專利名稱：：磷脂制劑的藥物形式及其制備方法磷脂制劑的藥物形式及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，涉及磷脂制劑的可注射藥物形式的制備技術(shù)，尤其是用于治療和預(yù)防急性和慢性肝病、脂質(zhì)交換紊亂和中毒后肝功能恢復(fù)的以"Phosphogliv"銷售的那些磷脂制劑。上述制劑包括植物磷脂、甘草酸或其鹽以及輔助性物質(zhì)。已知各種疾病的肝臟病理過程伴隨肝細(xì)胞膜系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)和功能損傷。由于脂質(zhì)參與過氧化過^I和內(nèi)源性磷脂酶活性，脂質(zhì)層紊亂引起對(duì)膜的損傷。脂質(zhì)的理化性質(zhì)的任何變化都能導(dǎo)致脂質(zhì)生物膜基質(zhì)的結(jié)構(gòu)損傷和伴隨膜酶系統(tǒng)失活的脂質(zhì)的屏障功能喪失。大量的研究(包括俄國醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物化學(xué)研究所進(jìn)行的一些研究)表明用于恢復(fù)損傷的肝細(xì)胞膜的最有效的磷脂是得自植物材料的磷脂。這樣的植物磷脂摻入必需脂肪酸(亞油酸和亞麻酸)，該必需脂肪酸使得植物磷脂比通常膜的磷脂酰膽堿更易流動(dòng)。這似乎允許它們扮演"膜膠"的角色，能夠更有效地修復(fù)損傷細(xì)胞膜的缺損。植物磷脂的作用機(jī)制似乎是由于多不^:包和磷脂酰膽堿包埋進(jìn)入膜內(nèi)，能恢復(fù)損傷細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。因此摻入磷脂的有效藥物形式的開發(fā)依然重要。有許多包含磷脂的制劑，該制劑制成膠嚢、糖錠劑或丸劑以及注射劑。"肝得健(Essentiale)"是這樣的制劑之一，已經(jīng)應(yīng)用于現(xiàn)實(shí)的公共衛(wèi)生事業(yè)超過40年，以恢復(fù)肝功能。更新的制劑以"肝得健H"(德國Natterman公司)銷售，包含磷脂、不飽和脂肪酸和維生素的混合物。在"肝得健"注射劑的制備工藝中，去氧膽酸鹽被用作洗滌劑來使脂肪磷脂物質(zhì)溶出。但這是不利的，因?yàn)樗哂幸欢ǔ潭鹊募?xì)胞毒性，因此能對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生負(fù)面影響。還有另一已知的磷脂制劑，即"Phosphogliv"，用于治療和預(yù)防肝病。它包含具有高磷脂酰膽堿含量(75-98%)的植物磷脂以及甘草酸、鹽和其它成分。甘草酸及其鹽可充當(dāng)乳化劑，但也具有保肝劑、抗炎、抗變應(yīng)性和抗病毒的性質(zhì)，另外還有溫和的洗滌作用。已知該制劑的注射劑。它們采用千燥的脂質(zhì)體制劑的形式，將該干燥脂質(zhì)體制劑水化使用。然而申請(qǐng)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)用常規(guī)方法難于獲得該組合物的注射劑，可遭遇脂質(zhì)體顆?？赡懿痪鶆蚝统叽邕^大、具有在貯存期聚集的趨勢(shì)。例如貯藏4-6個(gè)月后，冷凍干燥的粉末制劑產(chǎn)生混濁液，因?yàn)橹|(zhì)體/膠束結(jié)構(gòu)不再保持，顆粒變大。因此這些制劑的有效期通常僅限于3個(gè)月。此外，尤其隨著氧化磷脂含量的增加，也常觀察到溶血磷脂酰膽堿。按照法規(guī)的要求，在隨時(shí)可用的制劑中的溶血磷脂酰膽堿的含量不應(yīng)超過3%，一旦高于此水平，產(chǎn)品就不可用于醫(yī)療實(shí)踐。申請(qǐng)人已經(jīng)找到在一定程度上減少或者消除這些問題的制備途徑。依照本發(fā)明，提供制備包含磷脂和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合的藥用組合物的方法，該藥用組合物能水化產(chǎn)生可注射的藥物形式，所述方法包括使磷脂和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的水溶液和碳水化合物的混合物進(jìn)行勻化，形成包含納米顆粒的乳液，使勻化的產(chǎn)物經(jīng)過升華干燥步驟，制備所述組合物。當(dāng)用于本文時(shí)，術(shù)語"納米顆粒，，指在乳液中至少一些且適當(dāng)?shù)叵喈?dāng)比例的顆粒的尺寸(例如直徑)小于100nm。為了達(dá)到該要求，可利用^f吏用壓力或超聲運(yùn)轉(zhuǎn)的勻化器。尤其使用的勻化器是可以在壓力下使混合物循環(huán)的裝置?？衫贸^600巴的勻化壓力。然而，在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，使混合物在相當(dāng)高的壓力例如在800-1200巴的壓力下勻化。申請(qǐng)人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)使用該方法可得到特別具有改善性質(zhì)的組合物。勻化適宜在90。C以下進(jìn)行，并適宜在20-50。C的范圍內(nèi)，例如室溫至46。