專利名稱：洋薊提取物、其用途以及含有其的制劑的制作方法
洋薊提取物、其用途以及含有其的制劑本發(fā)明涉及可以通過樹脂分級(jí)獲得的洋薊(Cynara scolymus)多刺 變種(thorny varieties )提取物的制劑，及其制備步驟。本發(fā)明的方法允許從洋薊多刺變種的地上部分開始獲得提取物，其含 有三類恒定比例的活性成分，即二咖啡?？崴?，木犀草素和菜薊苦素苦。 通過添加精確量的硫酸化氨基酸或合適的硫代衍生物來穩(wěn)定菜薊苦素。這 些提取物具有降血脂(hypolipemizing )、抗消化不良和抗血管炎癥的活性。 該提取物主要配制在富含可以增強(qiáng)血管活性的(o-3和co-6酸的油中。技術(shù)背景從文獻(xiàn)中已知，洋薊的水或水醇提取物具有降低血膽固醇 (hypocholesterolemizing )、促膽汁分泌和抗消化不良的活性。在多年前已 經(jīng)知道其降低血膽固醇的活性，該活性與兩類物質(zhì)有關(guān)洋薊酸，其為一 種合成制備的二咖啡?？崴?，直到70年代仍在治療中使用；和黃酮類化 合物，其被證明具有在體外抑制肝臟膽固醇合成的活性。該通用活性與利 膽劑作用相關(guān)，特別是洋薊提取物，其通過排除膽酸促進(jìn)膽固醇排除。洋薊的活性成分是有效的抗氧化劑，其在干燥植物材料時(shí)很容易降解。 因此植物生物質(zhì)的制備對(duì)于獲得具有高活性成分含量的提取物是決定性 的。菜薊苦素是具有抗炎活性和溫和降低血膽固醇作用的辟。與所有的亞 甲基-Y內(nèi)酯環(huán)倍半萜一樣，菜薊苦素是低穩(wěn)定性的，這是該化合物不存在 于提取物和制劑中的原因之一。另一方面，該化合物在提取物中的存在是 關(guān)鍵性的，因?yàn)榫哂锌寡鬃饔玫纳锟衫梦镔|(zhì)(NFkB和反應(yīng)蛋白C) 可以調(diào)節(jié)血管炎癥，特別適合預(yù)防和治療動(dòng)務(wù)^更化和心臟病。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明涉及洋薊多刺變種的新提取物，所述變種優(yōu)選為洋薊變種5Wflfo ( q^mm sco/拜ms var. 5^Z"oso )或洋薊變種te附fl ( C"flmvar. rem")，其含有恒定比例的三類活性成分二咖啡?？崴?、 木犀草素和菜薊苦素苷。本發(fā)明另外涉及該提取物的制備過程。令人驚訝的發(fā)現(xiàn)，在洋薊提取物的提取步驟，或后續(xù)的純化或濃縮過 程中添加硫酸化氨基酸，優(yōu)選半胱氨酸，可以使最終提取物仍含有高濃度 在治療制劑中仍然穩(wěn)定的菜薊苦素。實(shí)際上，硫酸化M酸使得加合物形 成，該加合物穩(wěn)定倍半辟并促進(jìn)其吸收。在血漿中，這些加合物與蛋白質(zhì) 的巰基基團(tuán)發(fā)生交換反應(yīng)，因此恢復(fù)菜薊苦素的特異性活性。本發(fā)明提取物的重要治療應(yīng)用涉及治療結(jié)腸過敏， 一種影響高達(dá)9% 西方國家人口的疾病。所述的抗炎作用涉及對(duì)NFkB、 TNF-a和一些白介 素的調(diào)節(jié)，是參與減輕結(jié)腸過敏癥狀的機(jī)制之一。倍半薛內(nèi)酯也直接或間接的與腸道疾病中涉及的中樞神經(jīng)系統(tǒng)介質(zhì)相 互作用。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)提取和/或濃縮步驟中沒有使用硫酸化M酸作為穩(wěn)定 劑時(shí)，可以通過在制劑中添加硫酸化氨基酸來穩(wěn)定提取物。