專利名稱：抗-MAdCAM抗體在治療腹部疾病及熱帶口炎性腹瀉中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗-MAdCAM抗體在制備用于治療腹部疾病和/或熱帶口 炎性腹瀉的藥物中的用途。現(xiàn)有技術(shù)粘膜地址素細(xì)胞粘附分子(Mucosal addressin cell adhesin molecule, MAdCAM)是細(xì)胞粘附受體免疫球蛋白超家族的成員。其是借 助與在淋巴細(xì)胞表面的整聯(lián)蛋白分子進(jìn)行相互作用來參與向組織募集 淋巴細(xì)胞(需要時(shí))的粘附分子之一。已表明，可抑制MAdCAM與其整聯(lián)蛋白結(jié)合伴侶(oc4 P 7)結(jié)合的抗 體，例如抗-MAdCAM抗體(例如MECA-367;美國(guó)專利5403919號(hào)，美國(guó)專 利5538724)或抗-ou P 7抗體(例如Act-l;美國(guó)專利6551593),可抑制 白細(xì)胞向炎癥性腸部的滲出，且因此有利于治療炎癥性腸病(IBD)。然而，諸如MECA-367等抗-MAdCAM抗體在人患者中不具治療用途； MECA-367可結(jié)合小鼠MAdCAM，但對(duì)人MAdCAM分子未顯示出多少親和力。 此外，作為大鼠抗體，其會(huì)在人患者中引起免疫應(yīng)答且因此不適合治 療用途。曾闡述過針對(duì)人MAdCAM的小鼠單克隆抗體(WO 96/24673)，但 這些也有可能在人中具有免疫原性。最近，已研發(fā)出對(duì)人及靈長(zhǎng)類 MAdCAM具有強(qiáng)特異性及親和力的可用于治療的完整人抗-人MAdCAM抗 體并闡述于W0 2005/067620中。已提出MAdCAM與0C4P7整聯(lián)蛋白相互作用的抑制劑(例如阻斷性抗 -MAdCAM抗體或抗ou P 7整聯(lián)蛋白抗體，例如MLN02,其是人源化Act-l， 闡述于WO 01/078779)可用于治療炎癥性腸病(IBD)。然而，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn) 包括MAdCAM阻斷性抗體在內(nèi)的這種相互作用抑制劑也可用于治療腹部 疾病及熱帶口炎性腹瀉。腹部疾病(亦稱作麩質(zhì)敏感性腸病或口炎性腹瀉)是一種小腸病癥。在英國(guó)、歐洲及美國(guó)，300人中就有1人受此病癥影響。腹部疾病 是一種常見病癥，且會(huì)影響到任何年齡的任何人。據(jù)認(rèn)為其在男性中 更為常見，但有可能同樣出現(xiàn)在男性及女性中。麩質(zhì)是兩種蛋白質(zhì)(麥膠蛋白與麥谷蛋白)的混合物，存在于小麥、 大麥及黑麥中。其會(huì)與小腸發(fā)生反應(yīng)，通過激活免疫系統(tǒng)從而攻擊脆 弱的負(fù)責(zé)吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及維他命的腸內(nèi)膜來造成損傷。盡管該病癥可 在任何年齡診斷出，但其常在斷乳后飲食中引入谷物的兒童中得到診 斷。癥狀會(huì)很細(xì)微，且在作出診斷之前患者會(huì)在一定時(shí)間內(nèi)無原因地 感到不適。初始癥狀通常包括變得易受刺激及感覺痛苦，伴隨食欲不佳且無 法增重。大便(排便)會(huì)變得無力、松散且難聞。 一些兒童開始嘔吐并 腹瀉，因此常會(huì)對(duì)其作出"胃腸炎"的錯(cuò)誤診斷。胃會(huì)發(fā)脹，且手臂 和腿的肌肉消瘦并變細(xì)。在成年人中，癥狀可能是類似的，包括伴隨 面色蒼白的體重減少、嚴(yán)重腹瀉或伴隨"排氣"的便秘及腹脹。有一 半具有腹部疾病的成年人不會(huì)具有任何來自腸部的癥狀。其常會(huì)因?yàn)?以下原因去看醫(yī)生極度疲憊、心理問題，如抑郁、骨痛且甚至有時(shí) 是骨折(由于骨頭變細(xì)所致)、口腔潰瘍或起泡、主要出現(xiàn)在肘部及膝 部的發(fā)癢性皮疹(稱作皰疹樣皮炎)。一些患有腹部疾病的女性很難懷孕，且會(huì)因此而得到診斷。復(fù)發(fā) 性流產(chǎn)(自然性流產(chǎn))有時(shí)與腹部疾病有關(guān)。 一些女性在懷孕期間得到 診斷，因?yàn)槠淠c部無法吸收足夠的鐵及維他命來滿足妊娠需要，從而 使其嚴(yán)重貧血?；加懈共考膊〉哪赣H生下子宮內(nèi)年齡小(子宮內(nèi)生長(zhǎng)遲 滯)的嬰兒的頻率更高。若不經(jīng)治療，則腹部疾病會(huì)引起貧血、骨病且在較少情形下會(huì)引 起某些形式的癌癥。目前最重要的治療是避免所有含有麩質(zhì)的食物。 這通常的結(jié)果是腸內(nèi)膜損傷得以改善或甚至消失。然而，若在飲食中 重新引入麩質(zhì)則會(huì)重新造成損傷。盡管腹部疾病不可預(yù)防，但堅(jiān)持不含麩質(zhì)的飲食會(huì)逆轉(zhuǎn)小腸的損傷。此需要相當(dāng)?shù)淖月?。需要找到一種具有低風(fēng)險(xiǎn)副作用的如下藥物 能夠使患者食用正常飲食且可避免礦物質(zhì)及維他命缺乏及其它與腹部 疾病有關(guān)的病癥。熱帶口炎性腹瀉是一種出現(xiàn)在熱帶及亞熱帶的消化問題?；加袩?帶口炎性腹瀉的人們不能很好地吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，尤其是維他命BU及葉酸。腹瀉是熱帶口炎性腹瀉的主要癥狀；食用大量脂肪性食物的人們 會(huì)較食用低脂肪飲食的人們經(jīng)歷更嚴(yán)重的腹瀉。其它癥狀包括腹部絞 痛、惡心、減重、排氣及消化不良。大約每1000000人口中就有l(wèi)人受熱帶口炎性腹瀉影響且出現(xiàn)在約 赤道北綷30。至赤道南煒30。之間。其在某些國(guó)家更常見，包括印度、 海地、古巴、波多黎各及多米尼加共和國(guó)。其在非洲、巴哈馬群島及 牙買加不常見或不存在。該病癥給受影響國(guó)家的居民以及游客帶來痛 苦，但通常其只會(huì)影響停留6個(gè)月或更長(zhǎng)時(shí)間的游客。人們尚未確定熱帶口炎性腹瀉的原因，但其很可能是因各種因素 的組合所致，該因素包括感染及營(yíng)養(yǎng)不良，其會(huì)一起對(duì)小腸內(nèi)膜造成 損傷，從而使小腸內(nèi)膜無法吸收營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。熱帶口炎性腹瀉的診斷會(huì)很復(fù)雜，是因?yàn)樵S多病癥均具有類似癥 狀。實(shí)施大便及血液測(cè)試以排除其它的腹瀉原因。如果此等測(cè)試呈陰 性且患者曾長(zhǎng)時(shí)間生活在熱帶，則熱帶口炎性腹瀉可能是引起該疾病 的原因?？梢詫?shí)施活體組織檢查以檢查絨毛從而鑒定小腸絨毛的典型 平整性。某些血液測(cè)試也會(huì)有助于熱帶口炎性腹瀉的診斷。由于該疾病會(huì) 阻斷某些維他命及礦物質(zhì)的吸收，故會(huì)觀察到低含量的白蛋白、鈣或 維他命D、 A、 K及E?；颊咭矔?huì)因維他命B12及葉酸缺乏而出現(xiàn)貧血。此 外，大便樣本會(huì)展現(xiàn)過量的脂肪。治療通常會(huì)是3至6個(gè)月的抗生素及葉酸(folic acid或folate)補(bǔ) 充物。缺乏維他命B12的人也會(huì)接受維他命補(bǔ)充物。發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的一個(gè)方面是可特異結(jié)合MAdCAM的抗體在制備用于治療腹 部疾病和/或熱帶口炎性腹渴的藥物中的用途。本發(fā)明的另一個(gè)方面是 一種使用治療有效量的抗-MAdCAM抗體治療腹部疾病和/或熱帶口炎性 腹瀉(優(yōu)選是腹部疾病)的方法。本發(fā)明的另 一方面是抗-ct 4 p 7整聯(lián)蛋白抗體在制備用于治療腹部 疾病和/或熱帶口炎性腹瀉(優(yōu)選是腹部疾病)的藥物中的用途。優(yōu)選 地，該抗-ct4P7整聯(lián)蛋白抗體是人源化Act-l，也稱作MLN02。本發(fā)明 的另一方面是使用治療有效量的抗-oc^ P 7抗體(優(yōu)選是MLN02)治療腹 部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉(優(yōu)選是腹部疾病)的方法。本發(fā)明的另 一方面是MAdCAM- ot 4 P 7整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的粘附的抑制劑 在制備用于治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的藥物中的用途。本發(fā) 明的另 一方面是使用治療有效量的MAdCAM- ct 4 P 7整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的粘附 的抑制劑治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的方法。優(yōu)選地，用于本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體或其抗原結(jié)合部分可特異結(jié) 合MAdCAM。更優(yōu)選地，至少該抗體的CDR序列是人CDR序列或人抗體的 抗原結(jié)合部分。優(yōu)選地，該抗體是人抗體、進(jìn)一步優(yōu)選是人單克隆抗 體或其抗原結(jié)合部分、更優(yōu)選是可作為MAdCAM拮抗劑的抗體或其抗原 結(jié)合部分。優(yōu)選地，抗體或一部分具有至少一種以下性質(zhì)(a) 結(jié)合人細(xì)胞；(b) 對(duì)MAdCAM具有較VCAM或纖連蛋白高至少IOO倍的選擇性；(c) 以3xl(T1。 M或更低的Kd結(jié)合人MAdCAM;或(d) 抑制ct 4 p 7表達(dá)細(xì)胞對(duì)人MAdCAM的結(jié)合，(e ) 抑制淋巴細(xì)胞向胃腸淋巴組織的募集。優(yōu)選地，抗體或抗原結(jié)合部分可抑制人MAdCAM對(duì)ot, P 7的結(jié)合，且 具有至少一種以下性質(zhì)(a) 與參照抗體交叉竟?fàn)幗Y(jié)合MAdCAM;(b) 與參照抗體竟?fàn)幗Y(jié)合MAdCAM;(c) 與參照抗體結(jié)合相同的MAdCAM表位；(d) 以與參照抗體大體相同的L結(jié)合MAdCAM;(e) 以與參照抗體大體相同的解離速率結(jié)合MAdCAM; 其中該參照抗體選自單克隆抗體1.7.2、單克隆抗體1.8. 2、單克隆抗體6. 14.2、單克隆抗體6. 22. 2、單克隆抗體6， 34. 2、單克隆抗 體6. 67. 1、單克隆抗體6. 73. 2、單克隆抗體6. 77. 1、單克隆抗體7. 16. 6、 單克隆抗體7. 20. 5、單克隆抗體7. 26. 4、單克隆抗體9. 8. 2、單克隆抗 體6. 22. 2-mod、單克隆抗體6. 34. 2-mod、單克隆抗體6. 67. l-mod、單 克隆抗體6. 77. l-mod及單克隆抗體7. 26. 4-raod。在本發(fā)明的另一方面中，該抗-MAdCAM抗體的重鏈可變區(qū)、輕鏈可 變區(qū)或二者在氨基酸序列上與選自下述的單克隆抗體的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有 至少90%的同一性，該單克隆抗體選自單克隆抗體1.7.2、單克隆抗 體l. 8. 2、單克隆抗體6. 14. 2、單克隆抗體6. 22. 2、單克隆抗體6. 34. 2、 單克隆抗體6. 67. 1、單克隆抗體6. 73. 2、單克隆抗體6. 77. 1、單克隆 抗體7. 16.6、單克隆抗體7. 20. 5、單克隆抗體7. 26.4、單克隆抗體 9. 8. 2、單克隆抗體6. 22. 2-mod、單克隆抗體6. 34. 2-mod、單克隆抗體 6. 67. l-mod、單克隆抗體6. 77. 1-mod及單克隆抗體7. 26. 4-mod。優(yōu)選地，該抗體選自 (a) 含有示于SEQ ID N0:2及SEQ ID NO: 4的氨基酸序列且不含信 號(hào)序列的抗體；(b) 含有示于SEQ ID N0:6及SEQ ID NO: 8的氨基酸序列且不含信 號(hào)序列的抗體；(c) 含有示于SEQ ID NO:10及SEQ ID NO: 12的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(d) 含有示于SEQ ID N0:14及SEQ ID NO: 16的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(e) 含有示于SEQ ID N0:18及SEQ ID NO: 20的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(f) 含有示于SEQ ID N0:22及SEQ ID NO: 24的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(g) 含有示于SEQ ID NO:26及SEQ ID NO: 28的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(h) 含有示于SEQ ID NO:30及SEQ ID NO: 32的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(i) 含有示于SEQ ID NO:34及SEQ ID NO: 36的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(j)含有示于SEQ ID NO:38及SEQ ID NO: 40的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(k)含有示于SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 44的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(I)含有示于SEQ ID NO:46及SEQ ID NO: 48的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(m)含有示于SEQ ID N0:52及SEQ ID NO: 54的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(n)含有示于SEQ ID NO:56及SEQ ID NO: 58的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(o)含有示于SEQ ID NO:60及SEQ ID NO: 62的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；(p)含有示于SEQ ID N0:64及SEQ ID NO: 66的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體；及(q)含有示于SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 68的氨基酸序列且不含 信號(hào)序列的抗體。