專利名稱：：Lkktet和/或lkktnt肽組合物及方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及LKKTET禾fV或LKKTNT組合物及方法的領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：胸腺素(34起初被認(rèn)為是在體外內(nèi)皮細(xì)胞遷移和分化期間被上調(diào)的蛋白。胸腺素卩4最初從胸腺分離,是一個具有43個氨基酸、4.9KDa、在多種組織中普遍存在的多肽。歸于該蛋白的幾種功能包括在內(nèi)皮細(xì)胞分化和遷移、T細(xì)胞分化、肌動蛋白隔離、血管形成和傷口愈合中的功能。已經(jīng)鑒定了許多TP4異構(gòu)體，其與己知的TP4氨基酸序列具有約70%、或約75%、或約80%或更高的同源性。這些異構(gòu)體包括，例如T|34ala、TP9、T|310、Tpil、Tpi2、T|313、T(314禾卩Tpi5。與T(34相似，T(310和T(315異構(gòu)體也表現(xiàn)出能隔離肌動蛋白的活性。T(34、T(310和Tpi5，以及這些其他異構(gòu)體共有一個氨基酸序列LKKTET或LKKTNT，其似乎參與調(diào)節(jié)肌動蛋白的隔離或結(jié)合。盡管不希望被任何特定的理論所限制，但本文中描述的肽試劑的活性至少部分地歸因于這些試劑的抗炎活性。P-胸腺素也調(diào)節(jié)了肌動蛋白聚合(例如，卩胸腺素似乎通過隔離游離的G-肌動蛋白而解聚F-肌動蛋白)。T|34調(diào)節(jié)肌動蛋白聚合的能力可歸因于其通過LKKTET序列結(jié)合或隔離肌動蛋白的能力。本領(lǐng)域需要LKKTET和/或LKKTNT的組合物和方法。發(fā)明概述包括肽試劑或剌激試劑、以及眼用載體、抗微生物作用的防腐劑、提供所述組合物眼用滲透壓的高滲劑、舒適增強劑、能夠調(diào)節(jié)組合物pH至所需眼用pH水平的酸性或堿性pH調(diào)節(jié)劑中的至少一種、和基本維持所需pH水平的緩沖劑的組合物，其中所述肽試劑包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體，所述刺激試劑剌激LKKTET或LKKTNT肽或其保守變異體的產(chǎn)生。發(fā)明詳述為多種目的而對受試者施用的許多組合物含有一種或多種可能導(dǎo)致受試者損傷的組分。例如，防腐劑，如用在許多眼用和化妝產(chǎn)品的苯扎氯銨(BAK)，在施用該產(chǎn)品時可引起表面刺激和/或傷害。綜合癥包括發(fā)紅和不適。長期使用含有季銨鹽(如BAK)的滴眼液會產(chǎn)生顯著且逐漸嚴(yán)重的眼睛表面剌激和細(xì)胞凋亡。患者經(jīng)常發(fā)展為諸如發(fā)紅和通常的眼部不適這樣的癥狀。本發(fā)明的肽試劑，例如胸腺素(34(Tp4)，在與季銨鹽(如BAK)—起接觸眼組織對受試者施用時，可用于治療或阻止對眼組織的傷害或受損?？梢杂糜诒景l(fā)明的季銨鹽的實例包括BAK、西曲溴銨(cetrimide)、苯佐氯銨(benzoxonium)及其類"[以物。根據(jù)具體實施方式，該肽試劑與作為同一個制劑一部分的銨鹽如BAK—起施用，例如作為添加劑加入到含BAK或其他季銨鹽的制劑中。季銨鹽如BAK在許多眼溶液，如青光眼滴眼液中常用作防腐劑。在另一個具體實施方式中，該肽試劑可在施用季銨鹽如BAK之前，和/或施用季銨鹽如BAK期間，和/或施用季銨鹽如BAK之后施用。根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明尤其可用于阻止對眼角膜上皮的眼組織的傷害，其包括阻止這類眼組織中的細(xì)胞凋亡。例如，本發(fā)明也用作抗青光滴眼液或其他滴眼液的佐劑。本發(fā)明一方面提供了眼用組合物，其包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽試劑或其保守變異體。本發(fā)明另一方面提供了治療眼組織的方法，其包括對所述眼組織局部施用眼用組合物，該組合物包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽試劑或其保守變異體在具體實施方式中，本發(fā)明提供了通過將眼組織與有效量的含本文描述的肽試劑的組合物接觸的治療方法。直接施用的實施例包括，例如直接應(yīng)用含本文描述的肽制劑的溶液、洗劑、油膏、凝膠、乳膏、糊劑、噴霧劑、懸浮液、分散液、水凝膠、軟膏、油或泡沬與組織接觸。未發(fā)現(xiàn)適于任何特定理論，肌動蛋白-隔離肽，如胸腺素P4(T卩4或TB4)和其他包括肌動蛋白-隔離肽或肽片段的試劑可以促進眼組織健康，其中肌動蛋白-隔離肽或肽片段含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其保守變異體。胸腺素p4起初被認(rèn)為是內(nèi)皮細(xì)胞遷移和體外分化期間被上調(diào)的蛋白。胸腺素(34最初從胸腺分離，是一個具有43個氨基酸、4.9Kda、在多種組織中普遍存在的多肽。歸于該蛋白的幾種功能包括在內(nèi)皮細(xì)胞分化和遷移、T細(xì)胞分化、肌動蛋白隔離、血管形成和傷口愈合中的功能。根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明優(yōu)選地適用于胸腺素卩4、和/或T卩4異構(gòu)體、類似物或衍生物，其中包括KLKKTET、LKKTETQ、氧化的T卩4、T(34亞砜、TP4的N-端變異體和C-端變異體。根據(jù)具體實施方式，可用于本發(fā)明的組合物包括肽試劑，例如胸腺素P4、和/或T(34異構(gòu)體、類似物或衍生物，其中包括T卩4的氧化形式(包括T(34亞砜)、T(34的N-端變異體和C-端變異體、以及包含或基本上由氨基酸序列LKKTET及其保守性變異體組成的多肽或肽片段。國際申請PCT/US99/17282公開了可用于本發(fā)明的Tp4的異構(gòu)體，以及可用于本發(fā)明的氨基酸序列LKKTET或LKKTNT和其保守變異體，該申請通過引用的方式納入本文。國際申請PCT/GB99/00833(W099/49883)公開了可用于本發(fā)明的氧化的胸腺素(34，該申請通過引用的方式納入本文。盡管本發(fā)明在下文中主要針對T|34和TP4異構(gòu)體進行描述，但應(yīng)當(dāng)理解為以下描述同樣適用于氨基酸序列LKKTET或LKKTNT、包含或基本上由LKKTET、LKKTNT組成的肽和片段、它們的保守變異體，和/或Tp4異構(gòu)體、類似物或衍生物，其中包括氧化的TP4、Tp4的N-端變異體和C-端變異體。根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明的組合物以每天、每兩天、每兩周、每兩個月等的頻率施用，其中在施用的每日，可進行單次或多次用藥，例如每施用當(dāng)日用藥2、3、4或更多次。已經(jīng)鑒定了許多Tp4異構(gòu)體，其與已知的T|34氨基酸序列具有約70%、或約75%、或約80%或更高的同源性。這些異構(gòu)體包括，例如T|34ala、T|39、T(310、T|311、Tpl2、T|313、T(314禾口T(315。與T(34相4以，異構(gòu)體T(310和T(315也表現(xiàn)出能隔離肌動蛋白的活性。TP4、TpiO和T(315，以及其他異構(gòu)體共有氨基酸序列LKKTET或LKKTNT，其似乎參與調(diào)節(jié)肌動蛋白的隔離或結(jié)合。T(34具有抗炎活性，并且也能調(diào)節(jié)肌動蛋白聚合(例如，(3胸腺素似乎通過隔離游離的G-肌動蛋白而解聚F-肌動蛋白)。T(34調(diào)節(jié)肌動蛋白聚合的能力可歸因于其通過LKKTET或LKKTNT序列結(jié)合或隔離肌動蛋白的能力。這樣，與T(34—樣，其他抗炎性蛋白和/或結(jié)合或隔離肌動蛋白，或者調(diào)節(jié)肌動蛋白聚合的蛋白(其中包括具有氨基酸序列LKKTET的T(34異構(gòu)體)很可能如本文說明的那樣單獨或與T(34組合而發(fā)揮作用。