專(zhuān)利名稱(chēng)：：植物果肉的不皂化提取物在治療皮膚老化中的用途的制作方法植物果肉的不皂化提取物在治療皮膚老化中的用途本發(fā)明的領(lǐng)域涉及植物果肉的不皂化提取物在制備用于治療和/或預(yù)防與老化相關(guān)的皮膚病癥的美容、藥物或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中的用途。老化是一種不可避免的、緩慢進(jìn)行和不可逆的現(xiàn)象，它引起導(dǎo)致器官功能異常的解剖學(xué)和組織學(xué)變化。首先的可見(jiàn)標(biāo)志在皮膚組織水平上表現(xiàn)為質(zhì)地、顏色和透明度的改變以及皺紋的出現(xiàn)。這些表現(xiàn)可被外在因素如陽(yáng)光、煙草等所增強(qiáng)。氧自由基(0FR)在參與老化的過(guò)程中的重要性被認(rèn)為是主要的理論之一。在皮膚水平上，氧自由基被描述為炎癥病理學(xué)以及老化的早期介質(zhì)(KressM.等人，A//1995;62:87-94)。在老化的過(guò)程中，皮膚的所有結(jié)構(gòu)都發(fā)生改變。然而，基本的改變主要是在真皮中，并且成纖維細(xì)胞和細(xì)胞外基質(zhì)正是這些改變的主要靶標(biāo)和主要參與者。成纖維細(xì)胞能夠進(jìn)入衰老狀態(tài)，結(jié)果是，它們的數(shù)量減少，功能減弱，和表型改變。在這種情況下，它們積極參與皮膚細(xì)胞外基質(zhì)的降解。此外，在衰老過(guò)程中，成纖維細(xì)胞失去其反應(yīng)性并經(jīng)歷其調(diào)節(jié)的改變。這是因?yàn)椋颜J(rèn)識(shí)到，老化與對(duì)環(huán)境應(yīng)激的應(yīng)答的降低甚至是喪失相關(guān)，由此也與感染性、自身免疫性以及癌癥類(lèi)的疾病相關(guān)(GardnerI.D.//2尸ecL1980;2:801-10)。皺紋的出現(xiàn)是老化的最早的標(biāo)志之一。對(duì)某些人來(lái)說(shuō)，這成了他們與外界關(guān)系中的一個(gè)真實(shí)問(wèn)題。因此，今天，有許多力求治療皮膚老化的美容產(chǎn)品已提供給了公眾，這些特殊產(chǎn)品主要以植物提取物為基礎(chǔ)。阿干樹(shù)(arganier),在國(guó)際植物命名法中稱(chēng)為刺阿干樹(shù)(Jrgfl力ifls/7/770sa(L.)Skells)，尤其是通過(guò)美容產(chǎn)業(yè)而身價(jià)倍增，特別是它的種仁。阿干樹(shù)是一種低矮的樹(shù)木，6-10米高，它的樹(shù)形讓人想起橄欖樹(shù)。樹(shù)冠形狀可有一些變化，可能是直立的或者下垂的。枝條非常多刺，布滿互生、狹窄、短小(約2cm)的披針形小葉，枝條常聚集成束。阿干樹(shù)的葉子通常是常綠的，但在非常干燥的時(shí)期也會(huì)落葉?；S綠色，雌雄同體(雄蕊和雌蕊在同一朵花上)，五基數(shù)(五個(gè)花瓣，五個(gè)萼片)，聚成球狀花序?；ㄆ趶奈逶碌搅?。阿干樹(shù)自五歲樹(shù)齡開(kāi)始結(jié)果。果實(shí)是黃色、卵形的無(wú)柄漿果，長(zhǎng)4到5厘米。其由包藏一種極堅(jiān)硬的棕色"假果核"的肉質(zhì)果皮(也叫果肉)構(gòu)成。"假果核"實(shí)際上由2到3個(gè)彼此粘連在一塊的扁平種子組成，每個(gè)種子包含一個(gè)油質(zhì)種仁。最有價(jià)值的應(yīng)用在于種仁，它能提供油，繼而提供油餅。種子來(lái)源的油已成為多項(xiàng)發(fā)明專(zhuān)利的目標(biāo)用溶劑獲得油(FR2553788);富集在不皂化部分中的阿干樹(shù)油(FR2724663)。除油之外的其他物質(zhì)也獲得了專(zhuān)利。一個(gè)例子是從在油提取之后獲得的種子油餅而來(lái)的多肽油與油餅中的多肽的聯(lián)合用于治療與皮膚老化有關(guān)的紊亂(FR2756183)。