在本發(fā)明的另一方面中，該單克隆抗體或其一抗原結(jié)合部分選自 下列抗體(a) 重鏈包含參照抗體的重鏈CDR1、 CDR2及CDR3的氨基酸序列， 該參照抗體選自1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34.2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(b) 輕鏈包含參照抗體的輕鏈CDR1、 CDR2及CDR3的氨基酸序列，該參照抗體選自1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(c) 該抗體包含(a)的重鏈及(b)的輕鏈；及(d) 該(c)的抗體，其中該重鏈及輕鏈CDR氨基酸序列選自相同參 照抗體。在本發(fā)明的另一方面中，該單克隆抗體或抗原結(jié)合部分包含(a) 含有下述抗體重鏈可變區(qū)氨基酸序列的重鏈，所述抗體選自 1. 7. 2 (SEQ ID NO: 2); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 6); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 10); 6.22. 2 (SEQ ID NO: 14) ; 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 18) ; 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 22); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 26); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 30); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 34) ; 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 38) ; 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 42);及 9. 8. 2 (SEQ ID NO: 46); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 52); 6. 34. 2-mod (SEQ ID NO: 56); 6. 67. 1-mod (SEQ ID NO: 60); 6. 77. l-mod (SEQ ID NO: 64); 及7. 26. 4-mod (SEQ ID NO: 42);(b) 含有下述抗體輕鏈可變區(qū)氨基酸序列的輕鏈，所述抗體選自 1. 7. 2 (SEQ ID NO: 4); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 8); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 12); 6.22. 2 (SEQ ID NO: 16) ; 6.34. 2 (SEQ ID NO: 20) ; 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 24); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 28); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 32); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 36) ; 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 40) ; 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 44);及 9. 8. 2 (SEQ ID NO: 48); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 54); 6. 34. 2-mod (SEQ ID NO: 58); 6. 67. l-mod (SEQ ID NO: 62) 、 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 66); 及7. 26. 4-raod(SEQ ID NO: 68);或(c) (a)的重鏈及(b)的輕鏈。本發(fā)明的另 一方面是該抗-MAdCAM抗體的重鏈和/或輕鏈或其可變 區(qū)或其它抗原結(jié)合部分或編碼前述任一分子的核酸分子及藥學(xué)上可接 受的載體的用途。本發(fā)明的這方面包括任一上述抗體的片段(包括但不 限于Fab片段、F(abOs片段、單鏈Fv (scFv)片段)的用途。優(yōu)選地，該抗-MAdCAM抗體是選自如WO 2005/067620中所述的1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的人抑制性抗-MAdCAM抗體。 優(yōu)選地，該抗-MAdCAM抗體包含如下輕鏈，該輕鏈含有選自如W0 2005/067620中所示SEQ ID NO: 4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36、 40、 44、 48、 54、 58、 62、 66或68的氨基酸序列(含或不含信號(hào)序列) 或所述氨基酸序列中任一個(gè)的可變區(qū)或一個(gè)或多個(gè)來自所述氨基酸序 列的CDR。該抗-MAdCAM抗體優(yōu)選包含如下重鏈，該重鏈含有選自如W0 2005/067620中所示SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42、 46、 52、 56、 60或64的氨基酸序列(含或不含信號(hào)序列)或可 變區(qū)氨基酸序列或一個(gè)或多個(gè)來自所述氨基酸序列的CDR氨基酸序列。 該抗-MAdCAM抗體優(yōu)選是含有自上述序列中任一個(gè)的CDR1起始端至 CDR3末端的氨基酸序列的人抗-MAdCAM抗體。用于本發(fā)明的抗-MAdCAM 抗體也可是含有上述序列中任一個(gè)的一個(gè)或多個(gè)FR區(qū)的抗-MAdCAM抗 體。用于本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體也可包括含有其中已進(jìn)行一個(gè)或多 個(gè)修飾的上述氨基酸序列中的一個(gè)的抗-MAdCAM抗體。例如，該抗體中 具有化學(xué)反應(yīng)性的半胱氨酸可由另一殘基(包括但不限于丙氨酸或絲 氨酸)取代。該取代可發(fā)生在非典型半胱氨酸處或典型半胱氨酸處。該 取代可在抗體可變結(jié)構(gòu)域的CDR或框架區(qū)或恒定結(jié)構(gòu)域內(nèi)進(jìn)行。也可以進(jìn)行氨基酸取代以消除抗體中潛在蛋白水解位點(diǎn)。這樣的 位點(diǎn)可存在于抗體可變結(jié)構(gòu)域的CDR或框架區(qū)或恒定結(jié)構(gòu)域內(nèi)。半胱氨 酸殘基的取代及蛋白水解位點(diǎn)的去除會(huì)降低抗體產(chǎn)品中的異質(zhì)性?？?形成潛在脫酰胺位點(diǎn)的天冬酰胺-甘氨酸對(duì)可通過改變兩種殘基中的 一種或兩種來消除。進(jìn)行氨基酸取代可用于本發(fā)明的抗體的可變區(qū)中 的潛在糖基化位點(diǎn)的加入或去除?？闪呀獾粲糜诒景l(fā)明的抗-MAdCAM抗體的重鏈的C-末端賴氨酸。抗 -MAdCAM抗體的重鏈及輕鏈可視情況包含信號(hào)序列。用于本發(fā)明的12個(gè)優(yōu)選抑制性人抗-MAdCAM單克隆抗體(1. 7. 2、1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6,67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7. 26. 4及9. 8. 2)詳述于W0 2005/067620中(其全文以引用方 式引入本專利說明書中)。
具體實(shí)施方式
拔-#^^^#拔沐#類身及亞類該抗體可以是IgG、 IgM、 IgE、 IgA或IgD分子。優(yōu)選地，該抗體屬 于IgG類且屬于IgG" lgG2、 lgG3或lgG4亞類。更優(yōu)選地，該抗-MAdCAM 抗體是lgG2或lgG4亞類。更優(yōu)選地，該抗-MAdCAM抗體與作為lgG2的抗 體l. 7. 2、 1. 8. 2、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod或與作為lgG4的6. 14. 2 、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1或9. 8. 2 (如W0 2005/067620 中所述)屬于相同類別及亞類?？?MAdCAM抗體所屬類別及亞類可通過任一業(yè)內(nèi)已知方法確定。一般而言，抗體的類別及亞類可使用對(duì)特定類別及亞類抗體具有特異性的抗體來確定。這樣的抗體可商購(gòu)獲得。ELISA、 Western印跡分析以及其它技術(shù)均可確定該類別及亞類。或者，該類別及亞類可如下確定測(cè)定抗體的所有或一部分重鏈和/或輕鏈恒定結(jié)構(gòu)域的序列；將其氨基酸序列與各種類別及亞類免疫球蛋白的已知氨基酸序列加以比較；并 將該抗體的類別及亞類確定為顯示最高序列一致性的類別。參神遂舉嫂及為、子逸脊^用于本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體既表現(xiàn)出物種選擇性也表現(xiàn)出分子 選擇性。該抗-MAdCAM抗體可結(jié)合人、獼猴或狗的MAdCAM。其它的用于 本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體不能結(jié)合諸如狨等新世界猴物種。人們可使用 業(yè)內(nèi)熟知方法來確定抗-MAdCAM抗體的物種選擇性。例如，人們可^f吏用 Western印跡分析、FACS、 ELISA或免疫組織化學(xué)來確定物種選擇性。 在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，人們可使用免疫組織化學(xué)來確定物種選擇性。用于本發(fā)明的可特異結(jié)合MAdCAM的抗-MAdCAM抗體對(duì)MAdCAM的選 擇性高于VCAM、纖連蛋白或任何其它抗原，其高出至少10倍、優(yōu)選高至少20、 30、 40、 50、 60、 70、 80或90倍、最優(yōu)選高至少100倍。優(yōu)選 地，該抗-MAdCAM抗體除對(duì)MAdCAM外不會(huì)對(duì)VCAM、纖連蛋白或任何其它 抗原展現(xiàn)任何明顯的結(jié)合。人們可使用業(yè)內(nèi)熟知方法根據(jù)本說明書的 教導(dǎo)確定抗-MAdCAM抗體對(duì)MAdCAM的選擇性。舉例而言，人們可使用 Western印跡分析、FACS、 ELISA或免疫組織化學(xué)來確定該選擇性。 戎-^^^#戎#潛合船^^#,^力用于本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體優(yōu)選可以以高親和力特異性地結(jié)合 MAdCAM。用于本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體以3xl(T8 M或更低的Kd特異性地 結(jié)合MAdCAM，如由表面等離子共振(諸如BIAcore)所測(cè)量的。優(yōu)選地， 抗體以lx10—8或更低或lxl(T9 M或更低的Kd特異性地結(jié)合MAdCAM。更優(yōu) 選，抗體以lx10—1Q M或更低的L特異性地結(jié)合MAdCAM。用于本發(fā)明的 抗體以2. 66x10—"M或更低、2. 35x10—11 M或更低或9x10—12 M或更低的Kd 特異性地結(jié)合MAdCAM。優(yōu)選地，該抗體以lxl(T11 M或更低的Ka特異性 地結(jié)合MAdCAM。優(yōu)選地，該抗體以與選自如WO 2005/067620中所述的 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的抗體大體相同的L特異性地 結(jié)合MAdCAM。與參照抗體具有"大體相同Kd，，的抗體具有是±100 pM、優(yōu)選是 ±50 pM、更優(yōu)選是±20 pM、進(jìn)一步優(yōu)選是土IO pM、 ±5 pM或± 2 pM 的L(在相同實(shí)驗(yàn)中與參照抗體的Kd相比)。