因此，可以明確預(yù)期己知的T(34異構(gòu)體，例如T(34"a、TP9、TpiO、T(311、T(312、Tpi3、Tpi4和Tpi5，以及還未鑒定的Tp4異構(gòu)體可用于本發(fā)明的方法。這樣，TP4異構(gòu)體可用于本發(fā)明的方法，其中包括在受試者中采用的方法。本發(fā)明從而進一步提供了包括T(34，以及T卩4異構(gòu)體T(34a'a、TP9、T(310、T|311、Tpl2、Tpi3、T(314禾BT(315，以及眼用載體的藥物組合物。另外，如在適當(dāng)?shù)母綦x、結(jié)合、動員或聚合分析中所顯示的那樣或如通過具有調(diào)節(jié)肌動蛋白結(jié)合的氨基酸序列(例如LKKTETR、LKKTNT)所確認(rèn)的那樣，其他具有抗炎活性和/或肌動蛋白隔離或結(jié)合能力，或能夠動員肌動蛋白或調(diào)節(jié)肌動蛋白聚合的試劑或蛋白質(zhì)，可相似地用于本發(fā)明的方法。這樣的蛋白包括例如凝溶膠蛋白、維生素D結(jié)合蛋白(DBP)、抑制蛋白(profilin)、cofilin、蠶食蛋白(depactin)、DNA酶I、絨毛蛋白(villin)、截斷蛋白(fragmin)、肌割蛋白(severin)、加帽蛋白(cappingprotein)、卩-肌動蛋白和肌動調(diào)解蛋白(ac謹(jǐn)entin)。因此，方法包括已用于受試者的那些方法。本發(fā)明進一步提供了藥物組合物，其包括本文提到的凝溶膠蛋白、維生素D結(jié)合蛋白(DBP)、抑制蛋白(profilin)、cofilin、蠶食蛋白(depactin)、DNA酶I、絨毛蛋白(villin)、截斷蛋白(fragmin)、肌割蛋白(severin)、加帽蛋白(cappingprotein)、(3-肌動蛋白和肌動調(diào)解蛋白(acumentin)。因此，本發(fā)明包括含有氨基酸序列LKKTET、或LKKTNT和其保守變異體的多肽的應(yīng)用。本文所使用的術(shù)語"保守變異體"或其語法上的變體是指氨基酸殘基被另一種生物學(xué)上相似的殘基替換。保守變異體的實例包括疏水殘基例如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸替換另一個疏水性殘基，極性殘基替換另一個極性殘基，例如用精氨酸替換賴氨酸、谷氨酸替換天門冬氨酸、或谷氨酰胺替換天門冬酰胺以及類似的替換。根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明的組合物是滴眼液制劑。根據(jù)具體實施方式，用于本發(fā)明的組合物包含本文所描述的肽試劑，其中肽試劑的濃度范圍是大約0.001-1000毫克每毫升(mcg/ml)，更優(yōu)選的是0.1-100mcg/ml，最優(yōu)選的是大約1-10mcg/ml。在特別優(yōu)選的具體實施方式中，該肽試劑是T(34。根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明用于治療或預(yù)防眼組織由于與季銨鹽如BAK接觸造成的損害或損傷，季銨鹽濃度范圍是大約0.0001-lwtM，優(yōu)選的濃度范圍是大約0.001-0.1wt%，更優(yōu)選的濃度范圍是0.002-0.05wt%。在一個具體實施方式中，季銨鹽的濃度是大約0.005-0.02wt%。根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明也包括含本文中所描述的肽試劑的藥物組合物，該肽試劑在可眼用載體中。這樣的載體包括，例如本文中所列的載體。根據(jù)具體實施方式，提供治療的實際劑量或試劑、制劑或組合物依賴許多因素，包括受試者的大小和健康狀況。然而，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能夠使用在PCT/US99/17282ff和本文中引用的參考文獻(xiàn)中所描述的用于確定臨床劑量的方法和技術(shù)來確定合適的使用劑量。根據(jù)具體實施方式，本文中描述的方法和組合物所使用或包括的肽試劑可通過與可眼用的無毒賦形劑或載體混合來制成組合物。根據(jù)具體實施方式，包括活性化合物的外用制劑也包括生理相容性載體，眼科領(lǐng)域的技術(shù)人員可使用常規(guī)標(biāo)準(zhǔn)選擇該載體。該載體可選自已知的眼用載體，其包括但不局限于鹽溶液；聚醚水溶液(waterpolyethers)(例如聚乙二醇)；聚乙烯(例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯酮(povidone));纖維素衍生物，例如甲基纖維素和羥丙基甲基纖維素；石油衍生物，例如礦物油和白凡士林；動物脂肪例如羊毛脂；丙烯酸聚合物例如卡波姆膠(carboxypolymethylenegel);植物脂肪，例如花生油；以及多糖，例如葡聚糖；以及粘多糖(glycosaminogiycans)，例如透明質(zhì)酸鈉；和鹽，例如氯化鈉和氯化鉀。根據(jù)具體實施方式，眼用組合物有利于局部用于眼睛，尤其是以溶液、懸浮液、軟膏、凝膠或泡沫的形式。根據(jù)具體實施方式，用于相應(yīng)眼用組合物的常規(guī)藥學(xué)可接受賦形劑和添加劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員己知的，例如下文中提到的那些，尤其是載體、穩(wěn)定劑、增溶劑、滲透促進劑、緩沖物質(zhì)、防腐劑、增稠劑、復(fù)合劑和其他賦形劑。這樣的添加劑和賦形劑的實例可見美國專利5,134,124和4,906,613。這些組合物以各自己知的方法制備，比如通過將活性組分與相應(yīng)的賦形劑和/或添加劑混合形成相應(yīng)的眼用組合物?；钚越M分優(yōu)選地以滴眼液的形式施用，活性組分常規(guī)地溶解在例如載體中。該溶液可適當(dāng)?shù)卣{(diào)節(jié)和/或緩沖到所需的pH值，并且，適當(dāng)時添加穩(wěn)定劑、增溶劑或滲透促進劑。適當(dāng)時，向眼用組合物中添加防腐劑和/或其他賦形劑。本發(fā)明中所使用的載體通常適用于外用或普通給藥，并且例如是水、水和易與水混溶的溶劑的混合液，例如CrC7-烷醇、含0.5-5wt%羥乙基纖維素的植物油或礦物油、油酸乙酯、羧甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮和其他眼用的無毒水溶性聚合物，例如纖維素衍生物如甲基纖維素、羧甲基纖維素的堿金屬鹽、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基羥丙基纖維素和羥丙基纖維素、丙烯酸酯/鹽或甲基丙烯酸酯/鹽，如聚丙烯酸的鹽或丙烯酸乙酯、聚丙烯酰胺，天然物質(zhì)如明膠、藻酸鹽、果膠、黃芪膠、梧桐樹膠、黃原膠、角叉膠、瓊脂和阿拉伯樹膠，淀粉衍生物如淀粉醋酸酯和羥丙基淀粉，其他合成產(chǎn)物如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯垸酮、聚乙烯甲醚、聚氧化乙烯，優(yōu)選的交聯(lián)聚丙烯酸如中性卡波姆，或者這些聚合物的混合物。優(yōu)選的載體是水、纖維素衍生物如甲基纖維素、羧甲基纖維素的堿金屬鹽、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、甲基羥丙基纖維素和羥丙基纖維素、中性卡波姆或者其混合物。根據(jù)具體實施方式，用于本發(fā)明眼用組合物的增溶劑是，例如泰洛沙泊、脂肪酸甘油聚低級烷二醇酯(fattyacidglycerolpoly-loweralkyleneglycolesters)、脂肪酸聚低級烷二醇酯(fattyacidpoly-loweralkyleneglycolesters)、聚乙二醇(polyethyleneglycols)、甘油醚(glycerolethers)或這些化合物的混合物。所添加的量通常足以溶解活性組分。例如，增溶劑的濃度是活性組分濃度的0.1-5000倍。