專(zhuān)利名稱(chēng)：包含寄生蟲(chóng)卵的組合物以及用于分離和儲(chǔ)存寄生蟲(chóng)卵的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)卵的組合物和利用從所述組合物分離的卵治療、改善、預(yù)防或治愈個(gè)體動(dòng)物或人的自身免疫病或變應(yīng)性疾病的方法。本發(fā)明還涉及分離和儲(chǔ)存蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)卵的方法，以及用于制備包含蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品的藥物組合物的方法。所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)卵可以來(lái)自豬鞭蟲(chóng)卵(Trichuris suis ova)(TSO)。

背景技術(shù)：
TSO是活性藥物成分的原材料，旨在用于自身免疫病或變應(yīng)性疾病的治療。
例如在US 6,764,838中描述了寄生蟲(chóng)材料用于藥物治療炎性腸病(IBD)的用途。
炎性腸病(IBD)的病因似乎對(duì)遺傳和環(huán)境兩種因素均有涉及。目前的理論表明IBD由未知原因引起的對(duì)腸細(xì)菌的異常免疫應(yīng)答所引起。IBD在蠕蟲(chóng)定殖很少見(jiàn)的工業(yè)化國(guó)家內(nèi)是常見(jiàn)的。相反，在世界上大多數(shù)人有蠕蟲(chóng)的地區(qū)內(nèi)這種病則很少見(jiàn)。由于其降低過(guò)度反應(yīng)性免疫應(yīng)答的獨(dú)特能力，蠕在很多自身免疫病或變應(yīng)性疾病中可以是有益的。蠕蟲(chóng)減少小鼠和人的腸炎支持了這個(gè)理論。
蠕蟲(chóng)鞭蟲(chóng)屬(Trichuris)的成員是具有有利的治療用途特征的腸內(nèi)圓蠕蟲(chóng)(round worm)(鞭蟲(chóng))。豬鞭蟲(chóng)(Trichuris suis)在遺傳上與毛首鞭蟲(chóng)(Trichuris trichiura)(人鞭蟲(chóng))相關(guān)，但是實(shí)驗(yàn)表明它只是簡(jiǎn)單地定殖于人而不引起疾病。豬鞭蟲(chóng)的卵可以利用特殊的不含病原體的豬(即沒(méi)有感染特定病原體且經(jīng)過(guò)處理以確保不存在生物污染物的豬)來(lái)生產(chǎn)。
對(duì)于TSO的任何制備，關(guān)于用作培養(yǎng)基的溶液的顆粒污染和微生物活性有嚴(yán)格的限度 1)分離過(guò)程應(yīng)該確保溶液的顆粒污染超過(guò)2％或1％(以數(shù)目計(jì))。
2)分離過(guò)程應(yīng)該確保消除其它寄生蟲(chóng)卵。
3)微生物譜應(yīng)該滿(mǎn)足歐洲藥典目錄3B下對(duì)用于口服的包含天然來(lái)源原材料的要求。
4)用于儲(chǔ)存的培養(yǎng)基應(yīng)該可以使得卵從未孵化的(非感染性)發(fā)育成為孵化(感染性)的卵。
5)培養(yǎng)基應(yīng)該優(yōu)選不含有可能導(dǎo)致潛在患者的變態(tài)反應(yīng)的抗生素或其它化學(xué)品。
6)用于儲(chǔ)存的培養(yǎng)基應(yīng)該可以用于進(jìn)一步長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存(3至5年)而不影響TSO的感染性，以便于延長(zhǎng)藥物產(chǎn)品保存期限。
7)所述方法應(yīng)該可用于卵的大量回收。


發(fā)明內(nèi)容
蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng) 對(duì)蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的定義中，有兩個(gè)組。第一組是在天然定殖于在特定的哺乳動(dòng)物宿主(包括人)的蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)；第二組是不能成功地定殖于特定的哺乳動(dòng)物物種(包括人)上，但是如果受到感染，則它們可以因?yàn)榇碳っ庖呦到y(tǒng)而提供對(duì)個(gè)體的保護(hù)的蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)。
在第一組中，蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是具有復(fù)雜的生命周期的多細(xì)胞蠕蟲(chóng)并且適應(yīng)具體的哺乳動(dòng)物物種來(lái)發(fā)育。線(xiàn)蟲(chóng)(不分節(jié)圓蠕蟲(chóng))和扁形動(dòng)物(扁形動(dòng)物)是可定殖于人腸內(nèi)的兩組蠕蟲(chóng)。根據(jù)本發(fā)明，天然定殖于人或動(dòng)物身上的多種蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)中的任何一種將提供所期望的結(jié)果。
常寄居于人腸內(nèi)的線(xiàn)蟲(chóng)是似蚓蛔線(xiàn)蟲(chóng)(Ascaris lumbricoides)、蠕形住腸線(xiàn)蟲(chóng)(Enterobius vermicularis)(蟯蟲(chóng))、毛首鞭蟲(chóng)(Trichuristrichiura)(鞭蟲(chóng))、十二指腸鉤蟲(chóng)(Ancylostoma duodenale)和美洲板口鉤蟲(chóng)(Necator americanus)(鉤蟲(chóng))，和糞類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)(Strongyloidesstercoralis)。旋毛形線(xiàn)蟲(chóng)(Trichinella spiralis)僅感染小腸，但是罕見(jiàn)。
扁形動(dòng)物包括吸蟲(chóng)和絳蟲(chóng)。定居在人腸內(nèi)最常見(jiàn)的成年吸蟲(chóng)是姜片吸蟲(chóng)(Fasciolopsis)、棘口吸蟲(chóng)(Echinostoma)和異形吸蟲(chóng)(Heterophyes)種。那些生活在膽系統(tǒng)的吸蟲(chóng)包括華枝睪吸蟲(chóng)(Clonorchis sinensis)、麝貓后睪吸蟲(chóng)(Opisthorchis viverrini)、貓后睪吸蟲(chóng)(O.felineus)和肝片形吸蟲(chóng)(Fasciola hepatica)及大片形吸蟲(chóng)(Fasciola gigantica)。血吸蟲(chóng)(Schistosoma)種居住在靜脈系統(tǒng)，但是個(gè)別種通過(guò)腸壁進(jìn)行卵的傳代而長(zhǎng)期影響腸。通常感染人的成年絳蟲(chóng)是裂頭絳蟲(chóng)(Diphyllobothrium)種(魚(yú)絳蟲(chóng))、牛帶絳蟲(chóng)(Taenia saginata)(牛絳蟲(chóng))、豬帶絳蟲(chóng)(Taenia solium)(豬絳蟲(chóng))和縮小膜殼絳蟲(chóng)(Hymenolepsisdiminuta)和微小膜殼絳蟲(chóng)(H.nana)(短小絳蟲(chóng))。
其它感興趣的腸蟲(chóng)包括絲蟲(chóng)寄生蟲(chóng)和肺吸蟲(chóng)。這些寄生蟲(chóng)沒(méi)有腸階段，但是它們刺激強(qiáng)免疫應(yīng)答(Th2型)。
本發(fā)明可以利用的第二組的蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)包括通常不在特定哺乳動(dòng)物物種(包括人)身上定殖但可以提供保護(hù)免受疾病(包括特征在于Th1型免疫應(yīng)答的變態(tài)反應(yīng))的蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)。這些寄生蟲(chóng)包括鼠鞭蟲(chóng)(Trichuris muris)(鼠鞭蟲(chóng))、旋毛形線(xiàn)蟲(chóng)(Trichinella spiralis)、巴西日?qǐng)A線(xiàn)蟲(chóng)(Nippostrongylus brasiliensis)、多形螺旋線(xiàn)蟲(chóng)(Heligmosomoides polygyrus)和微小膜殼絳蟲(chóng)(Hymenolepsis nana)，所有這些寄生蟲(chóng)均是可感染小鼠的腸蠕蟲(chóng)。豬鞭蟲(chóng)和豬蛔蟲(chóng)(Ascarissuum)是也可以感染人的豬蠕蟲(chóng)。犬鞭蟲(chóng)(Trichuris vulpis)、弓首蛔蟲(chóng)(Toxocara)種、弓蛔蟲(chóng)(Toxascaris)種、棘顎口線(xiàn)蟲(chóng)(Gnathostoma)種和鉤蟲(chóng)(Ancylostoma)種是也可以感染人的狗或貓蠕蟲(chóng)。異尖線(xiàn)蟲(chóng)(Anisakis)和偽地新蛔蟲(chóng)(Pseudoterranova)是可以傳染到人的鼠科(marine)哺乳動(dòng)物的線(xiàn)蟲(chóng)。鳥(niǎo)血吸蟲(chóng)可以暫時(shí)感染人。這樣的血吸蟲(chóng)包括S.douthitti、眼點(diǎn)毛畢血吸蟲(chóng)(Trichobilharzia ocellata)、T.stagnicolae、T.physellae和Gigantobilharzia huronensis。
本發(fā)明相關(guān)的可治療疾病 A.炎性腸病(克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)) 流行病學(xué)數(shù)據(jù)表明了發(fā)生克羅恩病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)的遺傳易感性。CD在工業(yè)化社會(huì)中的發(fā)病率從20世紀(jì)50年代開(kāi)始增長(zhǎng)，至今為每年每100,000個(gè)人中1個(gè)到8個(gè)。這表明我們的環(huán)境中的未知變化已經(jīng)影響到了CD的發(fā)生頻率。
盡管IBD的病因仍然沒(méi)有確定，但推測(cè)是由腸道粘膜免疫系統(tǒng)失調(diào)而引起。粘膜中炎癥細(xì)胞通常保護(hù)我們隔開(kāi)內(nèi)腔內(nèi)容物。這種高度有效的慢性炎癥被嚴(yán)格控制以限制組織損傷。IBD可由對(duì)內(nèi)腔因素的不適當(dāng)?shù)膹?qiáng)烈免疫應(yīng)答而產(chǎn)生。CD似乎是一種產(chǎn)生IFN-γ和TNF-αt的過(guò)度強(qiáng)烈的Th1型炎癥。UC的性質(zhì)則沒(méi)有那么好地定義。
