專利名稱：：使用乙酰透明質(zhì)酸的治療方案的制作方法使用乙酰透明質(zhì)酸的治療方案
背景技術(shù)：
：發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明概括地涉及治療劑領(lǐng)域，更具體地，涉及用作治療劑的化療劑和制劑。更具體地，本發(fā)明提供了可以降低治療劑的毒性或增強(qiáng)治療劑的效能的治療策略。本發(fā)明也包括組合物、治療和預(yù)防方法以及治療方案。現(xiàn)有技術(shù)本說明書中對任意現(xiàn)有技術(shù)的參改不視為且不應(yīng)視為承認(rèn)或任何形式的提示現(xiàn)有技術(shù)構(gòu)成任意國家普通的一般知識的一部分。藥物毒性是治療性化合物給藥的主要限制。為了在病理部位處和內(nèi)部達(dá)到和維持活性藥物物質(zhì)的治療濃度，必須施用高劑量的化療劑。系統(tǒng)毒性經(jīng)常是最終的結(jié)果，因此在減輕系統(tǒng)毒性的嘗試中，臨床醫(yī)生會施用亞適量的治療劑，其中治療活性的藥物劑量和無毒的藥物劑量之間存在復(fù)雜平衡。作為該妥協(xié)的、但是平衡的用藥法的結(jié)果，患者中經(jīng)?？梢垣@得亞適量的給定治療化合物的治療血清水平。觀察到的毒性可能導(dǎo)致給藥頻率、給藥數(shù)量或給藥周期數(shù)目的限制。與顯著毒性有關(guān)的一種這樣的治療物質(zhì)的實(shí)例是鹽酸依立替康(CPT-11;Camptosar.CPT-ll)，它是喜樹堿(最初從喜樹分離出來的一種具有抗腫瘤活性的植物生物堿)的一種水溶性衍生物。CPT-ll具有廣譜的抗腫瘤活性，且已經(jīng)證實(shí)可以有效地治療難治的結(jié)腸直腸癌，為此已經(jīng)在世界范圍內(nèi)批準(zhǔn)了CPT-11的化療。在CPT-11化療過程中，主要劑量限制毒性是延遲的腹瀉和骨髓抑制。骨髓抑制是一種其中骨髓活性降低的狀況。該狀況會導(dǎo)致更少的紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板，這通常顯示為降低的免疫系統(tǒng)和對原發(fā)和繼發(fā)細(xì)菌和/或真菌感染的更高患病率。骨髓抑制的持續(xù)時間可以部分地受粒細(xì)胞集落刺激因子給藥的控制，但是該治療方案代表高成本的治療以及對于患者而言侵害性且長期的住院。腹瀉會影響生命質(zhì)量，當(dāng)與骨髓抑制并發(fā)時，會威脅生命。CPT-ll在體內(nèi)會被肝羧酸酯酶轉(zhuǎn)化，形成有活性的代謝物SN-38，即拓樸異構(gòu)酶I的一種有效抑制劑，DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中的一種關(guān)鍵的核酶。在肝中，SN-38的一部分會經(jīng)歷UDP-葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶系統(tǒng)的葡萄苷酸化的隨后解毒，形成無活性的SN-38G。膽汁分泌代表CPT-11和它的代謝物的主要消除途徑。SN-38G在腸中通過細(xì)菌或組織(3-葡糖醛酸糖苷酶介導(dǎo)的對SN-38的切割而去軛合后，導(dǎo)致對腸的局部刺激和毒性(Takasuna爭C謹(jǐn)eri3752-3757，1996)。從腸中，CPT-ll和它的代謝物也可以通過腸細(xì)胞重吸收，并形成腸肝再循環(huán)環(huán)路(Takasuna爭1996/^j!:)。因此，盡管目前可以得到治療劑，其在最佳劑量施用時，能治療疾病，例如癌癥，病原體感染，疼痛的治療，胃腸障礙，和神經(jīng)學(xué)病癥以及許多其它的病癥，仍然需要能減少虛弱副作用和/或促進(jìn)特別有效形式的治療劑的產(chǎn)生的組合物和治療策略。
發(fā)明內(nèi)容在本說明書中，除非上下文另有要求，詞語"包含"或變體例如"包括"，應(yīng)當(dāng)理解為包括所述元素或整體、或元素或整體的組，但是不排除任何其它的元素或整體，或者元素或整體的組。本發(fā)明部分地基于下述測定，即透明質(zhì)酸(在本文中也稱作乙酰透明質(zhì)酸或HA、或它的化學(xué)修飾的衍生物)調(diào)控酶的水平或活性，所述酶產(chǎn)生治療劑的有毒代謝物或它們的前藥形式，或產(chǎn)生更有效形式的治療劑。另外，乙酰透明質(zhì)酸或HA、或它的化學(xué)修飾的衍生物可以調(diào)控負(fù)責(zé)這些藥物或它們的代謝物的再吸收、運(yùn)輸和排泄的蛋白。因此，提出了同時或以任意次序連續(xù)地施用HA和治療劑。所述治療劑可以是抗癌劑、抗病原體劑或表現(xiàn)或賦予有益治療效果的任意治療劑，例如在糖尿病、神經(jīng)學(xué)病癥、疼痛處理和胃腸障礙的治療中。"有益治療效果"包括疾病或病癥的一種或多種癥狀的改善。術(shù)語"化療劑"不應(yīng)理解為將該試劑限制為任意特定類型的試劑(例如僅僅抗癌劑)。應(yīng)當(dāng)廣義地理解為覆蓋化學(xué)或蛋白性質(zhì)的任意治療劑。術(shù)語"化療劑"和"治療劑"在本文中視作同義詞，并互換使用。本發(fā)明令人驚奇地證實(shí)，包含特別低分子量HA作為用于治療疾病的制劑的組分導(dǎo)致胃腸道中毒性水平的降低，同時改變藥物的藥效學(xué)，其中最終結(jié)果是循環(huán)中毒性藥物或它們的代謝物的減少。因此，本發(fā)明提供了一種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(HA)和治療劑的制劑，其中所述制劑或其組分會調(diào)控p-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，降低胃腸毒性。本發(fā)明的另一個方面提供了一種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(HA)和治療劑的制劑，其中所述制劑或其組分調(diào)控藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性，這樣的陽離子交換蛋白稱作cM0AT，它導(dǎo)致毒性藥物或它們的代謝物的降低的循環(huán)水平；即具有降低的骨髓毒性的最終治療效果的臨床表現(xiàn)。更具體地，所述治療方法包含施用制劑，其中調(diào)控j5-葡糖醛酸糖苷酶在消化道中的生物活性。在一個具體的實(shí)施方案中，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量是約lkDa至約1000kDa。在另一個具體的實(shí)施方案中，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量是約lkDa至約100kDa。在另一個具體的實(shí)施方案中，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量是約350Da至約10kDa。另一個具體的實(shí)施方案包括，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量是約350Da至約5kDa。在另一個具體的實(shí)施方案中，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量是約350Da至約2kDa。更具體地，所述治療方法包含施用制劑，所述的制劑包含分子量約350-9500Da的乙酰透明質(zhì)酸(HA)和降低胃腸道中毒性水平的治療劑，其中所述HA調(diào)控胃腸道中p-葡糖酪酸糖苷酶的活性。更具體地，所述治療方法包含施用制劑，其包含(i)平均分子量約10kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA);和(ii)平均分子量約860kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA)，和(iii)治療劑，其中所述制劑調(diào)控P-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，降低胃腸毒性。更具體地，所述治療方法包含施用制劑，其包含(i)平均分子量約2kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA);和(ii)平均分子量約860kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA)，和(iii)治療劑，其中所述制劑調(diào)控p-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，降低胃腸毒性。更具體地，在施用所述治療劑之前或之后施用HA。更具體地，在施用所述治療劑之前施用HA。更具體地，在施用所述治療劑之后施用HA。更具體地，口服施用平均分子量約10kDa的HA。更具體地，口服施用平均分子量約2kDa的HA。更具體地，全身施用平均分子量約860kDa的HA。更具體地，所述治療劑是p-葡糖醛酸糖苷酶的底物。更具體地，所述治療劑含有葡萄糖醛酸苷部分。更具體地，所述治療劑被代謝形成葡萄糖醛酸苷軛合物。優(yōu)選地，所述葡萄糖醛酸苷選自嗎啡-3-葡萄糖醛酸苷，嗎啡-6-葡萄糖醛酸苷，石膽酸葡萄糖醛酸苷，D-葡萄糖醛酸苷，雌酮-3-葡萄糖醛酸苷，維甲酰葡萄糖醛酸苷，imboxyl-(5-D-多柔比星葡萄糖醛酸苷，雄烷二醇葡萄糖醛酸普和對乙酰氨基酚葡萄糖醛酸苷。優(yōu)選地，所述化療劑選自柔紅霉素，道諾霉素，更生霉素，多柔比星，表柔比星，伊達(dá)比星，依索比星，博來霉素，馬磷酰胺，異磷酰胺，阿糖胞苷，雙氯乙基硝基脲，白消安，絲裂霉素C，放線菌素D,光輝霉素，潑尼松，羥孕酮，睪酮，他莫昔芬，達(dá)卡巴嗪，丙卡巴肼，六甲蜜胺，五曱蜜胺，米托蒽醌，安吖啶，苯丁酸氮芥，甲基環(huán)己基硝基脲，氮芥，美法侖，環(huán)磷酰胺，6-巰基嘌呤，6-硫鳥嘌呤，阿糖胞苷，5-氮雜胞苷，羥基脲，脫氧柯福霉素，4-羥基過氧基-環(huán)磷酰胺，5-氟尿嘧啶(5-FU)，5-氟脫氧尿苷(5-FUdR),甲氨蝶呤(MTX)，奧沙利鉑，多柔比星，秋水仙素，紫杉醇，長春新堿，長春堿，依托泊苷(VP-16)，三甲曲沙，依立替康，托泊替康，吉西他濱，替尼泊苷，順鈿，己烯雌酚(DES)和其葡萄糖醛酸苷輒合物。優(yōu)選地，所述化療劑選自化療化合物，包括抗代謝物，抗腫瘤抗生素，有絲分裂抑制劑，甾族化合物，激素，烷化劑，氮芥，亞硝基脲，激素激動劑和微管抑制劑。其它有用的治療劑包括來自生物來源(例如植物、珊瑚或微生物)的提取物或純化分子。來自植物的抗癌劑以分離形式或作為級分或提取物是特別有用的。本發(fā)明的另一個方面提供了一種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(HA)和治療劑的制劑，其中所述制劑或其組分調(diào)控p-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，增強(qiáng)藥物激活。本發(fā)明的另一個方面提供了一種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(HA)和治療劑的制劑，其中所述制劑調(diào)控(5-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，減少骨髓抑制。優(yōu)選地，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約lkDa至約1000kDa。優(yōu)選地，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約lkDa至約100kDa。優(yōu)選地，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約350Da至約10kDa。優(yōu)選地，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約350Da至約5kDa。優(yōu)選地，所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約350Da至約2kDa。優(yōu)選地，所述治療方法包含施用制劑，其包含(i)平均分子量約10kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA);和(ii)平均分子量約860kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA)，和(iii)治療劑，其中所述制劑調(diào)控p-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，減少骨髓抑制。優(yōu)選地，所述治療方法包含施用制劑，其包含(i)平均分子量約2kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA);和(ii)平均分子量約860kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA)，和(Hi)治療劑，其中所述制劑調(diào)控P-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，減少骨髓抑制。優(yōu)選地，在施用所述治療劑之前或之后施用HA。優(yōu)選地，在施用所述治療劑之前施用HA。優(yōu)選地，在施用所述治療劑之后施用HA。優(yōu)選地，口月l施用HA。優(yōu)選地，口服施用平均分子量約10kDa的HA。優(yōu)選地，口服施用平均分子量約2kDa的HA。優(yōu)選地，全身施用HA。優(yōu)選地，全身施用平均分子量約860kDa的HA。優(yōu)選地，所述治療劑含有葡萄糖醛酸苷部分。優(yōu)選地，所述葡萄糖醛酸苷選自嗎啡-3-葡萄糖醛酸苷，嗎啡-6-葡萄糖醛酸苷，石膽酸葡萄糖醛酸苷，雌酮-3-葡萄糖醛酸苷，維甲酰葡萄糖醛酸苷，imboxyl-p-D-葡萄糖醛酸苷，多柔比星葡萄糖醛酸苷，雄烷二醇葡萄糖醛酸苷和對乙酰氨基酚葡萄糖醛酸苷。優(yōu)選地，所述試劑是選自下述的化療劑柔紅霉素，道諾霉素，更生霉素，多柔比星，表柔比星，伊達(dá)比星，依索比星，博來霉素，馬磷酰胺，異磷酰胺，阿糖胞苷，雙氯乙基硝基脲，白消安，絲裂霉素C，放線菌素D，光輝霉素，潑尼松，羥孕酮，睪酮，他莫昔芬，達(dá)卡巴溱，丙卡巴肼，六甲蜜胺，五曱蜜胺，米托蒽醌，安吖啶，苯丁酸氮芥，甲基環(huán)己基硝基脲，氮芥，美法侖，環(huán)磷酰胺，6-巰基嘌呤，6-硫鳥噪呤，阿糖胞苷，5-氮雜胞苷，羥基脲，脫氧柯福霉素4-羥基過氧基-環(huán)磷酰胺，5-氟尿嘧啶(5-FU)，5-氟脫氧尿苷(5-FUdR)，甲氨蝶呤(MTX)，奧沙利鉑，多柔比星，秋水仙素，紫杉酚，長春新堿，長春堿，依托泊普(VP-16)，三甲曲沙，依立替康，托泊替康，吉西他濱，替尼泊苷，順鉑，己烯雌酚(DES)和其葡萄糖醛酸苷輒合物。優(yōu)選地，所述試劑是選自下述化療化合物的化療劑，包括抗代謝物，抗腫瘤抗生素，有絲分裂抑制劑，甾族化合物，激素，烷化劑，氮芥，亞硝基脲，激素激動劑和微管抑制劑。優(yōu)選地，包含根據(jù)本發(fā)明制劑的藥物組合物用于治療癌癥。本文提及的"治療"包括預(yù)防和改善一種或多種癥狀。附圖簡述圖1中的圖解表示證實(shí)了〈2kDaHA對胃腸道組織上(3-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響。圖2中的圖解表示證實(shí)了<2kDaHA對胃腸道組織中p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響。圖3中的圖解表示證實(shí)了當(dāng)以60mg/kg的劑量施用依立替康時，HA劑量調(diào)控對SN-38的組織分布的影響。圖4中的圖解表示證實(shí)了當(dāng)以60mg/kg的劑量施用依立替康時，HA劑量調(diào)控對SN-38G的組織分布的影響。圖5中的圖解表示證實(shí)了在依立替康(30:空心正方形)之前l(fā)5分鐘單次靜脈內(nèi)注射依立替康(30:空心圓圏)、HyCAMPTM6"0:實(shí)心三角)和HA(26.6)后，CPT-ll(a)、SN-38(b)、SN-38G(c)和APC(d)的累積膽汁分泌。每個值代表平均值土SEM,其中/=6，除非另有說明。(a)與依立替康組相比，p^0.05。圖6中的圖解表示證實(shí)了單次靜脈內(nèi)注射依立替康(60:空心圓圏)、HyCAMPTM(26.6/60:實(shí)心三角)后，CPT-ll(a)、SN-38(b)、SN-38G(c)和APC(d)的累積膽汁分泌。每個值代表平均值士SEM。(a):與依立替康組相比，p^O.05。圖7中的圖解表示證實(shí)了在依立替康(30:空心正方形)之前15分鐘單次靜脈內(nèi)注射依立替康(30:空心圓圏)、HyCAMPTM(26.6/30:實(shí)心三角)和HA(26.6)后,CPT-11(a)、SN-38(b)、SN-38G(c)和APC(d)的累積腸外吸滲。每個值代表平均值士SEM,其中/z=6，除非另有說明。(a)&(b)與依立替康組相比，p5O.05;(c)與依立替康前15分鐘HA相比，p^O.05。