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      含有蘇云金芽孢桿菌的有害菌防除劑的制作方法

      文檔序號(hào):1121040閱讀:567來(lái)源:國(guó)知局

      專(zhuān)利名稱(chēng)::含有蘇云金芽孢桿菌的有害菌防除劑的制作方法
      技術(shù)領(lǐng)域
      :本發(fā)明涉及含有蘇云金芽孢桿菌(Bacillusthuringiensis)的有害菌防除劑、以及含有其的藥品、食品以及飼料。
      背景技術(shù)
      :胃腸的微生物菌群對(duì)于維持胃腸道的功能以及全身的生理健康起到許多極其重要的作用。益生菌療法顯示出了積極使用對(duì)健康有益的微生物。益生菌會(huì)存活著到達(dá)宿主的腸,增強(qiáng)腸內(nèi)的微生物菌群,有助于消化活動(dòng)。此外,這些益生菌的"細(xì)菌拮抗作用"、"細(xì)菌干擾"、"屏障作用"、"阻礙停留"、"競(jìng)爭(zhēng)排除(競(jìng)合的排除)"等的作用和性質(zhì),改善腸道的微生物菌群的平衡,抑制有害的系統(tǒng)微生物的增殖。由于此種益生菌無(wú)法恒定地在宿主的消化道內(nèi)形成菌群,因此,要維持益生菌的效果,必須定期進(jìn)行攝取。近年來(lái),乳酸菌以及雙歧桿菌被作為益生菌廣泛使用,這些細(xì)菌被廣泛使用于酸奶及其他乳制品中。此外,在畜牧業(yè)、寵物產(chǎn)業(yè)等領(lǐng)域,為了通過(guò)輔助動(dòng)物的消化活動(dòng)、增強(qiáng)腸內(nèi)細(xì)菌、抑制腸內(nèi)有毒細(xì)菌的增殖,從而促進(jìn)動(dòng)物的生長(zhǎng),益生菌細(xì)菌的使用也得到了擴(kuò)大。要將細(xì)菌作為益生菌使用,需要達(dá)到以下要求對(duì)于胃液、膽汁酸等有耐受性、具有存活著到達(dá)腸的能力;不僅在需氧的小腸上部、還在厭氧的小腸下部和大腸中也具有增殖能力;對(duì)于宿主帶來(lái)有益的作用;在藥品或食品形態(tài)中可維持一定以上的菌數(shù);安全。此種技術(shù)背景下,人們?cè)谘芯砍樗峋约半p歧桿菌以外的可用作益生菌的細(xì)菌。例如,有報(bào)告(專(zhuān)利文獻(xiàn)1)提出添加對(duì)于哺乳動(dòng)物具備膽汁酸耐受性的凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtillis)、克勞氏芽孢桿菌(Bacillusclausii)。j乍為人用的益生菌,iJ用的有B.coagulans,B.subtills,B.clausii,B.cereus,B.licheniformis,B.pumilus,B.polymyxa,B.vietnami,B.polyfermenticus(非專(zhuān)利文獻(xiàn)l)。此夕卜,所矢口的還有具備膽汁酸耐受性的芽孢桿菌屬細(xì)菌(專(zhuān)利文獻(xiàn)2、專(zhuān)利文獻(xiàn)3、非專(zhuān)利文獻(xiàn)2)和乳桿菌屬細(xì)菌(專(zhuān)利文獻(xiàn)4)等。另一方面,對(duì)于腸內(nèi)感染癥和皮膚損傷部位引起的感染癥也存在問(wèn)題。引起此種感染癥的病原菌,隨時(shí)尋求用于停留在動(dòng)物體內(nèi)的合適位置。一般,即使是在病原菌侵入體內(nèi)4的情況下,也會(huì)被宿主的生物防御組織排除,或被其他的細(xì)菌抑制增殖。另一方面,也存在例如,如幽門(mén)螺桿菌和綠膿桿菌一樣增殖到一定菌數(shù)、停留在動(dòng)物腸內(nèi),在宿主中引起慢性疾病的細(xì)菌。此種細(xì)菌在附著至皮膚、粘膜、侵入腸內(nèi)等初期增殖過(guò)程中不被宿主的生態(tài)防御組織感知,直到細(xì)菌密度充分高漲之后,一舉生成各種病原性因子,破壞組織。實(shí)現(xiàn)這些的構(gòu)造是通過(guò)細(xì)菌自身產(chǎn)生的自體誘導(dǎo)因子的信號(hào)傳遞組織(cdl-to-cellsignaling),即細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織(菌體密度感知組織)。該組織在弧菌屬細(xì)菌(Vibriofischeri)的培養(yǎng)中,通過(guò)發(fā)現(xiàn)隨著細(xì)菌的增殖而產(chǎn)生熒光物質(zhì)的現(xiàn)象而被發(fā)現(xiàn)(非專(zhuān)利文獻(xiàn)3),之后,在以綠膿桿菌(Pseudomonas)為首的許多病原菌中也發(fā)現(xiàn)了此組織,事實(shí)表明,病原因子的表達(dá)(発現(xiàn))得到了控制。此外,除了假單胞菌屬以外,也有報(bào)告提出伯克霍爾德菌(Burkholderia)屬、腸桿菌(Enterobacter)屬、弧菌(Vibrio)屬、沙雷氏菌(Serratia)屬、沙門(mén)氏菌(Salmonella)屬等許多臨床上重要的細(xì)菌具備有自體誘導(dǎo)組織(日文自己誘発機(jī)構(gòu))(非專(zhuān)利文獻(xiàn)4)。擔(dān)當(dāng)此種細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織的信號(hào)傳遞的是細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子,作為革蘭氏陰性細(xì)菌的細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子,?;呓z氨酸內(nèi)酯被廣泛保存。細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子是可以自由通過(guò)細(xì)菌外膜的分子,當(dāng)環(huán)境中的細(xì)菌密度較低時(shí),自體誘導(dǎo)因子濃度較低,不顯示出生物活性。但是,隨著細(xì)菌的增殖、環(huán)境中的細(xì)菌密度增高,細(xì)菌內(nèi)外的自體誘導(dǎo)因子濃度也增高,當(dāng)其到達(dá)一定的閾值時(shí),會(huì)促進(jìn)各種病原因子等的目的基因的表達(dá)。作為預(yù)防和治療此種病原菌引起的感染癥,有報(bào)告提出了通過(guò)向動(dòng)物經(jīng)口喂食細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活蛋白質(zhì)、或向動(dòng)物細(xì)胞中導(dǎo)入編碼細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活蛋白質(zhì)的核酸序列,表達(dá)該核酸序列,令病原菌的細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活,抑制病原因子產(chǎn)生的方法(專(zhuān)利文獻(xiàn)5)。但是,向動(dòng)物經(jīng)口喂食細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活蛋白質(zhì)的方法存在該蛋白質(zhì)在通過(guò)胃的過(guò)程中被消化分解、無(wú)法到達(dá)腸道的問(wèn)題。此外,核酸序列的導(dǎo)入很難適用于人類(lèi)和已經(jīng)成年的人類(lèi)以外的動(dòng)物。此外,產(chǎn)氣莢膜梭菌(Clostridiumperfringens)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)作為引起人類(lèi)食物中毒、家禽和家畜腹瀉癥的病原菌;蠟狀芽孢桿菌(Bacilluscereus)作為引起人類(lèi)食物中毒的病原菌;豬鏈球菌(Streptococcussuis)作為引起人類(lèi)神經(jīng)癥狀、引起家禽和家畜腹瀉癥和神經(jīng)癥狀的病原菌而成為問(wèn)題。這樣的細(xì)菌為屬于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的病原菌,人們?cè)趯で笥纱朔N病原菌引發(fā)的感染癥的對(duì)策。此外,作為對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌有拮抗性的細(xì)菌,有報(bào)告提出,可有效治療與艱難梭菌關(guān)聯(lián)的腹瀉的雙歧桿菌(專(zhuān)利文獻(xiàn)6)和對(duì)于葡萄球菌屬和梭菌屬的有害菌有抗菌作用的B.subtilis(專(zhuān)利文獻(xiàn)7)。但是,這些細(xì)菌無(wú)足以預(yù)防、治療上述的感染癥。在這樣的技術(shù)背景下,人們探求作為益生菌、在消化道內(nèi)具有優(yōu)異的增殖能力、且有預(yù)防、治療大范圍的屬于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的病原菌引起的感染癥的新菌種。另外,也有報(bào)告提出,蘇云金芽胞桿菌(Bacillusthuringiensis)抑制依存于屬于植物病原菌的軟腐歐文氏菌(Erwiniacarotovora)的菌體密度感知組織(quorum-sensingdependent)的病原性(非專(zhuān)利文獻(xiàn)5)。具體地,蘇云金芽胞桿菌會(huì)產(chǎn)生分解菌體密度感知信號(hào)因子(?;呓z氨酸內(nèi)酯(AHL))的酶一AHL-內(nèi)酯酶(lactonase),抑制AHL的積蓄。此種蘇云金芽胞桿菌作為安全的微生物殺蟲(chóng)劑廣泛地被農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的場(chǎng)所接受,但尚未對(duì)向人類(lèi)等動(dòng)物投與進(jìn)行研究。此外,有報(bào)告提出,對(duì)于寄生于植物或動(dòng)物宿主的線(xiàn)蟲(chóng)、吸蟲(chóng)和原蟲(chóng),蘇云金芽胞桿菌生成的結(jié)晶蛋白質(zhì)具有殺蟲(chóng)活性(專(zhuān)利文獻(xiàn)8、專(zhuān)利文獻(xiàn)9)。但是,在這里僅顯示出了蘇云金芽胞桿菌對(duì)于從動(dòng)物腸內(nèi)分離出來(lái)的線(xiàn)蟲(chóng)等具有殺蟲(chóng)性,沒(méi)有確認(rèn)實(shí)際向人類(lèi)等動(dòng)物經(jīng)口喂食時(shí)的效果和安全性。艮卩,截至目前,完全沒(méi)有研究過(guò)用含有蘇云金芽胞桿菌的藥品來(lái)預(yù)防、治療病原菌引起的感染癥,或通過(guò)攝取含有蘇云金芽胞桿菌的食品、使動(dòng)物攝取含有蘇云金芽胞桿菌的詞料,來(lái)抑制腸道內(nèi)存在的有害菌的增殖,改善腸內(nèi)菌群的平衡,預(yù)防、治療感染癥。專(zhuān)利文獻(xiàn)h特表2005-507670號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)2:特開(kāi)平5-268944號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)3:國(guó)際公開(kāi)第96/024659號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)4:特表2004-523241號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)5:特表2003-504028號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)6:特開(kāi)2005-508617號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)7:特開(kāi)平11-285378號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)8:特開(kāi)2002-34582號(hào)公報(bào)專(zhuān)利文獻(xiàn)9:美國(guó)專(zhuān)利第5468483號(hào)公報(bào)非專(zhuān)利文獻(xiàn)1:Senesi,S.,BacillusSporesasProbioticProductsforHumanUse,Bacterialsporeformers,2004,pp.131-141,Rica,E.,Henriques,A.O.,andCutting,S.M.(eds),HorizonBioscience,WymondhamNorfolkNR18OJAU.K.非專(zhuān)禾U文獻(xiàn)2:Hyronimus,B.etal.,InternationalJournalofFoodMicrobiology,2000,61,pp.193-197非專(zhuān)利文獻(xiàn)3:Kaplan,H.etal"JournalofBacteriology,1985,163,pp.1210-1214非專(zhuān)利文獻(xiàn)4:Tateda,k..,TheLungPerspectives,2005,13,pp.261-265非專(zhuān)禾廿文獻(xiàn)5:Yi-Hu-Dongetal.,AppliedandEnvironmentalMicrobiology,2004,70,pp.954-960
      發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種用于通過(guò)抑制有害菌的增殖,改善腸內(nèi)菌群的平衡,促進(jìn)整腸,預(yù)防、治療感染癥的方法,是對(duì)于以人類(lèi)為首的動(dòng)物可安全且簡(jiǎn)便地使用方法。具體的,本發(fā)明的課題在于提供一種通過(guò)向人類(lèi)和家禽、家畜等喂食來(lái)預(yù)防、治療病原菌引起的感染癥的藥品;此外,提供一種通過(guò)定期的攝取,抑制有害菌的增殖,改善腸內(nèi)菌群的平衡,用于進(jìn)一步預(yù)防、治療感染癥的食品以及詞料。本發(fā)明人為了完成上述課題,探求具有防除有害菌能力的細(xì)菌種,對(duì)于其有效性以及對(duì)于動(dòng)物的安全進(jìn)行了研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn)蘇云金芽胞桿菌具有抑制有害菌的增殖的能力,具備作為益生菌的有用特性。此外,通過(guò)經(jīng)口喂食蘇云金芽胞桿菌的細(xì)菌孢子,細(xì)菌孢子可存活著通過(guò)胃,不會(huì)被膽汁酸殺滅,并在腸內(nèi)發(fā)芽、增殖,從而抑制病原菌的增殖,改善腸內(nèi)菌群的平衡,預(yù)防、治療腸內(nèi)感染癥。艮P,本發(fā)明如下。(1)一種含有蘇云金芽胞桿菌(Bacillusthuringiensis)的有害菌防除劑。(2)如(1)所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述蘇云金芽胞桿菌具備膽汁酸耐受性。(3)如(1)或(2)所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述蘇云金芽胞桿菌還具有細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活能力。(4)如(1)~(3)任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑,蘇云金芽胞桿菌包括蘇云金芽胞桿菌蘇云金亞種(Bacillusthuringiensissubsp.thuringiensis)BGSC4A3株、蘇云金芽胞桿菌庫(kù)斯塔克亞種(Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki)BGSC4D1株、蘇云金芽胞桿菌鲇澤亞種(Bacillusthuringiensissubsp.aizawai)BGSC4J4株、蘇云金芽胞桿菌以色列亞種(Bacillusthuringiensissubsp.israelensis)BGSC4Q7株、或它們的變異株。