阿千樹(shù)的葉片以及油餅中的蛋白質(zhì)和皂苷也同樣是發(fā)明專(zhuān)利的目標(biāo)EP1213025涉及葉片提取物，EP1213024涉及油餅中的蛋白質(zhì)，和EP1430900涉及油餅中的皂苷。最近，阿干樹(shù)果實(shí)的果肉已成為專(zhuān)利申請(qǐng)WO2005/039610的目標(biāo)。阿千樹(shù)的果實(shí)是一種假核果。因此，它由一種稱(chēng)為果肉的肉質(zhì)果皮(占果實(shí)的55%至75%)以及一個(gè)具有極堅(jiān)硬外殼、包含1至3個(gè)種仁的果核組成。油就是從種仁中提取的。已對(duì)果實(shí)的果肉進(jìn)行了化學(xué)研究。它由糖類(lèi)組成，包括纖維素、葡萄糖、果糖和蔗糖。(CharroufZ.GuillaumeD.，Ethnoeconomical，ethnomedical，andphytochemicalstudyofArganiaspinosa(L.)Skeels.，JournalofEth卿harmacology，1999，67，1，7-14;SandretF.G.，Etudespr61iminairesdesglucidesetdulatexdelapulpedufruitd，Argan(Arganiaspinosa):variationaucoursdelamaturation,BulletindelaSoci6t6deChimieBiologique，1957，39，5-6，619-631)。其中還存在脂質(zhì)。它們的含量為6%。在這些脂質(zhì)的不皂化級(jí)分中已鑒定出5種三薛醇高根二醇、羽扇醇、a-和(3-脂檀素、樺木醛，和兩種甾醇a-菠菜甾醇(a-spinost&ol)和仙人掌甾醇(schomnol)(CharroufZ.，F(xiàn)kih-Teto畫(huà)iS.，CharroufM.,MouchelB.，Triterp6nesetsterolsextraitsdelapulped，Arganiaspinosa，PlantesM6dicinalesetPhytothgrapie，1991，25，2-3，112-117)。專(zhuān)利申請(qǐng)W02005/039610—般性地論及了基于阿干樹(shù)果實(shí)的果肉的組合物用于制備美容產(chǎn)品的用途。果肉提取物已多少經(jīng)過(guò)了純化。這是因?yàn)?，發(fā)明者在該過(guò)程的各個(gè)不同階段對(duì)提取物已做了測(cè)試。因此，這優(yōu)先描述了在己烷提取后獲得的果肉提取物的用途(第15頁(yè))。隨后，作者在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的傳統(tǒng)皂化步驟后對(duì)如此收集到的不皂化級(jí)分進(jìn)行了測(cè)試。最后，作者還設(shè)置了一個(gè)通過(guò)色譜法來(lái)分離不皂化級(jí)分的步驟，小心地除去了三萜化合物高根二醇。這樣做的理由可能基于所獲得的結(jié)果，尤其是這樣的事實(shí)，即在低于該文獻(xiàn)所定義的三萜級(jí)分的劑量時(shí)，高根二醇單獨(dú)地表現(xiàn)出具有毒性(實(shí)施例1):級(jí)分A不具有高根二醇(第38頁(yè))。此外，與所述三碎級(jí)分相比，高根二醇單獨(dú)地對(duì)于UVA和UVB僅表現(xiàn)出一般優(yōu)勢(shì)(實(shí)施例3和4)。因此，該文獻(xiàn)的一般性教導(dǎo)涉及阿干樹(shù)果實(shí)的果肉提取物的三萜級(jí)分在制備美容產(chǎn)品中的用途，優(yōu)選地在治療經(jīng)過(guò)刺激成纖維細(xì)胞的代謝而被UU和UVB侵害的皮膚中。更具體而言，該文件教導(dǎo)了，在WO2005/039610中所公開(kāi)的所述三萜級(jí)分比低含量的高根二醇更具有活性。