專利名稱：用于提高功能性血管完整性、細(xì)胞存活和在腦中局部缺血或者局部缺血發(fā)作后減少程序 ...的制作方法
用于提高功能性血管完整性、細(xì)胞存活和 在腦中局部缺血或者局部缺血發(fā)作后 減少程序性細(xì)胞死亡的組合物和方法發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及哺乳動(dòng)物營養(yǎng)和其增強(qiáng)血管完整性和保護(hù)免于與腦中局部 缺血或者局部缺血發(fā)作有關(guān)的細(xì)胞損傷的作用。具體地，本發(fā)明利用一氧 化氮釋放化合物、長鏈多不飽和脂肪酸和任選地包括抗氧化劑、抗炎劑、生長因子和B族維生素的其他成分的組合，其作為普通膳食的一部分施用， 以提高血管完整性、促進(jìn)細(xì)胞存活和從而減輕腦和/或其他器官中的局部缺 血損傷，例如，腦局部缺血中的損傷。發(fā)明背景在本說明書中全文引用多種出版物，包括專利、公布的申請、技術(shù)文 章和學(xué)術(shù)文章。將這些引用的出版物每個(gè)都完整引入本文作為參考。由于流向腦的血流的暫時(shí)或者永久減少或者停止引起對腦的氧供應(yīng)減 少，發(fā)生低氧局部缺血腦損傷。腦的局部缺血導(dǎo)致中風(fēng)，與隨后腦組織的 程序性細(xì)胞死亡和壞死，導(dǎo)致梗塞。類似于心血管局部缺血，腦局部缺血 可以由多種因素引起，如血塊、血栓形成、栓塞、動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的阻 塞，或者脈管系統(tǒng)中的其他阻塞。已經(jīng)將高膽固醇血癥、高血壓、糖尿病 和肥胖癥等因素鑒定為局部缺血性中風(fēng)的危險(xiǎn)因素。局部缺血性中風(fēng)是世 界上人類死亡的主要因素，并且也侵襲其他動(dòng)物，包括陪伴動(dòng)物。還已知局部缺血損害顯著促進(jìn)腦老化和癡呆。癡呆是影響老年人口的 主要疾病。癡呆的發(fā)病率從60到64歲人中約0.3到1%增加到95歲以上 人中的50 % ，每5年發(fā)病率加倍(McDowell， I" Aging (Milano) 13: (2001)143-162)。在西方人口中，認(rèn)為阿爾茨海默氏病(AD)是癡呆的主要形式， 而血管性癡呆(VD)似乎是東方人口中的主要形式(Fratiglioni， L.等人， Drugs Aging (1999) 15: 365-375; Ott， A.，等人，The Rotterdam Study, BMJ (1995) 310: 970-973)。不斷增長的證據(jù)表明血管性癡呆和阿爾茨海默 氏病通常共存于具有癡呆的群體中。例如，Kalaria (Neurobiol. Aging (2000) 21: 321- 330)報(bào)導(dǎo)約90 %的AD患者具有腦血管病理，約30 %的VD 患者具有AD病理。腦血管損害和AD共存于癡呆的老年人中被Snowdon 等人(JAm. Med. Soc. (1997) 277: 813-817)證實(shí)。此外，確定AD的病理 學(xué)診斷的標(biāo)志(淀粉狀蛋白沉積，和神經(jīng)原纖維纏結(jié))存在于非癡呆的老年 人中(Snowdon等人，1997，同上)。這些數(shù)據(jù)表明淀粉狀蛋白沉積，和神經(jīng) 原纖維纏結(jié)不足以在AD患者中引起癡呆，強(qiáng)調(diào)了腦局部缺血損傷對腦老 化和VD和AD的發(fā)生和進(jìn)展的顯著作用(Korczyn, A. J. Neurol. Sci. (2005) 230: 3-6)。因此，預(yù)防人類和動(dòng)物中局部缺血誘導(dǎo)的腦損害和神經(jīng)元程序 性細(xì)胞死亡可以延遲腦老化，減小認(rèn)知損害的風(fēng)險(xiǎn)，和延遲癡呆的進(jìn)展。局部缺血可以發(fā)生于任一組織中，但是最通常與腦、心臟或腎臟損害 有關(guān)。如上文討論的，腦中的局部缺血可以引起急性損害，如中風(fēng)，或者 慢性損害，如癡呆和相關(guān)的病癥。在心臟中，局部缺血發(fā)作可以導(dǎo)致心力 衰竭；同樣，腎衰竭可以由腎中的局部缺血事件引起。在腦或任何其他組織的局部缺血性中風(fēng)或發(fā)作期間，脈管系統(tǒng)中發(fā)生 生物化學(xué)反應(yīng)，其可以導(dǎo)致水肺、出血性轉(zhuǎn)變，和受侵襲的組織的進(jìn)一步 損害，如神經(jīng)系統(tǒng)損害。同樣，已經(jīng)鑒定脈管系統(tǒng)的治療和保護(hù)為探索急 性局部缺血性中風(fēng)以便開發(fā)新的療法的潛在途徑。此外，血管保護(hù)涉及減 小由于局部缺血發(fā)作引起的組織損害。已經(jīng)確定血管內(nèi)皮發(fā)揮多種調(diào)節(jié)功能，包括通過保持非粘連的、抗血 栓形成表面而調(diào)節(jié)血管緊張度、炎癥和內(nèi)穩(wěn)態(tài)(Boak， L.，等人Cur. Vase. Pharmacol. (2004) 2:45-52)。血管內(nèi)穩(wěn)態(tài)部分是血管平滑肌收縮和松弛的功 能，其受到多種因子的影響，所述因子包括自由基一氧化氮(NO)，其是血 管平滑肌的強(qiáng)烈松弛劑。NO由三種不同的NO合酶(NOS)產(chǎn)生，所述NO合酶為神經(jīng)元 NOS(nNOS)，其主要位于神經(jīng)組織中并且產(chǎn)生用于神經(jīng)傳遞的NO;可誘 導(dǎo)的NOS(iNOS)，其主要發(fā)現(xiàn)于巨噬細(xì)胞中并且可以應(yīng)答促炎介體；和內(nèi) 皮NOS(eNOS),其由內(nèi)皮細(xì)胞如在血管內(nèi)皮中發(fā)現(xiàn)的內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生 (Michel, T"等人J. Clin. Invest. (1997) 100: 2146-2152， Moncada， S"等 人Pharmacol. Rev. (1991) 43:109-142，和Nathan, C. (1992) FASEB J 6: 3051-3064)。 eNOS釋放的NO在血管舒張、平滑肌增殖、動(dòng)脈血壓的調(diào)節(jié) 中具有主要作用，并且通過抑制血小板和白細(xì)胞附著和聚集而具有抗凝和 抗炎作用(Gewaltig， M. T"等人Cardiovasc. Res. (2002) 55:250-260， De Graaf， J.C.等人Circulation (1992) 85:2284-2290， Freedman, J.E.，等人 Circ. Res. (1999) 84:1416-1421， Furchgott, R.F.,等人FASEB J (1989) 3:2007-2018， Gaboury, J"等人Am J Physiol. Heart. Circ. Physiol. (1993) 265: H862-H867,和，Kubes, P.，等人Proc. Natl. Acad. Sci USA (1991) 88: 4651-4655)。