專利名稱：：Pyy的增強(qiáng)粘膜遞送的制劑的制作方法劑發(fā)明背景肥胖及其相關(guān)病癥在美國及全世界都是普遍和非常嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題。已經(jīng)顯示當(dāng)對哺乳動物外周給予某些結(jié)合Y2受體的肽時，其誘導(dǎo)體重下降。所述Y2受體結(jié)合肽是結(jié)合Y2受體的神經(jīng)肽。這些Y2受體結(jié)合肽屬于包括肽YY(PYY)、神經(jīng)肽Y(NPY)和力夷多肽(PP)的肽家族。這些長約36個氨基酸的肽在該肽的中部具有包括"PP-折疊"的緊密的螺旋結(jié)構(gòu)。具體特征包括位于殘基1至8的多聚脯氨酸螺旋、位于殘基9至14的/3轉(zhuǎn)角、位于殘基15至30的a螺旋、位于殘基30至36的向外突出的C末端以及羧基末端酰胺，該羧基末端酰胺對于生物活性似乎是關(guān)鍵的。已經(jīng)顯示當(dāng)通過注射被外周給藥至個體時，稱為肽YY(l-36)[PYY(1陽36)][YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY,(SEQIDNO:l)]的36氨基酸肽造成體重下降且因此能夠被用作治療肥胖和相關(guān)疾病的藥物，Morley,J.，A^/ra;w_yc/io&o/ogy21:22-30(1989)。后來發(fā)現(xiàn)為產(chǎn)生此效果PYY與Y2受體結(jié)合，并且Y2激動劑與Y2受體的結(jié)合造成碳水化合物、蛋白質(zhì)和餐量攝取的下降，Leibowitz，S.F.etal.,U:1251-1260(1991)。PYY的另一分子形式是PYY(3-36)IKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY(SEQIDNO:1的殘基3-36),Eberlein,Eysseleinetal.,/0..797-803，1989)。下文中術(shù)語PYY指全長PYY和結(jié)合Y2受體的任何PYY片段。已知能夠通過靜脈輸注或注射給予PYY以治療在休克特別是內(nèi)毒素造成的休克中遇到的致命的低血壓(美國專利號4,839,343)，通過灌注、腸胃外、靜脈或皮下給藥及通過植入以抑制哺乳動物中胰腺腫瘤的增殖(美國專利號5,574，010),以及治療肥胖(Morley(1989)和美國專利申請?zhí)?0020141985)。還聲明能夠通過腸胃外、口服、鼻腔、直腸和局部途徑對家畜或人以有效提高所述個體的體重增加的量給予PYY，該提高通過增加鈉依賴的共轉(zhuǎn)運(yùn)營養(yǎng)物的胃腸吸收(美國專利號5,912,227)。然而，對于治療肥胖和相關(guān)疾病，包括糖尿病，給藥方式被限制為靜脈IV輸注，沒有優(yōu)化用于PYY的其它給藥的有效制劑。這些現(xiàn)有技術(shù)教導(dǎo)均未提供含有與設(shè)計用來增強(qiáng)粘膜(即鼻腔、含服、口服)遞送的賦形劑混合的PYY或PYY(3-36)的制劑，它們也未教導(dǎo)不含內(nèi)毒素的Y2受體結(jié)合肽制劑對于非輸注給藥的價值。以前，用于PYY鼻內(nèi)給藥的制劑在專利申請中有所描述，包括專利申請開WO040563142、US2004/0115135、US2004/0157777、US2004/0209807和US2005/0002927，通過參考的方式并入本文。這些申請公開了適合在0.1ml中含有20船至200將劑量，即0.2mg/ml至2.0mg/mlPYY濃度的制劑。在包含10mM檸檬酸鹽和100mMNaCl的制劑中、在40°C持續(xù)5天、在不同pH值下測試了0.3mg/mlPYY的劑型的穩(wěn)定性。發(fā)現(xiàn)最佳pH值為4.9,其中在孵育5天后超過80%的肽保留。然而，隨后發(fā)現(xiàn)PYY穩(wěn)定性受到PYY濃度的顯著影響在4交高濃度下，PYY穩(wěn)定性下降。此外，以前描述和測試的用于鼻內(nèi)給藥的制劑包括諸如甲基—p-環(huán)糊精和L-a-二癸酰磷脂酰膽堿的賦形劑，它們不是公認(rèn)安全的(GRAS)賦形劑。因此，為了提供在藥物的通常條件下具有普遍效用的劑型和制劑，亟需開發(fā)具有提高的穩(wěn)定性的替代制劑組合物。此外，亟需開發(fā)包含GRAS(公認(rèn)安全)賦形劑的制劑和劑型作為使用非藥典賦形劑的不同選擇。附圖簡要說明圖1在實(shí)施例1中測試的制劑的PYY3-36讀l透。圖2在實(shí)施例2中測試的制劑的PYY3-36讀嗜。圖3在實(shí)施例3中測試的制劑的PYY3-36讀卜透。圖4在實(shí)施例4中測試的制劑的PYY3-36讀卜透。圖5相對時間的肽回收(A)25。C儲存；(B)40。C儲存；和(C)50。C儲存。圖6:相對時間的肽回收，40。C儲存(A)基于檸檬酸鹽的制劑；(B)基于乙酸鹽的制劑；(C)基于谷氨酸鹽的制劑；和(D)未緩沖的制劑。圖7:在升高的溫度和每日3次噴霧的霧化應(yīng)力下在實(shí)施例8中測試的樣品的PYY3-36穩(wěn)定性。圖8:在升高的溫度和每日3次噴霧的霧化應(yīng)力下在實(shí)施例9中測試的樣品的PYY3-36穩(wěn)定性。圖9:在升高的溫度和每日3次噴霧的霧化應(yīng)力下的PYY3-36穩(wěn)定性，在實(shí)施例10中測試(A)樣品5-l、5-2和5-3;(B)樣品5-4、5-5、5陽6和5-7;(C)樣品5-8、5-9、5-10和5-11;(D)樣品5-12、5-13和5-14。發(fā)明的詳細(xì)描述為了更好地理解本發(fā)明，提供以下定義和詳細(xì)描述Y2受體結(jié)合肽用于本發(fā)明的粘膜制劑中的Y2受體結(jié)合肽包括3個天然存在的生物活性肽家族，PP、NPY和PYY。Y2受體結(jié)合肽的實(shí)例及其用途在美國專利號5,026,685;美國專利號5,574,010;美國專利號5,604,203;美國專利號5,696,093;美國專利號6,046,167;Gehlertetal.,尸rac.編.Afe/.218:7-22(1998);Sheikhetal.，爿m.乂尸Ajwo/,261:701-15(1991);Fo畫ieretal.,M>/.泡削,/.45:93-101(1994);Ki勿etal,,MedCA流38:4579-4586(1995);Ristetal.，歷oc/^附.247:1019-1028(1997);Kirbyetal.,C/ze附.36:3802-3808(1993);Grundemaretal.,iegw/ato^y尸e^Ww62:131-136(1996);美國專利號5,696,093(PYY激動劑的實(shí)例)、美國專利號6,046,167中有描述。根據(jù)本發(fā)明，Y2受體結(jié)合肽包括游離堿，酸加成鹽或金屬鹽，例如鉀鹽或鈉鹽，或肽，通過例如酰胺化、糖基化、?；?、^fb酸化、^疇酸化、乙?；铜h(huán)化的過程(美國專利號6,093,692、美國專利號6,225,445和聚乙二醇化)被修飾的Y2受體結(jié)合肽。肽YY激動劑如本文所用，"PYY"指天然序列或變體形式的PYY(1-36)(SEQIDNO:1)，以及任何來源的PYY衍生物、片段和類似物，不論是天然的、合成的或重組的。該P(yáng)YY由PYY序列的至少最后15個氨基酸殘基PYY(22-36)或其類似物組成。其它可以使用的PYY肽為PYY(l-36)(SEQIDNO:1)、PYY(3-36)、PYY(4-36)、PYY(5-36)、PYY(6畫36)、PYY(7-36)、PYY(8隱36)、PYY(9-36)、PYY(10-36)、PYY(ll-36)、PYY(12-36)、PYY(13-36)、PYY(14-36)、PYY(15-36)、PYY(16-36)、PYY(17-36)、PYY(18-36)、PYY(19-36)、PYY(20-36)和PYY(21-36)。這些肽通常結(jié)合腦和別處的Y受體，尤其是Y2和/或Y5受體。通常，這些肽以不含內(nèi)毒素或無熱原的形式合成，盡管這并不總是必需的。其它PYY肽包括其中進(jìn)行了保守氨基酸殘基改變的那些PYY肽，例如PYY肽的位點(diǎn)特異突變包括[Asp15]PYY(15-36)(SEQIDNO:2)、[Thr13]PYY(13-36)(SEQIDNO:3)、[Val12]PYY(12-36)(SEQIDNO:4)、[Glu11]PYY(l1-36)(SEQIDNO:5)、[Asp10]PYY(10-36)(SEQIDNO:6)、[Val7]PYY(7-36)(SEQIDNO:7)、[Asp6]PYY(6-36)(SEQIDNO:8)、[Gin4]PYY(4陽36)(SEQIDNO:9)、[Arg4]PYY(4-36)(SEQIDNO:10)、[Asn4]PYY(4-36)(SEQIDNO:11)、[Val3]PYY(3-36)(SEQIDNO:12)和[Leu3]PYY(3-36)(SEQIDNO:13)。其它PYY肽包括其中進(jìn)行了至少兩個保守氨基酸殘基改變的那些PYY肽，包括[Asp1Asp15]PYY(10-36)(SEQIDNO:14)、[Asp6,Thr13]PYY(6-36)(SEQIDNO:15)、[Asn4,Asp15]PYY(4-36)(SEQIDNO:16)和[Leu3，Asp10]PYY(3-36)(SEQIDNO:17)。還包括PYY的類似物，例如美國專利號5,604,203和號5,574,010中^^開的那些。這些包括下列肽通式1AR2X-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-A33-A34-A35-A36R4對于通式1A,能夠創(chuàng)造下列PYY(22-36)肽類似物，其中X是Cys或缺失；和R2中的每一個均鍵合到N末端氨基酸的ce-氨基的氮原子上；R,是H,d-C12烷基，C6-C,s芳基,d-C,2?；?，C7-C18芳烷基，或C7-C,s烷芳基；R2是H,d-C,2烷基，C6-C18芳基，G-C12?；?C7-Cs芳烷基，或C7-C18烷芳基；A22是芳香氨基酸，Ala,Aib,Anb,N-Me-Ala或缺失；A23是Ser、Thr、Ala,Aib，N-Me-Ser,N-Me-Thr，N-Me-Ala,D陽Trp,或缺失；AM是Leu，Gly，lie,Val，Trp，Me,Nva,Aib,AnbN-Me誦Leu,或缺失；A25是Arg,Lys，同源(homo)-Arg，二乙基-同源畫Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈C,-C,o烷基，或芳基)，Om,或缺失；A26是Ala,His,Thr,3-Me-His,l-Me-His，)3-吡唑基丙氨酸，N-Me-His,Arg,Lys,同源-Arg,二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH—R(其中R是H，支鏈或直鏈d誦d。烷基，或芳基)，Om,或缺失；A"是Nal，Bip,Pcp，Tic,Trp,Bth,TW,或Dip;A"是Leu,Val，Tip,Nle，Nva，Aib,Anb,或N-Me-Leu;A"是Asn,Ala,Gin,Gly，Trp,或N-Me-Asn;A"是Leu，lie,Val,Trp，Nle，Nva,Aib，Anb,或N-Me-Leu;A31是Val，Leu,lie,Trp，Nle，Nva,Aib,Anb,或N-Me-Val;A"是Thr,Ser,N-Me-Ser，N-Me-Thr，或D畫Trp;A"是Cys,Arg，Lys,同源-Arg，二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈Q(jìng)《10烷基，或C6-C,s芳基)，或Om;A34ACys,Gln，Asn,Ala,Gly，N-Me-Gin,Aib,或Anb;A35是Cys，Arg，Lys，同源-Arg,二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H，支鏈或直鏈d-do烷基，或(:6-(318芳基)，或Om;A36是芳香氨基酸，或Cys;R3是H,Q-C!2烷基，Q-Qs芳基,d《12?；?，C7-Cu芳烷基，或C7-C,s烷芳基；R4是H,d《12烷基,C6-C18芳基，-Cu?；?，C7-C,s芳烷基，或C7-C,8烷芳基，或其藥學(xué)上可接受鹽。PYY(22-36)通式1A肽類似物的實(shí)例包括N-a-Ac-Ala-Ser-Leu國Arg-His-Trp-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQIDNO:18);N-a-Ac畫Ala-Ser-Leu-Arg-His隱Thi-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQIDNO:19)，或其藥學(xué)上可接受鹽。可以使用的另外的通式IA類似物包括其中殘基八28和八29、八29和八30、A3o和A31、A"和A32、A33和A34、A34和A35或A35和A36之間的--CO—NH—鍵被CH2—NH、CH2--S、CH2--CH2或CH2-O取代，或者其中殘基A35和A36之間的CO-NH鍵被CH2—NH取代。對于通式1B，能夠創(chuàng)造下列PYY(22-36)肽類似物，其中X是Cys或缺失；和R2鍵合到N末端氨基酸；&是H,d-C12烷基，C6-C!s芳基，C,-Cu?；?C7-Qs芳烷基，或C7-C!s烷芳基；R2是H,Q-(:12烷基，(^6-(:18芳基，(:1-(:2?；?，(:7-(:18芳烷基，或(:7-(318烷芳基；A22是芳香氨基酸或缺失；A"是Ser、Thr、Ala,Aib,N-Me-Ser，N-Me-Thr,Me-Ala,D-Trp,或缺失；A"是Leu,Gly,Ile，Val,Trp,Nle，Nva，Aib，Anb,N-Me-Leu，或缺失；A25是Arg,Lys，同源-Arg,二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H，支鏈或直鏈C,-Qo烷基，或芳基)，Om,或缺失；A加是Ala,His,Thr，3-Me-His,l-Me-His,)3-吡唑基丙氨酸，N-Me-His,Arg,Lys，同源-Arg，二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈d-C,。烷基，或芳基)，或Om;A"是除Tyr之外的芳香氨基酸；A28是Leu,Val，Trp,Nle,Nva,Aib,Anb,或N-Me-Leu;A"是Asn,Ala,Gin,Gly，Trp,或N-Me-Asn;A3。是Leu，lie,Val,Trp，Nle,Nva,Aib，Anb，或N-Me-Leu;A31是Val,Leu,Ile，Trp,Nle,Nva，Aib，Anb,或N-Me-Val;A32是Thr,Ser，N-Me-Ser，N-Me-Thr,或D-Trp;A33是Cys，Arg,Lys,同源-Arg,二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈d-C,o烷基,或C6-C18芳基)，或Orn;A"是Cys,Gin,Asn,Ala,Gly,N-Me-Gin，Aib，或Anb;A"是Cys,Arg，Lys，同源-Arg，二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈d-C)o烷基，或C6-(318芳基)，或Om;A36是芳香氨基酸，或Cys;R3是H，d-C^烷基，C6-Qs芳基，d-Cu?；?C7-C18芳烷基，或C7-C18烷芳基；R4是H,d-C12烷基，C6-C18芳基，d-C12?；?C7-ds芳烷基，或CVd8烷芳基，或其藥學(xué)上可接受鹽。PYY(22-36)通式1B肽類似物的實(shí)例包括N-a-Ac-Tyr-Ser-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQIDNO:20),或其藥學(xué)上可接受鹽。能夠使用另外的通式IB類似物，其中A27是Phe,Nal,Bip,Pep,Tic,Trp,Bth,Thi,或Dip。