專利名稱：Sanglifehrin在hcv中的用途的制作方法
SANGLIFEHRIN在HCV中的用途本發(fā)明涉及可與親環(huán)蛋白結(jié)合的大環(huán)內(nèi)酯化合物如sanglifehrin類化 合物的新用途。Sanglifehrin是一類最初^Ut線菌(actinomycete)發(fā)酵肉湯中分離的多 環(huán)大環(huán)內(nèi)酯化合物。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Sanglifehrin顯示出結(jié)合親環(huán)蛋白的活性，并 且在Sanglifehrin A-D的情況下，顯示出免疫抑制活性和對(duì)B細(xì)胞增殖及T 細(xì)胞增殖的抑制活性。然而，與已知的免疫抑制劑和抗炎化合物如環(huán)孢菌 素A和FK506不同，sanglifehrin沒(méi)有FKBP結(jié)合活性或鉤依賴磷酸酶抑制活 性。因此，就化學(xué)結(jié)構(gòu)和不同活性鐠而言，Sanglifehrin提供了新的一類藥 物物質(zhì)。Sanglifehrin和用于制備它們的方法在WO 97/02285， WO 98/07743和 US 006124453內(nèi)描述。 一系列sanglifehrin衍生物，mini-Sanglifehrin,在 / j/w.0^w.5^c 2003， 125 (13)， 3849-3859; J力fg.C^e附.2000， 65， 9255-9260 和jwgew. C7^附.1999， 38(16)， 2443-2446內(nèi)描述。現(xiàn)在已驚訝地發(fā)現(xiàn)親環(huán)蛋白結(jié)合性Sanglifehrin對(duì)丙型肝炎病毒 (HCV)具有抑制作用。因此，本發(fā)明提供親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin用于預(yù)防或治 療丙型肝炎感染、HCV誘導(dǎo)的病癥、或抑制肽基脯氨酸順?lè)串悩?gòu)酶活性、 或與肝臟疾病相關(guān)的病況的用途。該活性劑還可以作為例如預(yù)防性療法用 于由HCV感染的母體分娩的新生兒或暴露于該病毒的健康護(hù)理工作者或 移植受體例如肝移植受體，以消除移植后可能的復(fù)發(fā)HCV感染。本發(fā)明涉及本文中統(tǒng)稱為"Sanglifehrin"的大環(huán)內(nèi)酯類化合物在預(yù)防或治療丙型肝炎感染中的用途。Sanglifehrin自放線菌發(fā)酵肉湯分離。通常 已知的Sanglifehrin包括sanglifehrin A至D，例如下式的Sanglifehrin<formula>formula see original document page 6</formula>Sanglifehrin A至D的大環(huán)(macrocyclic ring)的特征在于i)位置l至6包 含3-羧基六氫鈦溱基(piperidazinyl)羧酸殘基，ii)位置7至9包含芳族a-氨基 酸殘基，和iii)位置10至12包含脂族a-氨基酸殘基。該大環(huán)的剩余部分由羥基 羧酸殘基組成，從而在Sanglifehrin A至D的情況下，提供了該大環(huán)主環(huán)內(nèi) 的另外ll個(gè)碳原子。才艮據(jù)大環(huán)內(nèi)酯化學(xué)中的常規(guī)作法，如以上就Sanglifehrin A所示的， 將Sanglifehrin大環(huán)主環(huán)的原子加以編號(hào)，以大環(huán)內(nèi)酯鍵的羰基基團(tuán)的碳原 子作為位置l而起始。Sanglifehrin A至D還可以通過(guò)在該大環(huán)的位置23處經(jīng)由烴基連接基 團(tuán)(liker group)連接的新的二環(huán)螺系統(tǒng)的存在來(lái)表征?？梢詫?duì)Sanglifehrin A至D進(jìn)行廣泛的化學(xué)操作以得到Sanglifehrin類 的其它大環(huán)內(nèi)酯。此類操作包括該大環(huán)的斷裂(特別是在內(nèi)酯氧基基團(tuán)處)， 大環(huán)內(nèi)酯與螺環(huán)系統(tǒng)之間的連接基團(tuán)的斷裂，和取代基組的操作，例如保 護(hù)、衍生化或其它化學(xué)修飾；例如如下文所述的操作。其它修飾方法對(duì)本 領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見(jiàn)的。根據(jù)本發(fā)明，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)Sanglifehrin就其抗丙型肝炎感染的生物活性 而言具有特征性和完全新穎的活性鐠。尤其已發(fā)現(xiàn)它們顯示出如下文所述 的活性的組合。Sanglifehrin具有與先前已知的免疫抑制劑和抗炎化合物如環(huán)孢菌素 類化合物及大環(huán)內(nèi)酯類化合物(例如雷帕霉素和NIM811)不同的活性鐠，表 明Sanglifehrin具有不同于這些化合物的作用模式。因此，就結(jié)構(gòu)和活性而 言Sanglifehrin提供了新的一類藥物物質(zhì)，可以預(yù)期該藥物物質(zhì)將實(shí)質(zhì)性地 擴(kuò)大免疫抑制性、抗炎性或抗病毒性療法的范圍；例如以避免或減少先前 免疫抑制性和抗炎性療法的不受歡迎的副作用和/或改善或擴(kuò)展此類療法 以用于新的疾病領(lǐng)域或新的患者類型。Sanglifehrin,例如其中大環(huán)內(nèi)酯環(huán)是開(kāi)環(huán)形式的Sanglifehrin，其中 大環(huán)內(nèi)酯與螺環(huán)系統(tǒng)之間的烴基連接基團(tuán)內(nèi)的位置26和27均被羥基取代的 SangMehrin ，或其中與大環(huán)連接的螺殘基已被斷裂或截?cái)嗟腟anglifehrin ， 通常缺少Sanglifehrin特征活性的組合中的一些或全部活性。例如，其中螺 殘基被斷裂的Sanglifehrin典型地具有親環(huán)蛋白結(jié)合活性，但是不具有顯著 的免疫抑制活性。然而，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員明了的，這類化合物為制備 其它新的Sanglifehrin提供有價(jià)值的成分、中間體或關(guān)鍵結(jié)構(gòu)單元并且因 此進(jìn)一步拓展了 Sanglifehrin類化合物的治療潛力。由于二環(huán)螺系統(tǒng)的存在看來(lái)對(duì)例如Sanglifehrin A至D的生物活性具 有實(shí)質(zhì)性意義，故該二環(huán)螺系統(tǒng)還可以纟皮視為提供具有關(guān)鍵性生物學(xué)意義 的結(jié)構(gòu)成分，可以用作為結(jié)構(gòu)成分用于與產(chǎn)生其它Sanglifehrin有關(guān)的進(jìn)一 步衍生或修飾，或應(yīng)用于衍生或修飾其它藥物物質(zhì)，例如以修飾該類大環(huán) 內(nèi)酯的其它免疫抑制性藥物物質(zhì)的活性。因此，第一方面，本發(fā)明提供游離形式或受保護(hù)形式的大環(huán)內(nèi)酯， 或其鹽，在該大環(huán)內(nèi)酯中i)大環(huán)的位置2至6 (包括位置2和6在內(nèi))由六 氫峻溱基羧酸殘基提供；和/或ii)大環(huán)的位置7至9 (包括位置7和9在內(nèi)) 由芳族a-氨基酸殘基提供；和/或iii)大環(huán)的位置10至12 (包括位置10和12在內(nèi))由脂族a-絲酸殘基提供。適宜地，本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酯包含特征性結(jié)構(gòu)特點(diǎn)i)、 ii)和iii)中的2個(gè)、 尤其是全部3個(gè)特點(diǎn)。所述六氫歧溱基羧酸殘基適宜地是M部分占據(jù)大環(huán)的位置l并且l-氮原子占據(jù)大環(huán)的位置6的l，2-六氫喊溱-3-羧基-l-基殘基，例如式I的殘基其中所給出的編號(hào)代表該殘基的原子在大環(huán)中的位置。該殘基可以是 環(huán)被取代的或未取代的。適宜地，該殘基是未取代的。所述芳族a-氨基酸殘基的羧基部分適宜地占據(jù)大環(huán)的位置7，并且a-氨基部分占據(jù)位置9。合適地，該芳族a-氨基酸是游離形式、受保護(hù)形式或 活化形式的取代的或未取代的苯丙氨酸殘基，尤其是被羥基、曱氡基、乙 氧基、OnPr、 OiPr取代。所述脂族a-氨基酸殘基的羧基部分合適地占據(jù)大環(huán)的位置10，并且a-氨基部分占據(jù)位置12。合適地，脂族a-氨基酸殘基是游離形式、受保護(hù)形 式或活化形式的纈氨酸殘基。大環(huán)的剩余部分合適地包含羥基羧酸殘基，其中該殘基的氧基部分使 大環(huán)內(nèi)酯鍵完整并且該殘基的羰基部分與位于大環(huán)的位置12的a-氨基基團(tuán) 形成酰胺鍵。所述羥基羧酸殘基合適地具有6至20個(gè)、更合適地ll個(gè)碳原子 的鏈長(zhǎng)度。它可以是取代的或未取代的和/或沿其鏈長(zhǎng)含有一個(gè)或多個(gè)不飽 和鍵，尤其是累積雙鍵。更合適地，大環(huán)的剩余部分包含ll-氧基-十一碳 酰基-ll-基，特別是ll-氧基-十一碳-6，8-二烯?；?ll-基殘基，該殘基任選地 是取代的，例如在位置2、 3、 4和/或5被取代。