圖8中的圖解表示證實(shí)了在依立替康(30:空心正方形)之前15分鐘單次靜脈內(nèi)注射依立替康(60:空心圓圏)、HyCAMPTM(26.6/60:實(shí)心三角)和HA(26.6)后,CPT-11(a)、SN-38(b)、SN-38G(c)和APC(d)的累積腸外吸滲。每個值代表平均值土SEM。(a):與依立替康組相比，p$0.05。圖9中的圖解表示顯示了860kDaHA對腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響。圖IO中的圖解表示顯示了10kDaHA對腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響。圖11中的圖解表示顯示了〈2kDaHA對腫瘤細(xì)胞內(nèi)源性(3-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響。圖12中的圖顯示了CPT-ll的代謝途徑。圖13中的用照片顯示了長期暴露于依立替康和HyCAMPTM的大鼠的盲腸形態(tài)學(xué)的變化。大鼠每日接受依立替康(60.0)或HyCAMPTM(26.6/60.O)注射。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，處理胃腸道的一部分。圖A，D和G:接受乙酰透明質(zhì)酸的大鼠的顯微照片；圖B，E和H:接受依立替康的大鼠的顯微照片；圖C，F(xiàn)和I:接受HyCAMPTM的大鼠的顯微照片。注意到依立替康和HyCAMPTM(分別是圖B和C)之間粘膜隱窩的一般形態(tài)學(xué)變化。HyCAMPTM處理過的盲腸類似于在對照組(圖A)中觀察到的那些。發(fā)明詳述本發(fā)明部分地基于下述測定，即透明質(zhì)酸(HA)改變治療劑的代謝。"改變"在本上下文中是指調(diào)控，因?yàn)樵谟行┣闆r下，會抑制將治療劑或它們的前藥形式代謝成有毒產(chǎn)物或中間體的酶。結(jié)果，與在沒有HA情況下施用該試劑相比，存在治療劑的降低水平的有毒代謝副產(chǎn)物。在其它情況下，會升高產(chǎn)生更高活性的治療性代謝副產(chǎn)物的酶的水平，從而與在沒有HA情況下施用該試劑相比，增強(qiáng)施用的試劑或它的前藥形式的效能。因此，本發(fā)明提供了一種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(HA)和治療劑的制劑，其中所述制劑或其組分會調(diào)控p-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，降低胃腸毒性。術(shù)語"治療劑"和"化療劑"在本文中視作同義術(shù)語，在本說明書中互換使用。這些術(shù)語應(yīng)當(dāng)以它們的最廣含義理解為包括用于誘導(dǎo)、表現(xiàn)或賦予治療事件或益處的任意化學(xué)或頑固分子。治療劑可以是非天然存在的化合物，例如抗癌劑或抗病原體劑?；蛘?，化療劑是抗生素或重組分子。在一個具體的實(shí)施方案中，所述化療劑是葡糖醛酸糖苷酶(例如P-葡糖醛酸糖苷酶)的底物。術(shù)語"底物"在本上下文中是指，葡糖醛酸糖苷酶能催化化療劑的代謝變化。根據(jù)該方面，本發(fā)明為受試者提供了一種治療方案，其中所述治療方案包含施用化療劑或前藥形式的所述治療劑，所述方法包含，在施用治療劑或它的前藥形式之前、過程中或之后，給所述受試者施用有效調(diào)控酶的水平或活性量的HA或其衍生物，與在沒有HA情況下施用該治療劑相比所述酶會使治療劑或它的前藥形式有毒或更有活性。應(yīng)當(dāng)理解，除非另有說明，本發(fā)明不限于組分的特定制劑，生產(chǎn)方法，給藥方案等，因?yàn)檫@些可以變化。還應(yīng)當(dāng)理解，本文使用的術(shù)語僅用于描述具體實(shí)施方案的目的，無意進(jìn)行限制。另外，如在本說明書中所使用的，單數(shù)形式"一"、"一種"和"該"包括復(fù)數(shù)方面，除非上下文另有清楚說明。因而，例如，提及的"一種化療劑"、"一種抗癌劑"、"該透明質(zhì)酸"等包括單一物質(zhì)(即單一的抗癌劑、化療劑或透明質(zhì)酸)以及2種或更多種物質(zhì)。術(shù)語"HA"以它的最普通的含義使用，并也稱作透明質(zhì)酸鈉，乙酰透明質(zhì)酸或透明質(zhì)酸。所有這些術(shù)語可以用于描述同一實(shí)體。粘多糖存在于哺乳動物體的每個部分中，是哺乳動物結(jié)締組織的主要組分。在生理?xiàng)l件下，HA可以、尤其是將水吸收進(jìn)胞間隙，形成"膠狀基質(zhì)"。在體內(nèi)，這用于保護(hù)細(xì)胞結(jié)構(gòu)，并防御免受外部損傷、細(xì)菌感染等。本發(fā)明也提供了組合物，其包含一種或多種抗癌抗體和HA的衍生物、片段和/或鹽。HA的許多衍生物和片段已經(jīng)描述在文獻(xiàn)中，意在包括在本發(fā)明的方法和制劑中。示例性的HA衍生物是在美國專利號6，620，927(巰基修飾的透明質(zhì)酸衍生物)；美國專利號6，552，184(透明質(zhì)酸和其衍生物的交聯(lián)化合物)；美國專利號6，579，978(透明質(zhì)酸的疏酸化化合物和其衍生物)；美國專利號6,831,172(交聯(lián)的透明質(zhì)酸和其半琥珀酰化衍生物)；美國專利號6，027，741(硫酸化的透明質(zhì)酸和其酯)；歐洲專利號0138572(透明質(zhì)酸片段HYALECTIN和HYALASTINE)中描述的那些。Falk的更早的專利(例如US5852002;US6069135)將透明質(zhì)酸定義為天然存在的糖胺聚糖(glycosaminoglucan)，它的分子量可以從50，000Da向上。Fidia的專利(例如EP013852)公開了稱作HYAUSTINE的分子量為約50kDa-lOOkDa的透明質(zhì)酸，它具有用于促進(jìn)傷口愈合的局部用材料所需的特征。Fidia等人也公開了包含小于30kDa的級分的低分子量材料。但是，這些級分作為雜質(zhì)被拋棄，因此沒有教導(dǎo)作為本發(fā)明所述制劑的用途。國際專利申請?zhí)朩O00/41730和WO02/05852，例如，主要涉及分子量超過750kDa的HA的用途。盡管WO02/05852描述了幾種低分子量乙酰透明質(zhì)酸(例如四糖，己糖和十二糖，以及5600Da和50，000Da的HA)，這些低分子量乙酰透明質(zhì)酸用于測定HA對細(xì)胞周期的影響。這些現(xiàn)有技術(shù)都沒有公開小于10，000Da的HA在降低毒性水平和/或改善骨髓抑制方面的用途。令人驚奇地，本發(fā)明的HA包括分子量遠(yuǎn)小于50,000Da、特別是小于10，000Da、優(yōu)選約2000Da的級分。它們可以有利地降低在胃腸道中的毒性和/或改善骨髓抑制。因此，本發(fā)明擴(kuò)展至HA的用途，所述HA具有約350Da至1000kDa分子量，例如350，351，352，353，354，355，356，357，358，359360，361，362，363，364365，366，367，368,369,370，371，372373，374，375，376377，378，379，380，381，382，383，384，385386，387,388'389390，391，392，393，394，395，396，397，398399，400401'402403，404，405，406，407，408，409，410，411412，413414415,416，417，418，419，420，421，422，423，424425,426.427，428，429，430，431，432，433，434，435,436，437438，439，440，441，442，443，444，445，446，447，448，449，450451，452，453.454，455，456，457，458，459，460，461，462，463464，465，466，467，468，469，470，471，472，473，474，475，476477，478，479，480，481，482，483，484，485，486，487，488，489490，491，492，493，494，495，496，497，498，499，500，501，502503，504，505，506,507，508，509,510，511，512，513，514，515516，517，518,519，520，521，522，523，524，525，526，527，528529，530，531,532，533，534，535，536,537,538，539,540，541542，543,544，545，546，547，548，549，550，551,552,553，554555，556，557，558，559，560，561，562，563，564，565，566，567568，569，570,571，572，573，574，575，576，577，578，579，580581，582,583,584，585，586，587，588,589，590，591，592，593594,595，596，597,598，599，600，601，602,603，604,605，606607，608，609，610，611，612，613，614，615，616，617,618，619620，621，622,623，624，625，626，627，628，629，630,631，632633，634,635，636，637，638，639，640，641，642，643，644，645646,647，648，649，650，651，652，653，654，655，656，657，658659，660，661，662，663，664，665，666，667,668，669，670，671672，673，674，675，676，677，678，679，680，681，682，683，684685，686，687，688，689，690,691，692，693，694，695,696，697698，699，700，701，702,703'704，705，706，707，708，709，710711，712，713，714，715，716,717,718，719，720，721，722，723724,725，726，727，728，729'730，731，732，733，734，735，736737，738，739，740，741，742743，744，745，746，747，748，749750，751,752，753，754，755756，757，758，759，760，761，762763，764，765，766，767，768769,770，771，772，773，774，775776，777，778，779，780,781782，783，784，785，786，787，788789，790，791，792，793，794795，796，797，798，799，800，801802，803,謝，805，806，807808，809，810，811，812，813，814815,816，817，818，819，820，821，822，823，824，825，826，827828，829，830，831，832，833,834,835，836，837，838，839，840841，842，843，844,845，846，847，848，849，850,851，852，853854，855，856,857，858，859，860，861，862，863，864，865，866867,868'869，870，871，872，873，874，875，876,877，878，879880，881，882，883，884，885,886，887，888，889,890，891，892893，894，895，896，897，898899，900，901，902，903，904，905906,907，908，909，910，911912，913，914，915，916，917，918919，920，921，922，923，924925，926，927，928，929，930，931932，933，934，935，936，937，938，939，940，941，942，943，944945，946，947，948，949，950'951，952，953，954，955，956，957958，959，960,961，962，963，964，965，966，967，968，969，970971，972，973，974，975，976，977,978，979,980，981，982，983984，985，986，987，988，989，990，991，992，993994,995，996997，998,999，1000Da和1，2,3，4，5，6，7，8，9，10，11，1213，14，15，16，17，18，19，20，21，22,23，24，25，26，27，2829，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，42，43，4445，46，47，48,49，50，51，52，53，54，55，56，57，58，59，6061，62，63，64，65，66，67，68，69,70，71，72，73，74，75，7677，78，79，80，81，82，83，84,85，86，87，88，89，90，91,9293，94，95，96，97，98，99，100，101，102，103，104，105，106107，108，109，110，111，112113，114，115，116，117，118，119120，121，122，123，124，125126，127，128，129，130，131，132133，134，135，136，137，138139，140，141，142，143，144，145146，147，148，149，150，151.152，153，154，155，156，157,158159，160，161，162，163，164.165，166，167，168，169，170，171172，173174，175，176，177，178，179，180，181，182，183，184185，186,187,188，189，190，191，192，193，194，195，196，197198,199200，201，202，203，204，205，206，207，208，209，210211，212213，214，215，216，217，218，219，220，221，222，223224，225226，227,228，229,230，231，232，233，234，235，236237，238239，240，241，242,243，244，245，246，247，248，249250，251252，253，254，255，256，257，258，259，260，261，262263，264265，266，267，268，269，270，271，272，273，274，275276，277278，279，280，281，282，283，284,285，286，287，288289,290291，292，293，294，295，296，297，298，299，300，301302，303304，305，306，307,308，309，310，311，312，313，314315，316'317，318，319，320321，322，323，324，325,326，327328，329，330，331，332，333334，335，336，337，338，339，340341,342，343，344，345，346347，348，349，350，351，352，353354，355，356，357，358，359,360,361，362，363，364，365,366367，368，369，370，371，372373，374，375，376,377,378，379380，381，382，383,384，385,386，387，388，389，390，391，392393，394，395，396，397，398'399，400，401，402.403，404，405406，407'408，409，410，411，412，413，414，415416，417，418419，420，421，422，423，424'425，426，427，428429，430，431432，433，434，435，436，437,438，439，440，441442，443,444445，446，447，448，449，450，451,452，453，454455，456，457458，459，460，461，462，463，464,465，466，467，468，469，470，471,472，473，474，475,476，477，478，479，480，481，482，483，484，485，486，487，488，489，490，491，492，493,494，495，496，497，498,499,500，501，502，503，504，505,506，507,508，509，510,511，512，513，514，515，516，517，518，519，520,521，522，523，524，525，526,527，528，529，530，531，532，533，534，535，536，537，538，539，540,541，542，543，544，545，546，547，548，549，550，551，552，553，554，555，556，557，558，559，560，561，562，563，564，565，566,567，568,569，570,571，572,573，574,575，576，577，578，579，580，581，582，583，