(5)如(1)~(4)任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述有害菌為引起感染癥的病原菌。(6)如(1)~(5)任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑,上述病原菌為屬于革蘭氏陰性細(xì)菌的病原菌。(7)如(6)所述的有害菌防除劑,上述屬于革蘭氏陰性細(xì)菌的病原菌至少是沙門(mén)氏菌(Salmonella)屬菌、彎曲桿菌(Campylobacter)屬菌、弧菌(Vibro)屬細(xì)菌、耶爾森(Yersinia)屬細(xì)菌、氣單胞菌(Aeromonas)屬細(xì)菌、假單胞菌(Pseudomonas)屬細(xì)菌、大腸桿菌、志賀氏菌的l種。(8)如(1)~(5)任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑,上述病原菌為屬于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的病原菌。(9)如(8)所述的病原菌防除劑,其特征在于,屬于上述革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的病原菌至少是梭菌(Clostridium)屬細(xì)菌、芽孢桿菌(Bacillus)屬細(xì)菌、葡萄球菌(St叩hylococcus)屬細(xì)菌、鏈球菌(Streptococcus)屬細(xì)菌、李斯特菌(Listeria)屬細(xì)菌中的1種。(10)—種藥品,含有如(1)~(9)的任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑。(11)如(10)所述的藥品,其特征在于,所述藥品用于預(yù)防、治療病原菌引起的感染癥。(12)如(10)或(11)所述的藥品,其特征在于,所述藥品用于人。(13)如(10)或(11)所述的藥品,其特征在于,所述藥品用于人以外的動(dòng)物。(14)一種食品,其特征在于,含有(1)~(9)任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑。(15)—種飼料,其特征在于,含有(1)~(9)任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑。(16)如(15)所述的飼料,其特征在于,所述飼料用于預(yù)防、治療動(dòng)物的腸內(nèi)感染癥。(17)—種動(dòng)物的詞養(yǎng)方法,其特征在于,工序?yàn)槭箘?dòng)物攝取(15)或(16)所述的飼料。此外,本發(fā)明提供一種有害菌的防除方法,該方法包含在有害菌的防除劑制造中使用蘇云金芽胞桿菌、以及向需要防除有害菌的動(dòng)物喂食蘇云金芽胞桿菌。另外,上述使用以及方法中的優(yōu)選方式與有害菌的防除劑相同。具體實(shí)施例方式本發(fā)明的有害菌防除劑的特征是含有蘇云芽胞金桿菌(Bacillusthuringiensis)。本發(fā)明中,有害菌指的是,通過(guò)在動(dòng)物的腸內(nèi)等消化器官內(nèi)增殖,對(duì)動(dòng)物造成不好影響的菌和細(xì)菌。例如,可舉出的有,通過(guò)在腸內(nèi)增殖,引起消化不良、腹瀉、軟便、便秘等的細(xì)菌;通過(guò)在腸內(nèi)產(chǎn)生病原因子,引起腸內(nèi)感染癥的病原菌等。所謂抑制有害菌的增殖,是例如8通過(guò)蘇云金芽胞桿菌的細(xì)菌拮抗作用、細(xì)菌干擾、屏障作用、蘇云金芽胞桿菌細(xì)菌的阻礙有害菌在腸道細(xì)胞停留、競(jìng)爭(zhēng)排除等,抑制有害菌在動(dòng)物體內(nèi)停留和增殖。用于本發(fā)明的有害菌防除劑的蘇云金芽胞桿菌是在Bergey'sManualofDeterminativeBacteriology的第9版(1994)中被分類(lèi)為"蘇云金芽胞桿菌(Bacillusthuringiensis)"的細(xì)菌。用于本發(fā)明的有害菌防除劑的蘇云金芽胞桿菌的亞種并無(wú)特別限制??梢?xún)?yōu)選使用例如,蘇云金芽胞桿菌蘇云金亞種(Bacillusthuringiensissubsp.thuringiensis)、蘇云金芽胞桿菌庫(kù)斯塔克亞種(Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki)、蘇云金芽胞桿菌鲇澤亞種(Bacillusthuringiensissubsp.aizawai)、蘇云金芽胞桿菌以色歹ll亞禾中(Bacillusthuringiensissubsp.israelensis)等。其中,優(yōu)選使用例如,蘇云金芽胞桿菌蘇云金亞種BGSC4A3株、蘇云金芽胞桿菌庫(kù)斯塔克亞種BGSC4D1株、蘇云金芽胞桿菌鲇澤亞種BGSC4J4株、蘇云金芽胞桿菌以色列亞種BGSC4Q7株等。BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4、BGSC4Q7為登記在BacillusGeneticStockCenter(BGSC)(TheDepartmentofBiochemist)的菌株。此外,本發(fā)明的有害菌防除劑中可以使用BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4、BGSC4Q7的變異株。作為變異株,可以使用上述各菌株自然變異所得或各菌株通過(guò)化學(xué)變異劑或紫外線(xiàn)等進(jìn)行變異處理所得的物質(zhì)。本發(fā)明中,優(yōu)選從這樣的變異株中使用至少具備與上述各菌株相同的膽汁酸耐受性、細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活能力、殺菌活性、兼性厭氧性、耐酸性中的一種的變異株。對(duì)于它們的菌學(xué)性質(zhì),將在后文敘述。此外,也可優(yōu)選使用上述以外的菌學(xué)性質(zhì)也與上述各菌株相同的變異株。另外,也可優(yōu)選使用顯示出與上述各菌株相同的有害菌防除能力的上述各菌株的變異株。本發(fā)明的有害菌防除劑所使用的蘇云金芽胞桿菌優(yōu)選具備膽汁酸耐受性。所謂"膽汁酸耐受性",是指在含有高濃度膽汁酸的培養(yǎng)基中,形成具有發(fā)芽、增殖能力的孢子。作為膽汁酸,是指哺乳類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、爬蟲(chóng)類(lèi)、兩棲類(lèi)、魚(yú)類(lèi)的膽汁中被廣泛發(fā)現(xiàn)的4環(huán)結(jié)構(gòu)的類(lèi)固醇,包含膽酸、鵝脫氧膽酸、脫氧膽酸、石膽酸以及熊去氧膽酸。一般,在動(dòng)物體內(nèi),膽汁酸以膽汁中甘氨酸或牛磺酸與酰胺結(jié)合的結(jié)合型存在,為鈉鹽。本說(shuō)明書(shū)中簡(jiǎn)單稱(chēng)為"膽汁酸"時(shí),包含上述膽汁酸以及它們的鹽和它們的結(jié)合體。含有高濃度膽汁酸的培養(yǎng)基是指,可舉例的有,含有將新鮮膽汁10倍濃縮、干固的膽汁末(Oxgall、Difco制)的培養(yǎng)基,膽汁末的濃度在0.3質(zhì)量%以上,優(yōu)選1質(zhì)量%以上,更優(yōu)選3質(zhì)量%以上。此外,"具備發(fā)芽、增殖能力"指是指,在含有如上述的高濃度膽汁酸的培養(yǎng)基中接種孢子,除膽汁酸濃度以外,其他條件均為適宜培養(yǎng)蘇云金芽胞桿菌的條件下,細(xì)菌發(fā)芽、再次開(kāi)始增殖分裂、形成菌落。具備膽汁酸耐受性的蘇云金芽胞桿菌可通過(guò)例如下述而得到。在適宜形成孢子的條件下培養(yǎng)含有蘇云金芽胞桿菌的分離源,使之形成孢子。將得到的孢子接種到添加上述高濃度膽汁酸的培養(yǎng)基,培養(yǎng)后,分離所形成的菌落。從該菌落中,選拔具有蘇云金芽胞桿菌的菌學(xué)性質(zhì)的。本發(fā)明的有害菌防除劑中使用的蘇云金芽胞桿菌優(yōu)選使用具備細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活能力的細(xì)菌。"細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子"是指,擔(dān)當(dāng)細(xì)胞自體誘導(dǎo)組織的細(xì)胞間傳遞的信號(hào)分子,在細(xì)菌增殖時(shí)促進(jìn)產(chǎn)生特定物質(zhì)的基因的表達(dá)的信號(hào)分子。作為細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子,可舉出的有,例如,N-丁?;?L-高絲氨酸內(nèi)酯(BHL)、N-(3-羥基丁?;?-L-高絲氨酸內(nèi)酯(HBHL)、N-(3-氧代丁?;?-L-高絲氨酸內(nèi)酯(OBHL)、N-己酰基-L-高絲氨酸內(nèi)酯(HHL)、N-(3-氧代己酰基)-L-高絲氨酸內(nèi)酯(OHHL)、N-辛酰基-L-高絲氨酸內(nèi)酯(OHL)、N-(3-氧代辛酰基)-L-高絲氨酸內(nèi)酯(OOHL)、N-(3-氧代癸酰基)-L-高絲氨酸內(nèi)酯(ODHL)、N-(3-氧代十二垸酰基)-L-高絲氨酸內(nèi)酯(OdDHL)。"具備細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活能力"指的是,例如具有產(chǎn)生細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的分解酶的能力。"產(chǎn)生酶"指的是,在培養(yǎng)菌體時(shí),以可從培養(yǎng)基中檢測(cè)出酶活性的程度產(chǎn)生酶。此外,"具備細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活能力"指的是,抑制由細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子誘導(dǎo)的病原性因子等的特定物質(zhì)產(chǎn)生。細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活能力可通過(guò)例如下述方法確認(rèn)。將蘇云金芽胞桿菌檢體在含有細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的培養(yǎng)液中培養(yǎng),將該培養(yǎng)液添加至接種了具有細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織的細(xì)菌的培養(yǎng)基,培養(yǎng)了一定時(shí)間時(shí),用適當(dāng)?shù)臉?biāo)記物確認(rèn)含有細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織的細(xì)菌是否受到細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的影響而產(chǎn)生特定物質(zhì)。檢測(cè)出特定物質(zhì)時(shí),表明細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子未失活,另一方面,未測(cè)出特定物質(zhì)時(shí),表明細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活,未誘導(dǎo)細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織。作為含有細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織的細(xì)菌,可使用例如,細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子達(dá)到一定濃度時(shí)產(chǎn)生色素物質(zhì)的細(xì)菌種。例如可舉出的試驗(yàn)方法有,將蘇云金芽胞桿菌檢體在含有OHHL的培養(yǎng)液中培養(yǎng)一定時(shí)間后,將培養(yǎng)液添加到生長(zhǎng)有利用細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織而合成紫色色素(紫色桿菌素、violacdn)的紫色色桿菌(Chromobacteriumviolaceum)的細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子生合成基因缺損株的培養(yǎng)基中,試驗(yàn)有無(wú)紫色桿菌素的誘導(dǎo)(McClean,K.etal,Microbiology,1997,143,pp.3073-3711)。本發(fā)明的有害菌防除劑所使用的蘇云金芽胞桿菌更優(yōu)選可在厭氧條件下增殖的兼性厭氧性者。所謂厭氧條件指的是,例如,動(dòng)物腸內(nèi)所含氣體中的氧濃度以下的條件。實(shí)驗(yàn)室中指的是,例如,20'C下測(cè)定的氧化還原電位通常在-10mV以下,優(yōu)選-50mV以下的條件。氧化還原電位可使用一般的市售的氧化還原電位計(jì)測(cè)定。由于人類(lèi)的消化道是微需氧條件或厭氧條件,因此通過(guò)使用此種細(xì)菌,在腸道環(huán)境下細(xì)菌也可充分增殖。本發(fā)明的有害菌防除劑所使用的蘇云金芽胞桿菌更優(yōu)選耐酸性者。通過(guò)使用此種細(xì)菌,即使是在胃的內(nèi)部,細(xì)菌也不會(huì)殺滅,可到達(dá)腸。"耐酸性"指的是,將細(xì)菌喂食給動(dòng)物時(shí),可維持在胃內(nèi)部條件下(攝取了食物的狀態(tài)下通常為pH3.56)也不會(huì)被殺滅、到達(dá)腸后維持可增殖的程度的菌數(shù)。由于蘇云金芽胞桿菌的孢子通常為耐酸性,因此使用孢子時(shí)一般不會(huì)產(chǎn)生問(wèn)題。蘇云金芽胞桿菌細(xì)菌在胃的內(nèi)部也不會(huì)殺滅、可到達(dá)腸,可以通過(guò)例如測(cè)定排泄物中的菌體濃度來(lái)確認(rèn)。本發(fā)明的有害菌防除劑所使用的蘇云金芽胞桿菌的培養(yǎng)方法并無(wú)特別限制,可根據(jù)細(xì)菌的性質(zhì)在適當(dāng)條件下以一般的方法進(jìn)行。例如,培養(yǎng)溫度可以在1545X:下培養(yǎng),但優(yōu)選2042'C,更優(yōu)選25'C38'C。此外,培養(yǎng)方法也可以使用靜置培養(yǎng)、往復(fù)式振蕩培養(yǎng)、旋轉(zhuǎn)式振動(dòng)培養(yǎng)、發(fā)酵罐培養(yǎng)等液體培養(yǎng)法或固體培養(yǎng)法。培養(yǎng)所使用的培養(yǎng)基成分也無(wú)特別限制,作為碳源可使用葡萄糖、半乳糖、乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、蔗糖、淀粉、淀粉水解物、蜜糖等糖類(lèi)、檸檬酸等有機(jī)酸類(lèi)、甘油等醇類(lèi),作為氮源可使用氨、硫酸銨、氯化銨、硝酸銨等銨鹽類(lèi)和硝酸鹽類(lèi),此外,可使用氯化鈉、氯化鉀、磷酸鉀、硫酸鎂、氯化鈣、硝酸鈣、氯化錳、硫酸亞鐵等的無(wú)機(jī)鹽類(lèi)、胨、大豆粉、脫脂大豆粕、肉汁、酵母汁等。本發(fā)明的有害菌防除劑所使用的蘇云金芽胞桿菌,從保存穩(wěn)定性、耐酸性觀(guān)點(diǎn)來(lái)看,優(yōu)選孢子狀態(tài)。孢子狀態(tài)下,耐熱、耐干燥,因此可在制造藥品、食品以及飼料時(shí)進(jìn)行充分干燥,提高保存穩(wěn)定性。為了令細(xì)菌形成孢子,在培養(yǎng)周期中,可調(diào)整培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的pH、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)濕度、培養(yǎng)時(shí)的氧濃度等培養(yǎng)條件,令其適于孢子形成條件。