專利名稱：：用于治療粘膜疾病的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用于治療粘膜疾病的方法和組合物。特別地，本發(fā)明涉及用于治療哺乳動(dòng)物患者與粘膜屏障功能降寸氐相關(guān)病癥的方法和組合物。
背景技術(shù)：
：上皮組織作為兩流體間隔之間的屏障，上皮細(xì)胞和結(jié)合它們的緊密接點(diǎn)(tightjunction)(以下簡稱TJ)提供上皮屏障功能。TJ是細(xì)胞-細(xì)胞接點(diǎn)復(fù)合體的最頂部組分，在組織內(nèi)細(xì)胞極性的建立和維持中起著至關(guān)重要的作用，作為針對(duì)大分子的選擇性屏障，并防止頂部和基側(cè)膜區(qū)域之間的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)擴(kuò)散。TJ還產(chǎn)生了可變的屏障，該屏障可調(diào)節(jié)分子通過上皮層的旁細(xì)胞(paracelluler)運(yùn)動(dòng)，從而維持組織動(dòng)態(tài)平衡。粘膜上皮TJ是動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)，并在上皮組織重塑、傷口修復(fù)、炎癥和轉(zhuǎn)變成腫瘤期間經(jīng)受調(diào)節(jié)。顯示上皮癌TJ結(jié)構(gòu)變更的早期研究，暗示了反常的TJ功能與上皮瘤形成之間的關(guān)聯(lián)。有很多關(guān)于粘膜TJ功能降低或損失與多種癌癥之間至關(guān)重要關(guān)系的報(bào)道。據(jù)報(bào)道，幽門螺旋桿菌(在胃癌形成中起作用)破壞上皮屏障功能(InfectionandImmunity66(6):2943-2950,1998以及Science300:1430-1434,2003)。還有報(bào)道說，緊密接點(diǎn)蛋白的向下調(diào)節(jié)常見于晚期胃癌(OncologyReports13:193-199,2005)。據(jù)報(bào)道，結(jié)腸上皮TJ通透性增加，及由此導(dǎo)致的上皮屏障功能下降出現(xiàn)在結(jié)腸癌形成之前(Carcinogenesis20(8):1425-1431,1999)。據(jù)報(bào)道，TJ功能改變?cè)诎螂籽装Y和移行細(xì)胞癌的形成中可能是重要的(InternationalJournalofMolecularMedicine16:3-9,2005)。據(jù)報(bào)道，在人乳癌中觀察到TJ功能和TJ分子表達(dá)消失(AmencanJournalofPathology153(6):1767-1773,1998和JournalofMammaryGlandBiologyandNeoplasia8(4):449-462,2003)。據(jù)報(bào)道，緊密接點(diǎn)消失與人子宮內(nèi)膜癌進(jìn)程中結(jié)構(gòu)異型性及其惡性潛能之間密切相關(guān)(HumanPathology35(2)，159-164:2004)。據(jù)報(bào)道，TJ的破壞(被認(rèn)為是促使上皮肺瘤發(fā)生)見于卵巢癌細(xì)月包(TheJournalofBiologicalChemistry280(28):26233-26240,2005)。據(jù)報(bào)道，TJ變化見于曱狀腺嗜酸性細(xì)胞瘤(UltrastructuralPathology22(6):413-420,1998)。據(jù)報(bào)道，在肝細(xì)胞癌中出現(xiàn)緊密接點(diǎn)的解體，這些結(jié)構(gòu)異常可能會(huì)改變透性障并限制細(xì)胞間的交流，這可能會(huì)促進(jìn)新生細(xì)胞的增殖行為(丄Submicrosc.Cytol.15(3);799-810,1983)。巴雷特食道(BE)代表了胃食管反流病(GERD)的最嚴(yán)重組織后果，在患有GERD病人中的發(fā)生率是5至10%。巴雷特食道被認(rèn)為是癌變前的病癥，腺癌在患巴雷特食道病癥的人群中的發(fā)生率遠(yuǎn)高于普通人群。據(jù)報(bào)道，巴雷特上皮中的旁細(xì)胞(paracellular)屏障明顯不同，與正常食道相比，巴雷特上皮的屏障特性存在顯著的功能性差異(AmericanJournalofGastroenterology98(8):1901-1903,2003)。據(jù)報(bào)道，反流性食管炎(GERD)中TJ蛋白的改變很有可能增加食管上皮的通透性，從而削弱該上皮的防御機(jī)制(JournalofGastroenterology40,781-790,2005)。腸屏障功能是指腸粘膜防止?jié)撛谟泻Φ那怀煞?例如細(xì)菌和相關(guān)毒素)穿過上皮并進(jìn)入全身組織的能力。多種病理情況，包括缺血性損傷、休克、緊張、傳染病和炎性腸疾病(IBD)，可導(dǎo)致腸屏障功能崩潰。炎性腸疾病(IBD)被定義為原因不明的慢性、復(fù)發(fā)性腸炎，其中兩個(gè)主要形式是克羅恩氏病(Crohn'sdisease)和潰瘍性結(jié)腸炎。兩種疾病似乎都包含對(duì)胃腸(GI)道抗原的免疫反應(yīng)失調(diào)(粘膜屏障功能破壞)，和/或?qū)Τ掷m(xù)腸感染、膠原質(zhì)疾病、放射治療、口服藥物等有不良炎癥反應(yīng)。克羅恩氏病的特征是胃腸壁區(qū)域增厚(炎癥擴(kuò)散至所有的層)，深度潰瘍和粘膜裂隙，并出現(xiàn)肉芽腫。受影響區(qū)域可以出現(xiàn)在胃腸道的任何部位，經(jīng)常涉及末端回腸，并且它們可以與相對(duì)正常組織的區(qū)域交替散布。在潰癡性結(jié)腸炎中，疾病也出現(xiàn)在結(jié)腸和直腸中。在受影響區(qū)域，炎癥是表面的但又是連續(xù)的，罕見肉芽月中。同樣越來越明顯的是，許多危重病人患有內(nèi)臟灌注不足引發(fā)的多種器官衰竭。多種器官衰竭是加護(hù)病房病人死亡的首要原因。這些胃腸粘膜疾病通常難以治愈，在某些情況下，也用外科手術(shù)治療該疾病。目前用于這些疾病的有效藥物治療包括類固醇、Salazopyrin(通用名為水楊酰偶氮磺胺吡啶)、免疫抑制劑等。然而，類固醇藥物長時(shí)間大劑量給予會(huì)有副作用，而且由于具有非常有害的副作用，也必須謹(jǐn)慎使用免疫抑制劑。因此，期望開發(fā)出有效治療頑固性胃腸粘膜疾病并且可以長期安全使用的藥物。前列腺素(以下簡稱PG)是有機(jī)羧酸類的成員，其存在于人或其它哺乳動(dòng)物的組織或器官中，具有很多種生理活性。自然界發(fā)現(xiàn)的PG(原PG)通常具有式(A)所示的前列腺烷酸骨架<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>(a鏈)根據(jù)五元環(huán)的結(jié)構(gòu)和取代基，將PG分成幾種類型，例如，A系列前列腺素(PGA);<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>B系列前列腺素(PGB);D系列前列腺素(PGD);E系列前列腺素(PGE);HO'F系列前列腺素(PGF);HQHO'等。此夕卜，將它們分為含13,14-雙鍵的PG1;含5,6-雙鍵和13，14-雙鍵的PG2;以及含5,6-雙鍵、13,14-雙鍵和17,18-雙鍵的PG3。已知PG具有多種藥理和生理活性，例如血管舒張、炎癥誘導(dǎo)、血小板凝集、刺激子宮肌肉、刺激腸肌肉活動(dòng)、抗?jié)V作用等。人胃腸(GI)系統(tǒng)生成的主要前列腺素是前列腺素E、I和F系列(Sellin,胃腸和肝疾病病理生理學(xué)、診斷和處理(GastrointestinalandLiverDisease:Pathophysiology,Diagnosis,andManagement).(WBSaundersCompany,1998);Robert,胃腸道生理學(xué)(PhysiologyoftheGastrointestinalTract)1407-1434(Raven,1981);Rampton,前列腺素前列腺素及相關(guān)類二十烷酸的生物學(xué)與化學(xué)(Prostaglandins:BiologyandChemistryofProstaglandinsandRelatedEicosanoids)323-344(ChurchillLivingstone,1988);Hawkey等人，胃腸病學(xué)(Gastroenterology),89:1162-1188(1985);Eberhart等人，胃腸病學(xué)(Gastroenterology),109:285-301(1995))。