專利名稱：通過在樹脂上分級分離可得到的葡萄籽提取物的制作方法
通過在樹脂上分級分離可得到的葡萄并予提取物本發(fā)明涉及通過在樹脂上分級分離可得到的葡萄籽的提取物并涉及用 于制備該提取物的方法。本發(fā)明的方法提供來自葡萄籽內(nèi)的具有可變含量的兒茶素和表兒茶酸 (單體)的提取物。根據(jù)本發(fā)明可得到的產(chǎn)物具有抗氧化劑作用并且主要用 作化妝品、補充劑食品補充劑(尤其作為心血管保護補充劑)和營養(yǎng)藥。技術背景從葡萄籽的加工物中得到的總提取物含有多種代謝物，尤其是兒茶素單體和表兒茶酸單體、相關的原花青素(proanthocyanidole)寡聚體和多聚 體(矢車菊苷配基)以及多聚體和高分子量鞣質(zhì)。EP 275224公開了用于制備葡萄(K/泡viVi^m)類黃酮的磷脂復合物的 的方法。WO 2005/36988公開了用于提取葡萄籽的方法，即在加工提取物后， 立即將種皮與種子分離。得到的提取物以低含量的單體多酚為特征。EP 348781公開了通過用醚或酯或酯與芳香烴的混合物提取葡萄籽和/ 或通過過濾而得到的富含原矢車菊酚(procyanidol)寡聚體的級分。EP 1035859公開了葡萄提取物的磷脂復合物用于治療及預防動脈粥 樣硬化的用途。已知的方法具有一些缺點，如使用有毒溶劑或需要特定的植物或復雜 方法。因而需要這樣的常規(guī)方法，其中以簡單方式實施該方法并提供其活性 成分含量可以隨意進行調(diào)節(jié)的提取物。述套管足夠的軟以便從其內(nèi)推出的管進入到中耳室內(nèi)。然后，將插入 件取出并且使用細長的耳鉗將管正確放置。引入管的方法:引入所述管的方法包括下述步驟1. 在耳膜內(nèi)期望的位置切一小切口；2. 提供帶有套管的管。將處于其套管內(nèi)的管以長臂向前的方式安 裝在導引器的頂端，管臂處于套管的另一端。3. 將耳管處于其上的導引器的端部放置在耳內(nèi)，以便套管的端部 通過所述的穿孔稍微插入到耳膜內(nèi)；用耳鉗抓住管和導引件并將管的 頂喊插入到穿孔中。4. 通過滑動設置于把手上的導引件的旋鈕推動耳管穿過耳膜，并且5. 將導引器從耳內(nèi)取出。因為套管連接到導引器的頂端，其與導 引器一塊從耳中取出。當使用桿插入件時，步驟為 在耳膜內(nèi)期望的位置切一小切口，以便提供容易的插入； 將桿和處于套管腔內(nèi)的所述管插入并將其推入到中耳腔； 然后將桿取出，將管留在切口內(nèi)； 用細長耳鉗將所述管調(diào)整到合適的位置。 當使用導引件時，步驟為1. 在耳膜內(nèi)期望的位置切一小切口，以便提供容易的插入；2. 外科醫(yī)生用手從其尾部將導引件握住，管在頂部處于半環(huán)形端 部內(nèi)。將攜帶管的另一端放在穿孔附近；3. 將導引件的尾部固定保持在耳擴張器上以防止其任何的進一步 前進；4. 將管僅僅由細長耳鉗推動并插入到所述穿孔中，直到所述臂彈 性張開到其正確位置；5. 將管保持在位，然后將導引件從耳中取出；6. 然后管被放置在其位置上。步驟(a)用丙酮或d-C3醇或溶劑的混合物或其水溶液(只要含水量不 超過90。/。(v/v))提取葡萄籽加以實施。優(yōu)選40。/。v/v水-乙醇溶液。提取溫度可以是從0°C至溶劑的沸騰溫度并且優(yōu)選地是70。C。如此實施允許從提取物內(nèi)除去水不溶物、尤其高分子量鞣質(zhì)的步驟 (b)，即冷卻來自步驟(a)的提取物并且過濾或離心去掉不溶物。步驟(c)是任選的步驟，可以實施該步驟以除去在來自步驟(b)的提取物 內(nèi)仍存在的任何鞣質(zhì)。這些代謝物可以通過使用聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)加 以除去。優(yōu)選地，本發(fā)明的方法還包括步驟(c)。步驟(d)允許使提取物分級分離，除去大部分無用的次級代謝物(糖等)， 同時保留矢車菊苷配基。該步驟即是通過在聚合樹脂上吸附的色鐠分離。 用于此目的的合適樹脂的實例是苯乙烯-DVB樹脂如AmberliteHP2(f或 Rohm and Haas XAD1180 ,或丙烯酸樹脂如Rohm and Haas XAD7HP 。