作為此種方法,可舉出例如,Schaeffer,R,J.Millet,J.P.Aubert,ProceedingsoftheNationalAcademyofScience,US,1965,54,pp.704-711記載的方法。此外,通過(guò)上述方法得到的培養(yǎng)物或菌體,從保存性的觀(guān)點(diǎn)來(lái)看,優(yōu)選呈干燥粉末。干燥可以通過(guò),例如,優(yōu)選令有害菌防除劑的水分含量在20質(zhì)量%以下來(lái)進(jìn)行。干燥方法并無(wú)特別限制,可舉出的有,自然干燥、通風(fēng)干燥、噴霧干燥、凍結(jié)干燥等,但其中優(yōu)選使用噴霧干燥以及通風(fēng)干燥。干燥時(shí),可以使用脫脂粉乳、谷氨酸鈉以及糖類(lèi)等保護(hù)劑。使用糖類(lèi)時(shí),可使用葡萄糖或海藻糖。此外,干燥后,優(yōu)選在得到的干燥物中加入脫氧劑、脫水劑,放入阻氣性的鋁袋密封,在室溫至低溫下儲(chǔ)藏。這樣,可以令細(xì)菌長(zhǎng)期存活保存。本發(fā)明的有害菌防除劑可以理想地用于有害菌中的特別是引起感染癥的病原菌的防除。作為此種病原菌,可舉出的有,屬于革蘭氏陰性細(xì)菌的病原菌的引起腸內(nèi)感染癥的弧菌(Vibrio)屬、沙門(mén)氏菌(Salmonella)屬、彎曲桿菌(Campylobacter)屬、耶爾森菌(Yersinia)屬、氣單胞菌(Aeromonas)屬的細(xì)菌、大腸桿菌(Escherichiacoli)、志賀氏菌(Shigella)。作為屬于弧菌屬的細(xì)菌,可舉出的有,副溶血弧菌、霍亂弧菌等。作為屬于沙門(mén)氏菌屬的細(xì)菌,可舉出的有,鼠傷寒沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、雞白痢沙門(mén)氏菌、雞沙門(mén)氏菌、豬傷寒沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、德貝沙門(mén)氏菌、都柏林沙門(mén)氏菌等。作為屬于彎曲桿菌屬的細(xì)菌,可舉出的有,空腸彎曲桿菌、結(jié)腸彎曲桿菌、胎兒彎曲桿菌等。作為屬于耶爾森菌屬的細(xì)菌,可舉出的有,小腸結(jié)腸炎耶爾森菌(Y.enterocolitica)、假結(jié)核耶爾森菌等。作為屬于氣單胞菌屬的細(xì)菌,可舉出的有,嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌、維羅納氣單胞菌(A.veronii)、簡(jiǎn)達(dá)氣單胞菌、舒伯特氣單胞菌(A.schubertii)等。作為大腸桿菌,可舉出的有,腸侵襲性大腸埃希菌(enteroinvasiveE.coli:EIEC)、腸產(chǎn)毒性大腸桿菌(enterotoxigenicE.coli:ETEC)、腸致病性大腸桿菌(enteropathogenicE.coli:EPEC)、產(chǎn)志賀毒素大腸埃希菌(ShigatoxinproducingE.coli:STEC)、腸聚集性大腸桿菌(EnteroaggregativeE.coli:EAEC)等。作為志賀氏菌,可舉出的有,痢疾志賀氏菌、福氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌、宋內(nèi)志賀氏菌等。此外,作為在皮膚、角皮、粘膜等處增殖、引起感染癥的病原菌,可舉出的有,屬于假單胞菌(Pseudmonas)屬的細(xì)菌。作為此種細(xì)菌,可舉出例如綠膿桿菌。此外,本發(fā)明的有害菌防除劑也可以理想地用于屬于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的病原菌。作為此種病原菌,可舉出例如,屬于梭菌(Clostridium)屬、芽孢桿菌(Bacillus)屬、葡萄球菌(Staphylococcus)屬、鏈球菌(Streptococcus)屬、李斯特菌(Listeria)屬的細(xì)菌。作為屬于梭菌屬的細(xì)菌,可舉出的有,產(chǎn)氣莢膜梭菌(C.perfringens)、艱難梭菌(C.difficile)、肉毒梭菌(C.botulinum)等。作為屬于芽孢桿菌屬的細(xì)菌,可舉出蠟狀芽孢桿菌等。作為屬于葡萄球菌屬的細(xì)菌,可舉出金黃色葡萄球菌等。作為屬于鏈球菌屬的細(xì)菌,可舉出的有,豬鏈球菌、化膿性鏈球菌(S.pyogenes)等。本發(fā)明的有害菌防除劑,可以通過(guò)適當(dāng)添加一般藥品所使用的載體和增量劑等任意成分,制成制劑,作為用于防除有害菌的藥品。本發(fā)明的藥品特別理想地用于預(yù)防、治療病原菌引起的感染癥。藥品的劑形可根據(jù)投藥的部位、作為預(yù)防治療對(duì)象的疾病等適當(dāng)選擇使用。以下對(duì)于具體的醫(yī)藥的用途、劑形進(jìn)行說(shuō)明。本發(fā)明的藥品可用作改善腸內(nèi)菌群平衡的整腸劑,用于預(yù)防、治療病原菌引起的腸內(nèi)感染癥。作為此時(shí)的藥品的劑形,可舉出的有,經(jīng)口喂食用的片劑、顆粒劑、粉劑、膠囊劑等固體制劑以及水溶劑、漿劑、或用于非經(jīng)口投與的注射劑、栓劑、經(jīng)皮吸收劑等。此外,用于結(jié)腸清洗的也可以是用于通過(guò)灌腸投與的水溶劑。此時(shí),可以通過(guò)將蘇云金芽胞桿菌與生理鹽水混合而制造。此外,本發(fā)明的藥品可以抑制皮膚和粘膜的有害菌的增殖,可用于預(yù)防、治療皮膚和粘膜的感染癥。具體地,本發(fā)明的藥品可以抑制口腔細(xì)菌的增殖,可用于預(yù)防蛀牙、牙齦炎等牙周部疾病和口臭。作為此時(shí)的藥品的劑形,可優(yōu)選舉出的有,可咀嚼的片劑、磨牙劑、漱口藥、口腔滴劑等。另外,本發(fā)明的藥品可用于防除皮膚和角皮的病原菌。特別適用于促進(jìn)皮膚損傷的治愈。作為此時(shí)的藥品的劑形,可舉出的有,軟膏劑、膏、噴霧、洗劑、凝膠、粘貼劑等。此外,本發(fā)明的藥品可用于改善陰道內(nèi)菌群,預(yù)防、治療病原菌對(duì)陰道的感染。通過(guò)改善陰道內(nèi)菌群,可期望預(yù)防陰道的酵母菌感染和細(xì)菌性陰道疾病。作為此時(shí)的藥品的劑形,可舉出的有,膏、洗劑、凝膠等。此外,本發(fā)明的藥品也可用于眼、鼻腔、耳的炎癥,此時(shí)也可適當(dāng)選擇劑形。本發(fā)明的藥品除了蘇云金芽胞桿菌,還可以含有具有抑制其它有害菌增殖的作用的成分。這些成分只要不會(huì)殺滅蘇云金芽胞桿菌,確認(rèn)其對(duì)動(dòng)物的安全性,則無(wú)特別限制。本發(fā)明的藥品中的蘇云金芽胞桿菌的菌體濃度可根據(jù)藥品的用途和劑形,使用與投藥有效量適應(yīng)的濃度。一般為lX104~lX1012CFU/g,優(yōu)選lXl()5lX10"CFU/g,更優(yōu)選1X106~lX101()CFU/g的范圍。本發(fā)明的藥品可投藥于人類(lèi)及人類(lèi)以外的動(dòng)物。此時(shí)的投與方法也只要根據(jù)藥品的劑形、用途、投與對(duì)象的年齡、性別、體重、健康狀況、適用部位的病患的狀態(tài)等,用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行即可,以便可以投與有效量的蘇云金芽胞桿菌。例如,以促進(jìn)整腸和預(yù)防、治療腸內(nèi)感染癥為目的經(jīng)口投與時(shí),一般優(yōu)選1X105~1X10mCFU/kg體重/日的范圍內(nèi)喂食蘇云金芽胞桿菌。此外,在皮膚、角皮、粘膜中處于防除病原菌的目的而外用時(shí),可根據(jù)涂抹范圍適當(dāng)調(diào)節(jié),但一般優(yōu)選1X10SlX10"CFU/101000mg/日的范圍內(nèi)投與蘇云金芽胞桿菌。13本發(fā)明的有害菌防除劑可通過(guò)添加、混合至飲料食品,或適當(dāng)添加一般飲料食品所使用的任意成分并加工,制成具備改善腸內(nèi)菌群平衡的效果、整腸效果的食品或具備預(yù)防、治療腸內(nèi)感染癥的效果的食品。任意成分和食品的形態(tài)只要不會(huì)殺滅蘇云金芽胞桿菌菌體,則無(wú)特別限制,只要是一般食品中所使用的,則無(wú)特別限制。例如,可以可加工為健康飲料或粉末、片劑、膠囊等的增補(bǔ)劑。此外,也可使用于面包類(lèi)、面類(lèi)、餅干、巧克力、糖果等的點(diǎn)心類(lèi)、袋泡茶類(lèi)、麥片粥等的熱谷物、湯類(lèi)、熱飲料、甜味料、調(diào)味料、香味料、速溶咖啡、干奶油等干燥制品或凍結(jié)干燥制品、火腿、香腸等的畜肉加工品、魚(yú)糕、魚(yú)肉山芋餅等水產(chǎn)加工品。本發(fā)明的食品,從保存穩(wěn)定性的觀(guān)點(diǎn)來(lái)看,特別優(yōu)選增補(bǔ)劑的形態(tài)。本發(fā)明的食品中的蘇云金芽胞桿菌的菌體濃度只要是適于攝取有效量的范圍即可,可根據(jù)食品的形態(tài)進(jìn)行選擇。例如,通常優(yōu)選將蘇云金芽胞桿菌設(shè)為lX105~lX101QCFU/kg體重/日的范圍的適于攝取的范圍。作為此種濃度,例如可舉出,蘇云金芽胞桿菌的菌體濃度為1X104~1X1012CFU/g,優(yōu)選1X105~1X10nCFU/g,更優(yōu)選1X106~1X1010CFU/g的范圍。此外,本發(fā)明的食品的制造,除了混合本發(fā)明的有害菌防除劑以外,也可根據(jù)一般的食品加工的方法進(jìn)行。例如,本發(fā)明的有害菌防除劑為粉末狀、固體狀時(shí),為了易與食品成分混合,可以作為液狀或凝膠狀形態(tài)使用。此時(shí),可將水、大豆油、菜籽油、玉米油等植物油、液體動(dòng)物油、聚乙烯醇或聚乙烯吡咯垸酮、聚丙烯酸等的水溶性高分子化合物作為液體載體使用。另外,為了保持食品中的菌體濃度的均一性,也可添加藻酸、藻酸鈉、蒼耳烷膠、酪蛋白鈉、阿拉伯膠、瓜爾膠、羅望子種子多糖類(lèi)等水溶性多糖類(lèi)。此外,為了防止雜菌繁殖,也可添加丙酸、抗壞血酸、檸檬酸等有機(jī)酸,令液體生菌劑為酸性。本發(fā)明的有害菌防除劑可作為添加、混合至飼料的飼料添加劑。該飼料添加劑可以添加、混合至詞料中使用。此外,本發(fā)明的有害菌防除劑,通過(guò)與一般飼料中所使用的任意成分共同加工,可用于改善腸內(nèi)菌群平衡、促進(jìn)整腸、促進(jìn)生長(zhǎng)(增加體重)的飼料和用于預(yù)防、治療腸內(nèi)感染癥的飼料。此時(shí)的任意成分和詞料形態(tài)只要不會(huì)殺滅蘇云金芽胞桿菌的菌體,則無(wú)特別限制,可使用作為普通家畜飼料或?qū)櫸锸称?、?dòng)物用增補(bǔ)劑等動(dòng)物飼料所使用的成分和形態(tài)。本發(fā)明的飼料中的有害菌防除劑的含量為攝取有效量所適宜的范圍,可以根據(jù)投與動(dòng)物的種類(lèi)、體重、年齡、性別、使用目的、健康狀態(tài)、詞料成分等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)。例如,一般優(yōu)選lX105lX10^CFU/kg體重/日的范圍內(nèi)攝取蘇云金芽胞桿菌。作為此種濃度,例如可舉出,蘇云金芽胞桿菌的菌體濃度為lX104~lX1012CFU/g,優(yōu)選1X105~1X10"CFU/g,更優(yōu)選1X106~1X101GCFU/g的范圍。此外,本發(fā)明的飼料可直接通過(guò)混合本發(fā)明的有害菌防除劑而制造,但添加、混合粉末狀、固體狀的有害菌防除劑時(shí),也可與食品加工相同地使用液狀或凝膠狀的形態(tài)。攝取本發(fā)明的飼料的動(dòng)物種類(lèi)并無(wú)特別限制,可舉出例如,哺乳類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)、爬蟲(chóng)類(lèi)、兩棲類(lèi)、魚(yú)類(lèi)等。其中特別優(yōu)選用于選自雞、鴨、鵪鶉以及火雞(于乂y千3々)的家禽、選自豬、牛、羊以及兔的家畜。動(dòng)物攝取的飼料量可根據(jù)動(dòng)物的種類(lèi)、根據(jù)體重、年齡、性別、使用目的、健康狀態(tài)、詞料成分等進(jìn)行適當(dāng)調(diào)節(jié)。此外,作為預(yù)防、治療動(dòng)物的腸內(nèi)感染癥的方法,只要使動(dòng)物攝取在飼料成分內(nèi)添加了本發(fā)明的有害菌防除劑的飼料即可,該投與方法和動(dòng)物的飼養(yǎng)方法可通過(guò)一般動(dòng)物的飼養(yǎng)所使用的方法進(jìn)行。實(shí)施例U)膽汁酸耐受性以及厭氧性的試驗(yàn)在脫離子水1,000ml中加入35g普通瓊脂培養(yǎng)基"二'7^^"(日水制藥株式會(huì)社制造),用高壓鍋滅菌。滅菌后冷卻至45'C后,加入用纖維素混合酯式膜濾器(孔徑0.45um、7卜"o于7夕東洋株式會(huì)社制造)過(guò)濾滅菌的膽汁末(Oxgall、Difco制造),制作添加了膽汁末濃度為0.3質(zhì)量%、1質(zhì)量%以及3質(zhì)量%的的普通瓊脂平板培養(yǎng)基。將屬于蘇云金芽胞桿菌的BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7各自接種到未添加膽汁末的普通瓊脂平板培養(yǎng)基(去離子水l,OOOml、"二'7^4"35g),37°C下培養(yǎng)一夜。培養(yǎng)后,從形成于平板培養(yǎng)基的菌落中分離菌體,用經(jīng)過(guò)滅菌的接種環(huán)接種至上述制作的添加膽汁末的平板培養(yǎng)基。37'C下培養(yǎng)2天,確認(rèn)有無(wú)形成菌落(實(shí)施例14)。此外,為了確認(rèn)BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7在厭氧條件下的增殖能力,在上述制作的未添加膽汁末的平板培養(yǎng)基中接種各菌株,使用7氺口八"、乂夕少>年(三菱gas化學(xué)株式會(huì)社制造),在厭氧條件下37。C培養(yǎng)2天,確認(rèn)有無(wú)形成菌落。另一方面,將凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)ATCC8038株、凝結(jié)芽孢桿菌NBRC12583株、凝結(jié)芽孢桿菌DSM2312株、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株、枯草芽孢桿菌NBRC3025株、枯草芽孢桿菌NBRC3108株、枯草芽孢桿菌NBRC3336株、克勞氏芽孢桿菌(Bacillusclausii)DSM2512株、克勞氏芽孢桿菌DSM2515株、克勞氏芽孢桿菌DSM2525株、以及克勞氏芽孢桿菌DSM8716株各自相同地接種至未添加膽汁末的培養(yǎng)基,37。C培養(yǎng)2天。此外,相同地進(jìn)行厭氧條件下的增殖試驗(yàn)(比較例1~11)。ATCC8038為登記在AmericanTypeCultureCollection(ATCC);NBRC12583、NBRC3009、NBRC3025、NBRC3108、以及NBRC3336為登記在獨(dú)立行政法人產(chǎn)品評(píng)價(jià)技術(shù)基礎(chǔ)機(jī)構(gòu)的生物遺傳資源部門(mén)(NBRC);DSM2312、DSM2512、DSM2515、DSM2525、以及DSM8716為登記在DeutscheSammlungvonMikroorganismenundZellkulturenGmbH(DSMZ)的株。結(jié)果如表1所示。[表l]表l<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>+:確認(rèn)形成有菌落?!?確認(rèn)形成有微量菌落。-:確認(rèn)未形成菌落。已確認(rèn),實(shí)施例1~4的蘇云金芽胞桿菌在膽汁末濃度為0.3質(zhì)量%、1質(zhì)量%以及3質(zhì)量%的普通瓊脂平板培養(yǎng)基中全部形成了菌落,在厭氧條件下也可以增殖。