專利名稱：：治療免疫介導(dǎo)的神經(jīng)疾病的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本申請涉及免疫復(fù)合物形成的抑制，并且更具體地涉及通過多肽和其它小分子對免疫復(fù)合物形成的抑制。背景當(dāng)抗原特異性結(jié)合于抗體時，促發(fā)體液免疫應(yīng)答。抗體分子與抗原的結(jié)合形成小的、相對可溶的免疫復(fù)合物?？乖梢允峭鈦砦镔|(zhì)，諸如病毒或細(xì)菌多肽，或者可以是"自身抗原"，諸如通常在人體中發(fā)現(xiàn)的多肽。免疫系統(tǒng)通常將外來抗原與自身抗原區(qū)別開來。然而，當(dāng)這一系統(tǒng)破壞時，以致免疫系統(tǒng)攻擊機體并且破壞組織或器官系統(tǒng)，好像它們是外來物質(zhì)一樣，可以發(fā)生"自體免疫"疾病。更大的免疫復(fù)合物比小的、更可溶的免疫復(fù)合物更有致病性。大的、相對不溶的免疫復(fù)合物的形成可以由抗體分子與抗原的相互作用和抗體分子彼此之間的相互作用而導(dǎo)致。這樣的免疫復(fù)合物還可以由在不存在抗原時抗體分子之間的相互作用而導(dǎo)致?？贵w可以通過包被病毒或細(xì)菌來預(yù)防感染，但是它們本身是相對無害的。相反，當(dāng)抗體與抗原結(jié)合并且由此導(dǎo)致的免疫復(fù)合物結(jié)合于機體中某些效應(yīng)器分子時，可以發(fā)生器官特異性組織損害。效應(yīng)器分子被如此命名是由于它們實現(xiàn)免疫復(fù)合物的致病作用。通過抑制大的、不可溶的免疫復(fù)合物的形成，或者通過抑制免疫復(fù)合物與效應(yīng)器分子的結(jié)合，可以防止免疫復(fù)合物的組織損害作用。概述本發(fā)明基于這樣的發(fā)現(xiàn)具有諸如在SEQIDNOS:2和16中提出的氨基酸序列的多肽可以特異性并且高親和力地結(jié)合于免疫球蛋白分子的5CH2-CH3結(jié)構(gòu)域，因此抑制含有抗體和抗原的不溶性免疫復(fù)合物的形成，并且防止所述復(fù)合物與效應(yīng)器分子的結(jié)合。本發(fā)明提供這樣的多肽，以及應(yīng)用所述多肽和化合物抑制免疫復(fù)合物的形成和治療諸如肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病(PD)或阿爾茨海默病(AD)的自體免疫綜合疾病的方法。io—方面，本發(fā)明的特征在于用于抑制受試者中免疫復(fù)合物形成的方法。所述方法可以包括給受試者施用含有純化的多肽的組合物，其中所述多肽包括氨基酸序列(Xaai)n-Cys-Ala-XaarHis-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQIDNO:35)，其中Xaa,為任意氨基酸，Xaa2為Arg,Trp,5-HTP,Tyr,或Phe,Xaa3為任意氨基酸，和n為0,1，2，3,4,或5。免疫復(fù)15合物形成可以與肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化(ALS)相關(guān)。所述多肽可以抑制ALSIgGFc與Fc丫I,FcyIIa,FcyIIb，F(xiàn)cyIIIa,Fqdllb,FcRn,mClq，sClq，野生型SOD1,或突變型S0D1結(jié)合。所述方法還可以包括對于ALS的臨床或分子特征對所述受試者進(jìn)行監(jiān)測的步驟。監(jiān)測可以包括肌電圖或測量CNSMCP-1水平，運動神經(jīng)元免疫球蛋白介導(dǎo)的鈣增加，神經(jīng)遞質(zhì)釋放，20或神經(jīng)元細(xì)胞損傷或細(xì)胞死亡。免疫復(fù)合物形成可以與帕金森病(PD)相關(guān)。所述多肽可以抑制PDIgGFc與Fcyl，F(xiàn)cYlIa,FcyIIb,Fc^IIIa,Fqlllb,FcRn,mClq,sClq，a-突觸核蛋白，或a-突觸核蛋白與微管聚集體的結(jié)合。所述方法還可以包括對于PD的臨床或分子特征對受試者進(jìn)行監(jiān)測的步驟。PD的臨床或分子特征可以是黑質(zhì)區(qū)域中MCP-1的減少或黑質(zhì)中TH十25細(xì)胞的增加的存活。免疫復(fù)合物形成可以與阿爾茨海默病(AD)相關(guān)。所述多肽可以抑制ADIgGFc與FcyI,FcyIIa,FcyIIb,FcyIIIa,FcyIIIb，F(xiàn)cRn,mClq,sClq,P-淀粉樣肽，tau蛋白，微管，或tau蛋白與微管的聚集體的結(jié)合。所述方法還可以包括對于AD的臨床或分子特征對所述受試者進(jìn)行監(jiān)測的步驟。30所述多肽還可以含有末端穩(wěn)定基團(tuán)。末端穩(wěn)定基團(tuán)可以是在所述多肽的氨基端，并且可以是具有氨基酸序列Xaa-Pro-Pro的三肽，其中Xaa是任何氨基酸(例如，Ala)。末端穩(wěn)定基團(tuán)可以是在所述多肽的羧基端，并且可以是具有氨基酸序列Pro-Pro-Xaa的三肽，其中Xaa是任何氨基酸(例如，Ala)。所述多肽還可以包括在所述氮基酸序列氨基端的Asp。5所述多肽可以具有約10-約50個氨基酸的長度。多肽可以具有氨基酸序歹ijAsp-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:2)，或氨基酸序列Ala-Pro-Pro-Asp-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val匿Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:16)。在另一個方面，本發(fā)明著重描述純化的多肽，其氮基酸序列由(Xaa,)nio-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQIDNO:35)組成，其中Xaa!為任何氨基酸，Xaa2為Arg、Trp、5-HTP、Tyr或Phe，Xaa3為任意氨基酸，和n為0,1，2,3,4，或5。本發(fā)明還著重描述設(shè)計對具有結(jié)合的抗原的免疫球蛋白分子的CH2-CH3裂口具有特異的結(jié)合親和力的配體的方法。所述方法可以包括isa)為計算機提供數(shù)據(jù)，所述數(shù)據(jù)包括在CH2-CH3裂口內(nèi)的位置252，253，435和436的氨基酸殘基的原子坐標(biāo)，并且計算機具有能夠從原子坐標(biāo)數(shù)據(jù)生成分子的原子模的計算程序；b)使用計算機生成CH2-CH3裂口的原子模型；c)給計算機提供包括候選化合物的原子坐標(biāo)的數(shù)據(jù)；d)使用計算機生成最佳地位于CH2-CH3裂口內(nèi)的候選化合物的原子模型；e)確定20最佳地定位的候選化合物是否與在CH2-CH3裂口內(nèi)氨基酸殘基相互作用；和f)如果所述候選化合物與所述氨基酸殘基相互作用，鑒定所述候選化合物作為具有針對CH2-CH3裂口的特異性結(jié)合親和力的配體。所述配體可以具有針對CH2CH3裂口的至少1^M(例如，至少100nM或至少10nM)的結(jié)合親和力。所述配體可以能夠抑制Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成。所述25配體可以能夠抑制FcR與CH2CH3裂口的結(jié)合。所述配體可以能夠抑制Clq與所述CH2CH3裂口的結(jié)合。所述配體可以能夠治療ALS，、PD、或AD。在另一個方面中，本發(fā)明著重描述多肽在制備用于治療ALS,、PD、或AD的藥物中的應(yīng)用，其中所述多肽包括氨基酸序列30(Xaa,)n-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQIDNO:35)，其中Xaa,為任意氨基酸，Xaa2為Arg,Trp，5-HTP,Tyr,或Phe,Xaa3為任意氨基酸，和n為0,1,2,3,4，或5。在另一個方面中，本發(fā)明著重描述包含純化的多肽的組合物，所述多肽包括氨基酸序列(Xaa))n-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-5Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQIDNO:35)，其中Xaa,為任意氨基酸，Xaa2為Arg,Trp，5-HTP,Tyr,或Phe,Xaa3為任意氨基酸，和n為0,1,2，3，4，或5。除非另外定義，本文所用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有本發(fā)明所屬的
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員通常所理解的相同的意思。盡管與本文所述的方法io和材料相似或等價的方法和材料可以用來實施本發(fā)明，但是下文描述適當(dāng)?shù)姆椒ê筒牧?。本文提及的所有公布、專利申請、專利和其它參考文獻(xiàn)都通過引用完全結(jié)合于此。在沖突的情形中，本說明書，包括定義，將控制。另外，材料、方法和實例只是舉例說明，并不意欲限制。本發(fā)明的一個或多個實施方案的詳情在附圖和下文描述中闡述。通過15所述描述和通過權(quán)利要求，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點將更加清楚。詳述本申請?zhí)峁┠軌蚺c免疫球蛋白分子的CH2-CH3裂口相互作用的多肽和其它化合物，以致免疫球蛋白與其它分子(例如，效應(yīng)器或其它免疫球20蛋白)的相互作用得到阻滯。還提供用于鑒定這樣的多肽和其它化合物的方法，以及含有所述多肽和化合物的組合物和制品。另外，本發(fā)明提供應(yīng)用所述多肽和化合物抑制免疫復(fù)合物形成和治療其中IgG免疫復(fù)合物與效應(yīng)器分子結(jié)合的疾病的方法，所述效應(yīng)器分子諸如膜結(jié)合的Clq(mClq)，可溶的Clq(sClq)，SODl，tau蛋白，cc-突觸核蛋白和FcyRs25(包括，但不限于FcyRI,FcyRIIa,FcyRIIb,Fc^RIIIa,FcyRIIIb,FcRn和FcyRs的同種型)，其已經(jīng)表現(xiàn)出是ALS、PD和AD的主要調(diào)控子。免疫球蛋白組成在血漿和其它體液中發(fā)現(xiàn)的一類蛋白，其表現(xiàn)出抗體30活性并且以高度的特異性與其它分子(例如，抗原和某些細(xì)胞表面受體)結(jié)合?；谒鼈兊慕Y(jié)構(gòu)和生物活性，免疫球蛋白可以分成5類IgM,IgG,IgA，IgD,和IgE。IgG是機體中最豐富的抗體種類。除了IgMs之外，免疫球蛋白主要由4條肽鏈組成，所述肽鏈通過一些鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵連接。例如，IgGs由2條多肽重鏈(H鏈)和2條多肽輕鏈(L鏈)組成，其通5過二硫鍵和非共價鍵偶聯(lián)形成具有扭曲的"Y"型構(gòu)型和大約160,000道爾頓的分子量的蛋白分子。一般IgG分子含有大約4.5個鏈間二硫鍵和大約12個鏈內(nèi)二硫鍵(Frangione和Milstein(1968)/Mo/.所o/.f分f主^學(xué)染力33:893-906)。免疫球蛋白分子的輕鏈和重鏈由恒定區(qū)和可變區(qū)組成(參見，例如，ioPadlan(1994)Mo/./mm麗o/.f分f，疫學(xué)J31:169-217)。例如，IgGl分子的每一條輕鏈含有可變結(jié)構(gòu)域(VL)和恒定結(jié)構(gòu)域(co。每一條重鏈具有4個結(jié)構(gòu)域氨基端可變結(jié)構(gòu)域(VH)，接著是3個恒定結(jié)構(gòu)域(CHl，CH2，和幾基端Ch3)。鉸鏈區(qū)對應(yīng)在CHl和CH2結(jié)構(gòu)域之間的柔性結(jié)合。用木瓜蛋白酶消化完整的IgG分子導(dǎo)致在鉸鏈區(qū)的蛋白水解斷裂，并且產(chǎn)生含15有CH2和CH3結(jié)構(gòu)域的Fc片段，和2條相同的Fab片段，其中每一條Fab片段含有CH1、Cl、Vh和Vl結(jié)枸域。Fc片段具有補體-和組織-結(jié)合活性，而Fab片段具有抗原-結(jié)合活性。免疫球蛋白分子可以通過可變區(qū)與其它多肽相互作用。大多數(shù)的抗原結(jié)合，例如，通過Fab片段的V!7VH區(qū)發(fā)生。由于免疫學(xué)教義闡述用于20Fc受體(FcR)的結(jié)合位點發(fā)現(xiàn)于IgG分子的鉸鏈區(qū)(參見，例如，Raghavan禾口Bjorkman(1996)^朋m.Tev.Dev.說o/丫發(fā),生激學(xué)祭述年付」12:181-200)，所以還認(rèn)為鉸鏈區(qū)是重要的。然而，更近的證據(jù)表明當(dāng)免疫球蛋白是單體(即，非免疫復(fù)合的)時，F(xiàn)cR主要與鉸鏈區(qū)相互作用。這樣的相互作用典型地包括Ig分子的位置234-237的氨基酸(Wiens等.(2000)25J/mmw"o/.f免疫學(xué)i^D1^:5313-5318)。免疫球蛋白分子還可以通過CH2-CH3結(jié)構(gòu)域內(nèi)的裂口與其它多肽相互作用。"CH2-CH3裂口"典型地包括CH2結(jié)構(gòu)域內(nèi)位置251-255的氨基酸和Ch3結(jié)構(gòu)域內(nèi)位置424-436的氨基酸。