優(yōu)選地，該抗體以與含有一 個(gè)或多個(gè)如下可變結(jié)構(gòu)域或一個(gè)或多個(gè)如下CDR的抗體大體相同的Kd 結(jié)合MAdCAM，該可變結(jié)構(gòu)域或CDR來自選自下列的抗體如WO 2005/067620中所述的L 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. 1-mod、 6. 77. 1-mod或7. 26. 4-mod。優(yōu)選地，該抗 體以與含有如下氨基酸序列的抗體或其可變結(jié)構(gòu)域大體相同的Kd結(jié)合MAdCAM，該氨基酸序列選自下列之一如WO 2005/067620中所述的SEQ IDNO:2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信號(hào)序列)。優(yōu)選地，該抗體以與含有一個(gè)或多個(gè)如 下CDR的抗體大體相同的Kd結(jié)合MAdCAM，該CDR來自含有選自下列的氨 基酸序列的抗體如W0 2005/067620中所述的SEQ ID N0: 2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68?？?MAdCAM抗體對(duì)MAdCAM的結(jié)合親和力可通過任一業(yè)內(nèi)已知方法 確定。在一個(gè)實(shí)施例中，該結(jié)合親和力可通過竟?fàn)幮訣LISA、 RIA或表 面等離子共振(諸如BIAcore)測(cè)量。在一個(gè)更為優(yōu)選的實(shí)施例中，該結(jié) 合親和力是通過表面等離子共振測(cè)量。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施例中， 該結(jié)合親和力及解離速率是使用BIAcore測(cè)量。確定結(jié)合親和力的實(shí)例 可參見W0 2005/067620。^-船c^^/戎琳^一表癡用于本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體在活體外或活體內(nèi)具有至少1天的半 衰期。優(yōu)選地，該抗體或其部分具有至少3天的半衰期。更優(yōu)選地，該 抗體或其部分具有4天或更長(zhǎng)的半衰期。進(jìn)一步優(yōu)選地，該抗體或其部 分具有8天或更長(zhǎng)的半衰期。用于本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合部分也可 經(jīng)衍生或修飾以使其具有更長(zhǎng)的半衰期，如下文所論述。在另一優(yōu)選 的實(shí)施例中，該抗體可含有點(diǎn)突變以增加血清半衰期，如WO 00/09560 中所述?？贵w半衰期可通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員所已知的任何方式測(cè)量。舉 例而言，抗體半衰期可通過Western印跡分析、ELISA或RIA在一段適宜 時(shí)間內(nèi)測(cè)量?？贵w半衰期可在任何諸如靈長(zhǎng)類等適宜動(dòng)物(例如獼猴、 猴子或人)體內(nèi)測(cè)量。^-船^^/戎謬識(shí)身^船^:^i/4在的婆定本發(fā)明還提供了與本專利中提供的人抗-MAdCAM抗體結(jié)合相同抗 原或表位的人抗-MAdCAM抗體的用途。此外，本發(fā)明提供了與人抗-MAdCAM抗體竟?fàn)幓蚪徊婢範(fàn)幍娜丝?MAdCAM抗體的用途。優(yōu)選地，該人 抗-MAdCAM抗體是WO 2005/067620中揭示的1. 7. 2、 1.8.2、 6.14.2、6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9.8.2、 6. 22.2-mod、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或 7.26. 4-mod。優(yōu)選地，該人抗-MAdCAM抗體含有來自選自下列的抗體的 一個(gè)或多個(gè)可變結(jié)構(gòu)域或一個(gè)或多個(gè)CDR: 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod 、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod。優(yōu)選地，該人抗-MAdCAM抗體含有選自W0 2005/067620 中SEQ ID N0:2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信號(hào)序列)的氨基酸序列中的一個(gè)或其可變 結(jié)構(gòu)域中的一個(gè)。優(yōu)選地，該人抗-MAdCAM抗體含有一個(gè)或多個(gè)來自選 自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 4、 6、 8、 10、 12、 14、 16、 18、 20、 22、 24、 26、 28、 30、 32、 34、 36、 38、 40、 42、 44、 46、 48、 52、 54、 56、 58、 62、 64、 66或68的氨基酸序列中的一個(gè)的抗體的CDR。人們可使用各種業(yè)內(nèi)已知方法來確定抗-MAdCAM抗體是否與另一 抗-MAdCAM抗體結(jié)合相同抗原。舉例而言，人們可利用已知抗-MAdCAM 抗體捕獲抗原，將該抗-MAdCAM抗體上洗脫下抗原，并且隨后測(cè)定測(cè) 試抗體是否會(huì)結(jié)合經(jīng)洗脫的抗原。人們可如下確定抗體是否與另一抗 -MAdCAM抗體竟?fàn)幨乖摽?MAdCAM抗體在飽和條件下結(jié)合至MAdCAM上， 且隨后測(cè)測(cè)量試抗體結(jié)合MAdCAM的能力。若測(cè)試抗體能夠與抗-MAdCAM 抗體同時(shí)結(jié)合MAdCAM，則該測(cè)試抗體可結(jié)合不同于抗-MAdCAM抗體的 表位。然而，若該抗體不能同時(shí)結(jié)合MAdCAM，則該測(cè)試抗體可與該人 抗-MAdCAM抗體進(jìn)行竟?fàn)?。這個(gè)實(shí)驗(yàn)可使用ELISA或表面等離子共振或 優(yōu)選為BIAcore實(shí)施。為測(cè)試抗-MAdCAM抗體是否與另一抗-MAdCAM抗體 交叉竟?fàn)帲藗兛呻p向使用上述竟?fàn)幏椒?，即確定已知抗體是否阻斷 測(cè)試抗體，并反之確定測(cè)試抗體是否阻斷已知抗體。控^及重鏈《^炎y^本發(fā)明還提供了包含由人K基因編碼的輕鏈可變區(qū)的抗-MAdCAM 抗體的用途。優(yōu)選地，該輕鏈可變區(qū)是由人VK A2、 A3、 A26、 B3、 012或018基因家族編碼。優(yōu)選地，該輕鏈含有相對(duì)于種是人vk A2、 A3、 A26、 B3、 012或018序列的氨基酸取代不超過11個(gè)、不超過6個(gè)或不超 過3個(gè)。優(yōu)選地，所述氨基酸取代是保守性取代。優(yōu)選地，抗-MAdCAM抗體的VL含有與WO 2005/067620中所述的抗體 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的VL的任一個(gè)或多個(gè)相同的相 較于種系(germline)氨基酸序列的突變。本發(fā)明包括與例示抗體采 用相同的人V k及人j k基因的抗-MAdCAM抗體的用途。該抗體可與一個(gè) 或多個(gè)所例示抗體含有一個(gè)或多個(gè)相同的相較于種系的突變，或該抗 體在一個(gè)或多個(gè)與一個(gè)或多個(gè)所列示抗體相同的位置可包含不同的取 代。舉例而言，該抗-MAdCAM抗體的VL可包含一個(gè)或多個(gè)與抗體7. 16. 6 中存在的這些相同的氨基酸取代及另一與抗體7. 26. 4相同的氨基酸取 代。以此方式，人們可混合并匹配抗體結(jié)合的不同特征以改變(例如) 抗體對(duì)MAdCAM的親和力或其自抗原的解離速率。可在與存在于抗體 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. 1-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的任一個(gè)或多個(gè)VL中的相同位 置處進(jìn)行突變，但保守氨基酸取代卻不是用相同氨基酸進(jìn)行的。舉例 而言，若抗體l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod之一中相較于種系的氨基酸取 代是谷氨酸，則人們可保守性取代天冬氨酸。同樣地，若氨基酸取代 是絲氨酸，則人們可保守性取代蘇氨酸?？?MAdCAM抗體的輕鏈可以含有與l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6.22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的 VL氨基酸序列相同的氨基酸序列。該輕鏈優(yōu)選地含有與l. 7. 2、 1.8.2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod 或7. 26. 4-mod的輕鏈CDR區(qū)相同的氨基酸序列。該輕鏈可含有具有至少 一個(gè)l. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的輕鏈CDR區(qū)的氨基酸序列。 該輕鏈可以含有具有來自使用相同V k及J k基因的不同輕鏈的CDR的 氨基酸序列。優(yōu)選地，來自不同輕鏈的CDR是得自1. 7. 2、1. 8. 2、6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2 、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. 1—mod 、 6. 77. l-mod或 7.26. 4-mod。優(yōu)選地，該輕鏈含有選自W0 2005/067620的SEQ ID N0: 4、 8、 12、 16、 20、 24、 28、 32、 36、 40、 44、 48、 54、 58、 62、 64、 66或68(含或不含信號(hào)序列)的氨基酸序列。優(yōu)選地，該輕鏈含有由選 自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 3、 7、 11、 15、 19、 23、 27、 31、 35、 39、 43、 47、 53、 57、 61、 65或67 (含或不含信號(hào)序列)的核苷酸序列 或編碼其中具有1至11個(gè)氨基酸的插入、缺失或取代的氨基酸序列的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。優(yōu)選地，該氨基酸取代是保守氨基酸取 代。該抗體或其部分可含有A輕鏈。本發(fā)明還提供包含人VH基因序列或源自人VH基因的序列的抗 -MAdCAM抗體或其部分的用途。該重鏈氨基酸序列可源自人VH 1-18、 3-15、 3-21、 3-23、 3-30、 3-33或4-4基因家族。優(yōu)選地，相對(duì)于種 是人VH 1-18、 3-15、 3-21、 3-23、 3-30、 3-33或4-4基因序列，該重 鏈含有不超過15個(gè)、不超過6個(gè)或不超過3個(gè)氨基酸改變。公開于WO 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42及46提供了用于本發(fā)明的12個(gè)抗-MAdCAM抗體的全長(zhǎng)重 鏈的氨基酸序列。本說明書所涉及的所有SEQ IDNo是指實(shí)際公開于W0 2005/067620中的序列。優(yōu)選地，該抗-MAdCAM抗體的VH與抗體l. 7. 2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6. 34.2、 6.73.2、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6.22. 2—mod、 6. 34. 2—mod、 6. 67. l-mod、 6. 77， l一mod或7， 26. 4-mod的VH中任一個(gè)或多個(gè)含有相同的相較于種系氨基酸序列的突變。與上文 所述相類似，該抗體與一個(gè)或多個(gè)所例示抗體含有一個(gè)或多個(gè)相同的 相較于種系的突變。該抗體還可以在與一個(gè)或多個(gè)所例示抗體相同的 一個(gè)或多個(gè)位置含有不同取代。舉例而言，該抗-MAdCAM抗體的VH可以 含有一個(gè)或多個(gè)與抗體7. 16. 6中所存在的氨基酸相同的氨基酸取代， 及與抗體7. 26. 4相同的另外的氨基酸取代。依此方式，人們可混合及 匹配抗體結(jié)合的不同特征以改變(例如)抗體對(duì)MAdCAM的親和力或其自 抗原的解離速率。相較于種系的氨基酸取代可在與存在于參照抗體 1.7.2、 1.8.2、 6.14.2、 6.22.2、 6.34.2、 6.67.1、 6.77.1、 7.16.6、 7.20.5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod中的任一個(gè)或多個(gè)VH中的相較于種系的取代 相同的位置進(jìn)行，但該位置可用不同的殘基取代，這就是相較于參照 抗體的保守取代。優(yōu)選地，用于本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體的重鏈含有與l. 7. 2、1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7.26.4、 9.8.2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod 或7. 26. 4-mod的VH的氨基酸序列相同的氨基酸序列。更優(yōu)選地，該重 鏈含有與1.7. 2、 1.8.2、 6.14.2、 6. 22， 2、 6.34.2、 6.67.1、 6.73.2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的重鏈CDR區(qū)相同的氨基酸序 列。