另一方面,已確認(rèn),比較例1~3的凝結(jié)芽孢桿菌雖然可以在厭氧條件下增殖,但在膽汁末濃度為0.3質(zhì)量%的普通瓊脂培養(yǎng)基平板中僅生成微量的菌落,在膽汁末濃度為1質(zhì)量%以及3質(zhì)量%下完全沒(méi)有形成菌落,顯示出低于實(shí)施例1~4的蘇云金芽胞桿菌的膽汁酸耐受性。此外,比較例47的枯草芽孢桿菌雖然對(duì)膽汁酸顯示出耐受性,但在厭氧條件下不能增殖。此外,比較例8~11的克勞氏芽孢桿菌DSM2512、DSM2515、DSM2525、DSM8716雖然對(duì)膽汁酸顯示出耐受性,但在厭氧條件下不能增殖。(2)細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活能力的試驗(yàn)使用破壞了細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子產(chǎn)生基因的紫色色桿菌(Chromobacteriumviolaceum)CV026株,進(jìn)行確認(rèn)有無(wú)細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織的誘導(dǎo)的試驗(yàn)(McClean,K.etal.,Microbiology,143,3703-3711(1997))。CV026株是作為細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的N-己酰基-L-高絲氨酸內(nèi)酯(HHL)的生物合成基因被破壞的菌株,若不從外部添加HHL等的?;呓z氨酸內(nèi)酯(AHL),則無(wú)法表達(dá)細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織,因此無(wú)法合成紫色的色素(紫色桿菌素、violacein)。作為AHL,除HHL以外,添加N-(3-氧代己?;?-L-高絲氨酸內(nèi)酯(OHHL),也可以表達(dá)細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織。本試驗(yàn)的具體方法如下。將紫色色桿菌(Chromobacteriumviolaceum)CV026株接種至Luria-Bertani(LB)培養(yǎng)基,28'C中振蕩培養(yǎng)一夜。接著,在高壓鍋滅菌后冷卻至45'C的半流動(dòng)LB瓊脂培養(yǎng)基(0.3%)5ml中,加入上述得到的CV026的培養(yǎng)液5(Hd、經(jīng)過(guò)過(guò)濾滅菌的卡那霉素2%水溶液5(^1,將該半流動(dòng)LB瓊脂培養(yǎng)基5ml與事先準(zhǔn)備在直徑的9cm的平皿上的LB瓊脂培養(yǎng)基重疊。令瓊脂固化后,用穿孔器(3》夕求一,一)在LB瓊脂培養(yǎng)基上打開(kāi)直徑6mm的孔。此外,CV026是作為NCTC13278登記在NationalCollectionofTypeCultures(NCTC)中的菌株。在LB培養(yǎng)基10ml中加入500pM的OHHL(Sigma制造)0.5ml,28'C放置4小時(shí)制成陽(yáng)性質(zhì)控品。此外,將未添加任何物質(zhì)的LB培養(yǎng)基相同地處理,制成陰性質(zhì)控品。將各質(zhì)控品50pl各自添加到上述制作的含有CV026的LB培養(yǎng)基的孔內(nèi),28'C培養(yǎng)24小時(shí)。結(jié)果是,添加了添加有OHHL的陽(yáng)性質(zhì)控品的培養(yǎng)基的孔的周?chē)_認(rèn)有紫色桿菌素的誘導(dǎo),添加了未添加有OHHL的陰性質(zhì)控品的培養(yǎng)基中確認(rèn)沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。這樣,經(jīng)確認(rèn),若在存在有OHHL下培養(yǎng)CV026,則表達(dá)細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織、誘導(dǎo)紫色桿菌素,另一方面,在沒(méi)有OHHL下即使培養(yǎng),也不表達(dá)細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織,不會(huì)誘導(dǎo)紫色桿菌素。接著,為了調(diào)査芽孢桿菌屬細(xì)菌的OHHL失活能力,用以下順序使芽孢桿菌屬細(xì)菌與OHHL反應(yīng)。將蘇云金芽孢桿菌BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4、BGSC4Q7(實(shí)施例1~4)、以及表2所示的凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、克勞氏芽孢桿菌各自接種到LB培養(yǎng)基,37。C振蕩培養(yǎng)一夜(比較例1~11)。接著,在吸光度(660nm)調(diào)制為1.0的培養(yǎng)液10ml中,加入OHHL0.5ml,28'C反應(yīng)4小時(shí)。將各反應(yīng)液5(Hil各自添加到上述制作的含有CV026的LB培養(yǎng)基的孔內(nèi),28'C培養(yǎng)24小時(shí)。培養(yǎng)后,觀(guān)察各自的培養(yǎng)基的孔周?chē)袩o(wú)紫色桿菌素的誘導(dǎo)。結(jié)果如表2所示。[表2〗表2<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>+:確認(rèn)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。-:確認(rèn)沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。實(shí)施例14的蘇云金芽胞桿菌的所有菌株均確認(rèn)沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。另一方面,比較例1~3的凝結(jié)芽孢桿菌、比較例4~7的枯草芽孢桿菌、比較例8~11的克勞氏芽孢桿菌的所有菌株均確認(rèn)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。從結(jié)果可知,這些蘇云金芽胞桿菌通過(guò)產(chǎn)生OHHL的分解酶使OHHL失活,抑制CV026的細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織的表達(dá),另一方面,比較例1~11的芽孢桿菌屬細(xì)菌沒(méi)有使OHHL失活。(3)有害菌防除劑的制造使用下述組成的孢子形成培養(yǎng)基,將BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7各自在37。C下液體培養(yǎng)72小時(shí)(ProceedingsoftheNationalAcademyofSciences,US,1965,54,pp.704-711)。將得到的培養(yǎng)液離心分離,收集菌體。將得到的菌體凍結(jié)干燥后粉碎,加入乳糖,令孢子密度為5X108CFU/g,制造有害菌防除劑,各自制成制造例1~4。孢子密度通過(guò)將制造的有害菌防除劑用滅菌水稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛?,通過(guò)70'C中加熱30分鐘僅殺滅營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,然后接種至普通瓊脂培養(yǎng)基,通過(guò)計(jì)數(shù)所形成的菌落而測(cè)定。(孢子形成培養(yǎng)基成分)nutrientbroth(Difco制造)8.0gKC1l.OgMgS047H200.25gMnCl24H200.002gpH調(diào)整為7.0,總量1,000ml將上述成分用高壓鍋滅菌后,添加經(jīng)過(guò)滅菌的CaCl2溶液以及FeS04溶液,使之各自成為5X10^M以及1X10-6M。另一方面,將使用凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)NBRC12583株以及枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株進(jìn)行上述相同的制造的組合物各自作為比較制造例1和2。(4)雛雞成長(zhǎng)試驗(yàn)將混合有相對(duì)于雛雞的飼料(SDBroiler前后期用,日本配合飼料株式會(huì)社制造,未添加抗菌性物質(zhì)的飼料)總質(zhì)量為0.2質(zhì)量%制造例1~4的有害菌防除劑的詞料,分別作為實(shí)施例5~8。將12只源自Broiler種雞(品牌千^)的雞蛋孵化的雛雞作為一組,各組喂食實(shí)施例58的飼料56天,進(jìn)行成長(zhǎng)試驗(yàn)。另一方面,將混合有0.2%的比較制造例1以及2的組合物的飼料作為比較例12以及13。將混合有0.2。/。的乳糖以替代有害菌防除劑的飼料作為對(duì)照例,相同地進(jìn)行成長(zhǎng)試驗(yàn)。19測(cè)定56天后的各組的雛雞的體重,算出各組的平均值。此外,測(cè)定飼養(yǎng)期中的糞中的添加菌的菌體濃度,算出各自的平均濃度。結(jié)果如表3所示。[表3]表3<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>喂食了實(shí)施例58的詞料的雛雞,較之于喂食了比較例12以及13的飼料的雛雞,體重增加較大。此外,從喂食了實(shí)施例58的飼料的雛雞的糞中,測(cè)出了11.3Xl()SCFU/g(克生雞糞)以上的添加菌,較之于喂食了比較例12以及13的飼料的雛雞的糞,菌數(shù)明顯增加。據(jù)此顯示,含有本發(fā)明的蘇云金芽胞桿菌孢子的有害菌防除劑,不會(huì)在胃和消化道內(nèi)殺滅,在腸內(nèi)形成菌落,促進(jìn)動(dòng)物的體重增加。(5)豬飼養(yǎng)試驗(yàn)將混合有制造例1和3的有害菌防除劑和養(yǎng)豬用標(biāo)準(zhǔn)詞料(7'^$7"7—,昭和產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社制造)的飼料分別作為實(shí)施例9和10,將30只仔豬作為一組進(jìn)行喂飼。同樣地,將混合有比較制造例1的組合物和養(yǎng)豬用標(biāo)準(zhǔn)飼料的詞料作為比較例14,喂飼仔豬。將混合有乳糖以替代有害菌防除劑的飼料作為對(duì)照例,喂飼仔豬。測(cè)定21天后的各組的仔豬的體重,算出各組的平均值。此外,觀(guān)察期間內(nèi)腹瀉、軟便的發(fā)生情況,將l頭仔豬腹瀉或軟便的天數(shù)以l天l分計(jì)算,其結(jié)果作為腹瀉、軟便評(píng)分進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果如表4所示。[表4]表4<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table>喂食了實(shí)施例9和10的飼料的仔豬,較之于喂食了比較例14的詞料的仔豬,體重增加較大。此外,喂食了實(shí)施例9和IO的飼料的仔豬,較之于喂食了比較例14的飼料的仔豬,腹瀉、軟便評(píng)分明顯較低。據(jù)此顯示,含有本發(fā)明的蘇云金芽胞桿菌孢子的有害菌防除劑,可以促進(jìn)仔豬的體重增加,具有預(yù)防、改善腹瀉、軟便的效果。(6)仔牛飼養(yǎng)試驗(yàn)將6頭出生1周的公仔牛(Holstein種)作為一組進(jìn)行飼養(yǎng)。對(duì)于各組仔牛,在下述所示的代用乳中分別添加2質(zhì)量%的制造例1和3的有害菌防除劑,作為實(shí)施例11和12,將添加2質(zhì)量。/。的比較制造例1的組合物作為比較例15。對(duì)照例中添加等量的乳糖。喂食、詞養(yǎng)這些代用乳以及哺乳期仔牛飼養(yǎng)飼料(》^,,雪印種苗株式會(huì)社制造)至35天大,調(diào)査飼養(yǎng)期間的腹瀉、軟便的發(fā)生情況。(代用乳組成)蹈脫脂粉乳69乳清10牛脂12.2軟磷脂0.8維他命、礦物質(zhì)、其他添加物8(腹瀉、軟便的發(fā)生情況的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn))多試驗(yàn)期中腹瀉產(chǎn)生總頭數(shù)在10頭以上少試驗(yàn)期中腹瀉產(chǎn)生總頭數(shù)在不足10頭、在5頭以上明顯很少試驗(yàn)期中腹瀉產(chǎn)生總頭數(shù)不足5頭結(jié)果如表5所示。[表5]表5<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>喂食了實(shí)施例11和12的代用乳的仔牛,較之于喂食了比較例15的代用乳的仔牛,體重增加較大。此外,喂食了實(shí)施例11和12的代用乳的仔牛,較之于喂食了比較例15的代用乳的仔牛,腹瀉、軟便情況明顯較低。據(jù)此顯示,含有本發(fā)明的蘇云金芽胞桿菌孢子的有害菌防除劑,可以促進(jìn)仔牛的體重增加,具有預(yù)防、改善腹瀉、軟便的效果。從雛雞、仔豬、仔牛的成長(zhǎng)飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果可知,喂食含有本發(fā)明的有害菌防除劑的飼料,蘇云金芽胞桿菌高幾率停留在腸內(nèi),提高了飼料的消化吸收、促進(jìn)生長(zhǎng),還可預(yù)防、改善腹瀉、軟便等不理想的癥狀。(7)乳質(zhì)提升作用試驗(yàn)將混合有制造例1和3的有害菌防除劑和奶牛用飼料(玉米4.5kg、大麥2.5kg、甜菜U1.8kg、綿籽1.8kg、脫脂大豆1.4~1.6kg、大豆0.6kg1.2kg、干草10~12kg、水160~220L)的詞料各自作為實(shí)施例13和14,以30頭奶牛(Holstein)為一組令其各自攝取?;旌狭吮容^制造例1的組合物和奶牛用飼料的飼料為比較例16,同樣令其攝取。此外,混合有乳糖以替代有害菌防除劑的詞料作為對(duì)照例,同樣令其攝取。從各組奶牛間隔10天進(jìn)行17次擠奶,測(cè)定牛奶的乳脂率、乳蛋白質(zhì)率以及無(wú)脂乳固體分率,算出平均值。結(jié)果如表6所示。[表6]表6<table>tableseeoriginaldocumentpage23</column></row><table>喂食了實(shí)施例13和14的飼料的奶牛生產(chǎn)的牛奶的乳脂率、乳蛋白質(zhì)率以及無(wú)脂乳固體分率均大于喂食了比較例16的飼料的奶牛生產(chǎn)的牛奶。據(jù)此顯示,含有本發(fā)明的蘇云金芽胞桿菌孢子的有害菌防除劑具有提升奶牛乳質(zhì)的效果。(8)對(duì)于雛雞的沙門(mén)氏菌攻擊試驗(yàn)。將混合有相對(duì)于雛雞的飼料(SDBroiler前期用,日本配合飼料株式會(huì)社制造,未添加抗菌性物質(zhì)的詞料)總質(zhì)量為0.2質(zhì)量%的制造例1~4的有害菌防除劑的飼料,分別作為實(shí)施例15~18。將12只源自Broiler種雞(品牌*X>*—)的雞蛋孵化的雛雞作為一組,各組喂食實(shí)施例15~18的飼料12天。另一方面,將混合有0.2質(zhì)量%的比較制造例1以及2的組合物的飼料制成比較例17以及18。將混合有0.2質(zhì)量%的乳糖以替代有害菌防除劑的飼料作為對(duì)照例,相同地進(jìn)行喂食。7天大時(shí)每只經(jīng)口喂食1.2X107CFU的Salmonellaenteritidis(SE),12天大時(shí)用棉棒擦拭盲腸內(nèi)容物和總排泄腔采糞。SE使用從群馬縣的養(yǎng)雞農(nóng)場(chǎng)死亡的雞的盲腸內(nèi)容物中分離的菌株。通過(guò)以下方法測(cè)定盲腸內(nèi)容物的SE生菌數(shù),算出感染指數(shù)以及防御指數(shù)。在盲腸內(nèi)容物lg加入滅菌磷酸緩沖生理鹽水稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用滅菌生理鹽水將試料原液階段稀釋至10倍,得到階段稀釋液。