專利名稱：：控制病原體的產(chǎn)品的制作方法控制病原體的產(chǎn)品本發(fā)明涉及用于控制病原性疾病和對(duì)抗可能或易于引起感染的致病菌存在的制劑和其他產(chǎn)品。在病原性生物中，分為細(xì)菌、真菌和病毒。需要繼續(xù)尋求能夠控制游離狀態(tài)(即，可能存在于環(huán)境或外界中)和病原性生物侵入宿主體內(nèi)導(dǎo)致與特定生物體相關(guān)的疾病癥狀的感染狀態(tài)的病原性生物的抗感染劑和消毒劑。一般地，許多起因于病原性生物的疾病狀態(tài)使用抗生素治療，抗生素是已被發(fā)現(xiàn)并商品化以用于治療這種感染的典型藥物。在醫(yī)院病房、或診所、手術(shù)室、診療室或類似環(huán)境中，商業(yè)可獲得的消毒劑用作預(yù)防措施來(lái)控制和特別是殺滅或除害病原體，例如可能存在于例如地板、墻壁、盆、門等表面的細(xì)菌。有許多往往是基于卣代/芳香烴的可廣泛獲得的消毒劑。其他化學(xué)類型也是已知的。商業(yè)可獲得的消毒劑也用于家庭和辦公室環(huán)境，例如醫(yī)務(wù)工作者的家庭和/或辦公室中。需要為醫(yī)院內(nèi)或與醫(yī)院相關(guān)的環(huán)境提供感染控制系統(tǒng)。但是，目前存在對(duì)抗生素耐藥致病菌株的出現(xiàn)的關(guān)注，例如MRSA(甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌)；VRE(萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌)；耐克拉霉素幽門螺旋桿菌，甲硝唑僅指出少數(shù)幾種。由于這種獲得性耐藥性使得用常規(guī)的抗生素治療抗生素耐藥細(xì)菌是有問(wèn)題的。相應(yīng)地需要提供不依賴于目前或已發(fā)現(xiàn)的抗生素藥物的替代的治療和預(yù)防方案。也存在對(duì)與芳香卣代消毒劑相關(guān)的健康的關(guān)注，同樣需要研發(fā)替代的不依賴于閨代芳香組分的消毒劑和抗感染劑。在我們以前出版的WO01/15554申請(qǐng)中已經(jīng)建議大量含有金屬離子的組合物在治療病原性生物中是有益的。我們現(xiàn)已驚奇地發(fā)現(xiàn)在我們所述的早期出版物中公開的組合物的選擇在抗特異病原性生物中是有用的，其中病原性生物是抗生素耐藥的或難于治療或控制，和/或可以存在于醫(yī)院、診療室、診所和手術(shù)室、家庭和環(huán)境中在治療方案下對(duì)活的人體細(xì)胞沒(méi)有顯著危害或有害作用的。我們也已發(fā)現(xiàn)這種有益合物中。我們也已驚奇地發(fā)現(xiàn)基質(zhì)可以浸漬本文描述的組合物來(lái)荻得令人驚奇地有效和長(zhǎng)效抗菌特性，例如，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)目前商業(yè)可獲得的用于清潔醫(yī)院表面的微纖維和/或超微纖維布料可以浸漬本文描述的組合物并用作強(qiáng)效廣譜抗菌和/或抗真菌消毒劑輔助物。我們也已發(fā)現(xiàn)這種微纖維布料可以洗滌、再浸漬和再使用很多次，具有顯著的經(jīng)濟(jì)利益。我們也已意外地發(fā)現(xiàn)本文描述的含有離子修飾的銅的組合物可以同時(shí)有效地對(duì)抗多種不同病原體，并提供對(duì)抗這些多種不同病原性生物感染和再感染的保護(hù)。本文描述的組合物可以局部應(yīng)用于患有感染的病人，例如局部應(yīng)用于患者的皮膚來(lái)預(yù)防或治療MRSA和/或VRE。我們進(jìn)一步研發(fā)了一種感染控制系統(tǒng)，其基于通過(guò)優(yōu)選的微流體測(cè)定法檢測(cè)在表面或大氣環(huán)境內(nèi)存在的至少一種病原性生物，檢測(cè)的結(jié)果顯示或其他表現(xiàn)，通過(guò)將一種或多種本文描述的類型的組合物應(yīng)用于表面或大氣環(huán)境處理檢測(cè)的致病菌，重復(fù)檢測(cè)步驟并重復(fù)顯示步驟。這一過(guò)程的步驟可以組成實(shí)質(zhì)的感染控制系統(tǒng)。組合物可以以噴霧、細(xì)霧或"霧"使用或應(yīng)用來(lái)對(duì)抗致病菌。在這種應(yīng)用中用作消毒試劑的組合物分散于小水滴上，其隨后用作細(xì)霧或霧來(lái)覆蓋暴露的和/或隱藏的表面，并進(jìn)入建筑內(nèi)部的裂縫和縫隙。一旦處于表面，絡(luò)合銅離子的消毒特性是有效的并在相當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)保持有效。可以使用不同的噴霧設(shè)置，小水滴的大小和應(yīng)用組合物的濃度各異。表面活性劑可以包含于這些組合物中用作此目的。本發(fā)明也包含摻有本發(fā)明含銅組合物的清潔劑組合物。特別地，當(dāng)用于洗滌醫(yī)務(wù)工作者或其他與患有感染的病人接觸的人穿著的衣服時(shí)，這種清潔劑會(huì)變成消毒的并能夠控制致病菌，例如細(xì)菌和耐藥的細(xì)菌。類似地這種消毒清潔劑可以用于洗滌患有感染的病人的衣服或床單。根據(jù)我們上文提及的專利申請(qǐng)概述的一般過(guò)程，方便地制備下文描述的組合物，除了在某些情況下酸的添加限于獲得在較低范圍起始的電解電勢(shì)外，例如至少高達(dá)150毫伏，但某些實(shí)施方案低于350mV。