低級烷二醇中的亞烷基是指最多包括7個碳原子的亞烷基，例如為亞甲基、亞乙基、1，3-亞丙基、1,2-亞丙基、1,5-亞戊基、2，5-亞己基或1,7-亞庚基。低級亞烷基優(yōu)選的是最多包括4個碳原子的線性或支鏈亞烷基。緩沖物質(zhì)的實例是醋酸鹽、抗壞血酸鹽、硼酸鹽、碳酸氫鹽/碳酸鹽、檸檬酸鹽、葡萄糖酸鹽、乳糖酸鹽、磷酸鹽、丙酸鹽和TRIS(氨丁三醇)緩沖劑。氨丁三醇和硼酸鹽緩沖劑是優(yōu)選的緩沖劑。所添加緩沖物質(zhì)的量，例如是確保和維持生理耐受pH范圍所需要的量。該pH范圍通常為5-9，優(yōu)選為6-8.2，更優(yōu)選為6.8-8.1。滲透促進劑(tonicityenhancingagent)例如是離子化合物，如堿金屬或堿土金屬的鹵化物，例如是CaCl2、KBr、KC1、LiCl、NaBr、NaCl或硼酸。非離子滲透促進劑例如是尿素、丙三醇、山梨醇、甘露醇、丙二醇或葡萄糖右旋糖。例如添加足夠的滲透促進劑制成即用的眼用組合物，其滲透壓大約是50-1000mOsmol，優(yōu)選的是100-400mOsmol，更優(yōu)選的是200-400mOsmol，再更優(yōu)選的是280-350mOsmol。防腐劑的實例是季銨鹽，例如西曲溴銨、苯扎氯銨、苯佐氯銨、硫代水楊酸的浣基汞鹽，例如硫柳汞、硝酸苯汞、醋酸苯汞或硼酸苯汞；對羥苯甲酸酯類，例如對羥苯甲酸甲酯或?qū)αu苯甲酸丙酯；醇類如氯丁醇、苯甲醇或苯乙醇；胍衍生物，如氯己啶或聚六亞甲基雙胍，或者山梨酸。優(yōu)選的防腐劑是西曲溴銨、苯扎氯銨、苯佐氯銨和對羥苯甲酸酯類。適當(dāng)?shù)叵蜓塾媒M合物中添加足量防腐劑以確保防止使用中由細(xì)菌和真菌造成的二次污染。根據(jù)具體實施方式，該眼用組合物可進一步包括無毒賦形劑，例如乳化劑、濕潤劑或填充劑，比如聚乙二醇200、300、400和600，或者CarbowaxlOOO、1500、4000、6000和10000。如果需要，其他可以使用的賦形劑列表如下，但它們不以任何方式用于限制可用賦形劑的范圍。它們尤其是絡(luò)合劑，如EDTA二鈉或EDTA;抗氧化劑，如抗壞血酸、乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、亞硫酸氫鈉、丁基羥基茴香醚、丁基羥基甲苯或a-生育酚醋酸酯；穩(wěn)定劑，如環(huán)糊精、硫脲、硫代山梨醇、琥珀酸二辛酯磺酸鈉或單硫代甘油；或其他賦形劑，如月桂酸山梨醇酯、三乙醇胺油酸酯或棕櫚酸酯。優(yōu)選的賦形劑是絡(luò)合劑，例如EDTA二鈉，以及穩(wěn)定劑，如環(huán)糊精。所添加賦形劑的量和類型要根據(jù)特定的需求并且通常在大約0.0001至大約90wtM的范圍內(nèi)。環(huán)糊精含有多個葡萄糖單位，其中每個葡萄糖都含有3個游離羥基。具體實施方式中使用的環(huán)糊精的量優(yōu)選是0.01-20wt%，更優(yōu)選是0.1-15wt%，再更優(yōu)選是l-10wt%。根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明也涉及眼用組合物，其包括治療有效量的本文中所描述的肽試劑、載體、增溶劑和其他治療有效的藥學(xué)試劑，這些藥學(xué)試劑可以是，例如抗生素、抗過敏藥、麻醉劑、其他的消炎劑、皮質(zhì)類固醇、適用于降低眼內(nèi)壓(IOP)的試劑、或其他藥物。pH(氫離子濃度)根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明制劑的pH應(yīng)當(dāng)盡可能接近淚膜的pH。眼淚的生理pH大約是7.4士0.2。這樣，出于對舒適、耐受力和安全的考慮，這是最佳的眼用制劑的pH。刺激眼淚分泌和眨眼會導(dǎo)致pH值降低。當(dāng)眼瞼張開過長時間，淚膜會與周圍空氣中的C02分壓相平衡而被堿化，pH值會大于9。pH降低和升高都不會有不良后果。因此，當(dāng)表述發(fā)明的制劑在大約pH7.4時，該pH有一定的變動范圍。而且，當(dāng)對眼睛施用制劑時，其刺激流出眼淚。流淚能夠快速稀釋和緩沖少量的添加物質(zhì)，說明眼睛能夠耐受特定制劑造成的相對寬的pH范圍。因此，眼用制劑的pH值可以在大約3.5-11.5的范圍內(nèi)。然而，眼用制劑可以顯示出更窄的3.5-9的pH范圍，優(yōu)選的是4.5-8，最優(yōu)選的是55.-7.8。最優(yōu)選的pH范圍得益于本發(fā)明組合物的預(yù)期溶解度、化學(xué)穩(wěn)定性和治療活性，并且該范圍是對阻止角膜損害有用的、相對窄的范圍。緩沖系統(tǒng)根據(jù)具體實施方式，緩沖系統(tǒng)由弱酸或弱堿及其共軛鹽組成。系統(tǒng)中成分所具有的緩沖能力，使得無論添加酸或堿以及受溫度、壓力、體積、氧化還原勢、體液和眼淚的外部影響，pH將維持基本恒定。盡管緩沖能力應(yīng)足夠大以抵抗在合理的保存期(即在儲存條件下)內(nèi)產(chǎn)品pH的變化(即pH漂移)，但本發(fā)明眼用制劑的緩沖能力即使低也足以能在眼部施用時，即能快速地再調(diào)整產(chǎn)品到生理pH。根據(jù)具體實施方式，眼用產(chǎn)品的緩沖能力應(yīng)當(dāng)在0.05-1.0范圍內(nèi)，對特定發(fā)明組合物優(yōu)選的和最優(yōu)選的緩沖能力分別在0.02-0.2和0.01-0.1的范圍內(nèi)。緩沖能力通過以下公式確定*P=AB/ApH其中P是緩沖能力，AB是強酸/強堿改變1升緩沖溶液的pH所相當(dāng)?shù)目藬?shù)，ApH是添加強酸/強堿所造成的pH變化量。根據(jù)具體實施方式，合適的緩沖系統(tǒng)可以是以下酸的鈉鹽醋酸、抗壞血酸、硼酸、碳酸、磷酸、檸檬酸、葡萄糖酸、乳酸和丙酸。碳酸或丙酸的鈣鹽以及磷酸的鉀鹽都可形成合適的緩沖系統(tǒng)。Tris緩沖劑(氨丁三醇)作為矯正代謝酸毒癥的堿化劑在靜脈中使用，其也是用于本發(fā)明的優(yōu)選緩沖劑之一。其他優(yōu)選的緩沖劑是醋酸鹽、磷酸鹽、檸檬酸鹽和硼酸鹽。在特定實例中，包括蛋白質(zhì)的氨基酸殘基的質(zhì)子供體和質(zhì)子受體的緩沖系統(tǒng)比酸-堿或氨-堿緩沖劑更優(yōu)選。緩沖物質(zhì)的具體用量會變化并依賴于維持適于本發(fā)明組合物穩(wěn)定性的pH環(huán)境并確保和維持生理可耐受pH范圍所必須的量。高滲劑(tonicityagent)本文中所列的高滲劑，其目的是針對天然眼淚調(diào)節(jié)本發(fā)明眼用組合物的滲透壓大約至生理滲透壓(例如0.9%鹽水)。例如，可向本發(fā)明肽試劑制劑中添加氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、葡萄糖右旋糖和/或甘露醇。高滲劑的量會變化，并依賴于所要加入的具體試劑。大體上，特定的發(fā)明組合物含有的高滲劑的量足以使最終的組合物具有眼用可接受的滲透壓，滲透壓優(yōu)選的是150-450mOsm，最優(yōu)選的是250-350mOsm。優(yōu)選的高滲劑是鈉鹽和鉀鹽，尤其是氯化鈉和氯化鉀。最優(yōu)選的高滲劑是氯化鈉。潤滑劑/潤濕劑/粘度增強劑根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明包括如下化合物，其中該化合物能夠使眼睛潤滑，降低其他疏水上皮角膜表面的表面張力和提高其濕潤度(接觸)，與眼淚具有大致的一致性。這樣的化合物也可增強本發(fā)明組合物的粘度，使得本發(fā)明的制劑在眼睛內(nèi)停留時間更長從而使肽試劑有更多的時間發(fā)揮其治療活性或被吸收而達(dá)到所需的靶點。眼用制劑中合適的粘度增強劑和其在本發(fā)明的某些組合物中的濃度范圍包括但不局限于(a)單體多元醇，例如泰洛沙泊(tyloxapol)(0.