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹O.lml在SS瓊脂平板培養(yǎng)基"二'74"(日水制藥株式會(huì)社制造)以及亮綠瓊脂平板培養(yǎng)基(DifcoLaboratories制造)上,37'C培養(yǎng)24小時(shí),測(cè)定各平板培養(yǎng)基生長(zhǎng)的典型的SE的菌落數(shù)。接著,用該菌落釣菌,接種至賴(lài)氨酸脫碳酸試驗(yàn)用SIM瓊脂培養(yǎng)基"二'7^<"(R水制藥柱式會(huì)社制造)以及TSI瓊脂培養(yǎng)基"二'7^〗"(日水制藥株式會(huì)社制造),37'C培養(yǎng)24小時(shí),確認(rèn)性狀。將其中確認(rèn)為SE的菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg盲腸內(nèi)容物的SE生菌數(shù)。以此結(jié)果為基礎(chǔ),如下算出感染指數(shù)以及防御指數(shù)。感染指數(shù)是顯示病原菌的感染率高低的數(shù)值,防御指數(shù)是顯示與喂食不含芽孢桿菌屬細(xì)菌的飼料相比的各飼料防御病原菌感染的能力的數(shù)值。感染指數(shù)各個(gè)體的盲腸內(nèi)SE生菌數(shù)的對(duì)數(shù)的平均值(bgCFU/g的平均數(shù))防御指數(shù)對(duì)照群的感染指數(shù)/各試驗(yàn)群的感染指數(shù)關(guān)于采自總排泄腔的糞,通過(guò)以下方法,通過(guò)每個(gè)個(gè)體進(jìn)行定性培養(yǎng),觀(guān)察SE的性狀。即,將棉棒上附著的糞懸濁于10ml的滅菌磷酸緩沖生理鹽水,作為試料原液后,將其各自涂抹0.1ml在SS瓊脂培養(yǎng)基以及亮綠瓊脂平板培養(yǎng)基上,37'C培養(yǎng)24小時(shí),確認(rèn)各個(gè)體是否檢測(cè)出SE的菌落。此外,調(diào)查上述采取的各組的盲腸內(nèi)容物中有無(wú)高絲氨酸內(nèi)酯。首先,為了調(diào)査高絲氨酸內(nèi)酯的濃度與細(xì)菌自體誘導(dǎo)組織的誘導(dǎo)的關(guān)系,進(jìn)行以下試驗(yàn)。將紫色色桿菌CV026株接種至LB培養(yǎng)基,28'C振蕩培養(yǎng)一夜。接著,在高壓鍋滅菌后冷卻至45'C的半流動(dòng)LB瓊脂培養(yǎng)基(0.3%)5m沖,加入上述得到的CV026的培養(yǎng)液50W、經(jīng)過(guò)過(guò)濾滅菌的卡那霉素2%水溶液5(^1,將該半流動(dòng)LB瓊脂培養(yǎng)基5ml與事先準(zhǔn)備在9cm平皿上的LB瓊脂培養(yǎng)基重疊。令瓊脂固化后,將500nM、5(VM、5pM的OHHL(Sigma制造)各5(^1滴在重疊有CV026株的LB瓊脂培養(yǎng)基的表面,30分鐘干燥后,28'C培養(yǎng)24小時(shí)。結(jié)果確認(rèn)了滴下500nM、5(HiM的OHHL的培養(yǎng)基中,滴下的周邊有紫色桿菌素的誘導(dǎo),在滴下5pM的OHHL的培養(yǎng)基中,滴下的周邊沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。接著,將上述得到的盲腸內(nèi)容物的滅菌磷酸緩沖生理鹽水原液以4'C、20,000Xg進(jìn)行30分鐘離心分離,在得到的上清中加入2倍量的二氯甲烷(試劑特級(jí)、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社制造),通過(guò)l小時(shí)振蕩進(jìn)行萃取。萃取進(jìn)行2次。收集有機(jī)層,用無(wú)水硫酸鈉(試劑特級(jí)、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社制造)除去水分,蒸發(fā)除去溶劑后,加入50^il的滅菌水。將這樣得到的各組的50pl的盲腸內(nèi)容物溶液各自滴到重疊了CV026的LB培養(yǎng)基的表面上,30分鐘干燥后,28'C培養(yǎng)24小時(shí)。培養(yǎng)后,觀(guān)察上述溶液滴下的周邊是否有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。此外,測(cè)定飼養(yǎng)期間的糞中的添加蘇云金芽胞桿菌的菌體濃度,算出各自的平均濃度。結(jié)果如表7所示。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage0</column></row><table>+:確認(rèn)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。-:確認(rèn)沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。喂食了含有實(shí)施例15~18的蘇云金芽胞桿菌的詞料的雛雞,盲腸內(nèi)容物的SE的菌體濃度極低,沙門(mén)氏菌的感染指數(shù)極低。此外,肉眼檢測(cè)尸檢(部検Lf二)的雞內(nèi)臟,結(jié)果幾乎沒(méi)有在盲腸發(fā)現(xiàn)出血病變。從防御指數(shù)可知,感染指數(shù)與對(duì)照例相比為約1/41/10。喂食了比較例17和18的飼料的雛雞,與對(duì)照例相比,僅微量抑制了SE的增殖。此外,肉眼檢測(cè)尸檢的雞內(nèi)臟,結(jié)果盲腸出血病變較高。此外,從喂食了實(shí)施例15~18的有害菌防除劑的雛雞的糞中,檢測(cè)出了9.9X106CFU/g(克生雞糞)以上的添加菌,較之于比較例生菌數(shù)明顯增加。據(jù)此顯示,本發(fā)明的含有蘇云金芽胞桿菌孢子的動(dòng)物用有害菌防除劑,不會(huì)在胃和腸的消化道內(nèi)殺滅,在腸內(nèi)形成菌落,抑制SE的增殖,抑制細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的表達(dá)。艮卩,通過(guò)在飼料中添加本發(fā)明的蘇云金芽胞桿菌的孢子,具備預(yù)防、治療SE引起的腸內(nèi)感染癥的效果。(9)對(duì)于豬的大腸菌攻擊試驗(yàn)在養(yǎng)豬用飼料(7'^S7〉U—x',昭和產(chǎn)業(yè)株式會(huì)社制造)中分別混合相對(duì)于養(yǎng)豬用飼料總質(zhì)量為0.5質(zhì)量%的制造例1和3的有害菌防除劑,將混合得到的飼料分別作為實(shí)施例19和20,將30頭35天大的豬作為一組,喂食19天。同樣地,將混合有0.5質(zhì)量%的比較制造例1的有害菌防除劑的飼料作為比較例19,給豬喂食。此外,將混合有0.5%質(zhì)量的乳糖以替代有害菌防除劑的詞料作為對(duì)照例,給豬喂食。40天大時(shí)令每1頭經(jīng)口感染1.8X1()SCFU的浮腫病菌(Escherichiacoli)。浮腫病菌使用從北九州的養(yǎng)豬場(chǎng)浮腫病發(fā)病死亡的豬的腸內(nèi)容物中分離的菌株。飼養(yǎng)至54天大,算出各組的豬的死亡率。此外,小腸內(nèi)容物的E.coli的生菌數(shù)以下述方法測(cè)定。在小腸內(nèi)容物lg加入滅菌磷酸緩沖生理鹽水稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用滅菌生理鹽水將試料原液階段稀釋至10倍,得到階段稀釋液。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹O.lml在DHL瓊脂平板培養(yǎng)基(顆粒)"二'7^4"(日水制藥株式會(huì)社制造),37'C培養(yǎng)24小時(shí),測(cè)定各平板培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的典型的E.coli的菌落數(shù)。接著,將其中確認(rèn)為E.coli的菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg小腸內(nèi)容物的E.coli的生菌數(shù),通過(guò)如下方法算出感染指數(shù)。感染指數(shù)各個(gè)體的小腸內(nèi)E.coli的生菌數(shù)的對(duì)數(shù)的平均值(1ogCFU/g的平均數(shù))此外,為了調(diào)査小腸內(nèi)容物中有無(wú)高絲氨酸內(nèi)酯,使用與(8)相同的方法,使用CV026株觀(guān)察有無(wú)紫色桿菌素的誘導(dǎo)。結(jié)果如表8所示。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>+:確認(rèn)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。-:確認(rèn)沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。對(duì)照例的死亡率為60%,比較例19的試驗(yàn)組的死亡率為43%,死亡的豬可觀(guān)察到眼瞼浮腫和斜頸等浮腫病的病相。未死亡的豬也呈現(xiàn)出沒(méi)有精神、皮毛粗硬。實(shí)施例19和20的喂食了含有蘇云金芽胞桿菌的有害菌防除劑的豬的死亡率在10%以下。此外,實(shí)施例19和20的豬的小腸內(nèi)容物中E.coli的增殖被抑制。此外,細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的誘導(dǎo)也被抑制。據(jù)此可知,通過(guò)向豬喂食本發(fā)明的含有蘇云金芽胞桿菌孢子的有害菌防除劑,可以預(yù)防、治療浮腫病感染。(10)對(duì)于仔牛的沙門(mén)氏菌攻擊試驗(yàn)將8頭出生1周的公仔牛(Holstein種)作為一組進(jìn)行飼養(yǎng)。在仔牛用混合飼料($,夕&乂4卜,(株式會(huì)社)科學(xué)飼料研究所制造)中分別添加2.0質(zhì)量%制造例1及3的有害菌防除劑,作為實(shí)施例21和22,將添加有2.0質(zhì)量。/。的比較制造例1的組合物作為比較例20。喂食這些仔牛用混合飼料至4周大。2周大時(shí),對(duì)所有牛每1頭投經(jīng)口喂食8.9X105的鼠傷寒沙門(mén)氏菌(Salmonellatyphimurium,ST)。ST使用從北九州的酪農(nóng)家的農(nóng)場(chǎng)腹瀉發(fā)病的牛的新鮮糞便中分離的菌株。詞養(yǎng)至4周大,算出各組仔牛的死亡率。此外,采取小腸內(nèi)容物,以如下方法測(cè)定ST的生菌數(shù)。在小腸內(nèi)容物lg加入滅菌磷酸緩沖生理鹽水稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用滅菌生理鹽水將試料原液階段稀釋至10倍。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹0.1ml在SS瓊脂平板培養(yǎng)基"二'7^4"(日水制藥株式會(huì)社制造)以及亮綠瓊脂平板培養(yǎng)基(DifcoLaboratories制造)上,37'C培養(yǎng)24小時(shí),測(cè)定各平板培養(yǎng)基中生育的典型的ST的菌落數(shù)。接著,由菌落釣菌,接種至賴(lài)氨酸脫碳酸試驗(yàn)用SIM瓊脂培養(yǎng)基"二'7》4"(日水制藥株式會(huì)社制造)以及TSI瓊脂培養(yǎng)基"二'74"(日水制藥株式會(huì)社制造),37'C培養(yǎng)24小時(shí),確認(rèn)性狀。接著,將菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg小腸內(nèi)容物的ST生菌數(shù)。此外,為了調(diào)査小腸內(nèi)容物中有無(wú)高絲氨酸內(nèi)酯,使用與(8)相同的方法,使用CV026株觀(guān)察有無(wú)紫色桿菌素的誘導(dǎo)。結(jié)果如表9所示。表9<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>對(duì)照例的死亡率為50%,比較例20的試驗(yàn)組的死亡率為50%,死亡的牛可觀(guān)察到黃褐色泥狀便、粘血便至脫水、無(wú)法哺乳起立等病相。未死亡的牛也出現(xiàn)腹瀉。喂食了實(shí)施例21和22的有害菌防除劑的牛的死亡率較低,在12.5%以下,特別是喂食了實(shí)施例22的有害菌防除劑的牛的死亡率為0%。此外,實(shí)施例21和22的仔牛的小腸內(nèi)容物中ST的增殖被抑審U。此外,細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的誘導(dǎo)也被抑制。據(jù)此可知,通過(guò)給牛喂食本發(fā)明的含有蘇云金芽胞桿菌孢子的有害菌防除劑,可以預(yù)防、治療ST感染。(11)對(duì)于雛雞的梭菌攻擊試驗(yàn)。將混合有相對(duì)于雛雞的飼料(SDBroiler前期用,日本配合詞料株式會(huì)社制造,未添加抗菌性物質(zhì)的飼料)總質(zhì)量為0.2質(zhì)量%的制造例1~4的有害菌防除劑的詞料,分別作為實(shí)施例23~26。將12只雌的源自Broiler種雞(品牌f^>*一)的雞蛋孵化的雞的雛雞作為一組,對(duì)12組喂食實(shí)施例23~26的飼料14天。另一方面,將混合有0.2質(zhì)量%的比較制造例1以及2的組合物的飼料作為比較例21以及22,相同地喂食6組。此外,將混合有0.2質(zhì)量%的乳糖以替代有害菌防除劑的飼料作為對(duì)照例,相同地喂食3組。對(duì)于7天大的各組,每只經(jīng)口喂食1.0X106CFU、1.0X107CFU、1.0X1()8CFU的產(chǎn)氣莢膜梭菌(CP),14天大時(shí)用棉棒擦拭盲腸內(nèi)容物和總排泄腔采糞。通過(guò)以下方法測(cè)定盲腸內(nèi)容物的CP生菌數(shù),算出感染指數(shù)以及防御指數(shù)。在盲腸內(nèi)容物lg加入滅菌磷酸緩沖生理鹽水稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用滅菌生理鹽水將試料原液階段稀釋至10倍,得到階段稀釋液。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹O.lml在測(cè)定梭菌用培養(yǎng)基(日水制藥株式會(huì)社制造),用7卑口A、;/夕亇乂年35'C厭氧培養(yǎng)24小時(shí),測(cè)定各平板培養(yǎng)基中生育的黑色菌落數(shù)。接著,由菌落釣菌,接種至加蛋黃CW瓊脂培養(yǎng)基(日水制藥柱式會(huì)社制造),35'C下需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)2448小時(shí),確認(rèn)性狀。將其中確認(rèn)為CP的菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg盲腸內(nèi)容物的CP生菌數(shù)。以此結(jié)果為基礎(chǔ),如下算出感染指數(shù)以及防御指數(shù)。感染指數(shù)各個(gè)體的盲腸內(nèi)CP生菌數(shù)的對(duì)數(shù)的平均值(1ogCFU/g的平均數(shù))防御指數(shù)對(duì)照組的感染指數(shù)/各試驗(yàn)組的感染指數(shù)關(guān)于采自總排泄腔的糞,通過(guò)以下方法,通過(guò)每個(gè)個(gè)體進(jìn)行定性培養(yǎng),觀(guān)察CP的性狀。即,將棉棒上附著的糞懸濁于10ml的滅菌磷酸緩沖生理鹽水,作為試料原液后,將其各自涂抹0.1ml在測(cè)定梭菌用培養(yǎng)基上,用7氺口八°、乂夕少35'C厭氧培養(yǎng)24小時(shí),判斷各平板培養(yǎng)基有無(wú)形成生育的黑色菌落,由菌落釣菌,接種至加蛋黃CW瓊脂培養(yǎng)基,35°C需氧培養(yǎng)和厭氧培養(yǎng)24~48小時(shí),確認(rèn)性狀,確認(rèn)各個(gè)體的總排泄腔是否檢測(cè)出CP的菌落。