其中存在額外的成分，例如，幫助在表面清潔抗感染產(chǎn)品的表面活性劑，這顯示于表中。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>在其他具體實(shí)施方式中低濃度的銅是需要的，例如80-140g，例如90-130g或大約100-120g硫酸銅，假定其他組分的量相同。這對(duì)局部應(yīng)用和對(duì)抗幽門螺旋桿菌感染是有用的。在上表中，組合物作為含銅水溶液，其中在來(lái)自溶解的銨試劑的銨離子水溶液的存在下并可能與之結(jié)合，銅作為溶解的金屬離子存在，并且組合物顯示明顯的至少150mV的電解電勢(shì)，雖然在某些優(yōu)選具體實(shí)施方式大于300mV,例如至少350mV。我們已經(jīng)驚奇地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)在低于100ppm的濃度下，例如50ppm應(yīng)用于這些大腸桿菌細(xì)胞的培養(yǎng)物時(shí)，前述組合物可以高效對(duì)抗例如大腸桿菌頑固菌林的難以治療的菌林，同時(shí)對(duì)至少兩種不同的例如HT-29和U-937人細(xì)胞培養(yǎng)物缺乏細(xì)胞毒性。但是，在某些具體實(shí)施方式中預(yù)期高達(dá)1000ppm當(dāng)量銅的濃度。優(yōu)選組合物中銅當(dāng)量濃度是大約10-50g/升，優(yōu)選20-40g/升，更優(yōu)選25-35g/升，溶劑相是蒸餾(與去離子相比)水。室溫下1分鐘至12小時(shí)、或1分鐘至6小時(shí)或0.25至3.0小時(shí)的時(shí)間內(nèi)，用含有范圍0.01-100ppm當(dāng)量銅的組合物治療目標(biāo)病原性生物是優(yōu)選的。但是，對(duì)于噴霧/霧化治療，由于噴霧劑可以短期內(nèi)爆發(fā)，應(yīng)用時(shí)間可以短些。本發(fā)明銅組合物可以在例如0.5-500ppm的當(dāng)量銅下^f吏用來(lái)對(duì)抗幽門螺旋桿菌(H.pylori)和特別對(duì)抗耐藥幽門螺旋桿菌，二者是胃/消化性潰瘍的主要誘因。本發(fā)明銅組合物特別可治療的耐藥林是耐克拉霉素幽門螺旋桿菌、耐甲硝唑幽門螺旋桿菌和(雖然罕見)耐阿莫西林幽門螺旋桿菌。本發(fā)明銅組合物可以配制成可以應(yīng)用于皮膚和粘膜表面的局部制劑例如乳劑、凝膠劑和噴霧溶液、浸漬敷料和灌洗溶液。本發(fā)明的銅組合物可以用于浸漬用于清潔表面以消毒該表面的吸收性基質(zhì)。優(yōu)選的基質(zhì)是從JohnsonDiversity,Inc獲得的稱為微纖維和/或超微纖維(UMF)布料。如上文預(yù)示的，這種浸漬微纖維布料可以洗滌和再使用許多次。浸漬的這種布料提供了一種控制細(xì)菌生長(zhǎng)和/或發(fā)展的簡(jiǎn)便方式，例如抑制細(xì)菌生長(zhǎng)和/或發(fā)展，例如抑制細(xì)菌生長(zhǎng)和/或復(fù)制或至少抑制這種細(xì)菌的細(xì)菌活性。同時(shí)本發(fā)明的范圍廣泛至足以包含浸漬的微纖維基質(zhì)與任何抗微生物劑的組合，本發(fā)明也包括用得自上表或落入本發(fā)明范圍內(nèi)含銅組合物的銅組合物浸漬的微纖維基質(zhì)的特定具體實(shí)施方案。將本發(fā)明基于銅的金屬離子殺蟲劑混合到例如微纖維或超微纖維布料的基質(zhì)的一個(gè)優(yōu)點(diǎn)是其可以預(yù)防表面的交叉污染，這是沒(méi)有它時(shí)真正的危險(xiǎn)。特別地這種浸潰微纖維布料可以用于消毒表面(例如，在醫(yī)院、診療室、診所、手術(shù)室)來(lái)對(duì)抗難以治療的醫(yī)院感染MRSA(野生株)、ACCB(野生林)、VRE(野生林)、C.diff(孢子懸液)、本文隨后定義的LPn(軍團(tuán)桿菌屬)和沙門氏菌。本發(fā)明組合物和浸漬其的基質(zhì)能夠提供非常實(shí)質(zhì)的和顯著的細(xì)菌活性的抑制，即能夠妨礙并籍此控制用常規(guī)的抗生素和/或常規(guī)的消毒方案迄今難以處理的這種醫(yī)院致病菌的生長(zhǎng)、發(fā)展和/或復(fù)制。這種細(xì)菌致病活性的抑制可以令人驚訝地實(shí)現(xiàn)，而對(duì)周圍普遍的人細(xì)胞沒(méi)有顯著的并發(fā)的細(xì)胞毒性。在本文附帶的權(quán)利要求中限定本發(fā)明。為了說(shuō)明本發(fā)明，使本發(fā)明更容易理解并易于被本領(lǐng)域技術(shù)人員實(shí)施，其具體實(shí)施方式現(xiàn)在只是以非限制實(shí)施例的方式給出，并參考附圖進(jìn)行描述，其中圖1是在組合物20ppm當(dāng)量銅下的MRSA時(shí)間-殺菌曲線，單獨(dú)的銅鹽和組合物剩余組分(本文俗語(yǔ)稱為'粘合劑，)作為對(duì)照，圖2是與圖1相似的MRSA時(shí)間-殺菌曲線，但是在150ppm當(dāng)量銅下，圖3是在40ppm下與圖1相似的ACCB時(shí)間-殺菌曲線，圖4是在150ppm下與圖3相似的ACCB時(shí)間-殺菌曲線，圖5顯示使用標(biāo)準(zhǔn)EN12054實(shí)驗(yàn)方法配制的含有CuAL42[A]和PurelTM[困]手部凝膠的X-凝膠水性介質(zhì)對(duì)MRSA細(xì)菌存活的抗菌作用，圖6與圖5相似的視圖，但顯示使用相同制劑對(duì)ACCB存活的作用，圖7是與圖5和6相似的視圖，但顯