專利名稱：：用糖化蛋白質促進口服耐受性的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及促進動物口服耐受性的方法，其包括給該動物施用糖化蛋白質；用于促進動物口服耐受性的糖化蛋白質；用于促進動物口服耐受性的包含糖化蛋白質的食品；和制備所述食品的方法。
背景技術：
：對于所有嬰兒(infant)而言都推薦母乳。但是，在一些情況中，由于醫(yī)學原因母乳喂養(yǎng)不充足或不成功或不適當，或者母親選擇不進行母乳喂養(yǎng)。對于這些情況而言已經研制了嬰兒配方食品(infantformula),大多數嬰兒配方食品是以牛奶為基礎的。但是，在嬰兒中常見牛奶變態(tài)反應或奶超敏反應(milkhypersensitivity)。這種現象通常到兩歲或三歲消失，但是其有時可能終身存在。其是嬰兒最常見的疾病，在足月嬰兒中的發(fā)生率為0.5至3%,在早產嬰兒中的發(fā)生率為3至5%。這種變態(tài)反應可導致皮瘆、蕁麻滲、口周圍發(fā)紅、流弟(runnynose)、打噴噢、絞痛、腹瀉、嘔吐、過敏反應，或者更常見地是消化困難。其還可能與一些嬰兒猝死的情況有關。應當將奶超敏反應與乳糖不耐受區(qū)分開，乳糖不耐受是由于乳糖酶先天不足而造成的對乳的不耐受。在大多數情況中，牛奶變態(tài)反應是由對乳清部分中的a-乳清蛋白和卩-乳球蛋白反應造成的。其也可由酪蛋白和/或白蛋白引起，酪蛋白和白蛋白是也存在于牛奶中的可能變應原性乳蛋白質。在出生后的前幾個月，免疫系統(tǒng)尚在形成，可能無法識別和耐受該類飲食蛋白。結果是嬰兒將飲食蛋白作為外來物質處理并對其發(fā)生變態(tài)反應。如果兒童的免疫系統(tǒng)不能識別和耐受這些蛋白質，則他們也可對其它飲食蛋白質發(fā)生變態(tài)反應。有兩種類型的免疫響應對于細菌和病毒的攻擊而言很重要的細胞介導的免疫響應(或Thl)和參與變態(tài)反應的體液免疫響應(或Th2)。在嬰兒出生前，其身體是無菌的，Thl路徑是靜止的。但是，在出生前Th2路徑是活性的，因為其是防止嬰兒建立起對母親的免疫響應所必需的。嬰兒出生后立即接觸到許多細菌(良性和有害的)，為了應對這種攻擊，Thl路徑被激活。當每種新的可能的外來物質出現在腸中時，其通過M細胞被與腸有關的淋巴組織吸收并邂逅原初T細胞。如果Thl路徑正確運轉，則機體將產生由特定抗體或特定致敏的T淋巴細胞組成的免疫響應。這些變得專門針對無害飲食抗原的T細胞將來會以抑制機理發(fā)揮作用以防止經由Th2路徑發(fā)生超敏反應。這種機理纟皮稱為口服耐受性。但是，如果該免疫響應產生的抗體是IgE抗體，則其將通過產生炎性反應(其是變態(tài)反應)而對與該抗原的進一步接觸產生響應。這類變態(tài)反應的機理可以如下解釋IgE抗體出現在包括循環(huán)嗜堿性粒細胞在內的細胞表面。當該變應原/IgE相互作用出現時，呈遞該IgE/變應原偶合的細胞產生并釋;^文包括組胺在內的化學介質。這種現象導致了一些病理學作用，如局部或全身血管舒張。細菌的存在刺激Thl路徑。如果新生兒或者非常小的幼兒(baby)不能遇見足夠的細菌(如在發(fā)達國家因為衛(wèi)生標準高而可能發(fā)生這種情況)，則Thl路徑不能良好運行。