在延長的局部缺血期間NO產(chǎn)生的減少與內(nèi)皮損傷有關(guān) (Laude，L.，等人Braz. J. Med. Biol. Res. (2001) 34:1-7)。NOS酶將L-精氨酸氧化為瓜氨酸，導(dǎo)致形成作為副產(chǎn)物的NO。從而，已經(jīng)提出補(bǔ)充NO前體如L-精氨酸可以提高血管健康，并且可以促進(jìn)血管疾病狀態(tài)的修復(fù)。實(shí)際上，已經(jīng)表明飲食精氨酸補(bǔ)充誘導(dǎo)血管舒張的恢 復(fù)和提高動(dòng)物模型和具有高膽固醇血癥的人類患者中的冠狀動(dòng)脈循環(huán)，以及增強(qiáng)具有冠狀動(dòng)脈病的患者中的總體內(nèi)皮功能(Boak，L.，等人2004)。此 外，還已經(jīng)表明L-精氨酸補(bǔ)充提高NO水平和減輕人類患者中02自由基 介導(dǎo)的心肌損傷(Kiziltepe，U.，等人Int. J. Cardiol. (2004) 97:93-100)。最 近的研究已經(jīng)表明精氨酸補(bǔ)充促進(jìn)誘導(dǎo)的腸局部缺血-再灌注后大鼠腸中 的內(nèi)皮修復(fù)(Sukhotnik， I"等人，Pediatr. Surg. Int. (2005) 3:191-196)。從 而，施用NO前體如L-精氨酸涉及內(nèi)皮細(xì)胞活化和保護(hù)，特別是血管內(nèi)皮 細(xì)胞的活化和保護(hù)。已經(jīng)表明脂肪酸調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞活化。發(fā)現(xiàn)施用長鏈多不飽和脂肪酸 (LCPUFA)抑制淋巴細(xì)胞對血管內(nèi)皮細(xì)胞的黏附(Khalfoun， B.，等人Transplantation (1996) 62: 1649-1657)。隨后的研究確定施用LCPUFA減 小了粘附分子和細(xì)胞因子應(yīng)答刺激的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)，提示LCPUFA具有抗 動(dòng)脈粥樣硬化和抗炎性質(zhì)(De Caterina， R.,等人Am. J. Clin. Nutr. (2000) 7l(suppl)2l3S_223S)。很多證據(jù)表明經(jīng)常消費(fèi)LCPUFA,尤其n-: 脂肪酸 保護(hù)心血管系統(tǒng)，減小動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，和減小心血管疾病，尤其 心肌梗塞后的死亡危險(xiǎn)(Calder， P. C. Clin. Sci (Lond). 2004 107: l畫ll)。相 比，對于膳食LCPUFA對脈管系統(tǒng)和腦組織，尤其腦中局部缺血發(fā)作的影 響的研究很少。長久以來已經(jīng)知道氧化性應(yīng)激和損害涉及老化過程。已經(jīng)確立氧化性 應(yīng)激在許多神經(jīng)變性疾病的病理發(fā)生中起作用，所述疾病包括阿爾茨海默 氏病和某些形式的癡呆(例力p ， Smith, M.A.， Dementia & Geriatric CognitiveDisorders(1999)， Vol. lO，S叩p.l)。因此，已經(jīng)用補(bǔ)充抗氧化劑來 延緩衰老過程和保護(hù)免于氧化性應(yīng)激的變性作用。類似地，B族維生素葉 酸、維生素B6和維生素B12對于腦的健康和正常功能是重要的。這些維 生素的狀態(tài)在老年人中經(jīng)常不足，并且這些不足可以導(dǎo)致過高半胱氨酸血 癥，其是動(dòng)脈粥樣硬化(Temple ME,等人，Ann Pharmacother 2000; 34: 57-65.; Hankey GJ，等人，Lancet 1999; 354:407-413)和阿爾茨海默氏病 (Clarke R,等人，Arch Neurol 1998 1449-1455)的最近鑒定的危險(xiǎn)因素。 這些不足可以通過閉塞性血管病、中風(fēng)或血栓形成導(dǎo)致腦或其他組織的局 部缺血。發(fā)明概述本發(fā)明的 一方面描述了組合物，其包含增強(qiáng)例如腦中的血管完整性和/ 或減小動(dòng)物中程序性細(xì)胞死亡有效量的一種或多種長鏈多不飽和脂肪酸 (LCPUFA)和一種或多種一氧化氮釋放化合物(NORC)。所述例如腦的增強(qiáng) 的血管完整性，和/或細(xì)胞存活用于在發(fā)生局部缺血發(fā)作的情況下減少組織 如腦中的局部缺血損傷，并且還可以對此類局部缺血事件的最初發(fā)生發(fā)揮 保護(hù)作用。在一些實(shí)施方案中，所述組合物是寵物食品組合物、飲食補(bǔ)充劑，或者^^皮配制用于人類消費(fèi)的食品。在多種實(shí)施方案中，LCPUFA包括花生四 烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸的至少一種，并 且NORC包括L-精氨酸或其衍生物的至少一種。所述組合物可以包含額 外的成分。例如，可以包括一種或多種抗氧化劑、B族維生素、細(xì)胞生長 因子，或者抗炎劑。在一些實(shí)施方案中，配制組合物用于陪伴動(dòng)物，如狗或貓。在其他實(shí) 施方案中，配制所述組合物用于人類消費(fèi)。本發(fā)明的另一方面描述了增強(qiáng)動(dòng)物中血管完整性和/或減小局部缺血 誘導(dǎo)的腦損傷的方法，其包括對所述動(dòng)物規(guī)則地施用組合物，該組合物包 含一種或多種LCPUFA和一種或多種NORC，任選補(bǔ)充如上述的額外成 分，它們的量有效增強(qiáng)動(dòng)物組織中的血管完整性和/或在動(dòng)物腦中局部缺血 發(fā)作的情況下減小局部缺血誘導(dǎo)的腦損傷。在一些實(shí)施方案中，該方法應(yīng) 用于陪伴動(dòng)物，如狗或貓。在其他實(shí)施方案中，所述方法應(yīng)用于人。在一些實(shí)施方案中，對所述動(dòng)物規(guī)則地施用所述組合物導(dǎo)致在動(dòng)物腦中發(fā)生局部缺血的情況下腦損傷的減輕，或者它導(dǎo)致動(dòng)物中腦老化的延遲。 在另一實(shí)施方案中，對動(dòng)物規(guī)則地施用該組合物導(dǎo)致在動(dòng)物中發(fā)生局部缺 血的位置細(xì)胞程序性細(xì)胞死亡的減少，所述位置可以在任何組織中，包括 腦、心臟和腎。通過參考下面的附圖、詳細(xì)描述和實(shí)施例，本發(fā)明的其他特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn) 將變得顯而易見。附圖簡述圖l.條形圖，顯示了對照和試驗(yàn)^:食對受到暫時(shí)大腦局部缺血的所有 大鼠中局部缺血損傷體積的影響。在實(shí)施例l中描述了對照和試驗(yàn)飲食的組成(*相對于對照p<0.01)。圖2.條形圖，顯示了對照和試驗(yàn)々欠食對暫時(shí)大腦局部缺血后顯示出損傷的大鼠中局部缺血損傷體積的影響。