示使用相同制劑對(duì)C.diff(芽胞)存活的作用，圖8A-8D是表示三種銅制劑和單獨(dú)的硫酸銅[口]對(duì)人小腸上皮HT-29細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用的圖，圖9A-9D是與圖8A-8D相似的圖，但顯示三種銅制劑與單獨(dú)的石克酸銅[口]相比對(duì)人單核淋巴瘤U937細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用的圖，圖10-14是顯示與幽門螺旋桿菌實(shí)施例12相關(guān)的舉例的銅制劑作用的圖，其中AL用作CuAL42的縮寫，PC用作CuPC33的縮寫，濃度以ppm給出，其中Q表示對(duì)照，圖15顯示使用舉例的編碼CuAL42的銅制劑獲得的和與糖尿病足潰瘍相關(guān)的8種細(xì)菌微生物的抑菌帶，圖16顯示與圖15中相似的抑菌帶，但使用編碼CuWB50的銅抗菌組合物，圖17-19是代表三種銅組合物在低劑量(lppm)下對(duì)抗許多難以處理和/或抗生素耐藥細(xì)菌的時(shí)間-殺菌曲線的圖表，圖20顯示與實(shí)施例13相關(guān)的手部凝膠殘留物的抗MRSA活性，其中根據(jù)本發(fā)明(X-凝膠)的凝膠類型水性介質(zhì)與商業(yè)可獲得產(chǎn)品比較，圖21顯示通過(guò)三種配制的銅抗細(xì)菌組合物浸漬的與實(shí)施例14相關(guān)的MRSA-污染的UMF(超微纖維)布料的消毒作用，以及圖22是手部凝膠對(duì)A431人皮膚細(xì)胞系的細(xì)胞毒性與其它在實(shí)施例15中說(shuō)明的相關(guān)產(chǎn)品的對(duì)比。實(shí)施例1介紹根據(jù)本文表l的實(shí)施方案l-8獲得的編碼CuAL42、CuPC33和CuWB50的三種銅金屬離子制劑用于測(cè)試對(duì)抗下列目標(biāo)生物的活性曱氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA);醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌(ACCB);腸球菌(萬(wàn)古霉素耐藥；VRE);艱難梭菌芽胞；嗜肺性軍團(tuán)病桿菌。在用蒸餾水稀釋前，三種金屬離子制劑母液中當(dāng)量元素銅的濃度是30.43g/升。三種銅制劑母液實(shí)質(zhì)上各自用去離子水稀釋，隨后在當(dāng)量元素銅百萬(wàn)分之0.25、0.5和1.0(ppm)的最終稀釋后的濃度下測(cè)試對(duì)抗對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的微生物。相同的組合物在lppm下也測(cè)試了對(duì)抗穩(wěn)定期的微生物。縮寫ACCB，醋酸鉤-鮑曼不動(dòng)桿菌；MRSA，甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌；PBS，磷酸鹽緩沖鹽水；VRE，腸球菌(萬(wàn)古霉素耐藥)。材料和方法血瓊脂、營(yíng)養(yǎng)肉湯和BYCE培養(yǎng)基由OxoidLtd(UK)購(gòu)得。MRSA、ACCB和VRE在血瓊脂上純培養(yǎng)物中生長(zhǎng)，單一菌落轉(zhuǎn)移至營(yíng)養(yǎng)肉湯并在37匸振搖6小時(shí)培養(yǎng)。然后離心6小時(shí)的肉湯培養(yǎng)物(對(duì)數(shù)期細(xì)胞)使細(xì)胞沉淀，丟棄肉湯并洗滌細(xì)菌細(xì)胞，使用pH7.2的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)離心三次。在PBS中制備最終的混懸液，活細(xì)胞計(jì)數(shù)調(diào)節(jié)至試驗(yàn)需要的接種量U.5xl08)。這些細(xì)胞隨后接觸最終濃度為0.25、0.5和1.0ppm的本發(fā)明舉例的銅制劑。在15、30、60和120分鐘從這些培養(yǎng)物中取樣，通過(guò)Miles和Misra技術(shù)測(cè)定活菌數(shù)。在15和120分鐘制備PBS樣品對(duì)照培養(yǎng)物以確保接種物的活性和穩(wěn)定性。使用從24小時(shí)瓊脂平板培養(yǎng)物獲取的穩(wěn)定期細(xì)胞在1.Oppm重復(fù)上述實(shí)施例，在初期的PBS洗滌后將其直接混懸于PBS中，接種物調(diào)節(jié)至1.5xl()8細(xì)胞/ml。通過(guò)混懸在血瓊脂上50:50乙醇生理鹽水中厭氧培養(yǎng)的5天的微生物培養(yǎng)物制備艱難梭菌孢子懸液。隨后對(duì)該混懸液進(jìn)行Miles和Misra計(jì)數(shù)以測(cè)定活的芽胞的最終濃度，接種物最終調(diào)節(jié)至5xl(T芽胞/ml用于試驗(yàn)。由PBS中BCYE培養(yǎng)基上5天的培養(yǎng)物制備嗜肺性軍團(tuán)病桿菌的混懸液，使用活菌計(jì)數(shù)調(diào)節(jié)混懸液至5xl(T細(xì)胞/ml。使用營(yíng)養(yǎng)肉湯中6小時(shí)的培養(yǎng)物作為刺激接種物測(cè)試所有三種銅制劑對(duì)抗MRSA、ACCB和VRE。結(jié)果所有三種銅制劑-CuAL42(表A)、CuPC"(表2)和C11WB50(表3)以劑量依賴性方式減少細(xì)菌數(shù)目。