在該類情況中，免疫系統(tǒng)的唯一響應將是Th2響應，對所討論的抗原的變態(tài)反應將發(fā)生。這僅僅是不能形成口服耐受性的一個原因；可能還有其它原因。毫無疑問，認為存在遺傳素質。因此，口服耐受性現象是通過其經口服路徑施用抗原可預防隨后的對以免疫原形式給予的相同抗原的全身免疫響應的能力。據信，類似的機理可預防對腸內正常細菌群落的超敏反應響應，這些腸內正常細菌群落也是生命所必需的，是無害抗原的來源。如果嬰兒不能充分形成口服耐受性的機理，或者如果對某些抗原耐受的生理狀態(tài)瓦解，則這可能導致發(fā)生超敏反應。通常，當易受影響的嬰兒第一次接觸牛奶時會出現奶超敏反應。從々大食角度來看，有兩種方法可以處理既成變態(tài)反應一必須完全避免含有該變應原的食品或者必需對食品進行處理以降低其變應原性，例如通過水解來進行這樣的處理。針對這后一目的，制造了嬰兒配方食品和含有廣泛水解的蛋白質(由不超過5種氨基酸組成的肽)的谷類食品。但是，需要有助于降低發(fā)生變態(tài)反應風險和促進對完整蛋白形成耐受性的產品，特別是對認為有這類風險的兒童而言更是如此(例如，如果他們具有至少一個患有變態(tài)反應的家族成員)。例如，已經建議給嬰兒喂食部分水解的蛋白質以誘導口服耐受性。在WO03/09卯37中描述了另一種誘導和維持口服耐受性的方法，即使用含有益生菌(probioticbacteria)的食品。益生菌的實例包括各種乳酸桿菌(丄acto^"7/0和雙岐桿菌C^y^6fl"er,'ff)。已經發(fā)現施用益生菌可幫助在嬰兒中誘導口服耐受性。本發(fā)明的目的是提供另一種促進口服耐受性的方法。嬰兒配方食品常常含有乳清蛋白，從營養(yǎng)觀點來看，其特別令人感興趣，含有所有必需氨基酸，可以被迅速和容易地消化。當在還原糖存在下對乳清蛋白進行加熱時，該蛋白質的游離氨基將與糖反應，導致該蛋白質糖化。如果使該類反應不受抑制地進行，則結果可能是營養(yǎng)價值大大降低，還可能觀察到一些褐變?？赡馨l(fā)生的復雜系列反應被統(tǒng)稱為麥拉德(Maillard)反應。實際上，甚至認為含有所需化學基團的食品在室溫下也可發(fā)生麥拉德型反應，但是非常緩慢。盡管麥拉德反應一般被認為是不希望的并且因此在相關食品加工過程中采取措施來控制該反應，但是最近人們已經意識到在小心控制的情況下，乳清蛋白的糖化可提供以許多方式控制蛋白質性質的機會。由糖基和蛋白質的a-或s-氨基的非酶促相互作用產生的第一不可逆產物被稱為Amadori化合物。當進行酸水解時，所有Amadori化合物均產生糠氨酸(furosine),因此設計了一種監(jiān)測奶蛋白質糖化進程的方法，該方法基于糠氨酸產生的測量。用這種工具和隨后開發(fā)的質譜技術，理論上可對麥拉德反應的進程進行監(jiān)測。糖化可以在溶液中或在固體狀態(tài)下進行。WO00/18249描述了一種含乳清蛋白的粉狀物質的固體狀態(tài)糖化方法，其包括將該粉末的水活度調至0.3至0.8，使糖化在30至75'C的溫度下進行1小時至80天。其聲稱所得粉末具有增強的功能性，如增強的熱穩(wěn)定性、乳化活性、抗氧化劑活性和腸毒素結合容量。該粉末可用作添加劑以增強食品的功能性和營養(yǎng)含量。