在實(shí)施例l中描述了對照和試驗(yàn)^:9食的組成(*相對于對照p<0.01)。圖3.條形圖，顯示了對照和試驗(yàn)飲食對大鼠中大腦局部缺血誘導(dǎo)的程序性細(xì)胞死亡的影響。在實(shí)施例i中描述了對照和試驗(yàn)^:食的組成(*相對于對照p<0.001)。圖4.曲線圖，顯示了局部缺血損傷體積(X軸)與如通過受到暫時(shí)大腦 局部缺血的大鼠中TUNEL染色(Y軸)定義的凋亡細(xì)胞百分?jǐn)?shù)(Y軸)之間的 相關(guān)性。在實(shí)施例1中描述了對照和試驗(yàn)^:食的組成。闡明性實(shí)施方案詳述 定義在說明書和權(quán)利要求書全文中使用涉及本發(fā)明的方法和其他方面的多 種術(shù)語。除非指出相反，此類術(shù)語以它們在本領(lǐng)域中的普通含義給出。其 他特別定義的術(shù)語將以它們在本文提供的定義一致的方式理解。下面的縮寫可以用于說明書和實(shí)施例中AA，花生四烯酸；ALA， a-亞麻酸；ANOVA,方差分析；DHA， 二十二碳六烯酸；DM,干物質(zhì)； DPA， 二十二碳五烯酸；EPA， 二十碳五烯酸；LA，亞油酸；LCPUFA， 長鏈多不飽和脂肪酸；NORC， 一氧化氮釋放化合物；L-Arg， L-精氨酸。在該說明書的上下文中，將術(shù)語"約，，解釋為任選加上或減去20%;更 優(yōu)選地任選加上或減去10 % ;甚至更優(yōu)選地任選加上或減去5 % ;最優(yōu)選 地任選加上或減去2 % 。"有效量"指如本文所述的化合物、材料或組合物的有效實(shí)現(xiàn)特定生物 學(xué)結(jié)果的量。此類結(jié)果包括，但不限于，增強(qiáng)血管完整性或者減小局部缺 血性腦損傷。此類有效活性可以例如，通過對動(dòng)物施用本發(fā)明的組合物來 實(shí)現(xiàn)。術(shù)語"血管完整性，，指動(dòng)物中血管的總體健康，包括但不限于，健康的 血管緊張度和結(jié)構(gòu)、健康的血管生長、健康的收縮和擴(kuò)張、減小的通透性、 減小的增生、減小的炎癥、減小的細(xì)胞和/或血小板粘附、正常血壓和血流 的保持，等等。"增強(qiáng)的血管完整性，，指如通過本領(lǐng)域任何合適的方法測量的，動(dòng)物中血管的總體健康的任何改善。如本文所用的，"長鏈多不飽和脂肪酸"或者"LCPUFA"指任何一元羧 酸，其具有至少20個(gè)碳原子和至少兩個(gè)雙鍵。LCPUFA的非限制性實(shí)例 包括(n-6)脂肪酸，如花生四烯酸和(n-3)脂肪酸，如二十碳五烯酸、二十二 碳五烯酸和二十二碳六烯酸。如本文所用的，"一氧化氮釋放化合物"或者"NORC"指引起動(dòng)物中釋 放游離一氧化氮的任何化合物。此類化合物的優(yōu)選實(shí)例包括L-精氨酸和 L-精氨酸的類似物或者衍生物，如精氨酸a-酮戊二酸、GEA3175、硝普鈉、 三硝酸甘油酯、S-亞硝基-N-乙酰基-青霉胺、硝酸甘油、S-NO-谷胱甘肽、 NO-共軛的非類固醇抗炎藥物，如NO-萘普生、NO-阿司匹林、NO-布洛芬、 NO-雙氯芬酸、NO-氟比洛芬和NO-酮洛芬、NO-釋放化合物-7、 NO-釋 放化合物-5、 NO-釋放化合物-12、 NO-釋放化合物-18、 二醇二氮烯 镥(diazeniumdiolates)和其衍生物、二乙胺NO-親核復(fù)合體(NONOate)，或 者任何有機(jī)或無機(jī)化合物、生物分子、或其類似物、同系物、綴合物或衍 生物，其在動(dòng)物中引起釋放游離一氧化氮。"局部缺血，，指脈管組織的任何收縮或阻塞引起的對任何身體器官、組織或部分的血液供應(yīng)的任何減少或停止。"局部缺血發(fā)作"指局部缺血的任 何暫時(shí)或永久期間。"脈管組織，，指動(dòng)物身體中任何血管網(wǎng)絡(luò)，血管包括但不限于動(dòng)脈、靜 脈和毛細(xì)血管。"血管內(nèi)皮細(xì)胞"或"血管內(nèi)皮，，指這樣的細(xì)胞，其包含薄的扁平細(xì)胞層， 所述細(xì)胞內(nèi)襯在血管的內(nèi)表面，在管腔中的循環(huán)血液和血管壁剩余部分之 間形成界面。本發(fā)明涉及任何動(dòng)物，優(yōu)選哺乳動(dòng)物，更優(yōu)選陪伴動(dòng)物，最優(yōu)選人。"陪 伴動(dòng)物，，是任何馴養(yǎng)的動(dòng)物，并且包括但不限于，貓、狗、兔、豚鼠、白鼬、 倉鼠、小鼠、沙鼠、馬、奶牛、山羊、綿羊、驢、豬等等。如本文所用的，術(shù)語"寵物食品，，或者"寵物食品組合物"指預(yù)期由動(dòng)物， 優(yōu)選由陪伴動(dòng)物攝入的組合物。"完全和營養(yǎng)平衡的寵物食品"是這樣的食品，其含有基于陪伴動(dòng)物營養(yǎng)領(lǐng)域公認(rèn)的權(quán)威推薦的合適量和比例的所有 已知需要的營養(yǎng)，并且因此能夠作為膳食攝入的唯一來源以維持生命或者 促進(jìn)生產(chǎn)，而不用加入補(bǔ)充營養(yǎng)來源。營養(yǎng)平衡的寵物食品組合物是本領(lǐng) 域/^知和廣泛^f吏用的。如本文所用的，"飲食補(bǔ)充劑"是除了動(dòng)物的正常飲食之外意在被攝入 的產(chǎn)品。如本文使用的，"配制用于人消費(fèi)的食品，，是意在由人類攝入的任何組 合物。描述本發(fā)明人已經(jīng)觀察到在狗中補(bǔ)充精氨酸以劑量依賴性方式增加了多種生長因子和抗炎蛋白質(zhì)的表達(dá)。許多此類因子，包4舌NGF、 nIGF和BDNF 發(fā)揮有效的神經(jīng)元保護(hù)作用(Mattson， MP等人Neurobiol. Aging. (2002) 23:695-705，和Kruttgen， A.等人Proc. Natl. Acad Sci USA (1998) 95:9614-9619)。在狗的進(jìn)一步研究中，使用精氨酸的天然來源，包括緋粉(含 有富含LCPUFA的魚油)，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)與使用純L-精氨酸觀察到的相等或 比其更好的應(yīng)答。如本文的實(shí)施例中詳述的，在卵巢切除的大鼠模型中暫 時(shí)大腦局部缺血的功能研究表明含有L-精氨酸、魚油、抗氧化劑和B族維 生素的組合的膳食顯著減輕了腦損傷和程序性細(xì)胞死亡，與含有僅僅精氨 酸或魚油的膳食相比更是如此。因此，本發(fā)明的多方面通過提供膳食組合 物和方法利用這些發(fā)現(xiàn)來提高動(dòng)物的血管完整性和減輕動(dòng)物中局部缺血中 的局部缺血損傷，例如，動(dòng)物的腦局部缺血情況下的腦損傷。預(yù)期膳食組合物在多種局部缺血情況下是有效的，所述情況包括但不 限于，腦老化(中風(fēng)和輕微中風(fēng))和相關(guān)的病癥、局部缺血心臟事件、被誘 導(dǎo)的局部缺血和再灌注手術(shù)(手術(shù)前和手術(shù)后施用)、糖尿病誘導(dǎo)的外周局 部缺血，以及作為絕經(jīng)后雌激素治療的備選方案來減小絕經(jīng)后婦女中中風(fēng) 和心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在多種實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物和方法應(yīng)用多組分方法以提高功能血管完整性、在局部缺血發(fā)生后減小程序性細(xì)胞死亡和增強(qiáng)細(xì)胞存活。