584，585，586，587，588，589，590，591，592，593，594，595，596，597，598，599，600，601，602，603,604，605，606，607，608，609，610，611，612，613，614，615，616，617，618，619，620，621，622，623，624，625，626，627，628，629，630,631，632，633，634，635，636，637，638，639，640，641，642，643，644，645，646，647，648，649,650，651，652，653，654，655，656，657，658，659，660，661，662，663，664，665，666，667，668，669，670，671，672，673，674，675，676，677，678，679，680，681，682，683，684,685，686，687，688，689，690，691，692，693，694，695，696，697，698，699，700，701，702，703，704，705，706，707，708，709，710，711，712，713，714，715，716，717，718，719，720，721,722，723，724，725，726，727，728，729，730，731，732，733，734，735，736，737,738，739，740，741，742，743，744，745，746，747，748，749，750，751，752，753，754，755，756，757，758，759，760，761,762，763，764，765，766，767，768，769，770，771，772，773，774，775，776，777，778，779，780，781，782，783，784，785，786，787，788，789，790，791，792，793，794，795，796，797，798,799，800，801，802，803,804，805，806,807，808,809，810，811，812,813，814，815，816，817，818，819，820,821，822，823，824，825，826，827,828，829，830，831，832，833，834,21835，836，837，838，839，840,841，842，843，844，845，846，847，848，849，850，851，852,853，854，855，856，857，858，859，860，861，862，863，864，865，866，867，868，869，870，871,872，873，874，875，876，877，878，879，880，881，882，883，884,885，886，887，888，889，890，891，892，893，894，895，896，897,898，899，900，901，902，903，904，905，906，907，908，909，910，911，912，913，914，915，916，917，918，919，920，921，922，923，924，925，926，927，928，929，930，931,932，933，934，935，936,937，938，939，940，941，942，943，944，945，946，947，948，949,950，951，952，953，954，955，956，957，958，959，960，961，962，963，964，965，966，967，968，969，970，971，972，973，974，975,976，977，978，979，980，981，982，983，984，985，986，987，988,989，990，991，992，993，994，995，996，997，998，999,1000Da,包括其間的分子量。除了HA的片段和衍生物以外，合成衍生物和/或半合成衍生物可以用于本發(fā)明的方法和組合物中。HA的示例性的半合成衍生物是HA與脂族、芳族、雜環(huán)和環(huán)脂族系醇的酯，稱作"HYAFF"，它們描述在美國專利號4,851，521，4，965，353，和5，202，431，EP0341745和EP0216453中。每篇上述專利的內(nèi)容在本文中特別引作參考。本文使用的術(shù)語"受試者"指可以從本發(fā)明的組合物和方法獲益的動物，優(yōu)選哺乳動物，更優(yōu)選人。對于可以從本方法獲益的動物的類型沒有限制。受試者(無論人或非人動物)可以稱作個體，受試者，動物，宿主或受體。本發(fā)明的方法可以應(yīng)用于人藥、獸藥以及一般的馴養(yǎng)或野生動物飼養(yǎng)業(yè)。優(yōu)選地，候選受試者是哺乳動物，例如人或?qū)嶒?yàn)室動物例如小鼠，大鼠，兔子，豚鼠，倉鼠或禽類例如家禽。乙酰透明質(zhì)酸是一種由交替的葡糖酪酸和N-乙酰基葡糖胺單元組成的未分支的多糖。作為一種聚合分子，HA分子可以表現(xiàn)出許多分子量。因此，HA制劑可以包含不同分子量的分子。幾乎HA的模態(tài)分子量制劑的任意平均量都在本發(fā)明的方法中是有效的，并且本發(fā)明不限于任何特定大小或大小范圍的HA。HA的最小單位是分子量397Da的二糖。更高的糖是該二糖單元的多倍體，且分子量是(n-lx379)+397的倍數(shù)，因而四糖(2個最小單元，n-2)具有776的分子量等。優(yōu)選地，n是約5至約2200。由于高分子量乙酰透明質(zhì)酸會代謝或生物降解成低分子量乙酰透明質(zhì)酸，我們預(yù)測根據(jù)本發(fā)明可以使用任意平均分子量的乙酰透明質(zhì)酸。本文使用的術(shù)語例如"透明質(zhì)酸"、"乙酰透明質(zhì)酸"、"HA"等也包括HA的化學(xué)或聚合或交聯(lián)衍生物。可以對HA進(jìn)行的化學(xué)修飾的實(shí)例包括，試劑與HA的4個反應(yīng)基團(tuán)(即乙酰氨基，羧基，幾基和還原末端)的任意反應(yīng)。如上所述，HA和化療劑可以作為單一組合物施用，其中兩種物質(zhì)混合在一起，或在治療劑中包埋HA?；蛘?，HA和治療劑以任意次序分開施用，彼此間隔數(shù)秒、數(shù)分鐘、數(shù)小時、數(shù)天或數(shù)周。因此，以任意次序同時和連續(xù)施用HA和治療劑構(gòu)成本發(fā)明的一部分。本發(fā)明延伸至癌癥以及許多其它病癥的治療，例如許多細(xì)菌、真菌、酵母、病毒和寄生物的感染。病原體的實(shí)例包括人免疫缺陷病毒(HIV)，乙型肝炎病毒(HBV)，丙型肝炎病毒(HCV)，原形體和多抗性葡萄球菌(stephylococcus)。其它疾病狀況包括治療疼痛(急性和/或神經(jīng)性疼痛)，糖尿病，胃腸障礙(例如腹瀉)和神經(jīng)學(xué)病癥，包括帕金森病，阿爾茨海默氏病和亨廷頓氏舞蹈病。實(shí)際上，本發(fā)明包括其中可以施用葡萄糖醛酸苦來示蹤或表現(xiàn)病癥的Y壬意疾病狀況。但是，在一個具體的實(shí)施方案中，所述疾病是癌癥。提及的"癌癥"包括腫瘤、肉瘤、癌等。因此，本發(fā)明的另一個方面包括治療具有癌癥受試者的方法，所述方法包含，在施用抗癌化療劑或其前藥形式之前、過程中或之后，給所述受試者施用有效調(diào)控酶的活性水平量的HA或其衍生物，與在沒有HA情況下施用該治療劑相比所述酶會使抗癌化療劑或它的前藥形式有毒或更具活性。如上所述，"抗癌化療劑"的表述包括對多種(即2種或更多種)治療劑的表述。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述化療劑是葡糖醛酸糖苷酶的底物，在最優(yōu)選的實(shí)施方案中是葡萄糖醛酸苷。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了治療或預(yù)防受試者中"實(shí)體瘤"的生長和/或轉(zhuǎn)移的方法。本文使用的"實(shí)體瘤"指正在或已經(jīng)以失控方式生長形成腫瘤的一個或多個細(xì)胞，這些細(xì)胞無任何分化成為專門化的和不同的細(xì)胞。本文使用的術(shù)語"實(shí)體瘤"包括但不限于"癌"、"腺癌"和"肉瘤"。"肉瘤"是結(jié)締組織、軟骨、骨、肌肉等的癌癥。"癌"是上皮細(xì)胞(襯細(xì)胞)的癌癥。"腺癌"指從腺起源的細(xì)胞衍生的癌。根據(jù)本發(fā)明可以治療的示例性的"腫瘤"包括AIDS相關(guān)腫瘤，聽神經(jīng)瘤，嚢性腺樣癌，腎上腺皮質(zhì)癌，特發(fā)性骨髓外化生，脫發(fā)，泡狀軟組織肉瘤，肛門癌，血管肉瘤，再生障礙性貧血，星狀細(xì)胞瘤，共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張癥，基底細(xì)胞癌(皮膚)，膀胱癌，骨癌，腸癌，腦干神經(jīng)膠質(zhì)瘤，腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，乳腺癌，CNS腫瘤，類癌腫瘤，子宮頸癌，幼年腦腫瘤，幼年癌癥，幼年軟組織肉瘤，軟骨肉瘤，絨毛膜癌，結(jié)腸直腸癌，皮膚T細(xì)胞淋巴瘤，隆突性皮膚纖維肉瘤，促纖維組織增生性小細(xì)胞腫瘤，腺管癌，內(nèi)分泌癌，室管膜瘤，食管癌，尤因氏肉瘤，肝外膽管癌，眼癌，眼黑色素瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，輸卵管癌，范可尼貧血綜合癥，骨纖維肉瘤，膽嚢癌，胃癌，消化道癌，消化道類癌腫瘤，泌尿生殖癌，生殖細(xì)胞腫瘤，妊娠滋養(yǎng)細(xì)月包疾病，神經(jīng)膠質(zhì)瘤，子宮內(nèi)膜癌，惡性血液疾病，頭頸癌，肝細(xì)胞癌，遺傳性乳腺癌，組織細(xì)胞增多病，霍奇金氏病，類乳頭瘤病毒，葡萄胎，高血鈣，下咽癌，眼內(nèi)黑色素瘤，胰島細(xì)胞癌，卡波西肉瘤，腎癌，朗格漢斯細(xì)胞組織細(xì)胞增生癥，喉癌，平滑肌肉瘤，Li-Fraumeni綜合征，唇癌，脂肪肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴水腫，淋巴瘤，霍奇金氏淋巴瘤，非霍奇金氏淋巴瘤，男性乳腺癌，腎臟惡性橫紋肌樣瘤，成神經(jīng)管細(xì)胞瘤，黑色素瘤，Merkel細(xì)胞癌，間皮瘤，轉(zhuǎn)移的癌癥，嘴癌，多發(fā)性內(nèi)分泌瘤，蕈樣真菌病，骨髓發(fā)育不良癥綜合征，骨髓瘤，骨髓增殖疾患，鼻癌，鼻咽癌，腎胚細(xì)胞瘤，神經(jīng)母細(xì)胞瘤，神經(jīng)纖維瘤，Nijmegenbreakage綜合征，非黑色素瘤皮膚癌，非小細(xì)胞肺癌(NSCLC),眼癌，食道癌，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，造口卵巢癌，胰腺癌，鼻旁癌，甲狀旁腺癌，腮腺癌，陰莖癌，周邊性神經(jīng)外胚層腫瘤，垂體癌，真性紅細(xì)胞增多癥，前列腺癌，罕見癌癥和相關(guān)的病患，腎細(xì)胞胂瘤，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，橫紋肌肉瘤，Rothmund—Thomson綜合征，唾液腺癌，肉瘤，神經(jīng)賴瘤，Sezary綜合征，皮膚癌，小細(xì)胞肺癌(SCLC)，小腸癌，軟組織肉瘤，脊髓腫瘤，鱗狀細(xì)胞癌(皮膚)，胃癌，滑膜肉瘤睪丸癌，胸腺癌，甲狀腺癌，轉(zhuǎn)移性細(xì)胞癌(膀胱)，轉(zhuǎn)移性細(xì)胞癌(腎盂/輸尿管)，滋養(yǎng)層細(xì)胞癌，尿道癌，泌尿系統(tǒng)癌，膜板塊蛋白，子宮肉瘤，子宮癌，陰道癌，外陰癌，Waldenstrom氏巨球蛋白血癥，Wilms氏腫瘤。使用本發(fā)明的方法治療的腫瘤可以是原發(fā)病灶，或可以是原發(fā)癌轉(zhuǎn)移的結(jié)果。此外，如果腫瘤是原發(fā)癌的轉(zhuǎn)移，原發(fā)癌可以是上述的原發(fā)腫瘤，或可以是分散的原發(fā)癌，例如白血病或淋巴瘤。本發(fā)明包括給受試者"施用"HA。本文使用的術(shù)語"施用"應(yīng)當(dāng)視作包括HA的所有施用方法。如本領(lǐng)域技術(shù)人員會明白的，最方便的或合適的施用途徑取決于幾個因素，且它們可以隨受試者而異。但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員無需過度試驗(yàn)，可以容易地確定對于任意特定受試者最方便的或合適的施用途徑。施用途徑包括動脈內(nèi)、肝內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)、通過吸入劑、栓劑或在緩釋制劑中，包括在手術(shù)期間，盡管本發(fā)明無論如何不應(yīng)當(dāng)視作限于這些具體途徑。另外，HA和化療劑可以通過不同的途徑或相同的途徑施用。HA的優(yōu)選濃度是約0.00001%w/v至10，000%w/v，其中HA的該濃度經(jīng)1min、且最高達(dá)336小時的時間段來施用，但是優(yōu)選輸注時間為120min。此外，HA可以與化療劑同時施用，或兩種物質(zhì)可以以任意次序連續(xù)施用。另外，所述治療方案可以包括多次施用一種HA或化療劑，并低頻施用另一種HA和化療劑。"共同施用"是指通過相同或不同的途徑在同一制劑或在兩種不同制劑中同時施用，或通過相同或不同的途徑連續(xù)施用。"連續(xù)施用"是指在施用2種治療劑或治療方案之間間隔數(shù)秒、數(shù)分鐘、數(shù)小時、數(shù)天或數(shù)周。連續(xù)施用的治療劑或治療方案可以以任意次序施用。在一個實(shí)施方案中，HA和化療劑通過在相同制劑中遞送來共同施用，或者在施用治療劑之前和/或在施用治療劑之后施用HA。在另一個實(shí)施方案中，治療劑可以被HA或其衍生物包嚢，或與HA或其衍生物相結(jié)合。可以化學(xué)修飾HA，形成高分子量的粘性材料，其可以栓塞和捕獲更小的治療化合物，例如下述的治療劑。在另一個實(shí)施方案中，可以化學(xué)修飾HA，形成HA珠子，其可以填滿治療劑，所述治療劑可以一起栓塞在把組織內(nèi)。可以與HA或其衍生物共同施用的這種治療劑的實(shí)例包括但不限于柔紅霉素，道諾霉素，更生霉素，多柔比星，表柔比星，伊達(dá)比星，依索比星，博來霉素，馬磷酰胺，異磷酰胺，阿糖胞苷(cytosinearabinoside)，雙氯乙基硝基脲，白消安，絲裂霉素C,放線菌素D，光輝霉素，潑尼松，羥孕酮，睪酮，他莫昔芬，達(dá)卡巴嗪，丙卡巴肼:六曱蜜胺，五甲蜜胺，米托蒽醌，安吖啶，苯丁酸氮芥，曱基環(huán)己基硝基脲，氮芥，美法侖，環(huán)磷酰胺，6-巰基嘌呤，6-硫鳥嘌呤，阿糖胞苷(cytarabine)，5-氮雜胞苷，羥基脲，脫氧柯福霹素，4-羥基過氧環(huán)磷酰胺，5-氟尿嘧啶(5-FU),5-氟脫氧尿苷(5-FUdR)，甲氨蝶呤(MTX)，奧沙利鉑，多柔比星，秋水仙素，紫杉醇，長春新堿，長春堿，依托泊苷(VP-16)，三曱曲沙，依立替康，托泊替康，吉西他濱，替尼泊苷，順鉑，己烯雌酚(DES)和其葡萄糖醛酸苷軛合物?；熁衔锏钠渌窍拗菩詫?shí)例包括抗代謝物，抗腫瘤抗生素，有絲分裂抑制劑，甾族化合物，激素，烷化劑，氮芥，亞硝基脲，激素激動劑和微管抑制劑。組合物也可以包含通過調(diào)控癌癥相關(guān)受體或結(jié)合蛋白來發(fā)揮抗血管發(fā)生活性或抗癌活性的抗體或蛋白。本文使用的術(shù)語"抗代謝物"包括干擾細(xì)胞生長和再生所需的身體化學(xué)過程的物質(zhì)；在癌癥治療中，抗代謝物藥物會破壞DNA生產(chǎn)，這又阻止細(xì)胞分裂。實(shí)例包括偶氮絲氨酸，D-環(huán)絲氨酸，麥考酚酸，曱氧節(jié)啶，5-氟尿嘧啶，卡培他濱，甲氨蝶呤，吉西他濱，阿糖胞苷(ara-C)和氟達(dá)拉濱。"抗腫瘤抗生素"包括，通過阻斷酶和有絲分裂或改變細(xì)胞周圍膜來干擾DNA的化合物。這些治療劑在細(xì)胞周期的所有階段都起作用。因而，它們廣泛用于許多種癌癥?？鼓[瘤抗生素的實(shí)例包括更生霉素，柔紅霉素，多柔比星(阿霉素)，伊達(dá)比星和米托蒽醌。"有絲分裂抑制劑"包括植物生物堿和從天然產(chǎn)物衍生的其它化合物。它們可以抑制或終止有絲分裂，或抑制產(chǎn)生細(xì)胞再生所需蛋白的酶。它們在細(xì)胞周期的M期起作用。有絲分裂抑制劑的實(shí)例包括紫杉醇，多西他賽，依托泊苷(VP-16)，長春堿，長春新堿和長春瑞濱。本文使用的術(shù)語"甾族化合物"包括天然激素和激素-樣藥物，它們可以用于治療某些類型的癌癥(淋巴瘤，白血病和多發(fā)性骨髓瘤)以及其它疾病。當(dāng)這些藥物用于殺死癌細(xì)胞或減慢它們的生長時，它們視作化療藥物。它們經(jīng)常與其它類型的化療藥物聯(lián)合以增加它們的有效性。實(shí)例包括潑尼+〉和地塞米松。"激素"包括性激素和激素-樣藥物，它們會改變雌激素或雄激素的作用或生產(chǎn)。它們用于減慢乳腺癌、前列腺癌和子宮內(nèi)膜(子宮襯里)癌的生長，這些癌通常響應(yīng)于體內(nèi)激素水平而生長。這些激素通常不以與標(biāo)準(zhǔn)化療藥物相同的方式起作用。實(shí)例包括抗雌激素(他莫昔芬，氟維司群)，芳香酶抑制劑(阿那曲唑，來曲唑)，黃體酮(醋酸甲地孕酮)，抗雄激素(比卡魯胺，氟他胺)，和LHRH激動劑(亮丙瑞林，戈舍瑞林)。"烷化劑，，包括直接作用于DNA來阻止癌細(xì)胞的再生的化合物。作為一類藥物，這些試劑不是階段特異性的(換而言之，它們在細(xì)胞周期的所有階段都起作用)。