更合適地，所述的羥基羧 酸殘基是游離形式或受保護(hù)形式的式II殘基，或其鹽<formula>formula see original document page 9</formula>其中Rl是H、 OH或代表額外的鍵，并且R2是H或代表額外的鍵； R3是H并且R4是-CO-CH3或-CH(OH)-CH3或R3和R4—起代表式III的結(jié)構(gòu)■c才艮據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選大環(huán)內(nèi)酯因此是包含游離形式或受保護(hù)形式的式IV的大環(huán)或其鹽的大環(huán)內(nèi)酯<formula>formula see original document page 9</formula>其中X、 Y和Z是如上定義的殘基i)， ii)和iii)并且A是如上定義的羥基羧酸殘基；特別是包含游離形式或受保護(hù)形式的式v的大環(huán)或其鹽的那些大環(huán)內(nèi)酯<formula>formula see original document page 9</formula>通常在Sanglifehrin中，大環(huán)在臨近內(nèi)酯橋的氧基部分的碳原子處被 取代。典型地，該取代基包含游離形式或受保護(hù)形式的l-氧雜-7-氮雜-螺 -{5.5}-十一碳-8-酮-2-基殘基，例如式VI的殘基，或其鹽其中-a-b-是-(Me)C-CH-或-(Me)CH-CH(OH)-并且R是H或Me(其中 Me和Et分別代表甲基和乙基)，其中所述殘基通過(guò)位于螺殘基與大環(huán)內(nèi)酯 環(huán)之間的連接基團(tuán)與大環(huán)內(nèi)酯環(huán)連接，其中所述的連接基團(tuán)包含6至11個(gè)、 典型地9個(gè)碳原子的直鏈。連接基團(tuán)可以是取代的或未取代的和/或沿其鏈長(zhǎng)含有 一個(gè)或多個(gè)不 飽和鍵，尤其是累積雙鍵。合適地，連接基團(tuán)可以由甲基取代，例如被兩 個(gè)曱基基團(tuán)取代。合適地，連接基團(tuán)還可以被羥基，例如3個(gè)羥基取代基取 代，和/或可以是烯鍵式不飽和的，例如含有兩個(gè)碳-碳雙鍵。更合適地， 連接基團(tuán)包含l，7-二甲基-壬-9-基，尤其是1，7-二甲基-壬-l-烯-9-基或l，7-二 甲基-壬-l，3-二烯-9-基殘基，該殘基任選地是取代的，例如在位置3、 4和/ 或8上被取代。優(yōu)選地，連接基團(tuán)是游離形式或受保護(hù)形式的式VII的基團(tuán)其中c代表與螺殘基的鍵接；d代表與大環(huán)的鍵接并且R6和R7分別是 OH或一起代表額外的鍵。連接基團(tuán)通常在緊鄰于內(nèi)酯氧基基團(tuán)的碳原子處，即當(dāng)大環(huán)包舍ll-氧基-十一碳酰基-ll-基殘基時(shí)，在該殘基的位置ll處與大環(huán)連接。因此，本發(fā)明提供游離形式或受保護(hù)形式的式VIII化合物，或其鹽 S-L-M其中S代表如先前定義的螺二環(huán)殘基；L代表如先前定義的連接基團(tuán)并且M代表如先前定義的大環(huán)內(nèi)酯環(huán)。特別的本發(fā)明化合物是游離形式或受保護(hù)形式的式IXa和IX的化合 物或其鹽，<formula>formula see original document page 11</formula>其中-a-b-如上定義，-e-f-是-CH(OH)-CH(OH)-或-CH-CH-; -g-h-同上對(duì) -3-1>-的定義并且113、 R4和R5如上定義。式I至IX化合物含有不對(duì)稱碳原子并且因此可以以多種差向異構(gòu)體形式存在。本發(fā)明包括全部這些可能的差向異構(gòu)體以及其非對(duì)映異構(gòu)混合物。然而，其中的大環(huán)內(nèi)酯環(huán)為閉環(huán)形式并且其具有合適的立體化學(xué)的式VIII 和IX的化合物具有如本文中所提的Sanglifehrin特征性活性。優(yōu)選具有 sanglifehrin特征活性的差向異構(gòu)體。通常，例如對(duì)于本發(fā)明的制藥用途， 優(yōu)選純形式或基本上純形式的具有sanglifehrin特征活性的差向異構(gòu)體(即 不含或基本上不含缺乏sanglifehrin特征活性的差向異構(gòu)體)，例如包含至少 90%，例如至少95%的活性差向異構(gòu)體(即包含少于10%，例如少于5%的 無(wú)活性差向異構(gòu)體)。優(yōu)選地，位于大環(huán)的位置1至6的3-氛基六氬歧溱基羧酸殘基i)具有如 下構(gòu)象優(yōu)選地，位于大環(huán)的位置7至9的芳族氨基酸ii)具有L構(gòu)型，例如如下構(gòu)型優(yōu)選地，位于大環(huán)的位置10至12的脂族M胞ii)具有L構(gòu)型，例如如 下構(gòu)型當(dāng)大環(huán)的剩佘部分包含式II的殘基時(shí)，該殘基優(yōu)選地具有構(gòu)型當(dāng)R3和R4—起時(shí)優(yōu)選地具有如下構(gòu)型<formula>formula see original document page 13</formula>優(yōu)選地，1-氧雜-7-氮雜-螺-{5.5}-十一碳-8-酮-2-基殘基具有構(gòu)型<formula>formula see original document page 13</formula>其中當(dāng)-a-b-是-(Me)CH-CH(OH)-時(shí)，-a-b-優(yōu)選地具有構(gòu)型綴5當(dāng)連接基團(tuán)是式VII時(shí)，該連接基團(tuán)優(yōu)選地具有構(gòu)型當(dāng)R6和R7分別是OH時(shí)，位置26和27的構(gòu)型優(yōu)選地是26(S)，27(S)或 26(R)，27(R)。當(dāng)R6和R7—起代表額外的鍵時(shí)，位置26和27的構(gòu)型優(yōu)選地是本發(fā)明的式IX化合物優(yōu)選地具有如下構(gòu)象<formula>formula see original document page 14</formula>其中當(dāng)-a-b-是-(Me)CH-CH(OH)-時(shí)，-a-b-優(yōu)選地具有構(gòu)型<formula>formula see original document page 14</formula>當(dāng)-e-f-是-CH(OH)-CH(OH)-時(shí)，-e-f-優(yōu)選地具有(S)，(S)構(gòu)型或(R)，(R) 構(gòu)型；當(dāng)-g-h-是-(Me)CH-CH(OH)-時(shí)，-g-h-優(yōu)選地具有構(gòu)型<formula>formula see original document page 14</formula>當(dāng)-g-h-是-(Me)C-CH-時(shí)，-g-h-優(yōu)選地具有構(gòu)型并且當(dāng)R3和R4合在一起時(shí)，它們優(yōu)選地具有構(gòu)型<formula>formula see original document page 15</formula>、本發(fā)明的化合物可以為游離形式或受保護(hù)形式，例如T. W. Greene和 P. G. M. Wuts的"Protective Groups in Organic Synthesis",第二版,1991， John Wiley & Sons Inc., New York內(nèi)所述的受保護(hù)形式。尤其，OH基團(tuán)可 以采取受保護(hù)的形式，例如甲硅烷基醚(例如，如在Greene和Wuts同上引 文的第68-86頁(yè)內(nèi)的描述)、酯(見(jiàn)例如Greene和Wuts同上引文的第87-103頁(yè)) 和碳酸酯(見(jiàn)例如Greene和Wilts同上引文的第104-111頁(yè))的形式。此受保 護(hù)的形式還包括在內(nèi)部受保護(hù)的形式；例如在其中-g-h-是 -CH(CH3)-CH(OH)-的式IX大環(huán)內(nèi)酯的情況中，其中大環(huán)的位置14至17包 含式X殘基的受保護(hù)形式<formula>formula see original document page 15</formula>還例如，存在于Sanglifehrin內(nèi)的1，3二醇可以#皮保護(hù)為適宜的環(huán)結(jié)構(gòu)， 例如，Greene和Wuts同上引文的第118-142頁(yè)所述的環(huán)結(jié)構(gòu)。本發(fā)明的化合物還可以以鹽形式存在。對(duì)于在本發(fā)明用途中的應(yīng)用而 言適宜的可藥用鹽的實(shí)例包括酸加成鹽和堿加成鹽，根據(jù)化合物中存在的 具體取代基酌情具有例如HC1鹽形式。如前所述，本發(fā)明化合物的大環(huán)可以被斷裂(尤其在內(nèi)酯氧基基團(tuán) 處)，以提供其中大環(huán)是開(kāi)環(huán)形式的化合物。通常，內(nèi)酯氧基基團(tuán)的斷裂通過(guò)水解(溶劑解)進(jìn)行，例如以提供式XI的開(kāi)環(huán)大環(huán)化合物: R6 O-X-Y國(guó)Z畫(huà)A-OH S例如式XII的開(kāi)環(huán)大環(huán)化合物<formula>formula see original document page 16</formula>其中X、 Y、 Z、 A、 -a-b-、 -e-f-、 -g-h-、 R3、 R4和R5如上所定義并 且R6是H或Cw烷基，例如甲基。此類開(kāi)環(huán)形式為基礎(chǔ)的Sanglifehrin大環(huán)環(huán)系統(tǒng)的修飾提供中間手段 并且也是本發(fā)明的一部分。因此在又一方面，本發(fā)明提供如前文所定義的開(kāi)環(huán)形式的大環(huán)內(nèi)酯 或其鹽，其中所述的開(kāi)環(huán)大環(huán)為游離形式或受保護(hù)形式；游離形式或受保 護(hù)形式的如上所定義的化合物R6 0-X-Y-Z-A-OH，或其鹽；游離形式或受 保護(hù)形式的化合物R6 O畫(huà)X-Y畫(huà)Z-A'-CH(OH)-L-S,或其鹽，其中畫(huà)A'-CH(OH)-是如上所定義的羥基羧酸殘基，例如式II的殘基并且其它符號(hào)如 上所定義；游離形式或受保護(hù)形式的式XII'的化合物<formula>formula see original document page 17</formula>