提取物使用植物的地上部分制備，包括富含二咖啡酰套尼酸的頭狀花 序部分；主要含有黃酮類化合物和所有菜薊苦素的葉。根據(jù)本發(fā)明，可以使用頭狀花序與剩余地上部分之間為固定比例的新 鮮或脫水的完整植物，優(yōu)選使用新鮮的完整植物，該固定比例范圍從20:80 至40:60，優(yōu)選為30:70。如前所述，植物生物質(zhì)的制備對(duì)于避免活性成分在干燥植物材料時(shí)降 解是關(guān)鍵的。根據(jù)本發(fā)明，在收獲后可以立即冷凍植物材料，從而降低植物中天然 存在的許多氧化酶和水解酶的作用。冷凍的生物質(zhì)在-3(TC研磨，并立即浸 沒在提取用醇溶劑中，這完成了酶的滅活以及活性成分的提取。水-醇溶液 可用于提取所有的活性成分，優(yōu)選使用可以提供各種組分之間的最佳比例的70%溶液。在提取中，向溶劑中添加半胱氨酸，所添加的量比菜薊苦素的化學(xué)計(jì) 量高10%。獲得的7JC-醇提取物在7jC真空下于25-55°C (優(yōu)選為35°C )的低 溫下濃縮。在濃縮時(shí)，不具有本發(fā)明提取物產(chǎn)生的任何活性的難溶于水的 惰性物質(zhì)(例如一般在植物材料中存在的葉綠素和一些類胡蘿卜素)沉淀并 被排除。過濾含水溶液，去掉溶劑和不需要的物質(zhì)，將獲得的溶液真空濃 縮到與提取的植物材料量對(duì)應(yīng)的量，然后在吸附樹脂上純化，所述樹脂例 如聚苯乙烯樹脂、Amberlite、 duolite和XAD1180。樹脂用7jC徹底洗滌， 需要的提取物用90%乙醇洗脫直到樹脂耗盡。其特別具有含量>5%的菜薊苦素，咖啡?？崴崤c菜薊苦素的比例范圍 為1:0.2至1:0.8，優(yōu)選為1:0.6,木犀草素苷與菜薊苦素的比例范圍為20% 至60%，優(yōu)選為50%。在一系列藥理學(xué)測試中對(duì)本發(fā)明的提取物進(jìn)行了生物學(xué)研究。本發(fā)明 的提取物在乙醇誘導(dǎo)高脂血癥的測試中，誘導(dǎo)膽固醇和甘油三酯分別降低 40%和35%，在角叉菜膠浮腫測試中，誘導(dǎo)水胂劑量依賴性降低了 75%。 大鼠中的促膽汁分泌作用證實(shí)了文獻(xiàn)中報(bào)道的數(shù)據(jù)。 提取物非常適合包含在藥物制劑中，所述制劑例如片劑、糖包衣丸劑、 軟明膠膠嚢劑、硬明皿嚢劑和纖維素膠嚢劑。提取物優(yōu)選的在富含co-3 和o-6多不飽和酸的油類中配制，例如月見草(五"W/^/yi 6/ewm's)油或亞麻(丄/聽附船/似,/肌'附m附)油。根據(jù)待治療疾病的嚴(yán)重程度，人中的活性劑量范圍從每天50到1000mg。本發(fā)明將在下述實(shí)施例中更詳細(xì)的描述。 實(shí)施例1.制備洋薊變種5^Vms"的提取物4.12kg朝鮮薊全林(頭狀花序、莖和葉)在滲濾器中用70%乙醇在 7(TC提取直到耗盡植物材料。收集大約50升滲濾液，然后在降低的壓力下濃縮去除乙醇。離心獲得的含水濃縮物(約1.5kg)以分離不溶物。將獲 得的澄清溶液上樣到預(yù)先用水條件化的、含有XAD1180樹脂(約1400ml) 的層析柱上。柱子用約2.8L水洗滌，棄去洗脫物，純化的提取物用3.5L 90% v/v乙醇洗脫回收。濃縮水-醇洗脫物，用HPLC檢測菜薊苦素的含量，并且添加溶解在 一些水中的L-半胱氨酸，所添加量比存在的菜薊苦素的化學(xué)計(jì)量多10%。 