PYY(22-36)通式IB肽類似物的另一實(shí)例包括N-oAc-Phe-Ser陽Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQIDNO:21)。通式2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>對于通式2，能夠創(chuàng)造下列PYY(25-36)肽類似物，其中Rj和R2鍵合到N末端氨基酸的a-氨基的氮原子上；R,是H,d-C12烷基，C6-C18芳基，d-C2?；?，C7-C18芳烷基，或C7-C,s烷芳基；112是H,C,-C12烷基，C6-C18芳基，d-C12酰基，C7-C1S芳烷基，或C7-C18烷芳基;A25是Arg,Lys,同源-Arg,二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈d-do烷基，或芳基)，Om,或缺失；八26是Ala，His,Thr，3-Me-His,/3-吡唑基丙氨酸，N-Me-His,Arg,Lys,同源-Arg，二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈d-C,o烷基，或芳基)，或Om;八27是芳香氨基酸；A"是Leu,Val,Trp,Me,Nva,Aib,Aib，Anb,或N-Me畫Leu;A"是Asn,Ala,Gin,Gly,Trp,或N-Me-Asn;A3。ALeu,lie,Val:Trp,Nle，Nva,Aib,Anb,或N-Me-Leu;A31是Val，Leu，lie,Trp，Me,Nva，Aib,Anb,或N陽Me-Val;A32是Thr,Ser,N-Me-Ser,N-Me-Thr,或D畫Trp;A33是Arg,Lys,同源-Arg，二乙基-同源-Arg,Lys-e-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈C,-C,o烷基，或Ce-ds芳基)，Cys,或Om;AM是Cys,Gin,Asn,Ala,Gly,N-Me-Gin,Aib,或Anb;A35是Arg,Lys,同源-Arg,二乙基陽同源-Arg,Lys-f-NH—R(其中R是H,支鏈或直鏈Q(jìng)-C,o烷基，或C6-Qs芳基)，Cys,或Om;A36是芳香氨基酸，或Cys;R3是H,d-Cu烷基，C6-C!s芳基，d-d2?；?，C7-d8芳烷基，或(:7-(318烷芳基；以及R4是H,d-C,2烷基，C6-C,8芳基，C,-d2?；珻7-ds芳烷基，或CVd8烷芳基，或其藥學(xué)上可接受鹽。能夠使用另外的類似物，其中通式2的A"是Phe，Nal，Bip，Pcp，Tic，Trp,Bth,Thi,或Dip。PYY(22-36)通式2類似物的實(shí)例包括N-a-Ac-Arg國His-Phe-LeU-Asn-LeU-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-TYr-NH2(SEQ.ID.NO:22)，或其藥學(xué)上可接受鹽?？梢允褂玫牧硗獾耐ㄊ?類似物包括其中殘基A2、A29、A,口A30、A3、A31、A"和A32、A33和A34、A34和A35或A35和A36之間的--CO--NH—鍵被CH2--NH、CH2—S、CH2-CH2或CH2-0取代。此外，類似物可以包括二聚物化合物，該二聚物化合物包含通式1A的兩個肽、通式IB的兩個肽或通式2的兩個肽，或者通式1A的1個肽和通式1B的1個肽、或通式1A的1個肽和通式2的1個肽、或通式1B的1個肽和通式2的1個肽；其中所述二聚物通過所述兩個肽之間的酰胺鍵或二碌b橋形成。縮寫包括Asp二D-天冬氨酸；Ala二A^丙氨酸；Arg-R—青氨酸；Asn=N=天冬酰胺；Cys-O半胱氨酸；G1尸G^甘氨酸；Gh^E二谷氨酸；Gh^Q二谷氨酰胺；His^H^組氨酸；1^=1=異亮氨酸；Leu二L^亮氨酸；Lys^K^賴氨酸;MetHV^蛋氨酸；Phe^F^苯丙氨酸；Pro^P^脯氨酸；Ser二S二絲氨酸；Thr=T=蘇氨酸；Trp-W^色氨S臾；Ty^Y二酪氨酸；Val^V^纈氨酸；On^鳥氨酸;Nal二2-萘基丙氨酸；Nva二正纈氨酸；Nle^正亮氨酸；Thi二2-噻吩丙氨酸;Pcp4-氯苯丙氨酸；Bth-3-苯并噻吩丙氨酸；Bip二4，4'-二苯基丙氨酸；Tic二四氫異喹啉-3-羧酸；Aib-氨基異丁酸；Anb-.a,氨基正丁酸；Dip^2,2-二苯基丙氨酸；以及Thz二4-噻唑丙氨酸(美國專利號5,604,203)。美國專利5，574，010號中描述的類似物包括以下通式3/R2—X-A22-A23-A24-A25-A26-A27-A28-A29-A30-A31-A32-Y—R4通式3的類似物，其中X是0-5個氨基酸的鏈，包括的，其N末端的氨基酸與R,和R2鍵合；Y是0-4個氨基酸的鏈，包括的，其C末端的氨基酸與R3和R4鍵合；R!是H，d-C、2烷基(例如甲基)，C6-C,s芳基(例如苯基、萘乙?；?，Q《12?；?例如曱酰基、乙?；腿舛罐Ⅴ；?，C7《18芳烷基(例如芐基)，或C7-ds烷芳基(例如p-曱基苯基)；R2是H,d《12烷基(例如曱基)，C6《18芳基(例如苯基、萘乙?；?，d-(312?；?例如曱?；?、乙酰基和肉豆蔻酰基)，C7-ds芳烷基(例如千基)，或C7-C!8烷芳基(例如p-曱基苯基)；A"是芳香氨基酸，Ala,Aib,Anb,N-Me-Ala或缺失；A"是Ser、Thr、Ala，N-Me畫Ser,N-Me-Thr,N-Me-Ala,或缺失；A24是Leu,lie，Vat，Trp,Gly,Aib,Anb,N-Me畫Leu,或缺失；A25是Arg，Lys，同源-Arg:二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH-R(其中R是H,支鏈或直鏈Q(jìng)-Qo烷基，或芳基)，Om，或缺失；A26是His,Thr,3-Me-His，l-Me-His，/3-吡唑基丙氨酸,N-Me曙His,Arg,Lys,同源-Arg，二乙基-同源陽Arg,Lys陽e-NH-R(其中R是H,支鏈或直鏈d-Cw烷基，或芳基)，Orn,或缺失；A"是除Tyr之外的芳香氨基酸；A"是Leu，lie,Vat,Trp,Aib,Aib,Anb，或N-Me-Leu;A"是Asn，Ala,Gln，Gly,Trp,或N-Me-Asn;A^是Leu,lie,Val,Trp,Aib,Anb,或N-Me-Leu;A31是Vat，lie,Trp,Aib,Anb,或N-Me-Val;A"是Thr,Ser，N-Me-Set,或N-Me-Thr;R3是H,C廣Cu烷基(例如曱基)，C6-C18芳基(例如苯基、萘乙?；?，d-C!2?；?例如曱?；?、乙?；腿舛罐Ⅴ；?,C7-ds芳烷基(例如千基)，或C7-C"烷芳基(例如p-曱基苯基);R4是H，d《12烷基(例如曱基)，C6-ds芳基(例如苯基、萘乙?；?，d七12?；?例如甲?；?、乙酰基和肉豆蔻?；?，C7-Ci8芳烷基(例如節(jié)基)，或C7-ds烷芳基(例如p-曱基苯基)，或其藥學(xué)上可接受鹽。通式3的特別優(yōu)選的類似物包括N-.ce.-Ala-Ser-Leu-Arg-His-Trp-Leu-Asn-Leu-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH2(SEQ.ID.NO:23)。通式4R，R3/R2—A25HA2、A29-A30-A31-A32-Y-_R4另一肽YY類似物是通式4，其中N末端氨基酸與R,和R2鍵合；Y是0-4個氨基酸的鏈，包括的，其C末端的氨基酸與113和R4鍵合；是H，C,-C12烷基，C6-C18芳基，d-C12?；?，C7-C18芳烷基，或C7-C18烷芳基；R2是H,d《12烷基，C6-Cw芳基，d-d2酰基，C7-ds芳烷基，或C7-C18烷芳基；A25是Arg，Lys,同源-Arg，二乙基-同源Arg，Lys-e-NH-R(其中R是H,支鏈或直鏈C-C川烷基，或芳基)，Om，或缺失；A"是Ala，His,Thr,3-Me-His，l-Me-His，/5-吡唑基丙氨酸，N-Me-His，Arg,Lys，同源-Arg,二乙基-同源-Arg，Lys-e-NH-R(其中R是H，支鏈或直鏈G《10烷基，或芳基)，Om,或缺失；A"是芳香氨基酸；A28是Leu，Ile,Val,Trp,Aib,Anb，或N-Me-Leu;A29是Asn,Ala,Gin,Gly,Trp，或N-Me-Asn;A3°ALeu,lie,Val，Trp,Aib,Anb,或N-Me-Leu;A"是Val,lie,Tip,Aib,Anb,或N-Me-Val;A32是Thr,Set,N-Me畫Set，或N-Me-Thr或D畫Trp;R3是H,C廣C,2烷基，CVd8芳基，d《12?；?，(:7-018芳烷基，或C7-Qs烷芳基；以及R4是H,Q-C,2烷基，C6-C!s芳基，C-Cu?；?C7-ds芳烷基，或C廣d8烷芳基，或其藥學(xué)上可接受鹽。應(yīng)注意，除非另外指明，對于本文描述的所有肽YY激動劑，每一氨基酸殘基，例如Leu和A)，代表NH--C(R)H--CO--的結(jié)構(gòu)，其中R為側(cè)鏈。氨基酸殘基之間的線代表連接氨基酸的肽鍵。同樣，當(dāng)氨基酸殘基是光學(xué)活性的時，旨在指L型構(gòu)象，除非清楚地指明D型。縮寫Aib二氨基異丁酸；Anb=.a-氨基正丁酸；Bip二4,4'-二苯基丙氨酸；Btl^3-苯并噻吩丙氨酸；Dip二2,2-二苯基丙氨酸；Nat;萘基丙氨酸；Om二鳥氨酸；Pcp二4-氯苯丙氨酸；Thi二2-噻吩丙氨酸；Tic二四氫異喹啉隱3畫羧酸。(美國專利號5,574,010)。另外的PYY合成類似物的實(shí)例包括[im-DNP-His26]PYY:YPAKPEAPGEDASPEELSRYYASLR[im-DNP-His26]YLNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.24);[Ala32]PYY:ASLRHYLNLV[Ala]RQRY-NH2(SEQ.IDNo.25);[Ala23'32]PYY:A[Ala]LRHYLNLV[Ala]RQRY-NN2(SEQ.IDNo.26);[Glu28]PYY(22-36):ASLRHY[Glu]NLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.27);N普Ac-PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRHYLNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.28);N-o;-Ac[p.CL.Phe.sup.26]PYY:N-a-Ac畫ASLR[p.Cl.Phe26]YLNLVTRQR(SEQ.IDNo.29);N-a-Ac[Glu28]PYY:N-a-Ac-ASLRHY[GIu]NLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.30);N-a-Ac[Phe27]PYY:N-a-Ac-ASLRH[Phe]ENLVTRQR[N-Me陽Tyr]-NH2(SEQ.IDNo.31);N-a-Ac]8N-Me-Tyr]PYY:N-ce誦Ac-ASLRHYENLVTRQR[N—Me—Tyr]—NH2(SEQ.IDNo.32);N隱o;-肉豆蔻酰-PYY(22-36):N-a-肉豆蔻酰-ASLRHYLNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo,33);N-a-萘乙?；?PYY(22-36):N-ce-萘乙?；?ASLRHYLNLVTRQR(SEQ.IDNo.34);N會Ac[Phe27]PYY:N-a-Ac-ASLRH[Phe]ENLVTRQR[N-陽Me-畫Tyr]--NH2(SEQ.IDNo.35);N陽o:-Ac-PYY(22-36):N-o;-Ac-ASLRHYLNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.36);N-a-Ac-[Bth27]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.37);N-a-Ac國[Bip27]PYY(22-36):N會Ac-ASLRH[Bip]LNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.38);N-a-Ac-[Nal27]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[NaL]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.39);N-a-Ac-[Trp27]PYY(22-36):N-a-Ac隱ASLRH[Trp]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.40);N-a-Ac-[Thi27]PYY(22-36):N-o;-Ac-ASLRN[Thi]LNLVTRQRY-NH2(SEQ.IDNo.41);N-ce-Ac-[Tic27]PYY(22國36):N-a-Ac-ASLRH[Tic]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.42);N-a-Ac-[Phe27]PYY(25-36):N-a-Ac-H[Phe]LNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.43);N-a-Ac-[Phe27,Thi36]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH(phelLNLVTRQR[Thi]-NH2(SEQ.IDNo.44);N陽a-Ac誦[Thz26，Phe27]PYY(22-36):N陽a-Ac-ASLR[Thz][Phe]LNLVTRqRY—NH2(SEQ.IDNo.45);N-ce-Ac.[Pcp27]PYY(22陽36):N-a-Ac-ASLRH[Pep]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.46);N-a-Ac-[Ph22'27]PYY(22-36):N-a-Ac-[Phe]SLRN[Phe]LNLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.47);N-a-Ac-[Tyr22，Phe27]PYY(22陽36):N-a-Ac陽[Tyr]SLRH[Phe]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.48);N-ce-Ac-[Trp28]PYY(22-36):N扁a-Ac-ASLRHY[Trp]NLVTRQRY--NH2(SEQ.IDNo.49);N-0!-Ac-[Trpz。]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRHYLN[Tip]VTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.50);N-a-Ac-[Ala.sup.26，Phe27]PYY(22-36):N-ce-Ac-ASLR[Ala][Phe]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.51);N-a-Ac-[Bth27]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Bth]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.52);N-a-Ac-[Phe27]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQRY—NH2(SEQ.IDNo.53);N-ce-Ac-[Phe27'36]PYY(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Phe]LNLVTRQR[Phe]-NH2(SEQ.IDNo.54);N-ce畫Ac-[Phe27,D-Trp32]PYV(22-36):N-a-Ac-ASLRH[Phe]LNLV[D-Trp]RQRY--NH2(SEQ.IDNo.55)。