令人驚奇且意外地，本發(fā)明的作者證明了富含高根二醇的阿干樹(shù)所述提取物可以通過(guò)丙酮提取以及隨后的傳統(tǒng)皂化步驟來(lái)獲得。然而，有理由預(yù)期，本發(fā)明的益處可以被擴(kuò)展至任何植物果肉的不皂化提取物，所述不皂化提取物具有三萜級(jí)分，所述三辟級(jí)分的組成在主要化合物方面接近來(lái)源于阿干樹(shù)果肉的三薛級(jí)分。本發(fā)明涉及包含三萜級(jí)分的植物果肉的不皂化提取物在制備用于預(yù)防和/或治療與皮膚老化相關(guān)的皮膚病癥的美容、藥物或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中的用途，其特征在于，所述三萜級(jí)分包含高根二醇、a-脂檀素、p-脂檀素和羽扇醇。優(yōu)選地，所述提取物通過(guò)丙酮提取以及隨后的傳統(tǒng)皂化步驟來(lái)獲得。這種不急化提取物，也稱(chēng)為起始不皂化級(jí)分，可以被溶解于賦形劑之中以促進(jìn)配制。優(yōu)選地，所述提取物從選自山欖科(Sapotaceae)的植物中獲得。更優(yōu)選地，所述提取物從阿干樹(shù)果實(shí)的果肉中獲得。丙酮提取的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)在于可以除去膠乳，其占脂質(zhì)級(jí)分的絕大部分，并因此在脂質(zhì)級(jí)分的不皂化物質(zhì)中濃度更高。根據(jù)本發(fā)明的不皂化物的組成在質(zhì)和量上都與專(zhuān)利申請(qǐng)WO2005/039610中優(yōu)先描述的那種不同。根據(jù)本發(fā)明的提取物的特征在于含有三萜物質(zhì)。三萜物質(zhì)可以按照傳統(tǒng)的合適方法通過(guò)氣相色鐠來(lái)進(jìn)行分析，所述方法使得能夠鑒定p-脂檀素和高根二醇。相反地，a-脂檀素和羽扇醇不能用此法分離，因而，對(duì)于這些分子可以一般性地進(jìn)行含量測(cè)定。有利地，提取物的三萜級(jí)分由以下成分組成高根二醇，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為起始不皂化物的約7%至約40%;p-脂檀素，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)為起始不皂化物的約5%至約30%;a-脂檀素和羽扇醇，兩者質(zhì)量分?jǐn)?shù)之和為起始不皂化物的約10%至約50%。有利地，所述高根二醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為起始不皂化物的約10%至約20%;更有利地，等于起始不皂化物的約15%。有利地，所述p-脂檀素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為起始不皂化物的約7%至約20%;更有利地，等于起始不皂化物的約10%。有利地，所述a-脂檀素和羽扇醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)之和為起始不皂化物的約15%至約30%;更有利地，等于起始不皂化物的約20%。這些不同分子的含量決定于提取條件。根據(jù)添加至起始不急化物中的賦形劑，這些值在美容、藥物或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中的含量將會(huì)更低。本發(fā)明的一個(gè)突出點(diǎn)是，高根二醇在根據(jù)本發(fā)明的不皂化提取物的抗衰老特性中具有重要貢獻(xiàn)。由于氧自由基在皮膚老化過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，因而通過(guò)與根據(jù)本發(fā)明的阿千樹(shù)果肉的不皂化物相比較對(duì)高根二醇的抗自由基(抗氧自由基)效應(yīng)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。