有幾個(gè)慢性腸炎的動(dòng)物模型。一個(gè)重要的進(jìn)展是近來(lái)發(fā)現(xiàn)，一些具有遺傳工程化基因刪除的小鼠可以出現(xiàn)類(lèi)似IBD的慢性腸炎。這些小鼠包括靶向刪除IL-2、IL-10、II類(lèi)MHC或TCR基因等的突變小鼠。利用這些模型中的某些已表明，失調(diào)的免疫系統(tǒng)自身可以介導(dǎo)腸損傷。個(gè)別這些模型的粘膜炎產(chǎn)生大量IFN-γ和TNF-αt，這表明Th1型細(xì)胞因子的過(guò)量產(chǎn)生是疾病發(fā)病的一個(gè)常見(jiàn)機(jī)制。另外，阻斷Th1通路可防止炎癥。CD還具有高Th1應(yīng)答的特征。因此，這些模型可能直接涉及到對(duì)此人類(lèi)疾病過(guò)程的免疫病理學(xué)的理解。
B.類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA) RA是一種以持續(xù)的滑膜炎炎癥為特征的慢性病，通常涉及對(duì)稱(chēng)分布的外周關(guān)節(jié)。這種炎癥可以導(dǎo)致骨侵蝕、軟骨損傷和關(guān)節(jié)破壞。這種病困擾約1％的人群。此疾病的流行性隨年齡而增加，女性的患病頻率高于男性。RA的傳播是由CD4+Th1細(xì)胞(III型超敏性)驅(qū)動(dòng)的免疫介導(dǎo)的事件。
C.胰島素依賴(lài)型兒童糖尿病(DM)(1型) 1型DM是一種通常開(kāi)始于初成年期期，并且由于不能應(yīng)答于血糖濃度升高而不能產(chǎn)生胰島素所導(dǎo)致的疾病。胰島素缺乏引起持續(xù)的高血糖水平，不能恰當(dāng)?shù)卮x葡萄糖，引起代謝紊亂，最終損害眼睛、腎、心臟和其它器官。胃腸外攝入胰島素可以部分控制這些代謝問(wèn)題。1型DM由對(duì)胰腺β細(xì)胞的自身免疫攻擊所引起，所述胰腺β細(xì)胞是胰島素的來(lái)源?；罨木奘杉?xì)胞和細(xì)胞毒T細(xì)胞包圍并破壞胰島β細(xì)胞。遺傳易感性和不明確的環(huán)境事件引發(fā)了這種疾病過(guò)程。
D.紅斑狼瘡(LE) LE是一種系統(tǒng)性自身免疫病，其在成人初期至中期的女性中最常見(jiàn)。組織損傷由自身抗體和過(guò)度反應(yīng)性調(diào)節(jié)性T細(xì)胞引起。該異常免疫應(yīng)答可持續(xù)產(chǎn)生致病性自身抗體和免疫復(fù)合物，這可能涉及III型超敏反應(yīng)。這導(dǎo)致骨骼肌、皮膚、血液、腎組織和其它組織系統(tǒng)的損傷。異常的免疫應(yīng)答很可能依賴(lài)于多種遺傳因素和環(huán)境因素的交互作用。
E.結(jié)節(jié)病 結(jié)節(jié)病是一種病因未知的肺和其它器官的慢性肉芽腫病。大多數(shù)患者年齡在20至40歲之間。最常見(jiàn)的征狀是呼吸短促。這種疾病由過(guò)多的Th1型細(xì)胞免疫應(yīng)答(很可能是針對(duì)有限數(shù)目的抗原)所致。結(jié)節(jié)病在全世界發(fā)生并且折磨著所有的種族。然而，在某些種族和人種之間，結(jié)節(jié)病的流行性存在顯著的多樣性。例如，在波蘭、東南亞和印度很少出現(xiàn)這種疾病。
F.多發(fā)性硬化(MS) MS是一種中樞神經(jīng)系統(tǒng)的慢性復(fù)發(fā)性的多病灶炎性病癥，導(dǎo)致局部脫髓鞘和腦瘢痕。它是一種在西方世界影響約1百萬(wàn)人的常見(jiàn)病，其常常開(kāi)始于成年期的初期到中期。MS是至少部分由Th1細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫疾病。MS的損傷類(lèi)似于那些由遲發(fā)型超敏反應(yīng)誘導(dǎo)的損傷，所述遲發(fā)型超敏反應(yīng)包括活化的T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。它是一種溫帶氣候疾病，隨著遠(yuǎn)離赤道而流行性增加。
G.銀屑病 銀屑病是一種慢性復(fù)發(fā)性皮炎，其在西方社會(huì)中可見(jiàn)于2至3％的人群中。這種疾病通常在10至30歲的個(gè)體中第一次診斷出來(lái)，并且與異常免疫應(yīng)答相關(guān)。該異常免疫應(yīng)答可能依賴(lài)于多種遺傳因素和不明確的環(huán)境因素。
H.孤獨(dú)癥 孤獨(dú)癥的特征在于導(dǎo)致社會(huì)表現(xiàn)差的行為和發(fā)育偏差。孤獨(dú)癥可見(jiàn)于多達(dá)1％的人群中；然而，該發(fā)病率在穩(wěn)定上升。病因未知，但是有很強(qiáng)的遺傳成分，并且該疾病在易患自身免疫病癥的家庭中尤其常見(jiàn)，因此可能涉及到自身免疫。
I.變態(tài)反應(yīng) 對(duì)于典型的自身免疫病(例如上述疾病)，蠕蟲(chóng)感染與變應(yīng)性疾病表現(xiàn)型中過(guò)度反應(yīng)性免疫應(yīng)答的改變(例如1型超敏性疾病如遺傳性過(guò)敏癥、食物過(guò)敏、哮喘、過(guò)敏性鼻炎和過(guò)敏性皮炎)之間的相關(guān)性在衛(wèi)生假說(shuō)(hygiene hypothesis)的背景下應(yīng)該可以看出來(lái)。這些疾病的發(fā)病率在具有高水平衛(wèi)生保健和衛(wèi)生設(shè)施的工業(yè)化世界中穩(wěn)步增加。對(duì)微生物接觸的觀(guān)察研究最一致的報(bào)告是，蠕蟲(chóng)感染尤其與特應(yīng)性疾病和變應(yīng)性疾病的風(fēng)險(xiǎn)降低相關(guān)。一般來(lái)說(shuō)，蠕蟲(chóng)感染與血清中高水平的IgE抗體一起出現(xiàn)，后者在其它情況下只見(jiàn)于變應(yīng)性疾病中。然而，由于肥大細(xì)胞活化和與急性癥狀相關(guān)的脫粒(例如腫脹、打噴嚏和流淚)，在過(guò)敏個(gè)體中，IgE對(duì)抗例如花粉誘發(fā)的過(guò)敏性炎癥，而由于對(duì)蠕蟲(chóng)的低響應(yīng)性狀態(tài)，蠕蟲(chóng)感染常常是無(wú)癥狀的。不同種蠕蟲(chóng)(例如血吸蟲(chóng)和鉤蟲(chóng))的感染與特應(yīng)性風(fēng)險(xiǎn)的降低相關(guān)，這表明了共同的生物學(xué)機(jī)制。蠕蟲(chóng)感染期間低響應(yīng)性的狀態(tài)代表了免疫學(xué)特征，這與過(guò)敏性鼻炎的有效變態(tài)原免疫治療期間所觀(guān)察到的那些相似，包括細(xì)胞因子IL-10和對(duì)抗原/變態(tài)原特異性的IgG4的產(chǎn)生。變態(tài)反應(yīng)和蠕蟲(chóng)感染都通過(guò)所謂Th2細(xì)胞因子譜(IL-4、IL-5和IL-13)來(lái)表征。然而，在慢性蠕蟲(chóng)感染期間，這種譜通過(guò)被認(rèn)為具有抗炎調(diào)節(jié)特性的細(xì)胞因子IL-10和TGFβ而發(fā)生改變。蠕蟲(chóng)感染和變應(yīng)性疾病的小鼠模型支持上述對(duì)人的觀(guān)察。
觀(guān)察研究大部分集中于哮喘和蠕蟲(chóng)之間的關(guān)系，這些研究進(jìn)一步提出，觀(guān)察到的哮喘風(fēng)險(xiǎn)的降低可能對(duì)在人宿主中具有全身階段的蠕蟲(chóng)種的感染更強(qiáng)烈，和/或隨著通過(guò)糞便中卵計(jì)數(shù)測(cè)量的感染強(qiáng)度的增加而增強(qiáng)。目前，認(rèn)為蠕蟲(chóng)或它們的排泄物攜帶尤其適用于自然誘導(dǎo)強(qiáng)抗炎調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)的信號(hào)分子，所述調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)能夠防止或減輕變應(yīng)性疾病的癥狀。已經(jīng)通過(guò)研究提出了蠕蟲(chóng)感染和變應(yīng)性疾病風(fēng)險(xiǎn)降低之間的直接因果關(guān)系的證據(jù)，所述研究表明在地方性區(qū)域的抗蠕蟲(chóng)治療有效地去除了高蠕蟲(chóng)負(fù)擔(dān)，但是這種治療在時(shí)間上與對(duì)變態(tài)原的陽(yáng)性皮膚反應(yīng)(特應(yīng)性)的增加相關(guān)。
上述疾病復(fù)合物(A-G)的發(fā)生在不同程度上已經(jīng)在家畜中有所描述，盡管背景和臨床表現(xiàn)與在人身上的同樣疾病可能不同。然而，有很有力的理由相信動(dòng)物的這些疾病也可以根據(jù)本發(fā)明進(jìn)行治療。
需要上述自身免疫病和變應(yīng)性疾病以及其治療和改善的證據(jù)，來(lái)決定治療的需求和監(jiān)測(cè)治療進(jìn)展。下面的方法可以用來(lái)測(cè)量人身上上述疾病的臨床參數(shù)。
1.炎性腸病(IBD) 炎癥的評(píng)價(jià)在小鼠中，疾病的臨床證據(jù)包括體重減輕、腹瀉、直腸脫垂和腸炎的組織學(xué)證據(jù)。因此，這些參數(shù)的改善將明顯改善疾病。
為了將動(dòng)物模型中的腸炎分級(jí)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方法，將組織取出、夾心打卷(Swisss-roll)并包埋于石蠟中。用蘇木精和伊紅染色切片。由單個(gè)病理學(xué)家以盲式(blinded fashion)采用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將結(jié)腸炎癥的程度半定量地分為0至4級(jí)0＝?jīng)]有炎癥；1＝低水平炎癥；2＝中間水平的炎癥；3＝伴有壁增厚的高水平炎癥；和4＝透壁性浸潤(rùn)，和杯狀細(xì)胞的減少并伴有壁增厚。
為計(jì)數(shù)肥大細(xì)胞，通過(guò)夾心打卷(Swiss-roll)技術(shù)制備來(lái)自單個(gè)小鼠的腸組織樣品，將其固定在卡諾氏固定劑(Carnoy’s fixative)中，以石蠟包埋并用阿爾新藍(lán)和番紅染色處理。掃描給定切片的五十個(gè)相鄰視野中的固有層和肌肉層中的粘膜肥大細(xì)胞。通過(guò)用阿爾新藍(lán)將肥大細(xì)胞的區(qū)別性細(xì)胞內(nèi)顆粒染色來(lái)鑒定肥大細(xì)胞。所有樣品是盲式評(píng)價(jià)的。
利用不同的臨床、試驗(yàn)室和組織學(xué)標(biāo)準(zhǔn)來(lái)監(jiān)測(cè)人的疾病活性。存在一些建立很好的監(jiān)測(cè)臨床參數(shù)的IBD疾病活性指標(biāo)，比如腹瀉頻次和腹痛。一個(gè)用于評(píng)價(jià)克羅恩病的尤其有用的指標(biāo)是克羅恩病活性指數(shù)(或CDAI)。CDAI整合了8個(gè)涉及疾病活性的變量，并且已經(jīng)用于克羅恩病治療劑的最近研究中。它包括液態(tài)或非常軟的大便的量、腹痛或痙攣的嚴(yán)重程度、一般健康狀況、該疾病的腸外表現(xiàn)形式的存在、腹部腫塊的存在與否、止瀉藥的使用、血細(xì)胞比容和體重。綜合得分為0至約600。得分低于150表明好轉(zhuǎn)，得分高于450表示病情嚴(yán)重。