另夕卜的類4以物4苗述在Balasubramaniam，etal.，i&searcA(1988);日本專利申i貪2,225,497(1990);Balasubmmaniam,etal.,14:1011,1993;Grandt,etal.,"5/:151(1994);PCT國際申請公開94/03380中。Balasubramaniam,etal.描述了類似物PYY(l-28)、PYY(l-22)、PYY(22-28)、PYY(22隱36)和PYY(27隱36)。Grandt,etal.討論了PYY(l-36)(SEQIDNO:1)和PYY(3-36)。上述的肽通常結(jié)合腦和別處的Y受體，尤其是Y2和/或Y5受體。通常，這些肽以不含內(nèi)毒素或無熱原的形式合成，盡管這并不總是必需的。PYY激動劑包括大鼠PYY:TyrProAlaLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluLeuSerArgTyrTyrAlaSerLeuArgHisTyrLeuAsnLeuValThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:56)和與人相對應(yīng)的氨基末端截短形式；豬PYY:TyrProAlaLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluLeuSerArgTyrTyrAlaSerLeuArgHisTyrLeuAsnLeuValThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:57)和與人相對應(yīng)的氨基末端截短形式；以及月豕鼠PYY:TyrProSerLysProGluAlaProGlySerAspAlaSerProGluGluLeuAlaArgTyrTyrAlaSerLeuArgHisTyrLeuAsnLeuValThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:58)和與人相對應(yīng)的氨基末端截短形式。根據(jù)本發(fā)明，PYY肽還包括游離堿，酸加成鹽或金屬鹽，例如該肽的鉀鹽或鈉鹽，或通過例如酰胺化、糖基化、?；⒘蛩峄?、磷酸化、乙?；铜h(huán)化的過程和其它公知的共價修飾方法被修飾的PYY肽。這些肽通常結(jié)合腦和別處的Y受體，尤其是Y2和/或Y5受體。通常，這些肽以不含內(nèi)毒素或無熱原的形式合成，盡管這并不總是必需的。神經(jīng)肽Y激動劑NPY是另一種Y2受體結(jié)合肽。NPY肽包括全長人NPY(l-36):TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:59)以及NPY(l-36)的片段，其在氨基末端已經(jīng);故截短。為有效結(jié)合Y2受體，NPY激動劑應(yīng)至少具有羧基末端的最后11個氨基酸，即包含NPY(26-36)。結(jié)合Y2受體的NPY激動劑的其它實(shí)例為NPY(3-36)、NPY(4-36)、NPY(5-36)、NPY(6-36)、NPY(7-36)、NPY(8-36)、NPY(9-36)、NPY(10-36)、NPY(ll-36)、NPY(12隱36)、NPY(13-36)、NPY(14-36)、NPY(15誦36)、NPY(16-36)、NPY(17-36)、NPY(18-36)、NPY(19-36)、NPY(20-36)、NPY(21-36)、NPY(22-36)、NPY(23陽36)、NPY(24-36)和NPY(25-36)。其它NPY激動劑包括大鼠NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:60)以及如人形式中的從NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；兔NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:61)以及如人形式中的從NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；犬NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:62)以及如人形式中的從NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；豬NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspLeuAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:63)以及如人形式中的從NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；牛NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspLeuAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:64)以及如人形式中的從NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式；綿羊NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyAspAspAlaProAlaGluAspLeuAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGin的氨基末端截短形式；以及豚鼠NPY:TyrProSerLysProAspAsnProGlyGluAspAlaProAlaGluAspMetAlaArgTyrTyrSerAlaLeuArgHisTyrlieAsnLeulieThrArgGinArgTyr(SEQIDNO:66)以及如人形式中的從NPY(3-36)至NPY(26-36)的氨基末端截短形式。根據(jù)本發(fā)明，PYY肽還包括游離堿，酸加成鹽或金屬鹽，例如該肽的鉀鹽或鈉鹽，以及通過例如酰胺化、糖基化、?；⒘蛩峄?、磷酸化、乙酰化和環(huán)化的過程和其它公知的共價修飾方法被修飾的NPY肽。這些肽通常結(jié)合腦和別處的Y受體，尤其是Y2和/或Y5受體。通常，這些肽以不含內(nèi)毒素或無熱原的形式合成，盡管這并不總是必需的。胰多肽胰多肽(PP)和PP激動劑也結(jié)合Y2受體。PP激動劑的實(shí)例是全長人PP(l-36):AlaSerLeuGluProGluTyrProGlyAspAsnAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:67)以及許多PP片段，其在氨基末端截短。為結(jié)合Y2受體，PP激動劑必須具有羧基末端的最后11個氨基酸殘基，PP(26-36)。結(jié)合Y2受體的其它PP的實(shí)例為PP(3-36)、PP(4-36)、PP(5-36)、PP(6-36)、PP(7-36)、PP(8-36)、PP(9-36)、PP(10國36)、PP(ll-36)、PP(12-36)、PP(13畫36)、PP(14-36)、PP(15陽36)、PP(16-36)、PP(17-36)、PP(18-36)、PP(19-36)、PP(20陽36)、PP(21-36)、PP(22-36)、PP(23-36)、PP(24-36)和PP(25陽36)。其它PP激動劑包括綿羊PP:AlaProLeuGluProValTyrProGlyAspAsnAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaAspLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:68)以及如人形式中的從PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；豬PP:AlaProLeuGluProValAspAlaThrProGluMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:69)以及如人形式中的從PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；犬PP:AlaProLeuGluProValTyrProGlyAspAspAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:AlaProLeuGluProValTyrProGlyAspAsnAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr短形式；牛PP:AlaProLeuGluProGluTyrProGlyAspAspAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrAlaAlaGluLeuArgArgTyrlieAsnMetLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:72)以及如人形式中的從PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；大鼠PP:AlaProLeuGluProMetTyrProGlyAspTyrAlaThrHisGluGinArgAlaGinTyrGluThrGinLeuArgArgTyrlieAsnThrLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:73)以及如人形式中的從PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；小鼠PP:AlaProLeuGluProMetTyrProGlyAspTyrAlaThrHisGluGinArgAlaGinTyrGluThrGinLeuArgArgTyrlieAsnThrLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:74)以及如人形式中的從PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式；以及豚鼠PP:AlaProLeuGluProMetTyrProGlyAspTyrAlaThrProGluGinMetAlaGinTyrGluThrGinLeuArgArgTyrlieAsnThrLeuThrArgProArgTyr(SEQIDNO:75)以及如人形式中的從PP(3-36)至PP(26-36)的氨基末端截短形式。根據(jù)本發(fā)明，PP肽還包括游離堿，酸加成鹽或金屬鹽，例如該肽的鉀鹽或鈉鹽，以及通過例如酰胺化、糖基化、?；?、硫酸化、磷酸化、乙?；铜h(huán)化的過程和其它已知的共價修飾方法被修飾的PP肽。這些肽通常結(jié)合腦和別處的Y受體，尤其是Y2和/或Y5受體。通常，這些肽以不含內(nèi)毒素或無熱原的形式合成，盡管這并不總是必需的。肽和蛋白類似物和^f莫擬物(SEQIDNO:勺氨基末端包括在用于本發(fā)明的生物活性肽和蛋白的定義中的為天然或合成的、治療活性或預(yù)防活性的肽(包含2個或更多個共價連接的氨基酸)、蛋白、肽或蛋白片段、肽或蛋白類似物以及活性肽或蛋白的化學(xué)修飾的衍生物或鹽。預(yù)期Y2受體結(jié)合肽的多種有用的類似物和模擬物用于本發(fā)明中，并且能夠根據(jù)已知方法產(chǎn)生并測試其生物活性。經(jīng)常，用于本發(fā)明的Y2受體結(jié)合肽的肽或蛋白或其它生物活性肽或蛋白為容易得到的突變體蛋白(mutein)，該得到是通過天然存在的或天然的(例如野生型、天然存在的突變體或等位變體)肽或蛋白序列中的氨基酸的部分替代、添加或缺失。此外，包括天然肽或蛋白的生物活性片段。這樣的突變體衍生物和片段基本上保留天然肽或蛋白的所需生物活性。在肽或蛋白具有碳水化合物鏈的情況下，由這些碳水化合物種類的變化標(biāo)志的生物活性變體也包括在本發(fā)明之內(nèi)。如本文所用，術(shù)語"保守氨基酸替代"指具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基的通?？苫Q性。例如，一組通?？苫Q的具有脂肪族側(cè)鏈的氨基酸為丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸；一組具有脂肪族-羥基側(cè)鏈的氨基酸為絲氨酸和蘇氨酸；一組具有含酰胺側(cè)鏈的氨基酸為天冬酰胺和谷氨酰胺；一組具有芳香側(cè)鏈的氨基酸為苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；一組具有堿性側(cè)鏈的氨基酸為賴氨酸、精氨酸和組氨酸；以及一組具有含碌u側(cè)鏈的氨基酸為半胱氨酸和蛋氨酸。保守替代的實(shí)例包括諸如異亮氨酸,纈氨酸，亮氨酸或蛋氨酸的非極性(疏水)殘基替代另一個。同樣，本發(fā)明預(yù)期極性(親水)殘基的替代，例如精氨酸和賴氨酸之間、谷氨酰胺和天冬酰胺之間、以及蘇氨酸和絲氨酸之間。此外，還預(yù)期諸如賴氨酸、精氨酸或組氨酸的堿性殘基替代另一個，或諸如天冬氨酸或谷氨酸的酸性氨基酸替代另一個。保守氨基酸替代組的實(shí)例為纈氨酸-亮氨酸-異亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、賴氨酸-精氨酸、丙氨酸-纈氨酸、以及天冬酰胺-谷氨酰胺。通過將肽或蛋白類似物與相應(yīng)的天然肽或蛋白最佳比對，且通過使用確定選定生物活性的適合測定，例如粘附蛋白或受體結(jié)合測定，能夠容易地鑒定用于本發(fā)明方法和組合物的可行的肽和蛋白類似物?？尚械碾暮偷鞍最愃莆锿ǔＥc針對相應(yīng)天然肽或蛋白產(chǎn)生的抗體特異免疫反應(yīng)。藥代動力學(xué)(TK)參數(shù)如本文所用，"Y2受體結(jié)合肽的血漿峰濃度(CmJ"、"Y2受體結(jié)合肽的血漿濃度時間曲線(AUC)下面積"、"在血漿中達(dá)到Y(jié)2受體結(jié)合肽的最大血漿濃度的時間(tn^)，，是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的藥代動力學(xué)參數(shù)。Laursenetal.，Ewr./Emfocn'朋fogy735:309-315,1996。"濃度時間曲線"測量在通過鼻內(nèi)、肌內(nèi)、皮下或其它腸胃外給藥途徑對個體給予Y2受體結(jié)合肽劑量后，相對于時間該個體的血清中Y2受體結(jié)合肽的濃度。"Cmax，，是在對個體給予單次劑量的Y2受體結(jié)合肽后，該個體的血清中Y2受體結(jié)合肽的最大濃度。"t皿"是在對個體給予單次劑量的Y2受體結(jié)合肽后，在該個體的血清中達(dá)到Y(jié)2受體結(jié)合肽的最大濃度的時間。如本文所用，根據(jù)線性梯形法則加上剩余面積計算"Y2受體結(jié)合肽的血漿濃度時間曲線(AUC)下面積"。使用90%概率(第二類誤差8=10%)會檢測到23%的減少或30%的增加。通過達(dá)到最大濃度(CmJ與時間(tmax)的對照，估計"遞送速率"或"吸收速率"。Cm^和tn^均使用非參數(shù)方法分析。肌內(nèi)、皮下、靜脈和鼻內(nèi)Y2受體結(jié)合肽給藥的藥代動力學(xué)的比較通過方差分析(ANOVA)進(jìn)行。對于兩兩比較，使用Bonferroni-Holmes順序方法評價顯著性。通過回歸分析評估3次鼻腔給藥之間的劑量效應(yīng)關(guān)系。P<0.05被認(rèn)為顯著。結(jié)果以平均值+A標(biāo)準(zhǔn)誤給出。盡管吸收促進(jìn)的機(jī)制可以根據(jù)本發(fā)明的不同粘膜遞送增強(qiáng)劑變化，但是在此情況下有用的試劑基本上不有害地影響粘膜組織且將根據(jù)特定Y2受體結(jié)合肽或其它活性或遞送增強(qiáng)劑的物化特征而選擇。