如此處所用，編號方式關(guān)于完整的IgG分子，如在Kabat等中那樣(SequencesofProteinsof30ImmunologicalInterest(免疫目的蛋白質(zhì)的序列)，第5版，PublicHealthService(公共衛(wèi)生月艮務(wù)),U.S.DepartmentofHealthandHumanServices(美國健康與人類服務(wù)部)，貝塞斯達(dá)，馬薩諸塞)。本領(lǐng)域的那些普通技術(shù)人員可以容易地確定在其它免疫球蛋白種類中相對應(yīng)的氨基酸。CH2-CH3裂口是不尋常的，原因在于其特征在于高度的溶劑可及性和5突出的疏水特征，這表明暴露的疏水表面的包埋是在這一位點的結(jié)合之后的重要驅(qū)動力。一旦抗原結(jié)合，在lgGCH2-CH3裂口發(fā)生三維變化，這允許某些殘基(例如，位置435的組氨酸)變成暴露的并且可用于結(jié)合。使用對人IgG的Fc區(qū)的構(gòu)象變化敏感的單克隆抗體，在研究中發(fā)現(xiàn)在抗原結(jié)合時發(fā)生的三維結(jié)構(gòu)變化的直接證據(jù)。5個IgG表位通過抗原結(jié)合而改io變2個在鉸鏈區(qū)之內(nèi)和3個在CH2-CH3裂口內(nèi)(Girkontraite等.(1996)Ca"cer歷oAer.7aAo//zflrm.f^"i^生激治;^^Z^"i/洽^911:87-96)。因此，抗原結(jié)合對于確定免疫球蛋白是通過鉸鏈區(qū)還是FcCH2-CH3區(qū)結(jié)合于其它分子可以是重要的。Fc區(qū)可以結(jié)合于許多的效應(yīng)器分子和其它蛋白，其包括下列各項15(1)j^Sn-新生的Fc受體決定抗體分子在基本循環(huán)中的半衰期(Leach等，(1996)J./mm柳o/.f身疫學(xué)^^志J157:3317-3322;Gheti和Ward(2000;U朋.iev./mmzmo/.f^資學(xué)—祭述年T^18:739-766)。由于自體抗體的縮短的半衰期，遺傳上缺少FcRn的小鼠免于受到致病性自體抗體的有害作用(Liu等.(1997)/E平Medr實驗度,染,^V186:777-783)。FcRn20與IgGFc的唯一結(jié)合位點是IgGFcCh2-Ch3裂口，并且已經(jīng)通過3D結(jié)構(gòu)和丙氨酸掃描表明HIS435對于FcRn與IgGFc結(jié)合是重要的(Shields等.(2001)JBC(生物的化學(xué)雜志)276:6591-6604和Martin等，(2001),MolCelK分子細(xì)胞學(xué))，7:867-877)。由于本文提供的肽以高親和力與CH2-CH3裂口和HIS435結(jié)合，所以所述肽是(免疫復(fù)合的)IgGFc與FcRn結(jié)合25的直接抑制劑。結(jié)合免疫復(fù)合物或結(jié)合致病性自體抗體的FcRn的抑制劑將用于治療涉及致病性自體抗體和/或免疫復(fù)合物的疾病。(2)M-細(xì)胞Fc受體提供在體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞介導(dǎo)的效應(yīng)器系統(tǒng)之間的聯(lián)系(Hamano等.(2000)/mmzwo/.f免,學(xué)^^吝J164:6113-6119;Coxon等.(2001)/mmwwXy14:693-704;Fossati等.(2001)￡欲J!30C//"./"ve化f欲,/游^",究雜,^V31:821-831)。Fey受體對IgG分子特異，并且包括FqRI、FcYRIIa、FcyRIIb和FcyRIIL這些同種型以不同的親和力與單體的和免疫復(fù)合的IgG結(jié)合。(3)Clq-經(jīng)典補體路徑的第一個成分是C1，其作為3個蛋白，Clq、Clr和Cls的復(fù)合體存在于血清中。當(dāng)Clq結(jié)合于抗原結(jié)合的IgG或IgM5的Fc區(qū)時，激活經(jīng)典補體路徑。盡管Clq與單個Fc區(qū)的結(jié)合是微弱的，Clq仍可以形成與Fc區(qū)的簇的牢固鍵合。在這一點上CI變得具有蛋白水解活性。通過免疫球蛋白Fc區(qū)與其它抗體或其它因子(例如，上文所描述的那些)之間的相互作用的免疫復(fù)合物的形成在本文稱為"Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)io合物形成(Fc-mediatedinmmunecomplexformation)"或者"免疫復(fù)合物的Fc-介導(dǎo)的形成(Fc-mediatedformationofanimmunecomplex)"。含有這樣的相互作用的免疫復(fù)合物被稱為"Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物"。Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物可以包括帶有或不帶有結(jié)合的抗原的免疫球蛋白分子，和典型地包括CH2-CH3裂口-特異性配體，其具有的對于免疫復(fù)合的抗體的結(jié)15合親和力比對于單體抗體的更高。2,辨儲多嚴(yán)如此處所用，"多肽"是氨基酸殘基的任何鏈，不管翻譯后修飾(例如，磷酸化或糖基化)。本文提供的多肽典型地為10-50個氨基酸的長度(例20如，長度為10，11,12,13,14,15,20,25,30,35，40,45或50個氨基酸)。長度為10-20個氨基酸的多肽(例如，長度為10,11,12，13,14,15,16,17,18,19或20個氨基酸)可以是特別有用的。術(shù)語"氨基酸"指天然氨基酸、非天然氨基酸和氨基酸類似物，全都以它們的D和L立體異構(gòu)體形式存在，只要它們的結(jié)構(gòu)允許。天然氨基25酸包括丙氨酸(Ala),精氨酸(Arg)，天冬酰胺(Asn)，天冬氨酸(Asp),半胱氨酸(Cys)，谷氨酰胺(Gln)，谷氨酸(Glu)，甘氨酸(Gly)，組氨酸(His)，異亮氨酸(Ile),亮氨酸(Leu),賴氨酸(Lys)，甲硫氨酸(Met),苯丙氨酸(Phe),脯氨酸(Pro)，絲氨酸(Ser),蘇氨酸(Thr),色氨酸(Trp),酪氨酸(Tyr),和纈氨酸(Val)。非天然氨基酸包括，但不限于，鈴蘭氨酸(azetidinecarboxylicacid)、302-氨基己二酸、3-氨基己二酸、(3-丙氨酸、氨基丙酸、2-氨基丁酸、4-氨基丁酸、6-氨基己酸、2-氨基庚酸、2-氨基異丁酸、3-氨基異丁酸、2-氨基庚二酸、2,4-二氨基異丁酸、鎖鏈賴氨素、2,2'-二氨基庚二酸、2,3-二氨基丙酸、N-乙基甘氨酸、N-乙基天冬酰胺、羥基賴氨酸、別-羥基賴氨酸，3-羥基脯氨酸、4-羥基脯氨酸、異鎖鏈賴氨素、別-異亮氨酸、N-甲基甘氨5酸、N-甲基異亮氨酸、N-甲基纈氨酸、正纈氨酸、正亮氨酸、鳥氨酸和六氫吡啶羧酸。"類似物"是一種化學(xué)化合物，其彼此結(jié)構(gòu)上相似，但在組成上稍微不同(如在用不同元素的原子替代一個原子上或者在特定官能團(tuán)的存在上)。因此，"氨基酸類似物"與在天然多肽中典型發(fā)現(xiàn)的天然存在的氨基io酸分子結(jié)構(gòu)相似，但是在組成上不同，以致C端羧基、N端氨基、或側(cè)鏈官能團(tuán)已經(jīng)被化學(xué)修飾成另一種官能團(tuán)。氨基酸類似物包括天然和非天然氨基酸，其在它們的N端氨基或它們的側(cè)鏈基團(tuán)進(jìn)行可逆或不可逆地化學(xué)封閉、或修飾，并且包括，例如，甲硫氨酸亞砜、甲硫氨酸砜、S-(羧甲基)-半胱氨酸、S-(羧甲基)-半胱氨酸亞砜和S-傻甲基)-半胱氨酸砜。氨15基酸類似物可以是天然存在的，或可以是合成制備的。氨基酸類似物非限制性的實例包括5-羥色氨酸(5-HTP)，天冬氨酸-((3-甲酯)，天冬氨酸的類似物；N-乙基甘氨酸，甘氨酸的類似物；以及丙氨酸羧酰胺(carboxamide)，丙氨酸的類似物。氨基酸和氨基酸類似物的其它實例在Gross和Meienhofer，ThePeptides:Analysis,Synthesis,Biology(肽分析，合成，20生物學(xué))，AcademicPress,Inc.(學(xué)院出版公司)，紐約(1983)中列出。根據(jù)多肽主鏈附近的氨基酸殘基側(cè)鏈的拓?fù)浠瘜W(xué)排列可以描述多肽的立體化學(xué)，其通過氨基酸殘基之間的肽鍵和鍵合的殘基的ot-碳原子而定義。另外，多肽主鏈具有不同的末端和這樣的方向。大多數(shù)天然存在的氨基酸為L-氨基酸。天然存在的多肽主要包括L-氨基酸。25D-氨基酸是L-氨基酸的對映異構(gòu)體，并且可以形成本文稱為"反轉(zhuǎn)(irwerso)"多肽的肽(即，對應(yīng)天然肽但由D-氨基酸而非L-氨基酸組成的肽)。"反(retro)"多肽由L-氨基酸組成，但是具有其中氨基酸殘基按天然肽序列的反方向組裝的氨基酸序列.天然存在的多肽的"反-反轉(zhuǎn)(retro-inverso)"修飾包括將具有與對應(yīng)30的L-氨基酸相反的a-碳立體化學(xué)的氨基酸(即，D-或D-別-氨基酸)按照與天然多肽序列相反的順序合成組裝。因此，反-反轉(zhuǎn)類似物具有反轉(zhuǎn)的末端和反轉(zhuǎn)的肽鍵方向，然而其近似地保留了如在天然肽序列中的側(cè)鏈的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。術(shù)語"天然(native)"是指對于制備部分或完全的反、反轉(zhuǎn)或反-反轉(zhuǎn)類似物用作起始序列的L-氨基酸的任何序列。5部分反-反轉(zhuǎn)多肽類似物是其中只有部分序列反轉(zhuǎn)并且用對映異構(gòu)氨基酸殘基替代的多肽。由于這樣的類似物的反向反轉(zhuǎn)部分具有反轉(zhuǎn)的氨基和羧基末端，側(cè)連在反向-反轉(zhuǎn)部分的氨基酸殘基可以分別用側(cè)鏈類似的a-取代的雙-二氨基甲垸和丙二酸替代。備選地，多肽可以為完全的反-反轉(zhuǎn)類似物，其中全部序列反轉(zhuǎn)并且用D-氨基酸替代。io本文提供的多肽的氨基酸序列是稍微限定的，但是可以有一些變化。例如，本文所提供的多肽典型地包括氨基酸序列Xaa]-Cys-Ala-Xaa2-His-Xaa3-Xaa4-Xaa5-Leu-Val-Trp-Cys陽Xaa6(SEQIDNO:l)，其中由Xaan表示的殘基可以表現(xiàn)出可變性。例如，Xaa,可以不存在或可以為任何氨基酸(例如，Arg或Asp)。Xaa2可以為任何氨基酸，15諸如Phe、Tyr、Trp、Arg、5-羥色氨酸(5-HTP)或任何其它的氨基酸衍生物。Xaa3可以為任何氨基酸。Xaa4可以為Gly或Ala，而Xaas可以為Glu或Ala。與Xaa,相同，Xaa6也可以不存在或可以為任何氨基酸。在一些實施方案中，多肽可以包含氨基酸序列Asp-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu隱Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:2)。備20選地，多肽可以包含氨基酸序列Asp-Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:3)或Asp-Cys-Ak-Arg-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:4)。在一些實施方案中，多肽可以包含氨基酸序列Arg-Cys-Ala-Arg-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:5),25Arg-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:6),或Arg-Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:7)。在一些實施方案中，多肽可以包含氨基酸序列Cys-Ala-Xaa-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys(SEQIDNO:8),其中Xaa可以是Phe,Tyr，Trp,Arg,或5-HTP。例如，多肽可以包含下述氨基酸序30列Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:9),Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:10),和Cys-Ala-Arg-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:11)。為了體內(nèi)應(yīng)用，可以通過在氨基端或羧基端添加穩(wěn)定劑，對本文提供的多肽進(jìn)行修飾，以促進(jìn)多肽在體內(nèi)的存活。這可以用于這樣的情形在5細(xì)胞吸收前，肽末端趨向于被蛋白酶降解。這樣的封閉試劑可以包括，但不限于，添加的相關(guān)的或不相關(guān)的肽序列，其可以附著于多肽的氨基端和/或羧基端殘基上(例如，附著于N-端氨基酸的乙酰基或者附著于C-端氨基酸的酰胺基)。應(yīng)用本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員熟悉的方法，可以在多肽合成過程中通過化學(xué)方法或者通過重組DNA技術(shù)獲得這樣的附著。備選地，io封閉試劑，諸如焦谷氨酸或其它本領(lǐng)域已知的分子，可以附著于氨基端和/或羧基端殘基，或者氨基端的氨基或羧基端的羧基可以用不同的部分替代。在氨基端的脯氨酸或Xaa-Pro-Pro(例如，Ala-Pro-Pro)序列可以是特別有用的(參見，例如，WO00/22112)。