在lppm濃度下，所有3種銅制劑得到MRSA、ACCB和VRE的大約3對(duì)數(shù)抑制。CuAL42和CuPC33產(chǎn)生對(duì)艱難梭菌芽胞的2對(duì)數(shù)抑制，同時(shí)CuWB50產(chǎn)生對(duì)艱難梭菌芽胞的3對(duì)數(shù)抑制。CuAL42和CuWB50產(chǎn)生對(duì)嗜肺性軍團(tuán)病桿菌的2對(duì)數(shù)抑制，CuPC33產(chǎn)生大約3對(duì)數(shù)抑制。如表4所示，當(dāng)使用MRSA、ACCB和VRE時(shí)3種銅制劑對(duì)對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期和穩(wěn)定期細(xì)胞的抑制作用是相似的。在其他試驗(yàn)中細(xì)菌在PBS中生長(zhǎng)并觀察到顯著的殺菌作用。如表5所示，當(dāng)在營(yíng)養(yǎng)肉湯中生長(zhǎng)時(shí)MRSA、ACCB和VRE對(duì)殺菌作用較不敏感，表明蛋白質(zhì)或其他組分抑制銅制劑的活性。由于在獲得細(xì)菌生長(zhǎng)上的技術(shù)困難沒(méi)有對(duì)艱難梭菌和嗜肺性軍團(tuán)病桿菌進(jìn)行測(cè)試。討論這里顯示的結(jié)果顯示在直到lppm的濃度下所有3種銅制劑對(duì)致病菌是高度殺菌的。但是當(dāng)細(xì)菌在營(yíng)養(yǎng)肉湯中生長(zhǎng)時(shí)這種活性多少會(huì)被中和，表明肉湯的蛋白質(zhì)或其它組分降低銅制劑的功效。有趣地是，銅制劑對(duì)抗生長(zhǎng)的細(xì)菌和穩(wěn)定期的細(xì)菌是非常有效的，表明對(duì)細(xì)菌細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用而非只是抑制作用。我們已經(jīng)顯示了在0.lppm的CuAL42存在下生長(zhǎng)10天的MRSA在接觸lppm的CuAL42時(shí)100%地被殺滅。表ACuAL42時(shí)間-殺菌曲線(硫酸銅/疏酸銨/疏酸)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>(d)腸球菌(萬(wàn)古霉素耐藥，野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表2CuWB50時(shí)間-殺菌曲線(硫酸銅/氯化銨/鹽酸))MRSA(野生抹)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>)不動(dòng)桿菌(野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>)艱難梭菌孢子懸液<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>(C)艱難梭菌孢子懸液<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(d)腸球菌(萬(wàn)古霉素耐藥，野生林)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>(e)嗜肺性軍團(tuán)病桿菌NCTC<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表43種銅制劑(lppm)對(duì)穩(wěn)定期細(xì)菌的作用<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>初始接種量-lQSCFU/ml實(shí)施例2介紹根據(jù)本文表1的實(shí)施例1-8獲得的相同的三種金屬離子(銅)制劑編碼的CuAL42、CuPC33和CuWB50，當(dāng)吸收至超微纖維(UMF)布料并隨后用于消除來(lái)自普通環(huán)境的醫(yī)院表面(層狀的操作臺(tái)表面)的高水平的活細(xì)菌接種物(MRSA、ACCB或Cdiff),用于研究其殺菌性質(zhì)?？s寫ACCB，醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌；Cdiff，艱難梭菌(芽胞)；MRSA,甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌；PBS,磷酸鹽緩沖鹽水；ppm，百萬(wàn)分率；UMF，超孩吏纖維布料。材料和方法用于研究的MRSA、ACCB和Cdiff(芽胞)生物是臨床分離菌。層狀表面接種100ju1含有2xl()6菌落形成單位(cfu)的MRSA或ACCB或3xl()5芽胞/ral的Cdiff的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)，使用無(wú)菌平的涂布器涂布超過(guò)100cm2的區(qū)域并允許千燥。干燥后區(qū)域接觸涂板以確保接種物的活力。然后用蒸餾水(對(duì)照)或最終濃度為75ppm的各個(gè)銅制劑濕潤(rùn)至推薦的濕度限度的UMF清潔該區(qū)域。隨后區(qū)域再次接觸涂板來(lái)評(píng)價(jià)UMF消除的接種物。然后UMF裝于迷你手提袋中置于室溫下16小時(shí)以模擬去洗衣房或病房中的靜態(tài)儲(chǔ)存。16小時(shí)后UMF置于100mlPBS中并在Stomacher(勻漿器,SewardLtd,UK)中250rpm下攪拌3分鐘。