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明涉及促進哺乳動物對蛋白質的口服耐受性的方法，其包括給該哺乳動物施用所述蛋白質的糖化形式。該糖化蛋白質被腸內施用，例如通過摻入食品中來進行腸內施用。該類產品制造和施用簡單并且具有營養(yǎng)價值。另一方面，本發(fā)明涉及用于促進哺乳動物對未糖化蛋白質的口服耐受性的糖化蛋白質。第三方面，本發(fā)明涉及用于促進哺乳動物對未糖化蛋白質的口服耐受性的包含糖化蛋白質的食品。糖化蛋白質優(yōu)選是糖化乳清蛋白。包含糖化乳清蛋白的食品的一個實例是幼兒或嬰兒配方食品。或者，該食品可以是包含糖化蛋白質的千燥的、潮濕的或液態(tài)的寵物食品。糖化乳清蛋白優(yōu)選包含糖化P-乳球蛋白，糖化優(yōu)選是乳糖化，即還原糖是乳糖。由于這些組分存在于許多食品成分例如乳清蛋白分離物(isolate)、乳清蛋白濃縮物或脫脂奶粉中，調整這些產品的制備方法以包括乳糖化步驟是簡單的。這些含乳清蛋白的產品均被廣泛用作食品成分，其因它們的蛋白質的功能性質以及它們的良好營養(yǎng)性質而有價值。另一方面，本發(fā)明涉及制備上述食品的方法，其包括使產品中含有的蛋白質進行糖化過程。糖化可以在溶液中或在固體狀態(tài)下進行。另一方面，本發(fā)明涉及含有糖化蛋白質、優(yōu)選糖化乳清蛋白的嬰兒配方食品。附1表示用具有不同乳糖化程度的不同類型的乳清蛋白或P-乳球蛋白喂養(yǎng)的九組小鼠的抗-P-乳球蛋白IgE低響應性；圖2表示與圖l相同的九組小鼠的抗-p-乳球蛋白IgGl低響應性；圖3表示用具有不同乳糖化程度的不同類型的乳清蛋白或p-乳球蛋白喂養(yǎng)的五組小鼠的抗-p-乳球蛋白IgE低響應性；圖4表示與圖3相同的五組小鼠的抗-p-乳球蛋白IgGl低響應性。發(fā)明詳述根據本發(fā)明，蛋白質如乳清蛋白p-乳球蛋白(其是可對其發(fā)生變態(tài)反應的抗原)可以被糖化并施用于哺乳動物以促進對所述抗原的口服耐受性?？梢允褂玫钠渌鞍踪|包括乳清蛋白a-乳清蛋白、酪蛋白和白蛋白。促進口服耐受性意指同時或單獨地誘導和維持口服耐受性。由于在大多數情況中牛奶是嬰兒遇到的第一種食品，因此最常見的食品變態(tài)反應或超敏反應是牛奶變態(tài)反應或牛奶超敏反應。所以本文的討論主要集中于這種變態(tài)反應。但是，本專利申請的范圍并不僅限于這種變態(tài)反應，而是也涉及促進對其它飲食蛋白質如堅果(例如花生)、小麥和卵蛋白的口服耐受性，它們也常與兒童的變態(tài)反應有關。例如，才艮據本發(fā)明，可以將糖化的小麥蛋白施用于哺乳動物以促進其對小麥蛋白的口服耐受性，可以將糖化的卵蛋白施用于哺乳動物以促進其對卵蛋白的口服耐受性，可以將糖化的堅果蛋白施用于哺乳動物以促進其對堅果蛋白的口服耐受性。糖化蛋白質優(yōu)選是通過對蛋白質進行糖化過程、優(yōu)選固體狀態(tài)糖化過程來制備的。根據Morgan(JAgricFoodChem(1999)47(11):4543-8),固體狀態(tài)過程導致較小的蛋白質分子構象變化。此外，固體狀態(tài)過程易于監(jiān)測和控制，從而使得可以避免不希望的作用，如蛋白質聚集和高級麥拉德反應。糖化過程熱處理達至多約72小時。整個過程十分簡單、十分適用于現有的工業(yè)設備并且耗能低。