將從葡萄籽中得到的總提取物濃縮至5%至50% w/w 、優(yōu)選10% w/w 的干殘渣，并JL故置在1°C至25°C、優(yōu)選在4。C的溫度下，不攪拌，持 續(xù)l小時至24小時，優(yōu)選16小時。將得到的混懸液在4。C離心直至從水溶液中除去殘余沉淀物。將澄清 水溶液在旋轉蒸發(fā)器內(nèi)濃縮并添加水以得到5%至50% w/w 、優(yōu)選10% w/w的干殘渣。在一些例子中，溶液可以是水-醇或水-丙酮，而不僅是水 溶液。這取決于所需要的成品例如當需要具有高含量的兒茶素單體和寡 聚體的產(chǎn)物時，優(yōu)選使用水溶液，否則使用水-醇或水-丙酮溶液。因此，當將從終產(chǎn)物內(nèi)除去低分子量級分時，待上樣至柱上的溶液應 當具有5%至50% w/w的干殘渣和5%至30% v/v、優(yōu)選10% v/v的醇(d-C3醇)或丙酮含量。因此已制備的溶液吸附于樹脂上，而移出未滯留的溶液。此后，樹脂用水-醇(d-C3醇，優(yōu)選乙醇)或水-丙酮溶液洗滌以除去不想要的次級代謝物。溶劑應當具有100%至70%v/v、優(yōu)選90% v/v的含水 量。棄去從柱內(nèi)流出的洗滌溶液。產(chǎn)物用具有50%至5% v/v、優(yōu)選30% v/v含水量的7jC-醇溶液d-C3 醇)、優(yōu)選地用乙醇(洗脫。醇溶液可以任選地由具有50%至0% v/v、優(yōu)選 30% v/v的含水量的水-丙酮溶液替換。本發(fā)明更詳細的在如下實施例中描述。實施例1用水-醇溶液提取葡萄籽(步驟a、在此步驟中，制備作為隨后柱色鐠分離的原材料使用的總提取物。 將IOOO g葡萄籽在夾層式靜態(tài)滲濾器內(nèi)于70。C用1.5升乙醇(40% v/v) 覆蓋4小時。4小時后，回收濾液并在相同條件下再提取7次，但是每次 提取^f吏用l升溶劑，以得到大約8升總濾液。合并的濾液抽吸加熱過濾并 通過旋轉蒸發(fā)器在60。C在減壓下濃縮。該提取物具有228g總干殘渣，基 于原材料的產(chǎn)率是22.8% w/w。將濾液濃縮以得到具有10% w/w 干殘渣 的2.28 kg完全水性的混懸液。 實施例2用水-丙酮溶液提取葡萄籽(步驟a)在此步驟中，制備作為后續(xù)柱色鐠分離的原材料使用的總提取物。 將1000 g葡萄籽在夾層式靜態(tài)滲濾器或在配備攪拌器的夾層反應器內(nèi) 于70。C用1.5升40% v/v丙酮覆蓋4小時。4小時后，回收濾液并在相 同條件下再提取7次，但是每次提取使用1升溶劑，以得到大約8升總濾 液。合并的濾液抽吸加熱過濾并通過旋轉蒸發(fā)器在60。C在減壓下濃縮。 該提取物具有235.6g的總干殘渣，基于原材料的產(chǎn)率是23.56% w/w。 將濾液濃縮得到具有10% w/w干殘渣的2.35kg完全水性的混懸液。實施例3純化從葡萄籽中得到的提取物(步驟b):去除水不溶物 從步驟(a)的水-醇提取(實施例l)中得到的水混懸液在4°C冷卻并靜止 放置16小時，隨后將仍冰冷的水混懸液在3000 g離心20分鐘以從澄清水 溶液中分離淀析的殘留物。棄去富含高分子量產(chǎn)物的殘留物。得到的澄清溶液具有相當于168g部分純化提取物的干殘渣，具有 3.75% w/w兒茶素HPLC含量和2.87% w/w表兒茶酸HPLC含量及 6.62% w/w單體總含量(兒茶素+表兒茶酸)的?；谠牧系闹亓慨a(chǎn)率是 16.8% w/w。以下所述的全部色鐠柱純化法(4種不同方法)可以適用于該溶液。為 簡潔起見，僅報道實施例5(利用方法1)作為直接純化該溶液的實例。后續(xù) 所述的全部其它方法將適用于PVPP處理的溶液。實施例4純化從葡萄籽中得到的提取物(歩驟b):去除水不溶物從步驟(a)的水-丙酮提取(實施例2)中得到的水混懸液在4。C冷卻并靜 止放置16小時，隨后將仍冰冷的水混懸液在3000 g離心20分鐘以從澄清 水溶液中分離淀析的殘留物。棄去富含高分子量產(chǎn)物的殘留物。得到的澄清溶液具有173g部分純化提取物干殘渣，具有4.21。/。 