在正常的生理?xiàng)l件下，內(nèi)源性生成的前列腺素在維持GI功能(包括調(diào)節(jié)腸的運(yùn)動(dòng)性和傳輸、以及調(diào)節(jié)糞便堅(jiān)實(shí)度)中起著主要作用。(Sellm,胃腸與肝病病理生理學(xué)、診斷和處理(GastrointestinalandLiverDisease:Pathophysiology,Diagnosis,andManagement).(WBSaundersCompany,1998);Robert，胃腸道生理學(xué)(PhysiologyoftheGastrointestinalTract)1407-1434(Raven,1981);Rampton，前列腺素前列腺素及相關(guān)類二十烷酸的生物學(xué)與化學(xué)(Prostaglandins:BiologyandChemistryofProstaglandinsandRelatedEicosanoids)323-344(ChurchillLivingstone,1988);Hawkey等人，胃腸病學(xué)(Gastroenterology),89:1162-1188(1985);Eberhart等人,胃腸病學(xué)(Gastroenterology),109:285-301(1995);Robert,AdvProstaglandinThromboxaneRes,2:507-520(1976);Main等人，PostgradMedJ，64Suppl1:3-6(1988);Sanders,AmJPhysiol,247:Gl17(1984);Pairet等人，AmJPhysiol.，250(3pt1):G302-G308(1986);Gaginella,TextbookofSecretoryDiarrhea15-30(RavenPress,1990》。當(dāng)給予藥理劑量時(shí)，PGE2和PGF2a都顯示促進(jìn)腸傳輸并引起腹瀉(Robert,胃腸道生理學(xué)(PhysiologyoftheGastrointestinalTract)l407-1434(Raven，1981);Rampton,前列腺素前列腺素及相關(guān)類二十烷酸的生物學(xué)與4匕學(xué)(Prostaglandins:BiologyandChemistryofProstaglandinsandRelatedEicosanoids)323-344(ChurchillLivingstone,1988);Robert,AdvProstaglandinThromboxaneRes，2:507-520(1976))。此外，一種用來治療胃潰瘍病的PGE1類似物米索前列醇，最常報(bào)道的副作用是腹瀉(Monk等人，藥物(Drugs)33(1):1-30(1997))。PGE或PGF可以刺激腸收縮，但是腸混合(enter叩ooling)作用很弱。相應(yīng)的，由于例如引起腹部疼痛的腸收縮的副作用，用PGE或PGF作為瀉藥是不切實(shí)際的。據(jù)報(bào)道，多重機(jī)制(包括調(diào)整腸神經(jīng)反應(yīng)、改變平滑肌收縮、刺激粘膜分泌、刺激細(xì)胞離子分泌(特別是產(chǎn)生電的cr傳輸)以及增加腸流體體積)導(dǎo)致了前列腺素的GI作用(Robert,胃腸道生理學(xué)(PhysiologyoftheGastrointestinalTract)1407-1434(Raven,1981);Rampton,前列腺素前列腺素及相關(guān)類二十烷酸的生物學(xué)與化學(xué)(Prostaglandins:BiologyandChemistryofProstaglandinsandRelatedEicosanoids)323-344(ChurchillLivingstone,1988);Hawkey等人，腸胃病學(xué)(Gastroenterology),89:1162-1188(1985);Eberhart等人,腸胃病學(xué)(Gastroenterology),109:285-301(1995);Robert,AdvProstaglandinThromboxaneRes,2:507-520(1976);Main等人，PostgradMedJ,64增刊1:3-6(1988);Sanders,AmJPhysiol,247:G117(1984);Pairet等人，AmJPhysiol,250(3pt1):G302-G308(1986);Gaginella，分泌腹渴教科書(TextbookofSecretoryDiarrhea)15-30(RavenPress,1990);FederalRegisterVol.50,No.10(GPO,1985);Pierce等人，腸胃病學(xué)(Gastroenterology),60(1):22-32(1971);Beubler等人,腸胃病學(xué)(Gastroenterology),90:1972(1986);Clarke等人，AmJPhysiol259:G62(1990);Hunt等人，JVetPharmacolTher,8(2):165-173(1985);Dajani等人,歐洲藥理學(xué)雜志(EurJPharmacol),34(1):105-113(197》；Sellin,胃腸與肝病病理生理學(xué)、診斷和處理(GastrointestinalandLiverDisease:Pathophysiology,Diagnosis,andManagement)1451-1471(WBSaundersCompany,1998))。前列腺素還顯示有細(xì)胞保護(hù)作用(Sellin，胃腸與肝病病理生理學(xué)、診斷和處理(GastrointestinalandLiverDisease:Pathophysiology,Diagnosis,andManagement).(WBSaundersCompany,1998);Robert,胃腸道生理學(xué)(PhysiologyoftheGastrointestinalTract),1407隱1434(Raven,1981);Robert,AdvProstaglandinThromboxaneRes,2:507誦520(1976);Wallace等人，AiimentPharmacolTher9:227-235(1995))。美國專利第5,225,439號(hào)、第5,166,174號(hào)、笫5,284,858號(hào)、第5,428,062號(hào)、笫5，380，709號(hào)、第5,876,034號(hào)和笫6,265,440號(hào)描述了某些前列腺素E化合物治療潰瘍(例如十二指腸潰癡和胃潰瘍)有效。授予Ueno等人的美國專利第5,317,032號(hào)描述了前列腺素化合物瀉藥，其包括存在雙環(huán)互變異構(gòu)體，授予Ueno的美國專利第6,414,016號(hào)描述了作為抗便秘劑的具有顯著活性的雙環(huán)互變異構(gòu)體。被一個(gè)或多個(gè)卣素原子取代的雙環(huán)互變異構(gòu)體可以小劑量用于緩解便秘。在C-16位上，特別是氟原子，可以小劑量用于緩解便秘。Ueno等人的美國專利申"i青公布第2003/0130352號(hào)和第2003/0166632號(hào)描述了前列腺素化合物，其打開并激活氯化物通道，特別是C1C通道，尤其是ClC-2通道。Ueno等人的美國專利申請(qǐng)爿〉布第2003/0119898號(hào)描述了用于治療和預(yù)防便秘的卣化前列腺素4匕合物的具體成分。以前發(fā)明人證明了在豬的體外腸缺血模型中，通過涉及經(jīng)環(huán)氧化酶依賴途徑生產(chǎn)前列腺素(PG)并涉及激活的cr分泌的機(jī)制，來介導(dǎo)腸屏障功能的修復(fù)。(AmJPhysiol,276:G28-36,1999和AmJPhysiolGastrointestLiverPhysiol,284.G46-56,2003)。以前發(fā)明人也證明了，PGE2和PGl2在恢復(fù)腸屏障功能中有協(xié)同作用，然而每種單獨(dú)加入，則效果減弱(J.Clin.Invest.,1997.100(8):1928-1933)。