卜1%)、丙三醇(0.2-1%)、丙二醇(0.2-1%)、乙二醇(0.2-1%);(b)聚合多元醇，例如聚乙二醇(例如PEG300和PEG400)(0.2-1%);(c)纖維素衍生物(纖維素家族的多聚體)，例如羥乙基纖維素(0.2-2.5%)、羥丙甲纖維素(0.2-2.5%)、羥丙基甲基纖維素(0.2-2.5%)、甲基纖維素(0.2-2.5%)、羧甲基纖維素鈉(0.2-2.5%)、羥丙基纖維素(0.2-2.5%);(d)葡聚糖，例如葡聚糖70(當(dāng)與另一個潤濕劑一起使用時，其是0.1%);(e)水溶性蛋白，例如明膠(0.01%);(0乙烯基聚合物，例如聚乙烯醇(0.1-4%)、聚乙烯吡咯垸酮(0.1-4%);(g)其他多元醇，例如聚山梨醇酯80(0.2-1%)、聚乙烯吡咯酮(0.1-2%);(h)卡波姆，例如卡波姆934P、卡波姆941、卡波姆940和卡波姆974P;以及(i)多糖/糖胺聚糖，例如透明質(zhì)酸(透明質(zhì)酸/透明質(zhì)酸鹽)(0.1-3%)、硫酸軟骨素(0.1-3%)?？上虮景l(fā)明組合物中添加多于一種粘度增強劑來提高載體的粘度。本發(fā)明肽試劑制劑的載體中的優(yōu)選增強劑是羧甲基纖維素。粘度粘度描述了物質(zhì)在施壓后，抵抗流動或形狀改變的內(nèi)力。物質(zhì)(溶液、半粘性凝膠，懸浮液、油脂軟膏和軟凝膠(粘性凝膠))的粘性以單位泊表示。單位厘泊("cp"或其復(fù)數(shù)形式"cps")等于O.Ol泊并且經(jīng)常在藥學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域使用。用來增強粘度的化合物有多種級別，如15cps、100cps等。該級別數(shù)是指固定百分比液體溶液的增強劑制成后產(chǎn)生的粘度。通常，溶液是1%或2%;然而在特定增強劑內(nèi)溶液可以高到4%。在20或25T測量粘度。眼用溶液的合適粘度在25至50厘泊(cps)之間。為產(chǎn)生所需粘度而需要的增強劑的實際濃度依賴于增強劑的級別。例如，如果使用甲基纖維素25cps，那么"/。的溶液將產(chǎn)生25cps的粘度。如果使用甲基纖維素4000cps，那么0.25%的溶液可提供所需的粘度。標(biāo)準(zhǔn)參照給出了百分比溶液和組分級別所產(chǎn)生的粘度的列表。根據(jù)具體實施方式，本發(fā)明制劑也表現(xiàn)出大于1至100,000厘泊(cps)或更高的粘度。本發(fā)明的軟膏組合物(油脂凝膠或粘性凝膠)可具有大于100,000cps的粘度級別。這是因為眼用軟膏需要粘稠一些，這樣才能阻止其從需要施用的區(qū)域流走。在應(yīng)用后隨時間的推移，這些軟膏附著處的結(jié)膜囊內(nèi)或眼睛表面的溫度會導(dǎo)致這些軟膏"熔化"并開始流動。多種本發(fā)明制劑類型的優(yōu)選粘度范圍見下表:〈table>Complextableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>還原劑/抗氧化劑/氧隔離劑本發(fā)明的某些組合物具有被氧化降解的可能。因此，制作過程中，操作和包裝本發(fā)明組合物可包括通過(1)用氮氣或高濃度惰性氣體如氬替換氧，(2)添加還原劑以使氧化作用最小化，(3)加入誘傅分子保護本發(fā)明的化合物免受氧化作用的影響?？捎糜谘塾弥苿┑某Ｒ娍寡趸?還原)劑的濃度可達(dá)0.1%或更高，它們是硫酸鈉、硫代亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸氫鈉和硫脲。亞硫酸鹽可引起一些人的過敏反應(yīng)；因此，在用含此抗氧化劑的本發(fā)明組合物治療前應(yīng)當(dāng)詢問服用此類抗氧化劑的患者關(guān)于此類可能反應(yīng)的問題。其他適用于本發(fā)明組合物的可用抗氧化劑是抗壞血酸、EDTA/乙二胺四乙酸二鈉、醋酸、檸檬酸、谷胱甘肽和乙酰半胱氨酸。這些試劑也被視為穩(wěn)定劑。誘餌分子或氧隔離保護試劑可作為穩(wěn)定劑添加到本發(fā)明制劑中以最小化對本發(fā)明制劑的氧化作用。分子誘餌必須具有至少與本發(fā)明制劑相同的被氧化能力。對于含甲硫氨酸的本發(fā)明制劑，這樣的誘館就是甲硫氨酸本身。在含甲硫氨酸的本發(fā)明試劑中所添加的游離甲硫氨酸會在被氧化成甲硫氨酰的過程中競爭氧。游離氧消耗劑是阻止本發(fā)明組合物/肽中的氧活性氨基酸被氧化的試劑。為實現(xiàn)特定的發(fā)明組合物的目的，并不局限于游離氧消耗劑是甲硫氨酸。眼用軟膏/油脂軟化基質(zhì)眼用軟膏易于使活性試劑與眼睛接觸的時間長于懸浮液，當(dāng)然也比溶液的時間長。多數(shù)軟膏由于不易被流淚去除，所以趨于使視覺模糊。這樣，軟膏通常在晚上使用作為日用滴眼液的輔助治療。本發(fā)明組合物的油脂軟膏基質(zhì)是礦物油、凡士林和羊毛脂的混合物，它們都具有和體溫相近的熔點。對本發(fā)明的化合物下，該組合物可包括礦物油、凡士林或羊毛脂。根據(jù)具體實施方式，優(yōu)選的組合物包括凡士林、礦物油和羊毛脂的組合。最優(yōu)選的組合物是含白凡士林、礦物油和羊毛脂(無水)的軟膏組合物。含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其保守變異體的肽試劑溶解在少量的純水或0.9%的鹽水以影響溶出度。此水溶液加入到無水羊毛脂中，然后這樣的"水"羊毛脂(至多10%)與其余的軟膏/油脂軟化基質(zhì)組分，礦物油(至多30%)和白凡士林(至多60%)相混合。眼用軟膏管通常少量地含有大約1-5克的軟膏，優(yōu)選的是3.5克，并配有細(xì)頭，該細(xì)頭可擠出英寸計細(xì)條的軟膏或其小段，以用于對藥劑進行定量。防腐劑無菌是所有眼用制劑的絕對要求。污染的制劑會導(dǎo)致眼睛感染，從而最終導(dǎo)致失明，尤其是，如果含有銅綠假單胞菌微生物(尸.^n^/mw")，情況則更是如此。因此，本文中描述的眼用制劑必須使用確保本發(fā)明組合物的溶液、凝膠、懸浮液和軟膏無菌的技術(shù)。無菌制劑必須包裝在無菌容器里。多數(shù)外用眼用產(chǎn)品通常以多劑量形式包裝。因此，需要防腐劑來阻止使用過程中無菌產(chǎn)品的微生物污染。合適的防腐劑包括季銨化合物(鹽)，如苯扎氯銨(0.001-0.02%)、氯芐乙銨、西他氯銨、西曲溴銨、苯度溴銨和苯佐氯銨；硫代水楊酸的烷基汞鹽，例如硫柳汞(0.001-0.005%);對羥基苯甲酸酯類，例如對羥基苯甲酸甲酯和對羥基苯甲酸丙酯；螯合劑，如乙二胺四乙酸二鈉、葡萄糖酸鈉、丙酸鈉；其他試劑，例如三氯叔丁醇、硼酸、山梨酸、苯乙醇(0.25%);Purite⑧二氧化氯;Polyquadpol，atemi腿-l(0.001%)和Aldox⑧肉豆蔻酰胺丙基二乙胺(myristamidopropyldiethylamine)(0.005%)或其他本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的試劑。這些防腐劑通常以0.001%-0.1%(w/v)的水平使用以確保防止使用中由細(xì)菌、霉菌和真菌造成的二次微生物污染。以下所選的現(xiàn)已證明可在眼用制劑中使用的防腐劑的最大濃度見下表試劑最大濃度％苯扎氯銨(BAK)0.01氯芐乙銨0.01氯丁醇(clorobutanol)0.5醋酸苯汞0.004硝酸苯汞0.004硫柳滎(thiomersal)0.01對羥基苯甲酸甲酯0.2對羥基苯甲酸丙酯0.04來源FDA顧問團的OTC眼用藥物產(chǎn)品，最終報告，1979年12月合適防腐劑的選擇是基于其對所選發(fā)明組合物的抗微生物效率。用于本發(fā)明制劑的優(yōu)選防腐劑是對羥基苯甲酸甲酯(0.080%-1%)和對羥基苯甲酸丙酯(0.016%-0.024%)的組合、苯扎氯銨(BAK)(0.005%-0.02%，其中0.01%w/v是最優(yōu)選的)、BAK禾HEDTA(0.01-0.5%)的組合，它們在一起施用時有協(xié)同作用。本發(fā)明的單位劑量組合物是無菌的但未防腐處理。這樣的組合物多數(shù)不含防腐劑。因此，這些組合物不能反復(fù)使用，一旦打開必須丟棄。填充/穩(wěn)定劑填充/穩(wěn)定劑對在長時間儲存期間維持本發(fā)明組合物中的潤滑劑、軟化劑或載體增強劑的水合狀態(tài)是有益的。締合似乎發(fā)生在這些物質(zhì)的多聚鏈之內(nèi)或之間，這些締合隨時間促成了這些鏈的水合狀態(tài)的減少。