C進(jìn)行，方便地在室溫下進(jìn)行?？筛鶕?jù)勻化器的性能等改變勻化循環(huán)的精確次數(shù)，但優(yōu)選在干燥后循環(huán)次數(shù)足以制備包含以下直徑尺寸的脂質(zhì)體顆粒的制劑20-100nm、例如最高達(dá)60nm、更合適地最高達(dá)50nm、還更合適地最高達(dá)40nm,和優(yōu)選最高達(dá)30nm。典型地，使混合物經(jīng)歷5到22次勻化循環(huán)。在升華干燥前適當(dāng)?shù)厥箘蚧a(chǎn)物過濾。該過濾可以例如在惰性氣氛例如氮?dú)獾臍夥障掠媚磉M(jìn)行。優(yōu)選在相對(duì)溫和的條件下緩'隄地進(jìn)行升華干燥。時(shí)間將取決于例如批量大小等因素，但典型地將超過數(shù)天時(shí)間。在無菌室中，例如使用加壓過濾，例如在約3個(gè)大氣壓的壓力下適當(dāng)?shù)剡M(jìn)行滅菌過濾步驟。在藥用組合物中，磷脂與甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的比例適當(dāng)?shù)貫椴淮笥?:1，優(yōu)選為在0.5:l至4:l的范圍內(nèi)。所獲得藥用組合物適宜包含2-80%w/w的總磷脂和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽。在特定的實(shí)施方案中，從植物來源例如大豆提取物獲得使用的磷脂，該大豆提取物適當(dāng)?shù)匕?5-98%w/w的磷脂酰膽堿。用于所述方法的碳水化合物適當(dāng)?shù)剡x自麥芽糖、乳糖或異麥芽糖。包括的碳水化合物的量將是可變的，將取決于使用的條件，但是它可包含藥用組合物的余量，因此可占例如20-98%w/w。用于所述方法的溶液的pH值的合適范圍為6.0至7.5，優(yōu)選為6.5至7.5。在特定的實(shí)施方案中，配制甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的水溶液，并將磷脂分散在其中例如以便形成乳液。然后在使產(chǎn)生的混合物進(jìn)行勻化之前，加入另外配制的碳水化合物的水溶液。可由上述方法獲得的藥用組合物、以及可由這樣的組合物的水化獲得的可注射藥用組合物，形成本發(fā)明的再一方面。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)按上述所獲得的組合物是均勻的，具有納米顆粒的良好尺寸范圍。使用上述方法，獲得了精細(xì)分散的，均勻的和穩(wěn)定的脂質(zhì)體顆粒(20-100nm)。在有些情況下，95%的顆粒在20-35nm的尺寸范圍內(nèi)，這導(dǎo)致穩(wěn)定的溶液，最適合靜脈內(nèi)引入。顆粒的均勻性提供溶液的高透明度和穩(wěn)定性。此外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)按這種方法獲得的組合物特別地穩(wěn)定，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)甚至在三年貯藏期之后在溶于水時(shí)可恢復(fù)結(jié)構(gòu)。它們可用于治療和預(yù)防肝病、脂質(zhì)交換紊亂和/或中毒后的肝功能恢復(fù)，通過注射例如靜脈注射給藥。以下實(shí)施例舉例說明本發(fā)明實(shí)施例l溶液A:將6.9gGA的二鈉(dynatrium)鹽溶于注射用水，使體積至90ml。加入NaOH(2.25ml,IN)(在最后的300ml體積中足以產(chǎn)生6.7-7.5的pH)。加入具有80。/。的磷脂酰膽堿含量的壓碎的磷脂(16.5g)。使用高效推進(jìn)式混合器在惰性氣體(氮?dú)?流中進(jìn)行分散。溶液B:將麥芽糖(59.4g)溶于注射用水，仔細(xì)混合直到溶液變得透明，使最終的體積達(dá)到150ml?？赡茉偌尤胨?，條件是溶液A的體積十溶液B的體積〈300ml。然后將溶液A和溶液B混合在一起，加入注射用水使總體積至300ml。溶液的勻化在800巴的壓力下，將溶液通過勻化器(Mini-Lab7.30VH型，Rannie,Denmark)60分鐘。通過回流冷凝器進(jìn)行冷卻。在該階段獲得直徑為40-60nm的均勻脂質(zhì)體。勻化后的樣品的透明度(660nm)不低于60%。預(yù)過濾在2個(gè)大氣壓壓力的氮?dú)庀拢箘蚧娜芤和ㄟ^膜("Vladipor",3-4微米)過濾。溶液的透明度(660nm)不低于60。/0。滅菌過濾在3個(gè)大氣壓的壓力下，在壓力過濾裝置(PNF-90,Joint-StockCompany"Membranes(膜)"，Russia)的幫助下，通過直徑為0.2pm的過濾器("Vladipor")，在層流(LaminarboxLB-G,Russia)無菌室中進(jìn)行滅菌過濾。溶液的透明度為約65%。無菌灌裝瓶在層流無菌空氣中，用定量加料器將溶液灌入10ml深色瓶中，在-25"下冷凍。水溶液的升華干燥將冷凍樣品暴露在升華千燥裝置(LSLSECFROID,LYOLABF,Germany),持續(xù)48小時(shí)。獲得了一致致密的均勻脂質(zhì)體組合物。用鋁蓋密封瓶。