優(yōu)選地，該重鏈含有來自1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 7 3. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 4、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的重鏈的至少一 個(gè)CDR區(qū)的氨基酸序列，或該重鏈可含有具有來自不同重鏈的CDR的氨 基酸序列。優(yōu)選地，該來自不同重鏈的CDR是得自1. 7. 2、1. 8. 2、6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2 、 6. 22. 2-mod 、 6. 34. 2-mod 、 6. 67. l-raod 、 6. 77. l-mod或 7.26.4-mod。優(yōu)選地，該重鏈含有選自W0 2005/067620的SEQ ID NO: 2、 6、 10、 14、 18、 22、 26、 30、 34、 38、 42、 46、 52、 56、 60或64的氨基酸序列(含或不含信號(hào)序列)。該重鏈還可以含有由選自wo2005/067620的SEQ ID NO: 1、 5、 9、 13、 17、 21、 25、 29、 33、 37、 41、 45、 51、 55、 59或63的核苷酸序列或編碼其中具有1至15個(gè)氨基酸 的插入、缺失或取代的氨基酸序列的核苷酸序列編碼的氨基酸序列。 該取代優(yōu)選是保守氨基酸取代。用于制備抗體的核酸、載體、宿主細(xì)胞及重組方法 用于制備此等抗體的核酸、載體、宿主細(xì)胞及重組方法闡述于WO 2005/067620中。經(jīng)4汙生及標(biāo)記的抗體可將本發(fā)明的抗體或抗體的部分衍生或連接至另一分子(例如，另 一個(gè)肽或蛋白質(zhì))。 一般而言，該抗體或其各部分可經(jīng)衍生使得MAdCAM 結(jié)合不會(huì)受到衍生或標(biāo)記的不良影響。因此，用于本發(fā)明的抗體及抗 體部分意欲包括本說明書所述的人抗-MAdCAM抗體的完整形式和經(jīng)修 飾形式這二者。舉例而言，用于本發(fā)明的抗體或抗體部分在功能上可 連接(通過化學(xué)偶聯(lián)、基因融合、非共價(jià)鍵締合或其它方式)至一個(gè)或 多個(gè)其它分子實(shí)體，例如另一抗體(例如，雙特異性抗體或雙抗體)、 檢測(cè)劑、細(xì)胞毒性劑、醫(yī)藥劑和/或可介導(dǎo)該抗體或抗體一部分與另一 分子締合的蛋白質(zhì)或肽(例如鏈霉抗生物素蛋白核心區(qū)或聚組氨酸標(biāo) 簽)?？赏ㄟ^交聯(lián)兩個(gè)或兩個(gè)以上的抗體(同類型或不同類型，例如，以 生成雙特異性抗體)制備一種衍生的抗體。適宜交聯(lián)劑包括這些具有通 過適宜的間隔子分隔的兩個(gè)不同的反應(yīng)性基團(tuán)的異雙功能試劑(例如， 間-馬來酰亞胺苯甲?；?N-羥基琥珀酰亞胺酯)或同雙功能試劑(例 如，辛二酸二琥珀酰亞胺酯)。這些交聯(lián)劑可自Pierce Chemical乂/^司， Rockford， III購(gòu)得。另 一種類型的衍生抗體是標(biāo)記的抗體。用于衍生本發(fā)明的抗體或 抗體部分的有用的檢測(cè)劑包括熒光化合物，包括熒光素、異硫氰酸熒 光素、羅丹明、5-二甲基胺-l-萘磺酰氯、藻紅素、鑭系元素磷光體等。 抗體也可以用可用于檢測(cè)的酶標(biāo)記，例如辣根過氧化物酶、p-半乳糖苷酶、熒光素酶、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶及諸如此類。當(dāng)用可檢 測(cè)的酶標(biāo)記抗體時(shí)，其是通過加入可供該酶使用以產(chǎn)生可檢測(cè)反應(yīng)產(chǎn) 物的額外試劑檢測(cè)。舉例而言，當(dāng)存在試劑辣根過氧物酶時(shí)，加入過 氧化氫及二氛基聯(lián)苯胺可以生成能夠檢測(cè)的有色反應(yīng)產(chǎn)物。還可以用 生物素標(biāo)記抗體并通過間接測(cè)量抗生物素蛋白或鏈霉抗生物素蛋白結(jié) 合來加以檢測(cè)?？贵w可用諸如釓等/P茲性劑標(biāo)記?？贵w還可以用由二級(jí) 報(bào)告子(例如，亮氨酸拉鏈對(duì)序列、二級(jí)抗體結(jié)合位點(diǎn)、金屬結(jié)合結(jié) 構(gòu)域、表位標(biāo)簽)識(shí)別的預(yù)先確定的多肽表位標(biāo)記。在某些實(shí)施例中， 標(biāo)記物是通過各種長(zhǎng)度的間隔子臂連接以降低潛在的空間位阻?？?MAdCAM抗體也可以用經(jīng)^t射性標(biāo)記的氨基酸標(biāo)記。;^射性標(biāo)記既可用于i貪斷目的也可以用于治療目的。舉例而言，；改射性標(biāo)記可用于通過x-射線或其它診斷技術(shù)檢測(cè)表達(dá)MAdCAM的組織。此外，放射性標(biāo)記可作為毒素用于染病組織或表達(dá)MAdCAM的腫瘤的治療。多肽標(biāo)記物的實(shí)例包括但不限于以下放射性同位素或放射性核素--3H、 14C、 15N、 "s、 ，、 "TC、 mIn、 125工、131I?？?MAdCAM抗體還可以用化學(xué)基團(tuán)(諸如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙 基或碳水化合物基團(tuán))衍生。這些基團(tuán)可用于改善抗體的生物學(xué)特性， 例如，增加血清半衰期或增加組織結(jié)合。這種方法也可以應(yīng)用于任何 抗原-結(jié)合片段或抗-MAdCAM抗體的抗體版本。藥物組合物及套盒在另一方面中，本發(fā)明提供了含有抑制性人抗-MAdCAM抗體的組 合物和用這樣的組合物治療受試者的方法。在一些實(shí)施方案中，治療 的受試者是人。在其它實(shí)施方案中，該受試者是畜類受試者。在一些 實(shí)施例中，該畜類受試者是狗或非人靈長(zhǎng)類。治療可以涉及單獨(dú)或與藥學(xué)上可接受的載體組合給藥一種或多種 抑制性抗-MAdCAM單克隆抗體或其抗原-結(jié)合片段。抑制性抗-MAdCAM 抗體及包含它的組合物可與一種或多種其它治療、診斷或預(yù)防性作用 劑聯(lián)合給藥。額外的治療劑包括抗炎或免疫調(diào)節(jié)劑。這些作用劑包括 但不限于外用及口服皮質(zhì)類固醇類，諸如強(qiáng)的松龍(prednisolone)、甲基強(qiáng)的+>龍、NCX-1015或布地奈德(budesonide);氨基水楊酸類， 諸如美色拉"秦(mesalazine)、 奧色拉漆(olsalazine)、 巴柳氮 (balsalazide)或NCX-456 ; 免疫調(diào)節(jié)劑類，諸如硫唑嘌呤 (azathioprine) 、 6-巰基嘌呤(6-mercaptopurine)、 氨曱蝶呤 (methotrexate)、 環(huán)孢菌素 (cyclosporin) 、 FK506 、 IL-10(Ilodecakin) 、 IL-ll (Oprelevkin) 、 IL-12、 MIF/CD74拮抗劑、 CD40拮抗劑，諸如TNX-100/5-D12、 OX40L拮抗劑、GM-CSF、吡美莫司 (pimecrolimus)或雷帕審素(rapamycin);抗一TNFot藥劑類，i者^口英 夫利昔單抗(infliximab)、阿達(dá)木單抗(adal imumab) 、 CDP-870、奧 那西普(onercept)、依那西普(etanercept);消炎劑類，諸如PDE-4 抑制劑(羅氟司特(roflumilast)等)、TACE抑制劑(DPC-333、 RDP-58 等)及ICE抑制劑(VX-740等)以及IL-2受體拮抗劑，諸如達(dá)克力莫 (dacl izumab); 選擇粘附分子拮抗劑類，諸如那他珠單抗 (natalizumab) 、 MLN-02或阿里卡福(alicaforsen);鎮(zhèn)痛藥類，包括 但不限于C0X-2抑制劑，諸如羅非考昔(rofecoxib)、伐地考昔 (valdecoxib)、塞來考昔(celecoxib) 、 P/Q-型電壓敏感性信道(oc 25) 調(diào)節(jié)劑，諸如力口巴噴丁 (gabapentin)及普力口巴林(pregabalin) 、 NK-1 受體拮抗劑、大麻素受體調(diào)節(jié)劑及5類鴉片受體激動(dòng)劑；以及抗贅瘤藥、 抗腫瘤藥、抗血管生成藥或化療劑?？蓪⑦@類額外的作用劑包括在相 同的組合物中或分開給藥。本說明書所用"藥學(xué)上可接受的載體"意指任何及所有生理上兼 容的溶劑、分散介質(zhì)、涂布劑、抗細(xì)菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收 增強(qiáng)劑或吸收延遲劑諸如此類。藥學(xué)上可接受的栽體的實(shí)例是水、鹽 水、磷酸緩沖鹽溶液、含有氯化鈉的乙酸緩沖液、葡萄糖、甘油、聚 乙二醇、乙醇及諸如此類及其組合。在許多情況下，優(yōu)選將等滲劑， 例如，糖、多元醇(例如，甘露醇、山梨醇)或氯化鈉包括在組合物中。 藥學(xué)上可接受的物質(zhì)的其它實(shí)例是表面活性劑、潤(rùn)濕劑或少量輔助物 質(zhì)，諸如潤(rùn)濕或乳化劑、保存劑或緩沖劑，其可增強(qiáng)抗體保存期或效 力。用于本發(fā)明的組合物可呈多種形式，舉例而言，如液體、半固體 及固體劑型，諸如液體溶液(例如，可注射及可輸注溶液)、分散液或 懸浮液、錠劑、丸劑、凍干餅、干粉、脂質(zhì)體及栓劑。優(yōu)選形式視期 望給藥模式及治療應(yīng)用而定。典型優(yōu)選組合物是呈可注射或可輸注溶液形式，例如類似于用于人被動(dòng)免疫的組合物。給藥的優(yōu)選模式是非 經(jīng)腸(例如，靜脈、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)、皮內(nèi))給藥。在優(yōu)選的實(shí)施 方案中，該抗體是通過靜脈內(nèi)輸注或注射給藥。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方 案中，該抗體通過肌內(nèi)、皮內(nèi)或皮下注射給藥。需要時(shí)，該抗體可通 過泵、灌腸劑、栓劑或留置儲(chǔ)液器或諸如此類給藥。通常，治療組合物必須無菌且在生產(chǎn)及儲(chǔ)存條件下穩(wěn)定?？蓪⒃?組合物調(diào)配成溶液、凍干餅、干粉、微乳劑、分散液、脂質(zhì)體或其它適合高藥物濃度的所要求的結(jié)構(gòu)。無菌可注射溶液可通過下述來制備 將所需量的抗-MAdCAM抗體摻入含有上述一種成份或多種成份的組合 (視需要而定)的適宜溶劑中，隨后進(jìn)行無菌處理。如果為用于制備無 菌注射液的無菌粉劑，則優(yōu)選制備方法是真空干燥和冷凍干燥，如此 可自其先前經(jīng)無菌處理的溶液制成活性成份外加任何期望的額外成份 的粉劑。 一般而言，可通過將活性化合物摻入含有基本分散介質(zhì)及所 需的選自上文所列舉成份的其它成份的無菌媒劑中來制備分散液。舉 例而言，可通過表面活性劑及所需粒度(在分散液的情形中通過表面活 性劑、磷脂及聚合物)保持溶液的所需特性。通過在組合物中摻入可延 遲吸收的藥劑(例如單硬脂酸鹽、聚合材料、油及明膠)可使可注射組 合物的吸收延長(zhǎng)。本發(fā)明的抗體可通過多種業(yè)內(nèi)已知方法給藥，但對(duì)于許多治療應(yīng) 用而言，優(yōu)選給藥途徑/方式是皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)或靜脈內(nèi)輸注。本領(lǐng) 域的技術(shù)人員應(yīng)了解，給藥途徑和/或方式會(huì)因所期望的結(jié)果而變化。在某些實(shí)施例中，可以用可防止抗體快速釋放的載體制備該抗體， 例如受控釋放調(diào)制物，包括植入體、經(jīng)皮貼劑及微嚢化遞送系統(tǒng)?？?使用生物可降解的生物兼容性聚合物，例如乙烯基乙酸乙烯酯、聚酸 酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酸酯及聚乳酸。用于制備這種調(diào)制物的多種方法已獲得專利權(quán)或通常已為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。參見，舉例而言,5^"a/72ed a/ f/ Co/^ro/Zed Ae/ease "eh>ery 5y"e邁s (J.R. Robinson編輯，Marcel Dekker公司，New York (1978))。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體可經(jīng)口服給藥，舉例而 言，通過惰性稀釋劑或可吸收食用的載體給藥。還可將該化合物(及其它成份，需要時(shí))封裝入硬質(zhì)或軟質(zhì)殼的明膠膠嚢中、壓縮成錠片或直 接加入受試者飲食中。對(duì)于口服治療給藥而言，可將該抗-MAdCAM抗體 與賦形劑摻合在一起并以可吸收的錠劑、口含片、片劑、膠嚢、酏劑、 懸浮劑、糖漿、糯米紙嚢劑及諸如此類的形式使用。為通過非經(jīng)腸之 外的途徑給藥本發(fā)明化合物，可能有必要用一材料涂覆該化合物或與 該化合物共同給藥以防止其失活。本發(fā)明組合物可以包含"治療有效量"或"預(yù)防有效量的本發(fā)明抗體或抗原結(jié)合部分。"治療有效量"是指在所需時(shí)期內(nèi)以所需劑量有效達(dá)成期望治療效果的量。抗體或抗體一部分的治療有效量會(huì)隨 以下因素變化諸如疾病狀態(tài)、個(gè)體年齡、性別及體重以及抗體或抗 體部分在該個(gè)體體內(nèi)引發(fā)期望的反應(yīng)的能力。治療有效量還是其中抗 體或抗體部分的治療有益作用大于其任何毒性或有害作用的量。"預(yù) 防有效量"是指在所需時(shí)期內(nèi)以所需劑量有效達(dá)成期望預(yù)防效果的量。 通常，由于預(yù)防劑量是在患病之前或患病早期用于受試者中，故預(yù)防 有效量可少于治療有效量?？