例如，多肽可以包含氨基酸序列15Xaa廣Pro-Pro-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-Glu陽Leu-Val-Trp-Cys隱Thr(SEQIDNO:12),其中Xaa,為任何氨基酸(例如，Ala),和Xaa2是Trp,Tyr,Phe,Arg,或5-HTP。因此，例如，多肽可以包含氨基酸序列Xaa,-Pro-Pro-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:13),Xaa廣Pro-Pro-Cys-Ala-Arg-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:14),20或Xaa,-Pro-Pro-Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-Leu醫(yī)Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:15)。備選地，多肽可以包含氨基酸序列Xaa廣Pro-Pro-Asp-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:16),Xaa廣Pro-Pro隱Asp-Cys-Ala-Arg-His-Leu-Gly-Glu-Leu畫Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:17)，Xaa廠Pro-Pro-Asp-Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-25Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:18),Xaa廣Pro隱Pro-Arg-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:19),Xaa廣Pro-Pro-Arg-Cys-Ala-Arg-His-Leu-Gly-Glu陽Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:20)，或Xaa-Pro-Pro-Arg-Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:21)。30本文提供的多肽可以在它們的羧基端具有Pro-Pm-Xaa(例如，Pro-Pro-Ala)序歹ij。例如，多肽可以包含氨基酸序列Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu扁Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Pro-Pro-Xaa(SEQIDNO:22),Cys-Ala-Arg匿His-Leu-Gly-Glu陽Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Pro-Pro-Xaa(SEQIDNO:23),Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-5Pro-Pro扁Xaa(SEQIDNO:24),Asp-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Pro-Pro-Xaa(SEQIDNO:25)，Asp-Cys-Ala-Arg陽His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Pro-Pro-Xaa(SEQIDNO:26)，Asp-Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Pro-Pro-Xaa(SEQIDNO:27),Arg-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Pro-10Pro-Xaa(SEQIDNO:28),Arg-Cys-Ala-Arg-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Pro-Pro-Xaa(SEQIDNO:29),或Arg-Cys-Ala-Phe-His-Leu-Gly-Glu-Leu層Val-Trp-Cys腸Thr-Pro-Pro-Xaa(SEQIDNO:30)，其中Xaa可以是任何氨基酸。在一些實施方案中，本文提供的多肽可以包含添加的氨基酸序列，其15在SEQIDNO:l描述的序列的氨基端、SEQIDNO:l描述的序列的羧基端，或兩端。例如，多肽可以包含氨基酸序列Trp-Glu-Ala-XaarCys-Ala-Xaaz-His-XaarXaarXaas-Leu-Val-Trp-Cys-XaarLys-Val-Glu-Glu(SEQIDNO:31),其中Xaan所示的殘基可以表現(xiàn)出可變性。對于SEQIDNO:l描述的氨基酸序列，Xaa,可以不存在或可以為任20何氨基酸(例如，Arg或Asp);Xaa2可以為Phe，Tyr，5-HTP，Trp,或Arg;Xaa3可以為任何氨基酸；Xaa4可以為Gly或Ala;Xaa;可以為Glu或Ala;和Xaa6可以不存在或為任何氨基酸。在一個實施方案中，多肽可以包含氨基酸序歹UTrp-Glu-Ala-Asp-Cys-Ala-Xaa-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Lys-Val-Glu-Glu(SEQIDNO:32),其中Xaa為Arg,Trp,255-HTP,Tyr,或Phe。例如，多肽可以包含氨基酸序列Trp-Glu-Ala-Asp-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Lys-Val-Glu-Glu(SEQIDNO:33)。在一些實施方案中，多肽可以由氨基酸序列(Xaa0n-Xaa2-Cys-Ala-Xaa3-His-Xaa4-Xaa5-Xaa6-Leu-Val-Trp-Cys-(Xaa7)n30(SEQIDNO:34)組成，其中Xaa所示的殘基可以表現(xiàn)出可變性，以及n可以是從0到10的整數(shù)(例如，0,1，2，3,4,5,6，7,8,9或10)。例如，Xaa,可以為任何氨基酸；Xaa2可以不存在或為任何氨基酸(例如，Arg或Asp);Xaa3可以為Phe,Tyr,Trp,Arg,或5-HTP;Xaa4可以為任何氨基酸；Xa&可以為Gly或Ala;Xaa6可以為Glu或Ala;Xaa7可以為任何氨基酸；以及n5可以從0到5(例如，0,1,2，3,4或5)。備選地，多肽可以由氨基酸序列(Xaa))n-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQIDNO:35)組成，其中Xaa,為任何氨基酸，Xaa2為Phe,Tip,Tyr，Arg，或5-HTP,Xaa3為任何氨基酸，以及n是從0到5的整數(shù)(例如，0,1,2,3,4或5)。在這些實施方案內(nèi)的多肽的實例包括，但不限于，由氨基酸序列ioAla-Ala-Ala-Ala-Ala-Asp-Cys-Ala-Arg-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala(SEQIDNO:36),Ala-Ala-Arg-Cys-Ala-Arg-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-AIa-Ala(SEQIDNO:37),或Ala-Ala-Ala-Asp-Cys-Ala-Phe-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-Ala-Ala(SEQIDNO:38)組成的多肽。15在SEQIDNOs:1-38中描述的氨基酸序列典型地包含2個半胱氨酸殘基。由于這2個半胱氮酸殘基之間的二硫鍵的形成，含有這些氨基酸序列的多肽可以環(huán)化。例如，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可以應(yīng)用Ellman's試劑(Ellman，sReagent)來確定含有多個半胱氨酸殘基的肽是否環(huán)化。在一些實施方案中，這些半胱氨酸殘基可以用可以形成內(nèi)酰胺鍵而不是二硫鍵的20其它天然或非天然的氨基酸殘基取代。例如，一個半胱氨酸殘基可以用天冬氨酸或谷氨酸取代，而另外一個可以用鳥氨酸或賴氨酸取代。這些組合的任一種都可以產(chǎn)生內(nèi)酰胺鍵。通過改變形成內(nèi)酰胺鍵的氨基酸，可以生成本文提供的多肽，其包含與二硫鍵長度近似相等的鍵，如果多肽中存在2個半胱氨酸殘基就可能形成所述二硫鍵。25本文提供的多肽可以包含氨基酸標(biāo)記。"標(biāo)記(tag)"通常為短的氨基酸序列，其通過與抗所述標(biāo)記的抗體的相互作用或者通過識別所述標(biāo)記的其它化合物或分子而提供檢測或純化的便捷方法。例如，可以應(yīng)用諸如c-myc、血凝素、多組氨酸或FLAG⑧的標(biāo)記來輔助多肽的純化和檢測。例如，基于組氨酸殘基對鎳離子的親和力(例如，在Ni-NTA柱上)，可以30純化帶有多組氨酸標(biāo)記的多肽，并且可以通過抗多組氨酸的抗體(例如，5-組氨酸抗體；快而精公司(Qiagen),Valencia,CA)在蛋白質(zhì)印跡上檢湖ij。盡管在氨基端或羧基端插入是特別有用的，但是標(biāo)記可以插入在多肽序列內(nèi)的任何位置。本發(fā)明還提供基于多肽的氨基酸序列基礎(chǔ)設(shè)計的擬肽5(peptidomimetic)化合物。擬肽化合物是合成的、非肽化合物，其具有基本上與選擇的肽的三維構(gòu)象相同的三維構(gòu)象(即"肽模體，")，并且因此可以賦予與選擇的肽相同或相似的功能。本文提供的擬肽化合物可以設(shè)計成模擬本文所述的任何多肽。蛋白酶抗性的擬肽化合物特別有用。并且，擬肽化合物可以具有增加io治療效用的附加特征，諸如增加的細(xì)胞滲透性和延長的生物半衰期。這樣的化合物典型地具有部分或完全是非肽的主鏈，但是具有與在擬肽化合物依據(jù)的肽中存在的氨基酸殘基的側(cè)鏈基團(tuán)相同或相似的側(cè)鏈基團(tuán)。一些類型的化學(xué)鍵(例如，酯、硫代酸酯、硫代酰胺、逆酰胺、還原羰基、二亞甲基和酮亞甲基)是本領(lǐng)域己知的在擬肽化合物構(gòu)建中用于肽鍵的有效取15代。本文所述的多肽和免疫球蛋白分子之間的相互作用典型地通過免疫球蛋白的CH2-CH3裂口發(fā)生。這樣的相互作用通過物理接近發(fā)生，并且例如，通過疏水相互作用調(diào)控。多肽對于免疫球蛋白分子的"結(jié)合親和力"是指多肽和免疫球蛋白之間相互作用的強度。結(jié)合親和力典型地表示為平20衡解離常數(shù)(Kd)，其以Kd^koff/k^進(jìn)行計算，此處k。ff=反應(yīng)的動力學(xué)解離常數(shù)，和k。,反應(yīng)的動力學(xué)締合常數(shù)。Kd表示為濃度，其低Kd值(例如，低于IOOnM)表示高親和力?？梢耘c免疫球蛋白分子相互作用的多肽典型地具有對于免疫球蛋白的CH2-CH3裂口至少1pM的結(jié)合親和力(例如，至少500nM，至少100nM，至少50nM或至少10nM)。25本文提供的多肽可以以基本相等的親和力結(jié)合于和抗原結(jié)合的免疫球蛋白分子，以及結(jié)合于單體免疫球蛋白。備選地，對于與抗原結(jié)合的免疫球蛋白分子，多肽可以具有比對于單體免疫球蛋白更高的結(jié)合親和力(例如，至少10倍，至少100倍，或至少1000倍更高的結(jié)合親和力)。當(dāng)抗原結(jié)合于Fab區(qū)時在免疫球蛋白分子的Fc區(qū)內(nèi)發(fā)生的構(gòu)象變化可能30參與親和力的差異。結(jié)合和非結(jié)合的NC6.8Fab(來自鼠單克隆抗體)的晶體結(jié)構(gòu)表明，與其在非結(jié)合的Fab中的位置相比，F(xiàn)ab重鏈尾在抗原/抗體復(fù)合物的晶體中移動了19埃(Guddat等.(1994)7Mo/.所o/.f分7生激學(xué)^^V236-247-274)。由于在完整的抗體中Fab區(qū)的C端尾與Fc區(qū)連接，這一移動(shift)預(yù)計將影響CH2-CH3裂口的構(gòu)象。并且，完整免5疫球蛋白的一些三維結(jié)構(gòu)檢驗揭示Fab重鏈和FcCH2-CH3裂口之間的直接的物理聯(lián)系(Harris等.(1997)歷oc/^w^;^C生激眾學(xué)J36:1581-1597;Saphire等.(2001)Sc/e"ce(W學(xué)9293:1155-1159)。單體(即，不結(jié)合的)和免疫復(fù)合的IgG的CH2-CH3裂口的分子模型揭示單體的FcCH2-CH3裂口具有封閉的構(gòu)型(closedconfiguration),其io可以防止與關(guān)鍵(critical)氨基酸殘基結(jié)合(例如，His435;參見，例如，O'Brien等.(1994)^ra^.所0c/2e附.所o//z".f生激眾學(xué)/〃f激激湮學(xué)/l案J310:25-31;Jefferies等.(1984)/wmM"o/.f免瘦學(xué)遺識J7:191-194;和West等.(2000)所oc/zemW^f生激眾學(xué)J39:9698-9708)。然而，免疫復(fù)合的(抗原結(jié)合的)IgG具有更加開放的構(gòu)型，并且因此更加利于配體結(jié)合。15例如，RF對于免疫復(fù)合的IgG的結(jié)合親和力比RF對于單體IgG的結(jié)合親和力大得多(Corper等.(1997)A^.所o/.f^然翁溝主激學(xué)；4:374;Sohi等.(1996)/wm麗o/.^疫學(xué)J88:636)。典型地，相同的結(jié)果對于本文提供的多肽也是正確的。