整個過程可包括調節(jié)和平衡粉末的水活度、對潮濕了的粉末進行加熱處理；并且任選地包括冷卻和/或干燥粉末。在本發(fā)明一個優(yōu)選的方面，在食品中摻入糖化蛋白質。在本發(fā)明的上下文中，術語"食品，，旨在包括任何可消耗的物質。因此，其可以是用于被人消耗的產品，特別是嬰兒配方食品、幼兒配方食品、嬰幼兒后繼配方食品(follow-upformula)等。根據1991年5月14日的歐洲委員會法令(theEuropeanCommissionDirective)91/32I/EEC關于嬰兒配方食品和后繼配方食品的第1.2條，年齡在12個月以下的兒童是"嬰兒"。"嬰兒配方食品"是用于出生后前6個月期間嬰兒的全部營養(yǎng)的食品。但是，糖化蛋白質也可包含在不專用于嬰兒或幼兒營養(yǎng)、但也可被這類群體消耗的食品中，該類食品例如奶、酸奶、凝乳、干酪、發(fā)酵乳、以奶為基礎的發(fā)酵產品、冰洪淋、以發(fā)酵谷類為基礎的產品或以奶為基礎的產品等。術語"食品"還包括被其它哺乳動物消耗的產品，所述哺乳動物例如寵物如狗、貓、兔、豚鼠、小鼠、大鼠或其它家養(yǎng)哺乳動物如家畜，例如牛、馬、豬、綿羊、山羊、水牛、駱駝等。這方面，寵物優(yōu)選是伴侶動物(companionanimal)。因此，上述糖化蛋白質也可4皮摻入寵物食品中以促進口服耐受性。適宜的寵物食品包括大塊產品(chmikproducts)、炸肉餅(croquettes)、咀嚼產品、潮濕的產品，如罐裝食品和液體配方食品，如小貓或小狗喝的奶。寵物食品是適于被寵物消耗的食品，優(yōu)選是適于寵物全部營養(yǎng)的食品。根據定義，隨著糖化度提高，糖化蛋白質的營養(yǎng)品質逐漸降低。對于乳清蛋白而言，這可以通過測量被阻斷的賴氨酸的。/。來進行評估。這些蛋白質的有限糖化不會導致對其營養(yǎng)價值的顯著有害作用，但是當配制產品時必須考慮特定產品中所用的糖化蛋白質的糖化程度和比例。例如，嬰兒配方食品應優(yōu)選含有不大于約15%被阻斷的賴氨酸。如果在配方食品中使用糖化蛋白質，則可以通過將所有蛋白質糖化至該最大所需程度或者通過氨酸的總指標來實現該指標。根據本發(fā)明另一方面，提供了制備該類食品的方法，其包括對蛋白質進行糖化過程，優(yōu)選固體狀態(tài)糖化過程。本發(fā)明還提供了含有糖化蛋白質如糖化乳清蛋白的嬰兒配方食品。該嬰兒配方食品可以是其中的蛋白質被糖化或者被選擇的糖化蛋白質替代的標準組合物。如上面所討論的那樣，含有糖化乳清蛋白的嬰兒配方食品應優(yōu)選含有不大于約15。/"皮阻斷的賴氨酸，可以通過將配方食品中的所有蛋白質糖化至該最大所需程度或者通過使用更高糖化的蛋白質和未進行處理的蛋白質的混合物以遵守被阻斷的賴氨酸的總指標來實現該指標。糖化蛋白質應優(yōu)選作為未被糖化的蛋白質的替代物被消耗直至建立了對該蛋白質的耐受性。例如，在建立對卵蛋白的耐受性之前，應僅消耗糖化的卵蛋白，在建立了對卵蛋白的耐受性時可以在不擔心變態(tài)反應的情況下消耗普通的卵。類似地，應當給幼兒喂食含有糖化蛋白質的嬰兒配方食品，直至完全斷奶和兒童達到吃正常食物的年齡，例如3至5歲。實施例用下面的實施例對本發(fā)明范圍內的產品和制備所述產品的方法進行說明。絕不應將它們視為對本發(fā)明的限制?？梢詫Ρ景l(fā)明進行變化和修改。