這些藥物對慢性白血病、非霍奇金氏淋巴瘤、霍奇金病、多發(fā)性骨髓瘤和某些肺癌、乳腺癌和卵巢癌是有活性的。烷化劑的實(shí)例包括白消安，順鉑，卡鉑，苯丁酸氮芥，環(huán)磷酰胺，異磷酰胺，達(dá)卡巴溱(DTIC)，雙氯乙基甲胺(氮芥)和美法侖。"氮芥"，例如晶體鹽酸鹽形式的那些可以用作治療霍奇金病、非霍奇金氏淋巴瘤和腦瘤的藥物。氮芥會造成細(xì)胞遺傳物質(zhì)的突變，從而破壞有絲分裂或細(xì)胞分裂。細(xì)胞對氮芥的敏感性不同，快速增殖的腫瘤和癌細(xì)胞最敏感；產(chǎn)生紅細(xì)胞的骨髓也是敏感的，紅細(xì)胞生產(chǎn)的抑制是氮芥治療的常見副作用。氮芥也會抑制免疫應(yīng)答(見免疫)。其它類型包括芳族芥美法侖和苯丁酸氮芥，環(huán)磷酰胺，HN1，雙-(2-氯乙基)，乙胺；HN2，雙-(2-氯乙基)，甲胺和HN3，三-(2-氯乙基)，胺。"亞硝基脲"通常以與烷化劑類似的方式起作用。它們干擾輔助修復(fù)DNA的酶。這些試劑能移動到腦中，所以它們;故用于治療腦瘤以及非霍奇金氏淋巴瘤，多發(fā)性骨髓瘤，和惡性黑素瘤。亞硝基脲的實(shí)例包括卡莫司汀(BCNU)和洛莫司汀(CCNU)。"激素激動劑"包括調(diào)控一種或多種激素活性的化合物。實(shí)例包括用于前列腺癌的亮丙瑞林(Lupron，Viadur，Eligard)，用于乳腺癌和前列腺癌的戈舍瑞林(Zoladex)，和用于卵巢癌和前列腺癌的曲普瑞林(Trelstar)和醋酸那法瑞林(Synarel)。"微管抑制劑，，包括長春花生物堿，紫杉烷和苯并咪唑等化合物。本發(fā)明包括的特別重要的化療化合物是葡萄糖醛酸苷或葡萄糖醛酸苷輒合物。本發(fā)明包括的葡萄糖醛酸苷的實(shí)例包括但不限于嗎啡-3-葡萄糖酪酸苷，嗎啡-6-葡萄糖醛酸苷，石膽酸葡萄糖醛酸苷，維甲酰葡萄糖醛酸苷，imboxyl-p-D-葡萄糖醛酸苷，雌酮-3-葡萄糖醛酸苷，多柔比星葡萄糖醛酸苷，雄烷二醇葡萄糖醛酸苷和對乙酰氨基酚葡萄糖醛酸苷。在一個具體的實(shí)施方案中，所述治療劑是抗癌劑依立替康。共同施用依立替康和HA可以抑制無毒SN-38G形式向有毒SN_38形式的轉(zhuǎn)化。其提示HA可以抑制p-葡糖醛酸糖苷酶活性。HA或其片段似乎會與SN-38G竟?fàn)巔-葡糖醛酸糖苷酶轉(zhuǎn)化，從而降低胃腸(GI)道毒性。本發(fā)明提供的數(shù)據(jù)證實(shí)，非生理可達(dá)到濃度的乙酰透明質(zhì)酸(860和10kDa)可以對源自肝和胃腸道組織的內(nèi)源性p-葡糖醛酸糖苷酶的活性和腔內(nèi)容物發(fā)揮刺激作用。但是，相反地，低分子量HA(〈2kDa)會對源自肝和胃腸道組織的內(nèi)源性p-葡糖醛酸糖苷酶活性發(fā)揮抑制作用(圖1和2)。HA向片段〈2kDa的分解代謝可能干擾SN-38G向SN-38的轉(zhuǎn)化，這可能是外源施用的HA可以降低CPT-11-誘發(fā)的胃腸道毒性的嚴(yán)重性的機(jī)理。本發(fā)明的上述新的基于HA/化療劑的組合物和/或制劑(在本文中也稱作"活性化合物")可以摻入適合給藥的藥物組合物中。這樣的組合物通常包含活性化合物和藥學(xué)可接受的載體。本文使用的語言"藥學(xué)可接受的載體"意在包括與藥物施用相容的任意和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑等。這樣的介質(zhì)和試劑在藥學(xué)活性物質(zhì)中的應(yīng)用是本領(lǐng)域眾所周知的。如上所討論的，也可以將補(bǔ)充活性化合物摻入組合物中。將本發(fā)明的藥物組合物制成與它的目標(biāo)給藥途徑相容的制劑。給藥途徑的實(shí)例包括但不限于，腸胃外，例如，靜脈內(nèi)，皮內(nèi)，肌肉內(nèi)，intraosseous,皮下，經(jīng)口，鼻內(nèi)，吸入，經(jīng)皮(局部)，經(jīng)粘膜和直腸給藥。用于腸胃外，皮內(nèi)或皮下應(yīng)用的溶液或混懸液可包括以下成分無菌稀釋劑例如注射用水、鹽水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其他合成溶劑；抗菌劑例如節(jié)醇或?qū)αu基苯曱酸甲酯；抗氧化劑例如抗壞血酸或亞硫酸氫鈉；螯合劑例如乙二胺四乙酸；緩沖劑例如乙酸鹽、檸檬酸鹽或磷酸鹽，以及用于調(diào)節(jié)張力的試劑例如氯化鈉或葡萄糖。pH可用酸或堿調(diào)節(jié)，例如鹽酸或氫氧化鈉。腸胃外制劑可用安瓿、一次性注射器或玻璃或塑料制成的多劑量的小瓶包裝。適于注射使用的藥物組合物包括無菌水溶液(溶于水的)或用于臨時制備無菌注射溶液或分散液的分散體和無菌粉末。對于靜脈內(nèi)施用，適當(dāng)?shù)妮d體包括生理鹽水、抑菌水、CremophorEL(BASF，Parsippany，NJ)或磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。組合物優(yōu)選地是無菌的，并且其流動性應(yīng)該達(dá)到易于通過注射器的程度。組合物在制造和存儲的條件下應(yīng)該是穩(wěn)定的，且必須保護(hù)其不受微生物例如細(xì)菌和真菌作用的污染。栽體可以是溶劑或分散介質(zhì)包含，例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇、液態(tài)聚乙二醇等)及其適當(dāng)?shù)幕旌衔??？梢岳?，通過使用包衣例如卵磷脂，在混懸液的情況下通過維持所需粒子大小和通過使用表面活性劑維持適當(dāng)?shù)牧鲃有??？梢酝ㄟ^多種抗菌劑和抗真菌劑，例如，對幾基苯甲酸酯、三氯叔丁醇、苯酴、抗壞血酸、疏柳汞等實(shí)現(xiàn)微生物作用的預(yù)防。在許多情況中，優(yōu)選在組合物中包括等滲劑，例如糖，聚醇例如甘露醇、山梨醇，氯化鈉?？梢酝ㄟ^在組合物中包括延遲吸收的試劑，例如，單硬脂酸鋁和明膠來使注射用組合物的吸收延長。無菌注射用溶液可以通過在適當(dāng)?shù)娜軇┲袚饺胫委熡行Щ蛴幸媪康幕钚曰衔锖蜕鲜隽信e的一種成分或組合來制備，如果需要，隨后通過過濾除菌。一般而言，分散體通過將活性化合物摻入無菌載體來制備，所述無菌載體含有基本的分散介質(zhì)和所需的上述列舉的其他成分。在用于制備無菌注射溶液的無菌粉末的情況中，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和冷凍干燥，其產(chǎn)生活性成分加上任意來自其先前無菌過濾溶液另外所需成分的粉末。口服組合物一般包括惰性稀釋劑或可食用的載體。合適的口服組合物可以例如包含在明膠膠嚢中，或壓制成片劑。為了口服施用的目的，可以將活性化合物和賦形劑混合并以片劑、錠劑或膠嚢的形式使用?？诜M合物也可使用液體載體制備，用作漱口劑，其中所述液體載體中的化合物經(jīng)口應(yīng)用、并且漱口，吐出或咽下。藥物相容的粘合劑和/或輔料可作為組合物的一部分被包括。片劑、丸劑、膠嚢、錠劑等可含有任意以下成分，或相似性質(zhì)的化合物粘合劑例如微晶纖維素、黃蓍膠或明膠；賦形劑例如淀粉或乳糖；崩解劑例如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；潤滑劑例如硬酯酸鎂或Sterotes;助流劑例如膠體二氧化硅；甜味劑例如蔗糖或糖精；或調(diào)味劑例如薄荷、水楊酸甲酯或桔子香精。對于吸入施用，化合物以氣溶膠噴霧劑形式從含有適當(dāng)拋射劑(例如氣體，例如輕基氟代烷(HFA))的加壓容器或分配器或噴霧器遞送?；蛘撸莾?nèi)制劑可以包含干粉和適當(dāng)?shù)膾伾鋭├鏗FA。全身施用也可以通過經(jīng)粘膜或經(jīng)皮的方式使用。對于經(jīng)粘膜或經(jīng)皮施用，在制劑中使用適于滲透屏障的滲透劑。在本領(lǐng)域這樣的滲透劑通常是已知的，包括例如對于經(jīng)粘膜施用，洗滌劑、膽鹽和夫西地酸衍生物。通過使用鼻噴霧或栓劑實(shí)現(xiàn)經(jīng)粘膜給藥。對于經(jīng)皮施用，可將活性化合物配制成本領(lǐng)域中通常已知的軟膏、油膏、凝膠或乳膏。對于直腸施用，化合物也可以制備成栓劑(例如使用常規(guī)栓劑基質(zhì)例如可可脂和其他甘油酯)或保留灌腸劑的形式以遞送。在一個實(shí)施方案中，可將活性化合物與防止化合物從身體快速消除的載體，例如控釋制劑，包括植入物和微嚢化釋放系統(tǒng)的栽體一起制備?？梢允褂蒙锟山到獾?、生物相容的聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、膠原、聚原酯和聚乳酸。制備這樣制劑的方法對本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。材料也可從例如Alza公司和Nova制藥公司商購獲得。脂質(zhì)體混懸液(包括靶向于含有病毒抗原單克隆抗體的感染細(xì)胞的脂質(zhì)體)也可作為藥學(xué)可接受的載體使用。這些可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法制備，例如，描述于美國專利第4，522，811號。配制便于施用和使劑量一致的劑量單位形式的口服或腸胃外組合物是特別有利的。如本文所用"劑量單位形式"指適合作為用于所治療的患者的單一劑量的的物理離散單元；每個單元含有預(yù)先確定的計(jì)算量的以產(chǎn)生所需治療效果的活性化合物與所需的藥物載體。本發(fā)明的劑量單位形式的規(guī)格取決于且直接依賴于活性化合物的獨(dú)特特性和要達(dá)到的特定治療效果，以及將這樣的活性化合物配藥用于治療個體的領(lǐng)域固有的限制。通過標(biāo)準(zhǔn)的藥學(xué)操作，可以在細(xì)胞培養(yǎng)或?qū)嶒?yàn)動物中測定這樣的化合物的毒性和治療效能，例如用于測定LD5。(50%群體致死的劑量)和ED50(在50。/。群體中治療上有效的劑量)。毒性效應(yīng)和治療效應(yīng)的劑量比是治療指數(shù)，可以表達(dá)為LD5。/ED5。。優(yōu)選呈現(xiàn)高治療指數(shù)的化合物。雖然可以使用呈現(xiàn)毒副作用的化合物，但是需要仔細(xì)設(shè)計(jì)將化合物耙向于患病組織的遞送系統(tǒng)，以將對未感染細(xì)胞的潛在損害減到最小，并由此減少副作用。由細(xì)胞培養(yǎng)物試驗(yàn)和動物研究中獲得的數(shù)據(jù)可用于設(shè)計(jì)用于人類的劑量范圍?；衔锏膭┝績?yōu)選位于包括具有很小或沒有毒性的ED5。循環(huán)濃度的范圍內(nèi)。劑量可以在該范圍內(nèi)變化，這取決于使用的劑型和使用的施用途徑。對于在本發(fā)明方法中使用的任意化合物，可從細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)估計(jì)最初的治療有效劑量?？梢栽趧游锬Ｐ椭性O(shè)計(jì)劑量，以獲得包括在細(xì)胞培養(yǎng)物中測定的IC5。(也就是達(dá)到半數(shù)最大癥狀抑制的實(shí)驗(yàn)化合物濃度)的循環(huán)血漿濃度范圍。這樣的信息可用于更準(zhǔn)確的確定人類的有用劑量?？梢酝ㄟ^例如高效液相色譜，測定血漿水平。藥物組合物可以與施用說明書(例如書面說明書)一起，包括在容器、包裝或分配器中，更具體地，這樣的說明書指出了使用該活性劑來治療本文公開的病癥或疾病，包4舌與Siglec-8表達(dá)細(xì)胞有關(guān)的疾病或病癥。本發(fā)明也可以用于增加特定治療劑(例如蛋白，肽和抗體)在血流或其它生物流體中的半衰期或維持其穩(wěn)定性。下面的非限制性實(shí)例解釋了本發(fā)明。本文提及的所有文件在本文中整體引作參考。實(shí)施例1W^^^為、子;##,靡遂織尹--葡潛罄^潛茅^活遂和f廯^容敎^教詢胃腸道組織勻漿的制備和胃腸道(腔)內(nèi)容物聲處理從雄性遠(yuǎn)系雜交種SpragueDawley大鼠切離胃腸(GI)道的回腸、盲腸、橫結(jié)腸和降結(jié)腸部分。然后取出每個部分的腔內(nèi)容物，并稱重。然后用冰冷的O.9%w/v氯化鈉溶液徹底沖洗每個組織部分，并稱重。然后使用Ultra-Turrax組織勻漿器，在冰冷的磷酸鈉緩沖液中勻漿化回腸、盲腸、橫結(jié)腸和降結(jié)腸10分鐘。也以相同方式，勻漿化從回腸、盲腸、橫結(jié)腸和降結(jié)腸回收的腔內(nèi)容物。然后，對所有樣品進(jìn)行聲處理破碎4分鐘，隨后在6000《av4°C離心30分鐘。使用BCA方法，對得到的上清液定量蛋白含量。肝組織勻漿的制備將肝稱重，然后在含有0.2%v/vTritonXlOO的水冷的20mMTris/HClpH7.5緩沖液中勻漿化5-10分鐘，隨后在6000&v4°C離心30分鐘。使用BCA方法，對上清液定量蛋白含量，等分，并在-20。C儲存?zhèn)溆谩?_甲基-7-羥基重豆素(4-MU)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備為了這些實(shí)施例的目的，將1單位的p-葡糖醛酸糖苷酶活性定義為每mg/hr釋放出的l謂l的4MU(Sands爭尸rof歸/s/or7>a/^/"er//yyewosc/e/ce263-274,1996)。因此，為了將相對熒光(來自測定的組織和腔內(nèi)容物勻漿)轉(zhuǎn)化成酶活性，制備了范圍為0-10單位p-葡糖醛酸糖苷酶活性的4-MU的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在測定開始前，將肝勻漿稀釋至0.8mg/mL，并將胃腸道和腔內(nèi)容物稀釋至0.lmg/ml。將10mg/ml的才莫態(tài)分子量860kDa和10kDa的乙酰透明質(zhì)酸原液加入表l的稀釋樣品中。以此方式，當(dāng)10(^1每種樣品用于測定時，HA與固定量的蛋白的濃度范圍是10pg,40jug，80pg和lOOpgHA/jxg蛋白。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>將25mg/ml的分子量<2kDa的乙酰透明質(zhì)酸原料加入表2的稀釋樣品中。以此方式，當(dāng)100m1每種樣品用于測定時，HA與固定量的蛋白的濃度范圍是10pg，40jLig，80pg和10(VgHA/pg蛋白。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>加入HA后，徹底混合所有樣品，然后在37。C溫育過夜，此后將它們用于P-葡糖醛酸糖苷酶活性的定量。p-葡糖醛酸糖苷酶測定96孔平板方法對于胃腸道測定，使用100pl樣品(3.33jig)，100一底物和IOO一終止緩沖液。在96-孔黑色澄清底平板中，一式三份地進(jìn)行測定。對于對照樣品，使用等體積的75mM磷酸鐘緩沖液替代所用的生物樣品。通過向每個實(shí)驗(yàn)孔和空白孔中加入適當(dāng)體積的500nM4-曱基-7-羥基重豆素基-p-D-葡萄糖醛酸苷(4-MUBG)底物，開始反應(yīng)。在37°C溫育平板1小時，此后向每個孔中加入終止緩沖液。然后在FluostarOptima平板讀數(shù)器中，記錄在每個孔中產(chǎn)生的產(chǎn)物的量，在350nm激發(fā)，并在450nm記錄熒光。實(shí)施例2沐z/v,y定W求^和為\子量^/"開/-薪潛罄^潛茅雜活^的教詢在用于測定之前，將肝勻漿原料稀釋至0.8mg/mL。在磷酸鉀緩沖液中，將乙酰透明質(zhì)酸(860kDa，10kDa和〈2kDa)稀釋至8mg/ml，3.2mg/ml,1.6mg/ml，0.4mg/ml，0.2mg/ml，0.04mg/ml，0.02mg/ml和0.0008mg/ml。然后將等體積的HA的每種稀釋制品與0.8mg/ml肝勻漿的等分試樣徹底混合，在37。C溫育過夜。次日，將樣品簡單地輕打混合，然后定量P-葡糖醛酸糖苷酶活性。樣品制備參見表3:表3試管編號HA濃度，mg/mlHgHA/pg蛋白18mg/ml23.2mg/mlg31.6mg/ml2^g40.4mg/ml0.5網(wǎng)50.2mg/ml0.25pg60.04mg/ml0.05pg70.02mg/ml0.025ng80.0008mg/ml0.OOlpg數(shù)據(jù)分析施用空白對照樣品，校正粗熒光讀數(shù)的背景熒光。使用已知量的4-MU的標(biāo)準(zhǔn)曲線和(5-葡糖醛酸糖苷酶活性單位，將校正過的熒光讀數(shù)轉(zhuǎn)換成酶活性單位。然后用下式確定p-葡糖醛酸糖苷酶酶活性的百分比變化無HA對照的百分比變化-樣品熒光inn—100.無/w對照的熒光測定百分比變化的平均值、百分比變化的標(biāo)準(zhǔn)差(SD)和百分比變化的平均值的標(biāo)準(zhǔn)誤差(SEM)來繪圖。一式三份地進(jìn)行所有試驗(yàn)測定。建立用于P-葡糖醛酸糖苷酶活性定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線為了這些實(shí)施例的目的，l單位的P-葡糖醛酸糖苷酶相當(dāng)于產(chǎn)生lnmol的4-MU/hr(Wolfe&Sands尸r由cc7s尸ortoe7>a/7s/er//^i/r^c2'e力ce，1996)。通過改變反應(yīng)終產(chǎn)物4-MU的濃度，制備將相對焚光單位與已知量的p-葡糖醛酸糖苷酶活性相關(guān)聯(lián)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過使用0.Olpm-50nm4-MU的濃度范圍，制備相對于0.01-10單位的(5-葡糖醛酸糖苷酶活性的標(biāo)準(zhǔn)曲線。