專利名稱：：HMG-CoA還原酶抑制劑和mTOR抑制劑的組合的制作方法HMG-CoA還原酶抑制劑和mTOR抑制劑的組合本發(fā)明涉及諸如組合的制劑或藥物組合物的組合，分別包含HMG-Co-A還原酶抑制劑(亦稱作p-羥基-p-甲基戊二酰基-輔酶A還原酶抑制劑)或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物，任選地在可藥用載體存在下同時(shí)、單獨(dú)或相繼使用，特別是在與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣硬化的預(yù)防、iO艮的延遲或治療及與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病的預(yù)防、t艮的延遲或治療，這樣的組合在制備用于這些病癥的預(yù)防、t艮的延遲或治療的藥物制劑中的用途；與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病的預(yù)防、進(jìn)展的延遲或治療的方法諸如高膽固醇血癥、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣硬化和與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體腫瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼齊(SLE)、I型糖尿病等)、哮喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制。本發(fā)明涉及包含HMG-Co-A還原酶抑制劑或其可藥用鹽和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物，任選有可藥用載體的存在的藥物組合或組合物，及其在治療與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、像高膽固醇血癥的動(dòng)脈粥樣硬化，和與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體肺瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體腫瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑《良瘙(SLE)、I型糖尿病等)、哮喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制中的用途。本發(fā)明還涉及在組合中包含選自阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、匹伐他汀(以前稱作伊伐他汀)、普伐他汀、羅蘇伐他汀、和辛伐他汀的HMG-Co-A還原酶抑制劑，或者在每種情況下是其可藥用的鹽(優(yōu)選地是，氟伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀或辛伐他汀或其可藥用的鹽)，和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物及任選可藥用載體的藥物組合或組合物，同時(shí)、依次或分開(kāi)4吏用。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在組合中包含氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物任選可藥用載體同時(shí)、依次或分開(kāi)使用的藥物組合或組合物。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在組合中包含氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或選自32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、40-[3-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基丙酸酯-雷帕霉素(亦稱作CCI779)、40-表畫(huà)(四唑基)畫(huà)雷帕霉素(亦稱作ABT578)、40國(guó)O-(2-羥基乙基)陽(yáng)雷帕霉素、32-去氧代雷帕霉素及16-戊-2-炔基氧基-32(S)-二氬-雷帕霉素的雷帕霉素衍生物和任選可藥用載體同時(shí)、依次或分開(kāi)使用的藥物組合或組合物。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在組合中包含氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素和任選可藥用載體的同時(shí)、依次或分開(kāi)4吏用的藥物組合或組合物。一方面本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、與動(dòng)脈粥樣石更化相關(guān)的病癥或疾病的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合或組合物，在組合中包含HMG-Co-A還原酶抑制劑、特別是匹伐他汀或氟伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或選自32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氬-雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、40-[3-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基丙酸酯-雷帕霉素(亦稱作CCI779)、40-表-(四唑基)-雷帕霉素(亦稱作ABT578)、40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、32-去氧代雷帕霉素和16-戊-2-炔基氧基-32(S)-二氫-雷帕霉素的雷帕霉素衍生物和任選可藥用載體的同時(shí)、依次或分開(kāi)4吏用的藥物組合或組合物。一方面本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的病癥或疾病的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合或組合物，在組合中包含氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素和任選可藥用載體的同時(shí)、依次或分開(kāi)使用的藥物組合或組合物。在優(yōu)選的方面，本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的病癥或疾病的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合或組合物，在組合中包含氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素和任選可藥用載體的同時(shí)、依次或分開(kāi)使用的藥物組合或組合物。在另一方面，本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體肺瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼掩(SLE)、I型糖尿病等)、哮喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合或組合物，在組合中包含(i)氟伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀或辛伐他汀或其可藥用的鹽和(ii)mTOR抑制劑例如雷帕霉素或選自32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、40-[3-羥基-2-(羥基甲基)-2-曱基丙酸酯-雷帕霉素(亦稱作CCIT79)、40-表-(四唑基)-雷帕霉素(亦稱作ABT578)、40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、32-去氧代雷帕霉素和16-戊-2-炔基氧基-32(S)-二氫-雷帕霉素的雷帕霉素衍生物并任選可藥用載體的同時(shí)、依次或分開(kāi)使用的藥物組合或組合物。在優(yōu)選的方面本發(fā)明涉及用于治療或預(yù)防與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體腫瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼齊(SLE)、I型糖尿病等)、哮喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合或組合物，在組合中包含(i)氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和(ii)mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素及任選可藥用載體的同時(shí)、依次或分開(kāi)j吏用的藥物組合或組合物。在這些組合物中，組分(i)和(ii)可被得到并被一起、一種在另一種之后或分別地在一個(gè)組合的單位劑型中或兩個(gè)單獨(dú)的單位劑型中施用。單位劑型亦可是固定的組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明的藥物組合用于制備治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥、混合性血脂障礙、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣硬化和與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體腫瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼瘡(SLE)、I型糖尿病等)、哮喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的藥物的用途。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物用于治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防和與動(dòng)樂(lè)K粥樣石更化相關(guān)的病癥或疾病的用途。