即，本領域技術人員將意識到這些實施例中許多可能的變型，其覆蓋了廣泛的組合物、成分、加工方法和混合物，本領域技術人員可針對各種應用調整本發(fā)明的化合物的天然存在水平。實施例1:乳清蛋白在液體條件下的糖化P-乳球蛋白(BLG)得自戴維斯克(Davisco)公司(美國)。用RP-HPLC測定其純度(90%)。乳糖得自富可(Fluka)公司。將4%BLG(大約2.2mM)和7%乳糖單水合物(大約200mM)溶解在20mM磷酸鹽緩沖液(pH6.8)中。在0.22mm醋酸纖維素濾器(密理博(Millipore)公司)上過濾后，將蛋白質和乳糖的混合物放置在蓋好蓋的燒瓶中并在水浴中于60'C加熱0、24或72小時以達到不誘導對蛋白質營養(yǎng)價值顯著有害作用的低水平乳糖化。在理論上，這些條件使得每個p-乳球蛋白單體在共計14個可能的賴氨酸殘基上結合2-3個乳糖分子(Morgan等人，1999，J.Agri.FoodChem.47，83-91)。所有實驗均通過將300ml燒瓶的頂部空間降低至l-2ml而在缺氧和無菌條件下進行。加熱后，不對不同級分進行透析，而是將其立即冷凍干燥以防止膠凝。將對照的天然P-乳球蛋白(對照BLG)在室溫下水合6小時，在冰浴中冷卻，然后加入乳糖以達到與糖化BLG相同的7%濃度。作為另一個對照，將相同的純化的BLG溶液在沒有乳糖的情況下溫育，冷卻，然后加入乳糖粉末并使其溶解以達到7%濃度。其后立即將該溶液冷凍干燥。另外，還對兩個乳清蛋白分離物(WPI)進行了試驗-戴維斯克WPIBIPRO，其在乳糖基P-乳球蛋白中基本上被耗竭(用質鐠法控制)，和-得自阿拉食品(ArlaFoods)公司的Lacprodan80，其含有高水平的乳糖基p-乳球蛋白形式(用質譜法表征)。用糠氨酸測定法來測定被阻斷的賴氨酸。將蛋白質的等分試樣(約20mg蛋白質)用60ml6M鹽酸于110。C在回流裝置中水解24小時。用水定量至100ml體積后，將10ml等分試樣蒸發(fā)至干，進一步混懸在3ml0.02MHC1中。然后通過將10^進樣到配有檸檬酸鈉緩沖液和用于蛋白質水解物分析的柱的HitachiL-8500氨基酸分析儀中來進行分析。在用茚三酮試劑進行柱后衍生化后，通過于外標進行比較在相同的色傳圖中對賴氨酸和糠氨酸進行定量。由酸水解物中的賴氨酸和糠氨酸含量來計算被阻斷的賴氨酸的百分比，假^L在水解期間約40%s-脫氧果糖基賴氨酸(被阻斷的賴氨酸)被重新轉化成賴氨酸，部分被轉化成吡噴氨酸(pyridosine),約32%被轉化成糠氨酸(Finot等人，(1981)Prog.FoodNutr.Sci.5，345-355)。所有結果均是由兩個獨立測量獲得的平均值。結果如下面的表l所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>在實施例2中被喂食蛋白質的小鼠組。*這一非常高的值是由凍干過程中的問題造成的。實施例2:誘導小鼠的口服耐受性為了對誘導口服耐受性進行測試，使用Pecquet等人(1999，Immunology96:278-285)所述的標準小鼠方案。給小鼠喂食不同類型的如實施例1中所述的乳糖化或未乳糖化的乳清蛋白或BLG。5天后，通過皮下注射在Al(OH)3溶液中稀釋的BLG(100mgP-乳球蛋白/小鼠)來對小鼠進行激發(fā)。