在治療之前和之后還可以采用經(jīng)測(cè)試的、可接受的和疾病特異性的生活質(zhì)量問(wèn)卷來(lái)評(píng)價(jià)治療進(jìn)展。Irvine炎性腸病問(wèn)卷是一個(gè)有32個(gè)項(xiàng)目的問(wèn)卷。就關(guān)于腸功能(例如稀便和腹痛)、全身性征狀(疲勞和改變的睡眠模式)、社會(huì)功能(工作出勤率和取消社會(huì)活動(dòng)的需求)和情緒狀況(生氣、抑郁或急躁)方面評(píng)估生活質(zhì)量。得分為32至224，較高得分表示生活質(zhì)量較好。好轉(zhuǎn)的患者通常得分在170至190之間。
內(nèi)窺鏡檢查、x射線(xiàn)和對(duì)腸病活性的組織學(xué)評(píng)價(jià)也是有用的。C反應(yīng)蛋白水平和血細(xì)胞沉淀率也可以作為炎癥的全身性指標(biāo)來(lái)監(jiān)測(cè)。
2.類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎 炎癥的評(píng)價(jià)對(duì)于患有膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎的小鼠，每隔一天檢查小鼠，并且如下對(duì)它們的爪評(píng)分0，正常；1，紅斑和局限在踝關(guān)節(jié)或腳趾的輕微腫脹；2，紅斑和從踝延伸到足中部的輕微腫脹；3，紅斑和從踝延伸到跖骨關(guān)節(jié)的嚴(yán)重腫脹；和4，僵硬變形，并伴有關(guān)節(jié)腫脹。這些關(guān)節(jié)炎評(píng)分可以和關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)的組織學(xué)變化相關(guān)。治療成功導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎評(píng)分的下降，并伴有組織學(xué)情況的改善。
對(duì)于降植烷誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎，可以使用測(cè)微計(jì)測(cè)量關(guān)節(jié)來(lái)檢查腫脹。對(duì)于人類(lèi)，通過(guò)測(cè)量關(guān)節(jié)腫脹、紅斑、活動(dòng)受限和疼痛來(lái)對(duì)RA評(píng)分。此外，根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，可以分析滑液的細(xì)胞因子和炎性蛋白濃度以及白細(xì)胞的組成和功能。根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，滑液活組織檢查提供組織用于組織學(xué)分析。
3.紅斑狼瘡 炎癥的評(píng)價(jià)免疫系統(tǒng)的正常發(fā)育和功能非常依賴(lài)于通過(guò)稱(chēng)為細(xì)胞凋亡的過(guò)程除去不期望的細(xì)胞。穿過(guò)特異性細(xì)胞表面分子和其受體的細(xì)胞間相互作用經(jīng)常引發(fā)此過(guò)程。一個(gè)這樣的系統(tǒng)被稱(chēng)為FAS和FAS配體。FAS(LPR-I小鼠)或FAS配體(GLD-I小鼠)缺乏的小鼠發(fā)生自身免疫病，如狼瘡。
LPR或GLD小鼠的群體被保持在置于特殊的不合病原體條件下的微隔離器安置單元內(nèi)。這些小鼠可能自發(fā)地產(chǎn)生自身免疫性，但是，更可預(yù)期地是在人工誘導(dǎo)之后。為了誘導(dǎo)疾病，對(duì)8周齡的小鼠注射試劑，比如姥鮫烷。在兩個(gè)月內(nèi)，小鼠出現(xiàn)自身免疫病。對(duì)判斷小鼠和人的疾病誘導(dǎo)和改善有用的很多臨床、組織學(xué)和免疫學(xué)標(biāo)準(zhǔn)在本領(lǐng)域中是眾所周知的。
4.兒童胰島素依賴(lài)型糖尿病(1型) 炎癥的評(píng)價(jià)由于胰腺β細(xì)胞被自身免疫破壞，NOD小鼠產(chǎn)生類(lèi)似于人的1型糖尿病。根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法，臨床、生物化學(xué)、免疫學(xué)和組織學(xué)檢查可以評(píng)價(jià)小鼠中的疾病誘導(dǎo)和改善。
5.結(jié)節(jié)病 炎癥的評(píng)價(jià)在肺炎的珠栓塞模型中，抗原與瓊脂糖珠偶聯(lián)，通過(guò)注射進(jìn)小鼠尾靜脈中使得小鼠的肺發(fā)生栓塞。通常使動(dòng)物對(duì)偶聯(lián)抗體事先致敏。宿主的免疫系統(tǒng)對(duì)侵入性的珠發(fā)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答。這些可能持續(xù)幾周的局部炎癥應(yīng)答可以從組織學(xué)上檢查尺寸。它們還可以被從組織分離，用于研究細(xì)胞組成和細(xì)胞因子產(chǎn)生。此外，肺門(mén)淋巴結(jié)和脾容易用于實(shí)驗(yàn)。
結(jié)節(jié)病，一種通常涉及肺的人類(lèi)疾病。結(jié)節(jié)病和這種疾病的程度的確診可以根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來(lái)進(jìn)行。肺功能試驗(yàn)可以評(píng)估肺的依從型和功能。另外，支氣管灌洗得到在發(fā)炎期間滲透到支氣管樹(shù)的炎癥細(xì)胞?？梢匝芯窟@些細(xì)胞的組成和功能。肺部滲透和肺門(mén)淋巴結(jié)病是結(jié)節(jié)病的特征。因此，周期性的胸部x射線(xiàn)或CT掃描可以幫助評(píng)價(jià)疾病活性。血清學(xué)試驗(yàn)(例如根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法測(cè)量血管收縮素轉(zhuǎn)化酶的活性)可以用于度量疾病程度和活性。
6.多發(fā)性硬化 炎癥的評(píng)價(jià)通過(guò)重復(fù)注射適合適的致敏性髓鞘質(zhì)抗原而在易感小鼠中誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)性自身免疫腦脊髓炎。根據(jù)下面的標(biāo)準(zhǔn)臨床評(píng)價(jià)小鼠0，無(wú)疾??；1，尾部無(wú)力；2，后肢虛弱；3，后肢癱瘓；4；后肢癱瘓和前肢癱瘓或虛弱；5，瀕死。對(duì)于組織學(xué)分析而言，將脊髓和大腦取出并固定在福爾馬林中。將石蠟包埋切片染色并且在光學(xué)顯微鏡下檢查?？梢泽w外研究分散的脾細(xì)胞和來(lái)自其它區(qū)域的細(xì)胞。這些參數(shù)可以幫助衡量疾病改善和好轉(zhuǎn)。
對(duì)于人，MS疾病活性通過(guò)監(jiān)測(cè)神經(jīng)信號(hào)和癥狀的進(jìn)展和恢復(fù)(remittance)來(lái)度量。應(yīng)用最廣泛的結(jié)果測(cè)量被稱(chēng)為擴(kuò)展殘疾狀況評(píng)分。根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法分析的腦脊液蛋白組成和細(xì)胞含量也可以用于監(jiān)測(cè)疾病活性。此外，連續(xù)的MRI研究顯示出新的釓增強(qiáng)的腦損傷。
7.銀屑病 銀屑病可以簡(jiǎn)單地通過(guò)估計(jì)受到皮炎感染的皮膚百分比來(lái)衡量，或者更充分地，通過(guò)反映一段時(shí)間內(nèi)皮膚損傷的強(qiáng)度并結(jié)合受感染皮膚區(qū)域大小的PASI(銀屑病活性和嚴(yán)重程度指數(shù))評(píng)分來(lái)測(cè)量。
8.孤獨(dú)癥 孤獨(dú)癥是一種行為障礙，該癥狀的嚴(yán)重程度僅可通過(guò)行為研究來(lái)評(píng)分。
9.變態(tài)反應(yīng) 變態(tài)反應(yīng)是伴有例如腫脹、打噴嚏和流淚等急性癥狀的疾病復(fù)合體，并且疾病的評(píng)分通過(guò)測(cè)量暴露于相關(guān)過(guò)敏原的特殊癥狀的嚴(yán)重程度來(lái)進(jìn)行。
根據(jù)本發(fā)明的組合物 根據(jù)本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于儲(chǔ)存蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)(例如豬鞭蟲(chóng)(Trichuris suis))卵的組合物，所述組合物還包含在0℃至30℃或5℃至環(huán)境溫度的溫度下pH值低于7的液態(tài)載體。
所述液態(tài)載體可以是硫酸(H2SO4)，例如pH低于6的H2SO4，例如pH為0～6的H2SO4，例如pH為0～5的H2SO4，例如pH為0～1的H2SO4，例如pH為1～2的H2SO4，例如pH為2～3的H2SO4，例如pH為3～4的H2SO4，例如pH為4～5的H2SO4，例如pH為5～6的H2SO4。優(yōu)選pH為0～2。還可以使用其它酸性液態(tài)載體和添加抗生素。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)可以選自線(xiàn)蟲(chóng)屬例如蛔蟲(chóng)屬(Ascaris)、蟯蟲(chóng)屬(Enterobius)、鞭蟲(chóng)屬(Trichuris)、鉤蟲(chóng)屬(Ancylostoma)、板口線(xiàn)蟲(chóng)屬(Necator)和類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)屬(Strongyloides)。本發(fā)明的第一方面還包括一個(gè)實(shí)施方案，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是扁形動(dòng)物。根據(jù)本發(fā)明第一方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)可以選自吸蟲(chóng)和絳蟲(chóng)。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自寄生蟲(chóng)屬姜片吸蟲(chóng)屬(Fasciolopsis)、棘口吸蟲(chóng)屬(Echinostoma)、異形吸蟲(chóng)屬(Heterophyes)、支睪吸蟲(chóng)屬(Clonorchis)、后睪吸蟲(chóng)屬(Opisthorchis)、片吸蟲(chóng)屬(Fasciola)、血吸蟲(chóng)屬(Schistosoma)、裂頭絳蟲(chóng)屬(Diphyllobothrium)、帶絳蟲(chóng)屬(Taenia)和膜殼絳蟲(chóng)屬(Hymenolepsis)。