XII,游離形式或受保護(hù)形式的式IX'的化合物<formula>formula see original document page 17</formula>或其鹽。在該方面的具體實(shí)施方案中，本發(fā)明提供游離形式或受保護(hù)形式的式 IX"的化合物或其鹽，<formula>formula see original document page 17</formula>其中-a畫(huà)b畫(huà)是-(Me)C=CH-或-(Me)CH畫(huà)CH(OH)畫(huà)；R8是H或-C(O)-ORIO，其中R10是H或Me ; R9是H ，或者，當(dāng)-a-b-是 -(Me)CH-CH(OH)-并且RA-C(O)曙OMe時(shí)，R9是Me;以及當(dāng)國(guó)N—N-代表在 這兩個(gè)N原子之間的單鍵時(shí)XAH，或X連同-N--N-代表在這兩個(gè)N原子之間 的雙鍵。更具體地，本發(fā)明提供式W、 Y(開(kāi)環(huán)Sanglifehrin A) 、 S(開(kāi)環(huán) sanglifehrin B)和T的4匕合物<formula>formula see original document page 19</formula>
本發(fā)明還包括游離形式或受保護(hù)形式的、其中1-氧雜-7-氮雜-螺-{5.5}-十-碳-8-酮-2-基環(huán)系統(tǒng)是開(kāi)環(huán)形式的化合物，例如式XIII的化合物，或其鹽Me'。'， 迎 其中a、 b、 L和M如上所定義,構(gòu)象那樣的構(gòu)象。式XIII化合物的開(kāi)環(huán)螺二環(huán)環(huán)系統(tǒng)優(yōu)選地具有如下構(gòu)象:、OH0, 麗2其中當(dāng)-a-b-是-(Me)CH-CH(OH)-時(shí)本發(fā)明尤其提供游離形式或受保護(hù)形式的式Z的化合物(Sanglifehrin<formula>formula see original document page 20</formula>或其鹽。式IX"、 S、 T、 W、 Y、 XIII和Z的化合物是用于制備Sanglifehrin (— 般地包括閉環(huán)形式及環(huán)擴(kuò)展的閉環(huán)形式(ring expanded ring closed forms)) 的有用中間體。式IX"化合物可以通過(guò)在內(nèi)酯氧基基團(tuán)處或其附近斷裂閉環(huán)的 sanglifehrin (例如SanglifehrinA或B)的大環(huán)內(nèi)酯環(huán)而制備。因此，例如， 式Y(jié)和T的化合物可以通過(guò)在堿性條件下，例如對(duì)式III化合物而言在堿金 屬氫氧化物存在下，以及例如對(duì)式IV化合物而言在甲醇和堿金屬碳酸鹽存 在下處理sanglifehrin A進(jìn)行制備。備選地，式IX"化合物可以從產(chǎn)生sanglifehrin的微生物的培養(yǎng)物中作 為分離物得到。例如，式Y(jié)和S的化合物可以從如下文所述的鏈霉菌屬物種 (5^e/7to附y(tǒng)"s sp.)A92-308110的培養(yǎng)物中作為分離物得到。在US6124453內(nèi)描述了從鏈霉菌屬物種A92-308110的培養(yǎng)物中分離 式Y(jié)和S的化合物。式Z的化合物可以通過(guò)在螺系統(tǒng)的氮原子與中心原子之間斷裂該螺 二環(huán)環(huán)系統(tǒng)而得到。備選地，式Z化合物可以從產(chǎn)生sanglifehrin的微生物 的培養(yǎng)物中作為分離物得到。例如，在US6124453內(nèi)描述了從鏈霉菌屬物 種A92-308110的培養(yǎng)物中分離式Z的化合物。具有與大環(huán)連接的螺二環(huán)殘基的本發(fā)明大環(huán)內(nèi)酯還可以接受對(duì)間隔 連接基團(tuán)的斷裂處理，例如就式IX而言，特別在殘基26與27之間的鍵接處 斷裂，以產(chǎn)生分開(kāi)的新螺二環(huán)化合物和其它大環(huán)內(nèi)酯。也正如前述，這些化合物可以用作中間體，Sanglifehrin的螺二環(huán)部分在該Sanglifehrin類化 合物的生物活性中尤其具有不可缺少的功能作用。因此，本發(fā)明提供游離形式或受保護(hù)形式的1-氧雜-7-氮雜-螺-{5.5}-十一碳-8-酮-2-基或其鹽 <formula>formula see original document page 21</formula>，尤其是游離形式或受保護(hù)形式的式VI'化合物或 其鹽，其中R7是H、任選地受保護(hù)的OH基團(tuán)、活性官能團(tuán)或-CH: -CH(OH)-CH(CH3)-CH2 -CH2 -CHO基團(tuán)或其S內(nèi)半縮醛等價(jià)物。 優(yōu)選地，式VI'化合物具有構(gòu)型其中當(dāng)-a-b-是-(Me)CH-CH(OH)-時(shí)，-a-b-優(yōu)選地具有如先前定義的構(gòu)型。 <formula>formula see original document page 21</formula>本發(fā)明還包括游離形式或受保護(hù)形式的開(kāi)環(huán)的l-氧雜-7-氮雜-螺 -{5.5}-十一碳-8-酮-2-基或其鹽，尤其是游離形式或受保護(hù)形式的式XIII' 化合物或其鹽<formula>formula see original document page 22</formula>XIII，其中-3-1>和117如先前定義。式xni'化合物的開(kāi)環(huán)的螺二環(huán)環(huán)系統(tǒng)優(yōu)選地具有如下構(gòu)象<formula>formula see original document page 22</formula>其中當(dāng)-a-b-是-(Me)CH-(OH)-時(shí)，-a-b-優(yōu)選地具有如先前定義的構(gòu)型本發(fā)明還提供游離形式或受保護(hù)形式或開(kāi)環(huán)形式的式XIV大環(huán)內(nèi)酯<formula>formula see original document page 22</formula>XIV其中M是如上定義的大環(huán)內(nèi)酯環(huán)，尤其是式XV的大環(huán)內(nèi)酯<formula>formula see original document page 22</formula>XV優(yōu)選地具有構(gòu)象其中當(dāng)-g-h-是-(Me) CH-CH(OH)-時(shí)，-g-h-優(yōu)選地具有如先前定義的 構(gòu)型并且當(dāng)-g-h-是-(Me)C-CH-時(shí)，-g-h-優(yōu)選地具有如先前定義的構(gòu)型并 且當(dāng)R3與R4合在一起時(shí)，它們優(yōu)選地具有如本文中所定義的構(gòu)型。本發(fā)明還提供特定的式XVI的大環(huán)內(nèi)酯XVI其中X是H、甲氧基、乙錄、OnPr、 OiPr;R14和R15獨(dú)立地是H、甲基、烷基、(C廣C4)烷基、(C廣C4)-CO-CH3， 或R14與R15合在一起以形成5至7元取代的或未取代的環(huán)烷基選自例如式 XVII;<formula>formula see original document page 24</formula>R16是H或Me或(Cw)烷基；R17是H、 OH、 0-(d-4)烷基，或R14、 R15及R17合在一起以形成式 XVIII的環(huán)烷基；<formula>formula see original document page 24</formula>R23是H、支鏈或直鏈(Cwo)烷基和/或沿其鏈長(zhǎng)含有一個(gè)或多個(gè)不飽 和鍵，特別是累積雙鍵或三鍵，優(yōu)選-CH-CH2， -CH2-OH， -CH2-OCH3, -CHO,-COOH，或XIX，合適地，R23可以如本文中所述被取代。在本發(fā)明的另一個(gè)方面，特定的大環(huán)內(nèi)酯選自式xx在又一方面，本發(fā)明包括本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酯和化合物，特別是基本純化形式(例如至少卯％，優(yōu)選至少95%,尤其至少98%純形式)的、為天然 產(chǎn)物的大環(huán)內(nèi)酯和化合物。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，SanglifehrinA、 B、 C和D等分離 自新的鏈霉菌屬物種A92-308110分離。鏈霉菌屬物種A92-308110的樣品在 1995年5月3日按照布達(dá)佩斯條約保藏于德國(guó)布倫瑞克的德國(guó)微生物和培養(yǎng) 物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen imd Zelikulturen GmbH, Mascheroder Weg lb， D-38124),并且具有保藏號(hào)DSM 9954。