3周后，將小鼠處死，收集血樣以通過測量不同組中BLG-特異性IgE和IgGl的滴度來評價口服耐受性資導。按照以下組對小鼠進行處理A組水B組與乳糖一起凍干的對照BLG(不溫育)C組BLG+乳糖T0D組對照BLG，溫育24小時，然后與乳糖一起凍干E組BLG+乳糖，溫育24小時，然后凍干F組對照BLG，溫育72小時，然后與乳糖一起凍干G組BLG+乳糖，溫育72小時，然后凍干H組低乳糖化WPI(乳清蛋白分離物)(Bipro)I組高乳糖化WPI(Lacprodan)圖1中所給出的結果表明，與用天然BLG(B組)和低乳糖化乳清蛋白(H組)喂養(yǎng)的組相比，用乳糖化BLG(E組)和高乳糖化乳清蛋白(I組)喂養(yǎng)的小鼠進一步改善了特異性抗-BLGIgE低響應性，B組和H組均是陽性對照。應當注意，盡管被喂食的蛋白質具有最高的乳糖化率，但是B組(42。/。被阻斷的賴氨酸)并未產生最佳響應。對此的一種解釋可能是乳糖化反應未受控制。此外，其還可能是由于過度乳糖化掩蓋了蛋白質中關鍵表位這一事實造成的。同樣，盡管G組和I組所喂食的蛋白質中被阻斷的賴氨酸的水平相同，但是G組的結果不如I組的結果好。這可能是因為給予G組的BLG的乳糖化是在液體狀態(tài)下進行的，因此未^U艮好地控制。難以控制的液態(tài)乳糖化可導致出現一些不希望的現象，包括蛋白質聚集和高級麥拉德反應。另一方面，給予I組的乳清蛋白的乳糖化是以干燥狀態(tài)進行的，被更好地控制(僅發(fā)生早期的麥拉德反應)。用抗-BLG特異性IgGl(在Thl細胞調節(jié)下產生的另一種同種型)觀察到了類似的結果，表明了由于口服耐受性的誘導，這些細胞無變應性。如圖2所示，E組和I組呈現出最低的抗-BLGIgGl滴度，表明分別與喂食具有較低乳糖化的相同蛋白質的組即B組和H組相比，在這兩個組中，蛋白質的乳糖化改善了低響應性。實施例3:在干燥狀態(tài)下的糖化Prolacta75乳清蛋白濃縮物(WPC)購自萊克塔利斯工業(yè)(LactalisIndustrie)公司(Retiers，法國)。根據生產商的說明，其含有76.4%蛋白質、15.3%乳糖、3.2%灰分、0.42%鉤和5%水。通過固體狀態(tài)糖化將WPC乳糖化。簡單地說，通過將該粉末放在具有飽和K2C03的封閉室中將其水活度(Aw)調至約0.44。在該步驟期間，監(jiān)測吸水和Aw。當達到所需Aw時，將粉末密封在不透明袋中。然后，將粉末在15。C下至少保持48小時以使水在基質中平衡。通過將該粉末在自制的管狀加熱器中于60。C在密封的不銹鋼管(內徑為16mm，30g粉末)中溫育3小時和8小時來誘導蛋白質糖化。在糖化期結束時檢查水活度，觀察到沒有發(fā)生變化。然后將該粉末在15t:下密封儲存。用質鐠法(MALDI)檢測乳糖化形式的蛋白質和定量Prolacta75(未糖化的和糖化的)中每個蛋白質單體連接的乳糖的平均數。通過如上所述的游離氨基測定來評估糖化程度。用鄰-苯二曱醛法(OPA)測定游離氨基。OPA測定通過以下操作進行將200ml蛋白質溶液(1.5g/1，在50mmo1/1磷酸鈉緩沖液pH7.8中)、2ml還原溶液(480mg分散在200ml0.1mol/1硼酸鈉緩沖液pH9.3中的N-乙酰基-L-半胱氨酸)和50ml20%(w/w)SDS溶液混合。在混合并于50。