根據(jù)本發(fā)明第一方面的另一個(gè)實(shí)施方案，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自絲蟲(chóng)寄生蟲(chóng)和肺吸蟲(chóng)。
另外，本發(fā)明的第一方面還包括一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自如下屬鞭蟲(chóng)屬(Trichuris)、日?qǐng)A線(xiàn)蟲(chóng)屬(Nippostronglylus)、螺旋線(xiàn)蟲(chóng)屬(Heligmosomoide)、膜殼絳蟲(chóng)屬(Hymenolepsis)、管圓線(xiàn)蟲(chóng)屬(Angiostrongylus)、蛔蟲(chóng)屬(Ascaris)、弓蛔蟲(chóng)屬(Toxascaris)、顎口線(xiàn)蟲(chóng)屬(Gnathostoma)、鉤蟲(chóng)屬(Ancylostoma)、異尖線(xiàn)蟲(chóng)屬(Anisakis)和偽低新蛔蟲(chóng)屬(Pseudoterranova)。
在本發(fā)明第一方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是豬鞭蟲(chóng)。在此，所述組合物可以通過(guò)包括下列步驟的方法獲得用豬鞭蟲(chóng)感染動(dòng)物，例如豬；在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間后，例如接種后約5～30周之后或約5～11周之后，例如約7～9周之后，從動(dòng)物糞便中分離卵；向所分離的卵添加在0℃至30℃或5℃至環(huán)境溫度的溫度范圍內(nèi)pH值低于7的液態(tài)載體。優(yōu)選所述分離步驟包括清洗程序，即通過(guò)利用大直徑(例如直徑450mm)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的篩(網(wǎng)眼大小例如1000、500、250、100、80、70、60、50和20μm)的一系列清洗步驟，其中使用網(wǎng)眼尺寸減小的篩重復(fù)清洗步驟，從而使卵被充分清洗并從例如糞便材料的未消化植物材料中分離。優(yōu)選所述寄生蟲(chóng)卵包含在篩出的部分中，并且顆粒直徑為20至50μm。
當(dāng)所述寄生蟲(chóng)卵是豬鞭蟲(chóng)種的卵(TSO)時(shí)，本發(fā)明的第一方面還包括一個(gè)實(shí)施方案，其中所述組合物通過(guò)包括以下步驟的方法而得到從豬腸或腸內(nèi)容物中直接分離的蠕蟲(chóng)中回收寄生蟲(chóng)卵，并且將所述卵添加到在0℃至30℃的溫度范圍內(nèi)pH值低于7的液態(tài)載體中。在此，回收所述卵之前，可以將所分離的蠕蟲(chóng)在任選地包含一種或多種抗生素的介質(zhì)中清洗一次或多次。優(yōu)選將所分離的蠕蟲(chóng)在體外在任選地補(bǔ)充抗生素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中保持，其中所分離的蠕蟲(chóng)在所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中產(chǎn)卵。所述卵可以在被添加到所述液態(tài)載體之前，通過(guò)在篩上(例如50μm篩)過(guò)濾而從所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中分離出來(lái)。
根據(jù)本發(fā)明的方法 根據(jù)本發(fā)明的第二方面，提供了用于分離和儲(chǔ)存來(lái)自豬鞭蟲(chóng)的卵的方法，所述本發(fā)明第二方面的方法包括下列步驟 a)1)體外分離寄生蟲(chóng)卵，其中從豬腸取出的蠕蟲(chóng)在合適的培養(yǎng)基中產(chǎn)卵；或者2)從豬的糞便材料分離寄生蟲(chóng)卵，其中所述卵由發(fā)現(xiàn)于腸內(nèi)的蠕蟲(chóng)排出，和 b)將分離的和任選地清洗的卵儲(chǔ)存于酸性介質(zhì)中，例如H2SO4，例如pH為0～2或0～1或1～2的H2SO4，使得卵發(fā)育(孵化)并滅活任何污染細(xì)菌和病毒。
根據(jù)本發(fā)明的第三方面，提供了用于分離和儲(chǔ)存來(lái)自豬鞭蟲(chóng)的卵的方法，所述方法包括下列步驟 a)1)體外分離寄生蟲(chóng)卵，其中從豬腸取出的蠕蟲(chóng)在合適的培養(yǎng)基中產(chǎn)卵；或者2)從豬的糞便材料分離寄生蟲(chóng)卵，其中所述卵由發(fā)現(xiàn)于腸內(nèi)的蠕蟲(chóng)排出，和， b)過(guò)濾所分離的材料以減少顆粒污染和外來(lái)豬寄生蟲(chóng)的卵， c)浮選所分離的材料以減少顆粒污染， d)在酸性介質(zhì)(例如硫酸(H2SO4)，例如pH為0～2或0～1或1～2的H2SO4)中清洗所分離的材料以通過(guò)稀釋和滅活來(lái)減少外來(lái)病原體(細(xì)菌、真菌和病毒)的數(shù)量， e)將所分離和清洗的卵儲(chǔ)存在酸性介質(zhì)(例如H2SO4，例如pH為0～2或0～4或1～2的H2SO4)中，使得卵發(fā)育(孵化)和進(jìn)一步滅活和防止細(xì)菌、真菌和病毒的生長(zhǎng)， f)過(guò)濾和浮選含孵化的卵來(lái)分離具有最高孵化度(藥物原材料的生物潛能(biotic potential))的卵部分，和 g)將所分離和孵化的卵儲(chǔ)存在酸性介質(zhì)(例如H2SO4，例如pH為0～2或0～1或1～2的H2SO4)中，從而保持生物潛能和防止病原體生長(zhǎng)。
根據(jù)本發(fā)明第二和第三方面的方法，都優(yōu)選用于儲(chǔ)存所述卵的所述酸性介質(zhì)是pH值低于7的液態(tài)載體。所述液態(tài)載體可以是硫酸(H2SO4)，例如pH低于6的H2SO4，例如pH為0～6的H2SO4，例如pH為0～5的H2SO4，例如pH為0～1的H2SO4，例如pH為1～2的H2SO4，例如pH為2～3的H2SO4，例如pH為3～4的H2SO4，例如pH為4～5的H2SO4，例如pH為5～6的H2SO4。優(yōu)選pH為0～2。還可以使用其它酸性液態(tài)載體和添加抗生素。
根據(jù)本發(fā)明第二和第三方面的方法，這些方法都還涉及進(jìn)一步包括下列步驟的實(shí)施方案，其中儲(chǔ)存在酸性介質(zhì)中的卵由未孵化的卵(包含未分化的細(xì)胞)發(fā)育成完全孵化的卵(包含感染性幼蟲(chóng)階段)，從而得到孵化的卵在酸性介質(zhì)中的懸浮液。當(dāng)包含孵化的卵的所述酸性介質(zhì)是pH為0～2的H2SO4時(shí)，可以口服所述懸浮液。
根據(jù)本發(fā)明第三方面的方法，根據(jù)一個(gè)實(shí)施方案，步驟b)是任選的。也在本發(fā)明第三方面的一個(gè)實(shí)施方案中，步驟c)是任選的。本發(fā)明第三方面還涉及其中步驟d)是任選的和/或其中步驟f)是任選的的實(shí)施方案。
根據(jù)本發(fā)明的第四方面，提供了用于制備包含蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品的藥物組合物的方法，所述方法包括下列步驟 (1)在特殊的不含人病原體的環(huán)境中飼養(yǎng)預(yù)備動(dòng)物； (2)從所述預(yù)備動(dòng)物得到第一蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物； (3)在體外或從糞便培養(yǎng)物中從所述第一蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物提取卵； (4)在另外包含酸性液態(tài)載體的組合物中儲(chǔ)存來(lái)自所述第一蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物的未孵化的卵；和 (5)在適當(dāng)條件下在所述酸性液態(tài)載體中孵化來(lái)自所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物的卵以形成藥物組合物。
在本發(fā)明第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括以下步驟(6)在適當(dāng)條件下在所述酸性液態(tài)載體中儲(chǔ)尋來(lái)自所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物的未孵化的卵。
對(duì)于本發(fā)明第四方面，優(yōu)選所述酸性液態(tài)載體的pH值低于7。所述液態(tài)載體可以是硫酸(H2SO4)，例如pH低于6的H2SO4，例如pH為0～6的H2SO4，例如pH為0～5的H2SO4，例如pH為0～1的H2SO4，例如pH為1～2的H2SO4，例如pH為2～3的H2SO4，例如pH為3～4的H2SO4，例如pH為4～5的H2SO4，例如pH為5～6的H2SO4。優(yōu)選pH為0～2。還可以使用其它酸性液態(tài)載體和添加抗生素。
在本發(fā)明第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，分離蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的步驟包括得到所述預(yù)備動(dòng)物的大便，并且從所述大便分離蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)。在此，分離蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的步驟可以包括從所述預(yù)備動(dòng)物中取出組織，并且從所述組織分離蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)或其卵。優(yōu)選地，所述組織可以是內(nèi)部器官例如腸。還優(yōu)選分離所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的步驟進(jìn)一步包含下列步驟 (1)解剖來(lái)自所述預(yù)備動(dòng)物的組織，從而可以肉眼可見(jiàn)的分離蠕蟲(chóng)以制備蠕蟲(chóng)在其中產(chǎn)卵的蠕蟲(chóng)培養(yǎng)物； (2)過(guò)濾所述蠕蟲(chóng)培養(yǎng)物以產(chǎn)生含有卵的濾液；和 (3)從所述濾液中分離卵，由此從所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物提取卵。