在此情況下，提高粘膜組織的穿透或滲透性的遞送增強(qiáng)劑將經(jīng)常導(dǎo)致粘膜的保護(hù)性滲透屏障的某些改變。為了使這樣的遞送增強(qiáng)劑對本發(fā)明有價值，通常期望粘膜滲透性的任何顯著改變在對于藥物遞送的期望持續(xù)時間適合的時限內(nèi)是可逆的。此外，長期使用應(yīng)當(dāng)沒有顯著的、積累的毒性，也不誘導(dǎo)粘膜屏障特性的永久性有害改變。穩(wěn)定性穩(wěn)定本發(fā)明的固體蛋白制劑的一種方法是提高諸如凍干的純化蛋白的物理穩(wěn)定性。這將抑制通過疏水相互作用以及共價途徑的聚集，該聚集隨著蛋白去折疊而增加。在此情況下穩(wěn)定制劑經(jīng)常包括基于聚合物的制劑，例如可生物降解的水凝膠制劑/遞送系統(tǒng)。如上所述，公知水在蛋白結(jié)構(gòu)、功能和穩(wěn)定性中的關(guān)鍵作用。通常，蛋白在除去大量水的固體狀態(tài)下相對穩(wěn)定。然而，固體治療蛋白制劑可能因?yàn)樵诟邼穸认聝Υ娑匣蛟趶木忈尳M合物或裝置遞送期間水合。蛋白的穩(wěn)定性通常隨著水合的增加而下降。水能夠在固體蛋白聚集中起顯著作用，例如，通過增加蛋白柔性導(dǎo)致反應(yīng)性基團(tuán)的增加的可接近性，通過為反應(yīng)物提供可移動相，以及通過在諸如/5清除和水解的若干破壞性過程中作為反應(yīng)物。含有約6%至28%水的蛋白制劑是最不穩(wěn)定的。低于此水平，結(jié)合的水的活動性和蛋白的內(nèi)部運(yùn)動低。高于此水平，水活動性和蛋白運(yùn)動接近完全水合的那些。高至某點(diǎn)時，已在若干系統(tǒng)中觀察到了隨著水合增加而增加的固相聚集易感性。然而，在更高水分含量時，由于稀釋作用觀察到較少的聚集。根據(jù)這些原則，用于粘膜遞送的對抗固態(tài)聚集的穩(wěn)定肽和蛋白的有效方法是控制固體制劑中的水分含量和將制劑中的水活性保持在最佳水平。該水平依賴于蛋白的性質(zhì)，但通常，保持在其"單層"水覆蓋之下的蛋白顯示4支高的固態(tài)穩(wěn)定性。在本發(fā)明內(nèi)提供多種有效控制水分含量以提高蛋白穩(wěn)定性的添加劑、稀釋劑、.基質(zhì)和遞送載體。在此意義中有效作為抗聚集劑的這些試劑和載體材料包括，例如，具有多種功能性的聚合物，例如聚乙二醇、右旋糖酐、二乙胺基乙基葡聚糖和羧曱基纖維素，其顯著提高穩(wěn)定性且減少與其混合或連接的肽和蛋白的固相聚集。某些添加劑還賦予諸如凍干的干燥蛋白顯著的物理穩(wěn)定性。這些添加劑也能夠用于本發(fā)明以不僅在凍干期間還在干燥狀態(tài)儲存期間保護(hù)所述蛋白對抗聚集。本文提供多種另外的制備組分和方法以及具體的制劑添加劑，其生產(chǎn)用于有聚集傾向的肽和蛋白的粘膜遞送的制劑，其中使用穩(wěn)定劑將所述肽或蛋白穩(wěn)定在基本上純的、未聚集形式中。涉及一系列組分和添加劑用于這些方法和制劑。這些穩(wěn)定劑的實(shí)例為環(huán)糊精(CDs),其選擇性結(jié)合多肽的疏水側(cè)鏈。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)這些CDS以顯著抑制聚集的方式結(jié)合蛋白的疏水片。該抑制對于涉及的CD和蛋白均是選擇性的。蛋白聚集的這樣的選擇性抑制在本發(fā)明的鼻內(nèi)遞送方法和組合物內(nèi)提供另外的優(yōu)勢。用于此情況的另外的試劑包括具有由特異阻止肽和蛋白聚集的連接物控制的不同幾何學(xué)的CD二聚物、三聚物和四聚物。但是包括在本發(fā)明內(nèi)的穩(wěn)定劑和方法包括使用肽和肽模擬物選擇性阻止蛋白-蛋白相互作用。一方面，對CD多聚物報道的特異結(jié)合疏水側(cè)鏈通過使用類似地阻止蛋白聚集的肽和肽模擬物被擴(kuò)大到蛋白?？傻玫接糜诎ㄔ诒景l(fā)明的組合物和方法內(nèi)的多種適合的方法和抗聚集劑。蛋白酶抑制劑可以包括在透粘膜制劑中的另一賦形劑為降解性酶抑制劑?？捎糜诒景l(fā)明的粘膜制劑和方法的示例性粘膜粘附聚合物-酶抑制劑復(fù)合物包括但不限于羧曱基纖維素-胃酶抑制劑(具有抗胃蛋白酶活性)、聚(丙烯酸)-Bowman-Birk抑制劑(抗胰凝乳蛋白酶)、聚(丙烯酸)-胰凝乳蛋白酶抑制劑(chymostatin)(抗胰凝乳蛋白酶)、聚(丙烯酸)-彈性蛋白酶抑制劑(elastatinal)(抗彈性蛋白酶)、羧曱基纖維素-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)、聚卡波非-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)、殼聚糖-抗蛋白酶(antipam)(抗胰蛋白酶)、聚(丙烯酸)-桿菌肽(抗氨肽酶N)、殼聚糖-EDTA(抗氨肽酶N,抗羧肽酶A)、殼聚糖-EDTA-抗蛋白酶(抗胰蛋白酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗彈性蛋白酶)。如下文更詳細(xì)描述的，本發(fā)明的某些實(shí)施方案將任選地包括新的殼聚糖衍生物或殼聚糖的化學(xué)修飾形式。一種用于本發(fā)明的這樣的新的衍生物被表示為4]-2-胍基-2-脫氧-D-葡萄糖聚合物(聚-GuD)。合物和方法?？捎糜诒Ｗo(hù)生物活性蛋白和肽的酶抑制劑包括，例如，大豆胰蛋白酶抑制劑、胰胰蛋白酶抑制劑、從馬鈴薯(solanumtuberosumL.)塊莖分離的胰凝乳蛋白酶抑制劑以及胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶抑制劑。可以使用抑制劑的組合或混合物。用于本發(fā)明的另外的蛋白水解酶抑制劑包括卵類粘蛋白-酶、貝酯、cd-抗胰蛋白酶、抑酶肽、amastatin、烏苯美司、嘌呤霉素、桿菌肽、亮抑蛋白酶肽、Q2-巨球蛋白、胃酶抑制劑和卵清或大豆胰蛋白酶抑制劑。這些和其它抑制劑能夠單獨(dú)或聯(lián)合使用。所述一種或多種抑制劑可以被并入或結(jié)合到例如親水聚合物的載體中，該載體被包被在將接觸鼻腔粘膜的劑型的表面，或被并入到所述表面的表面相中，與生物活性劑聯(lián)合或在分別給藥(例如預(yù)給藥的)制劑中。諸如任選并入本發(fā)明組合物中的蛋白水解酶抑制劑的所述抑制劑的量將根據(jù)下列因素變化(a)具體抑制劑的特性，(b)分子中存在的官能團(tuán)的數(shù)目(可以與其反應(yīng)以誘導(dǎo)形成水凝膠的單體的共聚所需的乙烯型去飽和)，以及(c)存在于抑制劑分子中的諸如糖苷類的外源凝集素基團(tuán)的數(shù)目。其還可以依賴于要給藥的具體治療劑。一般而言，酶抑制劑的有用量為制劑(即分開的蛋白酶抑制劑制劑或含有抑制劑和生物活性劑的聯(lián)合制劑)的約0.1mg/ml至約50mg/ml，經(jīng)常從約0.2mg/ml至約25mg/ml，且更經(jīng)常從約0.5mg/ml至5mg/ml。在胰蛋白酶抑制的情況下，適合的抑制劑可以選自例如抑酶肽、BBI、大豆胰蛋白酶抑制劑、雞卵類粘蛋、雞卵類粘蛋白抑制劑、人胰胰蛋白酶抑制劑、曱磺酸卡莫他特(camostatmesilate)、黃酮類化合物抑制劑、抗蛋白酶、亮抑蛋白酶肽、對氨基苯脒鹽、AEBSF、TLCK(曱苯磺酰賴氨酰氯曱酮)、APMSF、DFP、PMSF和聚丙烯酸酯衍生物。在胰凝乳蛋白酶抑制的情況下，適合的抑制劑可以選自，例如抑酶肽、BBI、大豆胰蛋白酶抑制劑、胰凝乳蛋白酶抑制劑、千氧羰基-Pro-Phe-CHO、FK-448、雞卵類粘蛋白抑制劑、糖聯(lián)苯硼酸復(fù)合物、DFP、PMSF、/5-苯丙酸酯和聚丙烯酸酯衍生物。在彈性蛋白酶抑制的情況下，適合的抑制劑可以選自例如彈性蛋白酶抑制劑、曱氧基琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Val-氯曱基酮(SEQIDNO.76)(MPCMK)、BBI、大豆胰蛋白酶抑制劑、雞卵類粘蛋白抑制劑、DFP斗口PMSF。用于本發(fā)明的另外的酶抑制劑選自在效能和毒性水平上不同的廣泛的非蛋白抑制劑。如下文中更詳細(xì)描述的，可以容易地實(shí)施將這些輔助試劑固定到基質(zhì)或其它遞送載體上，或開發(fā)化學(xué)修飾的類似物，以當(dāng)遇到它們時減小或者甚至消除毒性作用。在用于本發(fā)明的候選酶抑制劑的這個廣泛的群中有有機(jī)磷抑制劑，例如二異丙基氟磷酸酯(DFP)和苯曱基石黃酰氟(PMSF),其為絲氨酸蛋白酶(例如胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶)的有效的、不可逆的抑制劑。這些化合物對乙酰膽堿酯酶的額外抑制使得它們在不受控制的遞送設(shè)定中有高毒性。另一候選抑制劑，4-(2-氨乙基)-苯石黃酰氟(AEBSF),具有與DFP和PMSF相當(dāng)?shù)囊种苹钚?，但毒性顯著較低。(4-氨基笨基)-曱烷磺酰氟鹽酸鹽(APMSF)是另一種有效的胰蛋白酶抑制劑，但在不受控制的設(shè)定中有毒。與這些抑制劑相反，4-(4-異丙基胡椒吸附羰基(isopropylpiperadinocarbonyl)苯基1,2,3,4,-四氫-1-萘酸曱磺酸酯(FK448)是低毒性物質(zhì)，代表有效和特異的胰凝乳蛋白酶抑制劑。抑制劑候選物的這類非蛋白組群的其它代表且還顯示低毒性風(fēng)險的為曱磺酸卡莫他特(N,N'-二曱基氨曱酰曱基-p-(p'-胍基-苯曱酰氧基)苯乙酸曱磺酸酯)。用在本發(fā)明的方法和組合物中的另一類型的酶抑制劑是干擾具體治療性化合物的酶促降解的氨基酸和經(jīng)修飾的氨基酸。為在此情況中使用，氨基酸和經(jīng)修飾的氨基酸基本上是無毒的且能夠以低成本生產(chǎn)。然而，由于其低分子大小和良好的溶解性，它們能夠在粘膜環(huán)境中被容易地稀釋和吸收。然而，在適當(dāng)條件下，氨基酸能夠作為蛋白酶的可逆竟?fàn)幮砸种苿?。某些?jīng)修飾的氨基酸能夠顯示強(qiáng)得多的抑制活性。在此情況下期望的經(jīng)修飾的氨基酸被稱為"過渡態(tài)"抑制劑。這些化合物的強(qiáng)抑制活性基于它們在其過渡態(tài)幾何排列中與底物的結(jié)構(gòu)相似性，而它們通常凈皮選擇以對于酶的活性位點(diǎn)具有比底物本身高得多的親和性。過渡態(tài)抑制劑是可逆的、竟?fàn)幮砸种苿?。這類抑制劑的實(shí)例為ce-氨基硼酸衍生物，例如硼-亮氨酸、硼-纈氨酸和硼-丙氨酸。這些衍生物中的硼原子能夠形成四面體硼酸鹽(boronate)離子，其被認(rèn)為模擬了肽在其被氨肽酶水解期間的過渡態(tài)。這些氨基酸衍生物是有效的和可逆的氨肽酶抑制劑，且報道了在酶抑制中硼-亮氨酸比烏苯美司更有效超過100倍且比嘌呤霉素更有效超過1000倍。其強(qiáng)蛋白酶抑制活性已被報道的另一經(jīng)修飾的氨基酸為N-乙酰半胱氨酸，其抑制氨肽酶N的酶活性。該輔助試劑還顯示溶解粘液的特性，該特性能夠被用在本發(fā)明的方法和組合物中以減'j、粘液擴(kuò)散屏障的作用。其它用于本發(fā)明的并列給藥方法和組合物的有用的酶抑制劑可以選自肽和經(jīng)修飾的肽酶抑制劑。這類抑制劑的重要的代表是從地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)得到的環(huán)十二肽，桿菌肽。除了這些類型的肽之外，某些二肽和三肽顯示對某些蛋白酶的弱的、非特異性的抑制活性。根據(jù)氨基酸類推，能夠通過化學(xué)修飾提高它們的抑制活性。例如，膦酸二肽類似物也是對氨肽酶具有強(qiáng)抑制活性的"過渡態(tài)"抑制劑。已經(jīng)報導(dǎo)其被用于穩(wěn)定鼻腔給藥的亮啡肽。過渡態(tài)類似物的另一實(shí)例是經(jīng)修飾的五肽胃酶抑制劑(pepstatin)，其是非常有效的胃蛋白酶抑制劑。通過測試若干合成類似物的抑制活性，胃酶抑制劑的結(jié)構(gòu)分析說明了負(fù)責(zé)所述抑制活性的分子主要結(jié)構(gòu)-功能特征。另一特殊類型的經(jīng)修飾的肽包括在其結(jié)構(gòu)中具有位于末端的醛官能的抑制劑。例如，滿足胰凝乳蛋白酶的已知主要和次要特異性要求的序列千氧羰基-Pro-Phe-CHO被發(fā)現(xiàn)是該靶蛋白酶的有效的可逆抑制劑。其它具有位于末端的醛官能的抑制劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)也是本領(lǐng)域已知的，例如抗蛋白酶、亮抑蛋白酶肽、胰凝乳蛋白酶抑制劑和彈性蛋白酶抑制劑，如同其它已知的可逆經(jīng)修飾的肽抑制劑的結(jié)構(gòu)，例如磷酰二肽、烏苯美司、嘌呤霉素和amastatin。由于它們可相比的高分子量，對于在藥物-載體基質(zhì)中濃縮遞送，多肽蛋白酶抑制劑比較小的化合物更易于控制。在本發(fā)明的制劑和方法中用于蛋白酶抑制的另外的試劑包括使用絡(luò)合劑。這些試劑通過剝奪(或制備或治療組合物)二價陽離子的鼻內(nèi)環(huán)境介導(dǎo)酶抑制，該二價陽離子是許多蛋白酶的輔因子。例如，并列給予的絡(luò)合劑EDTA和DTPA或聯(lián)合組方的輔助試劑在適當(dāng)濃度下足以抑制選定的蛋白酶，由此增強(qiáng)本發(fā)明生物活性劑的鼻內(nèi)遞送。這類抑制劑的其它代表為EGTA、1,10-菲羅啉和羥基奮啉(hydroxychinoline)。此外，由于其螯合二價陽離子的傾向，這些和其它絡(luò)合劑在本發(fā)明中可用作直接的吸收促進(jìn)劑。如本文中其它部分更詳細(xì)描述的，還預(yù)期使用各種聚合物尤其是粘膜粘附聚合物作為本發(fā)明的并列給藥、多次處理和/或聯(lián)合組方方法和組合物中的酶抑制劑。例如，諸如聚丙烯酸和聚卡波非的聚丙烯酸酯衍生物能夠影響多種蛋白酶的活性，包括胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶。這些聚合物的抑制作用也可以基于諸如Ca2+和Zn"的二價陽離子的絡(luò)合。如上文所述還預(yù)期這些聚合物可以作為另外的酶抑制劑的偶聯(lián)伙伴或載體。例如，已經(jīng)開發(fā)了殼聚糖-EDTA偶聯(lián)物且可用于本發(fā)明，其顯示對鋅依賴性蛋白酶的酶活性的強(qiáng)抑制作用。預(yù)期在此情況下在其它酶抑制劑的共價連接后聚合物的粘膜粘附特性不被顯著損害，還預(yù)期這些聚合物作為本發(fā)明中活性劑的遞送載體的一般用途不被減損。相反，由粘膜粘附機(jī)制賦予的遞送載體和粘膜表面之間的距離減小將最小化活性劑的系統(tǒng)前代謝，而共價結(jié)合的酶抑制劑保持集中在藥物遞送部位，最小化不期望的抑制劑的稀釋作用以及由此造成的毒性和其它副作用。以此方式，并列給藥的酶抑制劑的有效量由于排除稀釋作用而能夠被減少?？捎糜诒景l(fā)明的粘膜制劑和方法的示例性粘膜粘附聚合物-酶抑制劑復(fù)合物包括但不限于羧曱基纖維素-胃酶抑制劑(具有抗胃蛋白酶活性)、聚(丙烯酸)-Bowman-Birk抑制劑(抗胰凝乳蛋白酶)、聚(丙烯酸)-胰凝乳蛋白酶抑制劑(抗胰凝乳蛋白酶)、聚(丙烯酸)-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)、羧曱基纖維素-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)、聚卡波非-彈性蛋白酶抑制劑(抗彈性蛋白酶)、殼聚糖-抗蛋白酶(抗胰蛋白酶)、聚丙烯酸-桿菌肽(抗氨肽酶N)、殼聚糖-EDTA(抗氨肽酶N、抗羧肽酶A)、殼聚糖-EDTA-抗蛋白酶(抗胰蛋白酶、抗胰凝乳蛋白酶、抗彈性蛋白酶)。粘膜遞送本發(fā)明的粘膜遞送制劑包含Y2受體結(jié)合肽、類似物及模擬物，它們通常與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體以及任選的其他治療組分一起組合。所述載體必須是"藥學(xué)上可接受的"，意思是與所述制劑的其他組分相容且不引起受治療者的不可接受的有害作用。所述載體在本文上文有所描述，或者為藥理學(xué)領(lǐng)域的技術(shù)人員公知。期望地，所述制劑不應(yīng)包含諸如酶或氧化劑的物質(zhì)，已知待給藥的生物活性劑與這些物質(zhì)不相容。所述制劑可通過藥劑學(xué)領(lǐng)域公知的任何方法來制備。