此外，表明PGE,剌激的C1-分泌在腸屏障功能的恢復(fù)中減少(J.Clin.Invest.76:1828-1836,1985)。在進(jìn)一步研究中，顯示米索前列醇(Misoprostol)對(duì)屏障功能有影響，盡管脫氧-PGE,和硫前列酮(Sulprostone)對(duì)其沒有影響(Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.281:G375隱81,2001)。發(fā)明概述本發(fā)明目的是提供一種治療哺乳動(dòng)物患者粘膜疾病的方法和組合物。本發(fā)明目的還在于提供保護(hù)哺乳動(dòng)物患者粘膜的方法和組合物。不考慮已有技術(shù)，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)特殊的前列腺素化合物對(duì)TJ的構(gòu)象改變有顯著作用，從而導(dǎo)致粘膜屏障功能恢復(fù)，完成本發(fā)明。也就是說，本發(fā)明涉及治療哺乳動(dòng)物患者粘膜疾病的方法，其包括給予需要的患者有效量的以下通式(I)表示的前列腺素其中，L、M和N是氫、羥基、鹵素、低級(jí)烷基、羥基(低級(jí))烷基、低級(jí)烷?；趸蜓醮渲蠰和M中至少一個(gè)是除氬之外的基團(tuán)，且五元環(huán)可以有至少一個(gè)雙鍵；A是-CHg或者-CH20H、-COCH2OH、-COOH或者其官能衍生物；B是單鍵、-CH2-CH2-、-CH=CH-、-C三C-、-CH2-CH2-CH2-、-CH=CH-CH2-、-CH2-CH=CH-、-C三C-CH2-或者-CH2-C三C-;其中，114和Rs是氫、羥基、卣素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、或者羥基(低級(jí))烷基，其中R4和R5不同時(shí)為鞋基和低級(jí)烷氧基；是飽和或不飽和的二價(jià)低級(jí)或中級(jí)脂肪族烴殘基，其是未取代的或者被卣素、烷基、羥基、氧代基、芳基或者雜環(huán)基取代，且脂肪族烴中至少一個(gè)碳原子任選^皮氧、氮或^L取代；且或者單鍵;Ra是飽和或不飽和的低級(jí)或中級(jí)脂肪族烴殘基，其是未取代的或者被以下基團(tuán)取代卣素、氧代基、羥基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷?；趸?、環(huán)(低級(jí))烷基、環(huán)(低級(jí))烷氧基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基或者雜環(huán)-氧基；低級(jí)烷氧基；低級(jí)烷?；趸画h(huán)(低級(jí))烷基；環(huán)(低級(jí))烷氧基；芳基；芳氧基；雜環(huán)基；雜環(huán)-氧基，條件是Ra被卣素取代，或者Z是CO。特別地，本發(fā)明涉及一種治療與哺乳動(dòng)物患者粘膜屏障功能降低相關(guān)的病癥的方法，其包括給予需要的患者有效量的式(I)前列腺素化合物。本發(fā)明還涉及保護(hù)哺乳動(dòng)物患者粘膜的方法，其包括給予需要保護(hù)的患者有效量的具體的前列腺素化合物。本發(fā)明的另一方面，提供了包含有效量的式(I)前列腺素化合物的組合物，該組合物用于治療哺乳動(dòng)物患者粘膜疾病。本發(fā)明組合物可以用于上述本發(fā)明方法。本發(fā)明的又一方面，提供了式(I)前列腺素化合物在生產(chǎn)治療哺乳動(dòng)物患者粘膜疾病的藥用組合物中的用途。圖1顯示在缺血損傷豬回腸中，響應(yīng)化合物六(13,14-二氬-15-酮-16,16-二氟-PGE0的跨上皮電阻值(TER)。該值代表平均值士SE;n=6。在含有口引咮美辛(indomethacin)(5xl(y6M)的Ringer's溶液中浸泡的缺血組織證明，在30分鐘平衡期過后加入的化合物A(O.ljuM和lpM劑量)的存在下，跨上皮細(xì)胞電阻值(TER)顯著升高。圖2A顯示化合物A對(duì)短路電流的影響。圖2B顯示在缺血損傷豬回腸中響應(yīng)化合物A的短路電流變化(AIsc)。在兩個(gè)圖中，該值代表平均值士SE;n-6。缺血組織浸泡在含有"|咮美辛(indomethacin)(5xl(T6M)的Ringer's溶液中。短路電流(Isc)和短3各電流的絕對(duì)改變(AIsc)都表明C1-分泌有顯著增加(P<0.05)，觀察到這種增加與漸增劑量的化合物A的治療相對(duì)應(yīng)(^P<0.05)。圖3顯示化合物A對(duì)粘膜-至-絨膜SH-甘露醇流量的影響。該值代表平均值±SE;n=4。缺血組織浸泡在含有"引咮美辛(indomethacin)(5xl0'6M)的Ringer's溶液中。獵回腸經(jīng)受腸缺血，并且顯示311-甘露醇粘膜-至-絨膜流量增加(與非缺血對(duì)照相比)。應(yīng)用lpM的化合物A,降低了3H-甘露醇粘膜-至-絨膜流量至非缺血對(duì)照的水平。*P<0.05。圖4顯示了在缺血損傷的豬上升結(jié)腸中響應(yīng)化合物A處理的短;咯電流的變化。圖5顯示了在缺血損傷的豬上升結(jié)腸中響應(yīng)化合物A處理的跨上皮電阻值(TER)。圖6顯示了在缺血損傷的豬上升結(jié)腸中響應(yīng)化合物A處理的絨膜-至-粘膜SH-甘露醇流量。發(fā)明詳述這里所用的前列腺素化合物命名法是基于上式(A)中代表的前列腺烷酸的編號(hào)系統(tǒng)。式(A)顯示C-20碳原子的基本骨架，但是本發(fā)明不限于這些具有相同碳原子數(shù)的化合物。在式(A)中，組成PG化合物基本骨架的碳原子編號(hào)從羧酸處開始(編為1),且a-鏈上的碳原子向著五元環(huán)方向編為2至7,環(huán)上碳原子編為8至12,co-鏈上的碳原子編為13至20。當(dāng)a-鏈上碳原子數(shù)減少時(shí)，/人2位開始順序刪除編號(hào)；且當(dāng)a-鏈上碳原子數(shù)增加時(shí)，化合物命名為在2位有各自取代基(代替羧基(C-l))的取代化合物。相似地，當(dāng)a)-鏈上碳原子數(shù)減少時(shí)，從20位開始順序刪除編號(hào)；且當(dāng)co-鏈上碳原子數(shù)增加時(shí)，超過20位的碳原子被命名為取代基。化合物立體化學(xué)與上式(A)的情況相同，除非另有說明。一般而言，每個(gè)術(shù)語PGD、PGE和PGF代表在9位和/或11位有羥基的PG化合物，但是在本i兌明書中，這些術(shù)語還包括那些在9位和/或11位有除羥基之外取代基的化合物。這些化合物是指9-去羥基-9-取代-PG化合物或者U-去羥基-ll-取代-PG化合物。用氪替代羥基的PG化合物，簡單命名為9-或11-脫氧-PG化合物。如上所述，PG化合物的命名法是基于前列腺烷酸骨架。然而，如果化合物具有如前列腺素的相似的部分結(jié)構(gòu)，可以使用縮寫詞"PG"。因此，a-鏈延長2個(gè)碳原子(也就是，a-鏈上有9個(gè)碳原子)的PG化合物命名為2-脫羧-2-(2-羧乙基)-PG化合物。相似地，a-鏈上有11個(gè)碳原子的PG化合物命名為2-脫羧-2-(4-羧丁基)-PG化合物。此外，G)-鏈延長2個(gè)碳原子(也就是，co-鏈上有10個(gè)碳原子)的PG化合物命名為20-乙基-PG化合物。然而，這些化合物還可以根據(jù)IUPAC命名法命名。類似物(包括取代的衍生物)或者衍生物的例子包括a-鏈末端羧基被酯化的PG化合物；a-鏈延長的化合物；其生理學(xué)上可接受的鹽；在2-3位有雙鍵或者在5-6位有三4走的化合物；在3、5、6、16、17、18、19和/或20位有取代基的化合物；以及在9和/或11位有低級(jí)烷基或者羥基(低級(jí))烷基(代替羥基)的化合物。依照本發(fā)明，在3、17、18和/或19位上優(yōu)選的取代基包括具有1至4個(gè)碳原子的烷基、特別是曱基和乙基。在16位上優(yōu)選的取代基包括低級(jí)烷基(例如甲基和乙基)、羥基、鹵素原子(例如氯和氟)和芳氧基(例如三氟曱基苯氧基)。在17位上優(yōu)選的取代基包括低級(jí)烷基(例如曱基和乙基)、羥基、卣素原子(例如氯和氟)、芳氧基(例如三氟甲基苯氧基)。