這些締合可以是多聚鏈之內(nèi)或之間的氫鍵形式，其可以證明本發(fā)明的眼用制劑/組合物的粘度和質(zhì)地的變化。冷凍干燥填充劑，主要是糖，也可以看作是壓力保護劑，用來在冷凍周期內(nèi)保護化合物。大幅減低或消除這種降低的水合狀態(tài)的試劑是一類穩(wěn)定或水合增強試劑，艮口，0.2-5wty。濃度的多元醇。這些多元醇的代表是甘露醇、山梨醇、丙三醇、蔗糖、相關(guān)的糖和類似物。最優(yōu)選的穩(wěn)定劑是吸水的甘露醇，其濃度在0.2-5wto/o范圍內(nèi)。另外，50mM氨基酸穩(wěn)定劑，如丙氨酸(Ala)、賴氨酸(Lys)、甘氨酸(Gly)和谷氨酸(Glu)，也加入到含序列LKKTET或LKKTNT或其保守變異體的制成肽制劑中以提高冷凍后從再生水溶液的恢復(fù)。優(yōu)選的氨基酸穩(wěn)定劑是精氨酸和甘氨酸，而最優(yōu)選的50mM氨基酸是甘氨酸。本發(fā)明肽的施用實例性外用給藥(用于表面作用效果)為達(dá)到局部效果，將含序列LKKTET或LKKTNT或其保守變異體的肽制劑施用到眼睛表面，以治療例如1.由，但不限于由化學(xué)灼傷、復(fù)發(fā)性角膜糜爛、手術(shù)中的上皮清創(chuàng)術(shù)、角膜表面重修手術(shù)、激光輔助原位角膜磨鑲術(shù)(LASIK)造成的角膜上皮創(chuàng)傷；2.由季銨鹽(如BAK和類似物)造成的角膜上皮變薄；3.眼部發(fā)炎(單獨或與皮質(zhì)類固醇激素一起使用)，從而治療例如，結(jié)膜炎、眼瞼炎、角膜炎、眼色素層炎、鞏膜炎、視網(wǎng)膜炎、視神經(jīng)炎和顳動脈炎；4.治療微生物感染(單獨，或者與抗細(xì)菌、抗真菌或抗病毒試劑一起或者與抗微生物及抗炎癥試劑一起使用)；5.干眼綜合癥(眼球干燥癥)；6.紅眼(單獨或者與眼睛解充血劑(結(jié)膜的腎上腺能血管收縮藥)，例如麻黃素、萘唑啉、苯腎上腺素、四氫萘咪唑啉和抗組胺藥，例如馬來酸非尼拉敏)一起使用來使眼睛變白)；7.眼內(nèi)壓(IOP)高和青光眼；以及8.跌打損傷或外科手術(shù)之后的發(fā)炎或刺激狀況，或多種眼部刺激紊亂中的發(fā)炎或刺激狀況。本發(fā)明外用肽試劑制成溶液、懸浮液、凝膠和軟膏。本發(fā)明肽試劑制劑可以直接或間接的通過膠原海綿、插入或相似的方法來施用。包括外用眼藥在內(nèi)的每種眼用產(chǎn)品應(yīng)當(dāng)在其最終容器內(nèi)是無菌的，以阻止對眼睛的微生物感染。當(dāng)制劑包裝在多劑量容器內(nèi)用于多次使用時，為在容器打開后保持無菌，應(yīng)向制劑中添加防腐劑。眼用制劑需要仔細(xì)的控制其pH、緩沖能力、粘度和滲透壓。本文中描述了優(yōu)選的pH范圍、緩沖劑、粘度和滲透壓。實例性制劑用于滴眼液的外用溶液每毫升外用的本發(fā)明肽制劑包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的下述肽試劑肽的濃度范圍是大約0.001-1，000mg/ml，優(yōu)選的是大約0.01-600mg/ml，更優(yōu)選的是大約0.1-60mg/ml，最優(yōu)選的肽濃度是大約l-6mg/ml。優(yōu)選的載體(carrier/vehicle):20mM檸檬酸鈉；50mM甘氨酸；3%蔗糖；用于調(diào)解pH的NaOH或HCI;USP純化水。實例性制劑用于滴眼液的外用懸浮液對于包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT的肽試劑的眼用懸浮液，其顆粒必須小于IO微米以最小化對眼睛的刺激。固體未溶解顆粒往往會粘附到結(jié)膜上。當(dāng)藥物被吸收后，這些顆粒會溶解從而補充被吸收了的藥物。與溶液相比，這種蓄積或儲存作用提高了懸浮液的接觸時間和作用時長。每毫升外用的本發(fā)明肽制劑包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的下述肽試劑肽的濃度范圍是大約0.001-l,000mg/ml，優(yōu)選的是大約0.01-600mg/ml，更優(yōu)選的是大約0.1-60mg/ml，最優(yōu)選的肽濃度是大約1-6mg/ml。優(yōu)選的載體(carrier/vehicle):聚(丙交酯-乙交酯)PLGA微球形式的肽包囊；20mM檸檬酸鈉；50mM甘氨酸；3%蔗糖；用于調(diào)節(jié)pH的NaOH或HCI;USP純化水。實例性制劑用于滴眼液的外用凝膠每毫升外用的本發(fā)明肽制劑包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的下述肽試劑月太的濃度范圍是大約0.001-l,000mg/ml，優(yōu)選的是大約0.01-600mg/ml，更優(yōu)選的是大約0.1-60mg/ml，最優(yōu)選的肽濃度是大約l-6mg/ml。優(yōu)選的載體(carrier/vehicle):羧甲基纖維素鈉(0.5-1%);磷酸二鈉；氯化鈉；丙二醇；對羥基苯甲酸甲酯；對羥基苯甲酸丙酯；用于調(diào)節(jié)pH的NaOH或HCI;USP純化水。實例性制劑外用軟膏每毫升外用的本發(fā)明肽制劑包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的下述肽試劑肽的濃度范圍是大約0.001-l,000mg/ml，優(yōu)選的是大約0.01-600mg/ml，更優(yōu)選的是大約0.1-60mg/ml，最優(yōu)選的肽濃度是大約l-6mg/mlo優(yōu)選的載體(carrier/vehicle)(1):羧甲基纖維素鈉(2.5%);磷酸二鈉；丙二醇；對羥基苯甲酸甲酯；對羥基苯甲酸丙酯；氯化鈉；用于調(diào)節(jié)pH的NaOH或HCI;USP純化水。優(yōu)選的載體(carrier/vehicle)(2):"7夂"羊毛脂(10%);礦物油(30%)和白凡士林(60°/。)。節(jié)約類固醇作用的實例性外用給藥皮質(zhì)類固醇抑制了對多種刺激性試劑的抗炎癥反應(yīng)。*地塞米松眼用懸浮劑(0.1%);地塞米松眼用軟膏(0.05%);和地塞米松磷酸鈉眼用溶液(0.1%)*氟米龍眼用軟膏(0.1%);氟米龍眼用懸浮液(0.25-1%);和氟米龍醋酸鹽眼用懸浮液(0.1%)*氯替潑諾(0.5%)*甲羥松眼用懸浮液(1%)*醋酸強的松龍眼用懸浮液(0.12-1%)和強的松龍磷酸鈉眼用溶液(0.125-1%)*利美索龍眼用懸浮液(1%)然而，這些試劑可以提高眼內(nèi)壓(IOP)，可以誘導(dǎo)易感個體的青光眼從而損傷視神經(jīng)、使視覺準(zhǔn)確度和視野受損、形成后囊下白內(nèi)障。白內(nèi)障的形成更似乎是與高劑量、長時間使用相伴的并發(fā)癥。一些皮質(zhì)類固醇，例如醋酸氟米龍、甲羥松和氯替潑諾比其他皮質(zhì)類固醇引起較小的IOP升高。長期使用也會抑制宿主的免疫反應(yīng)從而幫助了從眼組織釋放的真菌和病毒形成二次眼部感染。已知外用皮質(zhì)類固醇延緩或減慢創(chuàng)傷的愈合。施用包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的本發(fā)明肽試劑的外用滴眼液或軟膏來抑制對刺激試劑的炎癥反應(yīng)具有節(jié)約類固醇的潛能。實例性眼內(nèi)給藥-結(jié)膜/鞏膜滴注外用結(jié)膜進入途徑在藥物滲透入眼前節(jié)中起到重要作用。而且，已發(fā)現(xiàn)外用藥物從結(jié)膜進入鞏膜。通過鞏膜轉(zhuǎn)運或擴散的可能性依賴于該組織大而且可透過的表面區(qū)域、以及其不隨年齡顯著降低的高水合性、高度細(xì)胞過少和高通透性。因此，可以想到本發(fā)明的組合物可以通過此非侵入給藥途徑找到到達(dá)眼前節(jié)的通路。數(shù)據(jù)說明鞏膜甚至對大分子量的化合物(150kD)也是易于穿透的，這遠(yuǎn)大于含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其保守變異體的肽試劑。