此外,測(cè)定飼養(yǎng)期間的糞中的添加芽孢桿菌的菌體濃度,算出各自的平均濃度。喂食1.0X106CFU的結(jié)果如表10、喂食1.0X107CFU的結(jié)果如表11、喂食1.0X108CFU的結(jié)果如表12所示。[表10]表10<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>[表12]表12<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>從喂食了含有實(shí)施例23~26的蘇云金芽胞桿菌的本發(fā)明飼料的雛雞的糞便,檢測(cè)出了1.5X107CFU/g(克生雞糞)以上的添加芽胞桿菌,較之于比較例生菌數(shù)明顯增加。此外,CP的喂食菌數(shù)為1.0Xl(^CFU/g時(shí),CP的感染指數(shù)極低,可得到較高的防御指數(shù),但CP的喂食菌數(shù)為1.0X10kFU/g時(shí),增殖抑制效果下降。另夕卜,CP的喂食菌數(shù)為1.0X108CFU/g時(shí),增殖抑制效果不夠充分。喂食了比較例21和22的飼料的雛雞,CP的喂食菌數(shù)較少時(shí),與對(duì)照例相比,僅微量抑制CP增殖。據(jù)此顯示,攝取含有本發(fā)明的有害菌防除劑的飼料時(shí),蘇云金芽胞桿菌不會(huì)在胃和腸的消化道內(nèi)殺滅,在腸內(nèi)形成菌落。此外,CP的喂食菌數(shù)少于蘇云金芽胞桿菌的盲腸內(nèi)容物每lg的生菌數(shù)時(shí),特別是抑制CP增殖的效果優(yōu)異。這樣,蘇云金芽胞桿菌可在腸內(nèi)形成菌落,競(jìng)爭(zhēng)排除CP。(12)對(duì)于仔牛的梭菌攻擊試驗(yàn)將8頭出生1周的公仔牛(Holstein種)作為一群進(jìn)行飼養(yǎng)。在仔牛用混合詞料($,夕A乂<卜,(株式會(huì)社)科學(xué)飼料研究所制造)中分別添加2.0質(zhì)量%制造例2及3的有害菌防除劑,作為實(shí)施例27和28,將添加有2.0質(zhì)量%的比較制造例1的組合物作為比較例23。此外,將添加有等量的乳糖代替有害菌防除劑的作為對(duì)照例。喂食這些仔牛用混合飼料至4周大。2周大時(shí),所有牛每頭經(jīng)口喂食3.1X107的Clostridiumperfringens(CP)。詞養(yǎng)至4周大,算出各組仔牛的死亡率。此外,采取小腸內(nèi)容物,以上述相同方法測(cè)定CP的生菌數(shù),算出感染指數(shù)以及防御指數(shù)。結(jié)果如表13所示。[表13]表13<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>-對(duì)照例的死亡率為38%,比較例23的試驗(yàn)組的死亡率為25%,但喂食了實(shí)施例27和28的飼料的試驗(yàn)群的死亡率為0%。此外,喂食了實(shí)施例27和28的牛的CP感染指數(shù)低、防御指數(shù)高。據(jù)此可知,通過(guò)攝取含有本發(fā)明的有害菌防除劑的飼料,可以預(yù)防、治療牛的CP感染癥。(13)對(duì)于仔豬的梭菌攻擊試驗(yàn)將25頭出生3周的公仔豬(大約克夏種)作為一組進(jìn)行飼養(yǎng)。將混合有相對(duì)于仔豬用混合飼料(SD仔豬人工乳前期用,日本配合詞料株式會(huì)社制造,未添加抗菌性物質(zhì)的飼料)總質(zhì)量為0.5質(zhì)量%的制造例2及3的有害菌防除劑的飼料,分別作為實(shí)施例29和30,喂食至6周大。此外,將混合有比較制造例1的組合物的詞料作為比較例24,將混合有乳糖代替有害菌防除劑的飼料作為對(duì)照例,相同地喂食仔豬。4周大時(shí),所有豬每頭經(jīng)口喂食1.8X107的Clostridiumperfringens(CP)。飼養(yǎng)至6周大,算出各組仔豬的死亡率。此外,采取小腸內(nèi)容物,以上述相同方法測(cè)定小腸內(nèi)容物的生菌數(shù),算出感染指數(shù)以及防御指數(shù)。結(jié)果如表14所示。表14<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>對(duì)照例的死亡率為60%,喂食了比較例24的飼料的試驗(yàn)組的死亡率為48%,但喂食了實(shí)施例29的飼料的試驗(yàn)組的死亡率為12%,喂食了實(shí)施例30的飼料的試驗(yàn)組的死亡率為8%。喂食了實(shí)施例29和30的飼料的試驗(yàn)組的CP感染指數(shù)極低、防御指數(shù)較高。據(jù)此可知,通過(guò)攝取含有本發(fā)明的有害菌防除劑的詞料,可以預(yù)防、治療豬的CP感染癥。(14)有害菌防除劑的制造使用與(3)相同的孢子形成培養(yǎng)基,將BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7各自在37r下液體培養(yǎng)72小時(shí)。將得到的培養(yǎng)液離心分離,收集菌體。加入滅菌水,令孢子密度為lX109CFU/ml,制造有害菌防除劑,分別作為實(shí)施例3134。孢子密度通過(guò)將制造的有害菌防除劑用滅菌水稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛?,通過(guò)70'C中加熱30分鐘僅殺滅營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,然后接種至普通瓊脂培養(yǎng)基,通過(guò)計(jì)數(shù)所形成的菌落而測(cè)定。另一方面,使用凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)NBRC12583株以及枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株,與上述相同制造的組合物,各自作為比較例25和26。(15)大鼠飼養(yǎng)試驗(yàn)將SD大鼠(Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社、雄性、導(dǎo)入時(shí)120g)以飼養(yǎng)溫度23'C、自由給水、自由喂食實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用飼料MF(Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品),進(jìn)行1周的預(yù)備飼養(yǎng),確認(rèn)外觀(guān)和行為無(wú)異常。接著,用滅菌水稀釋實(shí)施例31的孢子懸濁液,調(diào)制有害菌防除劑,令孢子濃度分別為1X106CFU/ml、lX107CFU/ml、以及1X108CFU/ml。將10只大鼠作為一組,使用胃探針,以1天1次、每只lml經(jīng)口喂食實(shí)施例31的各濃度的有害菌防除劑。同樣地,對(duì)于含有實(shí)施例32~34的孢子懸濁液的有害菌防除劑、含有比較例25和26的孢子懸濁液的組合物也進(jìn)行試驗(yàn)。此外,以含有滅菌水替代孢子懸濁液的組合物作為對(duì)照例,相同地進(jìn)行試驗(yàn)。3周后測(cè)定各組的大鼠的體重,算出各組的增加體重的平均值。此外,采取l天的糞便,測(cè)定添加菌的菌體濃度,算出各自的平均濃度。結(jié)果如表15和16所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>[表16]表16<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>試驗(yàn)期中,所有喂食組均未出現(xiàn)死亡、生病、腹瀉等異常變化。此外,喂食了含有實(shí)施例31~34的蘇云金芽胞桿菌孢子的有害菌防除劑的大鼠,較之于喂食了比較例25和26的組合物的大鼠,體重增加大。此外,從喂食了實(shí)施例3134的有害菌防除劑的大鼠的糞便檢測(cè)出了,6.5X10kFU/只/日以上的添加菌,較之于比較例,菌數(shù)明顯增加。另外,通過(guò)提高喂食的菌體濃度,大鼠的體重增加變大。據(jù)此顯示,本發(fā)明的蘇云金芽胞桿菌的孢子沒(méi)有在大鼠的胃和腸的消化道內(nèi)殺滅,在腸內(nèi)形成菌落,促進(jìn)大鼠的體重增加。(16)對(duì)于沙門(mén)氏菌的感染的防御試驗(yàn)將7周大的SPF小鼠(BALB/c,Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社、雄性)以詞養(yǎng)溫度23'C、自由給水、自由喂食實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用飼料MF(Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品),進(jìn)行1周的預(yù)備詞養(yǎng),確認(rèn)外觀(guān)和行為無(wú)異常。將10只小鼠作為一組,使用胃探針,以1天1次、每只100W經(jīng)口喂食含有實(shí)施例31的孢子懸濁液的有害菌防除劑。同樣地,對(duì)于含有實(shí)施例32~34的孢子懸濁液的有害菌防除劑、含有比較例25和26的孢子懸濁液的組合物也進(jìn)行試驗(yàn)。此外,以含有滅菌水替代孢子懸濁液的組合物作為對(duì)照例,相同地進(jìn)行試驗(yàn)。在喂食孢子懸濁液開(kāi)始后第7天使用胃探針,以每只1.4X104經(jīng)口喂食SalmonellaTyphimurium(ST)。在ST經(jīng)口喂食的第14天采取盲腸內(nèi)容物。ST的生菌數(shù)以如下方法測(cè)定。在盲腸內(nèi)容物lg加入滅菌磷酸緩沖生理鹽水稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用滅菌生理鹽水將試料原液階段稀釋至10倍。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹0.1ml在SS瓊脂平板培養(yǎng)基"二'爿》^"(日水制藥株式會(huì)社制造)以及亮綠瓊脂平板培養(yǎng)基(DifcoLabomtories制造)上,37'C培養(yǎng)24小時(shí),測(cè)定各平板培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的典型的ST的菌落數(shù)。接著,由菌落釣菌,接種至賴(lài)氨酸脫碳酸試驗(yàn)用SIM瓊脂培養(yǎng)基"二'7^<"(日水制藥柱式會(huì)社制造)以及TSI瓊脂培養(yǎng)基"二'7》4"(日水制藥株式會(huì)社制造),37'C培養(yǎng)24小時(shí),確認(rèn)性狀。將確認(rèn)為ST的菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg糞便的ST生菌數(shù)。此外,調(diào)査盲腸內(nèi)容物中有無(wú)高絲氨酸內(nèi)酯。使用與上述(8)相同的方法,將盲腸內(nèi)容物的萃取物滴在重疊有CV026的LB培養(yǎng)基的表面,培養(yǎng)后觀(guān)察滴下的周邊有無(wú)紫色桿菌素的誘導(dǎo)。結(jié)果如表17所示。[表17]表17<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>+:確認(rèn)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。-:確認(rèn)沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。喂食了含有實(shí)施例31-34的蘇云金芽胞桿菌的孢子的本發(fā)明的有害菌防除劑的小鼠,較之于喂食了比較例25和26的組合物的小鼠,盲腸內(nèi)容物的ST的生菌數(shù)極低,脾臟、腸間膜淋巴結(jié)完全沒(méi)有形成小肉芽腫、盲腸的炎癥性變。喂食了比較例的組合物的小鼠,較之于對(duì)照例,僅微量抑制了ST的增殖,脾臟、腸間膜淋巴結(jié)出現(xiàn)了形成小肉芽腫、盲腸的炎癥性變。據(jù)此顯示,通過(guò)喂食蘇云金芽胞桿菌的孢子,抑制了ST的增殖,抑制了細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的發(fā)現(xiàn)。即,通過(guò)喂食蘇云金芽胞桿菌的孢子,可以得到預(yù)防、治療ST引起的腸內(nèi)感染癥的效果。(17)對(duì)于弧菌的感染的防御試驗(yàn)與上述(16)的試驗(yàn)相同,將7周大的SPF小鼠(ICR,Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社、雄性)進(jìn)行預(yù)備飼養(yǎng),確認(rèn)外觀(guān)和行為無(wú)異常。將10只小鼠作為一群,使用胃探針,以l天1次、每只100pl經(jīng)口喂食含有實(shí)施例31的孢子懸濁液的有害菌防除劑。同樣地,對(duì)于含有實(shí)施例32~34的孢子懸濁液的有害菌防除劑、含有比較例25和26的孢子懸濁液的組合物也進(jìn)行試驗(yàn)。此外,以含有滅菌水替代孢子懸濁液的組合物作為對(duì)照例,相同地進(jìn)行試驗(yàn)。在孢子懸濁液喂食開(kāi)始后第7天使用胃探針,以每只2.1乂107經(jīng)口喂食副溶血弧菌(VP)。在VP經(jīng)口喂食的第14天采取小腸內(nèi)容物。VP的生菌數(shù)以如下方法測(cè)定。在小腸內(nèi)容物lg加入食鹽多粘菌素肉湯"二'7^4"(日水制藥株式會(huì)社制造)稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用食鹽多粘菌素細(xì)菌培養(yǎng)基將試料原液階段稀釋至10倍。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹0.1ml在TCBS瓊脂培養(yǎng)基"二'7^<"(日水制藥株式會(huì)社制造),37'C培養(yǎng)18小時(shí),測(cè)定各平板培養(yǎng)基生長(zhǎng)的典型的VP的菌落數(shù)。將菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg小腸內(nèi)容物的VP生菌數(shù)。此外,調(diào)査小腸內(nèi)容物中有無(wú)高絲氨酸內(nèi)酯。使用與上述(8)相同的方法,將小腸內(nèi)容物的萃取物滴在重疊有CV026的LB培養(yǎng)基的表面,培養(yǎng)后觀(guān)察滴下的周邊有無(wú)紫色桿菌素的誘導(dǎo)。<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>+,確認(rèn)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。-:確認(rèn)沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。喂食了含有實(shí)施例31~34的蘇云金芽胞桿菌的孢子的本發(fā)明的有害菌防除劑的小鼠,小腸內(nèi)容物的VP的生菌數(shù)極低,幾乎沒(méi)有出現(xiàn)小腸脹滿(mǎn)和腸內(nèi)容物充滿(mǎn)。另一方面,喂食了比較例25和26的細(xì)菌的小鼠,較之于對(duì)照例,僅微量抑制了VP的增殖,小腸變紅脹滿(mǎn),腸內(nèi)容物充滿(mǎn)。此外,對(duì)照例中,小腸變紅脹滿(mǎn),腸內(nèi)容物充滿(mǎn)。據(jù)此顯示,通過(guò)喂食蘇云金芽胞桿菌的孢子,抑制了VP的增殖,抑制了細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的表達(dá)。B卩,通過(guò)喂食蘇云金芽胞桿菌的孢子,可以得到預(yù)防、治療VP引起的腸內(nèi)感染癥的效果。