在 US6124453內(nèi)描述了從鏈霉菌屬物種A92-30810的培養(yǎng)物中分離 Sanglifehrin A、 <formula>formula see original document page 25</formula>下文通稱作"本發(fā)明活性劑"的本發(fā)明大環(huán)內(nèi)酯，例如式IX化合物， 例如SanglifehrinA、 B、 C和D，及其可藥用鹽顯示出sanglifehrin特征性活 性，即如下活性的組合具有親環(huán)蛋白結(jié)合活性；對(duì)肽基脯氨酸順?lè)串悩?gòu)酶具有抑制活性；具有免疫抑制活性；抑制B細(xì)胞增殖和T細(xì)胞增殖；但無(wú)FK結(jié)合蛋白結(jié)合活性，并且不抑制鈣依賴磷酸酶活性。本發(fā)明大環(huán)內(nèi)酉旨(例如式XVI)的生物活性可以在標(biāo)準(zhǔn)體外(/w v/辦w)和 體內(nèi)(/w v/vo)試驗(yàn)方法中，例如按如下方式證實(shí)。淋巴細(xì)胞對(duì)同種異體刺激的增殖性應(yīng)答可以按如下準(zhǔn)備。將來(lái)自 Balb/c小鼠(雌性，8-10周)的(2xl()S個(gè))脾細(xì)胞與來(lái)自CBA小鼠(雌性，8-10 周)的2xl05個(gè)脾細(xì)胞共孵育4日。同種異體細(xì)胞在應(yīng)答者脾細(xì)胞群體中誘 導(dǎo)增殖性應(yīng)答，該應(yīng)答可以通過(guò)標(biāo)記的前體在DNA中的摻入來(lái)測(cè)量。當(dāng)在 該試驗(yàn)中測(cè)試時(shí)，本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酉旨(例如式IX化合物)及其可藥用鹽(例如 SanglifehrinA、 B、 C和D)具有約30nM至多到約200nM的ICs。，而環(huán)孢 菌素A具有約20 nM的ICso。 (T. Meo (1979) The MLR in the mouse. In: "Immunological Methods", L. Lefkovits和B. Pernis編輯Academic Press, N.Y.第227-239頁(yè))將來(lái)自CBA小鼠的(2xl()S個(gè))脾細(xì)胞與50ng/ml LPS及試驗(yàn)化合物一 起孵育48小時(shí)。增殖由標(biāo)記的前體摻入DNA內(nèi)加以測(cè)量。本發(fā)明的大環(huán)內(nèi) 酯(例如式IX化合物)及其可藥用鹽(例如Sanglifehrin A、 B、 C和D)抑制B 細(xì)胞增殖并具有約40微摩爾至多到約100微摩爾的IC50。 (Greaves， M.和J. Janossy， 1972， Elicitation of selective T and B lymphocyte response by cell surface binding ligands， Transplant Rev.， 11:87 Janossy， (i和M. F.Greaves, 1971， Lymphocyte activation, I， Response of T and B lymphocytes to phytomitogens， Clin. Exp. Immunol. 9:483-498)。細(xì)胞毒性使用在IFNy (100 U/ml)和LPS(5微克/ml)及試驗(yàn)化合物(不 超過(guò)10微摩爾)存在下37。C孵育24至72小時(shí)的人單核細(xì)胞系THPl(5x104 個(gè)細(xì)胞/孔)測(cè)定?；罴?xì)胞使用測(cè)量活細(xì)胞內(nèi)線粒體脫氬酶的酶活性的比色 讀出MTT(colourimetric read-out MTT)定量(Mossman 1983)。在本試驗(yàn)中 孵育24小時(shí)后本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酯(例如式IX化合物)及其可藥用鹽(例如 Sanglifehrin A、 B、 C和D)具有約1000-5000 nM的ICs。。 (Mossman T. J. (1983)， Rapid calorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxic assays, J. Imm. Methods, 65， 55-63)。使用Ficoll-Hypaque密度分離，根據(jù)Hansell等(1991)方法從健康志愿 者的外周血中制備單核細(xì)胞。在添加刺激物之前，(在含10。/。體積FCS的20030分鐘。使用干擾素y (100 U/ml)和LPS (5微克/ml)作為刺激物以誘導(dǎo)外周 血單核細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子a(TNF-a)。在3小時(shí)溫育后，將細(xì)胞離心(1200 轉(zhuǎn)/分鐘，10分鐘)并收集上清液。存在于細(xì)胞上清液內(nèi)的TNF的量使用商 業(yè)可獲得的酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒測(cè)定。本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酯(例如式IX 化合物)及其可藥用鹽(例如SanglifehrinA、 B、 C和D)在此試驗(yàn)中測(cè)試時(shí)具 有約200nm至約1000 nm的IC50。合適的親環(huán)蛋白結(jié)合試驗(yàn)是Quesniaux在Eur. J. Immunol. 1987 17 1359-1365中所述的竟?fàn)幮訣LISA試驗(yàn)。在該試驗(yàn)中，將待測(cè)試的化合物在 溫育親環(huán)蛋白(人重組親環(huán)蛋白A)與已包被BSA的環(huán)孢菌素A的期間添加， 然后計(jì)算在無(wú)竟?fàn)幬锎嬖谙庐a(chǎn)生50%對(duì)照反應(yīng)抑制作用所需要的濃度 (IC5。)。替代性的試驗(yàn)是由Schneider等在Biochemistry(1994)， 33， 8218-8224 內(nèi)所述的竟?fàn)幮越Y(jié)合試驗(yàn)，該試驗(yàn)涉及在溫育生物素化的親環(huán)蛋白(人重組 親環(huán)蛋白A)與已包被BSA的環(huán)孢菌素A的期間添加試驗(yàn)化合物。在試驗(yàn)化合物存在和不存在下所結(jié)合的生物素化親環(huán)蛋白的量通過(guò)與鏈霉抗生物素 偶聯(lián)的堿性磷酸酶溫育而加以測(cè)定。當(dāng)在這些試驗(yàn)中測(cè)試時(shí)，本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酯例如式IX化合物(例如Sanglifehrin A、 B， C和B)具有約10 nM至約 100nM的IC5Q,而環(huán)孢菌素A具有約80nM的ICso?？梢允褂靡宰C實(shí)Sanglifehrin的生物學(xué)活性的其它體外試驗(yàn)是IL-2報(bào) 告基因試驗(yàn)和Con A-刺激的脾細(xì)胞試驗(yàn)(指示對(duì)T細(xì)胞活化的影響)。當(dāng)在標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)中測(cè)試時(shí)，本發(fā)明的大環(huán)內(nèi)酯例如式IX化合物(例如 Sanglifehrin A、 B、 C和B)沒(méi)有FK結(jié)合蛋白結(jié)合活性并且不抑制鈞依賴磷 酸酶活性。本發(fā)明的活性劑可用作藥物，例如作為免疫抑制劑以及抗炎劑和/或 抗病毒劑。它們尤其可以用于預(yù)防與肝炎病毒感染相關(guān)的病癥，尤其是丙型肝 炎。此外，本發(fā)明的活性劑具有抑制與肽基脯氨酸順?lè)串悩?gòu)酶(PPIase)活 性有關(guān)的病癥的治療性用途。PPIase是一類具有通過(guò)催化寡肽內(nèi)脯氨酸亞 氨基肽鍵的順?lè)串悩?gòu)化而加速蛋白質(zhì)折疊的作用的親環(huán)蛋白。本發(fā)明的大 環(huán)內(nèi)酯可以與親環(huán)蛋白結(jié)合并抑制PPI的活性。本發(fā)明的活性劑還可以用于治療自身免疫性疾病及治療炎性病癥，尤 其是具有包括自身免疫成分的病因的炎性病癥，如關(guān)節(jié)炎(例如類風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎、慢性累進(jìn)性關(guān)節(jié)炎(arthritis chronica progrediente )和變形性關(guān)節(jié) 炎)和風(fēng)濕性疾病。在一系列的其它具體或替代性實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供 1.1 用于在有需要的個(gè)體中預(yù)防或治療丙型肝炎感染或HCV誘導(dǎo)的病癥 如肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞癌的方法，包括向該個(gè)體施用治療有效 量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin,例如式—的化合物，其中 所述化合物單獨(dú)施用或與 一種或多種共同活性劑(co-agent)聯(lián)合施 用。1.2 用于抑制培養(yǎng)基內(nèi)HCV復(fù)制的方法，包括向該培養(yǎng)基施加有效量的 親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin，例如式—的化合物。