在5(TC和降低的壓力下進(jìn)一步濃縮和干燥，提供49.4g純化的干燥提取物 (總咖啡酰查尼酸HPLC含量為15.1%，總黃酮類化合物HPLC含量為 3.15%,總菜薊苦素HPLC含量為7.64% )。實(shí)施例2.制備洋薊變種的提取物4.12kg朝鮮薊全林(頭狀花序、莖和葉)在滲濾器中用70%乙醇在 70 °C提取直到完全提取出活性成分。確定結(jié)合的提取物中的菜薊苦素含量， 然后加入比其化學(xué)計(jì)量多10。/。的L-半胱氨酸。水-醇提取物在不超過30。C 的溫度下真空濃縮。將含水濃縮物4。C放置過夜，然后輕輕倒出主要由葉 綠素和類胡蘿卜素組成的固體殘余物。過濾溶液，然后用XAD1180樹脂 吸附，再用水洗滌直到徹底去掉不需要的不溶物。樹脂用90%乙醇洗滌， 然后將洗脫物濃縮到10% w/w殘余物，所述殘余物粉化后提供40g含有 15.8%咖啡?？崴?，4.2。/。木犀草素苷和8.6。/。菜薊苦素的提取物。實(shí)施例3.制備洋薊變種S/wVimo sflnfo的提取物4.12kg朝鮮薊全林(頭狀花序、莖和葉)在滲濾器中用70%乙醇在 35。C提取直到完全提取出活性成分。將結(jié)合的提取物濃縮到5L，在水箱中 放置15小時(shí)。將獲得的懸液離心。澄清的溶液用XAD1180樹脂吸附，再 用水洗滌直到干燥的殘余物(在水洗滌物中)低于0.01%。襯脂用90%乙 醇洗滌，然后將洗脫物在低于40。C的溫度下真空濃縮，得到40g含有16.2% 咖啡酰查尼酸，4.02%木犀草素苷和8.01。/。菜薊苦素的提取物。實(shí)施例4.油性懸液中的提取物的軟明膠膠嚢制劑單位組成實(shí)施例1的提取物 200mg白蜂蠟 15mg大豆卵磷脂 20mg大豆油 215mg實(shí)施例5.油性懸液中的提取物的軟明皿囊制劑 單位組成實(shí)施例2的提取物 200mg 大豆卵磷脂 240mg 白蜂蠟 6mg 月見草油 215mg實(shí)施例6.提取物的硬明M嚢制劑 單位組成實(shí)施例1的提取物 200mg孩t晶纖維素 200mg乳糖 卯mg二氧化珪 5mg硬脂酸鎂 5mg實(shí)施例7.提取物的硬明皿嚢制劑 單位組成實(shí)施例3的提取物 200mgL-半胱氨酸 lOOmg微晶纖維素 150mg乳糖 卯mg二氧化硅 5mg硬脂酸鎂 5mg實(shí)施例8.油性懸液中的提取物的軟明皿嚢制劑 單位組成實(shí)施例3的提取物 200mg大豆卵磷脂 240mg白蜂蠟 6mg亞麻油 215mg
權(quán)利要求
1.制備洋薊多刺變種提取物的方法，其包括a)用醇或水-醇溶劑提取植物新鮮的或脫水的生物質(zhì)；b)以25-55℃，優(yōu)選35℃的低溫在水真空下濃縮來自步驟a)的水-醇提取物；c)過濾除去沉淀的難溶于水的惰性物質(zhì)；d)在吸附樹脂柱上純化提取物。
2. 權(quán)利要求l所述的方法，其中步驟a)中使用在-30。C的溫度下冷凍 的磨碎的植物生物質(zhì)。
3. 權(quán)利要求1或2所述的方法，其中植物生物質(zhì)頭狀花序與剩余地上 部分的比例為20:80至40:60。
4. 權(quán)利要求3所述的方法，其中植物生物質(zhì)頭狀花序與剩余地上部分 的比例為30:70。
5. 權(quán)利要求l所述的方法，其中步驟a)的提取使用水-醇溶液進(jìn)行。
6. 權(quán)利要求5所述的方法，其中使用70%的水-醇溶液。
7. 權(quán)利要求5所述的方法，其中使用70%的乙醇溶液。