最新的發(fā)現(xiàn)外用奈帕芬胺通過降低VEGF的產(chǎn)生來抑制脈絡(luò)膜和視網(wǎng)膜的新生血管形成，大分子量肽如胰島素(5.8kD)能在外用給藥后在視網(wǎng)膜和視神經(jīng)處積累，這說明外用本發(fā)明的組合物，其分子量都〈150kD，不僅能穿過結(jié)膜到到眼前節(jié)，而且它們也具有治療作用。在上文中描述的含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的肽試劑的外用溶液、懸浮液、凝膠或軟膏是外用于結(jié)膜和鞏膜的合適制劑。另夕卜，通過注射含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其保守變異體的肽試劑的本發(fā)明組合物來進行結(jié)膜下施用可用于遞送抗炎癥和抗微生物療法(并對本發(fā)明的化合物是敏感的)，可用于治療嚴(yán)重的眼部炎癥和眼部感染，例如葡萄膜炎、眼內(nèi)炎和青光眼。優(yōu)選的可注射制劑每ml含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的肽試劑包含肽的濃度范圍在大約0.001-l,000mg/ml，優(yōu)選的在大約0.01-600mg/ml，更優(yōu)選的在大約0.1-60mg/ml，最優(yōu)選的肽濃度是大約l-6mg/ml。優(yōu)選的載體(carrier/vehicle):20mM檸檬酸鈉；50mM甘氨酸；30/。蔗糖；用于調(diào)節(jié)pH的NaOH或HCI;USP純化水。實例性眼內(nèi)給藥-透角膜滴注外用藥物通過疏水角膜滲透入眼內(nèi)環(huán)境；然而，透角膜轉(zhuǎn)運不是最有效的方式，原因是其只使十分之一到十分之三的劑量滲透入眼睛而大多數(shù)藥物殘留在上皮層的表面。本發(fā)明肽組合物通過角膜的被動擴散在很大程度上受它們的溶解度、分子量和離子化程度的影響。制成外用藥物的本發(fā)明的肽試劑由于具有凈負(fù)電和相對高的分子量，從而很難穿透完整的角膜。位于角膜上皮細(xì)胞之間的孔隙只允許約500分子量或更小的小分子細(xì)胞旁路穿過的事實支持這一觀點。然而，當(dāng)完整角膜被腐蝕所破壞時，例如或是暴露于能打開上皮細(xì)胞間緊密連接的某種物質(zhì)或穿透試劑，本發(fā)明的組合物可以更有效的穿過角膜進入眼內(nèi)空間。如上文所述的含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的肽試劑的外用溶液、凝膠或軟膏是透角膜滴注的合適制劑。實例性眼內(nèi)給藥-眼周注射在眼部炎癥不應(yīng)答單獨的外用滴眼液以及在炎癥狀況如前葡萄膜炎、后葡萄膜炎、眼內(nèi)炎和視神經(jīng)炎情況下，使用本發(fā)明肽試劑的眼周注射制劑。該肽試劑注射入結(jié)膜下或者筋膜囊(Tenon'scapsule)下的空間。從而，吸收會更多，結(jié)果是所期望靶點有更多的藥物。眼周注射是外用治療的補充，但其不方便且不適用于首選治療。優(yōu)選的可注射制劑每ml含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的肽試劑包含肽的濃度范圍是大約0.001-l,000mg/ml，優(yōu)選的是大約0.01-600mg/ml，更優(yōu)選的是大約0.1-60mg/ml，最優(yōu)選的肽濃度是大約l-6mg/ml。優(yōu)選的載體(carrier/vehicle):20mM擰豐蒙酸鈉；50mM甘氨酸；3%蔗糖；用于調(diào)節(jié)pH的NaOH或HCI;USP純化水。實例性眼內(nèi)給藥-玻璃體內(nèi)/房水內(nèi)(IntraAqueous)施用作為透角膜、透結(jié)膜和透鞏膜轉(zhuǎn)運的替代，本發(fā)明肽試劑的送入眼內(nèi)組織可通過注射入玻璃體或房水腔內(nèi)實現(xiàn)。玻璃體是由水凝膠(水、透明質(zhì)酸和膠原)構(gòu)成，其填充了視網(wǎng)膜和晶狀體之間的腔，而房水是填充晶狀體和虹膜之間腔的水性流體。將制成溶液的本發(fā)明肽試劑注射到玻璃體和房水內(nèi)可使眼內(nèi)組織迅速暴露于肽試劑。試劑會快速從玻璃體中清除掉，所以為實現(xiàn)本發(fā)明試劑在眼內(nèi)持續(xù)存在，就需要重復(fù)注射，而重復(fù)注射提高了患眼內(nèi)炎、損害晶狀體以及造成視網(wǎng)膜脫落的風(fēng)險，并且難以忍受。為克服這一障礙，本發(fā)明的肽試劑可以包裹到磷脂膜內(nèi)，即脂質(zhì)體、生物可降解微球、納米顆?；蛏锟山到鈨?nèi)酯為基質(zhì)的多聚體，其包括由L-丙交酯、乙交酯、己內(nèi)酯、二氧雜環(huán)己酮、環(huán)狀碳酸酯和它們的衍生物縮聚而制成的聚酯。聚交酯和聚乙交酯，也分別稱為聚(乳酸)PLA和聚(乙醇酸)PGA，尤其是它們的共聚物聚乳酸/乙醇酸共聚物PLGA是研究最多的生物可降解多聚體，其也可用作本發(fā)明肽試劑的載體。另外，肽-聚合物的結(jié)合物如含LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑與合成及天然多聚物如聚乙二醇(PEG)和葡聚糖(包括環(huán)葡聚糖)的共價連接，可改善藥代動力學(xué)模式，從而導(dǎo)致降低了對本發(fā)明肽的清除。玻璃體內(nèi)或房水內(nèi)施用本發(fā)明的肽試劑可以在眼部炎癥、眼部感染(細(xì)菌、真菌或病毒的)以及青光眼的治療中，通過控制流出通路細(xì)胞中F-肌動蛋白的構(gòu)建而展現(xiàn)(ReadATetal.,ExpEyeRes,2006Jun:82(6):974-85)。優(yōu)選的可注射制劑每ml含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或保守變異體的肽試劑包含肽的濃度范圍是大約0.001-l，000mg/ml，優(yōu)選的是大約0.01-600mg/ml，更優(yōu)選的是大約0.1-60mg/ml，最優(yōu)選的肽濃度是大約l-6mg/ml。優(yōu)選的載體(carrier/vehicle):1):20mM檸檬酸鈉;50mM甘氨酸；3%蔗糖；用于調(diào)節(jié)pH的NaOH或HCI;USP純化水。優(yōu)選的載體(carrier/vehicle)(2):PLGA微球形式的肽包囊；20mM檸檬酸鈉；50mM甘氨酸；3%蔗糖；用于調(diào)節(jié)pH的NaOH或HCI;USP純化水。。實例性制劑劑量外用溶液和懸浮液建議每次施用一滴并至少間隔5分鐘再次施用。向眼睛中滴注一滴后立即壓迫淚囊1-2分鐘以減少通過此通路的藥物流失速度?？勺⑸鋭┝渴褂?7-30規(guī)格的針，0.5英寸長度。根據(jù)具體實施方式的組合物可以是凍干形式，或者能夠被凍干的形式，其包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑，或者包括刺激LKKTET或LKKTNT肽、或其保守變異體產(chǎn)生的刺激試劑，該組合物進一步包括至少一種氨基酸穩(wěn)定劑。該組合物可包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑，或者包括刺激LKKTET或LKKTNT肽、或其保守變異體產(chǎn)生的剌激試劑，以及凍干填充劑或氨基酸穩(wěn)定劑中至少一種，所述組合物處于凍干形式。該組合物進一步包括酸性或堿性pH調(diào)節(jié)劑中的一種，該pH調(diào)劑能夠在含水介質(zhì)內(nèi)調(diào)節(jié)組合物的pH到所需的生理可接受pH水平，以及在所述含水介質(zhì)內(nèi)基本穩(wěn)定上述所需pH的緩沖劑。氨基酸穩(wěn)定劑可包括丙氨酸、賴氨酸、甘氨酸或谷氨酸中的至少一種。氮基酸穩(wěn)定劑可包括至少一種50mM的氨基酸穩(wěn)定劑。氨基酸穩(wěn)定劑可包括50mM甘氨酸。該組合物可進一步包括填充試劑，該填充試劑包括碳水化合物、糖醇、單糖、二糖、多聚糖、多元醇、甘露醇、山梨醇、丙三醇、蔗糖或葡萄糖右旋糖中的至少一種。