由于本文提供的多肽可以結(jié)合于免疫球蛋白分子的CH2-CH3裂口，它20們可有效用于阻滯其它因子(例如，F(xiàn)cRn、FcR、Clq、組蛋白、MBP、SOD1和其它免疫球蛋白)與免疫球蛋白的Fc區(qū)的相互作用，并且因此可以抑制Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成。"抑制"意指當(dāng)與不存在多肽時免疫復(fù)合物形成的水平相比較時，在多肽的存在下，F(xiàn)c介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成減少。這樣的抑制可以在體外(例如，在測試試管中)或在體內(nèi)(例如，25在個體中)發(fā)生。可以應(yīng)用任何適當(dāng)?shù)姆椒ㄔu估免疫復(fù)合物形成的水平。在本領(lǐng)域內(nèi)已知許多這樣的方法，并且本文描述了這些方法中的一些。本文提供的多肽典型地以具有1:2的IgGFc與肽的化學(xué)計量的單體方式與免疫球蛋白分子的Ch2-Ch3裂口相互作用(即，只與一個免疫球蛋白分子相互作用，并且因此不會將2個或更多的免疫球蛋白分子結(jié)合在一30起)。因此，多肽的存在排除了通過Fc區(qū)與其它免疫球蛋白分子的相互作用。可以在體外評估Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成的抑制，例如，通過在本文所述的多肽存在和不存在時，將IgG分子與標(biāo)記的免疫球蛋白分子(例如，熒光或酶(ELISA)標(biāo)記的Fc受體或Clq)—起溫育，并且測量接合到免疫復(fù)合物中的標(biāo)記的免疫球蛋白的量進(jìn)行評估。如下文所討論，還5可以應(yīng)用適于檢測免疫復(fù)合物形成的其它方法。丄多it游煮y備,錄眾本文提供的多肽可以通過許多方法生產(chǎn)，其中的許多方法為本領(lǐng)域所公知。通過實例的方式，但不限于此，多肽可以通過從天然來源中(例如，io從分離的細(xì)胞、組織或體液中)提取，通過編碼所述多肽的重組核酸的表達(dá)(例如，下文所描述的)，或通過化學(xué)合成(例如，通過固相合成或本領(lǐng)域公知的其它方法，包括用ABI肽合成器(應(yīng)用生物系統(tǒng)(AppliedBiosystems)，F(xiàn)osterCity,CA))合成而獲得。還描述了用于合成反-反轉(zhuǎn)多肽類似物的方法(Bonelli等.(1984)JP印/cfe6#歪^15質(zhì)^"充嵐/^雜志J24:553-556;禾口Verdini和Viscomi(1985)J.C/zem.Soc.尸enb力rrara.r眾學(xué)學(xué)會-尸eWU"學(xué)叛染,吉」1:697-701)，以及用于部分反-反轉(zhuǎn)肽類似物的固相合成的一些方法(參見，例如，歐洲專利號EP0097994)。本發(fā)明提供此處所描述的編碼多肽的分離的核酸分子。如此處所用，20"核酸"是指RNA和DNA，包括cDNA、基因組DNA和合成的(例如，化學(xué)合成的)DNA。核酸可以是雙鏈的或單鏈的(即，有義或反義單鏈)。如此處所用涉及核酸的術(shù)語"分離的(isolated)"是指天然存在的核酸，其不會直接毗連這樣的2個序列在其衍生的生物體的天然存在的基因組中，其直接與所述序列毗連(1個在5'端和1個在3'端)。由于所述25非天然存在的序列沒有在自然中發(fā)現(xiàn)，并且在天然存在的基因組中沒有直接毗連的序列，所以如此處所用涉及核酸的術(shù)語"分離的"還包括任何非天然存在的核酸序列。分離的核酸可以是，例如，DNA分子，條件是在天然存在的基因組中通常與DNA分子直接毗連的一條核酸序列被移除或不存在。因此，分30離的核酸包括，但不限于，不依賴其它序列作為獨立的分子存在的DNA分子(例如，化學(xué)合成的核酸、或通過PCR或限制性核酸內(nèi)切酶處理產(chǎn)生的cDNA或基因組DNA片段)，以及整合到載體、自主復(fù)制的質(zhì)粒、病毒(例如，逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、腺病毒或皰疹病毒)、或整合到原核或真核生物的基因組DNA中的DNA。另外，分離的核酸可以包括工程化5核酸，諸如重組DNA分子，其為雜化物或融合核酸的一部分。例如，存在于在cDNA文庫或基因組文庫、或含有基因組DNA限制性消化物的凝膠切片內(nèi)的數(shù)百到數(shù)百萬其它核酸中的核酸不被認(rèn)為是分離的核酸。本發(fā)明還提供含有本文所描述的核酸的載體。如此處所用，"載體(vector)"是一種復(fù)制子，諸如質(zhì)粒、噬菌體、或黏端質(zhì)粒，其中可以插m入另一種DNA片段，以使所插入的片段得以復(fù)制。本文提供的載體優(yōu)選為表達(dá)載體，其中核苷酸編碼帶有起始密碼子甲硫氨酸的多肽，其可操作地連接于表達(dá)控制序列。如此處所用，"可操作地連接(operablylinked)"意指組合到遺傳構(gòu)建體中以便表達(dá)控制序列有效地控制目的編碼序列的表達(dá)。"表達(dá)控制序列"為控制和調(diào)節(jié)另一種DNA序列的轉(zhuǎn)錄和翻譯的isDNA序列，以及"表達(dá)載體"是包括表達(dá)控制序列的載體，以便轉(zhuǎn)錄和翻譯整合到載體中的相關(guān)的DNA片段。當(dāng)RNA聚合酶將所述編碼序列轉(zhuǎn)錄成mRNA時，該mRNA然后翻譯成由所述編碼序列編碼的蛋白，所述編碼序列"可操作地連接"并且受到細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列的"控制"。20可以應(yīng)用本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的方法將分離的編碼目的多肽的核酸分子亞克隆到表達(dá)載體中，所述表達(dá)載體包含相關(guān)編碼序列和適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)錄/翻譯控制信號。參見，例如，Sambrook等.，MolecularCloning:ALaboratoryManual(分子克隆實驗室手冊)〖第二版),冷泉港實驗室(ColdSpringHarborLaboratory),紐約(1989);禾口Ausubel等.，CurrentProtocolsin25MolecularBiology(分子生物學(xué)現(xiàn)代方法),格林出版協(xié)會和wiley相互科學(xué)(GreenPublishingAssociatesandWileyInterscience),紐約(1989)。如本文所述，表達(dá)載體可以用于各種系統(tǒng)(例如，細(xì)菌、酵母菌、昆蟲細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞)。適宜的表達(dá)載體的實例包括，但不限于，質(zhì)粒和衍生于，例如，皰疹病毒、反轉(zhuǎn)錄病毒、痘苗病毒、腺病毒以及腺伴隨病毒的30病毒載體。廣泛種類的適宜的表達(dá)載體和系統(tǒng)可以商購獲得，包括pET系列的細(xì)菌表達(dá)載體(Novagen,Madison,WI)、腺-X表達(dá)系統(tǒng)(克隆技術(shù)(Clontech))、Baculogold桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(BD生物科學(xué)Pharmingen，圣地亞哥(SanDiego)，CA)和pCMV-Tag載體(Stratagene，拉霍亞(LaJolla),CA)。5編碼本文所述的多肽的表達(dá)載體可以用于生產(chǎn)多肽?？梢杂糜诙嚯牡男×炕虼罅可a(chǎn)的表達(dá)系統(tǒng)包括，但不限于，微生物，諸如細(xì)菌(例如，大腸桿菌(￡.co/0和枯草芽孢桿菌(及m^/fo)，其轉(zhuǎn)化了含有本文所述的核酸分子的重組噬菌體DNA、質(zhì)粒DNA、或黏端質(zhì)粒DNA表達(dá)載體；酵母(例如，釀酒酵母(X"mv/w'm))，其轉(zhuǎn)化了含有本文所述的核酸分io子的重組酵母表達(dá)載體；昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)，其感染了含有本文所述的核酸分子的重組病毒表達(dá)載體(例如，桿狀病毒)；植物細(xì)胞系統(tǒng)，其感染了含有本文所述的核酸分子的重組病毒表達(dá)載體(例如，煙草花葉病毒)或轉(zhuǎn)化了含有本文所述的核酸分子的重組質(zhì)粒表達(dá)載體(例如，Ti質(zhì)粒)；或哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)(例如，原代細(xì)胞或無限增殖的細(xì)胞系，諸如COS細(xì)15胞、CHO細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、HEK293細(xì)胞和3T3Ll細(xì)胞)，其攜帶含有衍生于哺乳動物細(xì)胞基因組的啟動子(例如，金屬硫蛋白啟動子)或衍生于哺乳動物病毒的啟動子(例如，腺病毒后期啟動子和巨細(xì)胞啟動子)，以及本文所述的核酸的重組表達(dá)構(gòu)建體。如此處所用，術(shù)語"純化的多肽"是指這樣的多肽其沒有天然存在20的負(fù)體(例如，擬肽)，或是化學(xué)合成的并且因此不被其它多肽污染，或者是從其天然伴隨的其它細(xì)胞成分中(例如，其它細(xì)胞蛋白、多聚核苷酸或細(xì)胞成分)分離或純化出來的。典型地，當(dāng)其為至少70干重％，沒有與其天然締合的蛋白和天然存在的有機分子時，認(rèn)為所述多肽是"純化的"。因此，純化的多肽的制劑可以是，例如，至少80干重％、至少9025干重％或至少99干重％的所述多肽。用于純化本文提供的多肽的適合的方法可以包括，例如，親和層析、免疫沉淀法、大小排阻層析以及離子交換層析?？梢酝ㄟ^任何適當(dāng)?shù)姆椒y量純化的程度，這些方法包括，但不限于柱層析、聚丙烯酰胺凝膠電泳或高效液相色譜。4.模擬，設(shè)計和鑒別化合物得方法本發(fā)明還提供用于設(shè)計、模擬和鑒別化合物的方法，其中所述化合物可以結(jié)合于免疫球蛋白分子的CH2-CH3裂口，并且因此作用為Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成的抑制劑。此處，這樣的化合物還叫作"配體"。通過本發(fā)明提供的方法設(shè)計、模擬和鑒別的化合物典型地可以通過CH2-CH3裂口5與免疫球蛋白分子相互作用，并且典型地對于免疫球蛋白的CH2-CH3裂口具有至少lpM的結(jié)合親和力(例如，至少500nM，至少100nM，至少50nM，或至少10nM)。對于免疫復(fù)合的免疫球蛋白分子，所述化合物通常具有比對于單體免疫球蛋白分子更高的結(jié)合親和力(例如，至少10倍，至少100倍，或至少IOOO倍更高的結(jié)合親和力)。io本發(fā)明提供的化合物典型地以單體方式與免疫球蛋白分子的Ch2-Ch3裂口相互作用(即，只與一個免疫球蛋白分子相互作用，并且因此不會將兩個或更多的免疫球蛋白分子結(jié)合在一起)?；衔锓肿雍兔庖咔虻鞍追肿又g的相互作用典型地包括免疫球蛋白的位置252、253、435和436的氨基酸殘基(按照Kabat編號，如前所述)。本發(fā)明所述的化合15物和CH2-CH3裂口之間的相互作用使得所述化合物能夠通過阻滯其它因子(例如，F(xiàn)cRs、FcRn、組蛋白、MBP、RF、tau蛋白、a-突觸核蛋白、S0D1和Clq)與CH2-CH3裂口的結(jié)合而抑制Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物的形成。通過本發(fā)明提供的方法鑒別的化合物可以是多肽，諸如，例如，本文20所描述的那些。備選地，化合物可以是能夠特異性結(jié)合于免疫球蛋白分子CH2-CH3裂口的任何適宜類型的分子。"模擬(modeling)"意指基于三維結(jié)構(gòu)信息和受體-配體相互作用模型對受體-配體結(jié)構(gòu)/功能進(jìn)行的定量和/或定性的分析。這包括常規(guī)的基于數(shù)字的分子動力學(xué)和能量最小化模型、交互式計算機立體圖、修飾的分子25力學(xué)模型、距離幾何學(xué)和其它基于結(jié)構(gòu)的限制模型。模擬典型地使用計算機進(jìn)行，并且可以使用己知方法進(jìn)一步最優(yōu)化。設(shè)計與已經(jīng)結(jié)合抗原的免疫球蛋白分子的CH2-CH3裂口特異性結(jié)合(即，以高親和力)的配體的方法典型地是基于計算機的，并且包括使用具有能夠產(chǎn)生原子模型的程序的計算機。對于設(shè)計可以與FcCh2-Ch3裂30口相互作用的配體，應(yīng)用X-射線結(jié)晶學(xué)數(shù)據(jù)的計算機程序是特別有用的。例如，諸如RasMol的程序可以用于產(chǎn)生CH2-CH3裂口的三維模型和/或確定參與配體結(jié)合的結(jié)構(gòu)。諸如INSIGHT(Accelrys,伯靈頓(Burlington),馬薩諸塞)，GRASP(AnthonyNicholls,哥倫比亞大學(xué))，Dock(分子設(shè)計研究所(MolecularDesignInstitute),加利福尼亞舊金山大學(xué)(Universityof5CaliforniaatSanFrancisco)),和Auto-Dock(Accelrys)的計算機程序允許進(jìn)一步的處理和弓I入新結(jié)構(gòu)的能力。