這些組分包括(l)增強(qiáng)血管完整性和功能，(2)增強(qiáng)細(xì)胞修復(fù)，(3)提高抗炎效 果(4)優(yōu)化細(xì)胞代謝，和(5)減小氧化性應(yīng)激。組合物本發(fā)明的一方面描述了包含有效增強(qiáng)動(dòng)物中血管完整性的一種或多種 長鏈多不飽和脂肪酸(LCPUFA)和一種或多種一氧化氮釋放化合物 (NORC)的組合物。LCPUFA和NORC可以在該組合物中作為一種成分或 添加劑存在。在組合物的優(yōu)選實(shí)施方案中，LCPUFA包含至少一種(n-3) 脂肪酸，如ALA、 EPA、 DPA和DHA,并且NORC包含至少一種L-Arg 和其衍生物。組合物使得該組合物被施用的動(dòng)物的血漿中富含LCPUFA和 NORC。本發(fā)明的組合物可以包括多種額外的組分，其用于提供多組分方法以 提高血管完整性和增強(qiáng)局部缺血中的細(xì)胞存活，如上面所述。這些組分包 括抗氧化劑、B族維生素、生長因子和抗炎劑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是寵物食品組合物。這些將 有利地包括預(yù)期提供必要的膳食需要，以及處理(例如餅干類)或其他膳食 補(bǔ)充劑的食品。任選地，寵物食品組合物可以是干燥組合物(例如，粗磨食 物)、半潮濕組合物、濕潤組合物，或其任一混合物。在另 一優(yōu)選實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物是經(jīng)配制用于人類消費(fèi)的食補(bǔ)充劑的食品和營養(yǎng)品。在詳述的實(shí)施方案中，經(jīng)配制用于人類消費(fèi)的食 品是完全的和營養(yǎng)上平衡的。在另一優(yōu)選實(shí)施方案中，組合物是飲食補(bǔ)充劑，如肉湯、飲用水、飲 料、液體濃縮劑、酸奶酪、粉劑、粒劑、糊劑、混懸劑、咀嚼劑、morsel、 treat、零食、彈丸劑、丸劑、膠嚢劑、片劑，或者任何其他遞送形式。還 可以特別配制飲食補(bǔ)充劑用于具體動(dòng)物如陪伴動(dòng)物或者人的消費(fèi)。在一個(gè) 詳述實(shí)施方案中，飲食補(bǔ)充劑可以包含高濃度的LCPUFA和NORC,使得可以將該補(bǔ)充劑以小量施用于動(dòng)物，或者備選地，可以在施用于動(dòng)物前 稀釋。飲食補(bǔ)充劑可以需要在施用于動(dòng)物前與水混合?？梢詫⒔M合物冷凍?？梢詫CPUFA和NORC與組合物的其他組分 預(yù)先混合以提供所需的有益量，可以被涂布在寵物食品組合物、飲食補(bǔ)充 劑或者經(jīng)配制用于人消費(fèi)的食品上，或者可以在提供給動(dòng)物前加入組合物， 例如使用粉劑或混合物。本發(fā)明的組合物包含有效增強(qiáng)施用該組合物的動(dòng)物中的血管完整性的 LCPUFA和NORC。對于寵物食品和經(jīng)配制用于人類消費(fèi)的食品，作為組 合物百分比的LCPUFA的量基于干重為組合物的約0，1%到約13%的范圍 內(nèi)，盡管可以提供更大的百分比。在多種實(shí)施方案中，所述量基于干重為 組合物的約0.1%、 0.2%、 0.3%、 0.4%、 0.5%、 0.6%、 0.7%、 0，8%、 0.9%、 1.0o/o、 l.l0/o、 1.2°/o、 13°/o、 1.4°/o、 1.50/0、 1.6°/0、 1.70/o、 1.8°/0、 1.9°/o、 2.0%、 2.1%、 2.2%、 2.3%、 2.4%、 2.5%、 2,6%、 2.7%、 2.8%、 2.9%、 3.0%、 3.1%、 3.2%、 3.3%、 3.4%、 3.5%、 3.6%、 3.7%、 3.8%、 3.9%、 4.0%、 4.1%、 4,2%、 4,3%、 4,4%、 4.5%、 4，6%、 4,7%、 4,8%、 4.9%、 5.0%，或以上，如6%、 7%、 8%、 9%、 10%、 11%、 12%、 13%或以上， 并且作為組合物百分比的NORC的量基于干重為組合物的約0.1%到約 12%的范圍內(nèi)，盡管可以提供更大的百分比。在多種實(shí)施方案中，所述量基于干重為組合物的約0.1%、0.2%、03%、 0.4%、0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、 0.9%、1.0%、 1.1%、1.2%、1.3%、 1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、 1.9%、2.0%、 2.1%、2.2%、2.3%、 2.4%、2.5%、2.6%、2.7%、2.8%、 2.9%、3.0%、 3.1%、3.2%、3.3%、 3.4%、3.5%、3.6%、3.7%、3.8%、 3.9%、4.0%、 4.1%、4.2%、43%、 4.4%、4,5%、4.6%、4.7%、4.8%、 4.9%、5.0%，或以上，例如，6%、 7%、 8%、9%、10%、11%、12%或以上。在特定實(shí)施方案中，利用2-2.5% LCPUFA和2-2.5%純的 L-精氨酸?？梢耘渲啤┣肥逞a(bǔ)充劑以含有幾倍更高濃度的LCPUFA和 NORC，以適于以片劑、膠嚢劑、濃縮液體或者其他相似的劑型施用于動(dòng) 物，或者在施用前稀釋，如通過用水稀釋、噴霧或者噴灑到寵物食品上，和其他相似的施用方式。在備選實(shí)施方案中，組合物中LCPUFA和NORC的量為在動(dòng)物的血 清中建立特定濃度的LCPUFA和NORC所需的量的函數(shù)。如本領(lǐng)域技術(shù) 人員將理解的，可以通過測定喂飼上述推薦量的LCPUFA和NORC的動(dòng) 物的血清水平來計(jì)算血清中LCPUFA的特定濃度。每種LCPUFA的來源可以是任何合適的合成的或天然來源。LCPUFA 的優(yōu)選來源包括但不限于，報(bào)春花、墨綠色蔬菜，如菠菜、藻類和藍(lán)綠藻， 如螺旋藻，植物種子和油，如亞麻子、油菜、大豆、核桃、西葫蘆、紅花、 芝麻、小麥胚、向日葵、玉米，和大麻，和魚，特別是冷水魚，如鮭魚、 金槍魚、鯖、緋、黑鱸、海鱸、鯊魚、大比目魚、鯰魚、沙丁魚、蝦，和 蛤，和它們的提取油，或者可以根據(jù)本領(lǐng)域中任何合適的方法從頭合成 LCPUFA。每種NORC的來源可以是任何合適的合成或天然來源。精氨酸的優(yōu)選 來源包括但不限于，動(dòng)物和植物蛋白。尤其富含精氨酸的植物的非限制性 實(shí)例包括豆類，如大豆、羽扇豆，和長豆角，谷類，如小麥和稻，和水果， 如葡萄。種子和堅(jiān)果如可可和花生也富含精氨酸。尤其富含精氨酸的動(dòng)物 蛋白的非限制性實(shí)例包括家禽和魚產(chǎn)品。可以根據(jù)本領(lǐng)域中任何合適的方 法從頭合成或者由商業(yè)來源提供NORC。