pH調(diào)節(jié)劑可包括NaOH或HCl中的至少一種。緩沖劑可包括醋酸、抗壞血酸、硼酸、碳酸、磷酸、檸檬酸、葡萄糖酸、乳酸或丙酸中至少一種的鈉鹽，碳酸或丙酸的鈣鹽，磷酸鉀鹽，Tris緩沖劑，醋酸，磷酸，檸檬酸鹽或硼酸鹽緩沖劑中的至少一種。緩沖劑可以是擰檬酸鈉。緩沖劑的緩沖能力是大約0.05-1.0。緩沖劑的緩沖能力是大約0.02-0.2，或大約0.01-0.1。所需的pH水平的范圍可以是大約3.5-11.5，大約3.5-9，大約4.5-8，或大約5.0-7.8。所需pH水平可以是大約5.5。肽試劑包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T&4、T|34的N-末端變異體、T|34的C-末端變異體、或T(34的異構(gòu)體。組合物可進一步包括含水介質(zhì)，其中所述的肽試劑在所述含水介質(zhì)內(nèi)的濃度范圍是大約0.001-1,000mg/ml。組合物可進一步包括至少一種類固醇。根據(jù)另一具體實施方式的組合物用于對受試者皮膚組織施用，并包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑，或者包括在所述組織內(nèi)刺激LKKTET或LKKTNT肽、或其保守變異體產(chǎn)生的刺激試劑，該組合物進一步包括季銨鹽和應(yīng)用于所述受試者的皮膚組織的外用載體。該肽試劑可包括氨基酸序列LKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T(34、Tp4的N-末端變異體或Tp4的異構(gòu)體。季銨鹽可包括苯扎氯銨。肽試劑的濃度可以是大于0.001-1,000mg/ml，所述季銨鹽在所述組合物內(nèi)大約是0.001-lwt%。該組合物可以是溶液、凝膠、乳膏、糊劑、洗劑、噴霧劑、懸浮液、分散液、油膏，水凝膠、軟膏或泡沫制劑的形式。該組合物可以是化妝品制劑。根據(jù)另一個具體實施方式的藥學(xué)或化妝品的并用藥物，其包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑，或者包括刺激LKKTET或LKKTNT肽、或其保守變異體產(chǎn)生的刺激試劑，該組合物進一步包括季銨鹽，其中所述試劑和所述鹽可分別或一起對受試者施用。該肽試劑可包括氨基酸序列LKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T(34、TP4的N-末端變異體或TP4的異構(gòu)體。季銨鹽可包括苯扎氯銨。該并用藥物可包括藥學(xué)、眼用或化妝品組合物，其所含肽試劑的濃度可以是大于0.001-1,000mg/ml，其中所述季銨鹽在所述組合物內(nèi)大約是0.001-lwt%。該并用藥物可包括眼用組合物，該眼用組合物進一步包括可眼用載體。該組合物可包括滴眼液組合物。根據(jù)另一個具體實施方式，治療、阻止、抑制或降低組織由于對受試者施用季銨鹽所造成的衰退、受損或損害的處理方法包括對所述受體施用所述季銨鹽以及對所述受試者施用含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑、或者在所述組織內(nèi)刺激LKKTET或LKKTNT肽或其保守變異體產(chǎn)生的剌激試劑。該試劑可在所述季銨鹽施用之前、同時或之后對受試者施用。該試劑和所述鹽可作為組合物同時施用。該組合物可進一步包括可眼用載體。該組合物可包括滴眼液組合物。該組合物可包括化妝品可接受的載體。該組合物可以是溶液、凝膠、乳膏、糊劑、洗劑、噴霧劑、懸浮液、分散液、油膏，水凝膠、軟膏或泡沫制劑的形式。肽試劑可包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T(34、T(34的N-末端變異體、T(34的C-末端變異體或鄧4的異構(gòu)體。季銨鹽可包括苯扎氯銨。包括在所述組合物中的肽試劑的濃度可以是大約0.001-1,000mg/ml，所述季銨鹽在所述組合物內(nèi)大約是0.001-lwt%。根據(jù)另一個具體實施方式的組合物，其包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體的肽試劑、或者刺激LKKTET或LKKTNT肽或其保守變異體產(chǎn)生的剌激試劑、以及可眼用載體、抗微生物作用的防腐劑、為所述組合物提供眼用滲透壓的高滲劑、舒適增強劑、能夠調(diào)節(jié)組合物pH到所需眼用可接受pH水平的酸性或堿性pH調(diào)節(jié)劑中的至少一種、以及基本維持上述所需pH水平的緩沖劑。該組合物可進一步包括抗氧化劑或氧隔離試劑中的一種?？寡趸瘎┗蜓醺綦x試劑可包括亞硫酸鈉、硫代壓硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸氫鈉、硫脲、抗壞血酸、EDTA/乙二胺四乙酸二鈉、醋酸、檸檬酸、谷胱甘肽、乙酰半胱氨酸或甲硫氨酸?？寡趸瘎┗蜓醺綦x試劑在所述組合物內(nèi)的濃度范圍是大約0.0001-1.0wt%。抗微生物作用的防腐劑可包括以下中的一種季銨化合物苯扎氯銨、氯芐乙銨、西他氯銨、西曲溴銨、苯度溴銨、苯佐氯銨；硫代水楊酸的烷基汞鹽硫柳汞、硝酸苯汞、醋酸苯汞、硼酸苯汞；對羥基苯甲酸酯類對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯；螯合劑、乙二胺四乙酸二鈉、葡萄糖酸鈉、丙酸鈉；醇類、三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇；胍衍生物氯己啶(chlorohexidine)、聚亞己基縮二胍(polyhexamethylenebiguanide)、山梨酸、硼酸、二氧化氯、聚咪唑啉季銨鹽(polyquatemium)或肉豆蔻酰胺丙基二乙胺(myristamidopropy1diethylamine)。防腐劑在所述組合物內(nèi)的濃度范圍是大約0.0001-5.0%(w/v)。該組合物可進一步包括至少一種眼用可接受穩(wěn)定劑。穩(wěn)定劑可包括多元醇、甘露醇、山梨醇、丙三醇、蔗糖、氨基酸穩(wěn)定劑丙氨酸(Ala)、賴氨酸(Lys)、或谷氨酸(Glu)中的至少一種。穩(wěn)定劑在所述組合物中的濃度范圍是大約0.01-10wt%。高滲劑包括離子化合物、堿金屬鹵代物、堿土金屬鹵代物、CaCl2、KBr、KC1、LiCl、NaBr、NaCl、硼酸、非離子化合物、尿素、丙三醇、山梨醇、甘露醇、丙二醇或葡萄糖右旋糖中的至少一種。該組合物的滲透壓的范圍可以是50-1000mOsmol。調(diào)節(jié)劑可包括NaOH或HC1中的至少一種。緩沖劑可包括醋酸鈉鹽、抗壞血酸鈉鹽、硼酸鈉鹽、碳酸鈉鹽、磷酸鈉鹽、擰檬酸鈉鹽、葡萄糖酸鈉鹽、乳酸鈉鹽、丙酸鈉鹽、碳酸韓鹽、丙酸轉(zhuǎn)鹽、磷酸鉀鹽、Tris緩沖劑、醋酸緩沖劑、磷酸緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑或硼酸鹽緩沖劑中的至少一種。所需的pH水平的范圍是大約3.5-11.5。緩沖劑具有的緩沖能力是大約0.05-1.0。肽試劑可包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序歹ljUCKTETQ、T卩4、T卩4的N-末端變異體、T(34的C-末端變異體或TP4的異構(gòu)體。該化合物進一步包括水性介質(zhì)，其中所述的肽試劑在所述含水介質(zhì)中的濃度范圍是0.001-1,000mg/ml。該組合物可以是溶液、凝膠、乳膏、糊劑、洗劑、噴霧劑、懸浮液、分散液、油膏，水凝膠、軟膏或泡沫制劑的形式。該組合物可包括滴眼液組合物。肽試劑可在所述組合物中，組合物被磷脂膜、脂質(zhì)體、微球、納米顆?；蛏锟山到舛嗑垠w中的至少一種所包裹，或者肽-聚合物的結(jié)合物的形式存在。實施例胸腺素卩4(T卩4)，是一個含43個氨基酸的分子，其促進了眼部創(chuàng)傷的愈合，降低了眼部炎癥，并對角膜上皮具有抗細(xì)胞凋亡作用。在本研究中，檢測了TP4對暴露于苯扎氯銨(BAK)的培養(yǎng)人角膜上皮細(xì)胞的存活的作用。