在該0.OOl-5單位范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)曲線是線性的，平均r2系數(shù)=0.99(n=5)，如表4所示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>實(shí)施例3體外測定HA分子量和濃度對胃腸道組織勻漿中B－葡糖醛酸糖甘酶活性的影響<2kDaHA的評價測定了<2kDaHA對胃腸道組織勻漿中p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響。在表5和圖1中顯示了p-葡糖醛酸糖苷酶單位的定量，其表達(dá)為p-葡糖醛酸糖苷酶活性相對于未處理的組織樣品的百分比變化(平均值土SEM)。在40]Lig，80jng和lOOpg的HA時，p-葡糖醛酸糖苷酶活性顯著降低。在該測定中使用最高濃度的HA(100pg)，p-葡糖醛酸糖苷酶活性的抑制最高達(dá)64%。由于測得盲腸含有最高p-葡糖醛酸糖苷酶活性，進(jìn)行8-0.5pgHA/pg蛋白的HA進(jìn)一步劑量滴定。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>測定〈2kDaHA的活性閾值濃度進(jìn)一步滴定HA,包含下述范圍0.5-8|ugHA/pg蛋白，并從源自盲腸的組織勻漿重復(fù)測定。在表6和圖2中顯示了p-葡糖醛酸糖苷酶單位的定量，其表達(dá)為活性相對于未處理的組織樣品的百分比變化(平均值土SEM)。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>10kDaHA的評價測定10kDaHA對胃腸道組織勻漿中p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響。在表7中，顯示了p-葡糖醛酸糖苷酶單位的定量，其表達(dá)為(5-葡糖醛酸糖苷酶活性相對于未處理的組織樣品的百分比變化(平均值土SEM)。40jLtg，80|iig和100pgHA/^g蛋白顯著增加|3-葡糖醛酸糖苷酶活性。在100|ugHA/pg組織時，p-葡糖醛酸糖苷酶活性的增加最高達(dá)43%。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>860kDaHA的評價測定860kDa分子量HA對胃腸道組織勻漿中p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響。在表8中顯示了p-葡糖醛酸糖苷酶單位的定量，其表達(dá)為P-葡糖醛酸糖苷酶活性相對于未處理的組織樣品的百分比變化(平均值士SEM)。在80]Lig和100pgHA/Vg蛋白時，回腸、盲腸和橫結(jié)腸中的P-葡糖醛酸糖苷酶活性增加。隨著HA的濃度從^8(VgHA/)ag蛋白增加，p-葡糖醛酸糖苷酶活性的增加最高達(dá)41%。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>實(shí)施例4伴^7辦;CWWi和為、于量對f應(yīng)iff織哞/-薪潛磬^潛茅^^Vi々f靡^容參^參詢雄性Sprague-Dawley大鼠購自MonashAnimalCentralServices(MonashUni雨isUy，Clayton)。適應(yīng)1周后，將大鼠隨機(jī)分配至各個治療組(/7=5)。然后限制每個動物，并在側(cè)尾靜脈單次推注注射實(shí)驗(yàn)物(參見表9)。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>單次靜脈內(nèi)注射表9列出的每種實(shí)驗(yàn)物，在90分鐘、3小時和6小時時間點(diǎn)，處死每個治療狀況的大鼠。切離血液和肝的一部分、小腸、大腸、脾和腎，稱重，并立即冷凍，直到通過HPLC對CPT-ll、SN-38和SN-38G進(jìn)行定量。通過加入400pl在甲醇和乙腈(60:40)中的0.1%正磷酸，從最大體積(2Q0pL)的血液提取CPT-ll和SN-38。然后將每個樣品渦旋1分鐘，隨后在室溫在恒定攪拌下提取1小時。在結(jié)束提取時，將樣品渦旋2分鐘，在13000^v、4。C離心5分鐘。然后將上清液風(fēng)干。在20(ViHPLC流動相中重配風(fēng)干的樣品后，將樣品渦旋5分鐘，在13000^v、4。C離心5分鐘。然后通過反相高效液相色譜(HPLC),使用表IO所示的洗脫條件分析得到的上清液。表10用于檢測和定量CPT-11和SN-38的HPLC條件<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>從器官和糞便樣品提取CPT-11和SN-38在CPT-11和SN-38提取之前，將器官和糞便樣品勾漿化。然后，通過向每份50mg樣品中加入400W在曱醇和乙腈(60:40)中的0.1%正磷酸，從器官和糞便樣品提取CPT-11和SN-38。渦旋2分鐘后，在定期攪拌下，在室溫溫育所有樣品1小時，然后在13，00(^av、4°C離心樣品10分鐘。將得到的上清液轉(zhuǎn)移至干凈的埃彭道夫管，風(fēng)干，然后在200pLHPLC流動相中重配。在13,000&v、4°C重新離心所有樣品5分鐘，然后使用表10所示的洗脫條件，通過反相高效液相色譜(HPLC)進(jìn)行分析。估^j&濕減遂織々《哞的57\K《6VA"f將血樣、組織勻漿和來自小腸和大腸的糞便物與15-倍體積(w/v)的冷甲醇(-20。C)混合，然后渦旋，直到形成均質(zhì)溶液。在300(^av、4°C離心2-分鐘后，將上清液轉(zhuǎn)移至干凈的埃彭道夫微量離心管。使用TSK凝膠ODS-80TS柱(150x4.6mm內(nèi)徑)和流動相梯度進(jìn)行色譜分離。流動相A和B分別是0.075M醋酸銨緩沖液(pH6.4)和乙腈。根據(jù)下述流動相B的線性方案，采用梯度洗脫時間0，15%;6min，30%;9min，55%;13min，55%和15min，15%;其中流速是1.1ml/min，總運(yùn)行時間20min，柱溫度維持在40°C，自動取樣器維持在4。C。熒光檢測器設(shè)定在激發(fā)波長355nm，發(fā)射波長515nm。將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的峰面積手工輸入表格程序中，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。從標(biāo)準(zhǔn)曲線外推樣品的量，并如下計(jì)算樣品的終濃度濃度=從標(biāo)準(zhǔn)曲線外推的量X稀釋因子/注射體積CPT-ll或SN-38的量=濃度X重配體積樣品中CPT-ll或SN-38濃度=CPT-ll或SN-38的量/外推的樣品的量圖中表示的數(shù)據(jù)是平均值士sem。通過使用參數(shù)t-檢驗(yàn)分析的統(tǒng)計(jì)分析，進(jìn)行治療組和時間點(diǎn)之間的對比。正態(tài)分布失敗后，使用Mann-Whitney秩和檢驗(yàn)進(jìn)行無參數(shù)分析。結(jié)果表11-14總結(jié)了從表9所示的所有試驗(yàn)組得到的CPT-ll、SN-"和SN-38G的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)數(shù)據(jù)。表11當(dāng)以60mg/kg的劑量施用依立替康時，HA劑量調(diào)控對SN-38在小腸中的組織分布的影響(見^力<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>表12當(dāng)以60mg/kg的劑量施用依立替康時，HA劑量調(diào)控對SN-38G在、腸中的組織分布的影響(見溶力<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>從表11-14中可以看出，含有依立替康的HA制劑(HyCAMP)發(fā)揮的主要藥代動力學(xué)和藥效學(xué)效應(yīng)是i.在血流中存在更多的CPT-ll代謝物SN-38，這證實(shí)改變了藥物的膽汁分泌和腸運(yùn)輸，這是HA改變cMOAT運(yùn)輸?shù)鞍椎幕钚院屯饷谕ǖ赖慕Y(jié)果；ii在小腸中，存在更少的SN-38和更多的SN-38G,這明確證實(shí)HA可以抑制腸p-葡糖醛酸糖普酶的活性，這會導(dǎo)致降低的胃腸毒性。表13a:HyCAMP(13/30)和HyCAMP(26/30)和HyCAMP("/30)制劑在大鼠中的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)<table>tableseeoriginaldocumentpage42</column></row><table>表13b:<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>表14a:HyCAMP(13/60)和HyCAMP(26/60)和HyCAMP(55/60)制劑在大鼠中的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>表14b:HyCAMP(13/60)和HyCAMP(26/60)和HyCAMP(55/60)制劑在大鼠中的藥代動力學(xué)和藥效學(xué)<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>實(shí)施例5游定W為、f葡*罄^潛#雄活#^影詢測定了860，10和〈2kDaHA對肝p-葡糖醛酸糖普酶活性的影響。在表15中顯示了p-葡糖醛酸糖苷酶單位的定量，其表達(dá)為p-葡糖醛酸糖苷酶活性相對于未處理的組織樣品的百分比變化(平均值土SEM)。盡管10和860kDaHA使p-葡糖醛酸糖苷酶的活性增加了最高達(dá)36%，<2kDaHA使該酶顯著抑制了約61%。表15<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>實(shí)施例6乙教邊效l^對j凝^ji夢i(T戶7W"和&的^謝參和5W-JM的僻/力為、必和濕^戎滲的影詢用于靜脈內(nèi)給藥的HyCAMPTM和依立替康的制備將20mg/mL的CPT-ll原液在0.9%(w/v)無熱原注射級NaCl中稀釋至10mg/mL,并根據(jù)各動物質(zhì)量，用于制備各依立替康注射劑，其目的是遞送30或60mg/kg的依立替康。將10mg/ml的HA在注射用水中的溶液用作原料HA,其中根據(jù)動物質(zhì)量個別地制備注射劑以〗更施用26.6mg/kgHA。在即將注射前，制備HyCAMPTM(與依立替康一起配制的乙酰透明質(zhì)酸)。然后根據(jù)各動物質(zhì)量，制備HyCAMpTM注射劑，其目的是遞送26.6mg/kg動物質(zhì)量的HA和60和30mg/kg動物質(zhì)量的依立替康。實(shí)驗(yàn)動物模型xf在滲;^動參說遂將雄性Wistar大鼠隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組(n-6/組)。當(dāng)大鼠達(dá)到希望的起始重量280-340g時，開始治療。在實(shí)驗(yàn)之前，將大鼠禁食過夜，自由接近飲用水。通過腹膜內(nèi)(i.p)注射氨基甲酸乙酯(1.2g/kg)麻醉大鼠。通過中線剖腹術(shù)暴露小腸。將聚乙烯管插入上十二指腸和回盲連接處。用37°C鹽水洗滌小腸，并以1.3ml/min的流速，從十二指腸經(jīng)小腸至回盲連接處，用乳酸鹽化的林格溶液灌注。經(jīng)2-3min后，通過股靜脈靜脈內(nèi)施用30mg/kg或60mg/kg的CPT-ll或HyCAMP。給藥后，進(jìn)行5-min灌注進(jìn)行平衡。在0，7.5,15,30，60,120，180和240min,經(jīng)插入股動脈的插管抽取血樣(O.4ml)。還在0，15，30,60，120，180和240min，從回腸流出物收集灌注液。在0，15，30，60，120，180和240min，從插入總膽管的插管收集膽汁樣品。立即在10，000gav、4。C離心2min分離血清，并在測定前儲存在-80。C。完成血液、膽汁和灌注液的收集后，處死大鼠，取出組織(肝，脾，腎和腸)，立即儲存于-70oC。檢測和定量所有(內(nèi)酯和羧酸鹽形式)的CPT-11、SN-38和SN-38G的分析方法HPLC系統(tǒng)和運(yùn)行條件使用TSK凝膠ODS-80TS柱(150x4.6mmI.D.)和流動相梯度實(shí)現(xiàn)色譜分離。流動相A和B分別是0.075M醋酸銨緩沖液(pH6.4)和乙腈。根據(jù)下述流動相B的線性方案，采用梯度洗脫時間0，15%;6min，30%;9min，55%;13min,55%和15min，15%;其中流速是1.1ml/min，總運(yùn)行時間20min，柱溫度維持在40°C,自動取樣器維持在4。C。熒光檢測器設(shè)定在激發(fā)波長355nm,發(fā)射波長515nm。樣品制備和HPLC分析血清，腸液和膽汁配有熒光檢測器的HPLC系統(tǒng)用于測定CPT-11，SN-38和SN-38G。簡而言之，將50-100在聚丙烯試管中的等分試樣加入100ul乙腈，后者含有0.2jag/ml喜樹堿作為內(nèi)標(biāo)。將試管渦旋混合5秒，在8000rpm、-10。C離心2min。將一部分上清液(IOOpl)轉(zhuǎn)入新試管，加入100pl磷酸(pH3.0)。將溶液簡單地渦旋混合，在室溫放置1h,將CPT-11，SN-38和SN-38G轉(zhuǎn)化成它們各自的內(nèi)酯形式。將20pl等分試樣注射進(jìn)上述柱。組織樣品為了分析組織水平，在15-倍體積(W/V)的冷甲醇(-20。C)中均質(zhì)化組織樣品，然后在3000rpm、4。C離心2min。將上清液(100pl)轉(zhuǎn)入新試管，向其中加入70^1流動相緩沖液。將溶液簡單地渦旋混合，將5Qpl等分試樣注射進(jìn)柱。藥代動力學(xué)分析CPT-ll，SN-38，SN-38G和APC通過梯形法則，計(jì)算總CPT-ll、SN-38和SN-38G的血清濃度-時間曲線下面積(AUC)。通過將4h期間分泌進(jìn)膽汁或外吸進(jìn)灌注液的藥物總量分別除以O(shè)h-4h的AUC，計(jì)算CPT-11、SN-38、SN-38G和APC的表觀膽和腸清除。未配對的t檢驗(yàn)用于評估藥代動力學(xué)參數(shù)。認(rèn)為p<0.05的概率水平是顯著的。實(shí)驗(yàn)組，劑量和給藥頻率6個治^i^-W^^T迷秀參遂合和摩迷W量。7"面^"辦:r卓^靜脈力g射每神賴浙和浙量,'組1:依立替康(30)組2:HyCAMPTM(26.6/30):(包含HA和依立替康的制劑)組3:在依立替康(30)之前15分鐘施用乙酰透明質(zhì)酸(26.6)組4:依立替康(60)組5:HyCAMPTM(26.6/60):(包含HA和依立替康的制劑)組6:乙酰透明質(zhì)酸(26.6)使用下式計(jì)算施用的劑量注射體積(mL)=注射前注射器質(zhì)量(g)-注射后注射器質(zhì)量(g)注射質(zhì)量(mg)=藥物濃度/注射溶液中的HA(mg/raL)X注射體積(mL)施用劑量(mg/kg)=注射質(zhì)量(mg)x1000/大鼠質(zhì)量(g)靜脈內(nèi)施用30mg/kg依立替康后的血清濃度在HPLC分析之前，所有提取的樣品進(jìn)行酸化。因此，所有顯示的結(jié)果代表內(nèi)酯形式的CPT-ll、SN-38和SN-38G。膽汁分泌特性，依立替康(30)在給大鼠施用依立替康(30)、HyCAMPTM(26.6/30)或在依立替康(30)之前15分鐘的HA(26.6)后，在確定的時間點(diǎn)從回腸流出物和插入總膽管的插管收集灌注液，并分析其中的CPT-ll、SN-38、SN-38G和APC。CPT-11的膽汁分泌圖5a顯示了CPT-ll的累積膽汁分泌速率。接受HyCAMPTM的大鼠傾向于分泌更少的CPT-11,但是差異不顯著(圖5a)。施用HA、然后施用依立替康的大鼠中的CPT-ll膽汁分泌與在CPT-ll治療組中觀察到的結(jié)果相當(dāng)(圖5a)。在90至240分鐘之間，HyCAMPTM和HA+依立替康組之間的差異是統(tǒng)計(jì)上顯著的(PSO.05)，其中制劑HyCAMPTM導(dǎo)致CPT-11更低的累積膽汁分泌。SN-38的膽汁分泌在僅用HyCAMPTM和僅用依立替康治療組中觀察到了SN-38的類似膽汁分泌特性(圖5b)。當(dāng)給大鼠施用HA、然后施用CPT-11時，在給藥后15分鐘，SN-38的量比其它治療組低約2.5-倍(圖5b:1300ngCPT-ll組相對于522HA+CPT-11組；p^0.05)。該組中SN-38更低的累積膽汁分泌是一致的趨勢，但是在所有隨后的時間點(diǎn)不顯著。SN-38G的膽汁分泌當(dāng)對比SN-38G的膽汁分泌時，HyCAMPTM治療的大鼠傾向于含有比僅接受依立替康的大鼠更少的無活性代謝物(圖5c)。這些差異不顯著。施用HA、然后施用依立替康的大鼠中的SN-38G膽汁分泌與CPT-ll治療組相當(dāng)(圖5c)。令人感興趣地，在給藥后30和240分鐘之間，HyCAMPTM和CPT-ll之前施用HA的治療組之間的差異是顯著的，其中HyCAMPTM組在膽汁中含有更少的SN-38G(圖5c)。