在本發(fā)明的組合物和方法中，本文所公開的Y2受體結(jié)合肽蛋白、類似物和模擬物以及其他生物活性劑可通過多種粘膜給藥方式給藥于受試者，包括通過口腔、直腸、陰道、鼻內(nèi)、肺內(nèi)或經(jīng)皮膚遞送，或通過局部遞送至眼睛、耳朵、皮膚或其他粘膜表面。任選地，本文所^^開的Y2受體結(jié)合肽蛋白、類似物和模擬物以及其他生物活性劑可通過非粘膜途徑協(xié)同地或輔助地給藥，包括通過肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、心房內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、腹膜內(nèi)或胃腸外途徑。在其他可選的實(shí)施方案中，所述生物活性劑可作為例如于合適的液體或固體載體中含有所述生物活性劑的體外組織或器官治療制劑的組分，通過直接暴露于源于哺乳動物受試者的細(xì)胞、組織或器官來進(jìn)行體外給藥。通常以鼻或肺噴霧劑的液體溶液給予本發(fā)明組合物，可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多種方法以噴霧劑形式配藥。第4,511,069號美國專利公開了優(yōu)選的鼻噴霧劑的配藥液體。所述制劑可于多劑量容器中提供，例如第4,511,069號美國專利公開的密封配藥系統(tǒng)中。其他的氣霧劑給藥形式包括例如壓縮空氣噴霧器、噴射噴霧器、超聲噴霧器、以及壓電噴霧器，其遞送溶解或懸浮于藥物溶劑例如水、乙醇或它們的混合物中的生物活性劑。本發(fā)明的鼻和肺噴霧劑溶液通常包含所述藥物或待遞送的藥物，其任選地與諸如非離子型表面活性劑(例如聚山梨醇酯-80)的表面活性劑和一種或多種緩沖液一起配制。在本發(fā)明的某些些實(shí)施方案中，所述鼻噴霧溶液還包括拋射劑。所述鼻噴霧溶液的pH任選在約pH3.0至6.0，優(yōu)選4.5±0.5。用于這些組合物的適合緩沖液如上所述或或?yàn)楸绢I(lǐng)域已知?？商砑悠渌M分以增強(qiáng)或維持化學(xué)穩(wěn)定性，包括防腐劑、表面活性劑、分散劑或氣體。適合的防腐劑包括但不限于苯酚、對羥基苯曱酸曱酯、對羥基苯曱酸酯、間曱酚、硫柳汞、氯丁醇、苯扎氯銨(benzylalkonimumchloride)等。適合的表面活性劑包括但不限于油酸、去水山梨糖醇三油酸酯、聚山醇酯、卵磷脂、磷脂酰膽堿，以及各種長鏈甘油二酯和磷脂。適合的分散劑包括但不限于乙二胺四醋酸等。適合的氣體包括但不限于氮?dú)狻⒑?、氯氟?CFCs)、氫氟碳(HFCs)、二氧化碳、空氣等。在可選的實(shí)施方案中，粘膜制劑作為用于鼻內(nèi)給藥的干粉制劑給藥，所述干粉制劑包含具有合適粒度或在合適粒度范圍內(nèi)的干燥、通常低壓凍干形式的生物活性劑。適于在鼻或肺通道內(nèi)沉積的最小粒度常為約0.5M質(zhì)量中值當(dāng)量空氣動力學(xué)直徑(MMEAD),通常約1/xMMEAD,更典型約2/xMMEAD。適于在鼻道內(nèi)沉積的最大粒度通常為約10pMMEAD,通常約8jLtMMEAD，更典型約4MMEAD。在這些大小范圍內(nèi)的鼻內(nèi)可吸收的粉末可通過多種常規(guī)技術(shù)產(chǎn)生，例如氣流動力磨、噴霧干燥、溶劑沉淀、超臨界液體凝縮等。這些合適MMEAD的干粉可經(jīng)常規(guī)干粉吸入器(DPI)給藥于患者，所述干粉吸入器依賴于肺或鼻吸入時患者的呼吸而將粉末分散成氣霧量?？蛇x地，干粉可經(jīng)氣助式裝置給藥，所述裝置使用外部能源來將粉末分散成氣霧量，例如活塞泵。為了配制本發(fā)明中用于粘膜遞送的組合物，可將所述生物活性劑與各種藥學(xué)上可接受的添加劑以及用于分散所述活性劑的基質(zhì)或載體組合在一起。所需添加劑包括但不限于pH控制劑，例如精氨酸、氫氧化鈉、甘氨酸、鹽酸、檸檬酸等。另外，可包括局部麻醉藥(例如苯甲醇)、等滲劑(例如氯化鈉、甘露醇、山梨糖醇)，吸附抑制劑(例如吐溫-80(Tween80))、增溶劑(例如環(huán)糊精及其衍生物)、穩(wěn)定劑(例如血清白蛋白)以及還原劑(例如谷光甘肽)。當(dāng)用于粘膜遞送的組合物為液體時，通常將制劑的張力(如參照作為單位的0.9%(w/v)生理鹽水溶液的張力所測量的)調(diào)節(jié)至鼻粘膜中給藥部位沒有誘導(dǎo)顯著、不可逆的組織破壞的數(shù)值。通常，將溶液的張力調(diào)節(jié)至約1/3至3、更典型1/2至2且最常用的3/4至1.7的數(shù)值。所述生物活性劑可分散于基質(zhì)或媒介物中，所述基質(zhì)或媒介物可包含具有分散所述活性劑和任何所需添加劑的能力的親水化合物。所述基質(zhì)可選自寬范圍的合適的載體，包括但不限于，多聚羧酸或其鹽、羧酸酐(例如馬來酸酐)與其他單體(例如甲基丙烯酸(曱)酯、丙烯酸等)的共聚物，親水乙烯聚合物例如聚乙酸乙烯酯、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮，纖維素衍生物例如羥曱基纖維素、羥丙基纖維素等，以及天然聚合物例如殼聚糖、膠原、海藻酸鈉、明膠、透明質(zhì)酸及其無毒性金屬鹽。通常，可生物降解的聚合物被選作基質(zhì)或載體，例如聚乳酸、聚(乳酸-羥基乙酸)共聚物、聚羥丁酸、聚(幾丁酸-羥基乙酸)共聚物及其混合物?？蛇x地或另外，合成的脂肪酸酯例如聚甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯等可用作載體。親水聚合物和其他載體可單獨(dú)或組合使用，且可通過部分結(jié)晶、離子鍵合、交聯(lián)等等賦予載體增強(qiáng)的結(jié)構(gòu)完整性。載體可以以多種形式提供，包括，用于直接應(yīng)用于鼻粘膜的液體或粘性溶液、凝膠、糊劑、粉吸收。本發(fā)明的組合物可選地可含有接近生理?xiàng)l件所需的藥學(xué)上可接受的載體物質(zhì)，例如pH調(diào)節(jié)劑和緩沖液，張力調(diào)節(jié)劑、濕潤劑等等。例如，醋酸鈉、乳酸鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鈣、去水山梨醇單月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯等。對于固體組合物，可使用常規(guī)的無毒性藥學(xué)上可接受的載體，其包括例如藥物級甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、碳酸鎂等等。用于進(jìn)行所述生物活性劑給藥的治療組合物還可配制成適于高濃度活性組分的溶液、微乳化液或其他有序的結(jié)構(gòu)。所述載體可為溶劑或分散介質(zhì)，包括例如水、乙醇、多元醇(例如丙三醇、丙二醇、液體聚乙二醇等)及其合適的混合物?？赏ㄟ^例如使用包被物例如卵磷脂、通過維持在可分散制劑情況的所需粒度以及通過使用表面活性劑來維持溶液的適當(dāng);危動寸生。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，所述生物活性劑于時間釋^:制劑中進(jìn)行給藥，例如于包括緩慢釋放聚合物的組合物中。所述活性劑可與防止快速釋放的載體一起配制，例如像聚合物、微嚢包埋的給藥系統(tǒng)或生物粘附凝膠的控釋媒介物。本發(fā)明各種組合物中的所述活性劑的延長遞送可通過在組合物制劑中包括延遲吸收的試劑例如單硬脂酸鋁水凝膠和明膠來實(shí)現(xiàn)。當(dāng)需要所述生物活性劑的控釋制劑時，適用于本發(fā)明的控釋結(jié)合劑包括對于所述活性劑為惰性并能夠摻入所述生物活性劑的任何生物相容的控釋材料。許多種這樣的材料為本領(lǐng)域已知。有用的控釋結(jié)合劑為在其鼻內(nèi)遞送之后于生理?xiàng)l件下(例如經(jīng)粘膜給藥之后在鼻粘膜表面或在體液存在的情況下)緩慢代謝的材料。適合的結(jié)合劑包括但不限于先前在本領(lǐng)域中用于持續(xù)釋放制劑的生物相容的聚合物和共聚物。這些生物相容化合物對周圍組織無毒性并具有惰性，且不引起顯著的不良副作用，例如鼻刺激、免疫反應(yīng)、炎癥等。它們被代謝為也為生物相容且容易從機(jī)體消除的代謝產(chǎn)物。無菌溶液可通過于合適的溶劑中將需要量的所述活性化合物與上文列舉的一種或組合的組分摻合在一起而制備，如需要，之后過濾滅菌。通常，分散劑通過將所述活性化合物摻入含有基礎(chǔ)分散介質(zhì)和來自上文所列的那些的所需其他組分的無菌媒介物而制備。在無菌粉末的情況中，制備方法包括真空干燥和冷凍干燥，其產(chǎn)生所述活性組分加上來自其先前無菌過濾溶液的任何其他所需組分的粉末。微生物作用的預(yù)防可通過各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑來實(shí)現(xiàn)，例如對羥苯曱酸酯、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞等。根據(jù)本發(fā)明的粘膜給藥允許患者的有效的自我給藥治療，條件是設(shè)有足夠的安全措施以控制和監(jiān)控劑量和副作用。粘膜給藥還克服了其他給藥形式的某些缺點(diǎn)，例如注射，它們令人疼痛且使患者暴露于可能的感染并可帶來藥物生物利用度的問題。對于鼻和肺遞送，用于為噴霧劑的治療液體的控釋氣霧劑配藥的系統(tǒng)是公知的。在一個實(shí)施方案中，計量劑量的活性劑通過特別構(gòu)建的機(jī)械泵閥的方式遞送(美國專利號4,511,069)。劑量藥或以重復(fù)給藥方案給藥于受試者(例如通過每小時、每天或每周的重復(fù)給藥方案)。在本申請的上下文中，PYY的治療有效劑量可包括在延長的預(yù)防或治療方案中重復(fù)的劑量，其產(chǎn)生緩解與上文所述的目標(biāo)疾病或狀態(tài)相關(guān)聯(lián)的一種或多種癥狀或可檢測的狀態(tài)的臨床顯著結(jié)果。本申請上下文中有效劑量的確定通?；趧游锬Ｐ脱芯恐笫侨祟惻R床試驗(yàn)，并通過確定顯著減輕受試者的目標(biāo)疾病癥狀或狀態(tài)的發(fā)生或嚴(yán)重性的有效劑量和給藥方案而得以指導(dǎo)。在該方面的適合模型包括例如小鼠、大鼠、豬、貓科動物、非人類靈長類動物以及本領(lǐng)域已知的其他可接受的動物模型對象?？蛇x地，有效劑量可使用體外模型來確定(例如免疫和組織病理測定)。使用這些模型，通常僅需要一般的計算和調(diào)節(jié)以確定合適的濃度和劑量來給予治療有效量的所述生物活性劑(例如引發(fā)所需反應(yīng)的鼻內(nèi)有效、經(jīng)皮有效、靜脈內(nèi)有效或肌內(nèi)有效的量)。生物活性劑的實(shí)際劑量當(dāng)然才艮據(jù)下述因素而不同例如疾病適應(yīng)癥和受試者的特定情況(例如受試者的年齡、尺寸、癥狀的程度、易感因素等)，給藥時間和途徑，同時給予的其他藥物或治療，以及用于引發(fā)受試者的所需活性或生物反應(yīng)的所述生物活性劑的具體藥理學(xué)?？烧{(diào)整給藥方案以提供最佳的預(yù)防或治療反應(yīng)。治療有效量還是這樣一種量即在臨床方面所述生物活性劑的治療有益作用超過任何毒性或有害作用的量。本發(fā)明方法和制劑中的治療有效量的非限制性范圍為0.7)Ltg/kg至約25/ig/kg。為了促進(jìn)體重減輕，鼻內(nèi)劑量以高達(dá)足以促進(jìn)飽食感但低至足以不會誘導(dǎo)任何非期望的副作用例如惡心的劑量給藥。PYY3—36的優(yōu)選鼻內(nèi)劑量為約1/xg-10Mg/kg患者重量，最優(yōu)選約1.5/xg/kg至約6/ig/kg患者重量。在標(biāo)準(zhǔn)劑量中，患者接受40/^g至2000/ig，更優(yōu)選約50至600pg之間，最優(yōu)選100/ig至400/ig?？蛇x地，本發(fā)明方法和制劑中生物活性劑的治療有效量的非限制性范圍在每kg體重約0.001pmol至約100pmol,每kg體重約0.01pmol至約10pmol，每kg體重約0.1pmol至約5pmol,或每kg體重約0.5pmol至約1.0pmol。在該范圍內(nèi)的劑量可通過單次或多次給藥獲得，包括例如每天多次給藥，每天一次或每周一次給藥。按照給藥之間約0.1至24小時、優(yōu)選給藥之間0.5和24.0小時之間的時間安排，本發(fā)明制劑的重復(fù)性鼻內(nèi)給藥維持正常、持續(xù)治療水平的Y2受體結(jié)合肽以最大化臨床利益而最小化過度暴露和副作用的危險?？擅刻鞄状谓o予該劑量以促進(jìn)飽食感，優(yōu)選在餐前半小時或當(dāng)產(chǎn)生饑餓時給予該劑量。目的是粘膜遞送Y2受體結(jié)合肽的這樣一種量即足以提高在個體血漿中的Y2受體結(jié)合肽的濃度以模擬正常情況下在餐后(即在個體完成進(jìn)食之后)產(chǎn)生的Y2受體結(jié)合肽的濃度的量。如果自我進(jìn)行非處方藥劑型給藥以維持靶部位的所需濃度，Y2激動劑例如PYY的劑量可根據(jù)主治醫(yī)師或患者而不同。在可選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了用于Y2受體結(jié)合肽的鼻內(nèi)給藥的組合物和方法，其中所述Y2受體結(jié)合肽化合物通過鼻內(nèi)有效給藥方案重復(fù)給藥，該給藥方案涉及在每天或每周時間中將Y2受體結(jié)合肽多次給予受試者以在延長的給藥過程中維持Y2受體結(jié)合肽的治療有效的增高或降低的脈動水平。所述組合物和方法提供了這樣Y2受體結(jié)合肽化合物即其由受試者在每天1和6次之間以鼻制劑自我給藥以維持在8小時至24小時的延長的給藥期間Y2受體結(jié)合肽的增高和降低的脈動水平。本發(fā)明還包括含有用于預(yù)防和治療哺乳動物受治療者的疾病或其他病癥的上述藥物組合物、活性組分和/或進(jìn)行上述藥物組合物、活性組分39給藥的方法的試劑盒、包裝和多個容器單元。簡言之，這些試劑盒包括這樣的容器或制劑即其含有本發(fā)明公開的配制成用于粘膜給藥的藥物制劑的與粘膜給藥增強(qiáng)劑組合的一種或多種Y2受體結(jié)合肽蛋白、類似物或模擬物和/或其他生物活性劑。本發(fā)明的鼻內(nèi)制劑可使用任何噴霧瓶或注射器進(jìn)行給藥。鼻噴霧劑瓶的一個實(shí)例為"具有安全夾的鼻噴霧泵"(PfeifferSAP#60548)，其遞送O.lml/噴的劑量并具有36.05mm的浸管長度。其可購自美國新澤西州普林斯頓的Pfeiffer。例如PYY的Y2受體結(jié)合肽鼻內(nèi)劑量可為0.1/xg/kg至約1500/xg/kg。當(dāng)作為鼻內(nèi)噴霧劑給藥時，優(yōu)選噴霧劑的粒度為10-100gm(微米)大小，優(yōu)選20-100/mi大小。為了促進(jìn)體重減輕，Y2受體結(jié)合肽PYY以高達(dá)足以促進(jìn)飽食感但低至足以不會誘導(dǎo)諸如惡心的非期望的副作用劑量進(jìn)行給藥。諸如PYY(3-36)的Y2受體結(jié)合肽優(yōu)選鼻內(nèi)劑量為約3/xg-10/xg/kg患者體重，最優(yōu)選約6/xg/kg患者體重。在標(biāo)準(zhǔn)劑量，患者接受50iLig至800Aig,更優(yōu)選約100gg至400Mg，最優(yōu)選150gg至約200/ig。諸如PYY(3-36)的Y2受體結(jié)合肽優(yōu)選在進(jìn)食前至少IO分鐘至1小時但不超過進(jìn)食前約12至24小時進(jìn)行給藥以防止惡心。優(yōu)選每天至少一次每餐前給藥于患者，直到患者減輕所需量的體重。然后患者接受至少每周一次優(yōu)選每天一次的維持劑量以維持體重減輕。如從下述實(shí)施例的數(shù)據(jù)所顯示的，當(dāng)使用本發(fā)明的Y2受體結(jié)合肽制劑鼻內(nèi)給藥于人時，發(fā)現(xiàn)PYY(3-36)降低食欲。實(shí)施例還顯示了可使用本發(fā)明PY2受體結(jié)合肽制劑通過鼻內(nèi)給藥途徑達(dá)到PYY肽的首次餐后生理水平，其中PYY(3-36)是Y2受體結(jié)合肽。