C溫育10分鐘后，加入50mlOPA試劑(通過將170mgOPA分散在5ml甲醇中制得)。將該混合物于50。C再溫育30分鐘，然后在室溫下冷卻30分鐘，然后在340nm下用Uvikon810分光光度計(福樂派克(Flowspek)公司，巴塞爾(Basel),瑞士)讀取吸光度。在最終混合物中在10至200mmol/l的濃度范圍中用L-亮氨酸標準品獲得校準曲線。為了獲得反應信號，扣除兩個空白?？瞻譴(蛋白質信號)是用曱醇代替OPA試劑獲得的?？瞻?是用磷酸鈉緩沖液代替蛋白質溶液獲得的。所用的產品和試劑分別為硼酸、N-乙?；?L-半胱氨酸、得自福路卡化學公司(FlukaChemieGmbH)(Buchs，瑞士)的OPA、磷酸二氫鈉單水合物、甲醇、得自默克(Merck)公司(Darmstadt,德國)的氫氧化鈉和得自星瑪(Sigma)公司的L-亮氨酸(圣路易斯(St-Louis)，MO，美國)。用分子排阻色譜法檢查Prolacta75(未糖化的和糖化的)中是否存在聚集的蛋白質。用足量的洗脫緩沖液稀釋蛋白質樣品，得到等于lg/l的蛋白質濃度(以起始蛋白質濃度為基礎)。柱為TSK2000SW(Tosohaas公司)，用0.1M磷酸鹽pH6.8+NaCl0.15M以0.5ml/min的流速進行洗脫。在214或280nm下記錄光學密度。用含有天然a-乳清蛋白和P-乳球蛋白的MW標準品對該柱進行校準?；瘜W表征的結果如下面表2中所示。表2樣<formula>formulaseeoriginaldocumentpage15</formula>每個蛋白質單體結合的平均乳糖數(MALDI-MS)BLGABLGBa國LA未糖化的Prolacta75糖化3小時的Prolacta75糖化8小時的Prolacta758.6%6.2%5.5%5%19.7%31.0%0.83.45.40.83.60.3，63.4發(fā)現在用于表征蛋白質乳糖化的各種方法之間有良好的關聯性。蛋白質乳糖化(干燥狀態(tài)糖化)所用的條件不會導致形成蛋白質聚集物(如分子排阻色傳法所示)。實施例4:誘導小鼠的口服耐受性為了測量乳糖化的作用，用上述小鼠模型進行口服耐受性的誘導。給小鼠喂食未糖化的和實施例3中制得的糖化的Prolacta蛋白質的不同制備物。然后，以全身水平用p-乳球蛋白(BLG)對小鼠進行激發(fā)，3周后，通過評估小鼠血清中BLG特異性IgE和IgGl水平來測量對BLG的口服耐受性的誘導。按照以下組對小鼠進行處理A組LacprodanB組未糖化的Prolacta75C組糖化Prolacta75(被阻斷的賴氨酸19%)D組糖化Prolacta75(被阻斷的賴氨酸31%)E組對照(水)結果如圖3中所示。以與實施例2中給出的結果相同的方式，可發(fā)現用乳糖化的Prolacta進行耐受誘導的小鼠(C組和D組)比喂食未乳糖化的Prolacta或喂食Lacprodan的小鼠組表現出更好的BLG特異性IgE低響應性。圖4中所示的抗-BLGIgGl滴度顯示出相同類型的致耐受性響應，C組和D組滴度最低?？傊摂祿砻髋c未乳糖化的蛋白質相比，乳清蛋白的乳糖化改善了特異性致耐受性低響應性(IgE和IgGl)。