在20位上優(yōu)選的取代基包括飽和或未飽和的低級(jí)烷基(例如Cl-4烷基)、低級(jí)烷氧基(例如Cl-4烷氧基)和低級(jí)烷氧基烷基(例如，Cl-4烷氧基-Cl-4烷基)。在5位上優(yōu)選的取代基包括自素原子(例如氯和氟)。在6位上優(yōu)選的取代基包括形成羰基的氧代基。在9和/或11位上具有羥基、低級(jí)烷基或者羥基(低級(jí))烷基取代基的PG的立體化學(xué)可以是a、p或者其混合物。此外，上述類似物或衍生物可以是在co-鏈末端具有烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷氧基、苯氧基或苯基的化合物，這里的鏈短于原PG。本發(fā)明所用具體的前列腺素4t合物是以式(I)代表的化合物其中，L、M、N、A、B、Z、R!和Ra如上述說明的相同。本發(fā)明所用的優(yōu)選化合物是式(n)代表的化合物「B—Z—C—R2—R3M其中，L和M是氫原子、羥基、囟素、低級(jí)烷基、羥基(低級(jí))烷基、低級(jí)烷?；趸蜓醮?，其中L和M中至少一個(gè)是除氫之外的基團(tuán)，且五元環(huán)可以有一個(gè)或多個(gè)雙鍵；A是-013或者-CH20H、-COCH2OH、-COOH或者其官能衍生物；B是單鍵、-CH2-CH2-、-CH=CH-、-C三C-、-CH2-CH2-CH2-、-CH=CH-CH2-、-CH2-CH=CH-、-00(:}12-或者-012-€:0;其中，114和Rs是氫、羥基、卣素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、或者羥基(低級(jí))烷基，其中R4和Rs不同時(shí)為羥基和低級(jí)烷氧基；X,和X2是氬、低級(jí)烷基或者囟素；R,是飽和或不飽和二價(jià)低級(jí)或中級(jí)脂肪族烴殘基，其是未取代的或者被鹵素、烷基、羥基、氧代基、芳基或者雜環(huán)基團(tuán)取代，且脂肪族烴中至少一個(gè)碳原子任選被氧、氮或硫取代；R2是單鍵或者低級(jí)亞烷基；且或者單鍵;R3是低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷?；趸?、環(huán)(低級(jí))烷基、環(huán)(低級(jí))烷氧基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基或者雜環(huán)-氧基；條件是X,和Xs之一被卣素取代，或者z是c二o。在上式中，R,和Ra定義中的術(shù)語"不飽和，，意指包括至少一個(gè)或多個(gè)雙鍵和/或三鍵，孤立、分開或者連續(xù)存在于主鏈和/或側(cè)鏈的碳原子之間。依照常規(guī)命名法，兩個(gè)連續(xù)位置之間的不飽和鍵通過指明這兩個(gè)位置的較低編號(hào)來表示，并且兩個(gè)末端位置之間的不飽和鍵通過指明這兩個(gè)位置來表示。術(shù)語"低級(jí)或中級(jí)脂肪族烴"是指具有1至14個(gè)碳原子(對(duì)于側(cè)鏈，優(yōu)選1至3個(gè)碳原子)，優(yōu)選1至10個(gè)碳原子，特別是1至8個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴基。術(shù)語"卣素原子"包括氟、氯、溴和碘。整個(gè)說明書中的術(shù)語"低級(jí)，，包括具有1至6個(gè)碳原子的基團(tuán)，除非另有說明。術(shù)語"低級(jí)烷基"是指含1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈飽和烴基，且包括例如曱基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基和己基。術(shù)語"低級(jí)亞烷基"是指含1至6個(gè)碳原子的直鏈或支鏈二價(jià)飽和烴基，且包括例如亞曱基、亞乙基、亞丙基、亞異丙基、亞丁基、亞異丁基、亞叔丁基、亞戊基和亞己基。術(shù)語"低級(jí)烷氧基"是指低級(jí)烷基-O-基團(tuán)，其中低級(jí)烷基如上所規(guī)定。術(shù)語"羥基(低級(jí))烷基"是指被至少一個(gè)羥基取代的如上所規(guī)定的低級(jí)烷基，例如羥甲基、l-幾乙基、2-羥乙基和l-曱基-l-羥乙基。術(shù)語"低級(jí)烷酰基氧基"是指式RCO-O-表示的基團(tuán)，其中RCO-是如上所規(guī)定的低級(jí)烷基氧化而形成的?；?，例如乙?；?。術(shù)語"環(huán)(低級(jí))烷基"是指通過如上所規(guī)定的低級(jí)烷基(包含3個(gè)或多個(gè)碳原子)環(huán)化而形成的環(huán)形基團(tuán)，包括例如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。術(shù)語"環(huán)(低級(jí))烷氧基"是指環(huán)(低級(jí))烷基-O-基團(tuán)，其中環(huán)(低級(jí))烷基如上所規(guī)定。術(shù)語"芳基"可包括未取代或取代的芳香烴環(huán)(優(yōu)選單環(huán)基團(tuán))，例如，苯基、曱苯基、二曱苯基。取代基的例子是卣素原子和囟代(低級(jí))烷基，其中卣素原子和低級(jí)烷基如上所規(guī)定。術(shù)語"芳氧基"是指式ArO-表示的基團(tuán)，其中Ar是如上所規(guī)定的芳基。術(shù)語"雜環(huán)基團(tuán)"可以包括5至14元，優(yōu)選5至10元環(huán)的單環(huán)至三環(huán)，優(yōu)選單環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)，所述環(huán)具有任選取代的碳原子和1至4個(gè)，優(yōu)選1至3個(gè)選自氮原子、氧原子和硫原子的1種或2種雜原子。雜環(huán)基的例子包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、嗯唑基、異噁唑基、噻唑基、異蓉唑基、。米唑基、p比峻基、呋咱基(fumzanyl)、吡喃基、吡啶基、噠溱基、嘧啶基、吡溱基、2-吡咯啉基、吡咯烷基、2-咪唑啉基、咪唑烷基、2-吡唑啉基、吡唑烷基、哌啶子基(piperidino)、哌嗪基、嗎啉代、吲哚基、苯并噻吩基、喹啉基、異喹啉基、嘌呤基、p奎唑啉基、咔唑基、吖咬基、菲啶基、苯并咪唑基、苯并咪唑啉基、苯并噻唑基、吩噻嗪基。這種情況下取代基的例子包括由素和鹵素取代的低級(jí)烷基，其中卣素原子和低級(jí)烷基如上所述。術(shù)語"雜環(huán)-氧基"是指式HcO-表示的基團(tuán)，其中Hc-是如上所述的雜環(huán)基團(tuán)。術(shù)語A的"官能衍生物"包括鹽(優(yōu)選藥學(xué)上可接受的鹽)、醚、酯和酰胺。適當(dāng)?shù)?藥學(xué)上可接受的鹽"包括慣用的非毒性鹽類，例如無機(jī)堿的鹽，例如堿金屬鹽(例如鈉鹽和鉀鹽)、堿土金屬鹽(例如4丐鹽和鎂鹽)、銨鹽；或者有機(jī)堿的鹽，例如胺鹽(例如曱胺鹽、二曱基胺鹽、環(huán)己胺鹽、千胺鹽、哌啶鹽、乙二胺鹽、乙醇胺鹽、二乙醇鹽、環(huán)己胺鹽、千胺鹽、哌啶鹽、乙二胺鹽、乙醇胺鹽、二乙醇胺鹽、三乙醇胺鹽、三(羥曱基氨基)乙烷鹽、單曱基-單乙醇胺鹽、普魯卡因鹽和咖啡因鹽)、堿性氨基酸鹽(例如精氨酸鹽和賴氨酸鹽)、四烷基銨鹽等。這些鹽可以用常夫見方法制備，例如從相應(yīng)的酸和堿或者通過鹽交換來制備。醚的例子包括烷基醚，例如低級(jí)烷基醚(例如曱基醚、乙基醚、丙基醚、異丙基醚、丁基醚、異丁基醚、叔丁基醚、戊基醚和1-環(huán)丙基乙基醚)；以及中級(jí)或高級(jí)烷基醚(例如辛基醚、二乙基己基醚、十二烷基醚和十六烷基醚)；不々包和醚，例如油基醚和亞麻基(linolenyl)醚；低級(jí)烯烴基醚，例如乙烯基醚、烯丙基醚；低級(jí)炔基醚，例如乙炔基醚和丙炔基醚；幾基(低級(jí))烷基醚，例如羥乙基醚和羥異丙基醚；低級(jí)烷氧基(低級(jí))烷基醚，例如曱氧基甲基醚和1-甲氧基乙基醚；任選取代的芳基醚，例如苯基醚、曱苯磺酰基醚、叔丁基苯基醚、水楊基醚、3,4-二-曱氧基苯基醚和苯曱酰胺苯基醚；以及芳基(低級(jí))烷基醚，例如苯曱基醚、三苯曱基醚和二苯曱基醚。