w/w兒 茶素HPLC含量和2.70% w/w表兒茶酸HPLC含量及6.91% w/w HPLC 單體總含量(兒茶素+表兒茶酸)。基于原材料的重量產(chǎn)率是17.3% w/w。以下所迷的全部色語純化方法(4種不同方法)可以適用于該溶液。為簡 潔起見，僅報道實施例6 (利用方法3)作為直接純化該溶液的實例。后續(xù) 所述的全部其它方法將適用于PVPP處理的溶液。實施例5純化從葡萄籽中得到的提取物方法l(歩驟d)將在步驟(b)內(nèi)描述的部分純化方法(實施例3)結束時得到的具有168 g干殘渣的澄清水溶液濃縮成10。/。w/w的干殘渣。已部分純化提取物的這 種澄清溶液具有具有3.75% w/w兒茶素HPLC含量和2.87% w/w表兒茶 酸HPLC含量和6.62% w/w HPLC單體總含量(兒茶素+表兒茶酸)的干殘 渣。將該水溶液加溫至室溫、隨后上樣至含有用水調(diào)濕的3300 ml Rohm and Haas XAD7HP⑧樹脂的色鐠柱上。水溶液吸附至樹脂上，而去除從柱 中流出的未滯留的溶液。樹脂隨后用6.6升水洗滌，也去除該溶液，因為該溶液的單體含量可忽略不計并且矢車菊苷配基含量低。這些棄去的水溶液(產(chǎn)物l)具有69 g總干殘渣(基于原材料的重量產(chǎn)率6.9% w/w)、 0.09% 兒茶素HPLC含量、0.10%表兒茶酸HPLC含量，總單體含量(兒茶素+ 表兒茶酸)是0.19% w/w。柱用9升卯％ v/v含水乙醇洗脫。將得到的洗脫物回收并在60。C在 減壓下干燥，產(chǎn)生98克干燥產(chǎn)物(產(chǎn)物2)，對應于基于原材料的產(chǎn)率9.80% w/w。該產(chǎn)物具有6.25%兒茶素HPLC含量、4.77%表兒茶酸HPLC含量 和11.02% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)。實施例6純化從葡萄籽中得到的提取物:方法2(歩驟d)將通過水-丙酮提取(步驟a;實施例2)并且隨后通過步驟(b)內(nèi)所述的 部分純化(實施例4)而得到的具有173 g干殘渣的澄清水溶液濃縮成10% w/w的干殘渣。此后，將該水溶液加溫至室溫，隨后上樣至含有3300 ml Rohm and Haas XAD1180⑧樹脂的色鐠柱上;去除從柱中流出的未滯留的溶液。樹脂 隨后用6升水洗滌，并且將洗滌溶液與未滯留的溶液合并。產(chǎn)生的水溶液 干燥得到產(chǎn)物3,其中產(chǎn)物3具有99.4g干殘渣、1.29% w/w兒茶素HPLC 含量、0.46% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用6升10% v/v丙酮洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物4) 。所述的產(chǎn)物具有23.9g干殘渣，13.5% w/w兒茶素HPLC含量、 8.41%w/wHPLC表兒茶酸含量。樹脂隨后用6升20% v/v丙酮洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物5) 。所述的產(chǎn)物具有15.3g干殘渣、14.3% w/w兒茶素HPLC含量、 10.9% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用6升30% v/v丙酮洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物6) 。所述的產(chǎn)物具有14.95g干殘渣，2.21% w/w兒茶素HPLC含量、 2.04% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用6升40% v/v丙酮洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物7) 。