細(xì)胞內(nèi)由氧自由基造成的損害表現(xiàn)為質(zhì)膜的脂質(zhì)組分的改變(脂質(zhì)過(guò)氧化)、蛋白質(zhì)的改變(變性和降解)以及遺傳物質(zhì)或DM的改變(突變)。進(jìn)行了體外測(cè)試以測(cè)定-高根二醇和不皂化提取物針對(duì)膜脂質(zhì)氧化的保護(hù)效力(實(shí)施例3);和-高根二醇和其他三薛分子(羽扇醇、a-和p-脂檀素)對(duì)于基因組DNA改變的保護(hù)能力(實(shí)施例4)。這些測(cè)試已經(jīng)證明，高根二醇是擁有顯著抗氧化潛力的分子。在本發(fā)明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，提取可以如下進(jìn)行磨碎干燥的阿千樹(shù)果實(shí)的杲肉，然后用丙酮提取。也可以采用丙酮/水的混合物。提取在攪拌下或者以靜止方式進(jìn)行，植物/溶劑比率可在1:2到1:20間變動(dòng)，溫度可在環(huán)境溫度到溶劑的沸點(diǎn)之間變化，進(jìn)行時(shí)間可以從30分鐘到24小時(shí)。一旦提取完畢，植物的固體殘留物通過(guò)過(guò)濾或離心而與提取溶液分開(kāi)。該溶液可以被或多或少地濃縮，直至獲得干的提取物。在后一種情況下，所述干物質(zhì)可以被溶解于醇中以允許皂化。在該溶液中加入金屬氫氧化物，尤其是氫氧化鈉或氫氧化鉀，濃度從O.1N到10N。皂化在從環(huán)境溫度至沸點(diǎn)的溫度下于攪拌下進(jìn)行，根據(jù)溫度，持續(xù)時(shí)間可從15分鐘到48小時(shí)變化。純化通過(guò)液/液萃取來(lái)進(jìn)行。那么，在水解介質(zhì)中加入不相混的溶劑，其可以是pH值調(diào)節(jié)到3至9的被鹽[NaCl，(NH4)2S04]飽和或未飽和的水。該溶劑可以是氧醚(aheroxyde)、酯、烷烴、卣代烴或者這些溶劑的混合物。進(jìn)行一次、兩次或三次連續(xù)的液/液提取。合并有機(jī)相，隨后用pH3至9的被鹽飽和或未飽和的水進(jìn)行洗滌。洗滌過(guò)程可重復(fù)數(shù)次。純化后，對(duì)有機(jī)相進(jìn)行處理以除去溶劑。該處理過(guò)程可以在控制壓力的情況下通過(guò)蒸發(fā)來(lái)完成。蒸發(fā)步驟可能導(dǎo)致產(chǎn)生具有多少有些蠟狀的脂質(zhì)粘稠性的產(chǎn)物，即起始不急化物?？梢约尤胭x形劑，其可以是動(dòng)物蠟(例如蜂蠟)或植物蠟(例如巴西棕櫚蠟、小燭樹(shù)臘或霍霍巴蠟)、植物油(玉米、紅花、芝麻、阿干樹(shù)等)、甘油、合成來(lái)源的產(chǎn)品如凡士林油、多元醇(例如丙二醇、丁二醇、丙三醇等)、酯化的甘油三酯(例如miglyol812、myritol318、neobeeMJ)、分子式為H(OCH2-CHCH3)n0H的氧化丙烯聚合物或分子式為H(OCH2-CH2)n0H的氧化乙烯聚合物、不同長(zhǎng)度(d至U)的脂肪醇的二酯。阿干樹(shù)果肉的起始不皂化級(jí)分與賦形劑的比例可以為1/99至99/1。有利地，本發(fā)明使得果實(shí)的果肉能夠以合理的成本用于抗老化治療。無(wú)需另外的純化步驟就可使用不皂化提取物，所述純化步驟是非常昂貴的。因此，根椐本發(fā)明的組合物可以借助于插入了本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的傳統(tǒng)提取和皂化步驟的過(guò)程來(lái)獲得。根據(jù)本發(fā)明的植物果肉的不皂化提取物的使用使得能夠預(yù)防和/或治療皮膚病癥，所述皮膚病癥表現(xiàn)為皮膚的質(zhì)地、顏色和透明度的改變以及鈹紋的出現(xiàn)。在本明的一個(gè)具體實(shí)施方案中，皮膚病癥是由于對(duì)環(huán)境應(yīng)激的應(yīng)答降低或者喪失而引起的，尤其是由陽(yáng)光或煙草造成的環(huán)境應(yīng)激。