方法可以包括，例如，給計算機提供位于Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物中免疫球蛋白分子CH2-CH3裂口內(nèi)的氨基酸殘基(例如，在裂口的位置252,253,435和436的氨基酸殘基)的原子結(jié)構(gòu)坐標(biāo)，使用計算機來產(chǎn)生CH2-CH3io裂口的原子模型，進(jìn)一步提供候選化合物的原子結(jié)構(gòu)坐標(biāo)，并且生成最優(yōu)化位于Ch2-Ch3裂口內(nèi)的化合物的原子模型，并且，如果所述化合物與裂口位置252,253,435和436的氨基酸殘基相互作用，那么鑒定所述候選化合物為目的配體。提供給計算機的數(shù)據(jù)還可以包括除了在位置252,253,435和436之外的位置的氨基酸殘基的原子坐標(biāo)。"最優(yōu)化位于(optimally]5positioned)"意指進(jìn)行放置以最優(yōu)化候選化合物和CH2-CH3裂口的位置252,253,435和436的氨基酸殘基之間的疏水性相互作用。備選地，用于設(shè)計具有對于免疫球蛋白分子CH2-CH3裂口的特異結(jié)合親和力的配體的方法可以利用在其內(nèi)存中存儲裂口的原子模型的計算機。然后，可以將候選化合物的原子坐標(biāo)提供給計算機，并且可以生成最優(yōu)化20放置的候選化合物的原子模型。如本文所描述，例如，如果所述化合物與裂口位置252,253,435和436的氨基酸殘基相互作用，那么可以鑒定所述候選化合物為具有對于免疫球蛋白分子CH2-CH3裂口的特異結(jié)合親和力的配體。單體(非抗原結(jié)合的)IgGFc在不同于IgGFcCH2-CH3裂口的位點結(jié)合，諸如在更低的鉸鏈區(qū)結(jié)合(Wines等，2000,164:5313-5318)，而25免疫復(fù)合的(抗原結(jié)合的)IgGFc與Fqdla的結(jié)合被IgM類風(fēng)濕因子(RF-AN)抑制，3D結(jié)構(gòu)己經(jīng)表明其只與IgGFcCH2-CH3界面裂口結(jié)合(Sohi等，(1996)，Immunology(免疫學(xué)),88:636-641和Corper等，(1997),NatureStructuralBiology(自然結(jié)構(gòu)生物學(xué))，4(5):374-381)?？扇艿腇cYlIa抑制免疫復(fù)合的(而不是單體的、非免疫復(fù)合的)IgGFc與RF-AN的結(jié)合30(Wines等，(2003),Immunology(免疫學(xué))，109:246-254)，然后結(jié)合IgGFcCh2-Ch3裂口的抑制剤，諸如本文所述的肽，抑制免疫復(fù)合的(抗原結(jié)合的)IgGFc與Fc,s的結(jié)合。還可以應(yīng)用其它基于結(jié)構(gòu)的設(shè)計/模擬技術(shù)(參見，例如，Jackson(1997)^而'"flraOco/ogyC^^學(xué),Z/會J24:L164-172;和Jones等.(1996)MedC/2em.(醫(yī)學(xué)生物化學(xué)雜志)39:904-917)，從本文所述的化合物的結(jié)構(gòu)信息交互式地設(shè)計本發(fā)明提供的化合物?；衔锖投嚯倪€可以通過，例如，通過計算機模擬將候選化合物特征性描述為在空間上并優(yōu)選地適配(即，具有高親和力)免疫球蛋白分子的CH2-CH3裂口，然后在體外或體內(nèi)篩選那些具有抑制Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合io物形成的能力的化合物而進(jìn)行鑒定。用于所述體外和體內(nèi)篩選的適用的方法包括本文所描述的那些。5.蘊合激浙劍^本發(fā)明提供用于治療由異常Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成(例如，F(xiàn)c-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物過量生產(chǎn))引起的疾病的方法。在這些方法中，將本發(fā)明所述的多肽和化合物施用給受試者(例如，人或其它哺乳動物)，所述受試者患有可以通過調(diào)節(jié)Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成而減輕的疾病或病癥(例如，ALS,PD,或AD)，并且本發(fā)明所述的多肽和化合物可以抑制免疫復(fù)合的IgGFc與，例如，mClq，sClq,Fc丫Rs,組蛋白，MBP,tau蛋白，a-突觸核蛋白，S0D1和FcRn的結(jié)合。典型地，可以給懷疑患有、診斷患有或有危險患有與免疫復(fù)合物形成相關(guān)的疾病或病況的受試者施用一種或多種多肽或者化合物。組合物可以包含一種或多種本文所述的多肽和化合物。例如，CH2-CH3結(jié)合多肽可以組合藥用載體或稀釋劑，并且可以按量和時間周期施用，所述的量和時間周期將取決于具體疾病的性質(zhì)、其嚴(yán)重度和受試者的總體情況而變化。典型地，所述多肽以抑制量(即，以有效抑制多肽接觸的細(xì)胞或組織中免疫復(fù)合物的產(chǎn)生的量)施用。本發(fā)明所述的多肽和方法還可以預(yù)防性地應(yīng)用，例如，將處于免疫復(fù)合物異?；虺可a(chǎn)的危險中的受試者(例如，移植物受者)中的免疫反應(yīng)性減小到最低。多肽抑制Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成的能力可以通過，例如，在治療之前和之后測量受試者中免疫復(fù)合物的水平進(jìn)行評估。許多方法可以用于測量組織或生物樣品中免疫復(fù)合物水平，其包括本領(lǐng)域公知的那些方法。例如，如果受試者是研究動物，那么可以通過在安樂處死后免疫染色而評估關(guān)節(jié)處的免疫復(fù)合物水平。還可以通過直接方法，諸如測量血清樣品中的循環(huán)免疫復(fù)合物的水平，來評估抑制性多肽的效用。備選地，可以應(yīng)用5間接方法來評估多肽在活的受試者中的效用。例如，可以從免疫介導(dǎo)的神經(jīng)變性疾病或者ALS、PD或AD的體外或體內(nèi)模型的臨床改善而推斷減少的免疫復(fù)合物形成。用于配制和后續(xù)施用治療組合物的方法是為本領(lǐng)域的技術(shù)人員公知的。劑量定量通常取決于要治療的疾病狀態(tài)的嚴(yán)重度和反應(yīng)性，治療的療10程持續(xù)幾天到幾個月，或者持續(xù)到實現(xiàn)治愈或獲得疾病狀態(tài)的減輕。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員常規(guī)確定最適劑量、定量方法和重復(fù)率。最適劑量可以取決于個體多肽的相對強度(potency)而變化，并且通常可以基于在體外和體內(nèi)動物模型中發(fā)現(xiàn)有效的EC50進(jìn)行估算。典型地，劑量為每kg體重O.Ol嗎-100g，并且可以給藥每天1次或多次、每兩周1次、每周115次、每月1次或甚至更不經(jīng)常給藥。成功治療后，可以理想地讓患者經(jīng)受維持治療，以防止所述疾病狀態(tài)的復(fù)發(fā)。本發(fā)明提供包含本發(fā)明所述的多肽和/或化合物的藥用組合物和制齊U。本發(fā)明還提供將本發(fā)明所述的多肽用于制備減少免疫復(fù)合物形成(例如，與ALS、PD或AD相關(guān)的免疫復(fù)合物形成)的藥物的方法。本發(fā)明20提供的多肽可以與其它分子，分子結(jié)構(gòu)，或化合物的混合物，諸如，例如，脂質(zhì)體、聚乙二醇、受體靶向的分子、或者口服、直腸、局部或其它制劑，進(jìn)行混合、包封、綴合或另外締合，用于輔助攝入、分布和/或吸收。"藥用載體"(本文也叫作"賦形劑")是用于運送一種或多種治療化合物(例如，CH2-CH3結(jié)合多肽)到受試者的藥用溶劑、混懸劑或任何其25它藥用惰性賦形劑。藥用載體可以是液體或固體，并且，當(dāng)其與一種或多種治療化合物和給出的藥用組合物的任何其它成分組合時，可以考慮計劃的施用方式而進(jìn)行選擇，以便提供需要的大小、稠度和其它相關(guān)的轉(zhuǎn)運和化學(xué)特性。不與氨基酸有有害反應(yīng)的典型的藥用載體包括，通過實例方式，但不限于水；鹽溶液；粘合劑(例如，聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖30維素)；填料(例如，乳糖和其它糖，明膠，或硫酸鈣)；滑潤劑(例如，淀粉，聚乙二醇或乙酸鈉)；崩解劑(例如，淀粉或淀粉羥乙酸鈉)；以及濕潤劑(例如，月桂硫酸鈉)。本發(fā)明提供的藥物組合物可以通過許多方法施用，其取決于需要的是局部還是全身性的治療，以及要治療的面積。例如，施用可以是局部的(例5如，透皮的、舌下的、眼的、或鼻內(nèi)的)；肺部的(例如，通過散劑或氣霧劑的吸入或吹入)；口服的；或腸胃外的(例如，通過皮下、鞘內(nèi)、心室內(nèi)、肌內(nèi)、或腹膜內(nèi)注射，或者通過靜脈內(nèi)點滴)。施用可以是快速的(例如，通過注射)或者可以在一段時間內(nèi)發(fā)生(例如，通過緩慢輸注或施用緩釋制劑)。對于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)的組織，可以通過注射或輸注10將CH2-CH3結(jié)合多肽施用到腦脊髓液中，優(yōu)選地和一種或多種能夠促進(jìn)所述多肽穿過血腦屏障滲透的藥劑一起施用。用于Ch2-Ch3結(jié)合多肽局部施用的制劑包括，例如，無菌的和未滅菌的水性溶液，在諸如醇類的常規(guī)溶劑中的非水性溶液，或者在液態(tài)或固態(tài)油基質(zhì)(oilbases)中的溶液。這樣的溶液還可以含有緩沖劑、稀釋劑以15及其它適宜的添加劑。用于局部施用的藥用組合物和制劑可以包括透皮貼片(transdermalpatches)、油膏、洗液、膏劑、凝膠、滴劑、栓劑、噴霧齊U、液體和散劑。鼻部噴霧劑特別有用，并且可以通過，例如，噴霧器或其它鼻部噴霧裝置進(jìn)行施用。通過吸入器的施用也是特別有用的。常規(guī)藥用載體、水、散劑或油基質(zhì)、增稠劑等可以是必需的或是需要的。20用于口服施用的組合物和制劑包括，例如，散劑或顆粒劑、或者在水或非水性介質(zhì)中的混懸液或溶液、膠囊、香囊或片劑。這樣的組合物還可以結(jié)合增稠劑、調(diào)味劑、稀釋劑、乳化劑、分散輔劑或結(jié)合劑。用于腸胃外、鞘內(nèi)或心室內(nèi)施用的組合物和制劑可以包括無菌的水溶液，其還可以含有緩沖劑、稀釋劑和其它適當(dāng)?shù)奶砑觿?例如，滲透增強25齊U、載體化合物和其它藥用載體)。藥物組合物可以包括，但不限于，溶液、乳狀液、水性混懸液和含脂質(zhì)體制劑。這些組合物可以從各種成分產(chǎn)生，其中所述成分包括，例如，預(yù)制的液體、自身乳化固體和自身乳化半固體。乳狀液通常為兩相系統(tǒng)，其包括密切混合并且分散在彼此之中的兩個不相溶的液相；通常，乳狀液30是油包7乂(water-in-oil，(w/o))或zK包油(oil-in-water,(o/w))禾中類。由于其配制的容易度和溶解、吸收以及生物利用度的功效，乳狀液制劑己經(jīng)廣泛地用于口服遞送治療劑。脂質(zhì)體是具有由親脂性材料形成的膜的和可以包含要遞送的組合物的水性內(nèi)核的囊泡。由于其從藥物遞送的觀點上提供的特異性和作用的持5續(xù)性，脂質(zhì)體可以是特別有用的。脂質(zhì)體組合物可以由，例如，磷脂酰膽堿，二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿，二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二肉豆蔻酰磷脂酰甘油，或二油?；字Ｒ阴０沸纬伞ＴS多親脂性試劑可以商購獲得，包括LIPOFECTIN(體外基因(Invitrogen)/生命技術(shù)，Carlsbad,CA)和EFFECTENE(快而精公司(Qiagen)，Valencia,CA)。io本發(fā)明提供的多肽還包含任何藥用鹽、酯或者所述酯的鹽、或任何其它化合物，所述化合物在施用給包括人在內(nèi)的動物時，能夠提供(直接地或間接地)生物活性代謝物或其殘基。因此，例如，本發(fā)明提供多肽的藥用鹽、藥物前體(prodrug)以及所述藥物前體的藥用鹽、和其它生物等價物。術(shù)語"藥物前體"是指一種治療藥劑，其以無活性形式制備，并且15通過內(nèi)生酶或其它化學(xué)劑和/或條件的作用在機體或其細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化成活性形式(即，藥物)。術(shù)語"藥用鹽"是指本發(fā)明所述的多肽在生理學(xué)上和制藥學(xué)上可用的鹽(即，保留母體多肽(parentpolypeptide)的需要的生物活性而沒有給予不理想的毒性作用的鹽)。藥用鹽的實例包括，但不限于，與陽離子(例如，鈉、鉀、鈣或多胺，諸如精胺)形成的鹽；與無機20酸(例如，鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸或硝酸)形成的酸式加成鹽；以及與有機酸(例如，乙酸、擰檬酸、草酸、棕櫚酸或延胡索酸)形成的鹽。含有本發(fā)明所述的多肽的藥用組合物還可以結(jié)合促進(jìn)多肽向動物皮膚有效運送的滲透增強劑。滲透增強劑可以增強親脂性和非親脂性藥物穿過細(xì)胞膜的擴散。滲透增強劑可以分類為屬于五大類中的一種，即，表面25活性劑(例如，月桂硫酸鈉、聚氧化乙烯-9-十二烷基醚和聚氧乙烯-20-十六烷基醚)；脂肪酸(例如，油酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸和硬脂酸)；膽酸鹽(例如，膽酸、脫氫膽酸和脫氧膽酸)；螯合劑(例如，乙二胺四乙酸二鈉、檸檬酸和水楊酸鹽)；以及非螯合非表面活性劑(例如，不飽和環(huán)狀脲)。