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物用于治療或預(yù)防與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體腫瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼瘡(SLE)、I型糖尿病等)、孝喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(肺瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的用途。本發(fā)明提供了在單個(gè)包裝中包含各自分開(kāi)的容器的藥物組合或組合物的藥盒，在一個(gè)容器中包含HMG-Co-A還原酶抑制劑特別是匹伐他汀或氟伐他汀或其可藥用的鹽的藥物組合物，且在第二個(gè)容器中包含mTOR抑制劑，例如雷帕霉素或選自32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、40-[3-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基丙酸酯]-雷帕霉素(亦稱作CCF779)、40-表-(四唑基)-雷帕霉素(亦稱作ABT578)、40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、32-去氧代雷帕霉素及16-戊-2-炔基氧基-32(S)-二氫-雷帕霉素的雷帕霉素衍生物的藥物組合物。本發(fā)明提供了在單個(gè)包裝中包含各自分開(kāi)的容器的藥物組合或組合物的藥盒，在一個(gè)容器中包含含有氟伐他汀或匹伐他汀的藥物組合物，且在第二個(gè)容器中包含mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素。形式是特別優(yōu)選的。本發(fā)明涉及包含HMG-Co-A還原酶抑制劑特別是氟伐他汀或匹伐他汀連同用于與mTOR抑制劑，例如雷帕霉素或選自32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、40-[3-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基丙酸酯-雷帕霉素(亦稱作CCI779)、40-表-(四唑基)-雷帕霉素(亦稱作ABT578)、40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、32-去氧代雷帕霉素和16-戊-2-炔基氧基-32(S)-二氫-雷帕霉素的雷帕霉素衍生物合并使用的用于治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣^_化相關(guān)的病癥或疾病和與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體胂瘤、特別是涉及這些肺瘤生長(zhǎng)的實(shí)體肺瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼掩(SLE)、I型糖尿病等)、哮喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的指導(dǎo)說(shuō)明的包裝。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，根據(jù)本發(fā)明的包裝包含氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素的組合。在另一個(gè)實(shí)施方案中本發(fā)明涉及預(yù)防或治療與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的病癥或疾病的方法，其包括給需要其的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的任意優(yōu)選的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物并任選可藥用載體。在另一個(gè)實(shí)施方案中本發(fā)明涉及預(yù)防或治療與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體腫瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼齊(SLE)、I型糖尿病等)、哞喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癉)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的方法，其包括給需要其的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的任意優(yōu)選的才艮據(jù)本發(fā)明的藥物組合物并任選可藥用載體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中本發(fā)明涉及預(yù)防或治療與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、與動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的病癥或疾病的方法，包括給需要其的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素并任選可藥用的載體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及預(yù)防或治療與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些肺瘤生長(zhǎng)的實(shí)體肺瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑豸良齊(SLE)、I型糖尿病等)、哮喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癉)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的方法，其包括給需要其的哺乳動(dòng)物施用治療有效量的氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素并任選可藥用的栽體。HMG-Co-A還原酶抑制劑(亦稱作p-羥基-(J-甲基戊二酰基-輔酶A還原酶抑制劑)被理解為那些可用于降低血中的脂質(zhì)包括膽固醇的水平的活性成分。這類HMG-Co-A還原酶抑制劑包括有不同結(jié)構(gòu)特點(diǎn)的化合物。例如，可提及選自阿托伐他汀、西立伐他汀、氟伐他汀、洛伐他汀、匹伐他汀(以前稱作^"伐他汀)、普伐他汀、羅蘇伐他汀、和辛伐他汀，或在每種情況下，其可藥用鹽。優(yōu)選的HMG-Co-A還原酶抑制劑是那些已上市的藥物，最優(yōu)選的是氟伐他汀、阿托伐他汀、匹伐他汀或辛伐他汀或其可藥用鹽。制備HMG-Co-A還原酶抑制劑的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的且這些成分包括可商購(gòu)獲得的那些。HMG-CoA還原酶抑制劑可以其游離酸形式、其酯形式、或其可藥用鹽的形式使用。這些可藥用鹽包括例如，鈉鹽、釣鹽、和酯鹽。HMG-CoA還原酶抑制劑可以以消旋混合物、或更強(qiáng)活性的適當(dāng)?shù)牧Ⅲw異構(gòu)體的形式進(jìn)行使用。HMG-CoA還原酶抑制劑在人體中可以以抑制膽固醇的生物合成的有效量存在。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥物組合物包含基于組合物總重量的約5至約50的重量百分?jǐn)?shù)的HMG-CoA還原酶抑制劑。更優(yōu)選地，組合物包含基于組合物總重量的約20至約40的重量百分?jǐn)?shù)的HMG-CoA還原酶抑制劑。mTOR抑制劑是靶向于細(xì)胞內(nèi)mTOR("雷帕霉素的哺乳動(dòng)物靶向")的化合物。mTOR是磷脂酰肌醇3-激酶(PI3-激酶)相關(guān)的激酶的家族成員。雷帕霉素和雷帕霉素衍生物通過(guò)與其細(xì)胞內(nèi)受體FKBP12(FK506-結(jié)合蛋白12)形成的復(fù)合物來(lái)抑制mTOR途徑。雷帕霉素是一種已知的由吸水鏈霉菌屬(Streptomyceshygroscopicus)產(chǎn)生的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素。雷帕霉素衍生物表示具有mTOR抑制特性的取代的雷帕霉素，例如在位置40和/或16和/或32取代的雷帕霉素，例如式I化合物其中Rj為CH3或C3—6炔基，R2為H、-CH2-CH2-OH、3-羥基-2-(羥基甲基)-2-曱基-丙?；蛩倪蚧?，并且乂為=0、(H,H)或(H,OH)，條件是當(dāng)X為-0且R!為CH3時(shí)，則R2不為H，或者當(dāng)R2為-CH2-CH2-OH時(shí)，則為其前藥，例如其生理上可水解的醚。代表性的式I雷帕霉素衍生物例如有32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、40-[3-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基丙酸酯-雷帕霉素(還稱為0:1779)或40-表-(四唑基)-雷帕霉素(還稱為ABT578)。優(yōu)選的化合物例如為WO94/09010中的實(shí)施例8所公開(kāi)的40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素(下文稱為化合物A)，或者如WO96/41807中公開(kāi)的32-去氧代雷帕霉素或16-戊-2-炔基氧基-32(S)-二氫-雷帕霉素。雷帕霉素衍生物還可以包括例如WO98/02441和WO01/14387中公開(kāi)的所謂的rapalog，例如AP23573、AP23464、AP23675或AP23841。雷帕霉素衍生物的其它實(shí)例為以名稱TAFA-93、biolimus-7或biolimus-9所公開(kāi)的那些。