根據(jù)本發(fā)明第四方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品可以包含線(xiàn)蟲(chóng)寄生蟲(chóng)。
本發(fā)明的第四方面還包括一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自下列屬的寄生蟲(chóng)蛔蟲(chóng)屬、蟯蟲(chóng)屬、鞭蟲(chóng)屬、鉤蟲(chóng)屬、板口線(xiàn)蟲(chóng)屬、類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)屬。
在本發(fā)明的第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含是扁形動(dòng)物的寄生蟲(chóng)。在本發(fā)明的第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自吸蟲(chóng)和絳蟲(chóng)的寄生蟲(chóng)。
在本發(fā)明第四方面的一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案中，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自下列屬的寄生蟲(chóng)姜片吸蟲(chóng)屬、棘口吸蟲(chóng)屬、異形吸蟲(chóng)屬、支睪吸蟲(chóng)屬、后睪吸蟲(chóng)屬、片吸蟲(chóng)屬、血吸蟲(chóng)屬、裂頭絳蟲(chóng)屬、帶絳蟲(chóng)屬和膜殼絳蟲(chóng)屬。
在本發(fā)明第四方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自絲蟲(chóng)寄生蟲(chóng)和肺吸蟲(chóng)的寄生蟲(chóng)。
另外，本發(fā)明第四方面包括一個(gè)或多個(gè)實(shí)施方案，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自下列屬的寄生蟲(chóng)鞭蟲(chóng)屬、日?qǐng)A線(xiàn)蟲(chóng)屬、螺旋線(xiàn)蟲(chóng)屬、膜殼絳蟲(chóng)屬、管圓線(xiàn)蟲(chóng)屬、蛔蟲(chóng)屬、弓蛔蟲(chóng)屬、顎口線(xiàn)蟲(chóng)屬、鉤蟲(chóng)屬、異尖線(xiàn)蟲(chóng)屬和偽低新蛔蟲(chóng)屬。
在本發(fā)明第四方面的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是豬鞭蟲(chóng)。
根據(jù)本發(fā)明的第五方面，提供用于預(yù)防性、改善性或治愈性治療個(gè)體人或動(dòng)物中自身免疫病或變應(yīng)性疾病的方法，所述方法包括下列步驟提供根據(jù)選自本發(fā)明第一方面的任意實(shí)施方案中的實(shí)施方案的組合物；從腸中分離蠕蟲(chóng)；在適于生長(zhǎng)的產(chǎn)卵條件下孵育所分離的蠕蟲(chóng)；從介質(zhì)中分離卵或從腸內(nèi)容物中分離卵；將所述卵轉(zhuǎn)移到酸性液態(tài)載體中從而得到蠕蟲(chóng)卵的懸浮液；將所述卵與藥學(xué)上可接受的載體混合以產(chǎn)生藥物組合物；以及以藥學(xué)有效量將所述藥物組合物施用給患有自身免疫病或變應(yīng)性疾病的個(gè)體(人或動(dòng)物)，或者預(yù)防這些疾病的發(fā)生。
根據(jù)本發(fā)明的第六方面，提供了用于治療個(gè)體人或動(dòng)物中自身免疫病或變應(yīng)性疾病的方法，所述方法包括下列步驟提供根據(jù)選自本發(fā)明第一方面的任意實(shí)施方案中的一個(gè)實(shí)施方案的組合物；在適當(dāng)?shù)臈l件下在酸性液態(tài)載體中孵化所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的卵，從而得到藥物組合物；以及以藥學(xué)有效量將所述藥物組合物施用給患有自身免疫疾病或變應(yīng)性病的個(gè)體(人或動(dòng)物)，或者預(yù)防這些疾病的發(fā)生。
根據(jù)本發(fā)明第五或第六方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述自身免疫疾病可以是炎性腸病。所述炎性腸病可以是克羅恩病(CD)或潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。
根據(jù)本發(fā)明第五或第六方面的實(shí)施方案，所述自身免疫疾病可以是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
根據(jù)本發(fā)明第五或第六方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述自身免疫疾病可以是紅斑狼瘡。
根據(jù)本發(fā)明第五或第六方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述自身免疫疾病可以是1型糖尿病。
根據(jù)本發(fā)明第五或第六方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述自身免疫疾病可以是結(jié)節(jié)病。本發(fā)明的第五或第六方面還包括其中所述自身免疫疾病是多發(fā)性硬化的實(shí)施方案。
根據(jù)本發(fā)明第五或第六方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述自身免疫疾病可以是銀屑病，或所述自身免疫疾病可以是孤獨(dú)癥。
根據(jù)本發(fā)明第五或第六方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述自身免疫疾病可以是變態(tài)反應(yīng)。
根據(jù)本發(fā)明的第七方面，提供了治療個(gè)體人或動(dòng)物中過(guò)度免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括下列步驟提供根據(jù)選自本發(fā)明第一方面的任意實(shí)施方案中的一個(gè)實(shí)施方案的組合物；在適當(dāng)?shù)臈l件下在酸性液態(tài)載體中孵化所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的卵，從而得到藥物組合物；以及以足以減少個(gè)體(人或動(dòng)物)中過(guò)度免疫應(yīng)答的量施用所述藥物組合物。在此，所述過(guò)度免疫應(yīng)答可以是增強(qiáng)的Th1免疫應(yīng)答。
根據(jù)本發(fā)明的第八方面，提供了用于延長(zhǎng)個(gè)體(人或動(dòng)物)中同種異體移植器官存活的方法，所述方法包括通過(guò)給個(gè)體施用有效Th2上調(diào)量的包含Th2上調(diào)活性的藥物組合物，來(lái)下調(diào)個(gè)體人或動(dòng)物中的Th1免疫活性，所述方法包括下列步驟提供根據(jù)選自本發(fā)明第一方面的任意實(shí)施方案中的一個(gè)實(shí)施方案的組合物；在適當(dāng)?shù)臈l件下在酸性液態(tài)載體中孵化所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的卵，從而得到包含Th2上調(diào)活性的藥物組合物；以及以足以通過(guò)下調(diào)個(gè)體中的Th1活性來(lái)延長(zhǎng)個(gè)體中同種異體移植器官存活的量施用所述藥物組合物。
在本發(fā)明第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述治療是改善性、預(yù)防性或治愈性的。
本發(fā)明第五、第六、第七或第八方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述個(gè)體是哺乳動(dòng)物，例如人或家畜。
根據(jù)本發(fā)明的第九方面，提供了根據(jù)選自本發(fā)明第一方面的任意實(shí)施方案中的一個(gè)實(shí)施方案的組合物在制備用于治療需要所述治療的個(gè)體人或動(dòng)物中自身免疫病或變應(yīng)性疾病的藥物或藥物組合物中的用途。在此，所述自身免疫病可以是炎性腸病。所述炎性腸病可以是克羅恩病(CD)或潰瘍性結(jié)腸炎(UC)。
根據(jù)本發(fā)明第九方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述自身免疫疾病可以是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
本發(fā)明第九方面還包括其中所述自身免疫疾病可以是紅斑狼瘡的實(shí)施方案。
在本發(fā)明第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述自身免疫病可以是1型糖尿病。另外，本發(fā)明第九方面還包括其中所述自身免疫病可以是結(jié)節(jié)病的實(shí)施方案，以及其中所述自身免疫病是多發(fā)性硬化的實(shí)施方案。
在本發(fā)明第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述自身免疫疾病可以是銀屑病，或所述自身免疫病可以是孤獨(dú)癥。
根據(jù)本發(fā)明第九方面的一個(gè)實(shí)施方案，所述自身免疫病可以是變態(tài)反應(yīng)。
在本發(fā)明第九方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物的制備包括選自本發(fā)明第四方面的任意實(shí)施方案的方法。
根據(jù)本發(fā)明的第十方面，提供了根據(jù)選自本發(fā)明第一方面的任意實(shí)施方案中的一個(gè)實(shí)施方案的組合物在制備用于治療需要所述治療的個(gè)體人或動(dòng)物中過(guò)度免疫應(yīng)答的藥物或藥物組合物中的用途。在此，所述過(guò)度免疫應(yīng)答可以是增強(qiáng)的Th1應(yīng)答。
在本發(fā)明第九或第十方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述治療是改善性、預(yù)防性或治愈性的。在本發(fā)明第九或第十方面的一個(gè)實(shí)施方案中，所述個(gè)體是哺乳動(dòng)物，例如人或家畜。
參考下面的附圖和優(yōu)選實(shí)施方案的描述，本發(fā)明其它的特征和優(yōu)點(diǎn)將更顯而易見(jiàn)。