蓪?duì)劑量方案加以調(diào)整以提供最佳期望反應(yīng)(例如，治療或預(yù)防反 應(yīng))。舉例而言，可給藥單次濃注劑、可經(jīng)一段時(shí)間給藥數(shù)個(gè)細(xì)分劑量或可根據(jù)治療狀況緊急程度所指示按比例降低或增加劑量。以劑量單元形式來調(diào)配非經(jīng)腸組合物特別有利于方便給藥及達(dá)成劑量一致性。本說明書所用劑量單元形式是指適于作為單位劑量供擬受治療哺乳動(dòng) 物受試者使用的物理分立單元；每一單元包括經(jīng)計(jì)算可產(chǎn)生期望治療 效果的預(yù)定量的活性化合物及所需醫(yī)藥載體的組合。本發(fā)明的劑量單元形式的規(guī)格取決于且直接依賴于下列因素(a)抗-MAdCAM抗體或其 部分的獨(dú)特性質(zhì)及想要達(dá)到的特定治療或預(yù)防效果，及(b)業(yè)內(nèi)調(diào)配該抗體以治療個(gè)體敏感性的固有居限性。本發(fā)明的抗體或抗體一部分的治療或預(yù)防有效量的例示性非限制范圍是O. 025至50毫克/公斤、更佳是O. l至50毫克/公斤、更佳是O. 1 至25、 0. I至IO或O. l至3毫克/公斤。在一些實(shí)施方案中，調(diào)制物含有5 毫克/毫升抗體，存于含有20 mM乙酸鈉，pH 5.5、 140 mM NaCl及O. 2 毫克/毫升聚山梨醇酯80的緩沖液中。在其它的實(shí)施方案中，對(duì)于(例 如)靜脈內(nèi)用途，調(diào)制物含有10毫克/毫升抗體，存在于2. 73毫克/毫升 三水乙酸鈉、45毫克/毫升甘露醇、0. 02毫克/毫升二水EDTA二鈉、0.2 毫克/毫升聚山梨醇酯80(用冰乙酸調(diào)節(jié)至pH 5. 5)中。在其它實(shí)施方案 中，對(duì)于(例如)皮下或皮內(nèi)用途，調(diào)制物含有50毫克/毫升抗體、2.73 毫克/毫升三水乙酸鈉、45毫克/毫升甘露醇、0. 02毫克/毫升二水EDTA 二鈉、0. 4毫克/毫升聚山梨醇酯80(用冰乙酸調(diào)節(jié)至pH 5.5)。應(yīng)注意 的是，劑量值會(huì)隨待緩解病癥的類型和嚴(yán)重性而變化。應(yīng)進(jìn)一步了解 對(duì)于任一特定受試者而言，應(yīng)根據(jù)個(gè)體需要及給藥組合物或監(jiān)督組合 物給藥的個(gè)人的專業(yè)判斷隨時(shí)調(diào)整具體劑量方案，且本說明書所述的 劑量范圍僅為舉例說明而非意欲限制所主張組合物的范圍或應(yīng)用。在一個(gè)實(shí)施方案中，該抗體以呈無菌水溶液形式的調(diào)制物給藥， 該無菌水溶液的pH介于約5. 0至約6. 5之間且含有約l毫克/毫升至約 200毫克/毫升的抗體、約1毫摩爾至約100毫摩爾組氨酸緩沖液、約0. 01 毫克/毫升至約10毫克/毫升聚山梨醇酯80、約100毫摩爾至約400毫摩 爾海藻糖及約O. Ol毫摩爾至約l. O亳摩爾二水EDTA二鈉。本發(fā)明的另 一方面提供含有本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體或抗體一部 分或含有該抗體的組合物的套盒。除抗體或組合物外套盒可包含診斷 或治療劑。套盒還可以包含用于診斷或治療方法的使用說明。在優(yōu)選 實(shí)施方案中，該套盒包含抗體或含有該抗體的組合物及可在下述方法 中使用的診斷劑。在另外一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該套盒包含該抗體 或含有該抗體的組合物及一種或多種可在下述方法中使用的治療劑。用于本發(fā)明的抗體可經(jīng)由基因治療給藥給有此需要的患者。該療法可在活體內(nèi)或來自體內(nèi)方式進(jìn)行。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，將編碼 重鏈及輕鏈二者的核酸分子給藥給患者。在一更優(yōu)選的實(shí)施方案中，給藥該核酸分子以使其穩(wěn)定整合至B細(xì)胞的染色體上，因?yàn)樵摷?xì)胞可專 門產(chǎn)生抗體。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，離體轉(zhuǎn)染或感染前體B細(xì)胞并重 新植入有此需要的患者體內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，使用已知可感染 感興趣細(xì)胞類型的重組病毒體內(nèi)感染前體B細(xì)胞或其它細(xì)胞。用于基因 治療的典型載體包括脂質(zhì)體、質(zhì)粒及病毒載體。例示性病毒載體是逆 轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒及腺相關(guān)病毒。體內(nèi)或離體感染后，可通過自經(jīng)治達(dá)水平。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，基因療法包括給藥編碼抗-MAdCAM抗體重 鏈或其抗原結(jié)合部分的經(jīng)分離的核酸分子及表達(dá)該核酸分子的步驟。 在另一個(gè)實(shí)施方案中，該基因療法包括給藥編碼抗-MAdCAM抗體輕鏈或其一抗原結(jié)合部分的分離的核酸分子及表達(dá)該核酸分子的步驟。在一 個(gè)更佳方法中，該基因療法包括給藥編碼本發(fā)明的抗-MAdCAM抗體重鏈 或其抗原結(jié)合部分的分離的核酸分子及編碼本發(fā)明抗-MAdCAM抗體輕 鏈或其抗原結(jié)合部分的分離的核酸分子并表達(dá)該核酸分子的步驟。該 基因療法還可以包括給藥另 一抗炎劑或免疫調(diào)節(jié)劑的步驟。 抗-MAdCAM抗體對(duì)oc 4 P 7/MAdCAM依賴性粘附的抑制 本發(fā)明還提供了結(jié)合MAdCAM并抑制具有a4 p 7-整聯(lián)蛋白的細(xì)胞對(duì) MAdCAM或其它同源配體(諸如L-選擇素)對(duì)MAdCAM的結(jié)合及粘附的抗 -MAdCAM抗體的用途。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該MAdCAM是人MAdCAM 且呈可溶形式或在細(xì)胞表面上表達(dá)。在另一優(yōu)選實(shí)施例中，該抗-MAdCAM抗體是人抗體。在另一實(shí)施方案中，該抗體或其部分抑制0C4 |3 7與MAdCAM之間的結(jié)合，其中ICs。值不超過50nM。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施 方案中，該IC5。值不超過5 nM。在一更優(yōu)選的實(shí)施例中，該ICs。值小于 5 nM。在一更優(yōu)選的實(shí)施例中，ICs。值小于0. 05微克/毫升、0. 04微克 /毫升或0. 03微克/毫升。在另一優(yōu)選實(shí)施例中，該IC5。值小于0. 5微克/ 毫升、0. 4微克/毫升或0. 3微克/毫升。該ICs。值可通過業(yè)內(nèi)已知的任一方法測(cè)量。通常，I"值可通過ELISA或粘附分析測(cè)量。在一個(gè)優(yōu)選的 實(shí)施方案中，該ICs。值是通過粘附分析使用天然表達(dá)MAdCAM的細(xì)胞或組 織或已經(jīng)構(gòu)建可表達(dá)MAdCAM的細(xì)胞或組織測(cè)量。除非本說明書另外定義，否則用于本發(fā)明的科學(xué)及技術(shù)術(shù)語(yǔ)具有 為業(yè)內(nèi)普通技術(shù)人員通常所了解的含義。并且，除非上下文另有要求， 否則單個(gè)術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括復(fù)數(shù)形式且復(fù)數(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括單數(shù)形式。 一般而言， 用于本說明書的所述細(xì)胞及組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物 學(xué)、遺傳學(xué)、蛋白質(zhì)及核酸化學(xué)以及雜交的術(shù)語(yǔ)及技術(shù)是為業(yè)內(nèi)熟知 且常用的。除非另有說明，否則本發(fā)明的方法及技術(shù)一般可根據(jù)業(yè)內(nèi) 熟知的傳統(tǒng)方法和如本發(fā)明說明書各處引用及論述的各種通用性及更 具體的參考文獻(xiàn)中所述實(shí)施。參見例如，Sambrook等人，#o/eci//fl/" C7o/72./7^v 爿 Za6orator/ vl/a/7i/a/, 第二版,Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N-Y, (1989)及Ausubel等 人，Ci/_rre/7f /VWoco/s // #o_/ecw/ar Si.o/o^o Greene Publishing Associates (1992)， 及Harlow與Lane， J/z〃6ocT/w 爿"6or"or/ 艙/7i/a/， Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990)，這些文獻(xiàn)以引用方式引入本說明書中。酶促反應(yīng)及純化 技術(shù)依照制備商的說明書實(shí)施，或如業(yè)內(nèi)習(xí)用方法實(shí)施，或如本說明 書所述實(shí)施?；瘜W(xué)品合成、化學(xué)品分析、藥物制備、調(diào)配及遞送、及 患者的治療采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。術(shù)語(yǔ)"多肽"涵蓋天然或人工合成蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)片段及蛋白質(zhì) 序列的多肽類似物。多肽可以是單體或聚合物。術(shù)語(yǔ)"經(jīng)分離蛋白質(zhì)"或"經(jīng)分離多肽，，根據(jù)其起源或衍生自如 下蛋白質(zhì)或多肽(l)不與原本在其天然狀態(tài)下伴隨其的天然結(jié)合組份 相結(jié)合，(2)不含來自相同物種的其它蛋白質(zhì)；(3)可由來自不同物種 的細(xì)胞表達(dá)；或(4)在天然狀態(tài)下不存在。因此，經(jīng)化學(xué)合成或在不同 于多肽天然起源的細(xì)胞的細(xì)胞系統(tǒng)中合成的多肽是與其天然結(jié)合組份 "分離"的。也可通過分離利用業(yè)內(nèi)熟知的蛋白質(zhì)純化技術(shù)使蛋白質(zhì) 大體不含天然結(jié)合組份。當(dāng)一樣品的至少約60至75%展現(xiàn)單一種類多肽時(shí)，蛋白質(zhì)或多肽是 "實(shí)質(zhì)純凈"、"實(shí)質(zhì)均一"或"經(jīng)實(shí)質(zhì)純化"的。該多肽或蛋白質(zhì) 可以是單體或多聚體。實(shí)質(zhì)純凈多肽或蛋白質(zhì)通常會(huì)占蛋白質(zhì)樣品的 約50%、 60%、 70%、 80%或90% W/W、更通常約95%，且優(yōu)選地會(huì)是99% 以上純度。蛋白質(zhì)純度或均一性可由業(yè)內(nèi)熟知的多種方式展現(xiàn)，例如 進(jìn)行蛋白質(zhì)樣品的聚丙烯酰胺凝膠電泳，隨后在用業(yè)內(nèi)熟知染劑染色 凝膠時(shí)目測(cè)單個(gè)多肽條帶。對(duì)于某些目的而言，可通過HPLC或業(yè)內(nèi)熟 知的其它方法進(jìn)行純化來提供更高的分辯力。如本說明書所用術(shù)語(yǔ)"多肽片段"是指具有氨基末端缺失和/或羧 基末端缺失的多肽，但其中剩余的氨基酸序列是與天然存在序列中相 應(yīng)位置相同。在一些實(shí)施例中，片段是至少5、 6、 8或10個(gè)氨基酸長(zhǎng)。 在其它實(shí)施例中，該片段至少14個(gè)氨基酸長(zhǎng)，更佳至少20個(gè)氨基酸長(zhǎng)， 通常至少50個(gè)氨基酸長(zhǎng)，進(jìn)一步優(yōu)選至少70、 80、 90、 100、 150或200 個(gè)氨基酸長(zhǎng)。本說明書所用術(shù)語(yǔ)"多肽類似物"是指包含與一氨基酸序列的一 部分具有實(shí)質(zhì)一致性且具有至少一種以下性質(zhì)的含有至少25個(gè)氨基酸 的片段的多肽(l)可在適合結(jié)合的條件下特異結(jié)合MAdCAM; (2)抑制 a 4 P 7整聯(lián)蛋白和/或L-選擇素結(jié)合MAdCAM的能力；或(3)降低活體外或 活體內(nèi)MAdCAM的細(xì)胞表面表達(dá)的能力。通常，相對(duì)于天然存在序列多 肽類似物含有一保守氨基酸取代(或插入或缺失)。類似物通常至少20 個(gè)氨基酸長(zhǎng)、優(yōu)選至少50、 60、 70、 80、 90、 100、 150或200個(gè)氨基酸 長(zhǎng)或更長(zhǎng)，且常與全長(zhǎng)天然存在的多肽一樣長(zhǎng)。"免疫球蛋白"是四聚體分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每 一個(gè)四聚體由兩對(duì)相同多肽鏈構(gòu)成，每一對(duì)具有一個(gè)"輕"鏈(約25kDa)及一個(gè)"重"鏈(約50至70 kDa)。每條鏈的氨基末端部分包括一 主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別的具有約100至110或更多氨基酸的可變區(qū)。每條鏈 的羧基末端部分界定主要負(fù)責(zé)效應(yīng)功能的恒定區(qū)。人輕鏈分類為K輕 鏈及X輕鏈。重鏈可分類為ia、 5、 y、 oc或e，且將抗體的同種型 分別定義為IgM、 IgD、 IgA及IgE。在輕鏈及重鏈中，可變區(qū)及恒定區(qū)是經(jīng)由含有由約12或更多個(gè)氨基酸的"J"區(qū)連接，其中該重鏈還包括 含有由約10或更多個(gè)氨基酸的"D"區(qū)。