備選地，抑制性多肽可以通過離子電滲療法運送，其包括帶有電荷30的透皮貼片以"驅(qū)動"多肽通過真皮。在一些實施方案中，藥物組合物可以包含(a)—種或多種多肽，和(b)一種或多種通過不同機制作用的其它試劑。例如，在本發(fā)明提供的組合物中可以包含消炎藥物，其包括但不限于非類固醇消炎藥物和皮質(zhì)甾類，以及抗病毒藥物，其包括但不限于利巴韋林(ribivirin)、阿糖腺苷、阿昔洛5韋和更昔洛韋。其它非多肽試劑(例如，化學(xué)治療藥劑)也在本發(fā)明提供的組合物的范圍內(nèi)。所述組合的化合物可以一同或先后使用。組合物另外可以包含常規(guī)在藥物組合物中發(fā)現(xiàn)的其它輔助成分。因此，所述組合物還可以包括相容的、藥用活性材料，諸如例如，止癢劑、收斂劑、局部麻醉劑或消炎藥物、或者用于在物理配制本發(fā)明提供的組合io物的不同劑量形式的添加材料，諸如染料、調(diào)味劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑、增稠劑和穩(wěn)定劑。并且，所述組合物可以與輔劑混合，例如，滑潤劑、防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑、乳化劑、用于影響滲透壓的鹽、緩沖劑、染料、調(diào)味劑以及芳香物質(zhì)。然而，當(dāng)添加時，這樣的材料不應(yīng)該不適當(dāng)?shù)胤恋K本發(fā)明提供的組合物內(nèi)的多肽成分的生物活性。如果需要，可以將15所述制劑滅菌?？梢园凑罩扑幑I(yè)中公知的常規(guī)技術(shù)制備藥用制劑，其可以便利地以單位劑型存在。所述技術(shù)可以包括使活性組分(例如，本發(fā)明提供的CH2-CH3結(jié)合多肽)與需要的藥用載體或賦形劑締合的步驟。典型地，所述制劑可以通過這樣的方式制備均一地并且使活性組分與液態(tài)載體或細(xì)20碎的固體載體或者兩者緊密締合，然后，如果必要，將產(chǎn)品定型。如果需要，可以將制劑滅菌，條件是滅菌方法不妨礙制劑中包含的多肽的效力。本發(fā)明提供的組合物可以配制成許多可能的劑型中的任何一種，諸如，但不限于，片劑、膠囊、液態(tài)糖漿、軟凝膠、栓劑和灌腸劑。所述組合物還可以配制成在水性、非水性或混合介質(zhì)中的混懸液。水性混懸液還25可以包含增加所述混懸液黏度的物質(zhì)，其包括，例如，羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖?；鞈乙哼€可以包含穩(wěn)定劑。本發(fā)明提供的CH2-CH3結(jié)合多肽可以與包裝材料組合，并且作為用于減少Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成的試劑盒出售。用于生產(chǎn)制品的成分和方法是公知的。制品可以與前述部分描述的一種或多種多肽和化合物組合。30另外，制品還可以包括，例如，緩沖劑或其它用于減少或監(jiān)測減少的免疫復(fù)合物形成的控制試劑。描述所述多肽怎樣有效用于減少Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成的用法說明可以包含在這樣的試劑盒中。6.應(yīng)^CC^3茲合多嚴(yán)來辨劍Fc-分導(dǎo)游免疫復(fù)合激形成游方法5CH2-CH3結(jié)合多肽可以用于Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成的體外測定。例如，所述方法有效用于評估CH2-CH3裂口-結(jié)合多肽阻滯Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成的能力。體外方法可以包括，例如，在本發(fā)明提供的多肽存在和不存在的情況下，將免疫球蛋白分子(例如，抗原結(jié)合的免疫球蛋白分子)和效應(yīng)器分子(例如，mClq,sClq，F(xiàn)cR，F(xiàn)cRn，或其它抗體)接觸，io并且確定每種樣品中免疫復(fù)合物形成的水平。免疫復(fù)合物形成的水平可以通過，例如，用考馬斯亮藍(lán)或銀染的聚丙烯酰胺凝膠電泳，或者通過共免疫沉淀進(jìn)行評估。這樣的方法包括本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員公知的那些。本文提供的方法還可用來抑制受試者中的免疫復(fù)合物形成，和通過抑制體內(nèi)Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成來治療受試者中的自體免疫疾病。這樣的方法15可包括，例如，給受試者施用任何本文提供的多肽，或含有任何本文提供的多肽的組合物。例如，一種方法可包括給個體施用含有包括氨基酸序列Cys-Ala-Trp陽His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:10)的多肽的組合物。備選地，一種方法可包括給受試者施用包含下列氨基酸序列的多肽Asp-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu隱Val-Trp-Cys-Thr(SEQID20NO:2)，或Ala-Pro-Pro-Asp-Cys陽Ala隱Trp-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:16)。本發(fā)明提供的方法可用于治療患有，例如，PD、ALS或AD的受試者。此處描述這些病況和Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成的涉及。所有這些神經(jīng)變性疾病特征在于，胞內(nèi)蛋白質(zhì)/包涵體的聚集，異常的微管和活化的25小膠質(zhì)細(xì)胞(CNS巨噬細(xì)胞)，其通常在選擇性神經(jīng)元丟失發(fā)作和每種這些疾病臨床癥狀的發(fā)作之前。ALS特征在于，免疫復(fù)合的IgGFc與叫作超氧化物歧化酶-l(SODl)的酶的結(jié)合，細(xì)胞蛋白質(zhì)的聚集，異常的微管，小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，和最終運動神經(jīng)元的死亡。PD特征在于，免疫復(fù)合的IgGFc與a-突觸核蛋白的結(jié)合，細(xì)胞蛋白質(zhì)的聚集，異常的微管，小30膠質(zhì)細(xì)胞的活化，和最終SNTH+細(xì)胞的死亡。AD特征在于，免疫復(fù)合的lgGFc與tau蛋白/微管的結(jié)合，異常的微管形成凍集，小膠質(zhì)細(xì)胞的活化，和膽堿能皮質(zhì)神經(jīng)元的選擇性死亡。參見，例如，Henkel等(2004)臉謡/.f辨經(jīng)學(xué)年，55:221-235;Morrison等(2000)E平G^邀/廬經(jīng)學(xué)J165:207-220;Orr等(2005)Brain(大腦)128:2665-2674;禾口5Bouras等(2005)5ra,'"/仏Sra/"W"Aev.Ot^^f^^〃;t,^^l^祭述J48:477-487。這表明，盡管特異的神經(jīng)元受到影響，并且不同的蛋白質(zhì)參與這三種疾病，但是基本的神經(jīng)免疫病理可能是相似的(Couillard等(1998)Ato/.JcW.S".t/Wf夷房嵐,辨,/^,叛J95:9626-9630;和Trojanowski等(1993)Bra/"P^/zo/.Ot^盧i^謬學(xué)J3:45-54)。io方法還可包括鑒定需要所述治療的受試者和/或監(jiān)測受治療的個體在癥狀或免疫復(fù)合物形成水平中的減少的步驟。例如，ALS可以通過測量CNS中的MCP-1水平，通過肌電圖，或者通過用于測量診斷患有ALS的個體的進(jìn)展或減少的任何其它的客觀或主觀檢測(例如，通過神經(jīng)學(xué)家或其他醫(yī)生評估)而進(jìn)行監(jiān)測。15裕:會^^-PD的臨床癥狀由在叫作黑質(zhì)(SN)的大腦部分中的多巴胺能神經(jīng)元的死亡引起。過度應(yīng)答的免疫系統(tǒng)可能在延長PD存在中起作用，其通過生成細(xì)胞因子(例如，白介素-l和腫瘤壞死因子)應(yīng)答初始損傷，其可以進(jìn)一步損傷大腦中的細(xì)胞。已經(jīng)表明來自PD個體的免疫球蛋白對SN細(xì)胞的發(fā)病機理有貢獻(xiàn)(Chen等(1998)^r/2.iVewra/.0￥經(jīng)學(xué)/-20案"5:1075-1080)。由于敲除FcyRs可以防止小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞活化和多巴胺細(xì)胞死亡(He等(2002)五A:p.WeMra/.f實驗摔經(jīng)學(xué)J176:322-327;和Le等(2001)/.A^wmy"'.0^經(jīng)搏學(xué)^^吉J21:8447-8455)，所以在由人PDIgG的被動轉(zhuǎn)運誘導(dǎo)的PD小鼠模型中FcYRs似乎是重要的。體液(抗體)介導(dǎo)的免疫性己經(jīng)涉及PD的免疫發(fā)病機理?；罨男∧z質(zhì)細(xì)胞在遺傳的和25自發(fā)性(偶發(fā)性)PD中都表達(dá)激活的FcyR，與通過神經(jīng)元IgG、支配性IgGl激活小膠質(zhì)細(xì)胞FcYR—致(Orr等，如前所述)。此外，由于a-突觸核蛋白聚集物的積聚，其引起微管病理學(xué)，在患有PD的受試者中SN細(xì)胞選擇性地死亡。a-突觸核蛋白與SN-特異的IgGl共局部化(colocalize)，這表明a-突觸核蛋白可以與免疫復(fù)合的IgG相互作用。30觀#"一銀絲勞#盧:賽^眾-ALS是具有上部和下部運動神經(jīng)元(MN)變性的破壞性疾病，由于呼吸衰竭其最終在1到5年內(nèi)導(dǎo)致死亡。來自ALS患者的IgG免疫復(fù)合物可以在小鼠中誘導(dǎo)ALS樣的損傷。IgGFqRs似乎在ALS的免疫發(fā)病機理中是重要的(Mohamed等(2002)JA^"ra"人0￥經(jīng)辨學(xué)^^^^孟^69:110-116;禾口Engelhardt等(2005)爿ctaA^wra/.5S園d112:126-133;和Zhao等(2003)臉wr—五平臉wra/.(7廬經(jīng)^^遵^^7^r邀/廬經(jīng)學(xué)^^^V63:964-977)。不到10%的ALS病例具有家族性(遺傳的)"fALS"基礎(chǔ)。大約2%的全部人類ALS病例是由于在編碼S0D1的基因中的多于一百個的已知突變引起的(Alexianu等(2001)A^wra/.0^經(jīng)學(xué)957:1282-1289)。轉(zhuǎn)基因人類SOD1突變諸如SODlG93Aio的小鼠，表現(xiàn)出與在同人ALS臨床和組織病理發(fā)展一致的運動神經(jīng)元(MN)丟失和臨床跡象發(fā)作之前出現(xiàn)的增加的IgG、FcYR和活化的小膠質(zhì)細(xì)胞的免疫反應(yīng)性。超過90%的全部ALS病例具有偶發(fā)性"sALS"基礎(chǔ)，沒有已知的遺傳基礎(chǔ)或任何關(guān)于SOD1或微管的己知的突變(Valentine等(2005)Ann.Rev.Biochem.(生物化學(xué)綜述年刊)74:563-593;禾BGarcia等(2006)15Neurobiol.Dis.(神經(jīng)生物學(xué)發(fā)現(xiàn))21:102-109)。已經(jīng)在fALS和sALS的脊髓中發(fā)現(xiàn)樹突細(xì)胞、單核細(xì)胞趨化蛋白-1(MCP-l)和活化的小膠質(zhì)細(xì)胞/巨噬細(xì)胞(Henkel等，如前所述)。免疫復(fù)合的IgG(而不是單體的、非免疫復(fù)合的IgG，或lgG的F(ab')2片段)通過結(jié)合并且激活免疫復(fù)合的IgGFcYR而使MCP-1mRNA的表達(dá)增加10倍20(Hora等(1992)7Va".Jcad>SW.t/Wf夷嵐凰^"辟學(xué)腐學(xué)叛)89:1745-1749)，表明在fALS和sALS病例中，免疫復(fù)合的IgG通過Fc怵(最可能在周圍的小膠質(zhì)細(xì)胞上)而激活MCP-1。斧7汆茨獰ff癆-傳統(tǒng)的科學(xué)觀點認(rèn)為，由于大腦通過血腦屏障(BBB)而排斥IgG，所以免疫球蛋白，包括IgG，不能到達(dá)大腦。然而，25患有炎性神經(jīng)疾病或作為正常大腦衰老的結(jié)果，IgG可以穿過有功能障礙的BBB而進(jìn)入大腦。IgGFc可以激活小膠質(zhì)細(xì)胞，其已經(jīng)通過細(xì)胞FcyRs(例如，F(xiàn)cyRI和FcyRIII)參與AD的免疫發(fā)病機理。免疫細(xì)胞化學(xué)實驗已經(jīng)表明FcYRI存在于在衰老的大腦中是IgG-免疫反應(yīng)性的相同的錐形神經(jīng)元中，表明這些受體在IgGFc神經(jīng)元內(nèi)部滲透中的作用。已經(jīng)表明神30經(jīng)元內(nèi)部的IgGFc結(jié)合tau蛋白。由于已經(jīng)表明tau蛋白在微管的正確聚合中是重要的，所以IgGFc(而不是IgGFab片段)與tau蛋白和與微管本身的結(jié)合可以引起微管的異常聚合。