APC的膽汁分泌與在僅施用CPT-ll的大鼠中觀察到的結(jié)果相比，施用HyCAMPTM會顯著降低APC的膽汁分泌(低約5-倍)(圖5d)。這與在該治療組中觀察到的APC的低血清水平相關(guān)聯(lián)。在所有時間點(diǎn)，這些結(jié)果是顯著的(ps0.05)。在CPT-11之前施用HA的大鼠中存在類似的趨勢，其中觀察到APC的更少膽汁分泌的趨勢，但是與依立替康治療的大鼠相比不顯著(圖5d)。在給藥后30和60分鐘，HyCAMPTM和CPT-11之前施用HA的治療組之間的APC膽汁分泌的差異是顯著的。膽汁分泌特性，依立替康(60)CPT-11的膽汁分泌母本化合物CPT-ll代表著在依立替康和HyCAMPTM治療的動物中將要通過膽汁分泌的注射物的絕大部分。在施用HyCAMPTM的大鼠中，累積膽汁分泌是在施用依立替康的動物中觀察到的大約一半(圖6a;在90分鐘時間點(diǎn)1388pgCPT-ll相對于653|ugHyCAMPTM:化o.05)。在30和180分鐘之間，治療組之間的差異是顯著的。SN-38的膽汁分泌活性代謝物SN38的膽汁分泌是相當(dāng)?shù)?，無論大鼠是施用HyCAMPTM還是依立替康(圖6b)。在最后時間點(diǎn)的值僅代表一只大鼠，因此在240分鐘時SN38水平與HyCAMPTM值的對比評價是不可能的。SN-38G的膽汁分泌當(dāng)依立替康作為HyCAMPtm施用時，會影響無活性代謝物SN-38G的膽汁分泌(圖6c)。盡管僅僅在120分鐘時間點(diǎn)是顯著的，這時分泌約少2-倍的SN-38G,注射HyCAMPTM的大鼠中的總趨勢是通過膽汁途徑分泌更少的SN-38G。APC的膽汁分泌正如在30mg/kg給藥實(shí)驗(yàn)中觀察到的，HyCAMP的最顯著的作用是對于無活性代謝物APC的膽汁分泌(圖6d)，其中與僅接受依立替康的那些相比，在HyCAMP大鼠中觀察到少約5-至2-倍的APC。在30-和120分鐘之間，治療組之間的差異是顯著的(p^0.05)。該特性與在該治療組中觀察到的APC的低血清水平相關(guān)聯(lián)。腸外吸滲，依立替康(30)CPT-11和代-浙物的腸外吸滲腸累積外吸滲代表經(jīng)腸膜通過外吸滲從血液進(jìn)入腸腔的CPT-ll和其代謝物的量。在該分泌模式內(nèi)，HyCAMPTM(26.6/30)不僅對CPT-11具有最顯著的作用，而且對SN-38、SN-38G和APC具有最顯著的作用。這些圖分別顯示在圖7a，b，c和d中。CPT-ll的腸外吸滲進(jìn)入接受HyCAMPTM的大鼠的腸腔的CPT-11的量比在施用CPT-11的動物中觀察到的量幾乎少2-倍(圖7a:120min525^gCPT-11相對于287網(wǎng)HyCAMPTM)。除了前2個時間點(diǎn)外，所有其它點(diǎn)都是顯著的。CPT-ll代表在腸腔中定量的所有代謝物的絕大部分。為了使HA發(fā)揮它對CPT-11的腸外吸滲的作用，必須以H'/CAMPtm的形式施用。從在依立替康之前施用HA的大鼠得到的數(shù)據(jù)支持了該論點(diǎn)，其中用僅接受依立替康的大鼠觀察到CPT-ll腸分泌的類似特性(圖7a)。從60分鐘至實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，HyCAMPTM和HA+CPT-11的CPT-ll腸分泌之間的差異是顯著的(圖7a)。SN-38的腸外吸滲當(dāng)以HjtCAMPtm的形式施用CPT-ll時，在回腸灌注液中收集到比施用依立替康的大鼠少約2-倍的活性代謝物SN-38(圖7b:120min;1411ng/minCPT-11相對于696ng/minHyCAMP:/^0.05)。在實(shí)驗(yàn)的60和MOmin之間，2個治療組之間的差異是顯著的。在接受依立替康之前施用HA的大鼠中存在類似的趨勢，但是該組和依立替康治療組之間的差異不顯著(圖7b)。來自HyCAMPTM和HA+CPT-ll治療的大鼠的SN-38腸外吸滲數(shù)據(jù)相當(dāng)。SN-38G的腸外吸滲在施用依立替康的大鼠的腸腔中表征的無活性代謝物SN-38G的量顯著不同于在接受HyCAMPTM的大鼠中觀察到的量(圖7c)。更具體地，在HyCAMPTM治療的大鼠中發(fā)現(xiàn)的SN-38G的量比依立替康組少2至幾乎3倍(圖7c:180min;22)ug依立替康組相對于9pgHyCAMPTM:化O.05)。在實(shí)驗(yàn)的60至240min之間，治療組之間的差異是顯著的。在依立替康之前施用HA的大鼠中仍然影響SN-38G的腸外吸滲(圖7c)。從90分鐘至實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)，接受該給藥方法的大鼠與只注射依立替康的大鼠之間的差異是顯著的(圖7c:180min;22pg依立替康組相對于15pgHA+CPT-11:p^0.05)。在HyCAMPTM組中觀察到SN-38G腸外吸滲的最大程度的調(diào)控，它在所有時間點(diǎn)都顯著少于在依立替康之前施用HA的大鼠。APC的腸外吸滲正如在血清和膽汁分泌特性中觀察到的，HyCAMPTM對APC的腸外吸滲發(fā)揮最顯著作用，其中與接受HyCAMPTM的大鼠相比，2個治療組之間的倍數(shù)差異是少約14至27倍的APC(見圖7d:1500ng依立替康組相對于92ngHyCAMPTM組)。在所有實(shí)驗(yàn)時間點(diǎn)，這2個組之間的差異是顯著的。另外，當(dāng)在依立替康之前施用HA時，在腸腔中存在更少APC積累的趨勢，但是不顯著。腸外吸滲，依立替康(60)CPT-11的腸外吸滲CPT-11代表經(jīng)腸膜通過外吸滲從血液進(jìn)入腸腔的注射物的絕大部分(圖8a)。在治療組之間，以該方式進(jìn)入腸腔的CPT-11的量相當(dāng)。SN-38的腸外吸滲在15和30分鐘的起始時間點(diǎn)，進(jìn)入接受HyCAMPTM的大鼠的腸腔的SN-38的量比僅接受依立替康的大鼠多約2-倍(圖8b)。在給藥后180分鐘之前，這是一致的趨勢，但是2個組之間的差異不顯著。當(dāng)考慮施用HyCAMPTM的大鼠的血液循環(huán)中SN-38的升高水平時，這是特別令人感興趣的，其發(fā)現(xiàn)所述水平顯著高于依立替康治療大鼠。SN-38G的腸外吸滲在無活性代謝物SN-38G的情況下，當(dāng)對比2個治療組時，在腸腔中發(fā)現(xiàn)了類似值，盡管在較晚的時間點(diǎn)(180分鐘)，在接受HyCAMPTM的大鼠中觀察到了更少的SN-38G(圖8c)。這些值是不顯著的。APC的腸外吸滲與以前的觀察相一致，在注射后15分鐘的所有隨后時間點(diǎn)，接受HyCAMPTM的大鼠中APC的腸分泌顯著更低(低約3至5倍)(圖8d)。數(shù)4居的討i侖該研究描述了乙酰透明質(zhì)酸對CPT-11、SN-38、SN-38G和APC的藥代動力學(xué)的影響。除了這些參數(shù)外，還評價了這些化合物經(jīng)膽汁途徑分泌和從血流外吸滲進(jìn)腸腔的速率。進(jìn)行該研究來考察乙酰透明質(zhì)酸降低依立替康的胃腸道毒性的可能機(jī)理。與接受相同劑量的單獨(dú)的依立替康的大鼠相比，乙酰透明質(zhì)酸/依立替康制劑降低胃腸道毒性。組織病理學(xué)檢查清楚地證實(shí)了小腸和大腸中嚴(yán)重性較低的損傷。更具體地，與接受單獨(dú)的依立替康的那些大鼠相比，當(dāng)用本發(fā)明的制劑治療時，大鼠的回腸和盲腸區(qū)域更少地受到影響。除了臨床前觀察外，在最近完成的I期臨床試驗(yàn)中，還觀察了患者的胃腸道毒性的減少。CPT-ll和SN-38都具有oc-羥基-3-內(nèi)酯環(huán)，它可以經(jīng)歷可逆的依賴于pH的水解，以及每種化合物在水溶液中的內(nèi)酯化反應(yīng)。封閉的內(nèi)酯形式在酸性條件下占優(yōu)勢，開環(huán)的羧酸酯形式在堿性條件下占優(yōu)勢。已經(jīng)研究了這兩種形式在CPT-ll和SN-38之間的相互轉(zhuǎn)化，其中已經(jīng)顯示，在pH7.6和5.6，以內(nèi)酯和羧酸酯形式存在的喜樹堿的百分比分別是11.7-和90.8%。另外已經(jīng)顯示，在pH7.4和6，內(nèi)酯和羧酸酯形式的CPT-11和SN-38的百分比分別是10-和90%[52]。因此，在血液的優(yōu)勢pH(約7.4)下，該平衡有利于水解以打開內(nèi)酯環(huán)，并產(chǎn)生羧酸酯形式。我們已經(jīng)進(jìn)行了體外研究來檢查不同分子量的HA對參與CPT-ll的生物轉(zhuǎn)化的下述酶的影響1.羧酸酯酶2.p-葡糖醛酸糖普酶將肝和胃腸道的組織勻漿用作每種酶的來源。這些研究清楚地證實(shí)，HA不會影響羧酸酯酶的活性，但是〈2kDaHA片段在生理相關(guān)濃度會抑制肝和胃腸道提取物中p-葡糖醛酸糖苷酶的活性。CPT-11的肝活化后，存在的過量的HA片段(〈2kDa)可以抑制SN-38G解離成SN-38，導(dǎo)致更少的SN-38通過膽汁途徑分泌進(jìn)胃腸道。除了該機(jī)理外，抑制胃腸道腔中的P-葡糖醛酸糖普酶可以預(yù)防從SN-38G產(chǎn)生SN-38。測試的所有分子量的乙酰透明質(zhì)酸不能調(diào)控羧酸酯酶活性(沒有觀察到抑制或刺激作用)。當(dāng)考慮該研究的結(jié)果以及無活性代謝物APC降低的血清水平時，這些發(fā)現(xiàn)是重要的并需要記住。更具體地，乙酰透明質(zhì)酸會通過細(xì)胞色素P450途徑調(diào)控和/或抑制CPT-11的氧化代謝，這已經(jīng)導(dǎo)致形成更少的CPT-11無活性代謝物APC。在含有更高劑量的依立替康(60)的制劑中，HyCAMPTM(26.6/60)治療造成了類似的趨勢，該趨勢就血清SN-38水平和APC形成更引人關(guān)注。盡管與僅依立替康治療的大鼠相比，CPT-ll和SN-38G的水平類似，乙酰透明質(zhì)酸/依立替康治療的大鼠表現(xiàn)出顯著升高水平的SN-38,后者與顯著減少的APC相關(guān)聯(lián)。該結(jié)果加強(qiáng)了在更低劑量觀察到的結(jié)果，并表明依立替康/乙酰透明質(zhì)酸制劑的施用會以使CPT-ll轉(zhuǎn)入羧酸酯酶途徑、產(chǎn)生更多SN-38的方式，擾亂細(xì)胞色素P450氧化途徑。與僅施用依立替康(30)的大鼠相比，施用乙酰透明質(zhì)酸/依立替康(26.6/30)制劑的大鼠在血清-時間過程實(shí)驗(yàn)的早期時間點(diǎn)表現(xiàn)出一些微弱差異。更具體地，在注射后的平衡(5min)階段后，觀察到更少的CPT-11,這與SN-38水平的短暫升高有關(guān)。盡管隨后的時間點(diǎn)不顯著，將該數(shù)據(jù)與僅接受依立替康的大鼠相比，血清中存在更低CPT-ll和更高SN-38水平的趨勢。在CPT-11的生物激活之外，HA對SN-38與葡萄糖醛酸苷部分輒合形成的SN-38G的水平造成更明顯的作用，即尿苷二磷酸葡糖醛?；D(zhuǎn)移酶(UGT)催化的解毒步驟。在給藥后最高達(dá)30分鐘，乙酰透明質(zhì)酸/依立替康和僅用依立替康的治療組之間的差異是顯著的。僅在接受乙酰透明質(zhì)酸/依立替康制劑的大鼠中觀察到這樣的減少SN-38G形成的作用。令人感興趣地，如果我們檢查在接受依立替康之前15分鐘施用HA(26.6)的大鼠中SN-38G的血清時間過程特性，SN-38G的水平最初增加，然后保持圩高最高達(dá)給藥后120分鐘，而施用依立替康的大鼠具有類似的起始增加，其下降至與用乙酰透明質(zhì)酸/依立替康制劑(其中乙酰透明質(zhì)酸和依立替康一起給藥)治療的動物相當(dāng)?shù)乃?。這代表著肝j5-葡糖醛酸糖苷酶的抑制，其中在依立替康之前15分鐘施用HA已經(jīng)造成參與HA代謝的酶、尤其p-葡糖醛酸糖苷酶的飽和動力學(xué)。相反，乙酰透明質(zhì)酸/依立替康治療的大鼠沒有表現(xiàn)出該趨勢，這可能反映了組合制劑形式的HA已經(jīng)干擾了由UGT催化的SN-38向SN-38G的葡萄糖醛酸苷軛合反應(yīng)。在更高劑量的乙酰透明質(zhì)酸/依立替康(26.6/60)，分泌進(jìn)入腸中的CPT-ll和SN-38G的量是在僅用依立替康治療的大鼠中觀察到的量的約一半。它們是重要的發(fā)現(xiàn)，其中該消除途徑通過下述方式引起胃腸道毒性1.通過膽汁分泌進(jìn)腸中的SN-38會誘導(dǎo)胃腸道損傷；2.借助于固有腸微生物群的p-葡糖醛酸糖普酶活性，葡萄糖醛酸苷部分從SN-38G去軛合，產(chǎn)生SN-38(在SN-38G的膽汁分泌之后)；3.腸羧酸酯酶活性將CPT-11轉(zhuǎn)化成SN-38'"]。當(dāng)考慮該分泌途徑時，本發(fā)明的制劑已經(jīng)降低了進(jìn)入胃腸道的CPT-ll和SN-38和SN-38G的量。因此，在這樣做時，會預(yù)見到由于羧酸酯酶活性和SN-38G向SN-38的去軛合(這是由于腸腔中固有微生物群的p-葡糖醛酸糖苷酶活性)而產(chǎn)生更少的SN-38。環(huán)孢霉素A是P-gp和cM0AT的已知抑制劑，會造成施用依立替康后CPT-ll和SN-38向膽汁中分泌的減少。在施用乙酰透明質(zhì)酸/依立替康制劑后，觀察到CPT-11和SN-38向膽汁中分泌的類似減少，認(rèn)為乙酰透明質(zhì)酸會調(diào)控膽膜中cM0AT和/或P-gp的活性。這得到下述發(fā)現(xiàn)的支持，即在乙酰透明質(zhì)酸/依立替康(26.6/60)治療的大鼠中，血清SN-38水平明顯高于用依立替康治療的動物，而用乙酰透明質(zhì)酸/依立替康治療的動物中CPT-11和SN-38G的膽汁分泌減少，并且通過該途徑分泌的SN-38的水平與僅接受依立替康的動物相當(dāng)。由于血清CPT-ll水平相對地相當(dāng)，觀察到的血清SN-38水平的增加可能是由于減少的膽汁分泌。在這些實(shí)驗(yàn)中觀察到的藥代動力學(xué)干擾潛在地表明，HA已經(jīng)抑制了參與CPT-ll代謝的肝CYP3A4途徑，優(yōu)先將母本藥物轉(zhuǎn)向SN-38。乙酰透明質(zhì)酸減少外吸滲進(jìn)胃腸道腔中的CPT-ll、SN-38和SN-38G的量。當(dāng)將CPT-ll、SN-38和SN-38G的血清水平與它們的腸外吸滲特性相比較時，這是顯然的。當(dāng)治療組之間CPT-11的血清水平基本上相當(dāng)且血清SN-38適度增加時，乙酰透明質(zhì)酸/依立替康制劑會使通過該途徑進(jìn)入腸中的母本藥物和有毒代謝物的量減少約一半。只有當(dāng)CPT-ll以本發(fā)明制劑的形式施用時，才會影響該減少運(yùn)輸?shù)臋C(jī)理。在乙酰透明質(zhì)酸/依立替康治療組中觀察到的低水平的SN-38G部分地解釋了進(jìn)入胃腸道腔的較低水平的該無活性軛合物，與依立替康治療的大鼠相比，在依立替康之前接受HA的大鼠表現(xiàn)出在血清中有更多SN-38G的趨勢。在該環(huán)境下，該組大鼠仍然表現(xiàn)出顯著減少的從血液循環(huán)進(jìn)入腸腔的SN-38G,并表明HA受該運(yùn)輸機(jī)理的影響。無活性代謝物APC以類似方式受到影響，但是可能反映了開始時在血清中發(fā)現(xiàn)的低水平。在更高劑量的乙酰透明質(zhì)酸/依立替康(26.6/60)，CPT-ll和它的代謝物的腸外吸滲基本上不顯著，例外是APC。在乙酰透明質(zhì)酸/依立替康組中最明顯改變的血清代謝物是顯著增加的SN-38,而治療組之間SN-38的腸外吸滲相當(dāng)。僅在接受30mg/kg依立替康的治療組中，可以對比CPT-11和它的代謝物的組織分布，這是由于在接受依立替康(60)的大鼠中觀察到的毒性相關(guān)的死亡，其中僅一只大鼠存活至實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)。相反，接受乙酰透明質(zhì)酸/依立替康(26.6/60)的大鼠都存活，并證實(shí)當(dāng)該藥物自身施用時，該制劑不是急毒性的。在接受乙酰透明質(zhì)酸/依立替康或在依立替康之前15分鐘接受HA的大鼠中，進(jìn)入脾的依立替康顯著降低。令人感興趣地，在只接受依立替康的大鼠的脾中沒有檢測到SN-38，盡管表現(xiàn)出更大量的CPT-11。在該環(huán)境下，我們以前已經(jīng)證實(shí)，與只接受依立替康的大鼠相比，長期暴露于乙酰透明質(zhì)酸/依立替康(26.6/60)的大鼠在實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時表現(xiàn)出明顯較小的脾。進(jìn)入所有其它器官的CPT-11是相當(dāng)?shù)?，因此表明乙酰透明質(zhì)酸沒有對藥物在肝、腎、腸和肺中的生物分布發(fā)揮顯著作用，因此不是HA對依立替康治療后胃腸道誘發(fā)的毒性發(fā)揮保護(hù)作用的潛在機(jī)理。在脾和肺中發(fā)現(xiàn)的SN-38的量都顯著高于施用乙酰透明質(zhì)酸/依立替康的大鼠。在單獨(dú)施用依立替康后，在脾或肺中不能檢測到SN-38。更重要的是，在所有治療組間相對相當(dāng)?shù)腃PT-ll和代謝物在腸中的分布表明乙酰透明質(zhì)酸/依立替康對依立替康誘發(fā)的胃腸道毒性發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)理是在通過膽汁消除的基本途徑中，也在腸外吸滲中。