PYY的氣霧劑鼻給藥我們發(fā)現(xiàn)在上述制劑中的PYY可使用鼻噴霧劑或氣霧劑進(jìn)行鼻內(nèi)給藥。這是令人驚訝的，因?yàn)樵谥苽鋰婌F劑或氣霧劑的過程中許多蛋白質(zhì)和肽顯示由于致動器產(chǎn)生的機(jī)械力而被剪切或變性，在本領(lǐng)域中，下述定義是有用的。氣霧劑——在壓力下包裝并含有當(dāng)適合的閥系統(tǒng)激活時釋放的治療活性劑的制品。計量氣霧劑——包括計量劑量閥的加壓劑型，其允許當(dāng)每次激活時進(jìn)行均一量噴霧劑的遞送。粉末氣霧劑——在壓力下包裝并含有當(dāng)適合的閥系統(tǒng)激活時釋放的粉末形式的治療活性劑的制品。噴霧氣霧劑——利用壓縮氣體作為拋射劑來提供排出作為濕噴霧劑的制品所需的力的氣霧劑制品，其通常可適用于于水溶劑中的藥劑的溶液。噴霧劑——由空氣或氣流噴射而細(xì)化的液體。鼻噴霧藥物制品含有在非加壓分散劑中的賦形劑溶液或混合物中溶解或懸浮的治療有效組分。計量噴霧劑——非加壓劑型，其包括允許當(dāng)每次激活時分配特定量噴霧劑的閥。懸浮噴霧劑——含有分散于液體媒介物中且以小滴形式或作為細(xì)化的固體的固體顆粒的液體制劑。由計量鼻噴霧泵作為藥物遞送裝置("DDD")噴放的噴霧劑的流體動力學(xué)特征。噴霧特征是食品和藥品管理局("FDA")批準(zhǔn)的對新型和現(xiàn)有的鼻噴霧泵的研究和開發(fā)、質(zhì)量保證以及穩(wěn)定性檢測規(guī)程所必需的法規(guī)要求的一個不可或在夾的部分。已發(fā)現(xiàn)噴霧劑幾何學(xué)的所有特征是鼻噴霧泵總性能最好的指示。特別地，已發(fā)現(xiàn)當(dāng)噴霧劑從所述裝置噴出時的分散角(煙流(plume)幾何學(xué))的測量；噴霧劑的橫截面橢圓率、均勻度以及顆粒/小滴分布(噴流模式(spraypattern));以及所發(fā)展噴霧的時間進(jìn)展是噴霧泵的特征中最具代表性的性能分量。在質(zhì)量保證和穩(wěn)定性的檢測中，煙流幾何學(xué)和噴流模式測量是用于證實(shí)與鼻噴霧泵的批準(zhǔn)數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)的一致性和相符性的關(guān)鍵鑒定標(biāo)識。下列定義用于噴霧的性質(zhì)。煙流高度——從致動器頂端至煙流角因?yàn)榫€流的破壞而變得非線性的點(diǎn)的測量值。基于對數(shù)字圖像的目測，且為了建立與噴流模式的最遠(yuǎn)測量點(diǎn)一致的寬度測量點(diǎn)，為該研究限定了30mm的高度。主軸-能在越過COMw的擬合噴流模式中以基本單位(mm)畫出的最長帶。短軸-能在越過COMw的擬合噴流模式中以基本單位(mm)畫出的最小帶。橢圓率-主軸對短軸的比例。D10-樣品總液體體積的10%由較小直徑(ium)的小滴組成的小滴直徑，。D50-樣品總液體體積的50%由較小直徑(jLim)的小滴組成的小滴直徑，也稱作質(zhì)量中值直徑。D90_樣品總液體體積的90。/。由較小直徑()Lim)的小滴組成的小滴直徑?？缇郷分布寬度的測量，值越小，分布越窄。如下計算跨距(D9°D5。D1。)。%RSD-相對標(biāo)準(zhǔn)差百分?jǐn)?shù)(標(biāo)準(zhǔn)差除以系列平均值并乘以100),也稱作。/。CV。鼻噴霧裝置包括放置PYY制劑的瓶和致動器，所述致導(dǎo)器當(dāng)致動或工作時驅(qū)使PYY的噴霧煙流通過所述致動器從噴霧劑瓶噴出。所述瓶可為包含I型硼硅玻璃的光滑玻璃瓶。所述瓶可具有螺紋頂部和凹底。瓶帽可為三葉紋(trifoil-lined)的聚丙烯。三葉(Tri-Foil)WP包括由0.00067"白色LDPE結(jié)合至0.0035"鋁箔然后結(jié)合LDPE膜/泡沫/膜共擠出物的0.0005"的透明聚脂。該內(nèi)襯的所有組分為GRAS。瓶帽可包含聚丙烯并帶合適的螺紋用于所需的小瓶。實(shí)施例實(shí)施例1:各種PYY3-36制劑的體外組織模型評價評價在各種賦形劑(EDTA、聚山梨醇酯80(吐溫80)、油酸、山梨糖醇以及乙醇)存在情況下PYY3—36的體外滲透性。使用10mM檸檬酸鹽緩沖液(檸檬酸/檸檬酸鈉)將制劑調(diào)節(jié)至pH4。所檢測的多種制劑示于表1。所有樣品透明且無色。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>濾器上匯合生長的嵌入物提供。當(dāng)收集時，在使用前將薄膜在lml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(無苯酚紅和無氫化皮質(zhì)酮的達(dá)爾伯克氏改良伊格爾氏培養(yǎng)基(DMEM))中于37。C/5%002培養(yǎng)24-48小時。給嵌入物提供養(yǎng)分以進(jìn)行每天的收集。將各組織嵌入物放入含有l(wèi)mlMatTek基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各孔中。在嵌入物的頂面，根據(jù)表l中的研究設(shè)計應(yīng)用50/xl的檢測制劑，并將樣品放于37。C振動器(100rpm)上1小時。將下面的培養(yǎng)基樣品儲存于4°C達(dá)48小時以進(jìn)行乳酸脫氬酶(LDH,細(xì)胞毒性)和樣品滲透性(酶免疫測定(EIA)評價。在1小時的溫育之前和之后測量經(jīng)上皮電阻(TER)。在溫育之后，經(jīng)線粒體脫氫酶(MDH)測定分析細(xì)胞嵌入物的細(xì)胞活力。1.跨單細(xì)胞層的電阻使用利用電極導(dǎo)線連接于帶有EVOM上皮伏歐表(WorldPrecisionInstruments,Sarasota,FL)的Endohm-12組織電阻測量腔實(shí)施TER的測量。在檢查校準(zhǔn)之前于斷電的MatTek培養(yǎng)基中平衡電極和組織培養(yǎng)空白嵌入物至少20分鐘。使用于Endohm組織腔中的1.5ml培養(yǎng)基和空白嵌入物中的300pd培養(yǎng)基測量背景電阻。調(diào)整頂部電極使得其接近但不接觸嵌入膜的頂面?？瞻浊度胛锏谋尘半娮铻榧s5-20歐姆。對于各TER測定，將300^1MatTek培養(yǎng)基添加至嵌入物，接著放入Endohm腔。電阻表示為(所測量的電阻-空白)X0.6cm2。結(jié)果顯示陰性對照和培養(yǎng)基對照在1小時暴露之后不表現(xiàn)TER的任何顯著變化。Triton對照顯示TER基本上完全降低。含有EDTA和乙醇的樣品表現(xiàn)TER降低，這與緊密連接的開放一致。2.細(xì)胞活力使用MTT測定(MTT-IOO，MatTek試劑盒)評價細(xì)胞活力。將融化和稀釋的MTT濃縮液用移液管(300Ad)移至24孔培養(yǎng)板。輕柔地干燥組織嵌入物，將其放入培養(yǎng)板孔中，并于37。C溫育3小時。在溫育之后，從培養(yǎng)板取出各嵌入物，輕柔吸印，并放入24孔提取培養(yǎng)板。然后將細(xì)胞培嵌入物浸于每孔2.0ml的提取劑溶液中(完全覆蓋樣品)。覆蓋并密封提取培養(yǎng)板以減輕提取劑的蒸發(fā)。室溫黑暗中過夜溫育之后，將各嵌入物中的液體倒回至從中取出它的孔，并丟棄嵌入物。將提耳又劑溶液(200All,以至少雙份)連同提取空白用移液管移至96孔微量滴定板。在讀板機(jī)上于550nm測量樣品的光密度。所有樣品和陰性對照和培養(yǎng)基對照表現(xiàn)可接受的細(xì)胞活力，即與培養(yǎng)基對照相比至少80%。如預(yù)期的，TritonX對照顯著降低細(xì)胞活力。3.細(xì)力包毒性通過使用CytoTox96纟田月包毒性測定試劑盒(PromegaCorp.,Madison,WT)測量乳酸脫氬酶(LDH)從細(xì)胞的喪失來測定細(xì)胞死亡的數(shù)量(細(xì)胞毒性)。評價頂部培養(yǎng)基的LDH分析。考慮到初始的樣品裝載體積，將合適量的培養(yǎng)基順序添加至頂面至總共300AtL。振動嵌入物5分鐘，然后取出150/xL頂部培養(yǎng)基，并將其分配至eppendorf管中，且在10000rpm離心3分鐘。取出2/xL體積的上清液，并將其添加至96孔培養(yǎng)板中。48/^L體積的培養(yǎng)基用于稀釋上清液以制備25x稀釋液。對于基底外側(cè)培養(yǎng)基的LDH分析，將50/xL樣品裝入96孔測定培養(yǎng)板中。新鮮的無細(xì)胞培養(yǎng)基用作空白。將50/xL基質(zhì)溶液添加至各孔并于室溫黑暗中溫育培養(yǎng)板30分鐘。在溫育之后，將50/xL終止液添加至各孔并在光密度讀板機(jī)上于490nm讀板。通過基底外側(cè)LDH測定，所有樣品和陰性對照以及培養(yǎng)基對照均具有較低的細(xì)胞毒性，即與培養(yǎng)基對照相比不超過20%。如預(yù)期的，TritonX對照具有4交高的細(xì)胞毒性。4.細(xì)胞滲透性PYY3.36EIA^式劑盒購自PhoenixPharmaceuticals,Inc.(Belmont,CA),并按照所提供的說明書進(jìn)行測定。滲透性結(jié)果(圖l)顯示10mMEDTA或1-2%乙醇提供顯著的％滲透性，即在1小時后滲透約1.5-2%的藥物。相比之下，觀察到陰性對照(等滲的，非滲透性增強(qiáng)劑)極低的％滲透性，例如<0.3%。觀察到樣品ll(lmg/mLEDTA,1%乙醇)和12(10mg/mLEDTA,2%乙醇)具有最大的％滲透性。EDTA和乙醇組合提供了與緊密連接的開放一致的TER的降低并增加PYY3—36滲透性，具有可接受的低細(xì)胞毒性和高細(xì)胞活力。實(shí)施例2各種PYY3-36制劑的體外評價目的是為了進(jìn)一步檢測乙醇、EDTA以及吐溫80作為PYY3.36的滲透性增強(qiáng)劑的作用。使用10mM檸檬酸鹽緩沖液(檸檬酸/檸檬酸鈉)將制劑調(diào)節(jié)至pH4。實(shí)施例2中檢測的各種制劑示于表2。除了這些樣品外，還包括陰性等滲對照、細(xì)胞培養(yǎng)基對照以及Triton-X對照。表2:實(shí)施例2中檢測的制劑的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>鹽水等滲鹽水檢測了表2中的各樣品的TER、MTT、LDH以及PYY3_36滲透性，如實(shí)施例1所述實(shí)施各種測定方法。在1小時的暴露之后，陰性對照和培養(yǎng)基對照不表現(xiàn)TER的任何顯著變化。Triton對照顯示TER基本上完全降低。所有纟企測的樣品顯示TER降低。這些數(shù)據(jù)說明EDTA、乙醇、吐溫80以及這些賦形劑的組合物降低TER，這與緊密連接的開放一致。通過基底外側(cè)LDH測定，所有樣品和陰性對照以及培養(yǎng)基對照具有較低的細(xì)胞毒性，即與培養(yǎng)基對照相比不超過20%毒性。TritonX對照具有較高的細(xì)胞毒性。百分比滲透性的數(shù)據(jù)示于圖2。陰性對照具有極低的滲透性，這與實(shí)施例1一致。這三種GRAS樣品均表現(xiàn)在檢測條件下顯著高的滲透性。這些數(shù)據(jù)還證實(shí)EDTA、乙醇、吐溫80以及這些賦形劑的組合物降低TER并提高PYY3-36滲透性，具有可接受的低細(xì)胞毒性。實(shí)施例3:各種PYY3-36制劑的體外組織模型評價該研究的目的是為了進(jìn)一步檢測乙醇、EDTA以及吐溫80作為PYY3.36的潛在滲透性增強(qiáng)劑的作用。評價在各種賦形劑(EDTA、乙醇、吐溫80、DDPC以及曱基-j8-環(huán)糊精)存在情況下PYY3.36的體外滲透性。使用10mM檸檬酸鹽緩沖液(檸檬酸/檸檬酸鈉)將制劑調(diào)節(jié)至pH4.2-4.3。實(shí)施例3中檢測的各種制劑示于表3。除了這些樣品外，還包括陰性等滲對照、細(xì)胞培養(yǎng)基對照以及Triton-X對照。樣品3-1含有曱基-Z5-環(huán)糊精(M-)3-CD)、DDPC和EDTA的組合物，先前顯示該組合物提供PYY3_36增強(qiáng)的滲透性(第10/768,288號美國專利申請[公布號20040209807])。檢測了表3中各樣品的TER、MTT、LDH以及PYY3-36滲透性，如實(shí)施例1所述實(shí)施各測定的方法。表3:實(shí)施例3中所檢測的制劑的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>所有樣品透明且無色。在1小時的暴露之后，培養(yǎng)基和陰性對照對照不表現(xiàn)TER的任何顯著變化。樣品3-1至3-13均表現(xiàn)相對于培養(yǎng)基對照的TER的顯著降低，表明EDTA、乙醇、吐溫80以及這些賦形劑的組合物降低TER。數(shù)據(jù)還顯示含有曱基-/3-環(huán)糊精、EDTA以及DDPC的制劑降低TER。百分比滲透性的數(shù)據(jù)(圖3)顯示3-1至3-13的所有樣品表現(xiàn)較高的％滲透性。陰性對照具有極低的％滲透性，這與實(shí)施例l一致。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)EDTA、乙醇、吐溫80及其組合物提供了TER的降低，與緊密連接的開放一致且增加PYYw6滲透性。這些制劑獲得了相當(dāng)于或優(yōu)于先前所述含有EDTA、DDPC以及曱基-iS-環(huán)糊精的制劑的滲透性(第10/768,288號美國專利申請)。實(shí)施例4:各種PYY3-36制劑的體外組織模型評價該研究的目的是為了進(jìn)一步檢測乙醇、EDTA以及吐溫80作為PYY3.36的潛在滲透性增強(qiáng)劑的作用。在該實(shí)施例中，對不同的緩沖液(檸檬酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液以及谷氨酸鹽緩沖液)，以及不同的防腐劑(氯丁醇和苯扎氯銨)進(jìn)行了試驗(yàn)。將所有制劑的數(shù)據(jù)與含有曱基-P-環(huán)糊精、DDPC以及EDTA的制劑進(jìn)行比較。評價在各種賦形劑(EDTA、乙醇、吐溫80、DDPC以及曱基-/3-環(huán)糊精)存在情況下PYY3—36的體外滲透性。使用lOmM檸檬酸鹽緩沖液(檸檬酸/檸檬酸鈉)將制劑調(diào)節(jié)至pH4。所;險測的各種制劑示于表4。除了這些樣品外，還包括陰性等滲對照、細(xì)胞培養(yǎng)基對照以及Triton-X對照。樣品4-1包含曱基-JS-環(huán)糊精(M-/3-CD)、DDPC以及EDTA的制劑，先前顯示提供PYYw6增強(qiáng)的滲透性(美國專利申請第10/768,288號)。表4:實(shí)施例4中所檢測的制劑的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>檢測了表4中的各種樣品的TER、MTT、LDH以及PYY3-36滲透性，如實(shí)施例1所述實(shí)施各測定的方法。在表4中，"BZK"=0.2mg/mL苯扎氯銨，"CB"-5mg/mL氯丁醇。TritonX對照顯示TER基本上完全的降低。陰性對照和培養(yǎng)基對照顯示TER無變化。所有檢測樣品表現(xiàn)相對于陰性對照的TER的顯著降低。數(shù)據(jù)顯示在PYY3.36制劑中乙酸鹽和谷氨酸鹽緩沖液可取代檸檬酸鹽緩沖液。數(shù)據(jù)還支持可將防腐劑例如氯化苯曱烴銨和氯丁醇添加至PYY3-36制劑。滲透性數(shù)據(jù)(圖4)顯示所有樣品較高的％滲透性，且4-4、4-6以及4-9表現(xiàn)最高的％滲透性。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步證實(shí)EDTA、乙醇、吐溫80及其組合物的滲透性增強(qiáng)作用。乙酸鹽和谷氨酸鹽緩沖液取代檸檬酸鹽緩沖液而不喪失滲透性。另外，將苯扎氯銨和氯丁醇成功地作為防腐劑添加。這些數(shù)據(jù)證實(shí)EDTA、乙醇以及吐溫80制劑可實(shí)現(xiàn)相當(dāng)于或優(yōu)于先前所述含有EDTA、DDPC以及曱基-/3-環(huán)糊精的制劑的滲透性。