因此，IgGFc神經(jīng)元內(nèi)部滲透可能參與皮層神經(jīng)元的易受攻擊的子集中的神經(jīng)變性的早期階段(Reiderer等(2003)A^wraiepoWG^經(jīng)學(xué)/《告J14:117-121;Bouras等，如前所述；和5Engelhardt等(2000)爿rc/z.iVewra/.G^經(jīng)學(xué)教案J57:681-686)。FcyR在AD免疫病理學(xué)中的作用可以在AD老年斑中的FwR+小膠質(zhì)細(xì)胞的活化中發(fā)現(xiàn)(Peress等1993/A^wraz'/W7ww/.O^^1,^^^^^^^48:71-79)。將在下述實施例中進(jìn)一步描述本發(fā)明，所述實施例不限制在權(quán)利要求中描述的本發(fā)明的范圍。10實施例實施例1-用于測量結(jié)合于Ch2-C^3裂口的配體的體外測定法包括酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)和雙免疫擴散技術(shù)的體外測定用來證明本發(fā)明提供的多肽和化合物對免疫復(fù)合的IgGFc與因子如FcRs、FcRn、15Clq、a-突觸核蛋白、S0D1、禾口tau蛋白的結(jié)合的競爭性抑制。在標(biāo)準(zhǔn)ELISA中，抗原被免疫吸附到塑料微孔上。在封閉和洗滌后，將具有針對所述抗原的特異性的一級抗體加入到微孔中。再一次洗滌階段之后，將針對所述一級抗體并且與酶標(biāo)記諸如辣根過氧化物酶(HRP)綴合的二級抗體加入到所述微孔中。再一次洗滌循環(huán)之后，加入適當(dāng)?shù)拿傅孜铩?0如果形成抗原/一級抗體/二級抗體/HRP綴合物，那么所綴合的酶催化與底物的比色化學(xué)反應(yīng)，其在微量板讀數(shù)儀或分光光度計上讀取。通過將抗原和二級抗體/HRP綴合物的水平標(biāo)準(zhǔn)化，確定一級抗體的滴度(變量)。在標(biāo)準(zhǔn)ELISA系統(tǒng)中，一級抗體通過其位于Fab臂的互補決定區(qū)(CDR)與抗原結(jié)合。同樣地，二級抗體/HRP綴合物通過其CDRFab區(qū)與一級抗25體結(jié)合。由于HRP綴合到二級抗體的Fc區(qū)，所以直接的Fc結(jié)合非常有限或者被消除了。由于這一原因，應(yīng)用"反式ELISA"技術(shù)來評估Fc區(qū)與結(jié)合于免疫復(fù)合的IgGFc的配體的結(jié)合。在這些測定中，所述酶(HRP)沒有共價綴合到二級抗體的Fc部分。相反地，應(yīng)用預(yù)制的過氧化物酶-兔(或小鼠)30抗-過氧化物酶IgG的免疫復(fù)合物("PAP"復(fù)合物)。因此，HRP作為抗原和酶標(biāo)記，但是不封閉Fc區(qū)。在反式ELISA系統(tǒng)中，F(xiàn)cCh2-Ch3裂口結(jié)合配體(例如，純化的人Clq)結(jié)合于微孔板上。在不存在競爭劑時，PAP復(fù)合物與固定的配體結(jié)合，并且HRP和其底物之間的反應(yīng)產(chǎn)生信號。抑制PAP與固定的配體結(jié)合的多肽和化合物，如本發(fā)明提供的那些，減5少這種信號。實施例2-Clq結(jié)合的抑制通過將2pi兔抗-過氧化物酶(西格瑪化學(xué)(SigmaChemicals),St.LouisMO)與50(il過氧化物酶(西格瑪-奧德里奇(SigmaAldrich),St.Louis,MO)io在1ml蒸餾水中混合而形成PAP復(fù)合物。將PAP(100Jul)與100fil肽或人Clq(快得標(biāo)(Quidel)公司，SanDiego，CA)預(yù)溫育1小時。然后將Clq/PAP和肽/PAP混合物(100pi)用Clq包被的板溫育30分鐘。在洗滌之后，將板用2-2'-連氮雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ATBS;快得標(biāo)(Quidel)公司)溫育15分鐘，并且在405nm讀數(shù)。結(jié)果在表1中顯示。15表1肽SEQIDNO:OD405謂DCAWHLGELVWCT2l.層APPCARHLGELVWCT140.567DCAFHLGELVWCT0.859APPDCAWHEGELVWCT160.389APPCAFHLGELVWCT150.983APPCAWHLGELVWCT131.148Clq(陰性對照)-0.337陽性對照-2.355APPDCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:16)導(dǎo)致最大的Clq結(jié)合的抑制，幾乎等于ciq自身。肽APPCARHLGELVWCT(SEQIDNO:14)給出次好的結(jié)果。實施例3-FcR結(jié)合的抑制一旦應(yīng)用Clq測定法建立起反式ELISA方法，就應(yīng)用Fqdla、FcyIIb和Fcylll替代Clq重新設(shè)計測定法。將高度純化的Fc^IIa、Fcyllb和Fcylll免疫吸附到塑料微孔上。在將FcyR反式ELISA系統(tǒng)最優(yōu)化之后，應(yīng)用本發(fā)明所述的多肽進(jìn)行競爭性抑制實驗，以研究它們對于免疫復(fù)合物與純化5的FqR結(jié)合的抑制能力。將Falcon微量滴定板用高度純化的FcyIIa、Fqdlb和Fcylll的1:10稀釋液包被，并且溫育24小時。洗滌板，然后用5XBSA封閉溶液(阿爾法診斷國際公司(AlphaDiagnosticInternational),SanAntonio,德克薩斯)封閉24小時。PAP免疫復(fù)合物按照實施例2所述形成。將PAP(100^1)io與100^的肽預(yù)先溫育1小時。將PAP/肽混合物加入到FcYR包被的板中，并且溫育1小時。洗滌后，將板與ABTS底物溫育15分鐘，并且在405nm讀數(shù)。結(jié)果在表2中顯示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>15肽APPDCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:16)導(dǎo)致最大的FcR與PAP結(jié)合的抑制，其次是肽DCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:2)。實施例4-免疫復(fù)合的IgG與野生型(wf)和突變型SOD1的結(jié)合的抑制PAP復(fù)合物按照實施例2所述形成。將PAP(100與100|_U肽預(yù)20溫育1小時，并且對照(200PAP)也溫育1小時。將100|ilPAP或PAP/肽加入到Falcon微量滴定板上，所述板已經(jīng)用0.8嗎/ml人wtSODl(西格瑪-奧德里奇(Sigma-Aldrich))或apo(不含Cu、Zn)單體突變型SOD1C57S(mSODlC57S)包被24小時。1小時后將PAP或肽/PAP混合物(100pl)加入到wtSODl或mSODlC57S包被的板中60分鐘。洗滌后，將板用ATBS溫育15分鐘，并且在405nm讀數(shù)。結(jié)果顯示在表3中。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>肽APPDCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:16)導(dǎo)致最大的wtSOD1或mSODlC57S與PAP結(jié)合的抑制，其次是肽DCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:2)。由于SOD1在特定條件下可以利用過氧化氫和ABTS作為底物(Elamio等(2003)/歷o/.Oze附.r^^^游化學(xué)J^吉J278:21032-21039;禾QYim等(1993)J.所o/.C/zem.f生激游眾學(xué)染,^)268:4099-4105)，將0.05mg/mlwtSOD1或0.050mg/ml過氧化物酶(西格瑪-奧德里奇(Sigma-Aldrich))加入到用于上述所述的SOD免疫復(fù)合物結(jié)合測定的ABTS底物中。在溫育5分鐘之后將板在405nm讀數(shù)。結(jié)果在表4中顯示。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>綜合來看，這些數(shù)據(jù)表明，免疫復(fù)合的IgFc與wtSODl和mSODlC57S的結(jié)合受到肽2和16的抑制，其中肽16給出最好的抑制。由于肽2和2016只與IgGFcCH2-CH3裂口結(jié)合，所以它在免疫復(fù)合的IgGFcCH2-CH3裂口與wtSODl和mSODlS57S結(jié)合之后。如在表4中所示，100X的wtSOD對在表3總結(jié)的實驗中實施例5-免疫復(fù)合的IgG與野生型CC-突觸核蛋白的結(jié)合的抑制通過將2pi兔抗-過氧化物酶(西格瑪)與50^tl過氧化物酶(西格瑪)在1ml蒸餾水中混合而形成PAP復(fù)合物。將PAP(100pl)與100|^1肽預(yù)溫育1小時。對照PAP(200pl)也溫育1小時。將100|ulPAP或PAP/肽加入到Falcon微量滴定板中，所述板己經(jīng)用167嗎/ml的人wta-突觸核蛋白(西格瑪-奧德里奇)包被24或48小時，并且將板溫育60分鐘。洗滌后，將板用ATBS溫育30分鐘，然后在405nm讀數(shù)。結(jié)果顯示在表5中。表5肽SEQIDNO:wtot-突觸核蛋白DCAWHLGELVWCT(24小時)20.111APPDCAWHLGELVWCT(24小時)160.088陽性對照-1.433只有ABTS底物0.061DCAWHLGELVWCT(48小時)20,152APPDCAWHLGELVWCT(48小時)160.136(x-突觸核蛋白陽性對照(48小時)-2.934肽APPDCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:16)導(dǎo)致最大的a-突觸核蛋白與PAP結(jié)合的抑制，其次是肽DCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:2)。實施例6-在體外系統(tǒng)中抑制ALS抗體15為了確定用本發(fā)明所述的抑制劑阻滯FcRs和Clq是否可以減少與ALS相關(guān)的MN細(xì)胞損傷和MN細(xì)胞死亡，按照Zhao等A^wrapa仇A^ewro/.0^經(jīng)錄湮學(xué)浙實邀#經(jīng)學(xué)染,志9(2004)63:964-977)所述制備含有小膠質(zhì)細(xì)胞和運動神經(jīng)元(MN)的細(xì)胞培養(yǎng)物。將ALSIgG(1或2嗎/ml)加入到有或無本文所述的FcR和Clq結(jié)合抑制劑(例如，具有在SEQID20NOS:2和16中描述的氨基酸序列的多肽)的小膠質(zhì)細(xì)胞/MN細(xì)胞培養(yǎng)物中。通過測量促炎性細(xì)胞因子，TNF-(x的量而進(jìn)行小膠質(zhì)細(xì)胞激活測定。使用抗-p75和/或抗-CFAp抗體進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)MN染色，以確定有和無免疫復(fù)合的IgG抑制劑時MN的存活。使用高效液相色譜測量谷氨酸，已知其對MN是細(xì)胞毒性的。實施例7-在體內(nèi)模型中抑制ALS免疫復(fù)合的IgGFc5在有和無本發(fā)明所述的多肽抑制劑的i.p.注射時，將從ALS患者制備的IgG(40mg)(Mohamed等.(2002)/A^wmsc/.C廬經(jīng)棄學(xué)^^^^,志J69:110-116)腹膜內(nèi)(i.p.)注射到13-17周齡的C57Bl/6X129SvEv小鼠中。MN中ALSIgG的超微結(jié)構(gòu)檢測，細(xì)胞內(nèi)鈣的釋放，和在神經(jīng)肌肉結(jié)合處的?；憠A(actylcholine)釋放用來監(jiān)測在對照和治療的小鼠中的ALS-io樣癥狀。備選地，使用FcyRIIb敲除小鼠。使用這些小鼠的實驗已經(jīng)表明，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)或系統(tǒng)紅斑狼瘡(SLE)的臨床跡象可以通過被動施用人RA或SLE血清而誘導(dǎo)(Petkova等.(2006)J.iWedC^驗,學(xué)i^志J203(2):275-280)。因此，在用和不用本發(fā)明所述的抑制劑時，給FcyRIIbR敲除小鼠施用ALS陽性血清用來被動誘導(dǎo)ALS。15實施例8-在體外模型中抑制PD免疫復(fù)合的IgGFc進(jìn)行實驗以確定本發(fā)明所述的抑制劑是否可以防止與PD臨床免疫病理相關(guān)的多巴胺能細(xì)胞的細(xì)胞破壞。用純化的小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞制備多巴胺能細(xì)胞系MES23.5(Le等(2001)JiVewras"'.C7伊經(jīng)矜學(xué)/雜,吉J2021:8447-8455)。制備純化的PD免疫復(fù)合的IgG，并且在用和不用本發(fā)明所述的FcR抑制劑時加入到所述細(xì)胞培養(yǎng)物中。按照實施例5中所述的方法還測量對(x-突觸核蛋白與免疫復(fù)合的IgGFc結(jié)合的抑制。實施例9-在體內(nèi)模型中抑制PD免疫復(fù)合的IgGFc25進(jìn)行體內(nèi)實驗，以確定本發(fā)明所述的抑制劑是否可以防止PDIgG與小膠質(zhì)細(xì)胞FcYR的結(jié)合，并且因此防止SN多巴胺能細(xì)胞的破壞，其是與PD相關(guān)的主要病理性損害。PDIgG如所述(He等，如前所述)純化，并且將20iul立體定位地(stereotactically)注射到小鼠SN中。