酯的例子包括脂肪族酯，例如低級(jí)烷基酯(例如曱基酯、乙基酯、丙基酯、異丙基酯、丁基酯、異丁基酯、叔丁基酯、戊基酯和1-環(huán)丙基乙基酯)；低級(jí)烯基酯，例如乙烯基酯和烯丙基酯；低級(jí)炔基酯，例如乙炔基酯和丙炔基酯；幾基(低級(jí))烷基酯，例如羥乙基酯；低級(jí)烷氧基(低級(jí))烷基酯，例如曱氧基甲基酯和l-曱氧基乙基酯；以及任選取代的芳基酯，例如苯基酯、曱苯基酯、1-丁基苯基酯、水楊基酯、3，4-二-曱氧基苯基酯和苯曱酰胺苯基酯；以及芳基(低級(jí))烷基酯，例如苯曱基酯、三苯曱基酯和二苯曱基酯。A的酰胺是指式-CONR'R"表示的基團(tuán)，其中R'和R"各是氫、低級(jí)烷基、芳基、烷基-磺?；蚍蓟?磺?；?、低級(jí)烯基和低級(jí)炔基，包括例如低級(jí)烷基酰胺，例如曱酰胺、乙酰胺、二曱酰胺和二乙酰胺；芳基酰胺，例如N-酰苯胺和N-酰甲苯胺；以及烷基-或芳基-磺酰胺，例如曱基磺酰胺、乙基磺酰胺和甲苯磺酰胺。L和M的優(yōu)選例子包括氫、羥基和氧代基，特別地，M是羥基，且L是氧代基，其具有所謂的PGE型五元環(huán)結(jié)構(gòu)。A的優(yōu)選例子是-COOH、其藥學(xué)上可接受的鹽、酯或者酰胺。X,和X2的優(yōu)選例子是都為卣素原子，更優(yōu)選的是氟原子，所謂的16,16-二氟型。優(yōu)選的R,是含1至10個(gè)碳原子，優(yōu)選6至10個(gè)碳原子的烴殘基。此外，脂肪族烴中至少一個(gè)碳原子任選被氧、氮或硫取代。R,的例子包括，例如以下基團(tuán)-CH2-CH2-CH2_CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-CH=CH_、-CH2-C三C-CH2-CH2-CH2-、-CH^-CH2-CH2-CH2-0-CH廠、-CH2-CH=CH-CH2-0-CH2-、-CH2-CeC-CH2-0-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CHs-CH^CH-CHs-CHs-CH^-CHr、-CH2_CH2-CH2-CH2-CH2,CH=CH-、-CH2-C三C-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3》CH2、-CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3)_CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH=CH-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2_CH2,CH2-CH=CH-、-CH2-C^C-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-以-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH(CH3)-CH2-。優(yōu)選的Ra是含1至10個(gè)碳原子，更優(yōu)選1至8個(gè)碳原子的烴。Ra可以有一至兩條具有1個(gè)碳原子的側(cè)鏈。前列腺素化合物最優(yōu)選的實(shí)施方式是13,14-二氬-15-酮-16,16-二氟-前列腺素E!或者13,14-二氫-15-酮-16,16-二氟-18-曱基-前列腺素E!。上式(I)和(II)中的環(huán)以及a-和/或co-鏈的構(gòu)象可以與原PG的構(gòu)象相同或者不同。然而，本發(fā)明還包括具有原型構(gòu)象的化合物和非原型構(gòu)象化合物的混合物。在本發(fā)明中，在13和14位之間是二氫且15位上是酮(=0)的PG化合物可以通過在11位的羥基和15位的酮之間形成半縮醛，處于酮-半縮醛平衡中。例如，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)當(dāng)X,和X2都是自素原子，特別是氟原子時(shí)，該化合物包含互變異構(gòu)體、雙環(huán)化合物。如果上述互變異構(gòu)體存在，兩種互變異構(gòu)體的比例隨著分子其它部分的結(jié)構(gòu)或者現(xiàn)有取代基的種類而變化。有時(shí)，可以存在一種主要的異構(gòu)體(相對(duì)于另一種異構(gòu)體而言)。然而，應(yīng)理解的是，本發(fā)明包括兩種異構(gòu)體。此外，本發(fā)明所用的15-酮-PG化合物包括雙環(huán)化合物及其類似物或者其衍生物。雙環(huán)化合物由式(III)表示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>其中，A是-CHg或者-CH20H、-COCH2OH、-COOH或者其官能衍生物；X/和X2'是氫、低級(jí)烷基或者卣素；Y是'，，口lIIR4'R5''FVR50其中，RV和Rs'是氫、羥基、鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基或者羥基(低級(jí))烷基，其中RV和R/不同時(shí)為羥基和低級(jí)烷氧基。R,是飽和或不飽和的二價(jià)低^^或中級(jí)脂肪族烴殘基，其是未取代的或被卣素、烷基、幾基、氧代基、芳基或者雜環(huán)基團(tuán)取代，且脂肪族烴中至少一個(gè)碳原子任選^C氧、氮或硫取代；且R2'是飽和或不飽和低級(jí)或中級(jí)脂肪族烴殘基，該脂肪族烴殘基是未取代的或者被卣素、氧代基、羥基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷?；趸?、環(huán)(低級(jí))烷基、環(huán)(低級(jí))烷氧基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基團(tuán)或者雜環(huán)-氧基取代；低級(jí)烷氧基；低級(jí)烷?；趸?；環(huán)(低級(jí))烷基；環(huán)(低級(jí))烷氧基；芳基；芳氧基；雜環(huán)基團(tuán)；雜環(huán)-氧基。IV是氫、低級(jí)烷基、環(huán)(低級(jí))烷基、芳基或雜環(huán)基團(tuán)。示，而不管是否存在異構(gòu)體，但要指出的是，這種結(jié)構(gòu)或名稱不是要排除半縮醛型化合物。在本發(fā)明中，可以為同一目的使用任何異構(gòu)體，例如單獨(dú)的互變異構(gòu)體及其混合物或者光學(xué)異構(gòu)體及其混合物、外消旋混合物，及其它空間異構(gòu)體。本發(fā)明所用的一些化合物可以通過美國專利第5,073,569號(hào)、第5,166,174號(hào)、第5，221，763號(hào)、第5,212,324號(hào)、第5,739,161號(hào)以及第6,242,485號(hào)中所述方法制備(這些引用的參考文獻(xiàn)通過引用而并入本文)。依照本發(fā)明，可以給予患者上述前列腺素化合物來治療哺乳動(dòng)物患者粘膜疾病。該患者可以是包括人在內(nèi)的任何哺乳動(dòng)物患者。該化合物可以全身或局部應(yīng)用。通常，該化合物可以通過口服給藥、靜脈注射(包括灌輸)、皮下注射、直腸內(nèi)給藥、陰道內(nèi)給藥、透皮給藥等方式給予。劑量可以隨著動(dòng)物類型、年齡、體重、接受治療的癥狀、預(yù)期治療效果、給藥途徑、治療期等而變化。通過以0.001至1000微克，更優(yōu)選0.01至100微克活性成分/千克體重/天的劑量全身給予活性成分1至4次/天或者連續(xù)給予活性成分，可以獲得滿意的效果?？梢詢?yōu)選用適合常規(guī)方式給子的藥用組合物將前列腺素化合物配成制劑。該組合物可以是那些適合口服給藥、注射或灌注的組合物，還可以是外用制劑、栓劑或陰道栓劑。本發(fā)明組合物還可以包含生理學(xué)上可接受的添加劑。所述添加劑可以包括賦形劑、稀釋劑、填充劑、溶劑、潤滑劑、佐劑、粘合劑、崩解劑、涂層劑、包嚢劑(cupsulatmgagent)、藥膏基質(zhì)、栓劑基質(zhì)、霧化劑(aerozolingagent)、乳化劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑、張度劑、緩沖劑、光滑劑、防腐劑、抗氧化劑、矯味劑、芳香劑、著色劑、功能性物質(zhì)(例如環(huán)糊精和生物可降解的聚合物和穩(wěn)定劑)。這些添加劑對(duì)于本