所述的產(chǎn)物具有14.2 g干殘渣，1.06% w/w兒茶素HPLC含量、0.66% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用6升50% v/v丙酮洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物8) 。所述的產(chǎn)物具有3.51g干殘渣，0.67% w/w兒茶素HPLC含量、 0.46% w/w表兒茶酸HPLC含量。得到的產(chǎn)物可以隨意加以混合以得到具有所需單體含量的產(chǎn)物。例如， 可以這樣得到具有減少的單體含量的產(chǎn)物，即通過3.51 g產(chǎn)物8與14.2 g 產(chǎn)物7混合以得到具有0.98% w/w兒茶素HPLC含量、0.62% w/w表兒 茶酸HPLC含量、1.60% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)的 17.71 g產(chǎn)物。或者，3.51 g產(chǎn)物8可以與14.2g產(chǎn)物7及與15.0g產(chǎn)物3混 合，以得到具有1.12% w/w兒茶素HPLC含量、0.55% w/w表兒茶酸 HPLC含量和1.67% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)的32.71 g產(chǎn)物。另一方面，可以這樣得到具有高含量單體的產(chǎn)物，即通過23.9g產(chǎn)物 4與15.3 g產(chǎn)物5混合，以得到具有13.81% w/w兒茶素HPLC含量、9.38% w/w表兒茶酸HPLC含量和23.19% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒 茶酸)的39.2 g產(chǎn)物。實施例7去除從葡萄籽得到的提取物中的水溶性鞣質(zhì)(步驟c)處理從步驟b的部分純化(實施例3)中得到的具有168 g干殘渣的澄清 水溶液以除去水溶性鞣質(zhì)。向溶液添加對應于待處理提取物的大約20%干 殘渣重量的34gPVPP。在室溫攪拌l小時后，將PVPP經(jīng)折疊式濾器濾除。得到的溶液具有 部分純化提取物的160 g干殘渣，鞣質(zhì)含量為2.7% w/w?；谠牧系闹亓慨a(chǎn)率是16.0% w/w。實施例8去除從葡萄籽得到的提取物中的水溶性鞣質(zhì)(歩驟c)處理從步驟b的部分純化(實施例4)中得到的具有168 g干殘渣的澄清水溶液以除去水溶性鞣質(zhì)。向溶液添加對應于待處理提取物的大約30% w/w干殘渣重量的52 g PVPP。在室溫攪拌l小時后，PVPP經(jīng)折疊式濾器濾除。得到的溶液具有部分純化提取物的163g干殘渣，鞣質(zhì)含量為1.5% w/w o基于原材料的重量產(chǎn)率是16.3% w/w。 實施例9純化從葡萄籽方法1中得到的提取物(步驟d)從步驟(c)(實施例7)的部分純化中得到的具有160 g干殘渣的澄清水 溶液濃縮成10% w/w的干殘渣。已部分純化提取物的這種澄清溶液具有 具有3.87%兒茶素HPLC含量、2.96%表兒茶酸HPLC含量和6.83% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)的千殘渣。將該水溶液加溫至室溫，隨后上樣至含有用水調(diào)濕的3200ml Rohm and Haas XAD7HP⑧樹脂的色鐠柱上。水溶液吸附至樹脂上，而去除從柱 中流出的未滯留的溶液。樹脂隨后用6.4升水洗滌，也去除該溶液，因為 該溶液的單體含量可忽略不計并且矢車菊苷配基含量低。這些棄去的水溶 液(產(chǎn)物9)具有65 g的總干殘渣(基于原材料的重量產(chǎn)率6.5% w/w)、 0.09。/。兒茶素HPLC含量、0.10。/。表兒茶酸HPLC含量、單體總含量(兒茶 素+表兒茶酸)是0.19% w/w。將柱用9升90% v/v含水乙醇洗脫。將得到的洗脫物回收并在60。C 在減壓下千燥，產(chǎn)生95克千燥產(chǎn)物(產(chǎn)物10)，對應于基于原材料的產(chǎn)率 9.50% w/w。