已令人驚異地發(fā)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的藥物組合或組合物可用于治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣^f更化相關(guān)的病癥或疾病和與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體胂瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼瘡(SLE)、I型糖尿病等)、哞喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制。已令人驚異地發(fā)現(xiàn)，HMG-Co-A還原酶抑制劑特別是氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的組合比單獨(dú)施用氟伐他汀或匹伐他汀或mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物取得更大的治療效果(增強(qiáng)作用)。優(yōu)選地下面的試驗(yàn)部分進(jìn)行了l)包含匹伐他汀或其可藥用的鹽和40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素的組合，2)匹伐他汀單獨(dú)，和3)40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素單獨(dú)的研究。優(yōu)選地下面的試驗(yàn)部分進(jìn)行了1)包含氟伐他汀或其可藥用的鹽和40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素的組合，2)氟伐他汀單獨(dú)，和3)40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素單獨(dú)的研究。例如，代表性研究是用氟伐他汀和依維莫司的組合進(jìn)行的，例如使用以下方法學(xué)。我們已經(jīng)評(píng)價(jià)了依維莫司(40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素)單獨(dú)或與氟伐他汀或匹伐他汀組合的抗動(dòng)脈粥樣化血栓形成作用，最終目標(biāo)注重于與不同作用機(jī)制的藥物的所述組合的潛在的相加或協(xié)同作用的好處。家兔頸動(dòng)脈損傷動(dòng)脈粥樣血栓形成的試驗(yàn)才莫型為了研究動(dòng)脈粥樣血栓形成的潛在的藥理調(diào)節(jié)作用，基本上使用與在動(dòng)脈粥樣硬化及其血栓并發(fā)癥期間發(fā)生的許多事件相似的試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀Ｎ覀円呀?jīng)建立了基于通過(guò)手術(shù)插入軟的中空硅酮套環(huán)("套環(huán)模型")的家兔頸動(dòng)脈的血管周圍操作的動(dòng)脈粥樣化形成的體內(nèi)模型。該方法在兩周內(nèi)誘導(dǎo)以在完整內(nèi)皮存在下發(fā)生的SMC的遷移和增生為特征的可重現(xiàn)的增生性內(nèi)膜損傷。特別地，我們能夠檢測(cè)白細(xì)胞(T-淋巴細(xì)胞、PMN、單核細(xì)胞)粘附和滲入以及粘附分子諸如ICAM-1和VCAM-1的表達(dá)。在此模型中，通過(guò)透射電鏡，最近我們已經(jīng)觀察到了從前未知的中皮層內(nèi)多形核白細(xì)胞和SMC之間的相互作用，指的是伸入運(yùn)動(dòng)，與吞喧作用不同的細(xì)胞吞入其他細(xì)胞的活動(dòng)現(xiàn)象。前文描述的損傷可獨(dú)立于脂質(zhì)升高而獲得；但是，高膽固醇血癥對(duì)發(fā)生在該模型中的致動(dòng)脈粥樣化過(guò)程有一般性的有害影響，導(dǎo)致以豐富的ECM、脂質(zhì)沉積作用、和載膽固醇單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞為特征的更嚴(yán)重的和復(fù)雜的內(nèi)膜增厚。在最近十年間，我們能夠顯示數(shù)類藥物(例如，他汀類、鈣拮抗劑、載脂蛋白AI-Milano)抑制套環(huán)放置在健康和高膽固醇血癥動(dòng)物后發(fā)生的斑塊形成的能力，以及試驗(yàn)化合物的作用機(jī)制。特別是，我們證實(shí)了氟伐他汀或匹伐他汀能夠干擾通過(guò)基本作用(即HMG-CoA還原酶的抑制作用)干擾斑塊的形成。我們已經(jīng)證實(shí)了在高膽固醇血癥家兔血管周圍操作后(manuscriptinpreparation)頸動(dòng)脈壁處TF(組織因子)和MMP(基質(zhì)金屬蛋白酶)表達(dá)的上調(diào)作用和升高的膽固醇酯化速率。高TF表達(dá)賦予頸動(dòng)脈血栓形成前表現(xiàn)型，但是，氟伐他汀或匹伐他汀顯示出減弱動(dòng)脈粥樣硬化損傷的炎癥和促血栓形成的性質(zhì)。他汀類和動(dòng)脈粥樣硬化臨床試驗(yàn)已牢固地確立了HMG-CoA還原酶抑制劑在有或無(wú)冠狀動(dòng)脈疾病患者中可誘導(dǎo)血管動(dòng)脈粥樣硬化的消退以及心血管相關(guān)發(fā)病率和死亡率的下降。這些對(duì)冠狀動(dòng)脈事件的有益作用已一般地被歸功于他汀類的降膽固醇性質(zhì)。但是，因?yàn)槊阜磻?yīng)的產(chǎn)物甲羥戊酸鹽，不僅是膽固醇的還是許多非甾體類異戊二烯化合物的前體，HMG-CoA還原酶的抑制作用可導(dǎo)致多效作用。的確，甲羥戊酸鹽路徑產(chǎn)生對(duì)于種種細(xì)胞功能極其重要的一系列類異戊二烯。數(shù)種通過(guò)甲羥戊酸鹽衍化的類異戊二烯基團(tuán)共價(jià)連接修飾的翻譯后的蛋白質(zhì)，不論是法呢基或忙牛兒基忙牛兒基-焦磷酸酯已被鑒定。這些蛋白質(zhì)必須被異戊烯化作為膜結(jié)合的前提條件，這是其功能所需的。該家族成員涉及包括細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞分化和增殖、髓鞘形成、細(xì)胞骨架動(dòng)力學(xué)和內(nèi)吞/外吞轉(zhuǎn)運(yùn)的許多細(xì)胞過(guò)程。許多試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明他汀類通過(guò)HMG-CoA還原酶的抑制作用獨(dú)立于其降低膽固醇性質(zhì)，可影響涉及動(dòng)脈粥樣硬化損傷形成的數(shù)個(gè)過(guò)程。他汀類對(duì)臨床事件的有益作用可涉及修飾內(nèi)皮功能、炎癥響應(yīng)、循環(huán)脂蛋白的氧化修飾作用、泡沫細(xì)胞形成、平滑肌細(xì)胞激活、血管發(fā)生、斑塊穩(wěn)定性和血栓形成的非脂質(zhì)相關(guān)機(jī)制。他汀類的多效特性可能通過(guò)甲羥路徑的調(diào)節(jié)作用得到解釋，因?yàn)闀趿u戊酸鹽的饑餓作用(作為HMG-CoA還原酶被他汀類抑制作用的結(jié)果)對(duì)細(xì)胞功能有可延伸至降低膽固醇合成以外的后果。已獲得的數(shù)據(jù)證實(shí)了HMG-CoA還原酶抑制劑超出了其降低脂質(zhì)的性質(zhì)，對(duì)動(dòng)脈壁施加直接的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用可顯著地預(yù)防心血管病。^瘦押辦浙和動(dòng)^:游樣硬^雷帕霉素(西羅莫司)，大環(huán)內(nèi)酯類mTOR(雷帕霉素的哺乳動(dòng)物革巴)免疫抑制劑，通過(guò)在后期Gl期細(xì)胞周期的停止，抑制造血細(xì)胞和非造血細(xì)胞的生長(zhǎng)因子依賴的增殖作用。西羅莫司已顯示抑制血管SMC(平滑肌細(xì)胞)的體外增殖作用和遷移并影響球嚢損傷大鼠頸動(dòng)脈和豬冠狀動(dòng)脈的新內(nèi)膜生長(zhǎng)。更近的時(shí)間，西羅莫司包衣的支架顯示在28天抑制豬冠狀動(dòng)脈中支架內(nèi)新內(nèi)膜的生長(zhǎng)，并且已報(bào)道在人體西羅莫司洗脫支架令人印象深刻的初始結(jié)果(在210天0%再狹窄率)。與西羅莫司同族的口服活性免疫抑制劑和抗增殖化合物，依維莫司[40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素]，已顯示在預(yù)防腎臟和心臟移植排異作用中有前景的作用。依維莫司顯示對(duì)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞以及其他間質(zhì)來(lái)源的造血細(xì)胞和非造血細(xì)胞的增殖作用的強(qiáng)效的抑制作用。與西羅莫司相似，依維莫司的生物活性依賴于與親免素——FK506結(jié)合蛋白12(FKBP12)的結(jié)合。依維莫司-FKBP12復(fù)合物與mTOR，對(duì)細(xì)胞周期從G1至S期的i^艮必需的酪氨酸激酶的相互作用，之后鑒定為FRAP激酶。在數(shù)種試驗(yàn)動(dòng)物移植模型中，依維莫司延長(zhǎng)了同種異體移植物的存活時(shí)間，較新數(shù)據(jù)提示其可能有益于預(yù)防與慢性同種異體移植物功能障礙相關(guān)聯(lián)的血管病變。在心臟移植中使用依維莫司的經(jīng)驗(yàn)已提供了潛在重要的洞察在血管SMC和成纖維細(xì)胞上的抗增殖作用的結(jié)果，其中在接受依維莫司的患者中，通過(guò)血管內(nèi)冠狀動(dòng)脈超聲檢查鑒定內(nèi)膜擴(kuò)張得到了降低。這種作用呈現(xiàn)了潛在相關(guān)的另外的治療靼。在家兔模型中，以與用于免疫抑制的劑量相似的劑量口服依維莫司預(yù)防支架相關(guān)的新內(nèi)膜擴(kuò)張?？赡軐?duì)移植最有前景的是使用依維莫司用于首次心臟移植的接受者中獲得的結(jié)果，其中觀察到了同種異體移植物冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生率的顯著降低。斜研《4吏用四組動(dòng)物(每組10只動(dòng)物)無(wú)治療組(對(duì)照組)依維莫司(設(shè)定劑量在0.75-1.5mg/kg/d的范圍)氟伐他汀或匹伐他汀(設(shè)定劑量5mg/kg/d)依維莫司(i殳定劑量在0.75-1.5mg/kg/d的范圍)+氟伐他汀或匹伐他汀(設(shè)定劑量5mg/kg/d)。