本發(fā)明的組合物可以任選包含補(bǔ)充物質(zhì)，如礦物質(zhì)、維生素、鹽、調(diào) 味品、色素和防腐劑。補(bǔ)充性礦物質(zhì)的非限制性實(shí)例包括鈣、磷、鉀、鈉、 鐵、氯化物、硼、銅、鋅、鎂、錳、碘、硒等等。補(bǔ)充維生素的非限制性 實(shí)例包括維生素A、各種B族維生素、維生素C、維生素D、維生素E和 維生素K。額外的々欠食補(bǔ)充劑還可以包括例如，煙酸、泛酸、菊粉、葉酸、 生物素、氨基酸，等等。本發(fā)明的組合物可以任選包含一種或多種補(bǔ)充物質(zhì)，其促進(jìn)或維持血 管健康，或者進(jìn)一步增強(qiáng)血管完整性或細(xì)胞存活。此類物質(zhì)包括，但不限 于， 一種或多種長春西汀、輔酶Q1()、磷脂酰絲氨酸、乙酰基-L-肉堿、a-石克辛酸、提取物，如越桔(Vaccinium myrtilis),或者抗氧化劑，包括生育酚類、生育三烯酚類、類胡蘿卜素類，如a和p胡蘿卜素、番茄紅素、葉 黃素、變胞藻黃素、玉米黃素和黃酮類化合物，如黃烷醇、黃烷酮、黃酮、 黃烷-3-醇類(兒茶酚)、花青苷，和異黃酮類(異黃酮)，等等，以及抗炎劑和 生長因子(尤其應(yīng)用于促進(jìn)細(xì)胞存活)，如本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解。在多種實(shí)施方案中，本發(fā)明的寵物食品或者飲食補(bǔ)充劑可以包含基于 干物質(zhì)，按組合物的重量計(jì)約15%到約50%粗蛋白。粗蛋白材料可以包含 植物蛋白，如大豆、棉籽和花生，或者動(dòng)物蛋白，如酪蛋白、白蛋白和肉 蛋白。本文所用的肉蛋白的非限制性實(shí)例包括豬肉、羔羊、馬、家禽、魚 和其混合物。組合物可以還包含基于干物質(zhì)，組合物重量的約5%到約40%脂肪。 組合物可以還包含糖類來源。組合物可以包含基于干物質(zhì)，組合物重量的 約15%到約6t)o/。糖類。此類糖類的非限制性實(shí)例包括谷類或糧食，如稻、 玉米、高粱、紫花苜蓿、大麥、大豆、油菜、燕麥、小麥，和其混合物。 組合物還可以任選包含其他物質(zhì)，如干燥的乳清和其他乳品副產(chǎn)品。組合物還可以包含至少一種纖維來源。如本領(lǐng)域技術(shù)人員將知道的， 可以利用多種可溶或不溶纖維。纖維來源可以是甜菜漿水(來自甜菜)、阿 拉伯樹膠、talha膠、蚤草、米糠、長角豆膠、柑桔漿、果膠、低聚果糖以 及短鏈寡果糖、寡甘露果糖、大豆纖維、羽扇豆纖維、阿拉伯半乳聚糖、 半乳寡聚糖、阿拉伯木聚糖，或者其混合物。備選地，纖維來源可以是可 發(fā)酵的纖維。以前已經(jīng)描述可發(fā)酵的纖維為陪伴動(dòng)物的免疫系統(tǒng)提供益處。 本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的提供用于增強(qiáng)腸內(nèi)益生微生物的生長的益生組分的 可發(fā)酵纖維或其他組合物也可以被摻入到該組合物中以幫助增強(qiáng)本發(fā)明所 提供的對動(dòng)物免疫系統(tǒng)的益處。此外，也可以向組合物中加入例如益生微二 生物，如乳桿菌或雙歧桿菌物種。在詳述的實(shí)施方案中，組合物可以是完全的或者營養(yǎng)平衡的寵物食品。 在該上下文中，寵物食品可以是濕潤食品、干燥食品或者中等水分含量的 食品，如寵物食品配制和生產(chǎn)領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識到的。"濕潤食品"描述 這樣的寵物食品，其通常以罐頭或箔袋出售，并且水分含量通常為約70 0/0到約90%。"干燥食品，，描述這樣的寵物食品，其具有與濕潤食品相似的組 成，但是含有有限的水分含量，通常為約5%到約15%,并且因此例如作 為小的餅干樣粗磨食物提供?？梢詾槌赡陝?dòng)物，或者為老年或年幼動(dòng)物特 別配制組合物和々欠食補(bǔ)充劑，如"狗食，，(puppy chow)、"貓食"(kitten chow) 或者"老年"(senior)制劑。通常，專門的制劑將包含適于不同發(fā)育階段或年 齡動(dòng)物的能量和營養(yǎng)需要。本發(fā)明的某些方面優(yōu)選與完全和平衡的食品組合使用(例如，如國家研 究委員會(huì)(National Research Council), 1985，狗的營養(yǎng)需要(Nutritional Requirements for Dogs), National Academy Press, Washington D. C，或美 國官方飼料4空制切、會(huì)(Association of American Feed Control Officials), Official Publication 1996中所述)。即，根據(jù)本發(fā)明的 一些方面的包含 LCPUFA或DHA的組合物優(yōu)選與高質(zhì)量商業(yè)食品一起使用。如本文所用 的，"高質(zhì)量商業(yè)食品，，指被生產(chǎn)以產(chǎn)生80%或以上的關(guān)鍵營養(yǎng)物消化率的 飲食，如在上面國家研究委員會(huì)對狗的推薦中所給出的。類似的高營養(yǎng)標(biāo) 準(zhǔn)將用于其他動(dòng)物。技術(shù)人員將理解怎樣確定將加入給定組合物中的合適量的LCPUFA 和NORC?？梢钥紤]的此類因素包括組合物類型(例如，寵物食品組合物、 飲食補(bǔ)充劑，或經(jīng)配制用于人類消費(fèi)的食品)、不同動(dòng)物對特定類型組合物 的平均消耗，和該組合物的生產(chǎn)條件。優(yōu)選地，基于動(dòng)物的能量和營養(yǎng)需 要計(jì)算將加入組合物的LCPUFA和NORC的濃度。根據(jù)本發(fā)明的一些方 面，LCPUFA和NORC可以在組合物的生產(chǎn)和/或加工的任何時(shí)候加入。 這包括但不限于，作為寵物食品組合物、飲食補(bǔ)充劑，或者經(jīng)配制用于人 類消費(fèi)的食品的制劑的部分，或者作為應(yīng)用于寵物食品組合物、飲食補(bǔ)充 劑，或者經(jīng)配制用于人類消費(fèi)的食品的涂層?？梢愿鶕?jù)本領(lǐng)域中任何合適的方法制備組合物，所述方法為如Waltham Book of Dog and Cat Nutrition, Ed. ATB Edney， A. Rainbird撰 寫的章節(jié)，標(biāo)題為"A Balanced Diet" ， 57到74頁(Pergamon Press Oxford)中所述。方法本發(fā)明的另一方面描述了增強(qiáng)動(dòng)物中血管完整性和/或促進(jìn)細(xì)胞存活 的方法，其包括對該動(dòng)物施用組合物，該組合物包含有效增強(qiáng)動(dòng)物中血管完整性和/或促進(jìn)細(xì)胞存活的量的一種或多種LCPUFA和一種或多種 NORC。本發(fā)明的再一方面描述了減輕動(dòng)物的腦或其他組織的局部缺血誘 導(dǎo)的損傷的預(yù)防方法，其包括對該動(dòng)物規(guī)則地施用組合物，該組合物包含 有效減輕例如對腦的局部缺血誘導(dǎo)的損傷(例如動(dòng)物中局部缺血發(fā)作，動(dòng)物 腦中局部缺血發(fā)作)的量的一種或多種LCPUFA和一種或多種NORC。