圖1是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的流程圖，舉例說(shuō)明從豬鞭蟲(chóng)感染的豬的糞便(腸蠕蟲(chóng)原位留下)或培養(yǎng)物中的蠕蟲(chóng)(所分離的蠕蟲(chóng)體外留下)分離寄生蟲(chóng)卵的方法， 圖2是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的流程圖，舉例說(shuō)明在豬鞭蟲(chóng)卵的懸浮液中減少顆粒污染和除去外來(lái)寄生蟲(chóng)卵的方法， 圖3是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的流程圖，舉例說(shuō)明孵化、儲(chǔ)存和保存待用作口服藥物制劑原材料的豬鞭蟲(chóng)卵的方法，以及 圖4舉例說(shuō)明了豬鞭蟲(chóng)卵的生命周期。

具體實(shí)施例方式 下面(步驟1～9)給出了對(duì)涉及本發(fā)明的實(shí)施方案的詳細(xì)描述。所述實(shí)施方案包括回收寄生蟲(chóng)卵(1，2)、減少顆粒污染(3，4)、除去外來(lái)寄生蟲(chóng)卵(5)、在酸性介質(zhì)中清洗(6)、孵化寄生蟲(chóng)卵(7)、儲(chǔ)存寄生蟲(chóng)卵(8)和施用寄生蟲(chóng)卵懸浮液(9)。
1.從糞便(原位蠕蟲(chóng))中回收寄生蟲(chóng)卵 被常見(jiàn)的腸蠕蟲(chóng)豬鞭蟲(chóng)感染的豬在被接種后約7～9周會(huì)將寄生蟲(chóng)卵排泄到豬的糞便中。這些卵可以從糞便中大量收集。分離過(guò)程依賴(lài)于清洗過(guò)程，所述清洗過(guò)程在一系列大直徑(例如直徑450mm)經(jīng)過(guò)認(rèn)證的鋼篩(網(wǎng)眼大小例如1000、500、250、100、80、70、60、50和20μm)上進(jìn)行。在網(wǎng)眼大小減小的篩上重復(fù)清洗步驟，可以將卵從糞便材料的未消化的植物纖維中有效清洗下來(lái)。所述寄生蟲(chóng)卵包含在顆粒直徑為20～50μm的篩出的部分中。將20～50μm的部分重新懸浮在H2SO4(例如pH 0～2)中，最后添加抗生素，以將病原體生長(zhǎng)降低至最小，并且在下面的步驟3和/或4中進(jìn)一步處理。
2.從蠕蟲(chóng)(體外蠕蟲(chóng))中回收寄生蟲(chóng)卵 作為替代，卵可以以較少數(shù)量從由豬腸直接分離的蠕蟲(chóng)中回收。在含有抗生素的介質(zhì)中重復(fù)清洗之后，在體外保持使蠕蟲(chóng)保持在含有抗生素或其它防腐劑的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，蠕蟲(chóng)在所述培養(yǎng)基中產(chǎn)卵。所述卵通過(guò)在50μm的篩上過(guò)濾，隨后在20μm的篩上過(guò)濾來(lái)分離。得到的20～50μm的部分在下面的步驟3和/或4中進(jìn)一步處理。
3.通過(guò)浮選減少顆粒污染 來(lái)自步驟1和/或步驟2的卵懸浮液構(gòu)成用于進(jìn)一步降低不期望顆粒含量的起始材料。在這些懸浮液中，所有顆粒為20～50μm，但是卵的密度比大多數(shù)其它顆粒(植物纖維和礦物顆粒)的密度要低。因此，所述卵可以漂浮在比重大于1.18g/ml的浮選流體中，所述浮選流體例如飽和的鹽-糖懸浮液，例如氯化鈉-葡萄糖，或者所述卵可以漂浮在硫酸鎂或氯化鋅溶液中。通過(guò)離心，卵將漂浮，且碎片沉淀。分離漂浮的卵，在20μm的篩上清洗并且重新懸浮在H2SO4(例如pH 0～2)中。
4.通過(guò)過(guò)濾減少顆粒污染 從步驟1、2和/或3中得到的卵懸浮液，包含大小為20～50μm的顆粒，將所述卵懸浮液通過(guò)在經(jīng)過(guò)認(rèn)證的網(wǎng)眼大小為30～35μm的一次性尼龍網(wǎng)上過(guò)濾來(lái)進(jìn)一步凈化，在20～25μm的尼龍網(wǎng)上回收卵。5.通過(guò)過(guò)濾除去外來(lái)寄生蟲(chóng)卵 在30～35μm過(guò)濾懸浮液確保了截留可能已經(jīng)存在于初始糞便溶液中的外來(lái)寄生蟲(chóng)卵。雖然豬鞭蟲(chóng)卵的長(zhǎng)度高達(dá)80μm，但它們的寬度只有約23～30μm，呈細(xì)長(zhǎng)的檸檬形，在經(jīng)過(guò)篩的溶液流中保持沿縱向方向。因此，實(shí)驗(yàn)已表明豬鞭蟲(chóng)卵會(huì)通過(guò)30μm的篩。其它具有感染豬潛力的卵則不會(huì)通過(guò)豬蛔蟲(chóng)(50～84μm)、后圓線(xiàn)蟲(chóng)(Metastrongylus)(38～64μm)、類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)(30～57μm)、球首線(xiàn)蟲(chóng)(Globocephalus)(40～72μm)、食道口線(xiàn)蟲(chóng)(Oesophagostomum)(38～83μm)、豬圓線(xiàn)蟲(chóng)(Hyostrongylus)(31～76μm)、巨吻棘頭蟲(chóng)(Macracanthorhynchus)(65～110μm)。常見(jiàn)的貓和狗的蛔蟲(chóng)弓蛔蟲(chóng)的卵(75～90μm)也將被截留。
6.利用H2SO4(例如pH 0～2)的清洗和病原體滅活 過(guò)濾之后，將所述懸浮液在H2SO4(例如pH 0～2)中多次清洗，以通過(guò)稀釋減少任意病原體或者病原體孢子。利用H2SO4(例如pH 0～2)防止病原體的進(jìn)一步生長(zhǎng)。
7.豬鞭蟲(chóng)卵(TSO)在H2SO4(例如pH 0～2)中的孵化 將所述懸浮液儲(chǔ)存在15～30℃溫度下的孵化器中，以使卵從未孵化的發(fā)育成孵化的。根據(jù)孵化溫度，孵化的過(guò)程需要2～6個(gè)月。
8.豬鞭蟲(chóng)卵(TSO)在H2SO4(例如pH 0至2)中的儲(chǔ)存 孵化之后，藥物原材料可以?xún)?chǔ)存在1～10℃的溫度下，而在高達(dá)數(shù)年的時(shí)間內(nèi)感染性沒(méi)有變化。因此，卵內(nèi)部的幼蟲(chóng)在這段時(shí)間內(nèi)將保持感染性。酸將防止病原體的生長(zhǎng)。
9.H2SO4(例如pH 0～2)中卵懸浮液(TSO)的口服 包含孵化的蠕蟲(chóng)卵(含有感染性幼蟲(chóng))的懸浮液可以作為口服懸浮液在膠囊中或者通過(guò)其它方式直接施用給個(gè)體(人或動(dòng)物)。
在圖1～3顯示的流程圖中進(jìn)一步描述了涉及本發(fā)明的方法和/或?qū)嵤┓桨浮?br> 圖1是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的流程圖，舉例說(shuō)明從豬鞭蟲(chóng)感染的豬的糞便(原位蠕蟲(chóng))或腸蠕蟲(chóng)(體外蠕蟲(chóng))分離寄生蟲(chóng)卵的方法。
圖1中，起點(diǎn)是用寄生蟲(chóng)材料101接種豬。然后為了回收寄生蟲(chóng)卵，可以采取兩個(gè)途徑。第一個(gè)途徑在圖1中對(duì)應(yīng)上面概述的步驟2并且包括下列步驟取出腸102a；得到蠕蟲(chóng)103a；清洗蠕蟲(chóng)104a；在用于培養(yǎng)蠕蟲(chóng)的培養(yǎng)基中體外回收卵105a；將卵過(guò)濾和重新懸浮在硫酸(H2SO4)中以使病原體生長(zhǎng)最小化106a；以及以降低原材料的顆粒污染107結(jié)束。第二個(gè)途徑在圖1中對(duì)應(yīng)上面討論的步驟1并且包括下列步驟收集糞便材料102b；將糞便材料懸浮并過(guò)篩103b；回收過(guò)篩的部分104b；從糞便材料體外分離卵105b；將卵過(guò)濾和重新懸浮在硫酸(H2SO4)中以使病原體生長(zhǎng)最小化106b；以及以降低原材料的顆粒污染107結(jié)束。
圖2是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的流程圖，舉例說(shuō)明在豬鞭蟲(chóng)卵的懸浮液中減少顆粒污染和除去外來(lái)寄生蟲(chóng)卵的方法。在圖2的流程圖中描述的途徑對(duì)應(yīng)于上面討論的步驟3至6。起點(diǎn)是在圖1的步驟107之后從蠕蟲(chóng)或糞便回收的卵的原材料。隨后，圖2中說(shuō)明的方法包括下列步驟將卵過(guò)篩并重新懸浮在鹽-糖浮選流體中201；離心和分離經(jīng)過(guò)浮選的卵202；棄去包含密度大于鹽-糖浮選流體的外來(lái)顆粒的沉淀203；將經(jīng)過(guò)浮選的卵重新懸浮在硫酸(H2SO4)中204；通過(guò)網(wǎng)眼大小為30～50微米的尼龍網(wǎng)過(guò)濾卵懸浮液205，隨后除去大于30微米的顆粒和外來(lái)寄生蟲(chóng)卵；在網(wǎng)眼大小為20微米的尼龍網(wǎng)上過(guò)濾卵懸浮液，從而除去小于20微米的顆粒206；重復(fù)在硫酸中清洗207，從而通過(guò)稀釋減少病原體；調(diào)節(jié)卵在溶液中的濃度208；和將卵儲(chǔ)存在硫酸中209，從而得到用于孵化卵的原材料。
圖3是根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案的流程圖，舉例說(shuō)明孵化、儲(chǔ)存和制備待用作口服藥物制劑原材料的豬鞭蟲(chóng)卵的方法。在圖3的流程圖中描述的途徑對(duì)應(yīng)于上面討論的步驟7至9。起點(diǎn)是通過(guò)圖2的浮選和過(guò)篩步驟209凈化的卵的原材料。隨后，圖3中說(shuō)明的方法包括下列步驟在重復(fù)攪拌或震蕩下在15～30℃的硫酸中孵化卵2～6個(gè)月301，持續(xù)觀(guān)察從未分化的卵到含有幼蟲(chóng)的卵(孵化)的發(fā)育302；使卵孵化進(jìn)行直育至孵化系數(shù)為60～90％或超過(guò)90％303；在2～10℃的硫酸(H2SO4)中清洗卵304；調(diào)節(jié)儲(chǔ)備溶液中卵的濃度305；在1～10℃的硫酸(H2SO4)中儲(chǔ)存卵，最后加入抗生素，從而防止病原體生長(zhǎng)306；調(diào)節(jié)溶液中卵的濃度至藥物原材料的要求307，這可以通過(guò)制備標(biāo)準(zhǔn)化懸浮液來(lái)進(jìn)行；卵溶液的劑量可以裝入貨運(yùn)容器中308，隨后可以包裝和貼標(biāo)簽、控制、發(fā)放和分配。
圖4舉例說(shuō)明豬鞭蟲(chóng)的生命周期。成年蠕蟲(chóng)見(jiàn)于在豬402的大腸壁401上。可以從兩條途徑得到蠕蟲(chóng)的卵1)將蠕蟲(chóng)轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)皿中，在培養(yǎng)基403中孵化，蠕蟲(chóng)在其中產(chǎn)卵，或者2)通過(guò)使糞便材料過(guò)篩來(lái)直接從糞便中回收卵。從1)或者2)得到的卵是未孵化的404，其包含未分化的材料。在酸性介質(zhì)中儲(chǔ)存2～6個(gè)月之后，最終添加抗生素，卵變成孵化的405，內(nèi)部有清晰可見(jiàn)的幼蟲(chóng)結(jié)構(gòu)。正是這些孵化的卵構(gòu)成了口服的活性藥物制劑豬鞭蟲(chóng)卵(TSO)。