對(duì)這些動(dòng)物我們測(cè)定血漿脂質(zhì)特性(總膽固醇、HDL-膽固醇、甘油三酯)；頸動(dòng)脈中的脂質(zhì)積聚；涉及損傷形成的細(xì)胞過(guò)程，即SMC積聚和白細(xì)胞(特別是單核細(xì)胞/巨噔細(xì)胞、PMN、T-、淋巴細(xì)胞)浸潤(rùn)；粘附分子(VCAM-1、ICAM-1、和al整合蛋白)在內(nèi)皮細(xì)胞和SMC上的表達(dá)；對(duì)損傷并發(fā)癥和斑塊穩(wěn)定性關(guān)鍵的巨噬細(xì)胞功能，即MMP表達(dá)和活性；組織因子在動(dòng)^^員傷中的表達(dá)；膠原蛋白的沉積作用和重建；體外研究為了對(duì)依維莫司單獨(dú)或與氟伐他汀或匹伐他汀合并使用的抗動(dòng)脈粥樣血栓形成作用的分子機(jī)制獲得更進(jìn)一步的了解，使用培養(yǎng)的家兔和大鼠血管動(dòng)脈SMC和小鼠腹膜巨噬細(xì)胞。另外，使用代表脂蛋白代謝的外周和中央模型的人體皮膚成纖維細(xì)胞(HSF)和人體肝臟細(xì)胞系Hep-G2，最終目標(biāo)是評(píng)價(jià)依維莫司對(duì)脂蛋白代謝的作用。特別地，我們將評(píng)價(jià)試驗(yàn)藥物對(duì)以下的作用SMC增殖作用。該體外研究允許我們?cè)u(píng)價(jià)依維莫司+/-氟伐他汀或匹伐他汀的組合的潛在的加和或協(xié)同作用。將進(jìn)行等效線圖解分析以論述前面所述的該問(wèn)題52細(xì)胞脂蛋白代謝。該體外方法對(duì)研究依維莫司的高脂血癥作用的可能機(jī)制非常有用。更具體地，我們探索了依維莫司對(duì)在HSF和H印-G2中的脂蛋白分解作用和膽固醇的代謝的作用細(xì)胞膽固醇的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。我們研究了膽固醇合成、酯化作用和外流以對(duì)依維莫司單獨(dú)使用或與氟伐他汀或匹伐他汀合并使用對(duì)在血管細(xì)胞中脂質(zhì)代謝、內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定和沉積作用的影響的清晰圖畫(huà)MMP表達(dá)和活性。本研究對(duì)解釋依維莫司單獨(dú)使用或與氟伐他汀或匹伐他汀合并使用的一些潛在的抗動(dòng)脈粥樣硬化作用提供了大量資料。材料與方法試驗(yàn)設(shè)#-在高膽固醇血癥家兔中套環(huán)放置14天后評(píng)價(jià)試驗(yàn)藥物對(duì)套環(huán)誘導(dǎo)頸動(dòng)脈損傷的作用。家兔在血管周圍操作的當(dāng)天開(kāi)始通過(guò)口服管飼(依維莫司)或與飼料混合(氟伐他汀或匹伐他汀)接受藥物。高膽固醇血癥通過(guò)在套環(huán)插入前4周開(kāi)始施用富含膽固醇的伺料(1%膽固醇)。J^Mt^資^餘-在基線、手術(shù)、處死時(shí)，禁食過(guò)#從耳中央動(dòng)脈抽:^樣進(jìn)行脂質(zhì)分析。酶法測(cè)定總膽固醇、HDL-膽固醇、和甘油三酯水平。使用梯形法通過(guò)脂質(zhì)濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)計(jì)算脂質(zhì)的總體變化。JC4r話#「乙教裙錄膽萄辱乙應(yīng)橫移凝活'鉤和<膽庫(kù)寧舍量-ACAT活性基本上通過(guò)Helgerud法測(cè)定。頸動(dòng)脈環(huán)在含復(fù)合有牛血清的["C]-油?；o酶A(0.5^Ci/樣)的TRIS/蔗糖緩沖液中，在0.1MpH7.4的磷酸鉀緩沖液中勻化。37X:孵育2h后，通過(guò)加入5ml氯仿/甲醇(2:lv/v)停止反應(yīng)，提取脂質(zhì)。離心后，氯仿層在N;j流下干燥，為了測(cè)定主動(dòng)脈弓中膽固醇含量，遵循相同的方法，只是省去在反應(yīng)混合物中加入["C]-油?；o酶A。提取的脂質(zhì)通過(guò)薄層色鐠(".(;.)分離(異辛烷/二乙醚/乙酸，75:25:2，v/v/v)。通過(guò)液閃計(jì)數(shù)(Insta-Fluor，Packard,Groningen，荷蘭)測(cè)定斑塊中膽固醇放射或性，同時(shí)斑塊中的膽固醇含量通過(guò)酶法測(cè)定。我們檢驗(yàn)了該法在1.5和50飔之間膽固醇的線性(一=0.99)。每次測(cè)定中，加入pH]-膽固醇作為內(nèi)標(biāo)，回收率大于卯％。豕#脈源諒-雄性新西蘭白兔(2，7-3，0kg)通過(guò)肌肉注射甲苯瘞喚(5mg/kg)和氯胺酮(35mg/kg)麻醉。動(dòng)物仰臥放置并在頸部中線進(jìn)行切口手術(shù)暴露兩頸動(dòng)脈。非封閉地、生物惰性、軟的、中空硅橡膠套環(huán)(SILICOLLAR⑧，MediGeneOy,芬蘭庫(kù)奧皮奧)放置在兩根頸動(dòng)脈周圍。套環(huán)25mm長(zhǎng)并在相隔20mm的兩點(diǎn)接觸動(dòng)脈圓周。在每只動(dòng)物中，對(duì)照組的頸動(dòng)脈通過(guò)在動(dòng)脈周圍放置套環(huán)但僅在縫合傷口前去除套環(huán)進(jìn)行假手術(shù)。在研究結(jié)束時(shí)，動(dòng)物通過(guò)施用致死i.v劑量的烏拉坦(IOml，25。/。水溶液)處死，并從頸動(dòng)脈收集樣本，對(duì)不同的分析方法按照適當(dāng)方法處理樣本。遂歡夢(mèng)-在剛剛處死后頸動(dòng)脈切片易于解剖和切除。動(dòng)脈被冷凍或石蠟包埋，并橫向切以便獲得5口m系列切片。組織用蘇木素-伊紅染色以通過(guò)形態(tài)測(cè)定分析鑒定和定量血管結(jié)構(gòu)。以下參數(shù)用計(jì)算機(jī)輔助圖像分析(OPTIMAS6.2，MediaCybernetics,SilverSpring,MD，美國(guó))進(jìn)行測(cè)定腔體面積(L),被內(nèi)部彈性層圍繞的面積(IEL)，和被外部彈性層圍繞的面積(EEL)。然后計(jì)算以下參數(shù)(3)內(nèi)膜面積=1=IEL-L;(b)中層面積-M-EEL-IEL;和(c)內(nèi)膜與中層的比值=I/M。另外的切片用picrosirius紅染料染色以標(biāo)記膠原蛋白。損傷內(nèi)的picrosiriuu紅正性區(qū)域用計(jì)算機(jī)輔助顏色圖像分析進(jìn)行測(cè)定。祐餘為^f(TC43f-、/C4Af-J和a/整合蛋勿在力發(fā)細(xì)應(yīng)和SMCJ:^這的瘦逸歡夢(mèng)檢浙-在內(nèi)膜頸動(dòng)脈損傷中細(xì)胞粘附分子的識(shí)別使用ICAM-1、VCAM-1(R&D系統(tǒng))、和al整合蛋白(Chemicon)的抗體進(jìn)行。按照標(biāo)準(zhǔn)方法頸動(dòng)樂(lè)M黃切片用特異性初級(jí)抗體孵育，然后用生物素化種特異小生第二抗體(VectorLaboratoriesInc.，Burlingame,美國(guó)力口州)賻育。用親和素-生物素-過(guò)氧化物酶試劑盒(VectastainABCElite,VectorLaboratoriesInc.)再用3，3-二^J^聯(lián)苯(Sigma)進(jìn)行標(biāo)記。陰性對(duì)照省略了初級(jí)抗體的陰性對(duì)照，且切片將用正常馬血清孵育。損傷內(nèi)部的VCAM-1、ICAM-1和al整合蛋白陽(yáng)性區(qū)域使用計(jì)算機(jī)輔助顏色圖像分析進(jìn)行測(cè)定。^諒^部卓y,細(xì)應(yīng)餘i時(shí)^逸敘敏和T淋￡細(xì)應(yīng)積果舉^的定量#浙-使用所有白細(xì)胞的標(biāo)記物抗體(anti-CD18、Serotec)、聚多形核細(xì)胞(PMN)(多核中性粒細(xì)胞)(MCA805，Serotec)、單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞(RAM11、DAKO)和T淋巴細(xì)胞(抗-CD5，Serotec)按照以下標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行浸潤(rùn)內(nèi)膜頸動(dòng)脈損傷的白細(xì)胞亞類的識(shí)別組織切片將用特異性初級(jí)抗體孵育，然后用生物素化種特異性第二抗體(VectorLaboratoriesInc.)孵育。用親和素-生物素-過(guò)氧化物酶試劑盒(VectastainABCElite,VectorLaboratoriesInc.)再用3，3-二氨基聯(lián)苯(Sigma)進(jìn)行標(biāo)記。陰性對(duì)照省略了初級(jí)抗體的陰性對(duì)照，且切片將用正常馬血清孵育。分別識(shí)別為CD18-、MCA805-、RAMll-和CD5-陽(yáng)性區(qū)域的損傷內(nèi)部的總白細(xì)胞、PMN、單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞區(qū)域，使用計(jì)算機(jī)輔助顏色圖像分析進(jìn)行測(cè)定。種！瘦邀織^#檢刺承組織^于蛋^^^的定##浙-為了組織因子的免疫組織化學(xué)檢測(cè)，預(yù)消化的組織切片用特異性小鼠抗家兔組織因子抗體(AP-1)孵育，然后與生物素化馬抗小鼠IgG第二抗體(VectorLaboratoriesInc.)孵育。用親和素-生物素-過(guò)氧化物酶試劑盒(VectastainABCElite,VectorLaboratoriesInc.)再用3，3畫(huà)二^J^聯(lián)苯(Sigma)按照標(biāo)準(zhǔn)ABC法(Vector)進(jìn)行標(biāo)記。陰性對(duì)照省略了初級(jí)抗體，且切片將用正常馬血清孵育。組織因子免疫陽(yáng)性內(nèi)膜區(qū)域的程度用計(jì)算機(jī)輔助顏色圖像分析進(jìn)4亍測(cè)定。#7^尸^這和話^的為、浙-不同MMP的分布通過(guò)免疫組織化學(xué)進(jìn)行評(píng)價(jià)。切片用初級(jí)單克隆抗體(Amersham-Pharmacia-Biotech,英國(guó))孵育然后用生物素化種特異性第二抗體(VectorLaboratoriesInc.)孵育。標(biāo)記將用FITC-偶聯(lián)extrAvidin進(jìn)行。用抗-MMP抗體和細(xì)胞特異性抗體(用于SMC的抗-gc肌動(dòng)蛋白、用于內(nèi)皮細(xì)胞的抗-CD31和用于白細(xì)胞的抗-CD18)進(jìn)行系列切片的免疫染色以識(shí)別負(fù)責(zé)不同MMP的表達(dá)的占據(jù)優(yōu)勢(shì)的細(xì)胞類，。在家兔頸動(dòng)脈的組織勻漿中的MMP活性通過(guò)明膠凝膠酶鐠法測(cè)定。