在PYY3-36制劑中，乙酸鹽和谷氨酸鹽緩沖液可取代檸檬酸鹽緩沖液，且可將防腐劑例如苯扎氯銨和氯丁醇添加至PYY3.36制劑中。實(shí)施例5包含乙酸鹽緩沖液、乙醇和EDTA的鼻內(nèi)PYYn制劑的藥代動力學(xué)試驗(yàn)在哺乳動物中進(jìn)行不同鼻內(nèi)制劑的PYY3—36的藥代動力學(xué)試驗(yàn)。所述制劑包括作為滲透增強(qiáng)劑的EDTA和乙醇(乙酸鹽緩沖液；pH4.0)。為進(jìn)行對比，還在鼻內(nèi)給藥包含作為滲透增強(qiáng)劑的曱基-/3-環(huán)糊精、DDPC和EDTA的制劑(先前顯示賦形劑的這種組合造成PYY3.36滲透的增強(qiáng)(美國專利申請?zhí)?0/768,288)。此外，給藥不含增強(qiáng)劑的制劑，以便闡明滲透增強(qiáng)劑改進(jìn)藥物輸送的效能。實(shí)施例5中檢測的不同制劑描述于表5。樣品5-l包含作為增強(qiáng)劑的甲基-i3-環(huán)糊精、DDPC和EDTA和作為防腐劑的CB，鼻內(nèi)給藥5-l用于對比。樣品5-2,5-3和5-4包含1或者10mg/mLEDTA和0、10或者20mg/mL乙醇，并且包含BZK作為防腐劑。在緩沖液中配制樣品5-5，不含滲透增強(qiáng)劑。表5:實(shí)施例5中檢測制劑的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>新西蘭白兔中進(jìn)行的藥代動力學(xué)(PK)鑒定遵守實(shí)驗(yàn)動物管理原則(NIH出版86-23,1985年修訂)。在給藥前和鼻內(nèi)給藥后2.5、5、10、15、30、45、60和120分鐘，/人邊緣耳,爭脈提取血液樣品。通過EIA測定血漿中PYY3.36的濃度(FoerderC.，等人，gw朋故a〃veZ)e^7w'"加'owyyj-36尸Ax附aWai//o/wmi/w6>awa_y,AAPS2004NationalBiotechnologyConference,Boston,MA，May2004)。采用非房室才莫型方法利用WinNonlin庫i^牛(PharsightCorporation,4.0片反本，MountainView,CA)進(jìn)行PK計算。數(shù)據(jù)表示為平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差。PK結(jié)果概述于表6。對所有樣品來說，鼻內(nèi)途徑的T^x在大約26-43之間。樣品5-l具有最高的C,和AUC，相對于沒有增強(qiáng)劑的情況(樣品5-5),后者增加27倍。與樣品5-1相比，樣品5-2和5-3的Q^顯示更低的標(biāo)準(zhǔn)差。并且，與樣品5-1相比，樣品5-2的Aucto顯示更低的標(biāo)準(zhǔn)差。樣品5-2顯示與樣品5-1幾乎相同的Auclast。表6:實(shí)施例5中檢測制劑的PK概述<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>與無增強(qiáng)劑相比，所有包含EDTA和/或乙醇組合(樣品5-2，5-3和5-4)的組顯示基本上增強(qiáng)的滲透，達(dá)到大約20-到25-倍。實(shí)施例6:在無任何其他賦形劑存在的條件下，不同緩沖液對PYY;i熱應(yīng)力穩(wěn)定性的影響按表7所列制備制劑。被測緩沖液包括檸檬酸鹽、酒石酸鹽、乙酸鹽和谷氨酸鹽。在所有情況下，PYYw6為1mg/mL,pH為5.0。l-cc棕色非硅烷化小瓶裝滿待測制劑，每瓶裝lmL,小瓶用三葉紋(trifoil-lined)蓋封口。小瓶購自SGDGlassInc.(NewYork,NY)。這些小瓶具有螺-菱蓋和凹底(U-形結(jié)構(gòu))。小并瓦由I型硼^圭玻璃組成。蓋子購自O(shè)'BerkCompany(Union,NJ)，由聚丙烯組成，被合適的螺紋化用于預(yù)定的小瓶。蓋子是三葉紋的。Tri-FoilWP由0.0005"透明聚酯組成，所述聚酯由0.00067"白色LDPE結(jié)合到0.0035"鋁箔然后結(jié)合到LDPE膜/泡沫/膜共擠塑物。所有襯墊的組件都是GRAS(公認(rèn)為安全的)。小瓶儲存于25、40和50°C,在不同時間點(diǎn)通過HPLC檢測化學(xué)穩(wěn)定性，表現(xiàn)為肽回收率(相對于1=0時數(shù)據(jù)測定的％肽)。在45。C，HPLC方法使用5-/miC18柱(Supelco,BIOWide-pore，250x4.6匪)，使用流動相組分為0.1Q/。三氟乙酸(A)和溶于乙腈的0.08。/。三氟乙酸(B),在27%A/73%B中等度洗脫。在21Onm利用UV進(jìn)行片企測。通過外標(biāo)法進(jìn)行定量。表7:實(shí)施例6中評價的制劑組#PYY3-36(mg/mL)檸檬酸鹽緩沖液(mM)酒石酸鹽緩沖液(mM)乙酸鹽緩沖液(mM)谷氨酸鹽緩沖液(mM)pH1-1110一-—5.0l畫21一10——5.01-31-一10一5.01-41一-一105.0HPLC數(shù)據(jù)顯示利用乙酸鹽和谷氨酸鹽緩沖液達(dá)到最佳穩(wěn)定性(不同條件保存后最高的回收率)。肽回收率結(jié)果顯示于圖5A、5B和5C,分別對應(yīng)于25、40和5(TC。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是啟示性的，因?yàn)槟切┍４鍼YY3—36穩(wěn)定性最好的緩沖液是一價緩沖液，而那些未提高PYY3-36穩(wěn)定性的是多價緩沖液。一價緩沖液可能在熱應(yīng)力條件下增強(qiáng)PYY3—36穩(wěn)定性。實(shí)施例7:在作為張力劑(Tonicifier)的山梨醇存在條件下，緩沖液類型和pH對熱應(yīng)力穩(wěn)定性的影響按表8所列制備制劑。被測緩沖液是檸檬酸鹽、乙酸鹽和谷氨酸鹽。在所有情況下，PYY3—36為2mg/mL，存在的山梨醇^是供225mOsm的重量克分子滲透壓濃度。pH從3.5到5.0。然后將這些制劑裝入l-cc棕色非硅烷化小瓶，每瓶裝lmL,小瓶用三葉紋蓋封口。保存樣品，按實(shí)施例6所述測定回收率。表8:實(shí)施例7中評1介的制劑<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>HPLC數(shù)據(jù)顯示鑒定的對于溫度最佳熱穩(wěn)定性的制劑是乙酸鹽和谷氨酸鹽緩沖液以及無緩沖液的制劑。肽回收率結(jié)果如圖6A,6B,6C和6D所示，其緩沖液分別是檸檬酸鹽、乙酸鹽、谷氨酸鹽或者無緩沖液。和實(shí)施例6相同，最佳性能制劑是那些包含一價緩沖液(即，乙酸鹽或者谷氨酸鹽)或者不包含超過鑒定的pH范圍和溫度的緩沖液的制劑。那些包含多價緩沖液(即，檸檬酸鹽)的制劑未達(dá)到最佳性能。此外，維持PYY3-36最適穩(wěn)定性的pH表現(xiàn)為pH3.5-pH4.5,與使用的緩沖液無關(guān)。實(shí)施例8:不同PYYw6制劑的熱穩(wěn)定性和霧化應(yīng)力穩(wěn)定性本研究的目標(biāo)是檢驗(yàn)PYY3—36制劑的熱和霧化應(yīng)力的穩(wěn)定性，所述PYY3.36制劑包含作為PYY3.36潛在滲透增強(qiáng)劑的乙醇、EDTA和Tween-80(吐溫80)。在該實(shí)施例中，添加不同的緩沖液(乙酸鹽緩沖液和谷氨酸鹽緩沖液)，以及用于多次使用制劑的防腐劑(苯扎氯銨)。在3mL非硅烷化棕色玻璃瓶裝入溶液約3.9mL。小瓶加接lOOjiiL致動器。致動器購自PfeifferofAmerica(Princeton,NJ)。'J、瓶通過致動虧1發(fā)直到實(shí)現(xiàn)第一次完全噴霧。在觀察到第一次完全噴霧后，進(jìn)行另外兩次致動以確認(rèn)完全的引發(fā)。在引發(fā)完成后，下一次噴射被認(rèn)作本研究的第一次噴射。所有致動都是手動進(jìn)行。在全部噴霧間小瓶保存于30。C/65。/。相對濕度(在白天以及夜間)。從容器取出后，小瓶進(jìn)行噴射(5分鐘內(nèi))，然后放回容器。在全部噴霧間間隔最少1小時。小瓶每天噴射3次(TID)，共10天。按實(shí)施例1所述進(jìn)行HPLC方法。肽穩(wěn)定性的數(shù)據(jù)表示為百分比回收(相對于最初t=0時天然肽的濃度)和百分比純度(天然肽的峰面積除以所有肽相關(guān)的峰面積)。在暴露于升高溫度和每日3次噴霧的霧化應(yīng)力的第0天、5天和10天，測定肽含量的HPLC數(shù)據(jù)。實(shí)施例8中檢測的不同制劑描述于表9。所有樣品包含6mg/mLPYY3-36。樣品包含10mg/mLEDTA，20mg/mL乙醇，苯扎氯銨(BZK)(作為用于多次使用的代表性防腐劑)，和0或者1mg/mLTween80。樣品3-1和3-2包含pH4.3的10mM乙酸鹽緩沖液(乙酸/乙酸鈉緩沖系統(tǒng))。樣品3-3包含pH4.3的10mM谷氨酸鹽緩沖液(谷氨酸/谷氨酸鈉緩沖系54統(tǒng))。表9:實(shí)施例8中被測制劑的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>在暴露于升高溫度和每日3次噴霧的霧化應(yīng)力的第0天、5天和10天的肽含量的HPLC數(shù)據(jù)顯示于圖7。數(shù)據(jù)顯示在含有10mg/mLEDTA和20mg/mL乙醇的制劑中，1mg/mLTween-80(3-1，實(shí)心三角形)的存在相對于不含Tween-80(3-2,空心正方形)的相同制劑具有穩(wěn)定效應(yīng)。相對于乙酸鹽緩沖液(3-2，空心正方形)，谷氨酸鹽緩沖液(3-3，空心菱形)提供更高的穩(wěn)定性。PYY3.36純度的數(shù)據(jù)顯示溶液中殘留的主要種類具有與天然PYY3—36相同的HPLC保留時間，與聚集導(dǎo)致的肽損失一致。沉淀主要由PYY3—36單體組成，顯示熱和霧化應(yīng)力下的PYY3—36損失源于疏水性(例如，非共價的)聚集。當(dāng)暴露于高溫和每日3次噴射的應(yīng)力的組合時，PYY3—36制劑可能遭受疏水性的，例如，非共價的，聚集。在一定條件下，Tween-80的存在改善這種狀況。同時，數(shù)據(jù)顯示對于穩(wěn)定性來說，谷氨酸鹽相對于乙酸鹽可能是優(yōu)選的緩沖系統(tǒng)。實(shí)施例9:不同PYYw、制劑的熱穩(wěn)定性和霧化應(yīng)力穩(wěn)定性本研究的目標(biāo)是檢驗(yàn)PYY3—36制劑抗熱和霧化應(yīng)力的穩(wěn)定性，所述PYY3.36制劑包含作為PYYw6潛在滲透增強(qiáng)劑的乙醇、EDTA和Tween80。在該實(shí)施例中，；險測從pH3.8到4.4的乙酸鹽緩沖液，氯丁醇用作多次使用的防腐劑。該實(shí)施例中使用的方法與上面實(shí)施例8所述的相同。與實(shí)施例8相同，此處所有噴射之間小瓶保存于30。C/65。/。相對濕度(在白天及夜間)，小瓶每天噴霧3次(TID),共10天，在噴霧的第0、5和10天使用HPLC確定噴霧(當(dāng)天的最后噴射)中的PYY3—36含量。該實(shí)施例中4企測的不同制劑描述于表10。所有樣品包含6mg/mLPYY3—36，10mM乙酸鹽緩沖液(乙酸/乙酸鈉緩沖系統(tǒng))和5mg/mL氯代丁醇(CB)。樣品4-1到4-8包含10mg/mLEDTA，20mg/mL乙醇，和0或者1mg/mLTween80，pH在3.8到4.4之間。為進(jìn)行對比，最后的樣品，4-9，包含45mg/mL曱基-|3-環(huán)糊精，1mg/mLDDPC，和1mg/mLEDTA，pH4.0。后一制劑先前已有記載(US專利申請?zhí)?0/768288，Quay等人."CompositionsandmethodsforenhancedmucosaldeliveryofY2receptor-bindingpeptidesandmethodsfortreatingandpreventingobesity")。表io:實(shí)施例9中被測制劑的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>縮寫Me-/5-CD=曱基-/3-環(huán)糊精EDTA=乙二胺四乙酸二鈉DDPC二L-o;-雙姿酰磷脂酰膽堿(L-a-phosphatidylcholinedidecanoyl)。在暴露于升高溫度和每日3次噴射的霧化應(yīng)力的第0天、5天和10天的肽含量的HPLC數(shù)據(jù)顯示于圖8。數(shù)據(jù)顯示在組合的熱和霧化應(yīng)力后，1mg/mLTween-80的存在提高PYYw6的穩(wěn)定性(比較樣品4-1和4-2(分別是實(shí)心和空心菱形)；比較樣品4_3和4_4(分別是實(shí)心和空心正方形)；比較樣品4-5和4-6(分別是實(shí)心和空心圓)；和比較樣品4-7和4-8(分別是實(shí)心和空心三角形))。當(dāng)pH從4.4降低到3.8時，還存在穩(wěn)定性升高的趨勢。pH3.8的包含1mg/mLTween-80(4-l)的樣品，顯示與樣品4-9幾乎相同的穩(wěn)定性。1mg/mLTween-80的存在提供PYYw6制劑對于熱和噴霧應(yīng)力的穩(wěn)定性，所述PYY3.36制劑包含10mg/mLEDTA和20mg/mL乙醇。當(dāng)pH從4.4降低到3.8時，穩(wěn)定性升高。實(shí)施例10:PYY^制劑的熱穩(wěn)定性和霧化應(yīng)力穩(wěn)定性本研究的目標(biāo)是檢驗(yàn)PYY3.36制劑抗熱和霧化應(yīng)力的穩(wěn)定性，所述PYY3.36制劑包含作為PYY3.36潛在滲透增強(qiáng)劑的乙醇、EDTA和Tween80。在該實(shí)施例中，緩沖液是乙酸鹽或谷氨酸鹽，pH為4.0,并且Tween-80的水平從0到50mg/mL。添加氯丁醇作為防腐劑。該實(shí)施例使用的方法描述于實(shí)施例8。所有噴霧之間小瓶保存于30。C/65。/。相對濕度，小瓶噴霧TID，共10天，在噴霧的第0、5和10天4吏用HPLC確定噴霧(當(dāng)天的最后噴霧)中的PYY3-36含量。該實(shí)施例中^^測的不同制劑描述于表11。所有樣品包含6mg/mLPYY3.36和5mg/mL氯丁醇(CB)。樣品5-1到5-13包含1-10mg/mLEDTA,10-20mg/mL乙醇，0-50mg/mLTween-80,還包含10mM乙酸鹽緩沖液/pH5或者10mM谷氨酸鹽緩沖液/pH4。為進(jìn)行對比，最后的樣品，5-14，包含45mg/mL曱基-/3-環(huán)糊精，1mg/mLDDPC,和1mg/mLEDTA,pH4.0。57表11:實(shí)施例10中被測制劑的描述<table>tableseeoriginaldocumentpage58</column></row><table>圖9A顯示樣品5-1，5-2和5-3的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。5-1和5-2的比較顯示1mg/mLTween80的添加不具有改進(jìn)效應(yīng)，因?yàn)樵谠囼?yàn)條件下(例如，1mg/mLEDTA和10mg/mL乙醇，pH4)，兩個樣品均獲得優(yōu)良的穩(wěn)定性。樣品5-2相對5-3的比較顯示在試驗(yàn)條件下，觀察到谷氨酸鹽緩沖液相對乙酸鹽緩沖液的稍微更低的穩(wěn)定性。圖9B顯示5-4,5-5，5-6和5-7的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。所有這些樣品包含10mg/mLEDTA，20mg/mL乙醇，和10mM乙酸鹽緩沖液/pH4.0。該系列樣品具有不同水平的Tween80,即從0到50mg/mL。通常，與圖9A中的樣品相比，圖9B條件下觀察到的穩(wěn)定性稍微更低。樣品5-7觀察到最高的穩(wěn)定性，所述樣品5-7包含該系列中最高水平的Tween80(50mg/mL)。圖9C顯示熱和霧化應(yīng)力對4f品5-4,5-5,5-6和5-7的影響。所有這些樣品包含10mg/mLEDTA,20mg/mL乙醇，和10mM谷氨酸鹽緩沖液/pH4.0。該系列樣品具有不同水平的Tween80,即從0到50mg/mL。