尸w^/錢e/z"7 /歸加/柳Ch. 7 (Paul, W.編輯，第二版，Raven Press, N. Y. (1989))(出于所有目的，其全部?jī)?nèi)容以引用方式引入本說明書中)。每 個(gè)輕鏈/重鏈對(duì)的可變區(qū)形成抗體結(jié)合位點(diǎn)以使免疫球蛋白具有兩個(gè) 結(jié)合位點(diǎn)。免疫球蛋白鏈展示具有相同的由三個(gè)超變區(qū)(亦稱為互補(bǔ)決定區(qū) 或CDR)連接的相對(duì)保守的框架區(qū)(FR)的通用結(jié)構(gòu)。來自每一對(duì)的兩條 鏈的CDR通過框架區(qū)排列成直線以形成表位特異結(jié)合位點(diǎn)。自N-末端至 C-末端，輕鏈及重鏈皆包括結(jié)構(gòu)域FR1、 CDR1、 FR2、 CDR2、 FR3、 CDR3 及FR4。氨基酸在各結(jié)構(gòu)域中的分配符合Kabat的5^^/e/ ces o尸 i7^e//751 o尸/邁邁w3o/og/ca/ //7fere" (National Institutes of Health, Bethesda， Md. (1987及1991))或Chothia & Lesk /. A/o人196:901-917 (1987); Chothia等人，#a ， 342:878-883 (1989)的定義。"抗體"是指完整免疫球蛋白或指可與完整抗體竟?fàn)幪禺愋越Y(jié)合 的其抗原結(jié)合部分。在一些實(shí)施例中，抗體是其抗原結(jié)合部分。抗原 結(jié)合片段是通過重組DNA技術(shù)或通過酶促或化學(xué)裂解完整抗體產(chǎn)生?？?原結(jié)合部分尤其包括Fab、 Fab'、 F(ab02、 Fv、 dAb及互補(bǔ)決定區(qū)(CDR) 片段、單鏈抗體(scFv)、嵌合抗體、雙抗體及含有至少免疫球蛋白一 部分的多肽(該免疫球蛋白一部分足以賦予該多肽以特異性抗原結(jié)合 能力)。Fab片段由VL、 VH、 CL及CH1結(jié)構(gòu)域構(gòu)成的單價(jià)片段；F(ab)2 片段含有在鉸鏈區(qū)由二硫鍵連接的兩個(gè)Fab片段的二價(jià)片段；Fd片段由 VH及CH1結(jié)構(gòu)域構(gòu)成；Fv片段由抗體單臂的VL及VH結(jié)構(gòu)域構(gòu)成；而dAb 片段(Ward等人，^a^re， 341: 544-546 (1989))由VH結(jié)構(gòu)域構(gòu)成。本說明書所用稱作(例如)1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6.77.2、 7.16.6、 7.20.5、 7. 26. 4或9. 8. 2的抗體是由具有相同名字 的雜交瘤生成的單克隆抗體。舉例而言，抗體1,7. 2是由雜交瘤1.7. 2 產(chǎn)生的。稱作6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. l-mod或7. 26. 4-mod的抗體是其序列以定點(diǎn)誘變修飾自其相應(yīng)的母體的單克隆 抗體。單鏈抗體(scFv)是其VL及VH區(qū)經(jīng)由能夠使其成為單個(gè)蛋白質(zhì)鏈的 合成連接子配對(duì)形成單價(jià)分子的抗體(Bird等人，Sc/e/7ce, 242: 423-426 (1988)及Huston等人，戶roc. ^a〃. Jcad. 5W. MJ， 85:5879-5883 (1988))。雙抗體是二價(jià)雙特異性抗體，其中VH及VL結(jié)構(gòu) 域表達(dá)在單一多肽鏈上，但是所用連接子太短因而不容許相同鏈上兩 個(gè)結(jié)構(gòu)域之間進(jìn)行配對(duì)，從而迫使這樣的結(jié)構(gòu)域與另一鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu) 域配對(duì)并形成兩個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)(參見例如，Holliger， P.等人，戶roc.5W. ,, 90:6444-6448 (1993); Poljak, R. J.等人， 5Y藩&re， 2:1121-1123 (1994))?？梢怨矁r(jià)或非共價(jià)方式將一個(gè)或 多個(gè)來自本發(fā)明抗體的CDR引入一個(gè)分子以使其成為可特異結(jié)合 MAdCAM的免疫粘附素。免疫粘附素可引入CDR作為較大多肽鏈的一部 分；可共價(jià)連接CDR以成為另一多肽鏈；或可以非共價(jià)方式引入CDR。 該CDR可以使免疫粘附素特異性結(jié)合至特定感興趣的抗原?？贵w可具有一個(gè)或多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。若存在一個(gè)以上的結(jié)合位點(diǎn)，則該結(jié)合位點(diǎn)可彼此相同或不相同。舉例而言，天然存在的免疫球蛋 白具有兩個(gè)相同的結(jié)合位點(diǎn)，單鏈抗體或Fab片段具有一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)， 而"雙特異性"或"雙功能"抗體(雙抗體)則具有兩個(gè)不同的結(jié)合位 點(diǎn)。"分離的抗體"是如下抗體(l)不與原本在其天然狀態(tài)下伴隨其 的天然結(jié)合組份(包括其它天然結(jié)合的抗體)相結(jié)合，(2)不含來自相同 物種的其它蛋白質(zhì)；(3)可由來自不同物種的細(xì)胞表達(dá)；或(4)在天然 狀態(tài)下不存在。分離的抗體的實(shí)例包括已利用MAdCAM親和純化的抗-MAdCAM抗體、已由雜交瘤或其它細(xì)胞系在活體外產(chǎn)生的抗-MAdCAM抗體 及源自轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物或植物的人抗-MAdCAM抗體。本說明書所用術(shù)語(yǔ)"人抗體"意指其中可變區(qū)及恒定區(qū)序列抗體 是人序列的抗體。該術(shù)語(yǔ)涵蓋具有源自人基因但為(例如)降低可能的 免疫原性、增加親和力、消除可能會(huì)引起不期望的折疊的半胱氨酸或糖基化位點(diǎn)等已發(fā)生改變的序列的抗體。該術(shù)語(yǔ)涵蓋這些在非人細(xì)胞 (其可能會(huì)賦予不具人細(xì)胞特征的糖基化)中重組產(chǎn)生的抗體。該術(shù)語(yǔ) 亦涵蓋已在含有一些或所有人免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因座的轉(zhuǎn)基因 小鼠中飼養(yǎng)的抗體。在一方面中，本發(fā)明提供人源化抗體。在一些實(shí)施例中，該人源 化抗體是源自非人物種的抗體，該抗體重鏈及輕鏈的框架及恒定結(jié)構(gòu) 域中某些氨基酸已接受突變以便避免或消除人體內(nèi)的免疫反應(yīng)。在一 些實(shí)施例中，人源化抗體可通過使來自人抗體的恒定結(jié)構(gòu)域與來自非 人物種的可變結(jié)構(gòu)域融合產(chǎn)生。如何形成人源化抗體的實(shí)例可見于美國(guó)專利第6， 054， 297號(hào)、第5，886，152號(hào)及笫5， 877， 293號(hào)。在一些實(shí) 施例中，本發(fā)明的人源化抗-MAdCAM抗體含有本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)人抗 -MAdCAM抗體的 一個(gè)或多個(gè)框架區(qū)的氨基酸序列。在另一方面中，本發(fā)明包括"嵌合抗體"的用途。在一些實(shí)施例 中，該嵌合抗體是指含有一個(gè)或多個(gè)來自 一個(gè)抗體的區(qū)域且含有一個(gè) 或多個(gè)來自一個(gè)或多個(gè)其它抗體的區(qū)域的抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方 案中， 一個(gè)或多個(gè)CDR源自本發(fā)明的人抗-MAdCAM抗體。在一個(gè)更佳實(shí) 施例中，所有CDR源自本發(fā)明的人抗-MAdCAM抗體。在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施 例中，將該來自 一個(gè)以上的本發(fā)明的人抗-MAdCAM抗體的CDR在一嵌合 抗體中混合并配對(duì)。舉例而言，嵌合抗體可含有來自第一個(gè)人抗 -MAdCAM抗體輕鏈的CDRl,該CDR1可與來自第二個(gè)人抗-MAdCAM抗體輕 鏈的CDR2及CDR3組合，且重鏈的CDR可源自第三個(gè)抗-MAdCAM抗體。此 外，框架區(qū)可源自相同抗-MAdCAM抗體、 一個(gè)或多個(gè)不同抗體(諸如人 抗體)或人源化抗體的框架區(qū)。"中和抗體，，、"抑制性抗體"或拮抗劑抗體是可抑制至少約20% 的ot 4 P 7或a 4 P廣表達(dá)細(xì)胞或任何其它同源配體或同源配體表達(dá)細(xì)胞 結(jié)合MAdCAM的抗體。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該抗體對(duì)a^7整聯(lián)蛋 白或oup7表達(dá)細(xì)胞與MAdCAM結(jié)合的抑制至少為40y。、更佳60%、進(jìn)一步 優(yōu)選80%、 85%、 90°/。、 95%或100%。結(jié)合降低可通過本領(lǐng)域的技術(shù)人員 已知的任何方法測(cè)量，舉例而言，如通過活體外竟?fàn)幗Y(jié)合分析測(cè)量，測(cè)量a 4 P 7表達(dá)細(xì)胞對(duì)MAdCAM的結(jié)果降低的例子如實(shí)施例1所示。本領(lǐng)域的技術(shù)人員遵照本說明書的教導(dǎo)會(huì)很容易地制備抗體片段 或類似物。片段或類似物的優(yōu)選氨基-及羧基-末端出現(xiàn)在功能結(jié)構(gòu)域 邊界區(qū)附近?？蓪⒑塑账岷?或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公開的或?qū)＠行?列數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比較藉此確定結(jié)構(gòu)及功能結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選地，用計(jì)算機(jī)化 比較方法來確定在其它具有已知結(jié)構(gòu)和/或功能的蛋白質(zhì)中出現(xiàn)的序 列基序或預(yù)期蛋白質(zhì)構(gòu)象結(jié)構(gòu)域。鑒別可折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白 質(zhì)序列的方法為人們所公知(Bowie等人，iWe細(xì),253:164 (1991))。 術(shù)語(yǔ)"k。ff"指用于表征抗體自抗體/抗原復(fù)合體離解的解離速率 常數(shù)。術(shù)語(yǔ)"Kd"指特定抗體-抗原相互作用的離解常數(shù)。據(jù)稱抗體在解 離常數(shù)《1 jaM、優(yōu)選《100 nM且最優(yōu)選《10 nM時(shí)可與抗原結(jié)合。術(shù)語(yǔ)"表位"包括能夠特異結(jié)合結(jié)合免疫球蛋白或T-細(xì)胞受體或 以其它方式與一分子相互作用的任何蛋白質(zhì)決定簇。表位決定簇通常 由分子的化學(xué)活性表面基團(tuán)(例如，氨基酸或碳水化合物側(cè)鏈)組成， 且其通常具有特異性三維結(jié)構(gòu)特征以及特異性電荷特征。An表位可呈"線性"或"構(gòu)象"形式。在線性表位中，蛋白質(zhì)與相互作用分子(諸 如抗體)之間所有相互作用點(diǎn)均沿該蛋白質(zhì)主要氨基酸序列以線性方式出現(xiàn)。在構(gòu)象表位中，相互作用點(diǎn)交叉出現(xiàn)在蛋白質(zhì)上彼此分開的 氨基酸殘基上。如本說明書所用，20種公知氨基酸及其縮寫遵循公知用法。參見 /邁/z/""o/og7 -」《5>/7^"2、(第2版，E.S. Golub及D.R. Gren編輯， Sinauer Associates, Sunderland, Mass. (1991))，其以引用的方 式引入本專利說明書中。20種公知氨基酸的立體異構(gòu)體(例如D-氨基 酸)、非天然氨基酸(例如a-， ot-二取代氨基酸、N-烷基氨基酸)、乳 酸、及其它非公知氨基酸也適用于本發(fā)明的多肽的組份。非公知氨基 酸的實(shí)例包括4-羥脯氨酸、Y-羧基麩氨酸、e-N,N，N-三曱基賴氨 酸、e-N-乙?；嚢彼帷?-磷酸絲氨酸、N-乙?；z氨酸、N-甲?；?曱硫氨酸、3-甲基組氨酸、5-羥基賴氨酸、s-N-甲基精氨酸、及其它類似氨基酸及亞氨基酸(例如，4-羥基脯氨酸)。在本說明書所用多肽 符號(hào)中，左手方向?yàn)榘被┒朔较蚨沂址较驗(yàn)轸然┒朔较?，符?標(biāo)準(zhǔn)用法及慣例。如本說明書所提及術(shù)語(yǔ)"多核苷酸"意指具有至少10個(gè)堿基長(zhǎng)度 的核苷酸(或?yàn)楹颂呛塑账峄蛎撗鹾颂呛塑账峄蛉我活愋秃塑账岬慕?jīng) 修飾形式)聚合形式。該術(shù)語(yǔ)包括DNA的單鏈及雙鏈形式。如本說明書所用術(shù)語(yǔ)"分離的多核苷酸"意指基因組來源、cDNA 來源、或合成來源或其某一組合的多核苷酸，根據(jù)其來源，該"分離 的多核苷酸"(l)并非與全部或一部分在天然狀態(tài)下于其中可發(fā)現(xiàn)該 "分離的多核苷酸，，的多核苷酸相結(jié)合，(2)以可操作方式與一在天然 狀態(tài)下其并未與其連接的多核苷酸相連接，或(3)未在天然狀態(tài)中作為 較大序列的一部分出現(xiàn)。本說明書所提及術(shù)語(yǔ)"寡核苷酸"包括通過天然存在及非天然存 在寡核苷酸鍵結(jié)連接在一起的天然存在及經(jīng)修飾核苷酸。