其它實(shí)施方案對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見(jiàn)的。應(yīng)該理解，前面的詳細(xì)描述只用于說(shuō)明并且只是示例性的。本發(fā)明的精神和范圍不限于上述實(shí)施例，而是涵蓋于以下權(quán)利要求之中。
權(quán)利要求
1.一種包含蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)卵和液態(tài)載體的組合物，所述液態(tài)載體在0～30℃的溫度范圍內(nèi)的pH值低于7。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述液態(tài)載體是硫酸H2SO4。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述液態(tài)載體的pH值為0～2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述液態(tài)載體的pH值為2～3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述液態(tài)載體的pH值為3～4。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是線(xiàn)蟲(chóng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自下列寄生蟲(chóng)屬蛔蟲(chóng)屬(Ascaris)、蟯蟲(chóng)屬(Enterobius)、鞭蟲(chóng)屬(Trichuris)、食道口線(xiàn)蟲(chóng)屬(Oesophagostomum)、鉤蟲(chóng)屬(Ancylostoma)、板口線(xiàn)蟲(chóng)屬(Necator)和類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)屬(Strongyloides)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是扁形動(dòng)物。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自吸蟲(chóng)和絳蟲(chóng)。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自下列蠕蟲(chóng)屬姜片吸蟲(chóng)屬(Fasciolopsis)、棘口吸蟲(chóng)屬(Echinostoma)、異形吸蟲(chóng)屬(Heterophyes)、支睪吸蟲(chóng)屬(Clonorchis)、后睪吸蟲(chóng)屬(Opisthorchis)、片吸蟲(chóng)屬(Fasciola)、血吸蟲(chóng)屬(Schistosoma)、裂頭絳蟲(chóng)屬(Diphyllobothrium)、帶絳蟲(chóng)屬(Taenia)和膜殼絳蟲(chóng)屬(Hymenolepsis)。
11.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自絲蟲(chóng)寄生蟲(chóng)和肺吸蟲(chóng)。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)選自下列蠕蟲(chóng)屬鞭蟲(chóng)屬(Trichuris)、日?qǐng)A線(xiàn)蟲(chóng)屬(Nippostronglylus)、螺旋線(xiàn)蟲(chóng)屬(Heligmosomoides)、膜殼絳蟲(chóng)屬(Hymenolepsis)、管圓線(xiàn)蟲(chóng)屬(Angiostrongylus)、蛔蟲(chóng)屬(Ascaris)、食道口線(xiàn)蟲(chóng)屬(Oesophagostomum)、弓首蛔蟲(chóng)屬(Toxocara)、顎口線(xiàn)蟲(chóng)屬(Gnathostoma)、鉤蟲(chóng)屬(Ancylostoma)、弓蛔蟲(chóng)屬(Toxascaris)、副蛔蟲(chóng)屬(Parascaris)、異尖線(xiàn)蟲(chóng)屬(Anisakis)和偽低新蛔蟲(chóng)屬(Pseudoterranova)。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是豬鞭蟲(chóng)(Trichuris suis)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其可通過(guò)包括下列步驟的方法得到用豬鞭蟲(chóng)感染動(dòng)物，例如豬；在適當(dāng)?shù)臅r(shí)間后例如接種后約5至20周之后，例如約7至9周之后，分離出動(dòng)物糞便中的卵；向所分離的卵添加在0～30℃的溫度范圍內(nèi)pH值低于7的液態(tài)載體。
15.根據(jù)權(quán)利要求14的組合物，其中所述分離包括清洗程序，其中應(yīng)用采用大直徑(例如直徑450mm)經(jīng)過(guò)認(rèn)證的篩(網(wǎng)眼大小例如1000、500、250、100、80、70、60、50和20μm)的一系列清洗步驟，其中使用網(wǎng)眼大小減小的篩重復(fù)清洗步驟，從而可以從糞便材料的未消化植物材料中充分清洗和分離卵。
16.根據(jù)權(quán)利要求1和13～15中任一項(xiàng)的組合物，其中所述寄生蟲(chóng)卵包含在篩出的部分中，并且顆粒直徑為20～50μm。
17.根據(jù)權(quán)利要求13的組合物，其可通過(guò)下列步驟的方法得到，所述步驟包括從由豬腸直接分離的蠕蟲(chóng)中回收寄生蟲(chóng)卵，和將所述卵添加到在0～30℃的溫度范圍內(nèi)pH值低于7的液態(tài)載體中。
18.根據(jù)權(quán)利要求17的組合物，其中回收所述卵之前，所述分離的蠕蟲(chóng)在任選地包含一種或多種抗生素的介質(zhì)中清洗一次或超過(guò)一次。
19.根據(jù)權(quán)利要求17和18中任一項(xiàng)的組合物，其中所述分離的蠕蟲(chóng)體外保持在任選地補(bǔ)充抗生素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中，并且其中所述分離的蠕蟲(chóng)在所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基中產(chǎn)卵。
20.根據(jù)權(quán)利要求19的組合物，其中通過(guò)在篩上(例如50μm篩)過(guò)濾將所述卵從所述生長(zhǎng)培養(yǎng)基和蠕蟲(chóng)中分離出來(lái)，然后使卵保留在具有更小網(wǎng)眼大小的篩(例如20μm篩)上并添加到所述液態(tài)載體中。
21.一種分離和儲(chǔ)存來(lái)自豬鞭蟲(chóng)的卵的方法，所述方法包括下列步驟
a)利用方法1)或方法2)來(lái)分離寄生蟲(chóng)卵，所述方法1)包括從已經(jīng)從豬腸中取出、并且已在適合生長(zhǎng)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的蠕蟲(chóng)中分離卵的步驟，其中所述蠕蟲(chóng)在所述適合的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中產(chǎn)卵；所述方法2)包括利用被感染的動(dòng)物或用豬鞭蟲(chóng)感染動(dòng)物例如豬并從所述豬產(chǎn)生的糞便材料中分離卵的步驟，和
b)將分離的和任選地清洗的卵儲(chǔ)存在最終包含抗生素的酸性介質(zhì)中，例如H2SO4，例如pH為0～2的H2SO4，從而使得卵發(fā)育(孵化)并滅活任何污染性的細(xì)菌、真菌和病毒。
22.一種分離和儲(chǔ)存來(lái)自豬鞭蟲(chóng)的卵的方法，所述方法包括下列步驟
a)利用方法1)或方法2)來(lái)分離寄生蟲(chóng)卵，所述方法1)包括從已經(jīng)從豬腸中取出、并且已在適合生長(zhǎng)的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)的蠕蟲(chóng)中分離卵的步驟，其中所述蠕蟲(chóng)在所述適合的生長(zhǎng)培養(yǎng)基中產(chǎn)卵；所述方法2)包括利用被感染的動(dòng)物或用豬鞭蟲(chóng)感染動(dòng)物例如豬并從所述豬產(chǎn)生的糞便材料中分離卵的步驟，和
b)過(guò)濾所分離的材料以減少顆粒污染和外來(lái)豬寄生蟲(chóng)的卵，
c)浮選所分離的材料以減少顆粒污染，
d)在酸性介質(zhì)例如H2SO4、例如pH為0～2的H2SO4中清洗所述分離的材料，以通過(guò)稀釋和滅活減少外來(lái)病原體(細(xì)菌、真菌和病毒)的數(shù)量，
e)將所分離和清洗的卵儲(chǔ)存在酸性介質(zhì)中，例如H2SO4，例如pH為0～2的H2SO4，其中最后添加有抗生素，從而使得卵發(fā)育(孵化)并進(jìn)一步滅活任何細(xì)菌、真菌和/或病毒，如果存在的話(huà)，
f)過(guò)濾和浮選孵化的卵以分離具有最高孵化度(藥物原材料的生物潛能)的卵部分，以及
g)將所分離并孵化的卵儲(chǔ)存在酸性介質(zhì)中，例如H2SO4，例如pH為0～2的H2SO4，其中最后添加有抗生素，從而保持生物潛能和防止病原體生長(zhǎng)。
23.權(quán)利要求22的方法，其中步驟b)是任選的。
24.權(quán)利要求22的方法，其中步驟c)是任選的。
25.權(quán)利要求22的方法，其中步驟d)是任選的。
26.權(quán)利要求22的方法，其中步驟f)是任選的。
27.一種用于制備包含蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品的藥物組合物的方法，所述方法包括
(1)在特殊的不含人病原體的環(huán)境中飼養(yǎng)預(yù)備動(dòng)物；
(2)由所述預(yù)備動(dòng)物得到蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物；
(3)從所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物提取卵；
(4)在還包含酸性液態(tài)載體的組合物中儲(chǔ)存來(lái)自所述第一蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物的未孵化的卵；
(5)在適當(dāng)條件下在所述酸性液態(tài)載體中孵化來(lái)自所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物的卵，以產(chǎn)生藥物組合物；和