斜鄉(xiāng)勿應(yīng)^庠^凝^-通過(guò)用磷酸鹽緩沖液(PBS)腹腔灌洗從給予3ml腹膜內(nèi)注射4%硫膠質(zhì)水溶液的小鼠收集小鼠皿巨噬細(xì)胞(MPM)。將MPM沉淀，用無(wú)血清的Dulbecco改進(jìn)的Eagle(DME)培養(yǎng)液洗滌兩次，并以3x106細(xì)胞/35mm皿的密度鋪板，并允許在含10。/。胎牛血清(FBS)的DME培養(yǎng)液中吸附到培養(yǎng)臟中2h。然后板子用DME培養(yǎng)液洗滌三次以去除未吸附的細(xì)胞，并在含10。/。FBS的DME培養(yǎng)液中孵育直至試驗(yàn)當(dāng)天。人體皮膚成纖維細(xì)胞(HSF)是從血脂正常的臨床健康個(gè)體中獲得的皮膚活組織檢查的分離塊生長(zhǎng)起來(lái)的。成纖維細(xì)胞以受體介導(dǎo)的LDL結(jié)合、細(xì)胞內(nèi)4聶作用和降解為特征。細(xì)胞以單層方式生長(zhǎng)，并保持在75ci^塑料瓶中、37"C、在95%空氣、5%<:02增濕的氣氛中、在補(bǔ)充了10。/。FCS、非必需M酸溶液(1。/。，v:v)、青霉素(100U/ml)、鏈霉素(100ug/ml)、三(羥甲基)甲基甘氨酸緩沖溶液(20mM，pH7.4)、NaHC03(24mM)的F-ll培養(yǎng)液中。對(duì)于所有試驗(yàn)，來(lái)自培養(yǎng)瓶的細(xì)胞用0.05。/。胰蛋白酶-0.02。/。EDTA在融合(5至15傳代)解離、接種至35mm塑料培#^(僅在達(dá)到細(xì)胞覆蓋之前使用1-1,5x105細(xì)胞用于結(jié)合攝取和降解試驗(yàn),通常在鋪板后的6天，每2-3天更換培養(yǎng)液。為了膽固醇和脂肪酸合成的測(cè)定，細(xì)胞接種在35mm塑料培養(yǎng)臟中(7.5xl05細(xì)胞)，并用補(bǔ)充10%FCS的MEM孵育。24h后培養(yǎng)液換成含有10%LPDS的培養(yǎng)液，且培養(yǎng)物孵育24h。在此時(shí)(時(shí)間0)培養(yǎng)液換成含有已知濃度的試驗(yàn)化合物存在和不存在的10%LPDS的培養(yǎng)液，孵育在37'C下再持續(xù)72h。通過(guò)測(cè)定加入的["C醋酸酯^到細(xì)胞固醇的量估計(jì)膽固醇的合成29。人體肝細(xì)胞系H印-G2代表脂蛋白代謝的中央模型，從美國(guó)菌種保藏中心獲得，以單層方式生長(zhǎng)，并照對(duì)HSF的描述，培養(yǎng)液加入O.llg/1丙酮酸鈉培養(yǎng)。對(duì)于所有試驗(yàn)，細(xì)胞接種在35mm亞中(3-5x105細(xì)胞)在2ml含10%FCS的培養(yǎng)液中，并在鋪板后6天使用。SMC從雄性SpragueDawley大鼠的主動(dòng)脈或雄性新西蘭白兔的頸動(dòng)脈內(nèi)膜-中膜層分離。細(xì)胞在補(bǔ)充以10。/。(v/v)的胎牛血清(FCS)、100U/ml青霉素、0.1mg/ml鏈霉素、20mM的三(羥甲基)甲基甘氨酸緩沖溶液和1。/。(v/v)非必需氨基酸溶液的MEM中生長(zhǎng)。使用第4和第10傳代之間的細(xì)胞。鑒定SMC的生長(zhǎng)行為、形態(tài)學(xué)，并使用對(duì)a-肌動(dòng)蛋白有特異性的單克隆抗體(Sigma，MO，美國(guó))。勿應(yīng)增崖#>^-大鼠SMC以每只培^(35mm)2x105個(gè)細(xì)胞的密度接種并用補(bǔ)充有10%FCS的MEM孵育。24小時(shí)后，換以含0.4%FCS的培養(yǎng)液以停止細(xì)胞生長(zhǎng)，培養(yǎng)物孵育72h。在此時(shí)間(O時(shí)間)后培養(yǎng)液用作為促有絲分裂刺激物的含10%FCS及不同濃度的試驗(yàn)化合物的培養(yǎng)液替換。在零時(shí)間，僅在加入藥物之前，使用3只培養(yǎng)贓用于細(xì)胞計(jì)數(shù)。在孵育3天后通過(guò)庫(kù)爾特計(jì)數(shù)器評(píng)價(jià)細(xì)胞數(shù)量。對(duì)于培養(yǎng)皿的每組進(jìn)行細(xì)胞周期素D和PCNA的免疫印跡分析。在另一套試驗(yàn)中，細(xì)胞周期的SMC至G0/G1間期的同步化伴隨著在含0.4%FCS的培養(yǎng)液中孵育對(duì)數(shù)增長(zhǎng)的培養(yǎng)物(2xi05個(gè)細(xì)胞/板)96-120h。休眠細(xì)胞在試驗(yàn)藥物存在的10%FCS新鮮培養(yǎng)液孵育20h。然后通過(guò)["H]胸苷的核加入，與細(xì)胞(liuCi/ml培養(yǎng)液)孵育2小時(shí)估計(jì)DNA的合成。用水溶膠液閃混合液(Packard，Groningen，NL)測(cè)定放射活性。家兔SMC以每只培^^(35mm)2x105個(gè)細(xì)胞的密度接種，并用補(bǔ)充有10%FCS的MEM孵育。18個(gè)小時(shí)后培養(yǎng)液換以含0.4。/。FCS的培養(yǎng)液以停止細(xì)胞生長(zhǎng)，培養(yǎng)物孵育48h。在此時(shí)間(O時(shí)間)后換以含10%FCS和不同濃度化合物的培養(yǎng)液。在零時(shí)間，即將加入藥物之前，使用一些皿用于細(xì)胞計(jì)數(shù)。在孵育1-7天后通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)評(píng)價(jià)細(xì)胞生長(zhǎng)。在單層胰酶消化后用庫(kù)爾特計(jì)數(shù)器測(cè)定細(xì)胞數(shù)量。如所描述繪出等效應(yīng)曲線。冷卻表達(dá)細(xì)胞周期素D和PCNA的細(xì)胞單層，用冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌，刮在含蛋白酶抑制劑混合物(BoehringerMannheim)的PBS中的細(xì)胞并離心(2000rpm，10min)。然后細(xì)胞團(tuán)溶解入80fAl的樣品緩沖液(3%SDS，62.5nMTRIS-HCl，pH=6.85%j3-巰基乙醇，10%甘油)中。10-25|ag的蛋白在12%聚丙烯酰胺或在5-20%梯度:^對(duì)PCNA和細(xì)胞周期素D分別進(jìn)行電泳。樣品被電泳轉(zhuǎn)移至聚偏二氟乙烯膜并用抗細(xì)胞周期素D的家兔多克隆抗體或用抗PCNA的單克隆抗體孵育。用過(guò)氧化物酶結(jié)合物標(biāo)記的驢抗家兔和家兔抗小鼠免疫球蛋白檢測(cè)抗體。過(guò)氧化物酶活性用ECLplus(Amersham)展現(xiàn)。細(xì)胞周期素D和PCNA表達(dá)的改變通過(guò)蛋白質(zhì)印跡的密度掃描進(jìn)行評(píng)價(jià)，并表示為對(duì)照條件(10。/。FCS)的平均百分?jǐn)?shù)。MM尸^這々法'^-MMP表達(dá)使用人體MMP的特異性抗體通過(guò)細(xì)胞^f培養(yǎng)液的蛋白質(zhì)印跡分析進(jìn)行評(píng)價(jià)。MMP活性通過(guò)明膠凝膠酶鐠法測(cè)定。效應(yīng)凝厥^謬法-有蛋白水解活性的蛋白質(zhì)在非還原條件和無(wú)沸騰下通過(guò)含10%SDS和明膠(lmg/ml)的7.5%聚丙烯酰胺凝膠電泳進(jìn)行鑒定。然后在37"C下用含NaCl150mM,CaCl2lOmM，ZnCl21口M的pH7.5的TRIS50mMoi/1中輕輕振搖孵育過(guò)夜，以激活金屬蛋白酶消化底物的能力。在孵育結(jié)束時(shí)，凝膠用考馬斯藍(lán)染色。藍(lán)色背景下的清晰區(qū)帶表明蛋白水解活性的存在。f冷伊逐為Vf—每份條件培養(yǎng)液(每個(gè)泳道40pl)在非還原條件下在含SDS的10。/。聚丙烯酰胺凝膠上進(jìn)行(Bellosta等人，1998)。蛋白印跡在硝化纖維素膜(Bio-RadLaboratories,意大利米蘭)上，并使用小鼠單克隆抗體抗小鼠MMP-9(R&D)識(shí)別。^J&清;^瞎f冷^乏的j&潢一脂蛋白從臨床健康的正常血脂志愿者的血漿制備。LDL(d1.019-1.063g/ml)通過(guò)連續(xù)制備超離心分離并用1251^^(匕。在制備后三天內(nèi)使用放射性LDL并在與細(xì)胞一起孵育之前通過(guò)Millipore濾器(0.22]Lim孔徑M吏其滅菌。丄D/:潛合凝取^攀摔一融合細(xì)胞在37X:含10%人體LPDS的培養(yǎng)液中預(yù)孵育48h。在用脂蛋白缺乏的培養(yǎng)液24h預(yù)處理用以在試驗(yàn)化合物存在或不存在下上調(diào)LDL受體活性后，每層將接受lml新鮮培養(yǎng)液。1251-標(biāo)記LDL加至最終濃度為7.5將/ml，且細(xì)胞在37X:、脂蛋白缺乏的培養(yǎng)液中、或在4。C含10%脂蛋白缺乏血清的培養(yǎng)液A(補(bǔ)充以10mM的Hepes緩沖液)孵育4h。然后細(xì)胞再放置于冰上并用冰凍的含0.2。/。牛血清白蛋白的pH7.4磷酸鹽緩沖液洗滌三次，用冰凍的磷酸鹽緩沖液洗滌三次。在4'C的預(yù)追蹤處理。細(xì)胞層還通過(guò)在4。C在含10。/。缺乏脂蛋白的血清的培養(yǎng)液A中孵育進(jìn)一步洗滌。在某些試驗(yàn)中在暴露于肝素鈉的追蹤前(10mg/ml肝素鈉4°C60min)去除受體結(jié)合的LDL。該培養(yǎng)液的一份用于分析其125I含量(可釋放的肝素)。在所有預(yù)追蹤處理后，細(xì)胞用磷酸緩沖液在4。C再洗滌兩次。在37"C的追蹤，細(xì)胞接受2ml的缺乏脂蛋白培養(yǎng)液。對(duì)于在4。C的追蹤，細(xì)胞暴露于冰凍的含10。/。缺乏脂蛋白血清的培養(yǎng)液A并保持在冰上面。在2h追蹤期后，去除培養(yǎng)液并保留用于分析(見(jiàn)下文)。細(xì)胞層用磷酸鹽緩沖液洗滌三次，通過(guò)37。ClNNaOH的過(guò)夜孵育溶解細(xì)胞。等份的溶解層計(jì)數(shù)以測(cè)定1251-放射性相關(guān)細(xì)胞，且按照Lowry法使用等份用于細(xì)胞蛋白質(zhì)的評(píng)估。培#差為、"#一0.31111100%三氯醋酸加至2ml培養(yǎng)液中。在冰上靜置30min后，1000xg離心30min收集沉淀，團(tuán)塊計(jì)數(shù)用于1251-標(biāo)記的三氯醋酸可沉淀物質(zhì)含量測(cè)定。酸上清液lml計(jì)數(shù)用于測(cè)定總的三氯醋酸可溶解的放射性，然后用于非碘的三氯活性測(cè)定。萄寧的^S戎一通過(guò)加入到細(xì)胞固醇中的放射活性醋酸酯的測(cè)量測(cè)定膽固醇的合成。