1.3 用于抑制有需要的患者內(nèi)的HCV復(fù)制的方法，包括向該患者施用治 療有效量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin，例如式—的化合物。1.4 用于預(yù)防有需要的移植受體內(nèi)的HCV感染復(fù)發(fā)的方法，包括向該受 體施用治療有效量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin，例如式_ 的化合物。2. 親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物(如sanglifehrin)在制備用于任何如上所述方 法的藥物組合物中的用途。3. 用于任何如上所述方法中的藥物組合物，其包含親環(huán)蛋白結(jié)合性化合 物如sanglifehrin以及一種或多種可藥用稀釋劑或載體。此外，具有親環(huán)蛋白結(jié)合活性的本發(fā)明Sanglifehrin可以作為試劑用 于針對(duì)環(huán)孢菌素和其它親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物的置換免疫試驗(yàn) (displacement immunoassays)中，例如，專利申請(qǐng)WO 95/07468所述的試驗(yàn) 方法。該專利申請(qǐng)涉及用于測(cè)定血液內(nèi)抑免疫白結(jié)合性藥物(例如環(huán)孢菌 素)的濃度的方法該方法包括添加可以從血液內(nèi)的免疫抑制劑-抑免疫白 復(fù)合物中置換出所述藥物的結(jié)合性竟?fàn)幬?；添加可以與所述藥物結(jié)合但不 與結(jié)合性竟?fàn)幬镲@著結(jié)合的受體；從樣品中分離受體-藥物復(fù)合物；并且測(cè) 定藥物的量。Sanglifehrin可以在此試驗(yàn)中作為結(jié)合性竟?fàn)幬锸褂茫焕纾?以從親環(huán)蛋白中置換出環(huán)孢菌素，由此釋放環(huán)孢菌素以(例如通過(guò)對(duì)該環(huán)孢 菌素特異的單克隆抗體)定量。根據(jù)前述內(nèi)容，本發(fā)明在又一個(gè)方面提供4. 藥物組合，其包含a)親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin(例如式I化合 物)作為第一活性劑，和b)共同活性劑例如，本文中提供的一種或多種 藥劑。5. 如上定義的方法，包括(例如同時(shí)或依次)共施用治療有效量的親環(huán)蛋 白結(jié)合性化合物如sanglifehrin(例如式I化合物)和共同活性劑(例如本文中提供的一種或多種藥劑)本發(fā)明的化合物可以通過(guò)任何常規(guī)途徑、尤其是腸道途徑，例如口服 (例如以用于飲用的溶液劑、片劑或膠嚢劑的形式)或腸胃外途徑(例如以可 注射的溶液劑或混懸劑的形式)施用。優(yōu)選的藥物組合物可以是例如基于如UK 2,222,770 A中描述的微乳劑的那些藥物組合物。在另 一個(gè)方面，合適的共同活性劑可以在聯(lián)合治療或交替治療中共施 用。如本文中所用的術(shù)語(yǔ)"共施用"或"聯(lián)合施用"等意味著包括向患者施用 這些所選的治療劑，并且旨在包括其中這些治療劑不一定經(jīng)相同的施用途 徑或在相同的時(shí)間施用的治療方案。本發(fā)明也包括固定的組合。與僅施用 這些藥物活性成分中的一種的單一療法相比，施用本發(fā)明的藥物組合產(chǎn)生 有益效果，例如協(xié)同性或加性治療效果。適合與本發(fā)明化合物共施用的共 同活性劑包括，但不限于(1)干擾素或干擾素的綴合物，如(a) Intron-A , 干擾素a-2b (Schering Corporation, Kenilworth， NJ)，(b) PEG-Intron ,聚乙二醇干擾素a-2b (Schering Corporation, Kenilworth, NJ)，(c) Roferon ,重組干擾素a-2a (Hoffmann-La Roche， Nutley， NJ)，(d) Pegasys ,聚乙二醇干擾素a-2a (Hoffmann-La Roche, Nutley， NJ)，(e) Berefor ， 可用的干擾素 a2 (Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield， CT)，(f) Sumiferon⑧，純化的天然a干擾素混合物(Sumitomo, Japan),(g) Wellferon ,類淋巴母細(xì)胞干擾素a nl (GlaxoSmithKline), (h) Infergen , 共有a干擾素(InterMune Pharmaceuticals, Inc.,Brisbane, CA和Amgen， Inc., Newbury Park, CA)，(i)Alferon ,天然a干擾素的混合物(Interferon Sciences，和Purdue Frederick Co" CT)，①Viraferon ;(k) 綴合的干擾素包括，例如，與人白蛋白綴合的Albuferon(H Genome Science)。與水溶性聚合物或聚環(huán)氧烷均聚物，如聚乙二醇(PEG) 或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物及其嵌段共聚物綴合的干擾素。 作為基于聚環(huán)氧烷的聚合物的替代物，可以使用有效的非抗原性材料如葡 聚糖、聚乙烯吡咯烷酮類、聚丙烯酰胺類、聚乙烯醇類、基于碳水化合物 的聚合物等。在US 4766106， US 4917888， EPA 0 236 987， EPA 0 510 356和 WO95/130卯內(nèi)描述了干擾素-聚合物綴合物。由于聚合性修飾充分降低抗 原性應(yīng)答，此外來(lái)的干擾素不需要是完全自體的。用來(lái)制備聚合物綴合物 的干擾素可以從哺乳動(dòng)物提取以制備，如人干擾素、反芻動(dòng)物干擾素或牛 干擾素，或重組地生產(chǎn)。其它形式的干擾素包括干擾素p、 y、 t和co，如Serono的Rebif (干 擾素p畫(huà)la)、 Viragen的Omniferon (天然干擾素)或Boehringer Ingelheim 的Omega干擾素；口月l干擾素3口 Amarillo Biosciences的口月艮干擾素a;在另一個(gè)方面，干擾素的其它實(shí)例包括聚乙二醇化干擾素a，例如 聚乙二醇化干擾素a -2a，聚乙二醇化干擾素a -2b，聚乙二醇化共 有干擾素(consensus interferon )或聚乙二醇化的純化干擾素-ot 產(chǎn)物。 聚乙二醇化干擾素 a-2a在歐洲專利593,868 (本文中完整引用作為參 考)內(nèi)描述并且可商業(yè)地獲得，例如商品PEGASYS (Hoffmann-La Roche)。聚乙二醇化干擾素-a-2b在例如歐洲專利975,369 (本文中完整引 用作為參考)內(nèi)描述并且可商業(yè)地獲得，如商品PEG-INTRON A (Schering Plough)。聚乙二醇化共有干擾素在WO M/ll953 (本文中完整引用作為參考)內(nèi)描述。(2) 抗病毒劑抗病毒劑可以是有效抑制病毒在哺乳動(dòng)物內(nèi)的形成和/或復(fù)制的化合 物或生物物質(zhì)。這包括干擾病毒在哺乳動(dòng)物內(nèi)形成和/或復(fù)制所需要的宿主 機(jī)制或病毒機(jī)制的活性劑，如來(lái)自Valeant Pharmaceuticals, Inc., Costa Mesa, CA的三氮唑核普(ribavirin) (l-p-D-呋喃核糖基-lH-l，2,4-三唑-3-酰 胺)、來(lái)自Schering-Plough Corporation, Kenilworth, NJ的Rebetol 、 和來(lái)自Hoffmann-La Roche， Nutley， NJ的Copegus⑧、開(kāi)發(fā)中的三氮峻核 脊類似物，如Valeant的Levovirin及Viramidine ，以及。米唑立賓單磷酸 鹽(Mizoribine Monophosphate);(3) 蛋白酶抑制物HCV NS3-4A絲氨酸蛋白酶的抑制物，如基于底物的蛋白酶抑制物 (Attwood等，爿wftv/m/ /7印ftVfe flfenv^/ves， PCT WO 98/22496, 1998; Attwood等,Antiviral Chemistry and Chemotherapy 1999， 10， 259-273; Attwood等，Preparation and use of amino acid derivatives as anti-viral agents,德國(guó)專利公開(kāi)DE 19914474; Tung等Inhibitors of serine proteases particularly hepatitis C virus NS3 protease; PCT WO 98/17679)，包括a酮 酰胺類和肼基脲類(hydrazinoureas)，以及在親電子試劑(如硼酸或膦酸西旨) 中終止的抑制物(Llinas-Brunet等Hepatitis C inhibitor peptide analogues, PCT WO 99/07734);用于治療HCV的美國(guó)專利，例如授予Spruce等的美國(guó)專利號(hào) 6，004，933(該專利公開(kāi)了 一類用于抑制HCV內(nèi)肽酶2的半胱氨 酸蛋白酶抑制物)；授予Zhang等的美國(guó)專利號(hào)5，990，276(該專利 公開(kāi)了丙型肝炎病毒NS3蛋白酶的合成性抑制物)；授予Reyes 等的美國(guó)專利號(hào)5,538,865內(nèi)公開(kāi)的蛋白酶抑制物；在Corvas International, Inc.