通常，與圖9A和圖9B中的樣品相比，圖9C條件下觀察到的穩(wěn)定性稍微更低。樣品5-11觀察到最高的穩(wěn)定性，所述樣品5-11包含該系列中最高水平的Tween80(50mg/mL)。最后，樣品5-12,5-13和5-14的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)顯示于9D。所有3個樣品均顯示優(yōu)良的穩(wěn)定性，即，在暴露于熱和霧化應(yīng)力IO天后基本上沒有肽回收率的變化。權(quán)利要求1.用于增強(qiáng)向哺乳動物粘膜遞送PYY的藥物制劑，其中所述制劑包含治療有效量的PYY、能與水混溶的極性有機(jī)溶劑和陽離子螯合劑。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制劑，其中PYY是PYY(3-36),所述能與水混溶的極性有機(jī)溶劑是乙醇且所述陽離子螯合劑是EDTA。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中乙醇的配方濃度為約l%(v/v)或更高。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中乙醇的配方濃度為約2%(v/v)或更高。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中乙醇的配方濃度為約10%(v/v)或更高。6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中EDTA在所述制劑中的濃度為至少約1mg/mL。7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中EDTA在所述制劑中的濃度為至少約2mg/mL。8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中EDTA在所述制劑中的濃度為至少約10mg/mL。9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其還包括表面活性劑。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制劑，其中所述表面活性劑為吐溫-80。11.根據(jù)權(quán)利要求IO所述的制劑，其中吐溫-80在所述制劑中以50mg/mL或更〗氐存在。12.根據(jù)權(quán)利要求IO所述的制劑，其中吐溫-80在所述制劑中以10mg/mL或更低存在。13.根據(jù)權(quán)利要求IO所述的制劑，其中吐溫-80在所述制劑中以1mg/mL或更低存在。14.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其還包括緩沖鹽。15.根據(jù)權(quán)利要求9所述的制劑，其還包括緩沖鹽。16.根據(jù)權(quán)利要求14所述的制劑，其中所述緩沖鹽是乙酸鹽或谷氨酸鹽。17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的制劑，其中所述緩沖鹽是乙酸鹽或谷氨酸鹽。18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的制劑，其中所述緩沖鹽是谷氨酸鹽。19.根據(jù)權(quán)利要求17所述的制劑，其中所述緩沖鹽是谷氨酸鹽。20.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中所述pH為約5.0或更低。21.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中所述pH為約4.4或更低。22.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中所述pH為約4.0或更低。23.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中所述pH為約3.8或更低。24.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其還包括防腐劑。25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的制劑，其中所述防腐劑為氯丁醇或苯扎氯銨。26.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中通過接觸單層粘膜細(xì)胞給予所述制劑導(dǎo)致與在不含滲透增強(qiáng)劑的等滲溶液中測量的Papp相比，測量的P，約為其2倍或更高。27.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中通過接觸單層粘膜細(xì)胞給予所述制劑導(dǎo)致與在不含滲透增強(qiáng)劑的等滲溶液中測量的Papp相比，測量的Papp約為其5倍或更高。28.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中通過接觸單層粘膜細(xì)胞給予所述制劑導(dǎo)致與在不含滲透增強(qiáng)劑的等滲溶液中測量的Papp相比，測量的P叩p約為其IO倍或更高。29.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中通過接觸單層粘膜細(xì)胞給予所述制劑導(dǎo)致與在不含滲透增強(qiáng)劑的等滲溶液中測量的Papp相比，所測量的P，約為其IO倍或更高。30.根據(jù)權(quán)利要求26、27、28或29所述的制劑，其中所述粘膜細(xì)胞為支氣管上皮細(xì)胞。31.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中在哺乳動物中鼻內(nèi)給予所述制劑導(dǎo)致與對于鼻內(nèi)給予不含滲透增強(qiáng)劑的等滲鹽水溶液所測量的AUC^t相比，測量的AUQast約為其2倍或更高。32.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中在哺乳動物中鼻內(nèi)給予所述制劑導(dǎo)致與對于鼻內(nèi)給予不含滲透增強(qiáng)劑的等滲鹽水溶液所測量的AUClast相比，所測量的AUClast約為其5倍或更高。33.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中在哺乳動物中鼻內(nèi)給予所述制劑導(dǎo)致與對于鼻內(nèi)給予不含滲透增強(qiáng)劑的等滲鹽水溶液所測量的AUC^相比，測量的AUC^t約為其IO倍或更高。34.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制劑，其中在哺乳動物中鼻內(nèi)給予所述制劑導(dǎo)致與對于鼻內(nèi)給予不含滲透增強(qiáng)劑的等滲鹽水溶液所測量的AUClast相比，測量的AUClast約為其20倍或更高。35.用于增強(qiáng)向哺乳動物粘膜遞送PYY的藥物制劑，其中所述制劑包含治療有效量的PYY、約2%(v/v)乙醇、約10mMEDTA、約1%吐溫-80,且pH約4.0。36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的制劑，其還包括防腐劑，其中所述防腐劑為氯丁醇或苯扎氯銨。37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的制劑，其還包括緩沖鹽，其中所述緩沖鹽為乙酸鹽或谷氨酸鹽。38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的制劑，其還包括緩沖鹽，其中所述緩沖鹽為谷氨酸鹽。39.適合用于多次使用的PYY劑型，包含含有水性藥物制劑的密封瓶子，其中所述制劑包含治療有效量的PYY、能與水混溶的極性有機(jī)溶劑和陽離子螯合劑，并且其中這樣的PYY劑型在5°C下儲存至少10天后顯示至少90%的PYY回收率。40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的PYY劑型，在5。C下儲存至少6個月后具有高于90%的PYY回收率。41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的PYY劑型，在5。C下儲存至少1年后具有高于90%的PYY回收率。42.根據(jù)權(quán)利要求39所述的PYY劑型，在5°C下儲存至少2年后具有高于90%的PYY回收率。43.適合多次使用的PYY劑型，其包含含有水性藥物制劑的瓶子和有效鼻內(nèi)給予所述制劑的致動器，其中所述制劑包含治療有效量的PYY、能與水混溶的極性有機(jī)溶劑和陽離子螯合劑，并且其中這樣的劑型在儲存長于約5天后顯示至少90%的PYY回收率。44.根據(jù)權(quán)利要求43所述的PYY劑型，其中所述給藥為每天3次。45.根據(jù)權(quán)利要求44所述的PYY劑型，在所有噴霧之間在30。C/65。/。相對濕度下具有高于約90%的PYY回收率。46.根據(jù)權(quán)利要求39和43所述的PYY劑型，其還包含具有凈單個離子化部分的pH緩沖劑，所述離子化部分具有所述制劑的pH的2個pH單位內(nèi)的pKa。47.根據(jù)權(quán)利要求46所述的PYY劑型，其中所述緩沖劑具有凈單個具有所述制劑的pH的1個pH單位內(nèi)的pKa的離子化部分。48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的PYY劑型，其中所述制劑選自谷氨酸鹽、乙酸鹽、甘氨酸、組氨酸、精氨酸、賴氨酸、蛋氨酸、乳酸鹽、甲酸鹽和乙醇酸鹽。49.根據(jù)權(quán)利要求48所述的PYY劑型，其還包括谷氨酸鹽或乙酸鹽緩沖劑。50.根據(jù)權(quán)利要求48所述的PYY劑型，其中所述pH為約5.0或更低。51.根據(jù)權(quán)利要求48所述的PYY劑型，其中所述pH為約4.4或更低。52.根據(jù)權(quán)利要求48所述的PYY劑型，其中所述pH為約4.0或更低。53.根據(jù)權(quán)利要求48所述的PYY劑型，其中所述pH為約3.8或更低。54.才艮據(jù)權(quán)利要求40和45所述的PYY劑型，其中PYY為PYY(3-36)。55.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中PYY的濃度為至少約20/xg/ml。56.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中PYY的濃度為至少約100jng/ml。57.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中PYY的濃度為至少約200/xg/ml。58.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中PYY的濃度為至少約1mg/ml或更高。59.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中PYY的濃度為至少約2mg/ml或更高。60.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中PYY的濃度為至少約6mg/ml或更高。61.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中PYY的濃度為至少約10mg/ml或更高。62.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中所述劑型適合鼻內(nèi)給藥以達(dá)到約2/xg至約1000所述PYY的劑量。63.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中所述劑型適合鼻內(nèi)給藥以達(dá)到約100Mg至約600/xg所述PYY的劑量。64.根據(jù)權(quán)利要求54所述的PYY劑型，其中所述能與水混溶的極性有機(jī)溶劑是乙醇且所述陽離子螯合劑是EDTA。65.根據(jù)權(quán)利要求64所述的PYY劑型，其中乙醇的配方濃度為至少約0.1%(v/v)。66.根據(jù)權(quán)利要求64所述的PYY劑型，其中乙醇的配方濃度為至少約l%(v/v)。67.根據(jù)權(quán)利要求64所述的PYY劑型，其中乙醇的配方濃度為至少約10%(v/v)。68.根據(jù)權(quán)利要求64所述的PYY劑型，EDTA在所述制劑中的濃度為至少約1mg/mL。69.70.71.72.73.根據(jù)權(quán)利要求72所述的PYY劑型，其中吐溫-80在所述制劑中以至少約1mg/mL存在。74.根據(jù)權(quán)利要求72所述的PYY劑型，其中吐溫-80在所述制劑中以至少約10mg/mL存在。75.根據(jù)權(quán)利要求72所述的PYY劑型，其中吐溫-80在所述制劑中以至少約50mg/mL存在。76.根據(jù)權(quán)利要求64所述的PYY劑型，其還包含防腐劑。77.根據(jù)權(quán)利要求76所述的PYY劑型，其中所述防腐劑是氯丁醇或苯扎氯銨。78.用于增強(qiáng)對哺乳動物的Y2受體結(jié)合肽粘膜遞送的藥物制劑，其中所述制劑包含治療有效量的所述肽、能與水混溶的極性有機(jī)溶劑和陽離子螯合劑。79.用于增強(qiáng)對哺乳動物的PYY功能類似物粘膜遞送的藥物制劑，其中所述制劑包含治療有效量的所述類似物、能與水混溶的極性有機(jī)溶劑和陽離子螯合劑。80.根據(jù)權(quán)利要求78或79所述的制劑，其中所述能與水混溶的極性有機(jī)溶劑是乙醇且所述陽離子螯合劑是EDTA。81.根據(jù)權(quán)利要求80所述的制劑，其中乙醇的配方濃度為約1%(v/v)或更高。82.根據(jù)權(quán)利要求80所述的制劑，EDTA在所述制劑中的濃度為至少約1mg/mL。83.根據(jù)權(quán)利要求80所述的制劑，其還包括表面活性劑。84.根據(jù)權(quán)利要求83所述的制劑，其中所述表面活性劑是吐溫-80。85.根據(jù)權(quán)利要求84所述的制劑，其中吐溫-80在所述制劑中以50mg/mL或更低存在。86.根據(jù)權(quán)利要求80所述的制劑，其還包括緩沖鹽。87.根據(jù)權(quán)利要求80所述的制劑，其中所述pH為約5.0或更低。88.根據(jù)權(quán)利要求80所述的制劑，其還包含防腐劑。89.根據(jù)權(quán)利要求88所述的制劑，其中所述防腐劑是氯丁醇或苯扎氯銨。90.用于增強(qiáng)對哺乳動物的Y2受體結(jié)合肽粘膜遞送的藥物制劑，其中所述制劑包含治療有效量的所述肽、約2%(v/v)乙醇、約10mMEDTA、約1%吐溫-80,且pH約4.0。91.用于增強(qiáng)對哺乳動物的PYY功能類似物粘膜遞送的藥物制劑，其中所述制劑包含治療有效量的所述類似物、約2。/。(v/v)乙醇、約10mMEDTA、約1%吐溫-80，且pH約4.0。92.根據(jù)權(quán)利要求90或91所述的制劑，其還包含防腐劑，其中所述防腐劑是氯丁醇或苯扎氯銨。93.根據(jù)權(quán)利要求92所述的制劑，其還包括緩沖鹽，其中所述緩沖鹽為乙酸鹽或谷氨酸鹽。全文摘要本發(fā)明描述了用于增強(qiáng)對哺乳動物的肽YY(PYY)的粘膜遞送的藥物制劑。描述了適合用于多次使用的PYY劑型。該P(yáng)YY劑型包含含有水性藥物制劑的瓶子和有效鼻內(nèi)給予該制劑的致動器。所述制劑包含治療有效量的PYY、控制pH的緩沖劑、能與水混溶的有機(jī)溶劑以及陽離子螯合劑。所述PYY劑型在儲存多于約5天后顯示至少90％的PYY回收率。文檔編號A61K47/16GK101262888SQ200680033237公開日2008年9月10日申請日期2006年7月10日優(yōu)先權(quán)日2005年7月11日發(fā)明者亨利·R·康斯坦丁諾,安東尼·P·西萊諾,安瑪麗·斯陶德·科恩,瑪麗·S·科勒佩申請人:納斯泰克制藥公司