在室溫下保存樣品三年，此后用水將它們水化，成功地恢復(fù)了結(jié)構(gòu)。在以下表中舉例說明其它的實(shí)施例。制備靜脈注射溶液的"Phophogliv"凍干產(chǎn)品中納米顆粒(微粒)尺寸(直徑)表<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>PC*磷脂酰膽堿PL**-磷脂GA***-甘草酸或其鹽所述方法導(dǎo)致具有納米顆粒良好尺寸的穩(wěn)定、高效制劑的制備，該制劑可用于臨床實(shí)踐，用于多種疾病包括肝功能紊亂的綜合治療。臨床試驗(yàn)已經(jīng)顯示，可通過上述方法，以用于靜脈內(nèi)引入溶液的凍干產(chǎn)品獲得的制劑("Phosphogliv")，對(duì)各種病因的肝病治療具有高的效力。該制劑的靜脈內(nèi)形式可被患者耐受，不引起明顯的副作用，導(dǎo)致臨床試驗(yàn)和患者的整體狀況可評(píng)估的改善。該制劑影響乙型肝炎和丙型肝炎的復(fù)制活性，并且免疫和干擾素的狀態(tài)也顯示，它可用于慢性病毒性肝炎和與肝損害有關(guān)的其它疾病的治療。權(quán)利要求1.一種制備藥用組合物的方法，該藥用組合物包含磷脂和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合，該組合物能水化產(chǎn)生可注射的藥物形式，所述方法包括使磷脂和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的水溶液以及碳水化合物的混合物進(jìn)行勻化，形成包含納米顆粒的乳液，并使勻化產(chǎn)物經(jīng)過升華干燥步驟，制備所述組合物。2.權(quán)利要求l的方法，所述方法在勻化器內(nèi)進(jìn)行，該勻化器使所述混合物經(jīng)受壓力。3.權(quán)利要求2的方法，其中所用的壓力為800-1200巴。4.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，所述方法在低于90。C下進(jìn)行。5.權(quán)利要求4的方法，其中在20-50。C下進(jìn)行所述勻化。6.權(quán)利要求5的方法，其中在室溫下進(jìn)行所述勻化。7.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中使所述混合物經(jīng)過5至22個(gè)勻化循環(huán)。8.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中使所述勻化產(chǎn)物在升華干燥之前進(jìn)行過濾。9.權(quán)利要求8的方法，其中所述過濾包括預(yù)過濾步驟，隨后是滅菌過濾步驟。10.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中磷脂與甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的比例不大于4:1。11.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中以所述藥用組合物計(jì)，在藥用組合物中磷脂和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的總含量為2-80%w/w。12.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所用的磷脂為植物提取物形式。13.權(quán)利要求12的方法，其中所述植物提取物包含75-98%的磷脂酰膽堿。14.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述碳水化合物包括麥芽糖、乳糖或異麥芽糖。15.前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法，其中所述溶液的pH在6.5至7.5的范圍內(nèi)。16.—種藥用組合物，所述組合物可由前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)的方法獲lf。17.—種可注射藥用組合物，所述組合物可由權(quán)利要求16的組合物水化獲得。全文摘要制備藥用組合物的方法，該藥用組合物包含磷脂和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合，該藥用組合物能水化產(chǎn)生可注射的藥物形式，所述方法包括使磷脂和甘草酸或其藥學(xué)上可接受的鹽的水溶液和碳水化合物的混合物例如在800-1200巴壓力下、在低于90℃時(shí)進(jìn)行勻化，使勻化的產(chǎn)物經(jīng)過升華干燥步驟，制備所述組合物。用該方法可得到的組合物、這些準(zhǔn)備注射給藥的水化形式，形成本發(fā)明的另外方面。文檔編號(hào)A61K9/19GK101370482SQ200680037239公開日2009年2月18日申請(qǐng)日期2006年8月11日優(yōu)先權(quán)日2005年8月12日發(fā)明者E·G·蒂克霍諾瓦,M·K·古斯瓦,O·M·伊帕托瓦,V·F·烏哈伊金,亞歷山大·伊凡諾維奇·阿查科夫申請(qǐng)人:亞歷山大·伊凡諾維奇·阿查科夫