在本發(fā)明的另一個(gè)具體實(shí)施方案中，皮膚病癥是由于HSP72蛋白的可誘導(dǎo)性降低或者喪失而引起的。HSP(標(biāo)示"熱休克蛋白")蛋白在許多細(xì)胞中組成性地表達(dá)，并且具有在維持蛋白質(zhì)方面必不可少的功能，它們的名字"分子伴侶"蛋白由此而來(lái)。這是因?yàn)?，它們抑制變性蛋白質(zhì)的聚集，防止蛋白質(zhì)的不適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合，并且它們參與細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸和參與以非活性形式維持某些蛋白質(zhì)(MorrisS.D.C///.Zer則&7.2002;27:220-224)。HSP還在應(yīng)激反應(yīng)中，尤其是在調(diào)動(dòng)適應(yīng)性應(yīng)答的細(xì)胞保護(hù)過(guò)程中起著根本作用(MaytinE.V././扁"."er/n"o厶1995;104:448-55)。令人意外地，使用根據(jù)本發(fā)明的提取物使得能夠恢復(fù)衰老的成纖維細(xì)胞中HSP72蛋白的誘導(dǎo)。在本發(fā)明的范圍內(nèi)，包含根據(jù)本發(fā)明的提取物的美容、藥物或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品通過(guò)口服或局部途徑施用，優(yōu)選地通過(guò)局部途徑施用。對(duì)于通過(guò)局部途徑的施用，所迷蓋侖氏形式選自霜?jiǎng)?、凝膠劑、軟骨劑和噴霧劑。有利地，口服形式選自片劑、膠嚢劑和用于可飲用懸液的粉劑。有利地，所述提取物在最終美容產(chǎn)品中的量為制劑總重量的約0.001重量％至約50重量％，優(yōu)選約0.01重量％至約10重量％，更優(yōu)選約0.1重量°/至約2重量％。此外，制劑還可以包含本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的用于治療和/或預(yù)防與皮膚老化相關(guān)的皮膚病癥的其他活性物質(zhì)。有利地，所述制劑包含來(lái)自阿干樹(shù)的因其"抗老化，，作用而知曉的其他物質(zhì)，例如從種仁中獲得的油以及油餅中的肽。下面的根據(jù)本發(fā)明的組合物的實(shí)例以示例性而非限制性的方式給出。百分比以相對(duì)于組合物總重量的以重量計(jì)的比例形式給出。實(shí)施例1:抗面部松弛的護(hù)理阿干樹(shù)果肉的不皂化提取物富集的阿干樹(shù)油阿千樹(shù)的多肽維生素E的衍生物維生素F的甘油酯0.1至2%1至5%0.1至1%0.1至0.5%0.1至0.5%-維生素A棕櫚酸酯0.1至1%-甲基葡萄糖硬脂酸酯1至5%-辛酸/癸酸甘油三酯2至8%-液體石蠟5至12%-香料q.s.-純化水q.s.p.100g下面的實(shí)施例舉例說(shuō)明了本發(fā)明，而并不限制其范圍。實(shí)施例2:獲得阿干樹(shù)果肉的不皂化提取物的方法磨碎1噸干燥的阿干樹(shù)果實(shí)的果肉，然后在反應(yīng)器中用5噸丙酮提取。該提取過(guò)程在回流攪拌下進(jìn)行1小時(shí)。溶液一旦冷卻，就經(jīng)過(guò)濾進(jìn)行回收，然后在真空下濃縮，直到得到去溶劑的油狀提取物。將該殘留物吸收在500升95%(v/v)的乙醇中。然后向其中添加100升ION的氫氧化鈉(lessivedesoude)，并回流攪拌l小時(shí)。冷卻后，將經(jīng)水解的溶液置于潷析器中，向其中加入500升庚烷和300升水。液/液萃取小心地進(jìn)行。在潷析后，收集有機(jī)相。用500升庚烷再進(jìn)行2次萃取。合并3個(gè)庚烷相，并洗滌3次，每次用500升水。經(jīng)洗滌的有機(jī)相是去除了溶劑的。這樣就得到一種蠟質(zhì)的糊狀物。測(cè)定這一提取物(相應(yīng)于起始不皂化物)中三萜物質(zhì)的含量。它包含10%p-脂檀素、15%高根二醇和20。