細(xì)胞單層，在與[2-"C醋酸酯(lj^Ci/ml)賻育24h后，用PBS洗滌，并用O.lMNaOH消化。等份在60。C在氫氧化鈉乙醇溶液中在加入[1，2(n)^H]膽固醇作為內(nèi)標(biāo)(0.04jiCi/樣)后進(jìn)行皂化。非皂化材料用低沸點(diǎn)石油醚萃取并進(jìn)行放射性計(jì)數(shù)。為了評(píng)價(jià)進(jìn)入細(xì)胞固醇的標(biāo)記的醋酸酯，從非皂化部分通過(guò)薄層色i普用石油醚(沸點(diǎn)，40-60。C)/二乙醚/醋酸(70:30:l)分離出這些物質(zhì)。放射性用Insta-Fluor液閃混合液(Packard，意大利米蘭)進(jìn)行測(cè)定。脂肪酸合成一石油醚提取的7jC相加在一起，用濃HC1酸化，并用石油醚萃取三次。然后加在一起的有樹(shù)目揮干，重混懸于含100照亞油酸作為載體的氯仿中，并在硅膠G上以庚烷/二乙^/醋酸組成為溶劑系統(tǒng)進(jìn)行薄層色譜分離，并如前文所述定量用于膽固醇"C-酯的測(cè)定。數(shù)據(jù)以加入到每mg總的細(xì)胞蛋白質(zhì)的"C脂肪酸的["C醋酸酯的皮摩爾數(shù)表示。應(yīng)萄舉凝必為、浙0C4r浮'/^):細(xì)胞按指示的方法用試驗(yàn)藥物和AcLDL(50照/ml)孵育。在加入與牛血清白蛋白復(fù)合的l-"C]油酸(0.68inCi/樣本)后在孵育最后2h期間測(cè)定膽固醇酯化，接下來(lái)測(cè)定與細(xì)胞膽固醇酯相關(guān)的放射性。在孵育結(jié)束時(shí)，細(xì)胞用PBS洗滌，脂質(zhì)用己烷/異丙醇(3:2)提取。提取的脂質(zhì)用TLC(異辛烷/二乙^/醋酸，75:25:2，v/v/v)分離。在斑點(diǎn)中的膽固醇》文射性用液閃計(jì)數(shù)測(cè)定。萄寧和廯萄攀^A—細(xì)胞在24孑L板中生長(zhǎng)直至80%融合。通過(guò)加入30照/ml卩H]-乙?；疞DL24h，或，加入有30照/ml乙?；疞DL的3|iCi/ml[1，2-311]膽固醇至放射標(biāo)記的細(xì)胞膽固醇24小時(shí)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行標(biāo)記。然后細(xì)胞用有或無(wú)HDL或apoAI的含0.2%BSA的培養(yǎng)液孵育18h。鍵^夢(mèng)一為了確保無(wú)偏差的結(jié)果，以盲的方式收集形態(tài)學(xué)數(shù)據(jù)。樣本在所有數(shù)字?jǐn)?shù)據(jù)獲得后歸其各自的治療組。數(shù)據(jù)以均值土SD表示。組間差異在單向ANOVA評(píng)價(jià)之后進(jìn)行未配對(duì)Student'st檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性指定在95%置信水平(尸<0.05)。已經(jīng)令人驚異地發(fā)現(xiàn)，氟伐他汀或其可藥用的鹽與依維莫司(40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素)的組合在預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化方面實(shí)現(xiàn)更大的治療效果(增強(qiáng)作用)。更一般地，亦令人驚異地發(fā)現(xiàn)，HMG-Co-A還原酶抑制劑特別是氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽與mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的組合在預(yù)防或治療動(dòng)脈粥樣硬化方面可獲得更大的治療效果(增強(qiáng)作用)。根據(jù)本發(fā)明的組合亦令人驚異地改善了癥狀且改進(jìn)了副作用例如肌肉毒性。更大的有效性亦可通過(guò)作用持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng)得到證明。作用的持續(xù)時(shí)間可用在下個(gè)劑量前回到基線的時(shí)間或曲線下面積(AUC)監(jiān)控，并且AUC表示為血壓的毫米汞柱變化(mmHg變化)和效應(yīng)持續(xù)時(shí)間(分鐘、小時(shí)或天)的乘積。更進(jìn)一步的益處是，根據(jù)本發(fā)明，可使用較低劑量的被組合使用的單個(gè)藥物以降低劑量，例如所需劑量不僅常常較小，而且應(yīng)用也不頻繁，或可用于降低副作用的發(fā)生率。優(yōu)選的是HMG-Co-A還原酶抑制劑和mTOR抑制劑的低劑量的組合。HMG-Co-A還原酶抑制劑特別是氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用的鹽和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素的組合施用導(dǎo)致更大百分?jǐn)?shù)的被治療患者的顯著響應(yīng)，即更大響應(yīng)者率的結(jié)果，而不論作為病癥^^出的病源學(xué)。這與被治療的患者的愿望和要求是一致的?？梢燥@示氟伐他汀或匹伐他汀和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的組合治療通過(guò)改進(jìn)有效性以及更大的響應(yīng)者率導(dǎo)致HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣^更4匕相關(guān)的病癥或疾病和inTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病的更有效的治療。還可顯示氟伐他汀或匹伐他和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的組合治療由于HMG-Co-A還原酶抑制劑治療證實(shí)在副作用的降低方面有益處，例如，毒性的降低。因此，在本說(shuō)明書(shū)中，術(shù)語(yǔ)"治療"指預(yù)防性或防止性治療以及治愈性或疾病緩和性治療，包括對(duì)具有罹患疾病的危險(xiǎn)或被懷疑已經(jīng)罹患疾病的患者以及患病的或已被確診為患有疾病或醫(yī)學(xué)病癥的患者的治療。本發(fā)明的活性劑，即HMG-Co-A抑制劑或貝特類藥物優(yōu)選地以藥物制劑的形式使用，所述藥物制劑含有相關(guān)的治療有效量的各活性成分(分開(kāi)的或組合的)，并任選地含有與其一起的或與其混合的適于施用的無(wú)機(jī)或有機(jī)的固體或液體的可藥用載體。本發(fā)明的藥物可以以同一藥物組合物的形式存在，但是優(yōu)選地以分開(kāi)的藥物組合物的形式存在。因此，活性成分可以在相同時(shí)間(例如同時(shí))或在不同時(shí)間(例如相繼)凈皮施用以及在不同的時(shí)間段被施用，所述的不同的時(shí)間段可以是相互分開(kāi)的或重疊的。單位劑量形式也可以是固定組合。優(yōu)選地，藥物組合物適于口服或胃腸外(特別是口服)施用。靜脈內(nèi)和口服施用、首要的是口服施用被認(rèn)為特別重要。本發(fā)明的藥物組合物可以以本身已知的方法制備并且是適于腸內(nèi)如口服、直腸、氣霧吸入或鼻腔施用以及胃腸外如靜脈內(nèi)或皮下施用的那些，或者是用于經(jīng)皮施用(例如4皮動(dòng)或離子電滲)于包括人在內(nèi)的哺乳動(dòng)物(溫血?jiǎng)游?的組合物。此類組合物包含單獨(dú)的或與一種或多種可藥用載體、特別是適于腸內(nèi)或胃腸外應(yīng)用的可藥用載體組合的治療有效量的藥理學(xué)活性化合物。典型的口服制劑包括片劑、膠嚢劑、糖漿劑、酏劑和混懸劑。典型的注射用制劑包括溶液劑和混懸劑?？梢詫⑵瑒┎鹏迵?jù)本領(lǐng)域已知的方法包薄膜衣或包腸溶衣。優(yōu)選的是片劑和明膠膠嚢，其包含活性成分以及a)稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纖維素和/或甘氨酸；b)潤(rùn)滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、其鎂或鈣鹽和/或聚乙二醇；對(duì)于片劑，還有c)粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、西黃蓍膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和或聚乙烯吡咯烷酮；如果需要，還有d)崩解劑，例如淀粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽或泡騰混合物；和/或e)吸收劑、著色劑、矯味劑和甜味劑。注射用組合物優(yōu)選地是等滲水溶液或混懸液，栓劑可以有利地由脂肪乳或混懸液來(lái)制備。所述組合物可以被滅菌和/或含有輔劑，如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑或乳化劑、溶解促進(jìn)劑(solutionpromotor)、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。另外，它們還可以含有其它有治療價(jià)值的物質(zhì)。所述組合物是分別根據(jù)常規(guī)的混合、制?；虬路椒ㄖ苽涞?，并且含有約0.1至85%、優(yōu)選約1至70%的活性成分。用在上述制劑中的典型的可藥用載體的實(shí)例有糖類，如乳糖、蔗糖、甘露醇和山梨醇；淀粉類，如玉米淀粉、木薯淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素和其衍生物，如羧曱基纖維素鈉、乙基纖維素和甲基纖維素；磷酸釣類，如磷酸二铞和磷酸三鈣；硫酸鈉；硫酸釣；聚乙烯吡咯烷酮；聚乙烯醇；硬脂酸；堿土金屬硬脂酸鹽，如硬脂酸鎂和硬脂酸釣；硬脂酸；植物油，如花生油、棉子油、t眛油、橄欖油和玉米油；非離子型、陽(yáng)離子型和陰離子型表面活性劑；乙二醇聚合物；p環(huán)糊精；脂肪醇；和水解的谷類固體，以及藥物制劑中常用的其它無(wú)毒的相容性填充劑、粘合劑、崩解劑、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、潤(rùn)滑劑、矯味劑等。用于腸內(nèi)和胃腸外施用的藥物制劑有例如劑量單元形式的那些，如糖衣丸、片劑或膠嚢劑以及安瓿劑。它們是通過(guò)本身已知的方法制備的，例如通過(guò)常規(guī)的混合、制粒、成型、溶解或凍干方法制備。