在本發(fā)明的兩個(gè)上述方面任一方面的詳述實(shí)施方案中，組合物是如本 文示例的寵物食品組合物、々大食補(bǔ)充劑，或者經(jīng)配制用于人類消費(fèi)的食品。 在進(jìn)一步詳述的實(shí)施方案中，LCPUFA是一種或多種(n-3) LCPUFA,包 括但不限于EPA、 DPA和DHA，并且NORC是一種或多種L - Arg和其 衍生物。動(dòng)物可以包括如上述的任一種馴養(yǎng)的或者陪伴動(dòng)物，或者可以包 括人。在一些實(shí)施方案中，動(dòng)物是陪伴動(dòng)物，如狗或貓。在另一實(shí)施方案 中，動(dòng)物是人?？梢酝ㄟ^多種備選施用途徑的任一種對動(dòng)物施用組合物。此類途徑包 括，但不限于，經(jīng)口、鼻內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、胃內(nèi)、經(jīng)幽門、皮下、經(jīng)腸 途徑，等等。優(yōu)選地，經(jīng)口施用組合物。如本文使用的，術(shù)語"經(jīng)口施用，， 或"口服施用，，指動(dòng)物攝入，或者人被指導(dǎo)而食用或者食用 一種或多種本文 所述的發(fā)明組合物。當(dāng)人被指導(dǎo)而食用組合物時(shí)，此類指導(dǎo)可以是教導(dǎo)和/或通知人使用該 組合物可以和/或?qū)⑻峁┧峒暗囊嫣?，例如，增?qiáng)動(dòng)物中血管完整性或者 動(dòng)物中的細(xì)胞存活，防止或延遲腦老化或者局部缺血發(fā)作，減少局部缺血 誘導(dǎo)的損傷，例如，對腦、心臟或其他組織的損傷，在局部缺血發(fā)作的情 況下保護(hù)免于局部缺血相關(guān)的傷害，例如，在再灌注手術(shù)、糖尿病誘導(dǎo)的 外周局部缺血等情況下，如上述。此類指導(dǎo)可以是口頭指導(dǎo)(例如，通過如 醫(yī)生、獸醫(yī)，或者其他健康專業(yè)人員的口頭指導(dǎo)，或者收音機(jī)或電視媒體(例如，廣告)，或者書面指導(dǎo)(例如，通過如醫(yī)生、獸醫(yī)，或者其他健康專業(yè) 人員的書面指導(dǎo)(如處方)，銷售專業(yè)人員或組織的書面指導(dǎo)(例如，通過銷 售手冊、小冊子，或者其他指導(dǎo)性附件)，書面媒介(如因特網(wǎng)、電子郵件 或者其他計(jì)算機(jī)相關(guān)的媒介)，和/或與組合物相關(guān)的包裝(例如，存在于容 納組合物的容器上的標(biāo)簽)。施用可以是基于需要或基于希望，例如， 一月一次、 一周一次、每天 一次，或者高于每天一次。類似地，施用可以為每兩天、兩周、或兩月一 次，每第三天、三周或三月一次，每第四天、四周或四月一次，等等。施 用可以為每天多次。當(dāng)用作普通飲食需要的補(bǔ)充物時(shí)，可以將組合物直接 施用于動(dòng)物或者與每天的飼料或食物接觸或混合。當(dāng)用作每天飼料或食物 時(shí)，施用將是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。施用還可以以規(guī)則的基礎(chǔ)進(jìn)行，例如，作為動(dòng)物的飲食方案的一部分。 飲食方案可以包括引起動(dòng)物規(guī)則地?cái)z入組合物，其包含增強(qiáng)血管完整性或 者在動(dòng)物中局部缺血發(fā)作的情況下減小對腦的局部缺血誘導(dǎo)的損傷有效量的一種或多種LCPUFA和一種或多種NORC。規(guī)則攝入可以是每天一次， 或者每天兩次、三次、四次或多次，以每天或每周為基礎(chǔ)。類似地，規(guī)則 施用可以每兩天或兩周一次、每三天或三周一次、每四天或四周一次、每 五天或五周一次、或每六天或六周一次，并且在此類飲食方案中，施用可 以是每天多次。規(guī)則施用的目標(biāo)是為動(dòng)物提供優(yōu)選的日劑量的LCPUFA和 NORC，如本文示例。才艮據(jù)本發(fā)明的方法，包含一種或多種LCPUFA和一種或多種NORC 的組合物的施用，包括作為飲食方案的一部分的施用，可以跨越從攝入直 到動(dòng)物的整個(gè)壽命的時(shí)間范圍。提供下面的實(shí)施例用于更詳細(xì)地描述本發(fā)明。它們意在闡明而不是限 制本發(fā)明。實(shí)施例117卩-雌二醇或者具有精氨酸、魚油或組合的飲食補(bǔ)充劑對卵巢切除的大鼠模型中暫時(shí)腦局部缺血引起的腦損傷的作用將17P-雌二醇(E2)的長期治療與含有精氨酸、魚油形式的LCPUFA或 者其組合的三種試驗(yàn)飲食分別比較它們對卵巢切除的大鼠模型中暫時(shí)腦局 部缺血引起的腦損傷的作用。方法動(dòng)物.將雄性 Charles Rivers Sprague畫Dawley 大鼠(250g， Wilmington, MA)在手術(shù)前適應(yīng)動(dòng)物設(shè)施三天，使用12小時(shí)光暗周期。在 飲食喂飼開始前2周進(jìn)行雙側(cè)卵巢切除術(shù)。開始飲食喂飼后4周，腹膜內(nèi) (i.p.)注射氯胺酮(60mg/kg)和曱苯瘞喚(l 0 mg/kg)后在麻醉下進(jìn)行暫時(shí)大腦 中動(dòng)脈(tMCA)閉塞。^L食和激素施用.將每組14到15只大鼠隨機(jī)分配到五個(gè)治療組之一。 這些組如下組1對照飲食(白色飲食)組2對照飲食+ SILASTIC⑧雌二醇植入物1周(白色+ E2) 組3飲食I(粉色飲食) 組4飲食II(紫色飲食) 組5飲食III(灰色飲食)對照飲食為標(biāo)準(zhǔn)大鼠飲食，其含有140 g/kg酪蛋白、100g/kg蔗糖、 50g/kg纖維、155g/kg糊精、466 g/kg玉米淀粉、35 g/kg標(biāo)準(zhǔn)鹽混合物、 40g/kg大豆油、10 g/kg標(biāo)準(zhǔn)維生素混合物、1.8 g/kg L-胱氨酸和2.5 g/kg 氯化膽堿。所有三種試驗(yàn)飲食(飲食I、 II和III)都補(bǔ)充(l)額外的B族維生 素，包括45mg/kg煙酸、35mg/kg泛酸、24mg/kg吡哆醇、15 mg/kg硫 胺、9 mg/kg核黃素、3 mg/kg葉酸、0.8 mg/kg生物素和0.225 mg/kg維 生素B12和(2)抗氧化劑混合物，其含有500 mg/kg維生素E、 150 mg/kg維 生素C、 100 mg/kg變胞藻黃素和0.4 mg/kg硒。飲食I還包括2 %精氨酸 (20g/kg)。飲食11還包括2%精氨酸和2%緋魚油(20 g/kg)。飲食III還包 括2%緋魚油。所有^:食無限制地喂養(yǎng)大鼠四周。每周更換食物一次。并且每周測定體重和食物攝入一次。誘導(dǎo)tMCA閉塞前一周，對組2大鼠以SILASTIC 彈丸劑中4mg/ml的劑量施用E2，所述彈丸劑被皮下植入。用該程序保護(hù) 腦免于多種損害和產(chǎn)生生理上相關(guān)水平的血清E2(Simpkins等人，1997; Jimg等人，20(B)。