寡核苷酸是 多核苷酸子集，其通常具有200堿基或更少的長(zhǎng)度。寡核苷酸優(yōu)選IO 至60堿基長(zhǎng)且最優(yōu)選12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19、或20至40堿 基長(zhǎng)。寡核苷酸通常是單鏈，例如對(duì)于探針；但寡核苷酸也可以是雙 鏈，例如對(duì)于基因突變體的構(gòu)造。本發(fā)明的寡核苷酸可以是有義鏈寡 核苷酸或反義鏈寡核苷酸。本說明書所提及術(shù)語(yǔ)"天然存在的核苷酸"包括脫氧核糖核苷酸 及核糖核苷酸。本說明書所提及術(shù)語(yǔ)"經(jīng)修飾核苷酸"包括帶有經(jīng)修 飾或經(jīng)取代糖基的核苷酸及諸如此類。本說明書所提及術(shù)語(yǔ)"寡核苷 酸鍵"包括如下寡核苷酸鍵，例如硫代磷酸酯基、二硫代磷酸酯基、 硒代磷酸酯基、二硒代磷酸酯基、苯氨基硫代磷酸酯基、苯氨基磷酸 酯基、砩酰胺酯基、及諸如此類。參見例如，LaPlanche等人，峁c/力c/^ 14:9081 (1986); Stec等人，/. J瓜Soc 106:6077 (1984); Stein等人，#wc/.爿c油紋，16: 3209 (1988); Zon等人，紐/-C露er / ri/g "e"'^ 6:539 (1991); Zon等人，組,wc/eo"Ves a/7d 細(xì)7喂w "rac〃c"場(chǎng)r瞎力，第87-108頁(yè)(F. Eckstein編輯，Oxford University Press, Oxford England (1991)); Stec等人,美 國(guó)專利第5， 151， 510號(hào)；Uhlmann及Peyman ， Chemical Review， 90: 543 (1990)，上述參考文獻(xiàn)及專利的揭示內(nèi)容一引用方式引入本專 利說明書中。寡核普酸可視需要包括一用于檢測(cè)的標(biāo)記物。"以可操作方式連接的"序列既包括與感興趣基因鄰接的表達(dá)控 制序列也包括反式或遠(yuǎn)距作用以控制感興趣基因的表達(dá)控制序列。本 說明書所用術(shù)語(yǔ)"表達(dá)控制序列"是指對(duì)于實(shí)現(xiàn)其所連接的編碼序列 的表達(dá)及加工不可缺少的多核苷酸序列。表達(dá)控制序列包括適宜的轉(zhuǎn) 錄起始、終止、啟動(dòng)子及增強(qiáng)子序列；有效RNA加工信號(hào)，諸如剪接及 聚腺苷酸化信號(hào)；穩(wěn)定胞質(zhì)mRM的序列；增強(qiáng)轉(zhuǎn)錄效率的序列(即， Kozak—致序列)；增強(qiáng)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的序列；且需要時(shí)，包括可增強(qiáng) 蛋白質(zhì)分泌的序列。該控制序列的性質(zhì)視宿主生物而不同；在原核生 物中，該控制序列通常包括啟動(dòng)子、核糖體結(jié)合位點(diǎn)、及轉(zhuǎn)錄終止序 列；在真核生物中，該控制序列一般包括啟動(dòng)子及轉(zhuǎn)錄終止序列。術(shù) 語(yǔ)"控制序列，，意欲包括(最低限度)所有其存在對(duì)于表達(dá)及加工是必 不可少的組件且也可包括額外的其存在是有益處的組件，例如前導(dǎo)序 列及融合伴侶序列。本說明書所用術(shù)語(yǔ)"載體"欲指能夠轉(zhuǎn)運(yùn)已與其連接的另一核酸 的核酸分子。 一類載體是"質(zhì)粒"，其指其中可連接有額外DNA段的環(huán) 狀雙鏈DNA環(huán)。另一類載體是病毒載體，其中額外DM段可連接于病毒 基因組中。某些載體(例如，具有細(xì)菌復(fù)制起始點(diǎn)的細(xì)菌載體及附加型 哺乳動(dòng)物載體)能夠在其中并入此載體的宿主細(xì)胞中自主復(fù)制。其它載 體(例如，非附加型哺乳動(dòng)物載體)可在并入宿主細(xì)胞后整合至宿主細(xì) 胞的基因組中，藉此與宿主基因組一起復(fù)制。此外，某些栽體能夠引 導(dǎo)以可操作方式與其連接的基因的表達(dá)。本說明書將此等載體稱作"重 組表達(dá)載體"(或簡(jiǎn)稱為"表達(dá)載體，，)。通常，用于重組DM技術(shù)的表 達(dá)載體通常呈質(zhì)粒形式。在本說明書中，由于質(zhì)粒是最常用的載體形 式，所以"質(zhì)粒"及"載體"可互換使用。然而，本發(fā)明欲包括可提 供等效功能的其它形式的表達(dá)栽體，例如病毒栽體(例如，復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺病毒及腺相關(guān)病毒)。本說明書所用術(shù)語(yǔ)"重組宿主細(xì)胞"(或簡(jiǎn)稱為"宿主細(xì)胞")欲 指其中已引入重組表達(dá)載體的細(xì)胞。應(yīng)了解，該術(shù)語(yǔ)不僅欲指特定受 試者細(xì)胞而且還指此細(xì)胞的子代。由于突變或環(huán)境影響可使后續(xù)各代 發(fā)生某些改變，因此，該子代實(shí)際上可能與母細(xì)胞不同但卻仍涵蓋于 本說明書所用術(shù)語(yǔ)"宿主細(xì)胞"的范圍內(nèi)。本說明書所提及術(shù)語(yǔ)"選擇性雜交"意指可檢測(cè)地且特異性地結(jié) 合。本發(fā)明多核苷酸、寡核苷酸及其片段在使可估計(jì)的與非特異性核 酸的可檢測(cè)結(jié)合量最小化的雜交及洗滌條件下選擇性雜交至核酸鏈 上。如業(yè)內(nèi)所公知及本說明書所論述，可用"高嚴(yán)謹(jǐn)性，，或"高度嚴(yán) 謹(jǐn)"條件來實(shí)現(xiàn)選擇性雜交條件。"高嚴(yán)謹(jǐn)性"或"高度嚴(yán)謹(jǐn)，，條件 的一個(gè)實(shí)例是使一多核苷酸與另一多核苷酸一起如下孵育的方法，其中可將一多核苷酸固定于固體(諸如膜)表面上，于含有6XSSPE或SSC、 50%曱酰胺、5X Denhardt試劑、0.5% SDS、 100微克/毫升變性片段化 鮭魚精子DNA的雜交緩沖液中在42。C的雜交溫度下孵育12至16小時(shí)，然 后在55。C下用含有1X SSC、 0.5% SDS的洗滌緩沖液洗滌兩次。可參見 Sambrook等人，上述文獻(xiàn)，第9. 50-9. 55頁(yè)。就核苷酸序列范圍而言的術(shù)語(yǔ)"百分比序列一致性，，指當(dāng)就最大 一致性進(jìn)行比對(duì)時(shí)兩個(gè)序列中相同的殘基。序列 一致性比較的長(zhǎng)度可 超過一段含有至少約9個(gè)核苷酸的核酸序列、通常至少約18個(gè)核苷酸、 更通常至少約24個(gè)核苷酸、典型至少約28個(gè)核苷酸、更典型至少約32 個(gè)核苷酸、且優(yōu)選地至少約36、 48或更多個(gè)核普酸。有多種可用來測(cè) 量核苷酸序列 一致性的不同的業(yè)內(nèi)已知算法。舉例而言，可使用FASTA、 Gap或Bestfit (該是Wisconsin Package Version 10. 3中的程序， Accelrys， San Diego， CA)來比較多核苦酸序列。包括(例如)程序 FASTA2及FASTA3的FASTA可提供查詢與搜索序列之間最佳重迭區(qū)的比 對(duì)及百分比序列一致性(Pearson, f/7z/iz70/. ， 183: 63-98(1990); Pearson, , 132: 185-219 (2000); Pearson,〃ef力0(/; i"/3zjwo/. ， 266: 227—258 (1996); Pearson, /. #0/. A/o厶，276: 71-84 (1998);該文獻(xiàn)以引用方式引入本專利說明書中)。除非 另有說明，否則可使用用于特定程序或算法的默認(rèn)參數(shù)。舉例而言，利用Gap以其Wisconsin Package Version 10. 3 (以引用方式引入本專一致性。除非另有說明，否則提及核苷酸序列也包括其互補(bǔ)部分。因此應(yīng) 了解，提及具有特定序列的核酸分子也包括具有其互補(bǔ)序列的其互補(bǔ)鏈。在分子生物學(xué)業(yè)內(nèi)，研究者可互換使用術(shù)語(yǔ)"百分比序列一致性"、 "百分比序列相似性，，及"百分比序列同源性，，。在本申請(qǐng)案中，此 等術(shù)語(yǔ)僅對(duì)核苷酸序列具有相同含義。當(dāng)提及核酸或其片段時(shí)，術(shù)語(yǔ)"實(shí)質(zhì)相似性"或"實(shí)質(zhì)序列相似 性"表示，用適宜核苷酸插入或刪除與另一核酸(或其互補(bǔ)鏈)進(jìn)行最 優(yōu)比對(duì)時(shí)，在至少約85%、優(yōu)選至少約90%且更佳至少約95%、 96%、 97%、 98%或99%核苷酸堿基中具有核苷酸序列一致性，如上所述通過任一熟 知序列一致性算法(諸如FASTA、 BLAST或Gap)所測(cè)得。用于多肽時(shí)，術(shù)語(yǔ)"實(shí)質(zhì)一致性"意指，當(dāng)兩個(gè)肽序列通過(例如) 程序GAP或BESTFIT利用默認(rèn)空位加權(quán)進(jìn)行最有比對(duì)時(shí)，二者具有至少 75%或80%序列一致性、優(yōu)選具有至少90%或95%序列一致性、進(jìn)一步優(yōu) 選具有至少98%或99%序列一致性。優(yōu)選地，不完全相同的殘基位置因保守氨基酸取代而不同。"保守氨基酸取代"是其中一氨基酸殘基由 另一具有有相似化學(xué)性質(zhì)(例如，電荷或疏水性)的側(cè)鏈(R基團(tuán))的氨基酸殘基所取代這樣的取代。 一般而言，保守氨基酸取代不會(huì)實(shí)質(zhì)改變 蛋白質(zhì)的功能性質(zhì)。在其中兩個(gè)或兩個(gè)以上氨基酸序列因保守取代而 彼此不同的情況中，可上調(diào)百分比序列一致性或相似度以校正取代的 保守性質(zhì)。用于進(jìn)行此調(diào)整的方法為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知。參見 例如，Pearson, "/o入，24: 307-31 (1994)，該文獻(xiàn)以引用方式引入本專利說明書中。具有有相似化學(xué)性質(zhì)的側(cè)鏈的各組氨基酸的實(shí)例包括l)脂肪族側(cè)鏈甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨 酸及異亮氨酸；2)脂肪族羥基側(cè)鏈絲氨酸及蘇氨酸；3)含酰胺側(cè)鏈 天冬酰胺及谷胺酰胺；4)芳香族側(cè)鏈苯丙氨酸、酪氨酸及色氨酸； 5)堿性側(cè)鏈賴氨酸、精氨酸及組氨酸；以及6)含硫側(cè)鏈半胱氨酸 及曱硫氨酸。優(yōu)選保守氨基酸取代基團(tuán)是纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、 苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、谷氨酸-天冬氨 酸及天冬酰胺-谷胺酰胺。或者，保守取代是在Gonnet等人，Sc/e腳，256: 1443-45 (1992)(以引用方式引入本專利說明書中)中揭示的PAM250對(duì) 數(shù)相似度矩陣中具有正值的任何改變。"中度保守"取代是在PAM250 對(duì)數(shù)相似度矩陣中具有非負(fù)值的任何改變。多肽的序列相似性通常利用序列分析軟件測(cè)量。蛋白質(zhì)分析軟件 使用分配給各種取代、缺失及其它修改(包括保守氨基酸取代)的相似 性量度匹配類似序列。舉例而言，GCG含有諸如"Gap"及"BestfU" 等程序，可利用該程序以默認(rèn)值確定緊密相關(guān)多肽(諸如來自不同物種 生物體的多肽)之間或野生型蛋白質(zhì)與其一突變蛋白質(zhì)之間的序列同 源寸生或序歹寸一致'〖生。參見例》口， Wisconsin package Version 10. 3。 也可以使用FASTA (Wisconsin package Version 10. 3中一程序)以默 認(rèn)或推薦參數(shù)比較多肽序列。FASTA(例如，F(xiàn)ASTA2及FASTA3)可提供查 詢與搜索序列之間最佳重迭區(qū)的比對(duì)及百分比序列一致性(Pearson (1990); Pearson (2000))。當(dāng)將本發(fā)明序列與含有大量來自不同生物 體的序列的數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比較時(shí)，另一優(yōu)選算法是計(jì)算機(jī)程序BLAST,尤 其是blastp或tblastn(使用默認(rèn)參數(shù))。參見例如，Altschul等人，/. #。7. S/o/. 215: 403-410 (1990); Altschul等人，腸/e/c 25:3389-402 (1997);該文獻(xiàn)以引用方式引入本專利說明書中。進(jìn)行同源性比較的多肽序列的長(zhǎng)度一般會(huì)是至少約16個(gè)氨基酸殘 基、通常至少約20個(gè)殘基、更通常至少約24個(gè)殘基、典型至少約28個(gè) 殘基且優(yōu)選多于約35個(gè)殘基。當(dāng)搜索含有來自大量不同生物體的序列 的數(shù)據(jù)庫(kù)時(shí)，優(yōu)選去比較氨基酸序列。本說明書所用術(shù)語(yǔ)"標(biāo)記物"或"經(jīng)標(biāo)記"是指在抗體中摻入另 一分子。在一個(gè)實(shí)施例中，該標(biāo)記物是可檢測(cè)的標(biāo)記物，例如，摻入 經(jīng)放射標(biāo)記的氨基酸或連接至具有可通過經(jīng)標(biāo)記抗生物素蛋白檢測(cè)的 生物素基部分的多肽(例如，包含熒光標(biāo)記物或具有可通過光學(xué)或比色 方法檢測(cè)的酶促活性的鏈霉抗生物素蛋白)。在另一實(shí)施例中，該標(biāo)記 或標(biāo)記物可以是治療劑，例如，藥物共軛物或毒素。多種標(biāo)記多肽及 糖蛋白的方法為業(yè)內(nèi)所知且可使用。