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是公知的，且通常可以選自藥學(xué)參考書中所述的添加劑。本發(fā)明組合物中上述前列腺素化合物的量可以隨著組合物的配方變化，通?？梢允?.000001至10.0%,更優(yōu)選0.00001至5.0%,最優(yōu)選0.0001至1%?？诜o藥固體組合物的例子包括片劑、錠劑、舌下片劑、膠嚢劑、丸劑、散劑、顆粒劑等。固體組合物可以通過將一種或多種活性成分與至少一種非活性稀釋劑混合來制備。該組合物還可以包含除非活性稀釋劑之外的添加劑，例如，潤滑劑、崩解劑和穩(wěn)定劑。如有必要，片劑和丸劑可以用腸或胃腸薄膜進(jìn)行包衣，它們可以覆蓋兩層或多層。它們還可以包括持續(xù)釋放物料，或者微嚢化。此外，該組合物可以用容易降解的物豐K如凝膠)包于膠嚢內(nèi)。它們還可以溶于適當(dāng)?shù)娜軇?，例如脂肪酸或者其單、雙或三甘油酯以制成軟膠嚢。舌下片劑可用于需要快速起效性質(zhì)時(shí)?？诜o藥液體組合物的例子包括乳劑、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑等。所述組合物還可以包含慣用的非活性稀釋劑，例如純化水或者乙醇。該組合物可以包含除非活性稀釋劑之外的添加劑，例如佐劑(如潤濕劑和助浮劑)、甜味劑、香料、芳香劑和防腐劑。本發(fā)明組合物可以為噴霧組合物的形式，其包含一種或多種活性成分，且可以依照已知方法來制備。腸胃外給藥的本發(fā)明可注射組合物的例子包括無菌水性或非水性溶液、懸浮液和乳劑。用于水性溶液或懸浮液的稀釋劑可以包括，例如，注射用蒸餾水、生理鹽水和Ringer's:容液。用于溶液和懸浮液的非水性稀釋劑可以包括，例如，丙二醇、聚乙二醇、例如橄欖油的植物油、例如乙醇的醇類以及聚山梨醇酯。該組合物還可以包含添加劑，例如防腐劑、潤濕劑、乳化劑、分散劑等。它們可以通過經(jīng)例如細(xì)菌-保留過濾器過濾滅菌，或者通過氣體或放射性同位素照射滅菌?？勺⑸浣M合物還可以作為無菌粉末組合物提供，在使用前溶于注射用無菌溶劑。本外用制劑包括所有用于皮膚醫(yī)學(xué)和耳鼻喉學(xué)的外用制劑，其包括藥膏、霜?jiǎng)?、洗劑和噴霧。本發(fā)明的另一種形式是栓劑或者陰道栓劑，它們可以通過將活性成分和常規(guī)基質(zhì)(例如，在體溫下軟化的可可油脂)混合來制備，且非離子表面活性劑(具有適當(dāng)?shù)能浕瘻囟?可用于改善吸收性。這里所用的術(shù)語"治療"或者"處理"包括任何調(diào)控方式，例如預(yù)防、護(hù)理、緩解病情，減弱病情以及控制發(fā)展。依照本發(fā)明，式(I)前列腺素化合物引起緊密接點(diǎn)處的構(gòu)象改變，從而恢復(fù)粘膜屏障功能。因此，這里所用的前列腺素化合物用于治療粘膜疾病。這里所用術(shù)語"粘膜疾病"是指與粘膜屏障功能降低有關(guān)的病癥。這種與粘膜屏障功能降低有關(guān)的病癥可以是任何病理因素導(dǎo)致的任何粘膜損傷。這種因素包括但不局限于，例如炎癥、缺血性損傷、休克、壓力、對(duì)抗原的免疫反應(yīng)失調(diào)疾病、傳染病、腸疾病、膠原質(zhì)疾病、輻射、藥物等。優(yōu)選的例子包括胃腸粘膜疾病。胃腸粘膜疾病包括但不局限于，例如，缺血性損傷(例如絞窄性腸梗阻，如腸捻轉(zhuǎn)(vovulus))、急性或慢性腸系膜缺血性損傷、腸缺血、腸屏障損傷、粘膜損傷(例如休克引起的粘膜損傷)、炎性腸疾病(例如Crohn's病)，結(jié)腸炎包括潰瘍性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、潰瘍性直腸炎、潰瘍性直腸乙狀結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞結(jié)腸炎、頑固性末端結(jié)腸炎、回腸結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎、顯微鏡結(jié)腸炎、嚢炎(pouchitis),放射性結(jié)腸炎、抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎和憩室炎，以及白塞病(Behcet病)。這里所用的化合物還用于治療內(nèi)臟灌注不足引起的多種器官衰竭，以及由此導(dǎo)致的腸屏障特性的喪失。如上所述，粘膜緊密接點(diǎn)功能降低或喪失與許多癌癥有至關(guān)緊要的關(guān)系，因此，粘膜屏障功能降低的病癥的另一方面，包括癌癥或者惡化前的病癥。這里所用的癌癥或者惡化前的病癥包括但不局限于，食道癌、胃食管返流性疾病、巴雷特食管、胃癌、十二指腸癌、小腸癌、闌尾癌、大腸癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肛門癌、胰腺癌、肝癌、膽嚢癌、脾癌、腎癌、膀胱癌、前列腺癌、睪丸癌、子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌和曱狀腺癌。這里所用的化合物還用于治療基于或者伴有上述舉例的粘膜疾病的感染。本發(fā)明的藥用組合物還可包含其它藥理成分，條件是它們不與本發(fā)明目的相矛盾。本發(fā)明的進(jìn)一步細(xì)節(jié)將用以下實(shí)施例進(jìn)行描述，然而，不想以此來限制本發(fā)明。實(shí)施例1(方法)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物外科手術(shù)將6至8周大的Yorkshire雜種豬(不分性別)單獨(dú)圈養(yǎng)，并用市售丸狀飼料喂養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)手術(shù)前24小時(shí)不給豬進(jìn)食。用曱苯p塞。秦(1.5毫克/千克，IM)、氯胺酮(ll毫克/千克，IM)和戊硫代巴比妥(15毫克/千克，IV)引起全身麻醉，并維持間歇輸入戊硫代巴比妥(6至8毫克/千克/小時(shí))。將豬放置在加熱墊上，并用時(shí)間循環(huán)的通氣設(shè)備經(jīng)氣管切開術(shù)通100%氧氣。將導(dǎo)管插入頸靜脈和頸動(dòng)脈，并進(jìn)行血液氣體分析以確證正常pH以及二氧化碳和氧氣的分壓。靜脈給予乳酸鹽Ringer's溶液，維持15毫升/千克/小時(shí)的速度。經(jīng)腹中線切口接近回腸。以10厘米間隔結(jié)扎小腸，隔出回腸部分，閉塞局部腸系膜血液供應(yīng)45分鐘來造成缺血。尤斯室(Ussingchamber)研究45分鐘缺血時(shí)段后，收集豬的組織，并在通氧(95%氧氣/5%二氧化碳)的Ringer's溶液(mmol/l:Na+、154;K+、6.3;Cl、137;HC03_、24;pH7.4)中,將粘膜從漿膜肌膜層剝離,Ringer's溶液包含5x10-6M吲咮美辛，以防剝離步驟期間產(chǎn)生內(nèi)源性PG。然后，將組織裝在3.14平方厘米孔的尤斯室里。對(duì)于尤斯室試驗(yàn)，將來自一只豬的回腸組織裝在多個(gè)尤斯室上，并經(jīng)歷不同的體外處理。用10毫升Ringer's溶液在漿膜側(cè)和粘膜側(cè)浸泡組織。漿膜浸泡溶液包含10mM的葡萄糖，并用10mM甘露醇在粘膜一側(cè)進(jìn)行滲透平衡。浸泡溶液用氧(95%氧氣/5%二氧化碳)處理，并在水套貯庫中循環(huán)。用連接在甘汞電極上的Ringer-瓊脂橋測定自發(fā)電位差(PD)，使用流體電阻校正的電壓夾，通過Ag-AgCl電極使PD短路。由自發(fā)電位差和短路電流(U計(jì)算跨上皮電阻(co.cm2)。如果自發(fā)電位差為-1.0至1.0毫伏，那么組織以±100微安的電流夾5秒鐘，并記錄電位差。在4小時(shí)的實(shí)驗(yàn)中，每15分鐘間隔記錄一次短路電流和電位差。實(shí)驗(yàn)處理將組織裝在尤斯室之后，使其適應(yīng)30分鐘以獲得穩(wěn)定的基線測量。然后通過將化合物加入粘膜浸泡溶液，用不同劑量的化合物A(13,14-二氬-15-酮-16,16-二氟-PGE,)(O.OlpM、O.lpM和l^M)處理組織(1=30分鐘)。3H-甘露醇流量研究記錄電測量結(jié)果的同時(shí)進(jìn)行這些研究。為了評(píng)價(jià)粘膜-至-漿膜流量，將sh-甘露醇加入粘膜溶液。