該產(chǎn)物具有6.34%兒茶素HPLC含量、4.85%表兒茶酸 HPLC含量和11.19% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)。實施例10純化從葡萄籽中得到的提取物方法3(步驟d) 將從步驟(c)的部分純化(實施例7)中得到的具有160 g干殘渣的澄清 水溶液濃縮成10"/。w/w的干殘渣。將該水溶液加溫至室溫，隨后上才羊至含有1600 ml Rohm and HaasXAD118(f樹脂的色語柱上。水溶液吸附至樹脂上，而去除從柱中流出的 未滯留的溶液。樹脂隨后用3升水洗滌。收集洗滌溶液并與未滯留的溶液 合并。產(chǎn)生的水i^液干燥得到產(chǎn)物(產(chǎn)物11)。所述的產(chǎn)物具有106.2 g干殘 渣、1.39% w/w兒茶素HPLC含量、0.95% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用3升乙醇(10% v/v)洗滌，隨后將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn) 物12)。所述的產(chǎn)物具有12.0g干殘渣、12.0% w/w兒茶素HPLC含量、 7.80% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用3升乙醇(20% v/v)洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物13) 。所述的產(chǎn)物具有14.7 g干殘渣、11.5% w/w兒茶素HPLC含量、 9.23% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用3升乙醇(30% v/v)洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物14) 。所述的產(chǎn)物具有20.0 g干殘渣、6.49% w/w兒茶素HPLC含量、 5.76% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用3升乙醇(40% v/v)洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物15) 。所述的產(chǎn)物具有5.08 g干殘渣、2.84% w/w兒茶素HPLC含量、 2.59% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用3升乙醇(50% v/v)洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物16) 。所述的產(chǎn)物具有1.55 g干殘渣、0.51% w/w兒茶素HPLC含量、 0.35% w/w表兒茶酸HPLC含量。得到的產(chǎn)物可以隨意加以混合以得到具有所需單體含量的產(chǎn)物?？梢?這樣得到具有減少的單體含量的產(chǎn)物，即通過1.55 g產(chǎn)物16與5.08 g產(chǎn)物 15混合以得到具有2.26% w/w兒茶素HPLC含量、2.11% w/w表兒茶酸 HPLC含量和4.37% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)的6.63 g 產(chǎn)物，或1.55 g產(chǎn)物16可以與7.00 g產(chǎn)物11混合以得到具有1.19% w/w 兒茶素HPLC含量、0.89% w/w表兒茶酸HPLC含量和的2.08% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)的8.55 g產(chǎn)物。