nèi)施用、腫瘤內(nèi)施用、靜脈內(nèi)施用、膀胱內(nèi)施用和動(dòng)脈內(nèi)施用構(gòu)成。5.如權(quán)利要求1所述的方法，其中所述一種或多種吲哚醌包含阿帕茲酉昆(apaziquone)(E09)。6.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述一種或多種吲哚醌的所述施用以選自以下的方式發(fā)生在所述患者的所有放射療法之前；在所述患者的部分所述放射療法之前；在所述患者的所有放射療法之后；在所述患者的部分所述放射療法之后；在所述患者的所有所述放射療法之前和之后；在所述患者的所有放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后；在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的全部放射療法之后；和在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后。7.包含一種或多種吲哚醌的組合物，其中所述一種或多種吲哚醌用于與放射療法組合施用以治療腫瘤。8.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述腫瘤包含低氧細(xì)胞。9.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述一種或多種吲哚醌用于全身性和/或局部施用。10.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述一種或多種吲哚醌用于通過(guò)選自下述組的一種或多種途徑施用，所述組由口內(nèi)施用、腫瘤內(nèi)施用、靜脈內(nèi)施用、膀胱內(nèi)施用和動(dòng)脈內(nèi)施用構(gòu)成。11.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述一種或多種剛哚醌包含阿帕茲酉昆(apaziquone)(E09)。12.如權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述一種或多種B引哚醌用于施用給會(huì)接受至少兩種放射療法的患者。13.如權(quán)利要求13所述的組合物，其中所述一種或多種吲哚醌用于以選自以下方式的方式施用在所述患者的所有放射療法之前；在所述患者的部分所述放射療法之前；在所述患者的所有放射療法之后；在所述患者的部分所述放射療法之后；在所述患者的所有所述放射療法之前和之后；在所述患者的所有放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后；在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的全部放射療法之后；和在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后。14.包含一種或多種吲哚醌和指導(dǎo)信息的給藥方案，所述指導(dǎo)信息指導(dǎo)所述一種或多種吲哚醌的施用與放射療法組合用于治療腫瘤。15.如權(quán)利要求14所述的給藥方案，其中所述腫瘤包含低氧細(xì)胞。16.如權(quán)利要求14所述的給藥方案，其中所述指導(dǎo)信息指導(dǎo)所述一種或多種吲哚醌的全身和/或局部施用。17.如權(quán)利要求14所述的給藥方案，其中所述指導(dǎo)信息指導(dǎo)所述一種或多種卩引哚醌通過(guò)選自以下組的一種或多種途徑施用，所述組由口內(nèi)施用、腫瘤內(nèi)施用、靜脈內(nèi)施用、膀胱內(nèi)施用和動(dòng)脈內(nèi)施用構(gòu)成。18.如權(quán)利要求14所述的給藥方案，其中所述一種或多種吲哚醌包含阿帕茲醌(apaziquone)(E09)。19.如權(quán)利要求14所述的給藥方案，其中指導(dǎo)信息指導(dǎo)所述一種或多種吲哚醌施用給將接受至少兩種放射療法的患者。20.如權(quán)利要求19所述的給藥方案，其中所述一種或多種吲哚醌用于以選自以下方式的方式施用在所述患者的所有放射療法之前；在所述患者的部分所述放射療法之前；在所述患者的所有放射療法之后；在所述患者的部分所述放射療法之后；在所述患者的所有所述放射療法之前和之后；在所述患者的所有放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后；在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的全部放射療法之后；和在所述患者的部分所述放射療法之前和所述患者的部分所述放射療法之后。全文摘要一般而言，本發(fā)明涉及吲哚醌引起的腫瘤放射療法增敏。更特別地，本發(fā)明涉及下述發(fā)現(xiàn)吲哚醌由于其選擇性靶向低氧細(xì)胞和破壞這些低氧細(xì)胞DNA的能力而作為放射增敏劑(放射療法佐劑)。吲哚醌以最小的正常細(xì)胞和組織毒性達(dá)達(dá)到這些效果。文檔編號(hào)A61K31/403GK101208086SQ200680010438公開(kāi)日2008年6月25日申請(qǐng)日期2006年3月31日優(yōu)先權(quán)日2005年3月31日發(fā)明者蘭迪·伯德,古魯·雷迪,尚塔·喬拉,路吉·萊納茲,阿達(dá)姆·P·迪克爾申請(qǐng)人:癌癥治療公司