15分鐘平衡期之后，從浸泡貯庫采取標(biāo)準(zhǔn)品。加入處理后30分鐘，在同位素加入一側(cè)的對(duì)側(cè)，從浸泡貯庫中取樣，進(jìn)行三個(gè)連續(xù)的60分鐘的流量期(實(shí)驗(yàn)的第30至210分鐘)測定。用液態(tài)閃爍計(jì)數(shù)器對(duì)樣品的^-甘露醇計(jì)數(shù)。用標(biāo)準(zhǔn)方程式測定單向的粘膜-至-漿膜(Jms)流量。組織學(xué)檢查在0、60和180分鐘時(shí)采取組織進(jìn)行常規(guī)的組織學(xué)評(píng)估。將組織切片(5微米)，并用蘇木精(hematoxylin)和曙紅染色。對(duì)于各組織，評(píng)估3份切片。在每一切片中識(shí)別出4個(gè)良好取向的絨毛和隱窩。在光學(xué)顯微鏡的接目鏡下，用千分尺測得絨毛長度。此外，測量每個(gè)絨毛的上皮覆蓋部分的高度。用圓柱體表面積的公式計(jì)算絨毛的表面積。通過減去絨毛底部的面積，并乘以因各絨毛橫截面位置不同而導(dǎo)致的因子，對(duì)此公式進(jìn)行了修正(胃腸病學(xué)(Gastroenterology)1993;104:440-471)。由絨毛的總表面積以及覆有上皮的絨毛表面積，計(jì)算保持棵露的絨毛表面積的百分?jǐn)?shù)?？寐督q毛表面積百分?jǐn)?shù)用作上皮恢復(fù)的指標(biāo)。統(tǒng)計(jì)分析以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤報(bào)道數(shù)據(jù)。對(duì)于重復(fù)測量，用方差分析(ANOVA)分析所有的數(shù)據(jù)，但用標(biāo)準(zhǔn)的單向方差分析(one-wayANOVA)(Sigmastat，JandelScientific,SanRafael,CA)分析峰值響應(yīng)。方差分析后，使用Tukey's檢驗(yàn)來確定處理之間的差異。(結(jié)果)對(duì)穿過缺血損傷豬回腸的短路電流和跨上皮電阻的影響使豬回腸經(jīng)受45分鐘的腸系膜缺血，然后裝在尤斯室上，對(duì)其短路電流(ij(即cr分泌的指示)和跨上皮電阻(ter)(即粘膜屏障功能的指示)進(jìn)行評(píng)價(jià)。45分鐘腸缺血導(dǎo)致跨上皮電阻(TER)下降40%(與非缺血對(duì)照組織相比)，表明缺血組織的屏障功能被削弱。向缺血損傷粘膜的粘膜一側(cè)加入O.OlpM、O.lpM和lpM的化合物A(圖1)，說導(dǎo)致TER呈劑量依賴性增加，lpM的化合物A刺激TER產(chǎn)生兩倍增加(ATER=26acm2,PO.Ol)。向缺血粘膜應(yīng)用0.1|liM和lpM的化合物A,促使短路電流(IJ出現(xiàn)尖銳且顯著(PO.05)的峰，呈劑量依賴性，表明促進(jìn)了這些組織中產(chǎn)生電的Cl-的分泌。在評(píng)估化合物A對(duì)短路電流(IJ絕對(duì)變化(對(duì)于lnM、0.1一和0.01的化合物A,AIsc=29±5.1、16±4.5和2±0.8)的影響時(shí)，觀察到相似的劑量響應(yīng)。L上升先于TER增加。對(duì)于缺血損傷的豬回腸中甘露醇的粘膜至漿膜流量的影響因?yàn)橐驯砻?H-甘露醇的粘膜至漿膜流量是粘膜屏障功能的敏感指標(biāo)，所以我們測量穿過缺血損傷粘膜的3&甘露醇流量以確定TER值。缺血損傷導(dǎo)致甘露醇流量顯著增加(與非損傷對(duì)照組織(圖3)相比)，表明缺血組織的屏障功能受損。應(yīng)用1的化合物A導(dǎo)致3H-甘露醇流量返回到非缺血對(duì)照水平。用化合物A處理的缺血組織的組織學(xué)評(píng)價(jià)損傷粘膜屏障功能的急性恢復(fù)包括3種協(xié)同機(jī)制(1)絨毛收縮，減少修復(fù)的總棵露表面積，(2)恢復(fù)或者細(xì)胞遷移以密封暴露的基膜，以及(3)細(xì)胞旁空間和緊密接點(diǎn)的關(guān)閉。為了確定響應(yīng)化合物A處理的屏障功能的改善是否部分歸因于增強(qiáng)的上皮恢復(fù)，我們?cè)诨謴?fù)期幾個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)恢復(fù)期間的缺血組織進(jìn)行了組織學(xué)評(píng)價(jià)。損傷組織的組織學(xué)分析表明絨毛頂部1/3的腸上皮發(fā)生脫落和起皺。這與用形態(tài)測定分析(表l)表明的上皮有30%棵露表面積這一結(jié)果相關(guān)聯(lián)。60分鐘內(nèi)，將組織裝在尤斯室上，腸絨毛經(jīng)歷了快速且完全的恢復(fù)。表1.缺血損傷的豬回腸粘膜上皮恢復(fù)的形態(tài)測定評(píng)估<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表1中，棵露絨毛表面積°/。和絨毛高度值用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示；n=3。組織是哺乳動(dòng)物的回腸，其經(jīng)過45分鐘體內(nèi)缺血，然后將它們裝在尤斯室里以監(jiān)測恢復(fù)響應(yīng)。在體外恢復(fù)階段的缺血后0分鐘、60分鐘和180分鐘獲取組織，在10%緩沖的福爾馬林中固定，并按照標(biāo)準(zhǔn)方案處理，供組織學(xué)纟企查。對(duì)所選組織給予5pM的p引咮美辛(Indo)，并加入lpM的化合物A。缺少共同上標(biāo)(*,弁)的數(shù)值存在差異，P<0.05。實(shí)施例2按照實(shí)施例1所述同樣的步驟，使用結(jié)腸而不是回腸，研究了化合物A處理后，缺血條件下粘膜屏障功能的恢復(fù)。圖4至6分別顯示了A)缺血損傷豬上升結(jié)腸中相應(yīng)于化合物A的短路電流的變化，B)缺血損傷豬上升結(jié)腸中相應(yīng)于化合物A的跨上皮電阻(TER),以及C)缺血損傷豬上升結(jié)腸中相應(yīng)于化合物A的漿膜至粘膜SH-甘露醇流量。將化合物A應(yīng)用于缺血豬上升結(jié)腸，增加了Isc(圖4)和TER,并減少了SH-甘露醇漿膜至粘膜流量(圖5和圖6)。結(jié)論該數(shù)據(jù)表明C1C-2激動(dòng)劑(化合物A)刺激cr分泌，從而恢復(fù)缺血損傷豬回腸和結(jié)腸的粘膜屏障功能。此外，化合物A對(duì)粘膜屏障功能的有益效果，顯示出是通過細(xì)胞旁滲透性降低來介導(dǎo)的，并不依賴上皮恢復(fù)。這些觀察結(jié)果表明，ClC-2激動(dòng)劑(化合物A)引起緊密接點(diǎn)構(gòu)象改變，從而恢復(fù)屏障功能。ClC-2的選擇性激動(dòng)劑可以提供新的藥理方式，促進(jìn)急性損傷腸的恢復(fù)。實(shí)施例3將雌性Crl:CD(SD)IGSBRVAF/Plus大鼠分成4個(gè)研究組(每組65只)。組2至組4分別給予20、100或者400微克/千克/天的化合物A,口服強(qiáng)伺104周。對(duì)照組(組1)給予賦形劑(1%聚山梨醇酯80的水溶液)。所有組的劑量體積是5毫升/千克/天。當(dāng)研究期間發(fā)生動(dòng)物不定期死亡時(shí)，對(duì)動(dòng)物進(jìn)4亍解剖。104周處理之后，處死所有存活動(dòng)物并解剖。每只鼠用顯纟救鏡檢查是否出現(xiàn)乳腺癌。如表2所示，化合物A降低了乳腺癌的發(fā)病率。表2.乳腺癌的發(fā)病率<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>雖然參考其具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)描述，但是，可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行各種變更和修改而不脫離本發(fā)明的精神和范圍，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的技術(shù)人員而言這是顯而易見。權(quán)利要求1.