例如，用于口服施用的藥物制劑可以通過(guò)以下方法獲得將活性成分與固體載體混合，如果合適，將所得的混合物制粒，并且如果需要或必需，在加入適宜的輔劑后將混合物或顆粒加工成片劑或糖衣丸的芯。其它可口服施用的藥物制劑有由明膠制成的干填充膠嚢，還有由明膠和增塑劑如甘油或山梨醇制成的密封軟膠嚢。干填充膠嚢可以含有顆粒形式的活性成分，例如與填充劑如乳糖、粘合劑如淀粉和/或助流劑如滑石粉或硬脂酸鎂混合的并且如果合適與穩(wěn)定劑混合的活性成分。在軟膠嚢中，活性成分優(yōu)選地溶解或混懸在適宜的液體如脂肪油、石蠟油或液體聚乙二醇中，還可能加入穩(wěn)定劑。胃腸外制劑特別是以各種方式如靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、皮內(nèi)或皮下有效的注射用液體。此類液體優(yōu)選是可在使用前制備的等滲水性溶液或混懸液，例如由含有單獨(dú)的或與可藥用載體一起的活性成分的凍干制劑制備的等滲水性溶液或混懸液。藥物制劑可以被滅菌和/或含有輔劑，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤(rùn)劑和/或乳化劑、增溶劑、調(diào)節(jié)滲透壓的鹽和/或緩沖劑。用于經(jīng)皮應(yīng)用的適宜制劑包含有效量的本發(fā)明的化合物和載體。有利的載體包括幫助通過(guò)接受主體皮膚的可吸收的藥理學(xué)上可接受的溶劑。例如，經(jīng)皮裝置是繃帶的形式，其包括背襯層、含有化合物并任選地含有載體的貯庫(kù)，任選地包括在延長(zhǎng)的一段時(shí)間中將化合物以控制的和預(yù)定的速度遞送至接受主體皮膚的控速屏障，以及將該裝置固定于皮膚的構(gòu)件。用于局部應(yīng)用、例如局部應(yīng)用于皮膚和眼的適宜制劑包括水溶液、混懸液、軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑或可噴霧制劑例如用于通過(guò)氣霧劑遞送的可噴霧制劑等。例如，藥物制劑包含約0.1-90%、優(yōu)選約1%至約80%的活性化合物。用于腸內(nèi)或胃腸外施用的藥物制劑是例如單位劑量形式，如包衣片、片劑、膠囊劑或栓劑以及安瓿劑。這些制劑是以本身已知的方法制備的，例如使用常規(guī)的混合、制粒、包衣、溶解或冷凍干燥方法制備。因此，用于口服使用的藥物制劑可以通過(guò)以下方法獲得將活性化合物與固體賦形劑混合，如果需要，將已經(jīng)獲得的混合物制粒，并且如果需要或必需，在加入適宜的輔助物質(zhì)后將混合物或顆粒加工成片劑或包衣片的芯?；钚曰衔锏膭┝靠扇Q于多種因素，如施用方式、恒溫動(dòng)物的物種、年齡和/或個(gè)體狀況。本發(fā)明的藥物組合的活性成分的優(yōu)選劑量是治療有效劑量，特別是可商購(gòu)獲得的那些。氟伐他汀以適當(dāng)?shù)膭┝繂挝恍问焦?yīng)，例如，膠嚢或片劑，并包含治療有效量例如從約20mg至約80mg應(yīng)用于患者。活性成分的應(yīng)用最多可達(dá)每日三次，開(kāi)始時(shí)例如每日劑量20mg或每日40mg，增加經(jīng)由每日40mg，進(jìn)一步至每日80mg。優(yōu)選地，氟伐他汀每日施用一次或每日兩次，劑量為80mg或40mg劑量每日兩次?？刹捎玫南鄳?yīng)劑量例如在早晨、中午或晚上。氟伐他汀的每日劑量應(yīng)當(dāng)隨各種因素而改變，例如選擇的化合物、要治療的個(gè)別的病癥和所需的效果。但是一般地，在氟伐他汀以每天20-80mg/kg的數(shù)量級(jí)的每日劑量施用實(shí)現(xiàn)滿意的結(jié)果。優(yōu)選的每日劑量范圍約為20-40mg/d作為單劑量或分割劑量。氟伐他汀可以任何傳統(tǒng)的途徑施用，特別是腸內(nèi)例如口服，例如以片劑、膠嚢、飲用溶液的形式；或腸道外，例如以可注射溶液或混懸液的形式。用于口服施用的適當(dāng)?shù)膯挝粍┝啃问桨瑥募s20mg活性成分通常為40mg例如氟伐他汀連同一種或多種可藥用稀釋劑或載體。mTOR抑制劑的日用劑量當(dāng)然地隨各種因素而改變，例如選擇的化合物、要治療的個(gè)別病癥及所需的效果。但是一般地，是以約0.01至5mg/kg/d數(shù)量級(jí)的日用劑量，特別是0.5至5mg/kg/d，以單劑量或分割劑量的形式施用mTOR抑制劑獲得滿意的結(jié)果。優(yōu)選的日用劑量范圍是約0.1至30mg以單劑量或分割劑量的形式。mTOR抑制劑例如化合物A可以任何傳統(tǒng)途徑特別，內(nèi)例如口服、例如以片劑、膠囊、飲用溶液的形式；或腸道外例如可注射溶液或混懸液的形式施用。用于口服施用的適當(dāng)?shù)膯挝恢苿┬问桨黕^從約0.05至15mg活性成分，通常為0.25至10mg例如化合物A連同一種或多種可藥用稀釋劑或載體。雷帕霉素或其衍生物以根據(jù)本發(fā)明的用途所需的劑量可被良好地耐受。例如，化合物A4周毒性研究的NTEL，大鼠是0.5mg/kg/d，猴子是1.5mg/kg/d。相關(guān)領(lǐng)域技術(shù)人員完全能夠選擇適當(dāng)?shù)脑囼?yàn)?zāi)Ｐ鸵宰C實(shí)本發(fā)明的組合在上文和下文中表明的治療適應(yīng)癥中的功效。以下實(shí)施例闡述了以上所述的發(fā)明，但是目的不是為了以任何方式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例A)氟伐他汀制劑的實(shí)施例<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表3—在來(lái)適TWmg應(yīng)襲的逸A<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>滑石粉18.860微晶纖維素，細(xì)粉48.000-縱晶纖維素，顆粒狀粉末66.440玉米淀粉，物理改性的83.800碳酸鉤125.680匹伐他汀制劑的實(shí)施例(實(shí)施例1至7)實(shí)施例1芯(相對(duì)于片芯重量的百分?jǐn)?shù))4.18mg(5.225。/。重量)的藥物物質(zhì)，例如匹伐他汀鈣鹽，42.82mg(53.525。/。重量)的微晶纖維素，4mg(5%ff)的HPMC(3cps),25mg(31.25。/o重量)的HPMC(100cps)，3.2mg(4。/o重量)的Neusilin，外相包含0.4mg(0.5。/。重量)的膠態(tài)二氧化珪和0.4mg(0.5。/。重量)的硬脂酸鎂。HPMC副衣層(非功能衣層)(相對(duì)于副衣層重量的百分?jǐn)?shù))2.856mg(71.4。/。重量)的羥丙基甲基纖維素3cps，0.286mg(7.15Y。重量)的聚乙二醇，0.286mg(7.15。/。重量)的滑石粉和0.572mg(14.3。/。重量)的二氧化鈦。腸衣層(相對(duì)于腸衣層重量的百分?jǐn)?shù))5mg(83.34。/。重量)的EudragitL30D，0.5mg(8.33。/。重量)的滑石粉和0.5mg(8.33。/。重量)的聚乙二醇。實(shí)施例2芯(相對(duì)于片芯重量的百分?jǐn)?shù))8.36mg(10.45。/o重量)的藥物物質(zhì)，例如匹伐他汀鈣鹽，38.6411^(48.3%重量)的微晶纖維素，4mg(5。/。重量)的HPMC(3cps),25mg(31.25%重量)的HPMC(100cps)，3.2mg(4%重量)的Neusilin,夕卜相包含0.4mg(0.5%重量)的膠態(tài)二氧化硅和0.4mg(0.5%重量)的硬脂酸鎂。HPMC副衣層(非功能性衣層)(相對(duì)于副衣層的百分?jǐn)?shù))2.856mg(71.4。/。重量)的羥丙基曱基纖維素3cps，0.286mg(7.15。/。重量)的聚乙二醇，0.286mg(7,15%重量)的滑石粉和0.572mg(14.3%重量)的二氧化鈦。腸衣層(相對(duì)于腸衣層重量的百分?jǐn)?shù))5mg(83.34%重量)的EudragitL30D，0.5mg(8.33%重量)的滑石粉和0.5mg(8.33。/o重量)的聚乙二醇。實(shí)施例3芯(相對(duì)于片芯重量的百分?jǐn)?shù))16.72mg(20.9。/。重量)的藥物物質(zhì)，例如匹伐他汀鈣鹽，30.28mg(37.85%重量)的孩i晶纖維素，4mg(5%重量)的HPMC(3cps)，25mg(31.25%重量)的HPMC(100cps),3.2mg(4%重量)的Neusilin，外相包含0.4mg(0.5。/o重量)的膠態(tài)二氧化硅和0.4mg(0.5%重量)的》更脂酸鎂。HPMC副衣層(非功能性衣層)(相對(duì)于副衣層重量的百分?jǐn)?shù))2.856mg(71.4。/。重量)的羥丙基甲基纖維素3cps，0.286mg(7.15。/。重量)的聚乙二醇，0.286mg(7.15%重量)的滑石粉和0.572mg(14.3%重量)的二氧化鈦。腸衣層(相對(duì)于腸衣層重量的百分?jǐn)?shù))5mg(83.34%重量)的EudragitL30D，0.5mg(8.33%重量)的滑石粉和0.5mg(8.33。/o重量)的聚乙二醇。實(shí)施例4芯(相對(duì)于片芯重量的百分?jǐn)?shù))3.135mg(3.92。/。重量)的藥物物質(zhì)，例如匹伐他汀鈣鹽，43.865mg(54.83。/。重量)的微晶纖維素，4mg(5。/。重量)的HPMC(3cps)，12.50mg(15.625。/。重量)的HPMC(100cps)，12.50mg(15.625%)的HPMC(100000cps)，3.2mg(4。/。重量)的Neusilin,外相包含0.4mg(0.5%重量)的膠態(tài)二氧化硅和0.4mg(0.5。/。重量)的硬脂酸鎂。HPMC副衣層(非功能性衣層)(相對(duì)于副衣層重量的百分?jǐn)?shù))2.856mg(71.4。/o重量)的羥丙基甲基纖維素3cps，0.286mg(7.15。/。重量)的聚乙二醇，0.286mg(7.15%重量)的滑石粉和0.572mg(14.3。/。重量)的二氧化鈦。腸衣層(相對(duì)于腸衣層重量的百分?jǐn)?shù))5mg(83.34%重量)的EudragitL30D，0.5mg(8.33%重量)的滑石粉和0.5mg(8.33。/。重量)的聚乙二醇。實(shí)施例5芯(相對(duì)于片芯重量的百分?jǐn)?shù))6.27mg(7.84。/。重量)的藥物物質(zhì)，例如匹伐他汀釣鹽，40.73mg(%50.91重量)的微晶纖維素，4mg(5%重量)的HPMC(3cps)，16.64mg(20.8。/o重量)的HPMC(100cps),8.36mg(10.45%)的HPMC(100000cps)，3.2mg(4%重量)的Neusilin,外相包含0.4mg(0.5。