另一方面，可以這樣得到具有高含量單體的產(chǎn)物，即通過12.0g產(chǎn)物 12與12.0 g產(chǎn)物13和15.0 g產(chǎn)物14混合，以得到具有9.73%w/w兒茶素HPLC含量、7.46% w/w表兒茶酸HPLC含量和17.19% w/w 的HPLC 總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)的39.0 g產(chǎn)物，或12.0 g產(chǎn)物12可以與 12.0 g產(chǎn)物13混合以得到具有11.75% w/w兒茶素HPLC含量、8.52% w/w表兒茶酸HPLC含量和20.27% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒 茶酸)的24.0 g產(chǎn)物。 實施例11純化從葡萄籽中得到的提取物方法4(歩驟d)從步驟(c)的部分純化(實施例7)中得到的具有160 g干殘渣的澄清水 溶液濃縮成10°/。 w/w的干殘渣。將該澄清水溶液濃縮成干殘渣(12% w/w),隨后對其添加320 ml乙醇 (95% v/v)，以得到約10% w/w的干殘渣和約20% Wv乙醇含量。將這種 水-醇溶液加溫至室溫，隨后上樣至含有1600 ml Rohm and Haas XAD1180 樹脂的色鐠柱上。去除從柱中流出的未滯留的溶液。樹脂隨后 用9.60升乙醇20。/。v/v洗滌，也去除洗滌溶液，得到135.6 g干殘渣，具 有4.37% w/w兒茶素HPLC含量、3.35% w/w表兒茶酸HPLC含量和 7.72% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)。柱用6.60升70。/。v/v含水乙醇洗脫，并且將從柱中流出的洗脫物收集 并在60°C在減壓下干燥，產(chǎn)生具有24.3 g干殘渣、0.79% w/w兒茶素 HPLC含量、0.62% w/w表兒茶酸HPLC含量和1.41% w/w HPLC總單體 含量(兒茶素+表兒茶酸)的產(chǎn)物(產(chǎn)物17)。實施例12純化從葡萄籽中得到的提取物方法2(步驟d)將通過步驟(a)的水-丙酮提取(實施例2)并且隨后通過步驟(b)的部分 純化(實施例4)以及步驟(c)的鞣質(zhì)去除(實施例8)而得到的具有163g干殘 渣的澄清水溶液濃縮成10% w/w的干殘淹。將該澄清水溶液加溫至室溫，隨后上樣至含有用水調(diào)濕3200 ml Rohm and Haas XAD7HP⑤樹脂的色語柱上；水-醇溶液吸附至樹脂上，而 去除從柱中流出的未滯留的溶液。樹脂隨后用6.4升水洗滌，也棄去這種溶液，因為該溶液的單體含量可忽略不計并且矢車菊苷配基含量低。這些棄去的水溶液(產(chǎn)物18)具有62.5 g的總干殘渣(重量產(chǎn)率對原材料6.3% w/w)、 0.11%兒茶素HPLC含量、0.14%表兒茶酸HPLC含量和0.25% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)。柱用9升90n/。v/v含水丙酮洗脫，并且將得到的洗脫物回收并在60。C 在減壓下干燥，產(chǎn)生99.8克干燥產(chǎn)物(產(chǎn)物19)(產(chǎn)物對原材料10% w/w)。 該產(chǎn)物具有7.11%%兒茶素HPLC含量、4.52%表兒茶酸HPLC含量和 11.63% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)。實施例13純化從葡萄籽中得到的提取物方法3(步驟d)將通過步驟(a)的水-丙酮提取(實施例2)并且隨后通過步驟(b)的部分 純化(實施例4)以及步驟(c)的鞣質(zhì)去除(實施例8)而得到的具有163g干殘 渣的澄清水溶液濃縮成10% w/w的干殘渣。將該澄清水溶液加溫至室溫，隨后上樣至含有用水調(diào)濕3200 ml Rohm and Haas XAD1180⑤樹脂的色鐠柱上。水溶液吸附至樹脂上，而去除從柱中流出的未滯留的溶液。樹脂隨后 用6升水洗滌，也棄去這種溶液與未滯留的溶液合并。產(chǎn)生的水溶液干燥 得到產(chǎn)物(產(chǎn)物20)。所述的產(chǎn)物具有106.4g干殘渣、1.58% w/w兒茶素 HPLC含量、0.47。