對(duì)洗脫劑進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，10ml的洗脫劑在3500rpm下離心10分鐘，沉積物在血瓊脂上培養(yǎng)。對(duì)任何環(huán)境污染測(cè)試板的本底計(jì)數(shù)和PBS計(jì)數(shù)。顯示的結(jié)果是三次單獨(dú)測(cè)定的平均值。結(jié)果如表6所示，接觸涂板顯示UMF非常有效地消除大量的活的接種物。但是，在銅制劑不存在時(shí)細(xì)菌在UMF布料上保持活力。所有三種銅制劑殺滅100。/D的不動(dòng)桿菌和艱難梭菌芽胞并產(chǎn)生對(duì)MRSA的4對(duì)數(shù)殺滅。UMF-Cu制劑浸漬的布料的勻漿器洗脫劑中沒(méi)有可回收的不動(dòng)桿菌或艱難梭菌細(xì)菌。討論這些研究調(diào)查了含和不含基于銅的抗細(xì)菌制劑的超微纖維布料清潔被污染的表面的能力。同時(shí)UMF布料顯示對(duì)從表面清除細(xì)菌是非常有效的，細(xì)菌在布料上保持活力至少16小時(shí)。當(dāng)UMF布料用3種基于銅的制劑的任意一種預(yù)處理時(shí)，清潔效力不變，但在布料上ACCB和Cdiff芽胞的細(xì)菌存活完全被防止，MRSA減少4對(duì)數(shù)級(jí)。這些結(jié)果表明UMF布料對(duì)清潔被污染的表面是非常有效的，但根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例用基于銅的抗細(xì)菌制劑對(duì)布料的預(yù)處理極大地減少了這些致病菌在布料上的存活率，這在醫(yī)院和家庭是非常有益的。表6含或不舍基于銅的抗細(xì)菌制劑的超微纖維布料對(duì)被污染的表面的清潔<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>'環(huán)境污染物的檢查。"PBS的無(wú)菌檢查。實(shí)施例3介紹醫(yī)院中非常難以消滅的抗生素耐藥細(xì)菌的存在，例如甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)和萬(wàn)古霉素耐藥腸球菌(VRE)、艱難梭菌芽胞，是日益嚴(yán)重的問(wèn)題。這些微生物也可以寄居于護(hù)士的制服上，并且這代表了細(xì)菌在醫(yī)院傳播以及進(jìn)入普通環(huán)境的一種方式。因此，采用本實(shí)施例來(lái)測(cè)定本文已證實(shí)在體外對(duì)抗MRSA、不動(dòng)桿菌、大腸桿菌和艱難梭菌是有效的稱為CuWB50(如本文定義的)的基于銅的金屬離子制劑與和不與Ariel生物清潔劑在洗滌系統(tǒng)模型中是否具有活性。縮寫Cdiff，艱難梭菌；MRSA,曱氧西林耐藥金黃色葡萄球菌；ppffl，百萬(wàn)分率；材料和方法在研究中使用的MRSA和Cdiff(芽胞)是臨床分離菌。Stomache,400循環(huán)器由SewardLtd(UK)購(gòu)得。1.使用Arie1清潔劑和或不和本文稱為CuWB50的銅制劑的實(shí)施例的洗滌試驗(yàn)設(shè)計(jì)。護(hù)士制服材料(100cm2)的樣品用MRSA或Cdiff芽胞污染并允許在室溫下干燥3小時(shí)。每個(gè)樣品添加至含有20ml水的塑料袋中，加入制造商推薦的濃度的Ariel清潔劑和或不和200ppm的CuWB50。每個(gè)樣品在室溫下循環(huán)勻漿器中240rpm處理15分鐘來(lái)才莫擬低溫洗涂周期。洗滌后，2ml的洗脫劑與2ml的富含鈣的林格溶液混合來(lái)中和任何遺留的CuWB50。當(dāng)菌落在雙份板上計(jì)數(shù)時(shí)，中和的洗脫劑(0.lml)隨后涂布于血瓊脂板上并在37匸下在空氣中(MRSA)或無(wú)氧條件下(Cdiff芽胞)過(guò)夜培養(yǎng)。2.具有CuWB50加至沖洗周期中的洗滌試驗(yàn)設(shè)計(jì)。護(hù)士制服材料(100cm2)的樣品用MRSA或Cdiff芽胞污染并允許在室溫下干燥3小時(shí)。每個(gè)樣品添加至含有20mL水的塑料袋中，然后在室溫下循環(huán)勻漿器中240rpm處理15分鐘來(lái)模擬低溫洗滌周期。在只用水洗周期后，用20ml含有200ppmCuWB5Q的水更換水，然后在勻漿器中再次處理5分鐘以模擬沖洗周期。2ml的洗脫劑與2ml的富含鈣的林格溶液混合來(lái)中和任何遺留的CuWB50。當(dāng)菌落在雙份板上計(jì)數(shù)時(shí)，中和的洗脫劑(0.lml)隨后涂布于血瓊脂板上并在37X:下在空氣中(MRSA)或無(wú)氧條件下(Cdiff芽胞)過(guò)夜培養(yǎng)。結(jié)果如表7所示，當(dāng)護(hù)士制服材料樣品只用Ariel清潔劑洗滌時(shí)，MRSA和C.diff的洗滌后回收量從初始的接種水平減少了2-3對(duì)數(shù)級(jí)。相反，當(dāng)洗液含有Ariel和200ppm的CuWB50時(shí)會(huì)有完全的6對(duì)數(shù)殺滅。當(dāng)護(hù)士制服材料樣品只在水中洗滌時(shí)，表8所示的每個(gè)實(shí)例中MRSA和Cdiff的洗滌后回收量只是輕微地減少了小于1對(duì)數(shù)級(jí)。但是，在含有200ppm的CuWB50水中沖洗5分鐘后所有殘留的微生物都被殺滅，沒(méi)有觀察到菌落。