實(shí)施例7體外測定乙酰透明質(zhì)酸的分子量和濃度對腫瘤細(xì)胞中內(nèi)源性P-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響實(shí)驗(yàn)品和對照品乙酰透明質(zhì)酸*批號HA10509(生物療法；InstituteofDrugTechnology^f吏用固有粘度測量法測得模態(tài)分子量860kDa);批號150103E/3/240/S(CPNLtd.模態(tài)分子量10kDa)乙酰透明質(zhì)酸<2kDa(通過透明質(zhì)酸酶消化，在HALaboratory產(chǎn)生)體外測定HA濃度和分子量對內(nèi)源性腫瘤細(xì)胞p-葡糖醛酸糖苷酶的影響樣品的制備從原始細(xì)胞胞溶產(chǎn)物制備肺瘤細(xì)胞胞溶產(chǎn)物原料(O.8mg蛋白/ml)。用磷酸鉀緩沖液稀釋10mg/ml的乙酰透明質(zhì)酸原料(IOkDa&860kDa)，達(dá)到8mg/ml，3.2mg/ml，1.6mg/ml，0.4mg/ml，0.2mg/ml，0.04mg/ml，0.02mg/ml和0.0008mg/ml乙酰透明質(zhì)酸。用磷酸鉀緩沖液稀釋進(jìn)一步25mg/ml<2kDaHA，達(dá)到8mg/ml，3.2mg/ml，1.6mg/ml,0.4mg/ml，0.2mg/ml，0.04mg/ml，0.02mg/ml和0.0008mg/ml乙酰透明質(zhì)酸。通過將125^1不同稀釋度的乙酰透明質(zhì)酸等分進(jìn)含有125^10.8mg蛋白/ml的下述細(xì)胞系的細(xì)胞胞溶產(chǎn)物的埃彭道夫管中制備測定樣品HCT-116,LIM-1215,LIM-2099，SK-COl，SW-1222，HT-29，SW-620，MST0-211H，MDA-MB-468和MDA-MB-435。通過反復(fù)倒置混合(約20次)徹底混合樣品，隨后在37°C溫育過夜。溫育結(jié)束后，通過反復(fù)倒置混合(約20次)徹底混合樣品，然后使用96-孔平板方法，定量p-葡糖醛酸糖苷酶。P-葡糖醛酸糖苷酶測定96-孔平板方法該測定在黑色澄清底96-孔平板的孔中進(jìn)行，其中將50pL腫瘤胞溶產(chǎn)物解物(20pg蛋白)加入孔中，并將50pL75mM磷酸鉀緩沖液用作對照空白孑L。該添加之后，向每個實(shí)驗(yàn)孔和空白孔中加入S(VL500jliM4-曱基-7-羥基重豆素基-p-D-葡萄糖醛酸苷(4-MUBG)底物。在3TC溫育平板剛好1小時。溫育結(jié)束后，加入50nL終止緩沖液，在FluostarOptima平板讀數(shù)器上，在350nm激發(fā)和450nm發(fā)射下讀平板。測定乙酰透明質(zhì)酸分子量和濃度對內(nèi)源性肺瘤p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響860kDa乙酰透明質(zhì)酸的評價為了測定不同的HA濃度和分子量對p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響，將20|ag細(xì)胞胞溶產(chǎn)物蛋白和500pM底物與0-lOjtgHA/^g蛋白共同溫育。從圖9和表16可以看出，在HA濃度和p-葡糖醛酸糖苷酶的刺激作用之間存在固有關(guān)系。另外，在CD44表達(dá)和HA對腫瘤細(xì)胞P-葡糖醛酸糖苷酶作用的倍數(shù)增加之間存在直接關(guān)系。與不含有HA的樣品相比，含有^2pgHA/pg蛋白的樣品表現(xiàn)出明顯更多的p-葡糖醛酸糖苷酶活性。在4pg時，p-葡糖醛酸糖苷酶活性的增加范圍是0-28%。在lOpg時，p-葡糖醛酸糖苷酶活性的增加范圍是20-125%，其中與CD44表達(dá)存在高度關(guān)聯(lián)。表16:用于產(chǎn)生圖9的原始數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage60</column></row><table>有可能將觀察到的HA刺激濃度模型化成在臨床環(huán)境中發(fā)生的濃度，從而確定該現(xiàn)象是否在體內(nèi)發(fā)生。在這些實(shí)驗(yàn)中使用的腫瘤細(xì)胞胞溶產(chǎn)物由26.7x106腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生3.6mg腫瘤細(xì)胞蛋白/ml胞溶產(chǎn)物。這相當(dāng)于每個細(xì)胞含有0.135ng蛋白的1個肺瘤細(xì)胞。因此，如果^2iLigHA/^ig腫瘤細(xì)胞蛋白導(dǎo)致內(nèi)源性p-葡糖醛酸糖苷酶活性的刺激，則它是^2pg/7407細(xì)胞或^270pgHA/細(xì)胞。為了建立快速推注注射850kDa乙酰透明質(zhì)酸的生物分布，給攜帶人乳腺癌異種移植物的棵鼠靜脈內(nèi)注射15.9±1.2mg/kg825kDa[3H]HA。在靜脈內(nèi)給藥后15min，30min，60min，2h，4h，8h，24h，48h和72h，殺死小鼠(n-5/時間點(diǎn))。取出所有身體器官和流體，稱重，使用p-閃爍計(jì)數(shù)法定量rH]放射性。分析所有組織中HA代謝物的存在，其中在8小時后鑒別出[3H]水和。H]醋酸鹽的終產(chǎn)物；沒有檢測到HA的中間分解產(chǎn)物。下表僅僅報(bào)告了在開始825kDaHA的顯著分解代謝之前HA的攝入。從下表可以看出，在腫瘤中積累的注射劑量的最高百分比是2.58%。因此，如果人接受2gHA(假定2m2患者接受lgHA/m2，這是在HyCAMPI和II期臨床試驗(yàn)中施用的HA的最高劑量)，則每克腫瘤會積累約51.6mgHA,相當(dāng)于51.6pgHA/細(xì)胞(假定lg腫瘤相當(dāng)于109細(xì)胞)。10kDa乙酰透明質(zhì)酸的評價為了測定不同的濃度和分子量的HA對腫瘤細(xì)胞p-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響，將l微克腫瘤細(xì)胞蛋白和50(^M底物與O-lOjig模態(tài)分子量為10kDa的HA共同溫育，該分子量相當(dāng)于位于到達(dá)溶酶體途徑上和在Hyal-1消化之前的溶酶體中的胞質(zhì)內(nèi)含體的Hyal-2消化產(chǎn)物。從圖10和表17可以看出，在>2|iigHA時，與不含有HA的樣品相比，存在明顯更高的p-葡糖醛酸糖苷酶活性。在4pg時，|5-葡糖醛酸糖苷酶活性的增加范圍是0_28%。在10pg時，p-葡糖醛酸糖苷酶活性的增加范圍是13-63%。在10kDaHA的情況下，在CD44表達(dá)和p-葡糖醛酸糖苷酶活性的倍數(shù)增加之間沒有顯示關(guān)聯(lián)。有可能將觀察到的HA刺激濃度模型化成在臨床環(huán)境中發(fā)生的濃度，從而確定該現(xiàn)象是否在體內(nèi)發(fā)生。在這些實(shí)驗(yàn)中使用的腫瘤細(xì)胞胞溶產(chǎn)物由26.7x106腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生，產(chǎn)生3.6mg腫瘤細(xì)胞蛋白/ml胞溶產(chǎn)物。其相當(dāng)于每個細(xì)胞含有0.135ng蛋白的1個腫瘤細(xì)胞。因此，如果^2網(wǎng)HA/jug腫瘤細(xì)胞蛋白導(dǎo)致內(nèi)源性(5-葡糖醛酸糖苷酶活性的刺激，則它是^2pg/7407細(xì)胞或^270pgHA/細(xì)胞。靜脈內(nèi)施用2gHA(假定2m2患者接受lgHA/m2，這是在HyCAMPI和II期臨床試驗(yàn)中施用的HA的最高劑量)，理論上會產(chǎn)生約51.6mgHA/g腫瘤，相當(dāng)于51.6pgHA/細(xì)胞(假定lg腫瘤相當(dāng)于109細(xì)胞)。注射825kDa[3H]HA后腫瘤勻漿的色譜分析沒有檢測到任何10kDaHA，因?yàn)镠A的任意中間降解產(chǎn)物都被p-葡糖醛酸糖苷酶快速加工成單糖。由于10kDa可以是p-葡糖醛酸糖苷酶的底物，為了響應(yīng)于腫瘤環(huán)境中底物的增加，p-葡糖醛酸糖苷酶可能仍然以類似體內(nèi)的方式作出響應(yīng)，導(dǎo)致酶活性的上調(diào)。表<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table><2kDa乙酰透明質(zhì)酸的評價為了測定不同乙酰透明質(zhì)酸濃度和分子量對(5-葡糖醛酸糖苷酶活性的影響，將1微克腫瘤細(xì)胞蛋白和500jnM底物與0-l(Vg模態(tài)分子量〈2kDa的乙酰透明質(zhì)酸共同溫育。從圖11和表18可以看出，在HA濃度低至2pg時，與不含有HA的樣品相比，腫瘤細(xì)胞p-葡糖醛酸糖苷酶存在明顯抑制。隨著HA濃度增加至高達(dá)lOpgHA，抑制程度增加，其中P-葡糖醛酸糖苷酶活性降低了最高達(dá)47%。在腫瘤勻漿中檢測注射825kDa[3H]HA后腫瘤勻漿的色譜分析(證實(shí)沒有<2kDa的HA小片段)，因此如果這些發(fā)現(xiàn)可以轉(zhuǎn)換成臨床情形，則不存在HA-介導(dǎo)的腫瘤內(nèi)p-葡糖醛酸糖苷酶的抑制。表18:用于產(chǎn)生圖8的原始數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage65</column></row><table>實(shí)施例8妙C^^tm^/歡傻^孩普潛^材料和方法進(jìn)入該研究的所有患者都具有晚期或轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌(CRC)，現(xiàn)在或過去有結(jié)腸直腸腺癌的組織學(xué)文件。要求患者具有難治的或已經(jīng)用一線5-FU(和/或卡培他濱)治療6個月以內(nèi)的轉(zhuǎn)移性疾病。允許以前的奧沙利鉑，但是在該I期研究開始時，基于奧沙利鉑的療法不能作為治療轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌的一線治療方案容易地得到。其它合格標(biāo)準(zhǔn)是年齡18-75，》1可測量病變(在旋轉(zhuǎn)CT或MRI上2lcm)，EC0G行為狀態(tài)(PS)為0或1，估計(jì)存活時間^12周，足夠的骨髓功能(中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)21.5x107L，血小板》100x107L),足夠的肝功能(膽紅素Sl.25x正常值上限，ALT^5x正常值上限)和足夠的腎功能(肌酸酐S0.2mmol/L)。主要排除標(biāo)準(zhǔn)是活躍的炎性腸病，22級慢性腹瀉，腫塊性病變(>50%肝參與，>25%肺參與，或腹部腫塊(abdominalmass)210cm)，腦轉(zhuǎn)移，吉爾伯特綜合癥，先前暴露于依立替康，對骨盆或〉30%骨髓的任意先前放療，現(xiàn)在活躍的第二種惡性的或其它嚴(yán)重的共存病。所有患者的在登記前提供書面志愿書，且研究經(jīng)過主管機(jī)構(gòu)倫理委員會的批準(zhǔn)。每三周經(jīng)90分鐘靜脈內(nèi)施用HA和依立替康的制劑(HyCAMP)，最多6個周期。HA的劑量固定在1000mg/m2，依立替康的起始劑量是300mg/m2[HyCAMP(1000/300)]。所有患者接受5-HT3抑制劑和地塞米松的預(yù)治療。如果在該起始劑量沒有觀察到顯著的治療相關(guān)毒性，則在隨后的周期中將依立替康的劑量升高至350mg/m2[HyCAMP(1000/350)]。沒有設(shè)計(jì)HA的劑量調(diào)整。根據(jù)國家癌癥研究所普通毒性標(biāo)準(zhǔn)(NCICTC)笫1版，對毒性分級。經(jīng)歷任意III或IV級毒性(除了脫發(fā)和血栓栓子事件外)的患者在其隨后的依立替康周期中接受25%劑量減少(但是HA則不然)。劑量持續(xù)最高達(dá)21天，直到毒性消退至I級或更低。發(fā)展成III或IV級血栓栓子事件的患者退出研究。所有患者接受關(guān)于治療相關(guān)腹瀉的潛在性和適當(dāng)使用洛哌丁胺的教育，洛哌丁胺在HyCAMPTM的第一個周期時常規(guī)分配。不允許粒細(xì)胞集落刺激因子或促紅細(xì)胞生成素的預(yù)防性使用?；€效能和安全性評價在治療前，根據(jù)醫(yī)療史、體檢、全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血清CEA和化學(xué)板評估每位患者的臨床狀態(tài)。在第一個治療周期之前4周內(nèi)，進(jìn)行胸、腹和骨盆的基線CT掃描。在治療期間，在每個周期的笫l天，通過體檢、全血細(xì)胞計(jì)數(shù)、血化學(xué)和毒性評級評估患者。另外，對于第二個周期，預(yù)定第IO天的全血細(xì)胞計(jì)數(shù)。在每兩個周期后，重復(fù)放射線成像以確定疾病狀態(tài)。使用先前公開的完全反應(yīng)(CR)、部分反應(yīng)(PR)、穩(wěn)定疾病(SD)和漸進(jìn)疾病(PD)的定義，用RECIST標(biāo)準(zhǔn)來評估反應(yīng)。藥代動力學(xué)在第一個周期中，在給藥當(dāng)天，在0，30，60，90min(在輸注期間)和在停止藥物輸注后5，10，15，20，30，60min和2，3，4，6，24，47，72和96h，抽取用于定量依立替康和其代謝物SN-38和SN-38G的血樣。將血液收集在肝素化的試管中，通過離心(1200g,10分鐘)從血細(xì)胞分離血漿，在-20。C冷凍，然后在-80。C儲存，直到分析。使用反相HPLC，測定融化的血漿中分析物的濃度。通過對比使用擬合的1/x加權(quán)線性回歸建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線和濃度-反應(yīng)關(guān)系圖，計(jì)算濃度，其中反應(yīng)等于分析物峰面積與內(nèi)標(biāo)的比。樣品提取在CPT-ll和SN-38定量之前，通過向200ul患者血漿中加入400^1含有18ng內(nèi)標(biāo)(喜樹堿，Sigma，USA)的冰冷的1:1乙腈曱醇提取樣品。通過在Biofuge13(Beckman，USA)中在13，5000rpm離心5min，澄清提取混合物。干燥上清液，并在200jli1流動相中重配，然后應(yīng)用于HPLC。CPT-11和SN-38的HPLC定量使用SGESSWarkosilC18柱(5^un，150x4.6mm內(nèi)^圣)進(jìn)^f亍分離，該;f主由AlUechC18(5jiim，7.5x4.6mm內(nèi)徑)保護(hù)柱保護(hù)。柱溫度維持在30。C。流動相是0.025MKH2P04:乙腈(75:25v/v)用1^04調(diào)節(jié)至pH2.5，流速設(shè)定在lml/min。在4。C冷卻樣品，以3(^1注射體積注射進(jìn)柱。HPLC測定用于驗(yàn)證特異性、靈敏度、線性以及樣品和原液經(jīng)適當(dāng)保藏/使用階段后的穩(wěn)定性。在檢測限，一天內(nèi)和兩天間的準(zhǔn)確度和精密度小于士15%或士20%。在分析之前，還評估了其它共同施用的試劑(包括透明質(zhì)酸(HA)和一定量止吐劑和抗組胺)的色譜千擾的可能性。SN-38G的定量通過定量p-葡糖醛酸糖苷酶水解SN-38G后SN-38水平的增加，估計(jì)SN-38G。簡而言之，在37°C，用1000單位的P-葡糖醛酸糖苷酶(TypeBIO，10,400單位/mg;Sigma，USA)溫育200^1血漿樣品等分試樣2h。在酶消化結(jié)束時，如上所述提取樣品，并進(jìn)行色譜分離?；赟N-38的100%純參照標(biāo)準(zhǔn)品，將SN-38G水平表達(dá)為ng/mlSN-38。結(jié)果,悉者橫在在2003年7月和2004年9月間，有12位患者登記進(jìn)入研究。對于所有患者都評價反應(yīng)和毒性。登記了9位男性和3位女性，平均年齡63歲(39至73歲)。所有患者接受先前的5-FU化療，3位還接受奧沙利鈾。在表1中顯示了研究開始時的患者特征。接受的周期平均數(shù)是5(1-6)。秀A'訪力夢與歷史數(shù)據(jù)相比，HyCAMP制劑會改變依立替康(CPT-11)和SN38的藥代動力學(xué)(表19)。當(dāng)與HA配制時，CPT-11的平均半衰期("/2)為約18h，與此相對比，已經(jīng)觀察到單獨(dú)的依立替康是約12h。這些數(shù)據(jù)表明，由于未改變C陋和清除數(shù)字，HA的制劑會改變依立替康的代謝或藥效學(xué)。當(dāng)對比有效代謝物SN-38的(Lx和曲線下面積時，證實(shí)了該科學(xué)假設(shè)。這些集合的SN-38藥代動力學(xué)數(shù)據(jù)表明，HA會調(diào)整依立替康的代謝活化和可能的藥效學(xué)。該代謝級聯(lián)中的關(guān)鍵酶是羧酸酯酶，UDP葡糖醛?；D(zhuǎn)移酶和p-葡糖醛酸糖苷酶。如果該觀察到的效應(yīng)是降低的羧酸酯酶活性的結(jié)果，CPT-11的C,水平會高于預(yù)期，因?yàn)樵撁覆荒芡瑯佑行У貙PT-ll轉(zhuǎn)化成SN-38,這會顯示為減少的SN-38、但是升高水平的循環(huán)CPT-11。如果UDP葡糖醛?；D(zhuǎn)移酶是乾標(biāo)酶，則藥代動力學(xué)效應(yīng)是改變了水平的SN-38G，但是這沒有觀察到。