的WO 02/008251和Schering Corporation的 WO 02/08187和WO 02/008256內(nèi)公開(kāi)的作為HCV NS3絲氨酸蛋白酶的抑制物的肽；在Boehringer Ingelheim的美國(guó)專利號(hào) 6,534,523、 6，410，531和6，420，380以及Bristol Myers Squibb的 WO 02/060926 (這些文獻(xiàn)在本文中完整地引用作為參考)內(nèi)公開(kāi)的 HCV抑制物三肽；在Schering Corporation的WO 02/48172內(nèi) 公開(kāi)的作為HCV NS3絲氨酸蛋白酶的抑制物的二芳基肽；在 Schering Corporation的WO 02/18198和Bristol Myers Squibb的 WO 02/48157 (在本文中完整地引用作為參考)內(nèi)/>開(kāi)的作為HCV NS3絲氨酸蛋白酶的抑制物的imidazoleidinone類；Vertex Pharmaceuticals的WO 98/17679和Bristol Myers Squibb的WO 02/48116也7>開(kāi)了 HCV蛋白酶抑制物(在本文中完整地引用作為 參考)。(4) 非基于底物的NS3蛋白酶抑制物如2,4，6-三羥基-3-硝基-苯曱酰胺 衍生物(Sudo K.等，5/oc/re附/5Tfl/和丑/o/7/rys/cfl/及&sefl/r/r CV 附附mw/ca^/ows， 1997， 238 643-647; Sudo K.等^w,/v/ra/ Or麵勿朋flf C7^歸幼mi/^， 1998, 9,186)，包括RD3-4082和RD3-4078;(5) 菲醌，在SDS-PAGEM射自顯影中具有對(duì)抗蛋白酶的活性的、 從鏈霉菌屬物種的發(fā)酵培養(yǎng)肉湯中分離的菲醌，Sch 68631 (Chu M.等， rcm/^flfrwi丄"teM， 1996， 37， 7229-7232), ( Chu M等，Tetrahedron Letters 37: 7229-7232， 1996);從真菌/^"/"7//"附gW / /v"/n中分離的Sch 351633 (Chu M.等,必/oo/^aw/c tfwdC7^附/y^y jLeftcs 9:1949-1952);基于 大分子水蛭蛋白酶抑制劑c所設(shè)計(jì)的選擇性抑制物，其中所述的水蛭蛋白 酶抑制劑c從水蛭中分離并且是數(shù)種絲氨酸蛋白酶(如S.griseus蛋白酶A 和B、 a-胰凝乳蛋白酶、類胰凝乳蛋白酶及枯草蛋白酶)的有效抑制物 (Qasim M.A.等，"/oc&附/Wo; 36:1598-1607， 1997)。(6) 在Kakiuchi N.等/ FEAS i^股/^ 421， 217-220; Takeshita N.等 Jwfl(^cfl/ B/oc/^wi^o;， J997， 247， 中定義的噢峻烷類和苯甲酰苯 胺類。在反向HPLC分析中顯示與NS3/4A融合蛋白和NS5A/5B底物有關(guān)的抑制作用的漆唑烷衍生物(Sudo K.等，爿/i"V/m/ Ae^flfd， 1996， 32， 9-18)。尤其是化合物，具有被長(zhǎng)烷基鏈取代的稠合的肉桂酰基部分的 RD-16250、 RD4 6205和RD4 6193。(7) HCV NS3-4A絲氨酸蛋白酶抑制物，包括由Boehringer Ingelheim 生產(chǎn)的BILN2061、由Vertex生產(chǎn)的VX-950、由Schering-Plough生產(chǎn)的 SCH-503034和SCH-351633和由GlaxoSmithKline、Bristol Myers Squibb、 Abbot、 Roche、 Merck、 Pfizer及Gilead生產(chǎn)的處于臨床前和臨床研發(fā)中 的其它HCV蛋白酶抑制物；(8) 核苷類似物由Idenix生產(chǎn)的替比夫定(Telbivudine) (US 6444652、 US6596700和 WO0196353)。 HCV NS5B RNA依賴性RNA聚合酶的核普抑制物或非核 苷抑制物，如WO 2004/002422所公開(kāi)的2，-C-甲基-3'-0-L-纈氨酸酯呋喃 核糖基胞苷(NM283, Idenix)。在國(guó)際公開(kāi)號(hào)WO 01/90121和WO 01/92282 (這些文獻(xiàn)在本文中完整 地引用作為參考)中由Idenix Pharmaceuticals公開(kāi)的、用于治療黃病毒(包 括HCV)和痙病毒的、分支的核苷。具體地，在該Idenix出版物中公開(kāi)了 用于治療人及其它宿主動(dòng)物中丙型肝炎感染(以及黃病毒和瘟病毒)的方 法，其中所述的方法包括單獨(dú)施用或與另外的抗病毒劑組合地施用有效量 的生物活性的1，、 2，、 3，或4，-分支的B-D或B-L核苷或其可藥用鹽或前 體藥物(任選地在可藥用載體中)。在公開(kāi)治療丙型肝炎病毒的用途的其它專利申請(qǐng)中的核苷類似物包 括由 BioChem Pharma， Inc.,(現(xiàn)為Shire Biochem， Inc.)提交的 PCTCA00/01316 (WO 01/32153 ; 2000年ll月 3 日提交)和 PCT/CAOl/00197 (WO 01/60315; 2001年2月19日提交)；由Merck & Co.， Inc.提交的PCT/US02/01531 (WO 02/057425; 2002年1月18日提交)和 PC1YUS02/03086 (WO 02/057287; 2002年1月18日提交)、由Roche提 交的PCT/EP01/09633 (WO 02/18404; 2001年8月21日7〉開(kāi))和由Pharmasset， Ltd.提交的PCT公開(kāi)號(hào)WO 01/79246 (在2001年4月13日 提交)、WO 02/32920 (在2001年10月18日提交)以及WO 02/48165(這些 申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容在本文中完整地引用作為參考)。在Emory大學(xué)的名為"2，-氟核苷"的PCT公開(kāi)號(hào)WO 99/43691 (本文 中完整引用作為參考)中公開(kāi)的2，-氟核苷類；由Eldmp等公開(kāi)的r-修飾的核苷類(口頭發(fā)言V，丙型肝炎病毒，黃 病毒科；第16屆國(guó)際抗病毒研究大會(huì)(2003年4月27日，Savannah, GA));在Bhat等中公開(kāi)的核苷類似物和2，-修飾的核普類(口頭發(fā)言V，丙型 肝炎病毒，黃病毒科，2003 (口頭發(fā)言V，丙型肝炎病毒，黃病毒科；第 16屆國(guó)際抗病毒研究大會(huì)(2003年4月27日，Savannah, Ga); pA75);Olsen等公開(kāi)的2，-修飾的核苦類(口頭發(fā)言V，丙型肝炎病毒，黃病 毒科；第16屆國(guó)際抗病毒研究大會(huì)(2003年4月27日，Savannah, Ga)p A76)臨床前的4匕合物包括R803 (Rigel)、 JTK-003 (Japan Tabacco)、 HCV-086 (ViroPha醒/Wyeth)、 R曙1479 (Roche);(9) 核普酸聚合酶抑制物和膠霉毒素(Ferrari R.等九"r"fl/W/Wogj;, 1999， 73， 1649-1654)和天然產(chǎn)物淺藍(lán)菌素(Lohmann V.等Wn /ogv， 1998， 249， 108-118);(10) HCV NS3解旋酶抑制物，如由ViroPhama生產(chǎn)的VP_50406和來(lái) 自Vertex的化合物，在美國(guó)專利號(hào)5,633,388和PCT WO 97/36554內(nèi)公開(kāi) 的其它解旋酶抑制物；(11) 指向HCV基因組或病毒復(fù)制所需要的任何細(xì)胞成分的反義分子。與病毒5'非編碼區(qū)(NCR)內(nèi)的序列段(Alt M.等，好e/mtofogv, 1995， 22， 707-717)，或包含該NCR的3'末端的核苦酸326-348和位于HCV RNA 的核心編碼區(qū)內(nèi)的核苷酸371-388 (Alt M.等，^n^/v^ 6>/ Wra/og);， 1997，142， 589-599; Galderisi U.等，/o"脂/ CW/由油gy， 199， 181， 251-257)互補(bǔ)的硫代磷酸酯寡脫氧核苷酸類(S-ODN);如由Isis Pharm/Elan生產(chǎn)的ISIS 14803、由Hybridon、 AVI bioPharma和Chugai 生產(chǎn)的反義寡核苷酸、AVI-4065 (AVI BioPharma)或可以增強(qiáng)治療的效力 的與HCV基因組的任何部分互補(bǔ)的反義序列；(12) IRES依賴性翻譯的抑制物(Ikeda N等，/^e^/w幼e /7"vewftV w "m/ Ae/;fl故/s C，日本專利公開(kāi)JP-08268890; Kai Y等 Prevew&》w flfif/ ,re",附ew/v/ni/ cfcefls^s1, 曰本專矛J公開(kāi)JP-10101591); :i口 由Isis Pharm/Elan生產(chǎn)的ISIS 14803 、由PTC Therapeutics, Anadys、 Immusol、 RiboTargets和SomaGenics生產(chǎn)的IRES抑制物；(13) 核酶，如抗核酸酶的核酶(Maccjak， D.J.等，好e/mto/ogv l"9， 30， 摘要995)和在Barber等的美國(guó)專利號(hào)6,043,077和Draper等的美國(guó)專利 號(hào)5，869，253及5，610，054(這些專利在本文中完整地引用作為參考)內(nèi)涉及 的那些核酶，如RPI和Sirna Therapeutics Inc.