結(jié)論我們使用模型洗滌系統(tǒng)和被甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)或艱難梭菌芽胞(Cdiff)污染的護(hù)士制服材料樣品來(lái)評(píng)價(jià)用Ariel生物清潔劑與和不與CuWB50或?qū)uWB50加入沖洗周期的洗滌的抗菌作用。結(jié)果表明當(dāng)Ariel減少2-3個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的細(xì)菌污染時(shí)，當(dāng)加入洗滌或沖洗周期時(shí)CuWB50在消除/殺滅細(xì)菌中是100%有效的。根據(jù)本發(fā)明基于銅的金屬離子制劑的加入到醫(yī)院和家庭洗衣中可能是一種消毒衣物的經(jīng)濟(jì)有效的方式。表7使用Ariel清潔劑和或不和CuWB50的洗滌實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)<table>tableseeoriginaldocumentpage20</column></row><table>實(shí)施例4介紹糖尿病性潰瘍代表了難以治療的嚴(yán)重疾病，特別是感染了厭氧菌或抗生素耐藥細(xì)菌時(shí)。糖尿病足潰瘍經(jīng)常致殘以及導(dǎo)致腳趾、腳、甚至是腿的截肢。糖尿病性潰瘍的感染通常與一種或多種下列微生物一起發(fā)生甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)、綠膿假單胞菌、醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌、肺炎克雷伯桿菌、脆弱擬桿菌、不解糖卟啉單胞菌、大芬戈?duì)柕戮?、厭氧消化鏈球菌[l-3]。本實(shí)施例的目的是測(cè)定已經(jīng)證明抗MRSA、不動(dòng)桿菌、大腸桿菌和艱難梭菌是有效的本文定義的稱為CuAL42、CuPC33和CuWB50的三種基于銅的金屬離子制劑是否也具有抗上述所列的糖尿病性潰瘍-相關(guān)的微生物的活性。材料和方法研究中使用的生物體是臨床分離菌。表l中使用的菌林的名稱和縮寫名如下甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)、A醋酸鈣-鮑曼不動(dòng)桿菌(ACCB)、綠膿假單胞菌(Paerug)、肺炎克雷伯桿菌(Kpneum)、脆弱擬桿菌(Bfragilis)、不解糖卟啉單胞菌(Pasacch)、大芬戈?duì)柕戮?Fmagna)、厭氧消化鏈球菌(Panaerob)。0.5ml的MacFarland標(biāo)準(zhǔn)混懸液由每種在緩沖生理鹽水中這些生物體制備。拭子浸蘸細(xì)菌混懸液并隨后使用旋轉(zhuǎn)板涂于血瓊脂上以在瓊脂板上培育細(xì)菌菌苔。含有不同濃度的CuAL42、CuPC33和CuWB50(以每紙盤元素銅的Mg數(shù)計(jì)算)紙盤置于瓊脂表面，板在DonWhitleyAnaerobic工作站中37'C下無(wú)氧培養(yǎng)24小時(shí)(厭氧菌)或37X:下空氣中培養(yǎng)24小時(shí)(需氧菌)。使用電子測(cè)徑器測(cè)量抑菌圏并記錄。表9所示的結(jié)果是平行測(cè)定的。結(jié)果如表9和圖15和16所示，所有三種銅制劑在超過(guò)100jLig元素銅的濃度下對(duì)抗所有8種微生物始終是非常有效的。觀察到某些細(xì)菌對(duì)3種不同制劑敏感性的一些輕度變異，例如，在50mg下醋酸鉀-鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)CuAL42和CuPC33比對(duì)CuWB50更敏感，在50jag下肺炎克雷伯菌只對(duì)CuAL42敏感。MRSA、Bfragilis和不解糖卟啉單胞菌在測(cè)試的最低濃度10yg下對(duì)所有3種銅制劑是敏感的。討論很明顯紙盤上所有3種銅制劑超過(guò)100|ig元素銅的濃度對(duì)所有8種生物體產(chǎn)生顯著的抑菌圏。這些結(jié)果與在營(yíng)養(yǎng)肉湯存在下需要至少75jag的銅制劑抑制細(xì)菌的使用試管稀釋試驗(yàn)的研究一致，也與使用超微纖維75jjg的銅制劑完全殺滅在儲(chǔ)存的布料上的細(xì)菌的研究一致。如這些紙盤試驗(yàn)中寬的抑菌圏顯示的，通常在糖尿病病人感染性潰瘍中發(fā)現(xiàn)的需氧菌和厭氧菌都對(duì)100jig或更高水平的銅敏感。在不同的銅制劑和某些生物的活性上有一些差異，但這些差異并不大。結(jié)果表明，由于其殺滅導(dǎo)致糖尿病性潰瘍持續(xù)和傳播的細(xì)菌的能力和加速皮膚愈合過(guò)程的能力，含有一種或多種例舉的銅制劑的洗劑、肥皂和凝膠在治療糖尿病性潰瘍中是有用的。