這是陽性對照，因?yàn)橐郧耙呀?jīng)表明E2的該劑量和處理 時(shí)間導(dǎo)致保護(hù)免于tMCA閉塞的影響(Simpkins，等人，1997; Yang等人， 2004a，Yang,等人，2004b)。大腦中動(dòng)脈閉塞和樣品制備.通過腹膜內(nèi)注射氯胺酮(60 mg/kg)和曱 苯噻嗪(10mg/kg)麻醉動(dòng)物。如以前描述的(Simpkins等人，1997)使用微小 改動(dòng)進(jìn)行tMCA閉塞。簡言之，通過中線頸切開暴露左頸總動(dòng)脈、頸外動(dòng) 脈和頸內(nèi)動(dòng)脈。將3.0單絲縫線引入頸內(nèi)動(dòng)脈腔中并輕輕地前進(jìn)直到感覺 到阻力。在20分鐘內(nèi)以最小出血進(jìn)行手術(shù)操作?？p線保持在原位60分鐘， 然后退出以允許再灌注。在整個(gè)操作中監(jiān)測直腸溫度并用加熱墊保持在 36.5到37。C之間。再灌注開始后24小時(shí)，處死動(dòng)物并除去腦。然后將腦 用金屬腦才莫子(ASI Instruments Inc.; Warren, MI)冠向切成2mm切片， 并通過氯化2，3，5-三苯基四唑錯(cuò)(TTC)在生理鹽水中的2%溶液在37。C溫 育，然后用10%福爾馬林固定。用TdT介導(dǎo)的dUTP Nick-末端標(biāo)記(TUNEL) MCA閉塞進(jìn)行的DNA 片段化分析廣泛用于局部缺血性中風(fēng)模型(Bederson等人，1986)。該神經(jīng) 元死亡的體內(nèi)模型在許多神經(jīng)元和其他細(xì)胞中可以快速誘導(dǎo)同步程序性細(xì) 胞死亡過程(Li等人，1997)。因此，通過用TUNEL測定法分析DNA片段 化檢查暫時(shí)局部缺血對程序性細(xì)胞死亡的效果。根據(jù)改進(jìn)的生產(chǎn)商使用說 明(Gavrieli等人，1992)進(jìn)行TUNEL染色。將福爾馬林固定的、石蠟包埋 的組織切片用二甲苯脫蠟，通過梯度乙醇處理再水化，并用PBS進(jìn)行最后 的洗滌。將切片用4%低聚甲醛后固定20分鐘。然后洗滌切片并用PBS 中的100ng/ml蛋白酶K處理15分鐘，用平衡緩沖液平衡10分鐘，然后 用含有TdT酶和FITC標(biāo)記的dUTP (Promega， Madison， WI)的緩沖液在 濕潤室中37。C溫育。通過在2xSSC緩沖液中室溫下溫育15分鐘終止反應(yīng)。 然后將切片用含有DAPI的抗褪色試劑(Molecular Probes, Eugene, OR)封固。將陽性對照切片在室溫下浸入DNase I溶液中10分鐘，然后用TdT 緩沖液平衡。在熒光顯微鏡下以合適的激發(fā)/發(fā)射濾光器對觀察切片。在該方案中， 一些動(dòng)物被排出在研究之外。被定量其損傷體積的動(dòng)物 數(shù)目為每組12到15 只。統(tǒng)計(jì)方法.使用Prism軟件(Graphpad Inc; San Diego， CA)，用單向方 差分析法(ANOVA)分析結(jié)果。通過單向ANOVA，接著通過Tukey的多重 比較檢驗(yàn)確定組間的差異顯著性。所有值以平均值+ASEM表示。結(jié)果中風(fēng)體積所有四種實(shí)驗(yàn)條件(雌二醇和飲食I、 II和III)都減小梗塞 大小(

圖1)。雌二醇處理(組2)減小梗塞體積68%，這是雌激素對中風(fēng)損害 保護(hù)的典型值(Simpkins，等人，1997; Fan等人，2003; Yang等人，2004a; Yang等人，2004b)。類似地，飲食II顯著減小梗塞體積(67 % )。測試的兩 種其他飲食也減小平均梗塞體積，但是數(shù)據(jù)差別太大而使得值不是統(tǒng)計(jì)學(xué) 顯著的。因?yàn)槊拷M都有觀察不到損傷的大鼠(在我們的損傷體積計(jì)算中值為0), 所有在省去這些值后評估數(shù)據(jù)，以確定0值對組差異的貢獻(xiàn)程度。如圖2 中所示，使用該數(shù)據(jù)修飾，相同的兩組顯著低于對照飲食組。從而，組間 差異由觀察到損傷的動(dòng)物以及沒有觀察到損傷的動(dòng)物數(shù)目引起。雌激素處 理和飲食的保護(hù)效果主要對皮質(zhì)發(fā)揮作用，皮質(zhì)是稱作半影的腦區(qū)域，因 為認(rèn)為半影是在實(shí)驗(yàn)性中風(fēng)中"可拯救的"。這與稱作梗塞核心的基底神經(jīng) 節(jié)相反，基底神經(jīng)節(jié)迄今在實(shí)驗(yàn)性中風(fēng)中還不容易通過任何測試的處理拯 救。程序性細(xì)胞死亡.使用TUNEL染色進(jìn)行程序性細(xì)胞死亡的評估以確 定雌二醇處理和三種試驗(yàn)々大食對應(yīng)答實(shí)驗(yàn)性局部缺血的程序性細(xì)胞死亡應(yīng) 答的影響。在完成該研究的所有動(dòng)物中評估TUNEL染色的三個(gè)腦區(qū)域。 在大腦皮質(zhì)的核心、大腦皮質(zhì)的半影和下皮層的核心中，基于我們使用 TTC染色對受損的腦區(qū)域的評估(Wen等人，2004),進(jìn)行TUNEL的評估。使用DAPI核計(jì)數(shù)器染色，將TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)目對視野中細(xì)胞總數(shù)歸 一化。計(jì)數(shù)來自所有三個(gè)腦區(qū)的切片并將每只動(dòng)物的平均細(xì)胞數(shù)用于產(chǎn)生 組平均值。在來自最大程度腦梗塞的切片中隨機(jī)選擇的顯微鏡視野(320 fui^切片)中進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，如通過TTC染色測定。TUNEL染色在對照動(dòng) 物的所有三個(gè)腦區(qū)域中都是廣泛的。當(dāng)進(jìn)行所有五個(gè)處理組的比較時(shí)，在 每個(gè)腦中TUNEL染色與使用TTC染色以定量損傷體積所發(fā)現(xiàn)的結(jié)果相關(guān) (圖3)。即，在E2處理的動(dòng)物以及喂飼飲食II的動(dòng)物中都有TUNEL染色 的顯著減小。喂飼飲食I和III的動(dòng)物介于對照和飲食II動(dòng)物之間。該TTC 染色和TUNEL染色之間的相關(guān)性在圖4中描繪。激素和飲食對TUNEL 染色的影響的表征表明E2和飲食II對細(xì)胞死亡的大部分保護(hù)由程序性細(xì) 胞死亡的抑制所介導(dǎo)。結(jié)論所有三種試驗(yàn)飲食都減小了平均梗死體積以及TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)并 且飲食II將這些參數(shù)減小到用已知的神經(jīng)保護(hù)劑雌二醇觀察到的水平。本發(fā)明不限于本文描迷的和上面示例的實(shí)施方案，而是能夠在所附權(quán) 利要求的范圍內(nèi)改變和修飾。
權(quán)利要求
1.組合物，其包含有效增強(qiáng)動(dòng)物中血管完整性的量的一種或多種長鏈多不飽和脂肪酸(LCPUFA)和一種或多種一氧化氮釋放化合物(NORC)。