/。羽扇醇/a-脂檀素混合物。實(shí)施例3:高根二醇的抗自由基效應(yīng)的分析一一脂質(zhì)過(guò)氧化的分析1)導(dǎo)言質(zhì)膜是氧自由基的主要和首要靶標(biāo)，并且由于富含脂質(zhì)，其是增加的過(guò)氧4匕作用的位點(diǎn)(GirottiA.W.X尸reeAad/c.#ecT.1985;1:87-95)。脂質(zhì)氧化過(guò)程中產(chǎn)生的過(guò)氧化物也具有很高的反應(yīng)性，并且能夠降解蛋白質(zhì)和基因組物質(zhì)。為了評(píng)價(jià)膜的改變，本發(fā)明的作者們通過(guò)對(duì)脂質(zhì)氧化產(chǎn)物和硫代巴比妥酸之間的復(fù)合物進(jìn)行體外定量，而測(cè)量了脂質(zhì)的過(guò)氧化。這些復(fù)合物稱(chēng)為T(mén)BARS(表示"硫代巴比妥酸反應(yīng)性物質(zhì)(ThioBarbituricAcidReactiveSubstances)，，)，并以》匕命名i亥須'J試TBARS須'J試。為了模擬化學(xué)氧化應(yīng)激，用由過(guò)氧化氫(H202)和鐵(Fe27Fe3+)組成的復(fù)合物來(lái)處理成纖維細(xì)胞系L929，因而再現(xiàn)了芬頓(Fenton)反應(yīng)，該反應(yīng)是氧自由基，尤其是羥基自由基(0H°)的來(lái)源(VesseyD.A.等人/.//2reW./er邊"o/.1992;99:859-63):H202+Fe2+^OH0+OH—+Fe3+。2)方法O受試產(chǎn)品產(chǎn)品在鼠成纖維細(xì)胞系L929上進(jìn)行評(píng)價(jià)。細(xì)胞用不同濃度的產(chǎn)品(表I)預(yù)處理16小時(shí)，然后用H20廣Fe^/Fe3+復(fù)合物刺激l小時(shí)。批次LK0304的阿干樹(shù)果肉的不皂化提取物根據(jù)實(shí)施例2進(jìn)行制備。表I:受試溶液概覽<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>膜脂質(zhì)的過(guò)氧化通過(guò)測(cè)量TBARS來(lái)進(jìn)行分析。(根據(jù)MorlUreP.等人，"/oc力/邁.S/o;力;^.1991;1084:261-268)。O測(cè)試原理在酸性介質(zhì)中，于95C下，脂質(zhì)氧化產(chǎn)物(丙二醛或MDA)和硫代巴比妥酸(TBA)之間形成復(fù)合物，稱(chēng)為T(mén)BARS(表示"硫代巴比妥酸反應(yīng)性物質(zhì)")，其含量可以通過(guò)相對(duì)于MDA標(biāo)準(zhǔn)系列而言的焚光來(lái)進(jìn)行測(cè)定。TBARS的測(cè)定值表示為pmol/pg蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)和TBARS均在細(xì)胞內(nèi)環(huán)境中進(jìn)行含量測(cè)定。O計(jì)算細(xì)胞膜保護(hù)的百分比從計(jì)算以pmol/ng蛋白質(zhì)表示的TBARS開(kāi)始，按下式計(jì)算不同的產(chǎn)物針對(duì)膜脂質(zhì)氧化的保護(hù)效力<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>來(lái)對(duì)HSP72基因的表達(dá)水平進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。最后，設(shè)定對(duì)照樣品中的表達(dá)水平為1,從而可以確定HSP7Z基因的誘導(dǎo)倍數(shù)。圖1B顯示了通過(guò)實(shí)時(shí)PCR進(jìn)行的對(duì)于在年輕IMR-90(翻)和衰老IMR-90(■)(由&02誘導(dǎo)的衰老)中HSP72mRNA誘導(dǎo)水平的定量分析。