/。重量)的膠態(tài)二氧化硅和0.4mg(0.5%重量)的硬脂酸鎂。HPMC副衣層(非功能性衣層)(相對(duì)于副衣層重量的百分?jǐn)?shù))2.856mg(71.4。/o重量)的羥丙基甲基纖維素3cps，0.286mg(7.15。/o重量)的聚乙二醇，0.286mg(7.15。/。重量)的滑石粉和0.572mg(14.3%重量)的二氧化鈦。腸衣層(相對(duì)于腸衣層重量的百分?jǐn)?shù))5mg(83.34%重量)的EudragitL30D，0.5mg(8.33%重量)的滑石粉和0.5mg(8.33。/o重量)的聚乙二醇。實(shí)施例6芯(相對(duì)于片芯重量的百分?jǐn)?shù))12.54mg(15.675。/。重量)的藥物物質(zhì)，例如匹伐他汀鈣鹽，34.46mg(43.075%重量)的孩吏晶纖維素，4mg(5。/o重量)的HPMC(3cps)，18.75mg(23.4375Q/o重量)的HPMC(100cps)，6.25mg(7.8125%重量)的HPMC(100000cps)，3.2mg(4%重量)的Neusilin，夕卜相包含0.4mg(0.5。/o重量)的膠態(tài)二氧化硅和0.4mg(0.5。/。重量)的硬脂酸鎂。HPMC副衣層(非功能性衣層)(相對(duì)于副衣層重量的百分?jǐn)?shù))2.856mg(71.4o/。重量)的羥丙基甲基纖維素3cps，0.286mg(7.15。/。重量)的聚乙二醇，0.286mg(7.15。/o重量)的滑石粉和0.572mg(14.3%重量)的二氧化鈥。腸衣層(相對(duì)于腸衣層重量的百分?jǐn)?shù))5mg(83.34%重量)的EudragitL30D,0.5mg(8.33%重量)的滑石粉和0.5mg(8.33。/o重量)的聚乙二醇。實(shí)施例7芯(相對(duì)于片芯重量的百分?jǐn)?shù))16.72mg(20.9。/。重量)的藥物物質(zhì)，例如匹伐他汀鈣鹽，30.28mg(37.85%重量)的微晶纖維素，4mg(5%重量)的HPMC(3cps)，20mg(25%重量)的HPMC(100cps)，5mg(6.25。/o重量)的HPMC(100000cps)，3.2mg(4%重量)的Neusilin,外相包含0.4mg(0.5。/。重量)的膠態(tài)二氧化硅和0.4mg(0.5%重量)的硬脂酸鎂。HPMC副衣層(非功能性衣層)(相對(duì)于副衣層重量的百分?jǐn)?shù))2.856mg(71.4。/o重量)的羥丙基甲基纖維素3cps，0.286mg(7.15。/。重量)的聚乙二醇，0.286mg(7.15%重量)的滑石粉和0.572mg(14.3%重量)的二氧化鈦。腸衣層(相對(duì)于腸衣層重量的百分?jǐn)?shù))5mg(83.34%重量)的EudragitL30D，0.5mg(8.33%重量)的滑石粉和0.5mg(8.33。/。重量)的聚乙二醇。權(quán)利要求1.藥物組合，其包含HMG-Co-A還原酶抑制劑特別是氟伐他汀或匹伐他汀或其可藥用鹽和mTOR抑制劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中的HMG-Co-A還原酶抑制劑是氟伐他汀或其可藥用鹽。3.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合，其中的HMG-Co-A還原酶抑制劑是匹伐他汀或其可藥用鹽。4.根據(jù)權(quán)利要求1至3的任意項(xiàng)的同時(shí)、依次或分開(kāi)使用的藥物組合，其中的mTOR抑制劑選自雷帕霉素或選自32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32-去氧代雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-雷帕霉素、16-戊-2-炔基氧基-32(S或R)-二氫-40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、40-[3-羥基-2-(羥基甲基)-2-甲基丙酸酯]-雷帕霉素(亦稱作CCI779)、40-表-(四唑基)-雷帕霉素(亦稱作ABT578)、40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素、32-去氧代雷帕霉素和16-戊-2-炔基ft^-32(S)-二氫-雷帕霉素的雷帕霉素衍生物或其可藥用鹽。5.根據(jù)權(quán)利要求1的同時(shí)、依次或分開(kāi)使用的藥物組合，其包含匹伐他汀或其可藥用鹽和40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素。6.根據(jù)權(quán)利要求1的同時(shí)、依次或分開(kāi)使用的藥物組合，其包含氟伐他汀或其可藥用鹽和40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素。7.根據(jù)權(quán)利要求1至6的任意一項(xiàng)的用于治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣^硬化相關(guān)的病癥或疾病，和與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體腫瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體腫瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼瘡(SLE)、I型糖尿病等)、哞喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的藥物組合。8.根據(jù)權(quán)利要求1至6的任意一項(xiàng)的藥物組合用于制備治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣》更化相關(guān)的病癥或疾病，和與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體肺瘤、特別是涉及這些肺瘤生長(zhǎng)的實(shí)體肺瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑《良瘠(SLE)、I型糖尿病等)、哮喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(腫瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮癬)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制的藥物的用途。9.在單個(gè)包裝中包含在各自分開(kāi)的容器中的藥物組合物的藥盒，在一個(gè)容器中包含含有匹伐他汀的藥物組合物，且在第二個(gè)容器中包含含有mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的藥物組合物。10.在單個(gè)包裝中包含在各自分開(kāi)的容器中的藥物組合物的藥盒，在一個(gè)容器中包含含有氟伐他汀的藥物組合物，且在第二個(gè)容器中包含含有mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物的藥物組合物。11.才艮據(jù)權(quán)利要求9或10的任意項(xiàng)的藥盒，其中的mTOR抑制劑為40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素。12.包含HMG-Co-A還原酶抑制劑特別是氟伐他汀或匹伐他汀連同用于與mTOR抑制劑、例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物組合使用的用于治療或預(yù)防與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病和與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病的^f吏用+兌明的包裝，與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病為諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的病癥或疾病，與mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病為諸如移植、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸道疾病(IBD)、慢性移植器官排異、血管成形術(shù)后再狹窄、實(shí)體肺瘤、特別是涉及這些腫瘤生長(zhǎng)的實(shí)體胂瘤侵入或癥狀、異種移植排異、移植物抗宿主(GvH)疾病、自身免疫性疾病和炎性病癥(全身性紅斑狼瘡(SLE)、I型糖尿病等)、哞喘、多藥抗藥性、增殖性障礙(肺瘤、增殖性皮膚病，例如牛皮辮)、葡萄膜炎、干性角膜結(jié)膜炎、真菌感染、血管發(fā)生和骨吸收的抑制。13.根據(jù)權(quán)利要求12的包裝，其包含氟伐他汀或其可藥用鹽連同與mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素組合的使用說(shuō)明。14.根據(jù)權(quán)利要求9的包裝，其包含匹伐他汀或其可藥用鹽連同與mTOR抑制劑40-O-(2-羥基乙基)-雷帕霉素組合的使用說(shuō)明。15.預(yù)防或治療與HMG-Co-A還原酶抑制劑相關(guān)的病癥或疾病諸如高膽固醇血癥相關(guān)的病癥或疾病、混合性血脂障礙相關(guān)的病癥或疾病、心血管事件的二級(jí)預(yù)防、動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)的病癥或疾病和mTOR抑制劑相關(guān)的病癥或疾病的方法，其包括給需要其的哺乳動(dòng)物施用根據(jù)權(quán)利要求1至5的任意一項(xiàng)的組合并任選可藥用載體。全文摘要本發(fā)明涉及藥物組合，其包含HMG-Co-A還原酶抑制劑特別是氟伐他汀匹或伐他汀或其可藥用鹽和mTOR抑制劑例如雷帕霉素或雷帕霉素衍生物。文檔編號(hào)A61K45/00GK101227927SQ200680027005公開(kāi)日2008年7月23日申請(qǐng)日期2006年5月29日優(yōu)先權(quán)日2005年5月31日發(fā)明者C·A·西普斯,R·J·多倫特申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司