用于多肽的標(biāo)記物實(shí)例包括但不限于以下各物放射性同位素或放射性核素(例如，3H、 14C、 15N、 35S、 9。Y、 "Tc、出ln、 I25l、 i3!l)、熒光標(biāo)記物(例如，F(xiàn)ITC、羅丹明、鑭系 元素磷光體)、酶標(biāo)記物(例如、過氧化物酶、p-半乳糖苷酶、熒光素 酶、堿性磷酸酶)、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物、生物素基團(tuán)、由二級(jí)報(bào)告子識(shí)別 的預(yù)先確定的多肽表位(例如，亮氨酸拉鏈對(duì)序列、二級(jí)抗體的結(jié)合位 點(diǎn)、金屬結(jié)合結(jié)構(gòu)域、表位標(biāo)簽)、磁性劑，諸如釓螯合物、毒素，諸 如百曰咳毒素(pertussis toxin)、 紫杉醇(taxol)、細(xì)胞松弛素 B(cytochalasin B)、短桿菌肽D (gramicidin D)、溴化乙錠(ethidium bromide)、吐根堿(emetine)、絲裂霉素(mitomycin)、表鬼桕毒素 (etoposide)、鬼臼瘞汾戒(tenoposide)、長(zhǎng)春新堿(vincrist ine)、 長(zhǎng)春堿(vinblastine)、 秋7Jc仙堿(colchicin)、 多柔比星 (doxorubicin)、 柔紅霉素(daunorubicin) 、 二羥基蒽酉昆(dihydroxy anthracin dione)、 米托蒽硫(mitoxantrone)、 光輝霉素 (mithramycin)、 方欠線菌素D(actinomycin D) 、 l一去氛華酉同 (l-dehydrotestosterone)、糖皮質(zhì)激素、普魯卡因(procaine) 、 丁 卡因(tetracaine)、利多卡因(lidocaine)、普萘洛爾(propranolol)、 及噤呤霉素(puromycin)及其類似物或同系物。在某些實(shí)施例中，標(biāo)記 物通過各種長(zhǎng)度之間隔子臂添加以降低潛在的空間位阻。
權(quán)利要求
1.一種抗-MAdCAM抗體或其抗原結(jié)合部分的用途，其用于制備用來治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的藥物。
2. 權(quán)利要求l的用途，其中該藥物用于治療腹部疾病。
3. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求2的用途，其中該抗-MAdCAM抗體是人單 克隆抗體。
4. 權(quán)利要求3的用途，其中該抗體或部分具有至少一種以下性質(zhì)(a) 結(jié)合人細(xì)胞；(b) 對(duì)MAdCAM具有較VCAM或纖連蛋白高至少100倍的選擇性；(c) 以3xl0—" M或更低的Kd結(jié)合人MAdCAM;或(d) 抑制ou )3 7表達(dá)細(xì)胞對(duì)人MAdCAM的結(jié)合；(e) 抑制淋巴細(xì)胞向胃腸淋巴組織的募集。
5. 權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的用途，其中所述抗體或抗原結(jié)合部分 抑制人MAdCAM對(duì)oc4 P 7的結(jié)合，且其中該抗體或其部分具有至少一種以 下性質(zhì)(a) 與參照抗體交叉竟?fàn)幗Y(jié)合MAdCAM;(b) 與參照抗體竟?fàn)幗Y(jié)合MAdCAM;(c) 與參照抗體結(jié)合相同的MAdCAM表位；(d) 以與參照抗體大體相同的Kd結(jié)合MAdCAM;(e) 以與參照抗體大體相同的解離速率結(jié)合MAdCAM; 其中該參照抗體選自單克隆抗體1.7. 2、單克隆抗體1.8.2、單克隆抗體6. 14.2、單克隆抗體6. 22. 2、單克隆抗體6. 34. 2、單克隆抗體 6.67.1、單克隆抗體6. 73. 2、單克隆抗體6. 77. 1、單克隆抗體7. 16. 6、 單克隆抗體7. 20. 5、單克隆抗體7. 26.4、單克隆抗體9. 8. 2、單克隆抗 體6. 22.2-mod、單克隆抗體6. 34. 2-mod、單克隆抗體6. 67. l-mod、單克 隆抗體6. 77. l-mod及單克隆抗體7. 26. 4-mod。
6. 權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的用途，其中該抗-MAdCAM抗體的重鏈 可變區(qū)、輕鏈可變區(qū)或二者在氨基酸序列上與選自下列的單克隆抗體的對(duì)應(yīng)區(qū)域具有至少90%的同一性單克隆抗體1.7. 2、單克隆抗體1.8. 2、 單克隆抗體6.14. 2、單克隆抗體6. 22. 2、單克隆抗體6. 34. 2、單克隆抗 體6. 67. 1、單克隆抗體6. 73. 2、單克隆抗體6. 77. 1、單克隆抗體7. 16. 6、 單克隆抗體7. 20. 5、單克隆抗體7. 26.4、單克隆抗體9. 8. 2、單克隆抗 體6. 22.2-mod、單克隆抗體6. 34. 2-mod、單克隆抗體6. 67. 1-mod、單克 隆抗體6. 77. l-mod及單克隆抗體7. 26. 4-mod。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的用途，其中該抗體選自(a) 含有示于SEQ ID N0:2及SEQ ID NO: 4的氨基酸序列但不含信號(hào)序 列的抗體；(b) 含有示于SEQ ID N0:6及SEQ ID NO: 8的氨基酸序列但不含信號(hào)序 列的抗體；(c) 含有示于SEQ ID NO:10及SEQ ID NO: 12的氛基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(d) 含有示于SEQ ID N0:14及SEQ ID NO: 16的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(e) 含有示于SEQ ID N0:18及SEQ ID NO: 20的氛基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(f) 含有示于SEQ ID NO: 22及SEQ ID NO: 24的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(g) 含有示于SEQ ID NO:26及SEQ ID NO: 28的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(h) 含有示于SEQ ID NO:30及SEQ ID NO: 32的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(i) 含有示于SEQ ID NO: 34及SEQ ID NO: 36的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(j) 含有示于SEQ ID NO: 38及SEQ ID NO: 40的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(k) 含有示于SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 44的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(1) 含有示于SEQ ID NO: 46及SEQ ID NO: 48的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；On) 含有示于SEQ ID NO:52及SEQ ID NO: 54的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(n) 含有示于SEQ ID NO:56及SEQ ID NO: 58的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(o) 含有示于SEQ ID NO:60及SEQ ID NO: 62的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；(p) 含有示于SEQ ID N0:64及SEQ ID NO: 66的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體；及(q) 含有示于SEQ ID N0:42及SEQ ID NO: 68的氨基酸序列但不含信號(hào) 序列的抗體。
8. 權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的用途，其中重鏈C-末端的賴氨酸自該 抗-MAdCAM抗體裂解。
9. 權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的用途，其中該單克隆抗體或其抗原結(jié) 合部分選自下列抗體(a) 重鏈包含選自于下列的參照抗體的重鏈CDR1、 CDR2及CDR3氨基酸 序列1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、 7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、6. 77. l-mod及7. 26. 4-mod(b) 輕鏈包含選自于下列的參照抗體的輕鏈CDR1、 CDR2及CDR3氨基酸 序列:1. 7. 2、 1. 8. 2、 6. 14. 2、 6. 22. 2、 6. 34. 2、 6. 67. 1、 6. 73. 2、 6. 77. 1、7. 16. 6、 7. 20. 5、 7. 26. 4、 9. 8. 2、 6. 22. 2-mod、 6. 34. 2-mod、 6. 67. l-mod、 6. 77. 1-mod及7. 26. 4-mod(c) 該抗體包含(a)的重鏈及(b)的輕鏈；及(d) (c)的抗體，其中重鏈及輕鏈CDR氨基酸序列選自相同的參照抗體。
10. 權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的用途，其中該單克隆抗體或抗原結(jié)合 部分包含(a)含有選自下列的抗體的重鏈可變區(qū)氨基酸序列的重鏈1. 7. 2(SEQID NO: 2); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 6); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 10); 6. 22. 2 (SEQ ID NO: 14); 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 18); 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 22); 6. 73. 2 (SEQ ID NO: 26); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 30); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 34); 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 38); 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 42); 及9. 8. 2 (SEQ ID NO: 46); 6. 22. 2-mod (SEQ ID NO: 52) ;6. 34. 2-mod卿 ID NO: 56);6. 67. l-mod(SEQ ID NO: 60) ; 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 64); 及7. 26. 4—mod (SEQ ID NO: 42);(b) 含有選自下列的抗體的輕鏈可變區(qū)氨基酸序列的輕鏈1. 7. 2 (SEQ ID NO: 4); 1. 8. 2 (SEQ ID NO: 8); 6. 14. 2 (SEQ ID NO: 12); 6. 22. 2 (SEQ ID NO: 16); 6. 34. 2 (SEQ ID NO: 20); 6. 67. 1 (SEQ ID NO: 24); 6， 73. 2 (SEQ ID NO: 28); 6. 77. 1 (SEQ ID NO: 32); 7. 16. 6 (SEQ ID NO: 36); 7. 20. 5 (SEQ ID NO: 40); 7. 26. 4 (SEQ ID NO: 44); 及9. 8. 2 (SEQ ID NO: 48); 6. 22. 2-mod (SEQIDNO: 54) ;6. 34. 2-mod (SEQID NO: 58);6. 67. 1-mod (SEQ ID NO: 62) ; 6. 77. 1-mod (SEQ ID NO: 66); 及7. 26. 4-mod(SEQ ID NO: 68);或(c) (a)的重鏈及(b)的輕鏈。
11. 一種抗-ouP7整聯(lián)蛋白抗體或其抗原結(jié)合部分的用途，其用于 制備用來治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的藥物。
全文摘要
本發(fā)明是關(guān)于抗-MAdCAM抗體在制備用于治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的藥物中的用途。本發(fā)明還涵蓋使用治療有效量的抗-MAdCAM抗體治療腹部疾病和/或熱帶口炎性腹瀉的方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK101227923SQ200680026974
公開日2008年7月23日 申請(qǐng)日期2006年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2005年7月8日
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