圖1B清楚地顯示了，在IMR-90成纖維細(xì)胞的經(jīng)誘導(dǎo)的衰老過(guò)程中，HSP72mRNA的誘導(dǎo)也大大降低。-阿干樹(shù)果肉提取物的效力的分析為了評(píng)價(jià)根據(jù)實(shí)施例2制備的阿干樹(shù)果肉抽提物，本發(fā)明的作者使用了釆用IMR-90成纖維細(xì)胞系的誘導(dǎo)的衰老或SIPS(StressInducedPrematureSenescence,應(yīng)激誘導(dǎo)的過(guò)早衰老)模型。將細(xì)胞與濃度為1fig/ml至3pg/ml的阿干樹(shù)果肉抽提物一起孵育24小時(shí)。然后，使它們經(jīng)歷能誘導(dǎo)衰老的氧化應(yīng)激。對(duì)于一批"年輕"IMR-90細(xì)胞和一批未經(jīng)阿干樹(shù)果肉抽提物預(yù)處理的"衰老"(誘導(dǎo)的衰老)細(xì)胞，將所有處理進(jìn)行比較。氧化應(yīng)激后3天(72小時(shí))，用熱誘導(dǎo)HSP72。最后，HSP72RNA和HSP72蛋白分別通過(guò)實(shí)時(shí)PCR和Western印跡進(jìn)行分析。圖2顯示了在用不同濃度的根據(jù)實(shí)施例2制備的不皂化提取物處理的IMR-90細(xì)胞中HSP72蛋白水平的Western印跡分析。圖注"T"和"ST"分別代表"對(duì)照"和"熱應(yīng)激"。A、B、C和D分析分別對(duì)應(yīng)于年輕IMR-90成纖維細(xì)胞、衰老IMR-90成纖維細(xì)胞(由&02誘導(dǎo)的衰老)、與1jig/ml不皂化提取物孵育的衰老IMR-90成纖維細(xì)胞以及與3jig/ml不皂化提取物孵育的衰老IMR-90成纖維細(xì)胞。圖3顯示了在用1jig/ml(C)和3|ng/ml(D)不皂化提取物預(yù)處理的衰老IMR-90成纖維細(xì)胞中HSP72蛋白的誘導(dǎo)水平(用P-肌動(dòng)蛋白的表達(dá)水平來(lái)標(biāo)準(zhǔn)化的)的半定量分析。還顯示了在年輕IMR-90成纖維細(xì)胞(A)和衰老IMR-90成纖維細(xì)胞(由&02誘導(dǎo)的衰老)(B)中HSP72蛋白的誘導(dǎo)水平。圖2和圖3表明，在變得衰老的IMR-90成纖維細(xì)胞中不再有HSP72蛋白的誘導(dǎo)，但濃度為1jig/ml和3pg/ml的阿干樹(shù)果肉抽提物恢復(fù)了熱應(yīng)激對(duì)于HSP72的誘導(dǎo)。最后，下面的表V給出了在用不同濃度的阿干樹(shù)果肉抽提物預(yù)處理的衰老成纖維細(xì)胞中HSP72mRNA的誘導(dǎo)倍數(shù)(標(biāo)準(zhǔn)化后的)。表V:誘導(dǎo)倍數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>這個(gè)表證實(shí)了在轉(zhuǎn)錄水平上獲得的結(jié)果，并顯示了阿干樹(shù)果肉抽提物幾乎完全恢復(fù)了HSP72mRNA的誘導(dǎo)。在3jig/ml的濃度時(shí)，該提取物的活性最大。4)結(jié)論HSP72蛋白是能被多種應(yīng)激(熱等)所誘導(dǎo)的蛋白質(zhì)，并且強(qiáng)烈地參與適應(yīng)性應(yīng)答的過(guò)程。已認(rèn)識(shí)到，在皮膚和其他組織水平上HSP72蛋白的可誘導(dǎo)性隨著年齡增長(zhǎng)而降低，特別是在細(xì)胞衰老的過(guò)程中。此外，已承認(rèn)，老化與對(duì)于引起年齡相關(guān)性病理學(xué)的環(huán)境應(yīng)激所作出的應(yīng)答降低有關(guān)。從在培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中的誘導(dǎo)的衰老模型開(kāi)始，作者評(píng)價(jià)了阿千樹(shù)果肉抽提物調(diào)節(jié)HSP72的熱誘導(dǎo)降低的能力。