8. 權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟a )的提取在10。C至80。C的溫度 范圍內(nèi)進(jìn)行，優(yōu)選在25'C進(jìn)行。
9. 權(quán)利要求l所述的方法，其中步驟b)中溶液在真空下濃縮到與提 取的植物材料相對(duì)應(yīng)的量。
10. 權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟d)中的層析分離在樹脂上進(jìn) 行，所述樹脂選自聚苯乙烯、Amberlite、 duolite、 XAD1180。
11. 權(quán)利要求1所述的方法，其中在提取步驟a)中或在隨后的純化或 濃縮b) -d)步驟中，添加硫酸化氨基酸，優(yōu)選添加半胱氨酸。
12. 權(quán)利要求ll所述的方法，其中以比菜薊苦素的化學(xué)計(jì)量多10%的 量加入半胱氨酸。
13. 權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中使用洋薊變種SpinosoSardo。
14. 權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的方法，其中使用洋薊變種tema。
15. 根據(jù)權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的方法獲得的、具有高含量菜薊 苦素的洋薊提取物。
16. 權(quán)利要求15所述的提取物，其具有高于5。/。的菜薊苦素含量，咖 啡酰奎尼酸與菜薊苦素的比例范圍為1:0.2至1:0.8，優(yōu)選為1:0.6，木犀草 素普與菜薊苦素的比例范圍為20%至60%，優(yōu)選為50%。
17. 權(quán)利要求15所述的提取物，其配制在富含co-3和co-6多不飽和酸 的油類中。
18. 權(quán)利要求17所述的提取物，其配制在月見草油中。
19. 權(quán)利要求15所述的提取物，其配制在亞麻油中。
20. 含有權(quán)利要求15-19中任一項(xiàng)的提取物的組合物。
21. 權(quán)利要求20所述的組合物，其形式為片劑、糖包衣丸劑、軟明膠 膠嚢劑、》更明膠膠嚢劑和纖維素膠嚢劑。
22. 權(quán)利要求15-19中任一項(xiàng)的提取物在制備用于治療異常血脂癥、 動(dòng)脈石更4t和炎癥性腸病的藥物中的應(yīng)用。
23. 權(quán)利要求22所述的提取物在治療結(jié)腸過敏綜合征中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及可以通過樹脂分級(jí)獲得的洋薊提取物的制備。本發(fā)明的方法允許從洋薊植物的地上部分開始獲得提取物，該提取物包含恒定比例的三類活性成分，即二咖啡?？崴帷⒛鞠菟睾筒怂E苦素苷。通過添加精確量的硫酸化氨基酸或合適的硫代衍生物可以穩(wěn)定菜薊苦素。這些提取物具有降血脂、抗消化不良和抗血管炎癥的活性。該提取物主要在月見草油或可以提高血管活性的富含ω-3和ω-6酸的油類中配制。
文檔編號(hào)A61K36/28GK101222931SQ200680025389
公開日2008年7月16日 申請(qǐng)日期2006年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月14日
發(fā)明者A·焦里, E·邦巴爾代利, G·豐塔納, M·龍基, P·莫拉佐尼, S·阿匹尼 申請(qǐng)人:因德納有限公司