的HEPTAZYME;(l4)在HCV生活周期(包括病毒進(jìn)入、裝配和成熟)中的其它靶的抑 制物，如一種由Migenix生產(chǎn)的糖蛋白加工抑制物Celgosivir(MBI 3253)、 由Trimeris生產(chǎn)的融合抑制物、由Achillion生產(chǎn)的ACH-0137171;(15)免疫調(diào)節(jié)劑受體激動(dòng)劑如toll樣受體(TLR，)激動(dòng)劑包括由Anadys生產(chǎn)的 ANA245、 ANA971、 ANA975 (US 5041426、 4880784); CpG-lOlOl， 一種 TLR-9激動(dòng)劑(Coley Pharmaceuticals); IMPDH抑制物，霉酚酸，其鹽 或前體藥物霉酴酸鈉或mycophenolate mofetil或Merimebodib (由Vertex 生產(chǎn)的VX-497);胸腺素a-l(由SciClone生產(chǎn)的Zadaxin或其組合)；SCV-07 (SciClone)、 Belerofon(由Nautilus生產(chǎn)的改良IFN-a);由NABI生產(chǎn)的 CIVACIR(丙型肝炎免疫球蛋白)，或S1P受體激動(dòng)劑、例如FTY720或其 類似物(任選地磷酸化的)，例如在EP627406A1、 EP778263A1 、 EP1002792A1、 WO02/18395、 WO02/76995、WO 02/06268、 JP2002316985、WO03/29184、 WO03/29205、 WO03/62252和WO03/62248內(nèi)所7>開(kāi)的那 些，這些申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容在本文中完整地引用作為參考；由3M Pharmaceuticals生產(chǎn)的雷西莫特(resiquimod)[VML600]， 一種咪奮莫特 (imiquimod)類似物，其是干擾素-a及其它細(xì)胞因子的有效誘導(dǎo)劑；(16) 抗纖維化劑，如N-苯基-2-嘧咬-胺衍生物、imatinib (Gleevac)、由 Indevus生產(chǎn)的IP誦501和來(lái)自InterMune的干擾素y lb、由Intermune、 Marnac、 Shionogi生產(chǎn)的吡非尼酮(Pirfenidone)(多重性TGF p激動(dòng)劑、 FGF拮抗劑、PDGF拮抗劑)；(17) 由Intercell(治療性肽疫苗IC41 HCV)、 Epimmune/Genecor、 Merix、 Tripep (Chiron-VacC)生產(chǎn)的治療性疫苗、由Avant提供的免疫 療法(Therapore)、由CellExSys提供的T細(xì)胞療法、由STL生產(chǎn)的單克 隆抗體XTL-002、由Anadys生產(chǎn)的ANA 246和ANA 246、由Innogenetics 生產(chǎn)的針對(duì)E2的治療性疫苗、由XTLBio生產(chǎn)的抗E2包膜蛋白的mAb、 GI-5005 (Globelmmune Inc)、 InnoVac-C(WO 9967285, Innogenetics)、 IC-41(Interce11)、干擾素a-n3(Interferon Sciences)、 Engerix B(SmithKline Beecham);(18)其它化合物包括Ursodiol(EP00269516 ， Axcan Pharma)、 HE-2000 (DHEA類似物，Colthurst Ltd)、 EHC-18(免疫調(diào)節(jié)物，Enzo biochem)、 二鹽酸組胺(H2激動(dòng)劑，WO09104037, Estero-Anstalt)、 1-氨 基-烷基環(huán)己烷類(美國(guó)專利號(hào)6,034,134)、烷基脂類(美國(guó)專利號(hào) 5,922,757)、維生素E和其它抗氧化劑(美國(guó)專利號(hào)5,922,757)、膽酸類(美 國(guó)專利號(hào)5，846，99964)、 N-(膦?；阴；?-L-天冬氨酸(美國(guó)專利號(hào) 5,830,905)、苯二曱酰胺類(美國(guó)專利號(hào)5,633,388)、多腺苷酸衍生物(美國(guó) 專利號(hào)5,496，546)、 2，3，-雙脫氧肌苷(美國(guó)專利號(hào)5，026，687)、苯并咪唑類 (美國(guó)專利號(hào)5,891,874)、植物提取物(美國(guó)專利號(hào)5,837,257、美國(guó)專利號(hào) 5,725，859和美國(guó)專利號(hào)6，056，961)和哌啶類(美國(guó)專利號(hào)5，830，905); N-(膦?；阴；?-L-天冬氨酸、苯二曱酰胺類、多腺苷酸衍生物、糖基化抑制物以及阻斷由病毒感染所致的細(xì)胞損傷的非特異性細(xì)胞保護(hù)劑；(19) 目前處于臨床前開(kāi)發(fā)或臨床開(kāi)發(fā)中用于治療HCV的任何其它化合 物，包括白細(xì)胞介素-10 (Schering-Plough)、由Endo Labs Solvay生產(chǎn)的 AMANTADINE (Symmetrel)、由Idun Pharma生產(chǎn)的胱天蛋白酶抑制物 IDN-6556、由Chiron生產(chǎn)的HCV/MF59、由Maxim生產(chǎn)的CEPLENE (二 氯組胺)、由Idun PHARM生產(chǎn)的IDN-6556、由Tularik生產(chǎn)的P-微管蛋 白抑制物T67、由Fujisawa Healthcare生產(chǎn)的FK788、 IdB1016(Siliphos， 口服水飛薊素-磷脂酰膽堿磷脂復(fù)合物(phytosome))、由Immtech生產(chǎn)的 Dication、由Aethlon Medical生產(chǎn)的hemopurifier、由United Therapeutics 生產(chǎn)的UT 231B;由Bayer生產(chǎn)的HepeX-C SMI 、 PPVO-Bay55-8800 (羊 副痘病毒(Parapoxvims ovis));由Angion生產(chǎn)的Refanalin(HGF才莫擬物)、 R803 (Rigel)、 JTK闘003、 JTK曙002和JTK-109 (均來(lái)自Japan Tobacco)、 HCV-086 (ViroPharma/Wyeth) 、 ISIS-14803 (ISIS Pharmaceuticals)、 GS-9132 (由Achillion Pharmaceuticals生產(chǎn)的 一種聚合酶抑制物)、 HCV-793 (Pharmasset and Roche) 、 R1626 (Roche)。處于臨床前開(kāi)發(fā)中的化合物或藥物可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員例如通過(guò)檢 索互聯(lián)網(wǎng)上的臨床試驗(yàn)信息和來(lái)自各個(gè)公司的通訊稿信息而容易地鑒定。(20) 增強(qiáng)組合療法效力的化合物，包括葉酸拮抗藥、5-氟嘧咬(包括 5-氟尿嘧咬)、胞苷類似物如p-L-l，3-二氧戊環(huán)基胞苷或j3-L-l，3-二氧戊環(huán) 基5-氟胞苦、抗代謝物(包括噤呤抗代謝物、阿糖胞普、fudarabine、氟尿 苷、6-巰基嘌呤、甲氨蝶呤和6-硫代鳥(niǎo)噤呤)、羥基脲、有絲分裂抑制物(包 括CPT-ll、依托泊苷(VP-21)、紫杉醇(taxol)、和長(zhǎng)春花生物堿類如長(zhǎng)春 花新堿和長(zhǎng)春花堿、烷基化劑(包括但不限于白消安、苯丁酸氮芥、環(huán)磷酰 胺、ifofamide、 氮芥、抗瘤氨酸(melphalan)和三胺硫磷(thiotepa))、非經(jīng) 典的烷基化劑、含鉑化合物、博來(lái)霉素、抗肺瘤抗生素、蒽環(huán)類藥如多柔 比星(doxorubin)和達(dá)諾霉素(dannomycin)、蒽二酮、拓樸異構(gòu)酶II抑制 物、激素劑(包括但不限于皮質(zhì)類固醇(地塞米松(dexamethasone)、潑尼松(prednisone)和甲基潑尼松(methylprednisone))、雄激素如氟甲睪酮 (fluoxymesterone)和甲睪酮(methyltestosterone)、 雌激素如己烯雌酚 (diethylstilbesterol)、抗雌激素藥如他莫昔芬(tamoxifen)、 LHRH類似物如 亮丙瑞林(leuprolide)、抗雄激素藥如氟他胺(flutamide)、氨魯米特 (aminoglutethimide)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)和甲羥孕酮 (medroxyprogesterone))、 天冬酰胺酶、卡莫司汁(carmustine)、 洛莫司汁 (lomustine)、六甲基蜜胺(hexamethyl-melamine)、達(dá)卡巴漆(dacarbazine)、 米托坦(mitotane)、 鏈佐星(streptozocin)、 順鉑(cisplatin)、 卡鉑 (carboplatin)、 levamasole和亞葉酸(leucovorin)。本發(fā)明的4匕合物還可以 與酶治療劑和免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)物如白細(xì)胞介素、腫瘤壞死因子、巨噬細(xì)胞集 落刺激因子和集落刺激因子聯(lián)合^^用。