以下通式(I)表示的前列腺素化合物用于生產(chǎn)治療哺乳動(dòng)物患者粘膜疾病的藥用組合物的用途id="icf0001"file="S2006800172054C00011.gif"wi="67"he="34"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中L、M和N是氫原子、羥基、鹵素原子、低級(jí)烷基、羥基(低級(jí))烷基、低級(jí)烷?；趸蜓醮?，其中L和M中至少一個(gè)是除氫之外的基團(tuán)，且五元環(huán)可以有至少一個(gè)雙鍵；A是-CH3或者-CH2OH、-COCH2OH、-COOH或者其官能衍生物；B是單鍵、-CH2-CH2-、-CH＝CH-、-C≡C-、-CH2-CH2-CH2-、-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH＝CH-、-C≡C-CH2-或者-CH2-C≡C-；Z是id="icf0002"file="S2006800172054C00012.gif"wi="75"he="17"top="5"left="5"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或者單鍵；其中，R4和R5是氫、羥基、鹵素、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、或者羥基(低級(jí))烷基，其中R4和R5不同時(shí)為羥基和低級(jí)烷氧基；R1是飽和或不飽和的二價(jià)低級(jí)或中級(jí)脂肪族烴殘基，其是未取代的或者被鹵素、烷基、羥基、氧代基、芳基或者雜環(huán)基取代，且脂肪族烴中至少一個(gè)碳原子任選被氧、氮或硫取代；且Ra是飽和或不飽和的低級(jí)或中級(jí)脂肪族烴殘基，該脂肪族烴殘基是未取代的或者被以下基團(tuán)取代鹵素、氧代基、羥基、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷酰基氧基、環(huán)(低級(jí))烷基、環(huán)(低級(jí))烷氧基、芳基、芳氧基、雜環(huán)基或者雜環(huán)-氧基；低級(jí)烷氧基；低級(jí)烷?；趸?；環(huán)(低級(jí))烷基；環(huán)(低級(jí))烷氧基；芳基；芳氧基；雜環(huán)基；雜環(huán)-氧基，條件是Ra被鹵素取代，或者Z是C＝O。2.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是16-單或二囟素-前列腺素化合物。3.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是15-S同-前列腺素化合物。4.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氬-16-單或二面素-前列腺素化合物。5.權(quán)利要求l的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氬-15-酮-前列腺素化合物。6.權(quán)利要求l的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氬-15-酮-l6-單或二卣素-前列腺素化合物。7.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氳-16-單或二氟-前列腺素化合物。8.權(quán)利要求l的用途，其中所述前列腺素化合物是15-酮-16-單或二氟-前列腺素化合物。9.權(quán)利要求l的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氫-15-酮-16-單或二氟-前列腺素化合物。10.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是13，14-二氫-16-單或二卣素-前列腺素E化合物。11.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是15-酮-16-單或二卣素-前列腺素E化合物。12.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氫-15-酮-16-單或二由素-前列腺素E化合物。13.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氫-16,16-二氟-前列腺素E,化合物。14.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氫-15-酮-前列腺素E,化合物。15.權(quán)利要求1的用途，其中所述前列腺素化合物是13,14-二氫-15-酮-16,16-二氟-前列腺素E,化合物或者13,14-二氫-15-酮-16,16-二氟-18-曱基-前列腺素E,化合物。16.權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)的用途，其中所述粘膜疾病是與粘膜屏障功能降低相關(guān)的病癥。17.權(quán)利要求16的用途，其中所述與粘膜屏障功能降低相關(guān)的病癥是胃腸道粘膜疾病。18.權(quán)利要求17的用途，其中所述胃腸道粘膜疾病是炎性腸疾病。19.權(quán)利要求18的用途，其中所述炎性腸疾病是克羅恩氏病、結(jié)腸炎或者白塞病。20.權(quán)利要求19的用途，其中所述結(jié)腸炎選自潰瘍性結(jié)腸炎、缺血性結(jié)腸炎、潰瘍性直腸炎、潰癡性直腸乙狀結(jié)腸炎、淋巴細(xì)胞結(jié)腸炎、頑固性末端結(jié)腸炎、回腸結(jié)腸炎、膠原性結(jié)腸炎、顯微鏡結(jié)腸炎、嚢炎、放射性結(jié)腸炎、抗生素相關(guān)性結(jié)腸炎和憩室炎。21.權(quán)利要求16的用途，其中所述與粘膜屏障功能降低相關(guān)的病癥是癌癥或者惡化前病癥。22.權(quán)利要求16的用途，其中所述癌癥或者惡化前病癥選自食道癌、胃食管返流性疾病、巴雷特食管、胃癌、十二指腸癌、小腸癌、闌尾癌、大腸癌、結(jié)腸癌、直腸癌、肛門癌、胰腺癌、肝癌、膽嚢癌、脾癌、腎癌、膀胱癌、前列腺癌、睪丸癌、子宮癌、卵巢癌、乳腺癌、肺癌和曱狀腺癌。23.以下通式(I)表示的前列腺素化合物用于生產(chǎn)保護(hù)哺乳動(dòng)物患者粘膜的藥用組合物的用途<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，L、M、N、A、B、Z、！^和Ra如權(quán)利要求l中所述。24.—種治療哺乳動(dòng)物患者粘膜疾病的方法，該方法包括給予需要的患者有效量的以下通式(I)表示的前列腺素化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(I)其中，L、M、N、A、B、Z、R,和Ra如權(quán)利要求l中所述。25.—種保護(hù)哺乳動(dòng)物患者粘膜的方法，該方法包括給予需要的患者有效量的以下通式(I)表示的前列腺素化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(I)其中，L、M、N、A、B、Z、R,和Ra如權(quán)利要求l中所述。26.—種治療哺乳動(dòng)物患者粘膜疾病的組合物，該組合物包括有效量的以下通式(I)表示的前列腺素化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>(I)其中，L、M、N、A、B、Z、R,和Ra如權(quán)利要求l中所述。21—種保護(hù)哺乳動(dòng)物患者粘膜的組合物，該組合物包括有效量的以下通式(I)表示的前列腺素化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中，L、M、N、A、B、Z、Ri和Ra如權(quán)利要求l中所述。全文摘要本發(fā)明提供了用特定的前列腺素化合物治療粘膜疾病的方法和組合物。該前列腺素化合物引起緊密接點(diǎn)的構(gòu)象改變，從而導(dǎo)致粘膜屏障功能恢復(fù)。因此，這里所用的該前列腺素化合物用于治療粘膜疾病。文檔編號(hào)A61P1/04GK101180096SQ20068001720公開日2008年5月14日申請(qǐng)日期2006年3月22日優(yōu)先權(quán)日2005年3月21日發(fā)明者A·J·莫伊塞,A·T·布里克斯拉格,上野隆司,久能祐子申請(qǐng)人:蘇坎波公司;北卡羅萊納州立大學(xué)