2. 權(quán)利要求l的組合物，其中所述組合物是寵物食品組合物、飲食補(bǔ) 充劑(其中LCPUFA和NORC各自在0.5到10g/天的范圍內(nèi))，或者經(jīng)配制 用于人類消費(fèi)的食品。
3. 斥又利要求1或2的組合物，其中LCPUFA包括花生四烯酸、二十 碳五烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸的至少一種。
4. 前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其中NORC包括L-精氨酸或其衍 生物的至少一種。
5. 權(quán)利要求4的組合物，其中LCPUFA為按制劑的重量計(jì)至少約 0.1%到約13%的量，精氨酸為按制劑重量計(jì)至少約0.1%到約12%的量。
6. 權(quán)利要求5的組合物，其中LCPUFA以飲食制劑的約1 %到約3% 的量存在。
7. 權(quán)利要求5或6的組合物，其中NORC以飲食制劑的約1%到約3 %的量存在。
8. 前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其還包含約O.lmg到5g量的至少 一種抗氧化劑。
9. 前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其還包含約1到5xRDA量的B族維生素。
10. 前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其還包含用于促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)的至 少一種生長因子。
11. 前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其還包含至少一種額外的抗炎劑。
12. 前面權(quán)利要求任一項(xiàng)的組合物，其中所述動(dòng)物是陪伴動(dòng)物。
13. 權(quán)利要求12的組合物，其中所述陪伴動(dòng)物是狗或貓。
14. 權(quán)利要求1到11任一項(xiàng)的組合物，其中所述動(dòng)物是人。
15. 增強(qiáng)動(dòng)物中血管完整性的方法，其包括對該動(dòng)物規(guī)則地施用組合物，該組合物包含增強(qiáng)動(dòng)物中血管完整性有效量的一種或多種LCPUFA和 一種或多種NORC。
16. 權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物是寵物食品組合物、飲食補(bǔ) 充劑，或者經(jīng)配制用于人類消費(fèi)的食品。
17. 4又利要求15的方法，其中LCPUFA包括花生四烯酸、亞油酸、a-亞麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸的至少一種。
18. 權(quán)利要求15的方法，其中NORC包括L-精氨酸或其衍生物的至 少一種。
19. 權(quán)利要求18的方法，其中LCPUFA為按制劑的重量計(jì)至少約 0.1%到約13。/。的量，L-精氨酸為按制劑重量計(jì)至少約0.1。/。到約12%的量。
20. 權(quán)利要求15的方法，其還包含選自抗氧化劑、B族維生素、生長 因子和抗炎劑的至少一種額外組分。
21. 權(quán)利要求15的方法，其中所述動(dòng)物是陪伴動(dòng)物。
22. 權(quán)利要求21的方法，其中所述陪伴動(dòng)物是貓或狗。
23. 權(quán)利要求15的方法，其中所述動(dòng)物是人。
24. 權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物對動(dòng)物的規(guī)則施用在動(dòng)物腦 中局部缺血發(fā)作的情況下，導(dǎo)致腦損害的減輕。
25. 權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物對動(dòng)物的規(guī)則施用導(dǎo)致動(dòng)物 中腦老化的延緩。
26. 權(quán)利要求15的方法，其中所述組合物對動(dòng)物的規(guī)則施用導(dǎo)致動(dòng)物 中發(fā)生局部缺血的部位細(xì)胞程序性細(xì)胞死亡的減少。
27. 權(quán)利要求26的方法，其中局部缺血發(fā)生在選自腦、心臟和腎的組 織中。
28. 減輕動(dòng)物中局部缺血誘導(dǎo)的腦損傷的方法，其包括對該動(dòng)物規(guī)則 地施用組合物，該組合物包含在動(dòng)物的腦中局部缺血發(fā)作的情況下減輕局 部缺血i秀導(dǎo)的腦損傷有效量的一種或多種LCPUFA和一種或多種NORC。
29. 權(quán)利要求28的方法，其中所述組合物是寵物食品組合物、飲食補(bǔ) 充劑，或者經(jīng)配制用于人類消費(fèi)的食品。
30. 權(quán)利要求28的方法，其中LCPUFA包括花生四烯酸、二十碳五 烯酸、二十二碳五烯酸或二十二碳六烯酸的至少一種。
31. 權(quán)利要求28的方法，其中NORC包括L-精氨酸或其衍生物的至 少一種。
32. 權(quán)利要求31的方法，其中LCPUFA為按制劑的重量計(jì)至少約 0.1%到約13。/。的量，L-精氨酸為按制劑重量計(jì)至少約0.1%到約12%的量。
33. 權(quán)利要求28的方法，其中所述動(dòng)物是陪伴動(dòng)物。
34. 權(quán)利要求33的方法，其中所述陪伴動(dòng)物是貓或狗。
35. 權(quán)利要求28的方法，其中所述動(dòng)物是人。
36. —種或多種LCPUFA和一種或多種NORC在生產(chǎn)用于共同施用 以增強(qiáng)血管完整性的一種或多種藥物中的用途。
37. 權(quán)利要求36的用途，其用于在腦中局部缺血發(fā)作的情況下減輕腦 損傷。
38. 權(quán)利要求36的用途，其用于延緩動(dòng)物的腦老化。
39. 權(quán)利要求36的用途，其用于在動(dòng)物中局部缺血部位減少細(xì)胞程序 性細(xì)月包死亡。
40. 權(quán)利要求39的用途，其中局部缺血發(fā)生在選自腦、心臟和腎的組 織中。
41. 一種或多種LCPUFA和一種或多種NORC在生產(chǎn)用于共同施用 以減輕動(dòng)物中局部缺血誘導(dǎo)的腦損傷的一種或多種藥物中的用途。
全文摘要
公開了用于增強(qiáng)動(dòng)物中血管完整性的組合物和方法。利用長鏈多不飽和脂肪酸和一氧化氮釋放化合物的組合物和方法在減輕動(dòng)物中局部缺血誘導(dǎo)的腦損傷中也是有效的。
文檔編號A61P9/10GK101247736SQ200680030641
公開日2008年8月20日 申請日期2006年8月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年8月26日
發(fā)明者B·拉爾森, 潘元龍 申請人:雀巢技術(shù)公司