親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物或治療劑如sanglifehrin在治療如上文所述的 疾病和病癥中的用途可以在標(biāo)準(zhǔn)的體外實(shí)驗(yàn)或臨床試驗(yàn)中予以證實(shí)，例如 才艮據(jù)如下文所述的方法進(jìn)行證實(shí)。A. 體外本發(fā)明的各種Sanglifehrin對(duì)HCV基因組復(fù)制的影響可以使用HCV 復(fù)制子細(xì)胞進(jìn)行檢驗(yàn)。HCV復(fù)制子細(xì)胞系，克隆A，從Apath，LLC得到許可。細(xì)胞在含有 10%熱滅活胎牛血清(FBS, Gibco)、 2 mM L-谷氨酰胺、lx非必需氨基酸 (Gibco)和l mg/ml G418 (Invitrogen， Carlsbad, CA)的Dulbecco改良Eagle 培養(yǎng)基(DMEM， Gibco)內(nèi)培養(yǎng)。為確定化合物的抗病毒效應(yīng)，HCV復(fù)制子細(xì)胞(克隆A)用在補(bǔ)加 2。/。FBS和0.5。/。 DMSO的DMEM中系列稀釋的化合物處理48小時(shí)，隨后， 提取總細(xì)胞內(nèi)RNA，并且使用HCV特異性引物(5，-TCTTCACGCAGA AAG CGT CTA-3，和5,-CTG GCA ATT CCG GTG TAC T-3) Sequence ID No: l和探針(5，-6-FAM-TCC TGG AGG CTG CAC GAC ACT CAT A-TAMRA-3，) Sequence ID No: 2，通過(guò)實(shí)時(shí)定量RT-PCR(Taqman)確定HCV RNA的水平。對(duì)于每個(gè)處理，將HCV RNA的量基于提取的總RNA 的量進(jìn)行標(biāo)化，其中所述總RNA的量在Quant-iT試驗(yàn)(Molecular Probe) 中確定。得到的每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)代表在細(xì)胞培養(yǎng)物中六個(gè)重復(fù)的平均值。IC50 是化合物的如下濃度，在此濃度上復(fù)制子細(xì)胞內(nèi)的HCV RNA水平減少 50%。為監(jiān)測(cè)化合物的細(xì)胞毒效應(yīng)，復(fù)制子細(xì)胞在化合物處理48小時(shí)后的 成活力使用基于四氮唑鹽化合物(MTS)的試驗(yàn)(CellTiter 96 AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega， Madison, WI)確定。CC50 是化合物的如下濃度，在此濃度上細(xì)胞的成活力減少50%。B.臨床試驗(yàn)總計(jì)15 30名患有丙型肝炎病毒感染的患者入選2 12周的研究。每名 患者接受治療有效劑量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin。在治療進(jìn) 程中及在2周的隨訪期內(nèi)(典型地對(duì)全部患者)監(jiān)測(cè)病毒RNA載量的血清 水平。在丙型肝炎患者內(nèi)實(shí)現(xiàn)持續(xù)病毒學(xué)應(yīng)答所需要的治療時(shí)長(zhǎng)和劑量將 在涉及更大數(shù)目的患者和多到12個(gè)月的更長(zhǎng)治療時(shí)間及6個(gè)月隨訪期的將 來(lái)臨床試驗(yàn)中確定。在實(shí)施本發(fā)明方法時(shí)需要的日劑量將根據(jù)例如所用的親環(huán)蛋白結(jié)合 性化合物、宿主、施用模式、待處理的病況的嚴(yán)重性而變動(dòng)。Sanglifehrin可以作為單獨(dú)成分施用或者與其它藥物一起施用，其中 所述其它藥物是例如具有抗HCV活性的藥物，例如干擾素a、聚乙二醇 化干擾素a、三氮唑核苷、HCV聚合酶抑制物如NM283或HCV蛋白 酶抑制物如SCH503034和VX-950。所用共同活性劑的日劑量將才艮據(jù)例如 與所用化合物的協(xié)同效應(yīng)、宿主、施用模式及待處理的病況的嚴(yán)重性而變 動(dòng)。
權(quán)利要求
1.用于在有需要的個(gè)體中預(yù)防或治療丙型肝炎和相關(guān)疾病如肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞癌的方法，包括向所述個(gè)體施用治療有效量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如大環(huán)內(nèi)酯。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中大環(huán)內(nèi)酯是游離形式或受保護(hù)形式 的式VIIS國(guó)L-M 的sanglifehrin， 或其鹽,其中S代表支鏈或直鏈(d.m)烷基；L代表包含具有6至11個(gè)碳原子的直鏈的連接基團(tuán)；并且 M代表大環(huán)，其中該大環(huán)的位置2至6由取代或未取代的式I的六氫 歧溱基羧酸殘基提供；其中該大環(huán)的位置7至9由芳族a-氨基酸殘基提供， 其中該芳族a-氨基酸殘基的羧基部分占據(jù)該大環(huán)的位置7，并且該芳族a-氨基酸殘基的a-M部分占據(jù)該大環(huán)的位置9;該大環(huán)的位置10至12由脂族 a-氨基酸殘基提供，其中該脂族a-氨基酸殘基的羧基部分占據(jù)該大環(huán)的位 置IO，并且該脂族a-氨基酸殘基的a-氨基部分占據(jù)該大環(huán)的位置12;大環(huán) 的剩余部分包含具有6至20個(gè)碳原子鏈長(zhǎng)的羥基羧酸殘基，該羥基羧酸殘基 的氧基部分完成大環(huán)內(nèi)酯鍵并且其羰基部分與位于大環(huán)的位置12處的a-氨 基基團(tuán)形成酰胺鍵。
3. 用于在培養(yǎng)基中抑制HCV復(fù)制的方法，包括向該培養(yǎng)基施加有 效量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin。
4. 用于在有需要的患者中抑制HCV復(fù)制的方法，包括向該患者施 用治療有效量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin。
5. 用于在有需要的移植受體中預(yù)防HCV感染復(fù)發(fā)的方法，包括向該 受體施用治療有效量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin。
6. 親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin在預(yù)防或治療丙型肝炎和 相關(guān)疾病如肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞癌中的用途。
7. 親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin在制備用于根據(jù)權(quán)利要求l 至6之任一項(xiàng)的方法的藥物組合物中的用途。
8. 用在根據(jù)權(quán)利要求1至6之任一項(xiàng)的方法中的藥物組合物，包含親 環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin及一種或多種可藥用稀釋劑或載體。
9. 藥物組合，包含a)親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin作為第 一活性劑，和b)具有抗HCV特性的共同活性劑。
10. 根據(jù)權(quán)利要求1至6之任一項(xiàng)的方法，包括同時(shí)或依次地共施 用治療有效量的親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物如sanglifehrin和具有抗HCV特性 的共同活性劑。
11. 根據(jù)前述權(quán)利要求之任一項(xiàng)的方法、用途、組合物或組合，其中 親環(huán)蛋白結(jié)合性化合物是下式的化合物其中X是H、曱氧基、乙IL^、 OnPr、 OiPr;R14和R15獨(dú)立地是H、曱基、烷基、(C廣C4)烷基、(d-C4)-CO-CH3， 或R14和R15合在一起形成5至7元取代或未取代的環(huán)烷基選自下式R16是H、或Me或(d-4)烷基;R17是H、 OH、 -0-(0:1.4)烷基，或R14、 R15和R17合在一起形成下式 的環(huán)烷基<formula>formula see original document page 4</formula>18R23是H、支鏈或直鏈(Cw。)烷基和/或沿其鏈長(zhǎng)含有一個(gè)或多個(gè)不飽 和鍵，特別是累積雙鍵或三鍵。
12 根據(jù)權(quán)利要求ll的方法、用途、組合物或組合，其中R23選自 -CH=CH2、 -CH2-OH、 CH2-OCH3、 -CHO、畫(huà)COOH，或式XIX，
13.如此前定義并描述的方法、用途、組合物或組合。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)大環(huán)內(nèi)酯化合物如sanglifehrin用于治療和預(yù)防丙型肝炎和相關(guān)疾病如肝纖維化、肝硬化和肝細(xì)胞癌的用途。
文檔編號(hào)A61P31/00GK101242842SQ200680029768
公開(kāi)日2008年8月13日 申請(qǐng)日期2006年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年6月17日
發(fā)明者B·魏德曼, K·林, K·齊默爾曼 申請(qǐng)人:諾瓦提斯公司