表9三種銅金屬離子制劑和8種與糖尿病性潰瘍有關(guān)的微生物獲得的抑菌圏儲(chǔ)艦歸1ACCBPaerugKpne咖BfragilisPasacchFmagnaPanaerobL柳對(duì)的直徑(咖)CuAL421010.3900011.322.43005010.627.957.078.6920.9830.5515.349.8110010,8310.808.629.3825.1734.2618.3015.3520011.1213.4712.5011,2426.3739.1122.3417.6530012.3315,5115.0613.5529.1842.4624.1623.74CuPC33109.8000012.9118.307.205010.007.777.58018.1022.2914.8911.9810012.2810.059.497.8924.8930.6619.2115.8020013.4312.0512.429.9825.9140.9623.1020.0030023.61R5213.9913.7027.2842.6425.1126.44謹(jǐn)501013.1400011.3515.57005022.6906.83019.6620.7412,7210.9110023.598.567.377.7123.9329.5416.7615.3620023.1910.379.538.8425.8835.1225,1118.6530025.8214.2111.2911,0528.8039.5228.0322.13i縮寫顯示于材料和方法中。實(shí)施例5介紹目前少有證據(jù)證實(shí)HSG(95)18中給出的推薦的洗衣時(shí)間/溫度關(guān)系對(duì)在醫(yī)院內(nèi)感染中特別關(guān)注的生物體是有效的。進(jìn)一步，這些洗衣條件少有科學(xué)支持。因此，采用本實(shí)施例來(lái)定義在冷洗滌條件下導(dǎo)致受污染的亞麻制品減少的條件。冷洗循環(huán)被認(rèn)為是抗菌銅制劑最苛刻的測(cè)試。另外，看起來(lái)可能日益增加的高能量花費(fèi)導(dǎo)致在工業(yè)和家庭洗滌中較低洗滌溫度的使用，特別是如果能夠研發(fā)出足夠容易應(yīng)用和經(jīng)濟(jì)的并對(duì)織物也很"柔和，，的抗菌產(chǎn)品。本研究描述了使用被標(biāo)記微生物污染的織物的洗滌去污染作用的研究。試驗(yàn)材料是在Electrolux洗衣機(jī)中使用低溫(18")洗滌的稱為CuWB50的金屬離子(銅)制劑和兩種商業(yè)可獲得的洗滌清潔劑(指定為A和P)?？s寫ACCB,不動(dòng)桿菌；BSA，牛血清白蛋白；cfu，菌落形成單位；MRSA，耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌；PBS，磷酸鹽緩沖液。方法和材料典型的醫(yī)院材質(zhì)制服織物的商業(yè)可獲得的樣品由CarringtonCareer&WorkwearLtd(UK)提供。才羊品纟且合物是67%的聚脂/33%的195g/m'重的棉混紡織物。新的Claris控制系統(tǒng)升級(jí)的商業(yè)洗衣機(jī)購(gòu)自Electrolux。ClarisClaris系統(tǒng)也提供記錄每個(gè)洗滌周期指標(biāo)的電子數(shù)據(jù)輸出。Stomache^400循環(huán)器購(gòu)自SewardLtd(UK)。洗滌清潔劑A和P購(gòu)自當(dāng)?shù)爻小ＥＱ灏椎鞍?BSA)購(gòu)自Sigma-Aldrich。所有孩吏生物試劑和瓊脂板購(gòu)自O(shè)xoidLtd(UK)。PBS和BSA購(gòu)自Sigma,在體積為2ml含有7。/。BSA的PBS中樣品各自用2乂108細(xì)菌接種量的甲氧西林耐藥金黃色葡萄球菌(MRSA)或多重耐藥不動(dòng)桿菌(ACCB)的臨床分離菌污染。在洗滌研究使用之前，在室溫下干燥樣品。樣品附著于壓載亞麻織物得到每個(gè)冷水洗滌最終重量為5kg以模擬15升水中15分鐘標(biāo)準(zhǔn)洗滌時(shí)間的正常洗滌。使用兩種細(xì)菌林評(píng)價(jià)6種洗滌條件1.水單獨(dú)；2.水+清潔劑A;3.水+清潔劑P;4.水+CuWB50;5.水+清潔劑A+CuWB50;6.水+清潔劑P+CuWB50。C11WB50的濃度是100ppm，使用單一gelule的清潔劑A(50ml)或清潔劑P(25g)，除非另有說(shuō)明。在每個(gè)洗滌的最后收集1升洗衣機(jī)洗后的水，100ml離心，細(xì)菌片狀沉淀物用于檢查菌落形成單位數(shù)(cfu)。以cfu計(jì)進(jìn)行細(xì)菌污染的實(shí)際測(cè)定的洗過(guò)的污染的樣品(n-3)、對(duì)照未污染的(清潔的)樣品(n-2;用于評(píng)價(jià)在洗滌中細(xì)菌從污染的樣品的轉(zhuǎn)移)、和污染的、未洗滌的樣品(與初始接種量相反，因此在干燥期間控制生物體活力的損失)，各自置于含有20ml的PBS的塑料袋中并在室溫下于均漿器中振搖15分鐘。得到的均漿細(xì)菌混懸液的10倍稀釋液和洗衣機(jī)洗過(guò)的水涂板于雙份的瓊脂板上，在37X:下24小時(shí)培養(yǎng)階段后對(duì)cfu計(jì)數(shù)。結(jié)果在下列各表中結(jié)果顯示的是(i)對(duì)照污染的樣品-以cfu計(jì)初始細(xì)菌接種量，(ii)洗過(guò)的污染的樣品-洗滌后在污染的樣品上殘留的細(xì)菌的cfu,(iii)洗滌后洗衣機(jī)洗脫液-在15分鐘洗滌周期結(jié)束時(shí)洗衣水中游離細(xì)菌的cfu數(shù)，和(iv)洗滌后清潔的樣品-洗滌后未污染的樣品上細(xì)菌的cfu(表示洗滌期間細(xì)菌的轉(zhuǎn)移)。表IO中的結(jié)果表明冷水洗滌引起污染樣品上cfu數(shù)目的適度的減少-ACCB減少2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)和MRSA減少4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)。