(6)在適當(dāng)條件下在所述酸性液態(tài)載體中儲(chǔ)存來(lái)自所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物的孵化的卵。
28.權(quán)利要求27的方法，其中分離蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的步驟包括得到所述預(yù)備動(dòng)物的大便，并且從所述大便分離蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)。
29.權(quán)利要求28的方法，其中分離蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的步驟包括從所述預(yù)備動(dòng)物中取出組織，以及從所述組織中分離所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)或其卵。
30.權(quán)利要求29的方法，其中所述組織是內(nèi)部器官，例如腸。
31.權(quán)利要求29的方法，其中所述分離所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的步驟還包括下列步驟
(1)解剖來(lái)自所述預(yù)備動(dòng)物的組織，從而可以肉眼可見(jiàn)地分離蠕蟲(chóng)以制備蠕蟲(chóng)在其中產(chǎn)卵的蠕蟲(chóng)培養(yǎng)物；
(2)過(guò)濾所述蠕蟲(chóng)培養(yǎng)物以制備含有卵的濾液；和
(3)從所述濾液分離卵，從而從所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)分離物提取卵。
32.權(quán)利要求27的方法，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含線(xiàn)蟲(chóng)寄生蟲(chóng)。
33.權(quán)利要求27的方法，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自下列屬的寄生蟲(chóng)蛔蟲(chóng)屬、蟯蟲(chóng)屬、鞭蟲(chóng)屬、鉤蟲(chóng)屬、板口線(xiàn)蟲(chóng)屬、類(lèi)圓線(xiàn)蟲(chóng)屬、食道口線(xiàn)蟲(chóng)屬、弓蛔蟲(chóng)屬、副蛔蟲(chóng)屬。
34.權(quán)利要求27的方法，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含扁形動(dòng)物寄生蟲(chóng)。
35.權(quán)利要求27的方法，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自吸蟲(chóng)和絳蟲(chóng)的寄生蟲(chóng)。
36.權(quán)利要求27的方法，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自下列屬的寄生蟲(chóng)姜片吸蟲(chóng)屬、棘口吸蟲(chóng)屬、異形吸蟲(chóng)屬、支睪吸蟲(chóng)屬、后睪吸蟲(chóng)屬、片吸蟲(chóng)屬、血吸蟲(chóng)屬、裂頭絳蟲(chóng)屬、帶絳蟲(chóng)屬和膜殼絳蟲(chóng)屬。
37.權(quán)利要求27的方法，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自絲蟲(chóng)寄生蟲(chóng)和肺吸蟲(chóng)的寄生蟲(chóng)。
38.權(quán)利要求27的方法，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)制品包含選自下列屬的寄生蟲(chóng)鞭蟲(chóng)屬、日?qǐng)A線(xiàn)蟲(chóng)屬、螺旋線(xiàn)蟲(chóng)屬、膜殼絳蟲(chóng)屬、管圓線(xiàn)蟲(chóng)屬、蛔蟲(chóng)屬、弓首蛔蟲(chóng)屬、顎口線(xiàn)蟲(chóng)屬、鉤蟲(chóng)屬、異尖線(xiàn)蟲(chóng)屬和偽低新蛔蟲(chóng)屬、食道口線(xiàn)蟲(chóng)屬、弓蛔蟲(chóng)屬和副蛔蟲(chóng)屬。
39.權(quán)利要求27的方法，其中所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)是豬鞭蟲(chóng)。
40.一種制備用于治療個(gè)體動(dòng)物或人的自身免疫病或變應(yīng)性疾病的藥劑的方法，所述方法包括下列步驟提供根據(jù)權(quán)利要求1～20中任一項(xiàng)的組合物，在適當(dāng)?shù)臈l件下在酸性液態(tài)載體中孵化所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的卵，從而得到藥物組合物，并且以藥學(xué)有效量將所述藥物組合物施用給患有自身免疫病或變應(yīng)性疾病的個(gè)體，或者防止這些疾病的發(fā)生。
41.權(quán)利要求40的方法，其中所述自身免疫病是炎性腸病。
42.權(quán)利要求40的方法，其中所述自身免疫病是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
43.權(quán)利要求40的方法，其中所述自身免疫病是1型糖尿病。
44.權(quán)利要求40的方法，其中所述自身免疫病是紅斑狼瘡。
45.權(quán)利要求40的方法，其中所述自身免疫病是結(jié)節(jié)病。
46.權(quán)利要求40的方法，其中所述自身免疫病是多發(fā)性硬化。
47.權(quán)利要求40的方法，其中所述自身免疫病是銀屑病。
48.權(quán)利要求40的方法，其中所述自身免疫病是孤獨(dú)癥。
49.權(quán)利要求40的方法，其中所述疾病是變態(tài)反應(yīng)。
50.一種用于治療個(gè)體中過(guò)度免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括下列步驟提供根據(jù)權(quán)利要求1～20中任一項(xiàng)的組合物，在適當(dāng)?shù)臈l件下在酸性液態(tài)載體中孵化所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的卵，從而得到藥物組合物，并且以足以減少所述個(gè)體中過(guò)度免疫應(yīng)答的量施用所述藥物組合物。
51.權(quán)利要求50的方法，其中所述過(guò)度免疫應(yīng)答是增強(qiáng)的Th1免疫應(yīng)答。
52.一種用于延長(zhǎng)個(gè)體中同種異體移植器官存活的方法，所述方法包括通過(guò)給個(gè)體施用Th2上調(diào)有效量的包含Th2上調(diào)活性的藥物組合物來(lái)下調(diào)個(gè)體中的Th1免疫活性，所述方法還包括下列步驟提供根據(jù)權(quán)利要求1～20中任一項(xiàng)的組合物；在適當(dāng)?shù)臈l件下在酸性液態(tài)載體中孵化所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)的卵，從而得到包含Th2上調(diào)活性的藥物組合物；并且以足以通過(guò)下調(diào)個(gè)體中的Th1活性而延長(zhǎng)個(gè)體中同種異體移植器官存活的量施用所述藥物組合物。
53.權(quán)利要求40～52中任一項(xiàng)的方法，其中所述治療是改善性、預(yù)防性或治愈性的。
54.權(quán)利要求40～53中任一項(xiàng)的方法，其中所述個(gè)體是人。
55.根據(jù)權(quán)利要求1～20中任一項(xiàng)的組合物在制備用于治療需要所述治療的個(gè)體中自身免疫病或變應(yīng)性疾病的藥物中的用途。
56.權(quán)利要求55的用途，其中所述自身免疫病是炎性腸病。
57.權(quán)利要求55的用途，其中所述自身免疫病是類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
58.權(quán)利要求55的用途，其中所述自身免疫病是1型糖尿病。
59.權(quán)利要求55的用途，其中所述自身免疫病是紅斑狼瘡。
60.權(quán)利要求55的用途，其中所述自身免疫病是結(jié)節(jié)病。
61.權(quán)利要求55的用途，其中所述自身免疫病是多發(fā)性硬化。
62.權(quán)利要求55的用途，其中所述自身免疫疾病是銀屑病。
63.權(quán)利要求55的用途，其中所述自身免疫病是孤獨(dú)癥。
64.權(quán)利要求55的用途，其中所述疾病是變態(tài)反應(yīng)。
65.權(quán)利要求55～64中任一項(xiàng)的用途，其中所述藥物的制備包括權(quán)利要求27～39中任一項(xiàng)的方法。
66.根據(jù)權(quán)利要求1～20中任一項(xiàng)的組合物在制備用于治療需要所述治療的個(gè)體中過(guò)度免疫應(yīng)答的藥物中的用途。
67.權(quán)利要求66的用途，其中所述過(guò)度免疫應(yīng)答是增強(qiáng)的Th1免疫應(yīng)答。
68.權(quán)利要求55～67中任一項(xiàng)的用途，其中所述治療是改善性、預(yù)防性或治愈性的。
69.權(quán)利要求55～68中任一項(xiàng)的用途，其中所述個(gè)體是哺乳動(dòng)物、人或動(dòng)物。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)卵的儲(chǔ)存和發(fā)育的組合物，所述組合物還包含在1℃至環(huán)境溫度下pH值低于7的液態(tài)載體。所述液態(tài)載體可以是pH為0～2的硫酸(H2SO4)，并且可以添加抗生素。本發(fā)明還涉及利用從所述組合物中分離的卵來(lái)治療、改善、預(yù)防或治愈個(gè)體、動(dòng)物或人的自身免疫病或變應(yīng)性疾病的方法。本發(fā)明還涉及用于分離、孵化和保藏蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)卵的方法，以及用于制備包含蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)卵制品的藥物組合物的方法。所述蠕蟲(chóng)寄生蟲(chóng)卵可以來(lái)自豬鞭蟲(chóng)卵(Trichuris suisova)(TSO)。
文檔編號(hào)A61K35/56GK101346150SQ200680049362
公開(kāi)日2009年1月14日 申請(qǐng)日期2006年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月30日
發(fā)明者克里斯蒂安·莫林·歐特曾·卡佩爾, 艾倫·勒普斯托夫, 斯蒂格·米蘭·塔姆斯堡 申請(qǐng)人:派羅賽技術(shù)股份有限公司