/ow/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用6升20。/。v/v丙酮升洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物22) 。所述的產(chǎn)物具有11.7g干殘渣、16.8% w/w兒茶素HPLC含量、 15.2% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用6升30% v/v丙酮洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物23) 。所述的產(chǎn)物具有11.8g干殘渣、2.20% w/w兒茶素HPLC含量、 2.20% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用6升40% v/v丙酮洗滌，將得到的溶液收集并千燥(產(chǎn)物24) 。所述的產(chǎn)物具有10.2g干殘渣、1.15% w/w兒茶素HPLC含量、0.75% w/w表兒茶酸HPLC含量。樹脂隨后用6升50% Wv丙酮洗滌，將得到的溶液收集并干燥(產(chǎn)物 25)。所述的產(chǎn)物具有3.04g干殘渣、0.71% w/w兒茶素HPLC含量、 0.43% w/w表兒茶酸HPLC含量。得到的產(chǎn)物可以隨意混合以得到具有所需要的單體含量的產(chǎn)物。例如 可以這樣得到具有減少的單體含量的產(chǎn)物，即通過3.04g產(chǎn)物25與10.2g 產(chǎn)物24混合以得到具有1.05% w/w兒茶素HPLC含量、0.68% w/w表兒 茶酸HPLC含量和1.73% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)的 13.24 g產(chǎn)物，或3.04g產(chǎn)物25可以與10.2 g產(chǎn)物24和15.0 g產(chǎn)物20混 合以得到具有1.33% w/wHPLC單體含量、0.57% w/w表兒茶酸HPLC含 量和1.90% w/w HPLC總單體含量(兒茶素+表兒茶酸)的28.24g產(chǎn)物。另一方面，可以這樣得到具有高含量單體的產(chǎn)物，即通過19.6g產(chǎn)物 21與11.7g產(chǎn)物22混合，以得到具有15.80% w/w兒茶素HPLC含量、 11.88% w/w表兒茶酸HPLC含量和27.76% w/w HPLC總單體含量(兒茶 素+表兒茶酸)的3L3g產(chǎn)物。
權利要求
1.用于提取葡萄籽的方法，其包括a)用溶劑提取葡萄籽(總提取物)；b)去除水不溶性鞣質(zhì)；c)任選地去除水溶性鞣質(zhì)；d)通過在柱上的色譜純化，分離具有不同分子量的產(chǎn)物。
2. 如權利要求1內(nèi)所述的方法，其中步驟(a)通過用丙酮或CrC3醇 或其混合物或含水量不高于卯。/。(v/v)的水溶液提取葡萄籽而實施。
3. 如權利要求2內(nèi)所述的方法，其中提取溶劑是40% v/v的水-乙醇 溶液。
4. 如權利要求2或3內(nèi)所述的方法，提取在70。C下實施。
5. 如權利要求1至4任一項內(nèi)所述的方法，其中步驟(c)通過使用聚 乙烯吡咯烷酮(PVPP)而實施。
6. 如權利要求1至5任一項內(nèi)所述的方法，其中色鐠分離在苯乙烯-二乙烯苯樹脂或丙烯酸樹脂上實施。
7. 具有預定含量的兒茶素、表兒茶酸、原花青素寡聚體和多聚體 (矢車菊苷配基)的提取物，其通過權利要求1-6的方法可得到。
8. 組合物，含有權利要求7的提取物。
全文摘要
用于提取葡萄籽的方法，其包括a)用溶劑提取葡萄籽(總提取物)；b)去除水不溶性鞣質(zhì)；c)任選地去除水溶性鞣質(zhì)；d)通過在柱上的色譜純化，分離具有不同MW的產(chǎn)物。
文檔編號A61K8/97GK101232865SQ200680027531
公開日2008年7月30日 申請日期2006年7月13日 優(yōu)先權日2005年7月29日
發(fā)明者A·焦里, A·阿內(nèi)利 申請人:因德納有限公司