實施例5:含有糖化乳清蛋白的嬰兒配方食品下面給出了該嬰兒配方食品的組成-<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>200680046708.4說明書第14/14頁維生素B2(mg)0.151.0煙酸(mg)16.7維生素B6(mg)0.0750.50葉酸(Hg)960泛酸(mg)0.453維生素B12Oig)0.32生物素(Hg)2.215膽堿(mg)1067Fe(mg)1.2815100Cu(mg)0.060.4Zn(mg)0.755蛋白質源是用上面實施例3中所述的方法糖化至被阻斷的賴氨酸含量為11%的Prolacta75乳清蛋白濃縮物。該嬰兒配方食品是通過將蛋白質源、碳水化合物源和脂肪源混合物在一起來制備的。如果需要，可以在該混合物中包含乳化劑。然后，混入已經進行了反滲透處理的水，以形成液體混合物。通過將其迅速加熱至約80'C至約IIO'C的溫度達約5秒至約5分鐘來對該液體混合物進行熱處理以降低細菌負載量。然后，將該液體混合物快速冷卻至60'C至85。C。然后將該液體混合物分兩步勻化，首先在約7MPa至約40MPa下勻化，然后在第二步中在約2MPa至約14MPa下勻化。將勻化的混合物進一步冷卻并加入熱敏感的微生物類和礦物質。這時，使該勻化的混合物的pH和固體含量符合標準。然后，將勻化的混合物轉移到噴霧干燥器中，將其轉化成水含量低于約5%重量的粉末。權利要求1.促進哺乳動物對蛋白質的口服耐受性的方法，其包括給該哺乳動物腸內施用所述蛋白質的糖化形式。2.權利要求l所述的方法，其中所述糖化蛋白質被口服施用。3.權利要求2所述的方法，其中所述糖化蛋白質是食品的組分。4.權利要求3所述的方法，其中所述食品是幼兒或嬰兒配方食品。5.權利要求3所述的方法，其中所述食品是寵物食品。6.權利要求1至4中任意一項所述的方法，其中所述蛋白質是乳清蛋白。7.權利要求6所述的方法，其中所述糖化乳清蛋白是乳糖化乳清蛋白。8.權利要求6或7所述的方法，其中所述乳清蛋白包含P-乳球蛋白。9.用于促進哺乳動物對未糖化蛋白質的口服耐受性的糖化蛋白質。10.權利要求9所述的糖化蛋白質，其是乳清蛋白。11.權利要求10所述的糖化乳清蛋白，其是乳糖化乳清蛋白。12.權利要求10或11所述的糖化乳清蛋白，其中所述乳清蛋白包含P-乳球蛋白。13.用于促進哺乳動物對未糖化蛋白質的口服耐受性的包含糖化蛋白質的食品。14.權利要求13所述的食品，其中所述糖化蛋白質是乳清蛋白。15.權利要求14所述的食品，其中所^t化乳清蛋白是乳糖化的。16.權利要求14或15所述的食品，其中所述乳清蛋白包含P-乳球蛋白。17.權利要求13至16中任意一項所述的食品，其中該食品是幼兒或嬰兒配方食品。18.權利要求13所述的食品，其中該食品是寵物食品。19.制備權利要求13至18中任意一項所述的食品的方法，其包括使產品中含有的蛋白質進行固體狀態(tài)糖化過程。20.含有糖化蛋白質的嬰兒配方食品。21.含有糖化乳清蛋白的嬰兒配方食品。全文摘要本發(fā)明涉及促進動物對蛋白質的口服耐受性的方法，其包括給該動物施用所述蛋白質的糖化形式；用于促進動物口服耐受性的糖化蛋白質；用于促進動物口服耐受性的包含糖化蛋白質的食品；和制備所述食品的方法。文檔編號A61P37/00GK101325880SQ200680046708公開日2008年12月17日申請日期2006年11月14日優(yōu)先權日2005年11月14日發(fā)明者F·摩根,L·J·R·博韋托,S·佩凱申請人:雀巢技術公司