在用和不用所述抑制劑時，F(xiàn)cYIIb敲除的小鼠還用作被動轉(zhuǎn)移PD的體內(nèi)模型。實施例10-在體內(nèi)模型中使用FcyR抑制劑抑制ADIgG介導(dǎo)的對膽堿能神經(jīng)元的損傷AD是一種發(fā)展性神經(jīng)變性疾病，其特征在于在基底前腦中的膽堿能神經(jīng)元(CN)的失去。將ADIgG立體定位注射到成年雌性Sprague-Dawley大鼠的基底前腦中導(dǎo)致ChAT-免疫染色的CN細(xì)胞的顯著減少，所述ChAT-免疫染色的CN細(xì)胞是在人AD患者中CN退化的特征(Engelhardt等(2000)如前所述)。因此，進(jìn)行體內(nèi)實驗以確定本發(fā)明所述的FcYR抑制劑是否可以防止FcYR小膠質(zhì)細(xì)胞的激活和IgGFc對CN細(xì)胞的內(nèi)在化，其導(dǎo)致在AD中觀察到的退化性的免疫病理。在用和不用所述抑制劑時，F(xiàn)cyIIb敲除小鼠還用作被動轉(zhuǎn)移AD的體內(nèi)模型。實施例11-免疫復(fù)合的IgG與野生型tau結(jié)合的抑制通過將2pi兔抗-過氧化物酶與50^過氧化物酶在1ml蒸餾水中混合而形成PAP復(fù)合物。將PAP(100pi)與100pi肽預(yù)溫育1小時。對照PAP(200pi)也溫育1小時。將100^PAP或PAP/肽加入到Falcon微量滴定板中，所述板已經(jīng)用16.7嗎/ml的人野生型tau蛋白(441個殘基；西格瑪-奧德里奇)包被24小時。1小時后，將PAP或肽/PAP混合物(lOOpl)加入到tau包被的板中，并且溫育60分鐘。洗滌后，將板用ATBS溫育15分鐘，并且在405nm讀數(shù)。結(jié)果顯示在表6中。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>肽APPDCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:16)導(dǎo)致對人野生型tau蛋白與PAP結(jié)合的最大抑制，其次是肽DCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:2)。實施例12-免疫復(fù)合的IgG與野生型B-淀粉樣肽結(jié)合的抑制A卩肽的不同片段構(gòu)成AD的淀粉狀蛋白斑特殊病征，并且這些A|3片段似乎刺激小膠質(zhì)細(xì)胞激活和隨后的AD神經(jīng)病理。因此，進(jìn)行實驗，以檢測AP1-40與免疫復(fù)合物的結(jié)合，并且確定本發(fā)明所述的抑制劑是否可以抑制PAP免疫復(fù)合物與A(3肽的結(jié)合。PAP復(fù)合物通過2pl兔抗-過氧化物酶與50^過氧化物酶在1ml蒸餾水中混合而制備。將PAP(100^d)與100^肽預(yù)溫育1小時。對照PAP(200也溫育1小時，并將100)ulPAP或PAP/肽加入到Falcon微量滴定板中，所述板已經(jīng)用33嗎/ml的人野生型(3淀粉樣肽1-40(淀粉狀前體蛋白(APP)片段1-40;西格瑪-奧德里奇)包被24小時，所述人野生型p淀粉樣肽1-40具有序列Asp-Ala-Glu-Phe-Arg-His-Asp-Ser-Gly-Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe-Ala-Glu-Asp-Val-Gly-Ser-Ans-Lys-Gly-Ale-Ile-Ile-Gly-Leu-Met-Val-Gly-Gly-Val-Val(SEQIDNO:39)。將PAP或肽/PAP混合物在(3-淀粉樣肽包被的板上溫育60分鐘。洗滌后，將板用ATBS溫育15分鐘，并且在405nm讀數(shù)。結(jié)果顯示在表7中。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>肽DCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:2)導(dǎo)致對人野生型f3淀粉樣肽與PAP結(jié)合的最大抑制，其次是肽APPDCAWHLGELVWCT(SEQIDNO:2016)。其它實施方案應(yīng)該理解，盡管本發(fā)明已經(jīng)結(jié)合其詳細(xì)內(nèi)容進(jìn)行了描述，但是前述內(nèi)容只是舉例說明，并不限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍通過后附的權(quán)利要求的范圍而限定。其它方面、優(yōu)點和改進(jìn)在下述權(quán)利要求的范圍內(nèi)。權(quán)利要求1.抑制受試者中免疫復(fù)合物形成的方法，所述方法包括給所述受試者施用包含純化的多肽的組合物，所述多肽包含氨基酸序列(Xaa1)n-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQIDNO35)，其中Xaa1為任何氨基酸，Xaa2為Arg，Trp，5-HTP，Tyr，或Phe，Xaa3為任何氨基酸，和n為0，1，2，3，4，或5。2.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫復(fù)合物形成與肌萎縮性脊髓側(cè)io索硬化(ALS)相關(guān)。3.權(quán)利要求2的方法，其中所述多肽抑制ALSIgGFc與Fcyl,FcyIIa,FcyIIb,FcyIIIa,FcyIIIb,FcRn，mClq,或sClq的結(jié)合。4.權(quán)利要求2的方法，其中所述多肽抑制ALSIgGFc與野生型SOD1或突變型SOD1的結(jié)合。5.權(quán)利要求2的方法，其還包括監(jiān)測所述受試者的ALS的臨床或分子特征的步驟。6.權(quán)利要求5的方法，其中所述監(jiān)測包括肌電圖或測量CNSMCP-1水平、運動神經(jīng)元免疫球蛋白介導(dǎo)的鈣增加、神經(jīng)遞質(zhì)釋放或神經(jīng)元細(xì)胞損傷或細(xì)胞死亡。7.權(quán)利要求l的方法，其中所述多肽還包含末端-穩(wěn)定基團(tuán)。8.權(quán)利要求7的方法，其中所述末端穩(wěn)定基團(tuán)在所述多肽的氨基端，并且是具有氨基酸序列Xaa-Pro-Pro的三肽，其中Xaa是任何氨基酸。9.權(quán)利要求8的方法，其中Xaa是Ala。10.權(quán)利要求7的方法，其中所述末端穩(wěn)定基團(tuán)是在所述多肽的羧基25端，并且是具有氨基酸序列Pro-Pro-Xaa的三肽，其中Xaa是任何氨基酸。11.權(quán)利要求10的方法，其中Xaa是Ala.12.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫復(fù)合物形成與帕金森病(PD)相關(guān)。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述多肽抑制PDIgGFc與Fc化FcyIIa,30FcYnb，F(xiàn)cYlIIa,FcYlIIb，F(xiàn)cRn,mClq,sClq，a-突觸核蛋白，或a-突觸核蛋白與微管的聚集物的結(jié)合。14.權(quán)利要求12的方法，其還包括監(jiān)測所述受試者的PD的臨床或分子特征的步驟。15.權(quán)利要求14的方法，其中所述PD的臨床或分子特征是黑質(zhì)區(qū)5MC.P-1的減少或黑質(zhì)中增加的TH+細(xì)胞存活。16.權(quán)利要求1的方法，其中所述免疫復(fù)合物形成與阿爾茨海默病(AD)相關(guān)。17.權(quán)利要求16的方法，其中所述多肽抑制ADIgGFc與Fqd,Fqdla，F(xiàn)cyIIb,Fc丫nia,FcYlIIb,FcRn,mClq，或sClq的結(jié)合。18.權(quán)利要求16的方法，其中所述多肽抑制ADIgGFc與tau蛋白，卩-淀粉樣肽、微管或tau蛋白與微管的聚集物的結(jié)合。19.權(quán)利要求16的方法，其還包括監(jiān)測所述受試者的AD的臨床或分子特征的步驟。20.權(quán)利要求1的方法，其中所述多肽還包含在所述氨基酸序列氨基15端的Asp。21.權(quán)利要求1的方法，其中所述多肽具有約10個到約50個氨基酸的長度。22.權(quán)利要求1的方法，其中所述多肽包含氨基酸序列Asp-Cys-Ala-Trp-His-Leu陽Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:2)。23.權(quán)利要求1的方法，其中所述多肽包含氨基酸序列Ala-Pro-Pro陽Asp-Cys-Ala-Trp-His-Leu-Gly-Glu誦Leu-Val-Trp-Cys-Thr(SEQIDNO:16)。24.純化的多肽，其氨基酸序列由下述組成(Xaa,)n-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQ25IDNO:35),其中Xaai為任何氨基酸，Xaa2是Arg,Tip,5-HTP，Tyr，或Phe,Xaa3為任何氨基酸，和n是0,1,2,3,4，或5。25.設(shè)計對具有結(jié)合的抗原的免疫球蛋白分子的CH2-CH3裂口具有特異的結(jié)合親和力的配體的方法，所述方法包括a)為計算機提供數(shù)據(jù)，所述數(shù)據(jù)包括在所述Ch2-Ch3裂口的位置252，253，435和436的氨基酸30殘基的原子坐標(biāo)，并且所述計算機具有能夠從所述原子坐標(biāo)數(shù)據(jù)生成分子的原子模型的計算機程序；b)使用所述計算機生成所述CH2-CH3裂口的原子模型;c)向所述計算機提供包括候選化合物的原子坐標(biāo)的數(shù)據(jù);d)使用所述計算機生成最優(yōu)化位于所述CH2-CH3裂口內(nèi)的所述候選化合物的原子模型；e)確定所述最優(yōu)化定位的候選化合物是否與在所述CH2-CH35裂口內(nèi)的所述氨基酸殘基相互作用；和f)如果所述候選化合物與所述氨基酸殘基相互作用，鑒定所述候選化合物作為具有針對所述CH2-CH3裂口的特異性結(jié)合親和力的配體。26.權(quán)利要求25的方法，其中所述配體具有針對所述CH2CH3裂口的至少1)iM的結(jié)合親和力。27.權(quán)利要求25的方法，其中所述結(jié)合親和力為至少100nM。28.權(quán)利要求25的方法，其中所述結(jié)合親和力為至少10nM。29.權(quán)利要求25的方法，其中所述配體能夠抑制Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物的形成。30.權(quán)利要求25的方法，其中所述配體能夠抑制FcR與所述CH2CH315裂口的結(jié)合。31.權(quán)利要求25的方法，其中所述配體能夠抑制Clq與所述CH2CH3裂口的結(jié)合。32.權(quán)利要求25的方法，其中所述配體能夠治療ALS。33.權(quán)利要求25的方法，其中所述配體能夠治療PD。34.權(quán)利要求25的方法，其中所述配體能夠治療AD。35.多肽在制備治療ALS的藥物中的應(yīng)用，其中所述多肽包含氨基酸序歹ij(Xaa,)n-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr隱(Xaa3)n(SEQIDNO:35),其中Xaa,是任何氨基酸，Xaa2是Arg，Trp,5-HTP,Tyr,或Phe,Xaa3是任何氨基酸，和n是0，1,2，3,4,或5。36.多肽在制備治療PD的藥物中的應(yīng)用，其中所述多肽包含氮基酸序列(Xaa,)n-Cys-Ala-XaarHis-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQIDNO:35),其中Xaa,是任何氨基酸，Xaa2是Arg，Trp,5-HTP,Tyr,或Phe,Xaa3是任何氨基酸，和n是0,1,2，3,4,或5。37.多肽在制備治療AD的藥物中的應(yīng)用，其中所述多肽包含氨基酸序歹U(Xaa,)n-Cys-Ala-Xaa2-His-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQIDNO:35),其中Xaa,是任何氨基酸，Xaa2是Arg,Trp,5-HTP,Tyr，或Phe，Xaa3是任何氨基酸，和n是0,1，2,3,4，或5。38.包含純化的多肽的組合物，所述多肽包含氨基酸序列(Xaa0n-Cys-Ala-XaarHis-Leu-Gly-Glu-Leu-Val-Trp-Cys-Thr-(Xaa3)n(SEQ5IDNO:35),其中Xaa,是任何氨基酸，Xaa2是Arg，Trp，5-HTP,Tyr,或Phe,Xaa3是任何氨基酸，和n是0,1,2,3,4,或5。全文摘要本發(fā)明提供可以特異性與免疫球蛋白分子的C_H2-C_H3裂口結(jié)合的多肽和其它化合物，和使用所述多肽和化合物抑制Fc-介導(dǎo)的免疫復(fù)合物形成、免疫復(fù)合的IgG與IgGFγR結(jié)合、和免疫復(fù)合的IgGmC1q(膜C1q)或可溶的C1q結(jié)合的方法。所述化合物可以在治療肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化(ALS)、帕金森病(PD)和阿爾茨海默病(AD)中具有治療應(yīng)用。文檔編號A61K38/00GK101277714SQ200680036622公開日2008年10月1日申請日期2006年9月6日優(yōu)先權(quán)日2005年9月6日發(fā)明者勒妮·博迪,埃利奧特·奧爾特曼,尼爾·M·博迪申請人:三一治療公司