(18)對(duì)于空腸彎曲桿菌的感染的防御試驗(yàn)與上述(16)的試驗(yàn)相同,將7周大的SPF小鼠(BALB/c,Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社、雄性)進(jìn)行預(yù)備飼養(yǎng),確認(rèn)外觀(guān)和行為無(wú)異常。將10只小鼠作為一組,使用胃探針,以l天1次、每只100pl經(jīng)口喂食含有實(shí)施例31的孢子懸濁液的有害菌防除劑。同樣地,對(duì)于含有實(shí)施例32~34的孢子懸濁液的有害菌防除劑、含有比較例25和26的孢子懸濁液的組合物也進(jìn)行試驗(yàn)。此外,以含有滅菌水替代孢子懸濁液的組合物作為對(duì)照例,相同地進(jìn)行試驗(yàn)o在孢子懸濁液喂食開(kāi)始后第7天使用胃探針,以每只1.7X10經(jīng)口喂食Campylobacterjejuni(CJ)。在CJ經(jīng)口喂食的第14天采取小腸內(nèi)容物。CJ的生菌數(shù)以如下方法測(cè)定。在小腸內(nèi)容物lg中加入滅菌磷酸緩沖生理鹽水稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用滅菌生理鹽水將試料原液階段稀釋至10倍。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹0.1ml在改良Skirrow氏培養(yǎng)基(日水制藥株式會(huì)社制造),使用7木口/^;/夕*、>匕°口(三菱gas化學(xué)株式會(huì)社制造),在微需氧條件下42"C培養(yǎng)23天,測(cè)定各平板培養(yǎng)基生長(zhǎng)的典型的CJ的菌落數(shù)。將認(rèn)定為CJ的菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg小腸內(nèi)容物的CJ生菌數(shù)。此外,調(diào)査小腸內(nèi)容物中有無(wú)高絲氨酸內(nèi)酯。使用與上述(8)相同的方法,將小腸內(nèi)容物的萃取物滴在重疊有CV026的LB培養(yǎng)基的表面,培養(yǎng)后觀(guān)察滴下的周邊有無(wú)紫色桿菌素的誘導(dǎo)。結(jié)果如表19所示。[表19]表19<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>+:確認(rèn)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。-:確認(rèn)沒(méi)有紫色桿菌素的誘導(dǎo)。喂食了含有實(shí)施例31~34的蘇云金芽孢桿菌的孢子的本發(fā)明的有害菌防除劑的小鼠,小腸內(nèi)容物的VP的生菌數(shù)極低,沒(méi)有在小腸的腸粘膜發(fā)現(xiàn)浮腫和出血性病變。另一方面,喂食了比較例25和26的細(xì)菌的小鼠,較之于對(duì)照例,僅微量抑制了CJ的增殖,小腸的腸粘膜出現(xiàn)了浮腫和出血性病變。此外,對(duì)照例中在小腸的腸粘膜出現(xiàn)了浮腫和出血性病變。據(jù)此顯示,通過(guò)喂食蘇云金芽孢桿菌的孢子,抑制了CJ的增殖,抑制了細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子的表達(dá)。g卩,通過(guò)喂食蘇云金芽孢桿菌的孢子,可以得到預(yù)防、治療CJ引起的腸內(nèi)感染癥的效果。(19)對(duì)于小鼠的芽孢桿菌攻擊試驗(yàn)將7周大的SPF小鼠(ICR,Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社、雄性)以飼養(yǎng)溫度23'C、自由給水、自由喂食實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用飼料MF(Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品),進(jìn)行1周的預(yù)備飼養(yǎng),確認(rèn)外觀(guān)和行為無(wú)異常。將10只作為一組,使用胃探針,以1天1次、每只100pl經(jīng)口喂食含有實(shí)施例31的有害菌防除劑,喂食21天。同樣地,對(duì)于含有實(shí)施例32~34的有害菌防除劑、含有比較例25和26的組合物也進(jìn)行試驗(yàn)。此外,以含有滅菌水替代孢子懸濁液的組合物作為對(duì)照例,相同地進(jìn)行試驗(yàn)。在孢子懸濁液喂食開(kāi)始后第7天使用胃探針,以每只100nl、經(jīng)口喂食1.0X108CFU的Bacilluscereus(BC)的卡那霉素耐受性變異株(BCKm株)。BCKm株通過(guò)如下方法制作。SP,使用肉湯培養(yǎng)基(日水制藥株式會(huì)社制造)37。C下培養(yǎng)BC16小時(shí)。4'C離心集菌后,用滅菌水洗凈一次后再懸濁于滅菌水。距離UV燈20cm照射紫外線(xiàn)后,懸濁于肉湯培養(yǎng)基中37'C培養(yǎng)4小時(shí)。在普通瓊脂培養(yǎng)基(日水制藥株式會(huì)社制造)中添加了200ppm的卡那霉素硫酸鹽(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社制造)的培養(yǎng)基(NAKm)中涂抹培養(yǎng)液0.1^1,37'C培養(yǎng)。培養(yǎng)后,萃取形成于NAKm的菌落,作為BCKm株。在BCKm(以下稱(chēng)為BC)經(jīng)口喂食的第14天算出各組的死亡率。此外,采取大腸內(nèi)容物,以如下方法測(cè)定大腸內(nèi)容物中的BC生菌數(shù)。在大腸內(nèi)容物lg中加入滅菌磷酸緩沖生理鹽水稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用滅菌生理鹽水將試料原液階段稀釋至10倍,作為階段稀釋液。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹O.lml在添加了200ppm的卡那霉素硫酸鹽(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社制造)的加蛋黃NGKG瓊脂培養(yǎng)基(日水制藥株式會(huì)社制造),30'C培養(yǎng)18小時(shí),測(cè)定各平板培養(yǎng)基生長(zhǎng)的典型的BC的菌落數(shù)。將確認(rèn)為BC的菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg大腸內(nèi)容物的BC生菌數(shù)。以此結(jié)果為基礎(chǔ),如下算出感染指數(shù)以及防御指數(shù)。感染指數(shù)各個(gè)體的大腸內(nèi)BC生菌數(shù)的對(duì)數(shù)的平均值UogCFU/g的平均數(shù))防御指數(shù)對(duì)照組的感染指數(shù)/各試驗(yàn)群的感染指數(shù)結(jié)果如表20所示。表20<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>實(shí)施例、比較例、對(duì)照例的試驗(yàn)組中,死亡率均為0%。喂食了實(shí)施例3134的有害菌防除劑的試驗(yàn)組,較之于喂食了比較例的組合物的試驗(yàn)群,BC的感染指數(shù)低,防御指數(shù)高。據(jù)此顯示,本發(fā)明的有害菌防除劑具備預(yù)防、治療BC引起的腸內(nèi)感染癥的效果。(20)對(duì)于小鼠的葡萄球菌攻擊試驗(yàn)與上述(19)相同地,將7周大的SPF小鼠(ICR,Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社、雄性)進(jìn)行預(yù)備飼養(yǎng),確認(rèn)外觀(guān)和行為無(wú)異常。以井田等的下述方法,令金黃色葡萄球菌(SA)停留在小鼠的腸道(井田孝志、田村淳、河原條勝己、嶋田甚五郎、Chemother叩y、42、pp.923-930(1994))。首先,對(duì)所有的小鼠,使用胃探針,以1天1次、每只100pl經(jīng)口喂食氨芐青霉素鈉(和光純藥工業(yè)株式會(huì)社制造)的10mg/ml水溶液,在3天前喂食。氨芐青霉素鈉喂食結(jié)束的翌日,將10只作為一組,使用胃探針,以每只100pl經(jīng)口喂食在實(shí)施例31的有害菌防除劑中加入了5.0X1(fCFU的SA的組合物。氨芐青霉素鈉喂食結(jié)束的第2天起,使用胃探針,以1天1次、100pl經(jīng)口喂食實(shí)施例31的有害菌防除劑,喂食13天。此外,同樣經(jīng)口喂食實(shí)施例3234的有害菌防除劑、比較例25和26的組合物、以及滅菌水替代孢子懸濁液制造的對(duì)照例的組合物,進(jìn)行試驗(yàn)。在SA經(jīng)口喂食的第14天算出各組的死亡率。此外,采取大腸內(nèi)容物,以如下方法測(cè)定大腸內(nèi)容物中的SA生菌數(shù)。在大腸內(nèi)容物lg中加入滅菌磷酸緩沖生理鹽水稀釋至10倍,充分混合得到試料原液。接著,用滅菌生理鹽水將試料原液階段稀釋至10倍,作為階段稀釋液。將試料原液和階段稀釋液各自涂抹O.lml在食鹽蛋瓊脂培養(yǎng)基"二'7^4"(日水制藥株式會(huì)社制造),37'C培養(yǎng)48小時(shí),測(cè)定各平板培養(yǎng)基生長(zhǎng)的典型的SA的菌落數(shù)。將確認(rèn)為SA的菌落數(shù)乘以稀釋液的稀釋倍率,算出每lg大腸內(nèi)容物的SA生菌數(shù)。以此結(jié)果為基礎(chǔ),如下算出感染指數(shù)以及防御指數(shù)。感染指數(shù)各個(gè)體的大腸內(nèi)SA生菌數(shù)的對(duì)數(shù)的平均值(1ogCFU/g的平均數(shù))防御指數(shù)對(duì)照組的感染指數(shù)/各試驗(yàn)群的感染指數(shù)結(jié)果如表21所示。表21<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>實(shí)施例、比較例、對(duì)照例的試驗(yàn)組中,死亡率均為0%。喂食了實(shí)施例3134的有害菌防除劑的試驗(yàn)組,較之于喂食了比較例的組合物的試驗(yàn)組,SA的感染指數(shù)低,防御指數(shù)高。據(jù)此顯示,本發(fā)明的有害菌防除劑具備預(yù)防、治療SA引起的腸內(nèi)感染癥的效果。(21)對(duì)于小鼠的鏈球菌攻擊試驗(yàn)與上述(19)相同地,將7周大的SPF小鼠(ICR,Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社、雄性)進(jìn)行預(yù)備飼養(yǎng),確認(rèn)外觀(guān)和行為無(wú)異常。將實(shí)施例31的有害菌防除劑裝入給水器,以10只為一組,自由給水飼養(yǎng)21天。每天更換給水器,同時(shí)更換新鮮的有害菌防除劑(孢子懸濁液)。同樣喂食實(shí)施例32~34的有害菌防除劑、比較例25和26的組合物。此外,用含有滅菌水的組合物替代孢子懸濁液作為對(duì)照例,同樣進(jìn)行喂食。在開(kāi)始喂食孢子懸濁液的第7天,用棉棒沾lO(Hd的已滅菌的1.1X1()SCFU的豬鏈球菌(SS),在小鼠的口腔內(nèi)慢慢轉(zhuǎn)動(dòng)30秒,以此經(jīng)口喂食。喂食SS后,每天觀(guān)察,算出確認(rèn)有斜頸、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)等神經(jīng)癥狀的個(gè)體以及死亡個(gè)體的比例。此外,從死亡個(gè)體立即進(jìn)行無(wú)菌心臟采血,同時(shí)無(wú)菌采取肺、肝臟、脾臟、腎臟、以及腦髓液。再使用滅菌棉棒采取咽喉部組織。同樣從喂食SS后第14天生存著的剩余小鼠采取各組織。對(duì)于這些組織,在采取后立即用Todd—Hweitt肉湯培養(yǎng)基(Oxoid制造),37'C培養(yǎng)24小時(shí)。將確認(rèn)己增殖的培養(yǎng)基再接種到添加了5體積%羊血的心浸液肉湯(八一卜,y匕乂)瓊脂培養(yǎng)基(日水制藥株式會(huì)社制造),37'C培養(yǎng)2448小時(shí),確認(rèn)性狀。將確認(rèn)了SS的組織判定為陽(yáng)性,算出每個(gè)組織判斷為陽(yáng)性的個(gè)體的比例,作為SS陽(yáng)性率。此外,將腦用10%緩沖福爾馬林液固定后,根據(jù)一般的方法,制作石蠟切片,進(jìn)行蘇木素伊紅染色,通過(guò)研究組織所見(jiàn),算出髓膜炎的發(fā)病率。結(jié)果如表22所示。表22<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>實(shí)施例31和33的試驗(yàn)組的死亡率低至20%。此外,實(shí)施例32和34的試驗(yàn)組的死亡率為30%。各組的SS陽(yáng)性率根據(jù)組織不同而不同,但實(shí)施例31和33的試驗(yàn)組的所有組織的SS陽(yáng)性率均低至20。/。。此外,實(shí)施例32的試驗(yàn)組中的肝臟及脾臟的SS陽(yáng)性率低至20n/。,其他為30%。此外,實(shí)施例34的試驗(yàn)組中,各組織的SS陽(yáng)性率稍高,為30%。另一方面,比較例的試驗(yàn)組中,各組織的SS陽(yáng)性率高達(dá)40~50%,與對(duì)照例相比,僅微量抑制了SS感染。此外,實(shí)施例3134的試驗(yàn)組中,髓膜炎的發(fā)病率為20~30%,低于比較例的試驗(yàn)組。據(jù)此可知,通過(guò)喂食本發(fā)明的有害菌防除劑,可以預(yù)防,治療SS引起的感染癥,降低神經(jīng)障礙和髓膜炎的發(fā)病率。(22)含有蘇云金芽胞桿菌的藥品(A)軟膏劑使用(3)記載的孢子形成培養(yǎng)基,將蘇云金芽胞桿菌BGSC4A3、BGSC4D1、BGSC4J4以及BGSC4Q7在37'C下液體培養(yǎng)72小時(shí)。將得到的培養(yǎng)液離心分離,收集菌體。將得到的菌體凍結(jié)干燥后粉碎,加入D(+)海藻糖二水合物(試劑特級(jí)、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品),令孢子密度為lX109CFU/g。加入lg如此得到的含有蘇云金芽胞桿菌細(xì)菌孢子的海藻糖與5g加溫至60。C的聚乙烯樹(shù)脂'流動(dòng)石蠟軟膏(產(chǎn)品名7',》千《一^、大正制藥制造),充分混合,再加入聚乙烯樹(shù)脂*流動(dòng)石蠟軟膏,合成總量100g后,均勻揉合得到軟膏劑,分別作為實(shí)施例35~38。實(shí)施例35~38的軟膏劑的孢子密度各自為1.1X107CFU/g、1.2X107CFU/g、1.0X107CFU/g、以及1.1X107CFU/g。孢子密度通過(guò)將軟膏用含有0.1質(zhì)量%Tween80(Tween80、注冊(cè)商標(biāo))的滅菌水稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛?,通過(guò)70'C加熱30分鐘僅殺滅營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,然后接種至普通瓊脂培養(yǎng)基,計(jì)數(shù)所形成的菌落而測(cè)定。另一方面,使用凝結(jié)芽孢桿菌(Bacilluscoagulans)NBRC12583株以及枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株,與上述相同地制造軟膏劑,各自作為比較例27和28。得到的比較例27和28的軟膏劑的孢子密度各自為1.0Xl(^CFU/g以及l(fā).lXl(^CFU/g。此外,使用未添加芽孢桿菌的D(+)海藻糖二水合物,與上述相同地制造軟膏劑,作為對(duì)照例。