觀察到的結(jié)果可能是下述代謝途徑改變的結(jié)果(圖12)。表19:輸注配制為HyCAMP的乙酰透明質(zhì)酸和依立替康后，依立替康和其代謝物SN-38和SN38G的血漿藥代動力學(xué)參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>1.用于劑量計(jì)算的BSA(體表面積)，最大2.0m。2.Vol.Dist.(L)=[清除率(L/hr)*tl/2(hr)]/0.693'參數(shù)的模型獨(dú)立計(jì)算使用2或3個肉眼選擇的終端消除點(diǎn)，用于最佳擬合log-線性消除曲線。所有圖代表平均值士l個標(biāo)準(zhǔn)偏差200680035079.5勢滔a被63/66K柏在第一個治療周期后在HyCAMP(1000/300)劑量水平登記的第一位患者中觀察到被認(rèn)為歸因于漸進(jìn)性疾病的in級肝功能障礙。在該水平治療另外4位患者沒有劑量限制毒性，它們接受HyCAMP(1000/350)，進(jìn)行第二個和隨后的周期。7位患者開始HyCAMP(1000/350)劑量水平的治療。2位患者發(fā)生劑量減少由于在周期1的IV級熱性中性白血球減少癥，在周期2中依立替康劑量減少50%;由于在周期4的III級嗜睡，在周期5中依立替康劑量減少25%。由于在周期1和5中的中性白血球減少癥(分別是III和II級)，一位患者在周期2和6中需要治療延遲(但是沒有劑量調(diào)整)。在表3中總結(jié)了根據(jù)預(yù)定就診的治療相關(guān)的III和IV級毒性。發(fā)作在周期5期間的單次III級腹瀉發(fā)生在以前沒有顯著腹瀉的患者中。該患者在周期6中要求劑量減少，但是這沒有發(fā)生，因?yàn)樵摶颊哂捎谠谥芷?結(jié)束時的漸進(jìn)性疾病而退出研究。在表3中顯示的其它III級/IV級毒性包括，被認(rèn)為與漸進(jìn)性疾病有關(guān)的肝功能障礙，和被認(rèn)為與甾族化合物預(yù)治療有關(guān)的高血糖癥。NCICTCIII/IV級毒性共發(fā)作9次。其中，3次被認(rèn)為是研究藥物相關(guān)的。它們是1次III級腹瀉，1次IV級中性白血球減少癥和1次III級中性白血球減少癥。在第IO天記錄了III級中性白血球減少癥的發(fā)作，并且在進(jìn)行下一個周期之前，中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)已經(jīng)恢復(fù)，所以這沒有影響治療。沒有與治療有關(guān)的毒性死亡。^Vf及^和存活^河所有12位患者都用于評價反應(yīng)。反應(yīng)數(shù)據(jù)總結(jié)在表20中。在2位患者中觀察到部分反應(yīng)，總反應(yīng)率是17%。5位患者具有穩(wěn)定疾病，5位具有漸進(jìn)性疾病作為他們的最好反應(yīng)。發(fā)展的中間時間是6個月，中間總存活時間是16個月。盡管樣品群體較小，CEA水平的分析證實(shí)是令人感興趣的，其中在患者6和9中，CEA水平實(shí)質(zhì)上降低，而計(jì)算機(jī)x線斷層攝影術(shù)評估指示漸進(jìn)性疾病。對這些"不反應(yīng)"患者的隨訪已經(jīng)揭示，這些患者仍然存活至開始治療后623和629天，這在通過CEA評估的反應(yīng)者的預(yù)期存活時間內(nèi)。表20:腫瘤反應(yīng)和存活時間<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>本領(lǐng)域技術(shù)人員會明白，本文所述的發(fā)明易于進(jìn)行除特別描述的那些以外的變化和修改。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明包括所有這樣的變化和修改。本發(fā)明也包括在本說明書中單獨(dú)或一起提及或指出的所有步驟、特征、組合物和化合物，和任意2個或多個所述步驟或特征的任意和所有組合。文獻(xiàn)目錄歐洲專利號0138572歐洲專利號0216453歐洲專利號0341745Sands爭尸rofoco/5"尸or《e/e7/^/s,er//7yVew/"o"/e/7ce263-274，1996Takasuna爭Ca"cer7esi"d.3752-3757，1996美國專利號4，522，811美國專利號4,851,521美國專利號4，965，353美國專利號5，202，431，美國專利號5,852，002美國專利號6，027，741美國專利號6，069，135美國專利號6,552，184美國專利號6，579，978美國專利號6，620,927美國專利號6，831，172WO00/41730WO02/05852Wolfe&Sands/Vc^oco/5"尸orCe/e7ys/7^尸e/"http://^i/i^c/e刀ce,199權(quán)利要求1.一種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(HA)和治療劑的制劑，其中所述治療調(diào)控β-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，降低胃腸毒性。2.根據(jù)權(quán)利要求1的治療方法，其中調(diào)控p-葡糖醛酸糖苷酶在消化道中的生物活性。3.權(quán)利要求1的制劑，其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約lkDa至約1000kDa。4.權(quán)利要求l的制劑，其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約lkDa至約100kDa。5.權(quán)利要求1的制劑，其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約350Da至約10kDa。6.權(quán)利要求l的制劑，其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約350Da至約5kDa。7.權(quán)利要求l的制劑，其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約350Da至約2kDa。8.根據(jù)權(quán)利要求2的治療方法，其包含施用制劑，所述制劑包含分子量約350-9500Da的乙酰透明質(zhì)酸(HA)和降低胃腸道中的毒性水平的治療劑，其中所述HA調(diào)控胃腸道中P-葡糖醛酸糖苷酶的活性。9.根據(jù)權(quán)利要求1的治療方法，其包含施用制劑，所述制劑包含(i)平均分子量約10kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA);和(ii)平均分子量約860kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA)，和(iii)治療劑，其中所述制劑調(diào)控葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，降低胃腸毒性。10.根據(jù)權(quán)利要求1的治療方法，其包含施用制劑，所述制劑包含..(i)平均分子量約2kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA);和(ii)平均分子量約860kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA)，和(iii)治療劑，其中所述制劑調(diào)控P-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，降低胃腸毒性。11.權(quán)利要求l的方法，其中在施用所述治療劑之前或之后施用HA。12.權(quán)利要求l的方法，其中在施用所述治療劑之前施用HA。13.權(quán)利要求l的方法，其中在施用所述治療劑之后施用HA。14.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其中口服施用HA。15.權(quán)利要求9的方法，其中口服施用平均分子量約10kDa的HA。16.權(quán)利要求10的方法，其中口服施用平均分子量約2kDa的HA。17.根據(jù)權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)的方法，其中全身施用HA。18.根據(jù)權(quán)利要求9或10的方法，其中全身施用平均分子量約860kDa的HA。19.用于治療癌癥的權(quán)利要求9或10的方法。20.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述治療劑是P-葡糖醛酸糖苷酶的底物。21.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述治療劑含有葡萄糖醛酸苷部分。22.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述治療劑被代謝，形成葡萄糖醛酸苷軛合物。23.權(quán)利要求21-22中任一項(xiàng)的方法，其中所述葡萄糖醛酸苷選自嗎啡-3-葡萄糖醛酸苷，嗎啡-6-葡萄糖醛酸苷，石膽酸葡萄糖醛酸苷，雌酮-3-葡萄糖醛酸苷，維曱酰葡萄糖醛酸苷，imboxy卜P-D-葡萄糖醛酸苷，多柔比星葡萄糖醛酸苷，雄烷二醇葡萄糖醛酸苷和對乙酰氨基酚葡萄糖醛酸苷。24.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述治療劑是選自下述的化療劑柔紅霉素，道諾霉素，更生霉素，多柔比星，表柔比星，伊達(dá)比星，依索比星，博來霉素，馬磷酰胺，異磷酰胺，阿糖胞苷，雙氯乙基硝基脲，白消安，絲裂霉素C，放線菌素D,光輝霉素，潑尼松，羥孕酮，睪酮，他莫昔芬，達(dá)卡巴溱，丙卡巴肼，六甲蜜胺，五曱蜜胺，米托蒽醌，安吖啶，苯丁酸氮芥，甲基環(huán)己基硝基脲，氮芥，美法侖，環(huán)磷酰胺，6-巰基嘌呤，6-硫?yàn)踵堰剩⑻前眨?-氮雜胞苷，羥基脲，脫氧柯福霉素，4-羥基過氧環(huán)磷酰胺，5-氟尿嘧啶(5-FU)，5-氟脫氧尿苷(5-FUdR)，甲氨蝶呤(MTX)，奧沙利鉑，多柔比星，秋水仙素，紫杉醇，長春新堿，長春堿，依托泊苷(VP-16)三曱曲沙，依立替康，托泊替康，吉西他濱，替尼泊苷，順鉑，己烯雌酚(DES)和其葡萄糖醛酸苷軛合物。25.權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)的方法，其中所述治療劑是選自下述的化療劑化療化合物，包括抗代謝物，抗肺瘤抗生素，有絲分裂抑制劑，甾族化合物，激素，烷化劑，氮芥，亞硝基脲，激素激動劑和微管抑制劑。26.—種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(HA)和治療劑的制劑，其中所述制劑調(diào)控P-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，增強(qiáng)藥物激活。27.—種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(HA)和治療劑的制劑，其中所述治療調(diào)控P-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，減少骨髓抑制。28.權(quán)利要求27的制劑量為約lkDa至約1000kDa。29.權(quán)利要求27的制劑量為約lkDa至約100kDa。30.權(quán)利要求27的制劑量為約350Da至約10kDa。31.權(quán)利要求27的制劑量為約350Da至約5kDa。32.'權(quán)利要求27的制劑，其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子，其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子,其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子,其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子，其中所述乙酰透明質(zhì)酸組分的平均分子量為約350Da至約2kDa。33.權(quán)利要求27的方法，其包含施用制劑，所述制劑包含(i)平均分子量約10kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA);和(ii)平均分子量約860kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA)，和(iii)治療劑，其中所述制劑調(diào)控P-葡糖醛酸糖普酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，減少骨髓抑制。34.權(quán)利要求27的方法，其包含施用制劑，所述制劑包含(i)平均分子量約2kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA);和(ii)平均分子量約860kDa的乙酰透明質(zhì)酸(HA)，和(Hi)治療劑，其中所述制劑調(diào)控P-葡糖醛酸糖苷酶的活性，并與單獨(dú)的治療劑相比，減少骨髓抑制。35.權(quán)利要求27的方法，其中在施用所述治療劑之前或之后施用HA。36.權(quán)利要求27的方法，其中在施用所述治療劑之前施用HA。37.權(quán)利要求27的方法，其中在施用所述治療劑之后施用HA。38.權(quán)利要求27-32中任一項(xiàng)的方法，其中口服施用HA。39.權(quán)利要求33的方法，其中口服施用平均分子量約10kDa的HA。40.權(quán)利要求34的方法，其中口服施用平均分子量約2kDa的HA。41.權(quán)利要求27-32中任一項(xiàng)的方法，其中全身施用HA。42.權(quán)利要求33或34的方法，其中全身施用平均分子量約860kDa的HA。43.權(quán)利要求34的方法，其中口服施用平均分子量約2kDa的HA,并全身施用平均分子量約860kDa的HA。44.用于治療癌癥的權(quán)利要求36的制劑。45.權(quán)利要求27-44中任一項(xiàng)的方法，其中所述治療劑含有葡萄糖醛酸苷部分。46.權(quán)利要求27-45中任一項(xiàng)的方法，其中所述葡萄糖醛酸苷選自嗎啡-3-葡萄糖醛酸苷，嗎啡-6-葡萄糖醛酸苷，石膽酸葡萄糖醛酸苷，雌酮-3-葡萄糖醛酸苷，維甲酰葡萄糖醛酸苷，imboxyl-P-D-葡萄糖醛酸苷，多柔比星葡萄糖醛酸苷，雄烷二醇葡萄糖醛酸苷和對乙酰氨基酚葡萄糖醛酸苷。47.權(quán)利要求27的方法，其中所述試劑是選自下述的化療劑柔紅霉素，道諾霉素，更生霉素，多柔比星，表柔比星，伊達(dá)比星，依索比星，博來霉素，馬磷酰胺，異磷酰胺，阿糖胞苷，雙氯乙基硝基脲，白消安，絲裂霉素C，放線菌素D，光輝霉素，潑尼松，羥孕酮，睪酮，他莫昔芬，達(dá)卡巴溱，丙卡巴肼，六甲蜜胺，五曱蜜胺，米托蒽醌，安吖啶，苯丁酸氮芥，曱基環(huán)己基硝基脲，氮芥，美法侖，環(huán)磷酰胺，6-巰基噤呤，6-硫鳥嘌呤，阿糖胞苷，5-氮雜胞苷，羥基脲，脫氧柯福霉素，4-幾基過氧環(huán)磷酰胺，5-氟尿嘧啶(5-FU)，5-氟脫氧尿苷(5-FUdR),甲氨蝶呤(MTX)，奧沙利鉑，多柔比星，秋水仙素，紫杉醇，長春新堿，長春堿，依托泊苷(VP-16)，三甲曲沙，依立替康，托泊替康，吉西他濱，替尼泊苷，順鉑，己烯雌酚(DES)和其葡萄糖醛酸苷軛合物。48.權(quán)利要求27的方法，其中所述試劑是選自下述的化療劑化療化合物，包括抗代謝物，抗腫瘤抗生素，有絲分裂抑制劑，甾族化合物，激素，烷化劑，氮芥，亞硝基脲，激素激動劑和微管抑制劑。49.用于治療癌癥的包含權(quán)利要求1的制劑的藥物組合物。50.用于治療癌癥的包含權(quán)利要求9的制劑的藥物組合物。51.用于治療癌癥的包含權(quán)利要求IO的制劑的藥物組合物。52.用于治療癌癥的包含權(quán)利要求33的制劑的藥物組合物。53.用于治療癌癥的包含權(quán)利要求34的制劑的藥物組合物。54.—種治療方法，其包含施用包含乙酰透明質(zhì)酸(M)和治療劑的制劑，其中所述制劑或其組分調(diào)控藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的活性。55.根據(jù)權(quán)利要求54的方法，其中所述藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白是陽離子交換蛋白cM0AT。56.根據(jù)權(quán)利要求54或55的方法，其中所述陽離子交換蛋白cMOAT降低毒性藥物的循環(huán)水平。全文摘要本發(fā)明概括地涉及治療劑、尤其是化療領(lǐng)域。更具體地，本發(fā)明提供了可以降低化療劑的毒性或增強(qiáng)化療劑的效能的治療策略。本發(fā)明也包括組合物，治療和預(yù)防方法。文檔編號A61P35/00GK101287474SQ200680035079公開日2008年10月15日申請日期2006年7月27日優(yōu)先權(quán)日2005年7月27日發(fā)明者T·J·布朗申請人:阿爾卡米亞腫瘤學(xué)股份有限公司