大約80%匯合的人角膜上皮細(xì)胞在用0%、0.001%、0.01%或0.1%的BAK處理15分鐘。在培養(yǎng)基內(nèi)恢復(fù)3和24小時后，使用比色BrdU滲入分析來檢測細(xì)胞增值。使用比色膜聯(lián)蛋白為基礎(chǔ)的細(xì)胞死亡分析來檢測細(xì)胞凋亡。在lmcg/mlT(34中重復(fù)實驗，該劑量在幾個已發(fā)表的研究中顯示有效。為進一步評估TP4阻止細(xì)胞凋亡的能力，角膜上皮細(xì)胞用0.01%BAK±T(34處理超過5天。在所有使用過的BAK濃度下，與對照相比，角膜上皮細(xì)胞在3和24小時的恢復(fù)時間的增殖被抑制了，細(xì)胞凋亡被提高了。在3和24小時的時間點，T(34沒有消除BAK的有害作用；T(34也沒有促進細(xì)胞增殖并且細(xì)胞凋亡沒有被抑制。然而，在更長的培養(yǎng)時間(2-5天)時，T，4處理顯著抑制了BAK誘導(dǎo)的上皮細(xì)胞凋亡。另外，與只在培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)5天的細(xì)胞相比，TP4處理的細(xì)胞的細(xì)胞凋亡降低了。BAK是在許多市售眼用溶液中使用的防腐劑，其在培養(yǎng)中誘導(dǎo)了上皮細(xì)胞的凋亡，說明長時間的暴露對角膜健康是有害的。本文報道的研究說明T(34能夠克服BAK的有害細(xì)胞凋亡前作用。因為許多含BAK的滴眼液通常在很長一段時間內(nèi)使用，所以Tp4是含此種防腐劑的溶液的有用添加劑。權(quán)利要求1.組合物，其包括含氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其保守變異體的肽試劑或者刺激LKKTET或LKKTNT肽或其保守變異體產(chǎn)生的刺激試劑，以及眼用載體、有效抗微生物防腐劑、為所述組合物提供眼用可接受滲透壓的高滲劑、舒適增強劑、能夠調(diào)節(jié)組合物pH至所需眼用pH水平的酸性或堿性pH調(diào)節(jié)劑中的至少一種和基本維持上述所需pH水平的緩沖劑。2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的組合物，其進一步包括抗氧化劑或氧隔離劑中的至少一種。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中所述的抗氧化劑或氧隔離劑包括亞硫酸鈉、硫代亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸氫鈉、硫脲、抗壞血酸、EDTA/乙二胺四乙酸二鈉、醋酸、檸檬酸、谷胱甘肽、乙酰半胱氨酸或甲硫氨酸中的至少一種。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中所述的抗氧化劑或氧隔離劑在所述組合物中的濃度范圍是大約0.0001-1.0wt%.5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的有效防腐劑包括以下化合物中的至少一種季銨鹽化合物苯扎氯銨、氯節(jié)乙銨、西他氯銨、西曲溴銨、苯度溴銨、苯佐氯銨；硫代水楊酸的烷基汞鹽硫柳滎、硝酸苯汞、醋酸苯汞、硼酸苯汞；對羥基苯甲酸酯對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯；螯合劑、乙二胺四乙酸二鈉、葡萄糖酸鈉、丙酸鈉；醇三氯叔丁醇、苯甲醇、苯乙醇；胍衍生物氯己啶、聚亞己基縮二胍，山梨酸、硼酸、二氧化氯、聚咪唑啉季銨鹽或肉豆蔻酰胺丙基二乙胺。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中所述防腐劑在所述組合物中的濃度范圍是大約0.0001-5.0%(w/v)。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其進一步包括至少一種眼用穩(wěn)定劑。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的組合物，其中所述的穩(wěn)定劑包括下述中的至少一種多元醇甘露醇、山梨醇、丙三醇、蔗糖；氨基酸穩(wěn)定劑丙氨酸(Ala)、賴氨酸(Lys)、或谷氨酸(Glu)。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中所述的穩(wěn)定劑在所述組合物中的濃度范圍是大約0.01-10wt%。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的高滲劑包括下述中的至少一種離子化合物堿金屬鹵代物、堿土金屬鹵代物、CaCl2、KBr、KC1、LiCl、NaBr、NaCl、硼酸；非離子化合物尿素、丙三醇、山梨醇、甘露醇、丙二醇或葡萄糖右旋糖。11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的組合物，其所具有的滲透壓的范圍是大約50-1000mOsmol。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的pH調(diào)節(jié)劑包括NaOH或HC1中的至少一種。13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的緩沖劑包括醋酸鈉鹽、抗壞血酸鈉鹽、硼酸鈉鹽、碳酸鈉鹽、磷酸鈉鹽、擰檬酸鈉鹽、葡萄糖酸鈉鹽、乳酸鈉鹽、丙酸鈉鹽、碳酸鈣鹽、丙酸鈣鹽、磷酸鉀鹽、Tris緩沖劑、醋酸鹽緩沖劑、磷酸鹽緩沖劑、檸檬酸鹽緩沖劑或硼酸鹽緩沖劑中的至少一種。14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述所需的pH水平的范圍是大約3.5-11.5。15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述緩沖劑的緩沖能力是大約0.05-1.0。16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述肽試劑包括氨基酸序列KLKKTET、氨基酸序列LKKTETQ、T(34、Tf34的N-末端變異體、Tp4的C-末端變異體或T|34的異構(gòu)體。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其進一步包括含水介質(zhì)，其中所述的肽試劑在所述含水介質(zhì)中的濃度范圍是大約0.001-1,000mg/ml。18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的組合物是溶液、凝膠、乳膏、糊劑、洗劑、噴霧劑、懸浮液、分散液、油膏、水凝膠、軟膏或泡沫制劑的形式。19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述組合物包括滴眼液組合20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述的肽試劑存在于所述組合物中，該肽試劑被磷脂膜、脂質(zhì)體、微球、納米顆?；蛏锟山到饩酆衔镏械闹辽僖环N所包裹，或者以肽-聚合物的結(jié)合物形式存在。全文摘要包括肽試劑或刺激試劑、以及眼用載體、抗微生物作用的防腐劑、提供所述組合物眼用滲透壓的高滲劑、舒適增強劑、能夠調(diào)節(jié)組合物pH至所需眼用pH水平的酸性或堿性pH調(diào)節(jié)劑中的至少一種、和基本維持所需pH水平的緩沖劑的組合物，其中所述肽試劑包括氨基酸序列LKKTET或LKKTNT或其變異體，所述刺激試劑刺激LKKTET或LKKTNT肽或其保守變異體的產(chǎn)生。文檔編號A61K38/08GK101198346SQ200680021661公開日2008年6月11日申請日期2006年6月19日優(yōu)先權(quán)日2005年6月17日發(fā)明者加布里埃爾·索斯恩,埃瓦爾德·漢納佩爾,大衛(wèi)·克羅克福德,阿蘭·L·戈爾茨坦申請人:雷金納克斯生物制藥公司;埃朗根-紐倫堡大學(xué)