將SD大鼠(Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社、雄性、導(dǎo)入時(shí)120g)10只作為1組,對(duì)7組,以飼養(yǎng)溫度23。C、自由給水、自由喂食實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用飼料MF(Oriental酵母工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品),進(jìn)行l(wèi)周的預(yù)備飼養(yǎng),確認(rèn)外觀(guān)和行為無(wú)異常。用戊巴比妥對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉,對(duì)右大腿除毛后固定在固定臺(tái)上,在一次性注射器的底部(直徑16mm)連續(xù)進(jìn)行6天、每天6小時(shí)的壓迫(壓力1.0kg/cm2)。在注射器底部和大鼠的大腿之間加入硅的薄墊片。壓迫試驗(yàn)結(jié)束后,以每天100mg將上述得到的實(shí)施例、比較例和對(duì)照例的軟膏劑涂至各組的褥瘡部位,對(duì)各個(gè)軟膏劑進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)。藥效評(píng)價(jià)通過(guò)肉眼觀(guān)察和病理組織學(xué)觀(guān)察進(jìn)行。肉眼觀(guān)察通過(guò)用游尺測(cè)定褥瘡部分的長(zhǎng)徑和短徑,測(cè)定經(jīng)過(guò)天數(shù)的褥瘡部分的面積變化和治療天數(shù)而進(jìn)行。首先,以褥瘡制作第2天的褥瘡部分的長(zhǎng)徑和短徑的積作為100%,用下式算出與此相對(duì)的第3天以后的長(zhǎng)徑和短徑的積的比率(面積比)。面積比(%)=(褥瘡部分的長(zhǎng)徑X短徑[觀(guān)測(cè)日])X100/(褥瘡部分的長(zhǎng)徑X短徑[褥瘡制作第2天])將該面積比y與經(jīng)過(guò)天數(shù)x進(jìn)行繪圖,得到曲線(xiàn)f(x),通過(guò)下式求得<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>所表示區(qū)域的大致面積,作為治愈經(jīng)過(guò)的指標(biāo)。即,在褥瘡部分變小為止,天數(shù)越多,治愈經(jīng)過(guò)的指數(shù)越大。[數(shù)l]is面積比[第n天]+面積比[第n+1天]治愈經(jīng)過(guò)指標(biāo)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage43</formula>此外,將褥瘡部分形成上皮、完成治愈所需天數(shù)作為治愈天數(shù)。結(jié)果如表23所示。表23<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>根據(jù)表23,涂抹了實(shí)施例3538的軟膏劑,較之于涂抹比較例27和28的軟膏劑,治愈天數(shù)短。此外,治愈經(jīng)過(guò)指數(shù)也小,可盡早得到較高的治愈率。此外,開(kāi)始涂抹軟膏劑第5天和第10天摘取褥瘡部位的皮膚,用10%中性緩沖福爾馬林液固定后,根據(jù)一般方法制作石蠟切片,進(jìn)行蘇木素伊紅染色,進(jìn)行病理組織學(xué)觀(guān)察。病理組織學(xué)觀(guān)察的結(jié)果發(fā)現(xiàn),涂抹了實(shí)施例35~38的軟膏劑的組,在開(kāi)始涂抹第5天,殘存的毛囊細(xì)胞長(zhǎng)出上皮組織,從邊緣出現(xiàn)痂皮剝離。再生上皮的下層,肉芽組織形成顯著,較之于比較例27和28,組織修復(fù)明顯。此外,在開(kāi)始涂抹第10天,從邊緣顯著出現(xiàn)上皮伸長(zhǎng),細(xì)胞濕潤(rùn)局限于上層,再生上皮也形成了纖維,逐漸治愈。另一方面,涂抹了比較例27和28的軟膏劑的褥瘡部分的邊緣,可確認(rèn)再生上皮覆蓋,缺損部分覆蓋有厚痂皮,上皮伸長(zhǎng)被抑制。其結(jié)果顯示,含有實(shí)施例35~38的蘇云金芽胞桿菌的軟膏劑具有促進(jìn)損傷治愈的效果。(B)整腸劑使用上述孢子形成培養(yǎng)基將蘇云金芽胞桿菌BGSC4D1在37'C下液體培養(yǎng)72小時(shí)。將得到的培養(yǎng)液離心分離,收集菌體。將得到的菌體凍結(jié)干燥后粉碎,加入D(+)海藻糖二水合物(試劑特級(jí)、和光純藥工業(yè)株式會(huì)社產(chǎn)品),令孢子密度為2X107CFU/g。將如此得到的含有蘇云金芽胞桿菌細(xì)菌孢子的50質(zhì)量份海藻糖與50質(zhì)量份的馬鈴薯淀粉混合,制成每片350mg的片劑,制造整腸劑,作為實(shí)施例39。實(shí)施例39的整腸劑的孢子密度為l.lX107CFU/g。孢子密度通過(guò)將整腸劑用滅菌水稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛?,通過(guò)7(TC加熱30分鐘僅殺滅營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,然后接種至普通瓊脂培養(yǎng)基,計(jì)數(shù)所形成的菌落而測(cè)定。另一方面,使用凝結(jié)芽孢桿菌NBRC12583株,與上述相同地制造整腸劑,作為比較例29。比較例29的整腸劑的孢子密度為1.2X107CFU/g。此外,使用未添加芽孢桿菌的D(+)海藻糖二水合物,與上述相同地制造組合組作為對(duì)照例。(a)軟便的改善試驗(yàn)以出現(xiàn)軟便的成人為對(duì)象,研究含有蘇云金芽胞桿菌的整腸劑對(duì)便性的影響。使11名40多歲的男性、以及7名50多歲的男性在早飯、午飯、以及晚飯后各攝取3片上述實(shí)施例39的整腸劑,攝取2周。接下來(lái)的2周攝取對(duì)照例的組合物。再接下來(lái)的2周攝取比較例29的整腸劑。攝取期開(kāi)始前的2周為非攝取期,對(duì)于非攝取期以及各攝取期的便性進(jìn)行問(wèn)巻調(diào)查。即根據(jù)下述評(píng)價(jià)記錄便的形狀和硬度。便的形狀1.水狀2.泥狀3.半捏合狀4.香蕉狀5.硬梆梆狀6.圓粒狀便的硬度1.非常軟2.軟3.—般4.硬5.非常硬結(jié)果如表24所示。表25<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table>攝取實(shí)施例39的整腸劑,對(duì)于排便次數(shù)、便的形狀、暢快感,得到了改善。另一方面,攝取了比較例29的整腸劑時(shí),排便次數(shù)、便的形狀、暢快感與對(duì)照例幾乎相同。以上結(jié)果表明,含有蘇云金芽胞桿菌的孢子的整腸劑可改善通便、便性。(23)含有蘇云金芽胞桿菌的食品使用上述孢子形成培養(yǎng)基將蘇云金芽胞桿菌BGSC4D1在37'C下液體培養(yǎng)24小時(shí)。用自來(lái)水以4'C浸漬極小大豆1晚,用壓力蒸煮鍋以121'C、30分鐘滅菌。對(duì)于如此調(diào)制的滅菌大豆,以上述芽孢桿菌培養(yǎng)液的1000倍稀釋液以每100g滅菌大豆植菌2ml,37°C下培養(yǎng)48小時(shí)。再進(jìn)行4'C、72小時(shí)的冷藏熟成,制成實(shí)施例40。孢子密度為2.9X109CFU/g。孢子密度通過(guò)在10g大豆培養(yǎng)物中加入90ml滅菌水,用高速攪拌器((株式會(huì)社)日本精機(jī)制作所制造)以10,000rpm進(jìn)行2分鐘高速攪拌后,再用滅菌水稀釋至適當(dāng)?shù)臐舛?,通過(guò)7(TC加熱30分鐘僅殺滅營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞,然后接種至普通瓊脂培養(yǎng)基,計(jì)數(shù)所形成的菌落而測(cè)定。使用枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)NBRC3009株,與上述相同地制造,作為比較例30。孢子密度為1.0X109CFU/g。此外,將未添加芽孢桿菌的滅菌大豆作為對(duì)照例。(a)軟便的改善試驗(yàn)以出現(xiàn)軟便的成人為對(duì)象,研究含有蘇云金芽胞桿菌的食品對(duì)便性的影響。使11名40多歲的男性、以及7名50多歲以每天100g攝取上述實(shí)施例40的食品,攝取2周。接下來(lái)的2周攝取對(duì)照例的食品。再接下來(lái)的2周攝取比較例30的食品。攝取期開(kāi)始前的2周為非攝取期,對(duì)便性進(jìn)行問(wèn)巻調(diào)査。即根據(jù)下述評(píng)價(jià)記錄便的形狀和硬度。便的形狀1.水狀2.泥狀3.半捏合狀4.香蕉狀5.硬梆梆狀6.圓粒狀便的硬度1.非常軟2.軟3.—般4.硬5.非常硬結(jié)果如表26所示。表26<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>攝取實(shí)施例40的食品,對(duì)于便的形狀及硬度,保形性得到了改善。另一方面,攝取了比較例30的食品時(shí),便的形狀及硬度與對(duì)照例幾乎相同。(b)便秘的改善試驗(yàn)以有便秘傾向的成人為對(duì)象,研究含有蘇云金芽胞桿菌的食品對(duì)便性的影響。使17名30多歲的女性、以及5名40多歲的女性以每天100g攝取上述實(shí)施例40的食品,攝取2周。接下來(lái)的2周攝取對(duì)照例的食品。再接下來(lái)的2周攝取比較例30的食品。攝取期開(kāi)始前的2周為非攝取期,對(duì)便性進(jìn)行問(wèn)巻調(diào)査。即根據(jù)下述評(píng)價(jià)記錄排便次數(shù)、便的形狀和暢快感。排便次數(shù)次/一周便的形狀1.水狀2.泥狀3.半捏合狀4.香蕉狀5.硬梆梆狀6.圓粒狀暢快感1.非常差2.差3.—般4.好5.非常好結(jié)果如表27所示。表27<table>tableseeoriginaldocumentpage47</column></row><table>攝取實(shí)施例40的食品,對(duì)于排便次數(shù)、便的形狀及暢快感得到了改善。另一方面,攝取了比較例30的食品時(shí),排便次數(shù)、便的形狀及暢快感與對(duì)照例幾乎相同。以上結(jié)果表明,含有蘇云金芽胞桿菌的孢子的食品對(duì)通便、便性的改善有用。產(chǎn)業(yè)上利用的可能性通過(guò)向動(dòng)物投與本發(fā)明的有害菌防除劑,使蘇云金芽胞桿菌在腸內(nèi)增殖,抑制有害菌的增殖、令細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活,以此改善腸內(nèi)菌群的平衡,預(yù)防、治療感染癥。特別是,本發(fā)明的有害菌防除劑所含的蘇云金芽胞桿菌對(duì)于有害菌具有拮抗作用、細(xì)菌干擾、屏障作用、阻礙停留在腸道細(xì)胞、競(jìng)爭(zhēng)排除的作用。本發(fā)明的有害菌防除劑可適用于預(yù)防、治療感染癥的藥品、用于改善腸內(nèi)菌群平衡的食品、促進(jìn)家畜生長(zhǎng)的詞料。權(quán)利要求1.一種有害菌防除劑,其特征在于,含有蘇云金芽胞桿菌(Bacillusthuringiensis)。2.如權(quán)利要求1所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述蘇云金芽胞桿菌具備膽汁酸耐受性。3.如權(quán)利要求1或2所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述蘇云金芽胞桿菌還具有細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活能力。4.如權(quán)利要求13任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑,其特征在于,蘇云金芽胞桿菌含有蘇云金芽胞桿菌蘇云金亞種(Bacillusthuringiensissubsp.thuringiensis)BGSC4A3株、蘇云金芽胞桿菌庫(kù)斯塔克亞種(Bacillusthuringiensissubsp.kurstaki)BGSC4D1株、蘇云金芽胞桿菌鲇澤亞種(Bacillusthuringiensissubsp.aizawai)BGSC4J4株、蘇云金芽胞桿菌以色列亞種(Bacillusthuringiensissubsp.israelensis)BGSC4Q7株、或它們的變異株。5.如權(quán)利要求14任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述有害菌為引起感染癥的病原菌。6.如權(quán)利要求15任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述病原菌為屬于革蘭氏陰性細(xì)菌的病原菌引起的感染癥。7.如權(quán)利要求6所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述屬于革蘭氏陰性細(xì)菌的病原菌至少是沙門(mén)氏菌屬菌、彎曲桿菌屬菌、弧菌屬細(xì)菌、耶爾森屬細(xì)菌、氣單胞菌屬細(xì)菌、假單胞菌屬細(xì)菌、大腸桿菌、志賀氏菌的l種。8.如權(quán)利要求15任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑,其特征在于,上述病原菌為屬于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的病原菌引起的感染癥。9.如權(quán)利要求8所述的病原菌防除劑,其特征在于,上述屬于革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的病原菌至少是梭菌(Clostridium)屬細(xì)菌、芽孢桿菌(Bacillus)屬細(xì)菌、葡萄球菌(Staphylococcus)屬細(xì)菌、鏈球菌(Streptococcus)屬細(xì)菌、李斯特菌(Listeria)屬細(xì)菌的1種。10.—種藥品,其特征在于,含有如權(quán)利要求19任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑。11.如權(quán)利要求10所述的藥品,其特征在于,用于預(yù)防、治療病原菌引起的感染癥。12.如權(quán)利要求10或11所述的藥品,其特征在于,所述藥品用于人。13.如權(quán)利要求10或11所述的藥品,其特征在于,所述藥品用于人以外的動(dòng)物。14.一種食品,其特征在于,含有權(quán)利要求19任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑。15.—種飼料,其特征在于,含有權(quán)利要求19任意一項(xiàng)所述的有害菌防除劑。16.如權(quán)利要求15所述的詞料,其特征在于,所述飼料用于預(yù)防、治療動(dòng)物的腸內(nèi)感染癥。17.—種動(dòng)物的飼養(yǎng)方法,其特征在于,工序?yàn)榱顒?dòng)物攝取權(quán)利要求15或16所述的飼料。全文摘要為了通過(guò)抑制病原菌的增殖、令細(xì)菌自體誘導(dǎo)因子失活,從而改善腸內(nèi)菌群的平衡,促進(jìn)動(dòng)物的整腸,預(yù)防、治療這些病原菌引起的感染癥,因此向動(dòng)物投與含有蘇云金芽胞桿菌的藥物,令動(dòng)物攝取含有蘇云金芽胞桿菌的食物或飼料。文檔編號(hào)A61K35/74GK101309696SQ20068004278公開(kāi)日2008年11月19日申請(qǐng)日期2006年10月5日優(yōu)先權(quán)日2005年11月18日發(fā)明者望月正己申請(qǐng)人:出光興產(chǎn)株式會(huì)社
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