總之，這些結(jié)果確認(rèn)了，一方面，與年輕成纖維細(xì)胞相比，在衰老成纖維細(xì)胞中HSP72蛋白的誘導(dǎo)(通過(guò)熱應(yīng)激)強(qiáng)烈降低。另一方面，這些工作表明，阿干樹(shù)果肉抽提物恢復(fù)了表老成纖維細(xì)胞中HSP72蛋白的誘導(dǎo)。在這個(gè)體外研究模型中，阿千樹(shù)果肉抽提物限制了細(xì)胞衰老的生物學(xué)后果，因而表現(xiàn)出抗老化的特性。權(quán)利要求1.包含三萜級(jí)分的植物果肉的不皂化提取物在制備用于預(yù)防和/或治療與皮膚老化相關(guān)的皮膚病癥的美容、藥物或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中的用途，其特征在于，所述三萜級(jí)分包含高根二醇、α-脂檀素、β-脂檀素和羽扇醇，其中高根二醇的量為所述不皂化提取物的7重量％至40重量％。2.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，|3-脂檀素的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為所述不皂化提取物的5%至30%。3.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，a-脂檀素和羽扇醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)之和為所述不皂化提取物的10°/。至50%。4.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，所述提取物在最終美容產(chǎn)品中的量為所述制劑總重的0.001重量°/。至50重量°/。，優(yōu)選0.01重量％至1G重量％，更優(yōu)選0.1重量％至2重量％。5.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，所述提取物從選自山欖科的植物中獲得。6.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，所述提取物獲自阿干樹(shù)的果實(shí)的果肉。7.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，所述皮膚病癥表現(xiàn)為皮膚質(zhì)地、顏色和透明度的改變以及皺紋的出現(xiàn)。8.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，所述皮膚病癥是由于對(duì)環(huán)境應(yīng)激的應(yīng)答降低或者喪失而引起的。9.權(quán)利要求8的用途，其特征在于，所述環(huán)境應(yīng)激由陽(yáng)光或煙草造成。10.權(quán)利要求1的用途，其特征在于，所述皮膚病癥是由于HSP72蛋白的可誘導(dǎo)性降低或者喪失而引起的。11.權(quán)利要求l的用途，其特征在于，所述美容、藥物或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品為口服或局部使用的形式，優(yōu)選為局部使用的形式。12.權(quán)利要求11的用途，其特征在于，所述局部使用的形式選自霜?jiǎng)?、凝膠劑、軟骨劑和噴霧劑。13.權(quán)利要求ll的用途，其特征在于，所述口服形式選自片劑、膠嚢劑和用于可飲用懸液的粉劑。全文摘要本發(fā)明的領(lǐng)域涉及植物果肉的不皂化提取物在制備用于治療和/或預(yù)防與老化相關(guān)的皮膚病癥的美容、藥物或營(yíng)養(yǎng)產(chǎn)品中的用途。文檔編號(hào)A61K8/97GK101355926SQ200680050441公開(kāi)日2009年1月28日申請(qǐng)日期2006年12月28日優(yōu)先權(quán)日2006年1月5日發(fā)明者B·法伯,C·鮑杜尹,M·查爾弗隆,R·伯利申請(qǐng)人:皮爾法伯護(hù)膚化妝品公司