洗滌后機(jī)器洗脫液中ACCB和MRSA的cfu對(duì)兩種細(xì)菌是相似的，并且轉(zhuǎn)移到清潔的樣品上的細(xì)菌cfu比洗滌后殘留在污染的樣品上的cfu水平低大約2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)。這些結(jié)果表明只用冷水的15分鐘的洗滌周期可以使污染樣品上的部分細(xì)菌進(jìn)入水中，在洗滌循環(huán)中這些游離細(xì)菌中的一些可以附著在清潔的樣品上。表ll中的結(jié)果表明使用任一清潔劑的冷水洗滌引起污染樣品上不動(dòng)桿菌cfu數(shù)目的適度地減少-比使用清潔劑A減少的2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)略大，比清潔劑P減少的2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)略小。清潔劑A洗滌后機(jī)器洗脫液中ACCB的cfu比清潔劑P略大，雖然在實(shí)施例中清潔劑A的初始接種量也略高。轉(zhuǎn)移到清潔的樣品的細(xì)菌cfu比洗滌后殘留在污染的樣品上的cfu水平低大約2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)。這些結(jié)果表明用冷水和清潔劑的15分鐘的洗滌周期可以使污染樣品上的部分不動(dòng)桿菌進(jìn)入水中，在洗滌循環(huán)中這些游離細(xì)菌中的一些可以附著在清潔的樣品上。但是，該結(jié)果與表10所示的只用水的結(jié)果不是非常不同的，表明這些清潔劑對(duì)不動(dòng)桿菌沒(méi)有抗菌活性。表12中的結(jié)果顯示使用兩種清潔劑的冷水洗滌引起污染樣品上MRSA的cfu實(shí)質(zhì)上5-6個(gè)對(duì)數(shù)減少，表明兩種清潔劑對(duì)MRSA都具有強(qiáng)的抗菌作用。洗滌后機(jī)器洗脫液中和轉(zhuǎn)移到清潔的樣品上的MRSA的cfu水平非常低，這支持了清潔劑對(duì)MRSA具有強(qiáng)的抗菌作用的觀點(diǎn)。這些結(jié)果表明兩種清潔劑對(duì)MRSA具有強(qiáng)的抗菌作用，未見對(duì)不動(dòng)桿菌的作用(表ll)。表13中的結(jié)果顯示只用CuWB50的冷水洗滌在廣泛的濃度范圍內(nèi)在降低細(xì)菌污染上是高效的。不動(dòng)桿菌對(duì)CuWB50更敏感并且在100和15ppm濃度下被完全殺滅。在l-10ppm的CuWB50濃度下仍具有相當(dāng)?shù)目咕饔?，不?dòng)桿菌的cfu減少3-5個(gè)對(duì)數(shù)。在幾乎所有的CuWB50濃度下，不動(dòng)桿菌不能在機(jī)器洗脫液中存活或轉(zhuǎn)移至清潔的樣品上。CuWB50對(duì)MRSA也是有效的，在l-100ppm的濃度下引起4-5個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅。與不動(dòng)桿菌一樣，在CuWB50任何的濃度下在機(jī)器洗脫液或清潔的樣品上幾乎檢測(cè)不到MRSA。這些結(jié)果表明兩種細(xì)菌林都對(duì)CuWB50高度敏感，不動(dòng)桿菌比MRSA稍微更敏感。表14中的結(jié)果清楚地顯示100ppm的CuWB50與清潔劑A或P組合導(dǎo)致不動(dòng)桿菌和MRSA的完全殺滅，在洗滌后的樣品中沒(méi)有可檢測(cè)到的cfu。表ll的結(jié)果表明任一清潔劑單獨(dú)對(duì)不動(dòng)桿菌幾乎沒(méi)有殺菌作用(2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅)，同時(shí)表13的結(jié)果表明100ppm的CuWB50完全殺滅不動(dòng)桿菌，這解釋了上述結(jié)果。表12的結(jié)果表明兩種清潔劑單獨(dú)對(duì)MRSA都是十分有效的，產(chǎn)生5個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅，表13中的結(jié)果表明CuWB50對(duì)MRSA也十分有效(5個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅)。因此，上述結(jié)果表明CuWB50對(duì)清潔劑的附加作用導(dǎo)致MRSA的完全殺滅。表15所示的結(jié)果證實(shí)了表14的結(jié)果，表明與清潔劑A組合的100ppm的CuWB50在冷洗滌條件下完全殺滅不動(dòng)桿菌和MRSA。進(jìn)一步地，表15的結(jié)果表明清潔劑A和在降至低達(dá)5ppm的濃度下的CuWB50對(duì)殺滅兩種細(xì)菌是非常有效的。MRSA也會(huì)被清潔劑A加2ppm的CuWB50完全殺滅，同時(shí)不動(dòng)桿菌對(duì)這個(gè)濃度較不敏感，只有2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅。這些結(jié)果表明5ppm和更高的濃度的CuWB50與清潔劑A組合形成有效的抗菌制劑組合，甚至是在低洗滌溫度下使用。討論^使用工業(yè)Electrolux洗衣才;L評(píng)價(jià)殺滅生物的銅化合物，CuWB50，與和不與2種商業(yè)洗滌清潔劑對(duì)MRSA-或不動(dòng)桿菌污染的護(hù)士制服織物樣品冷水洗滌的作用。單用冷水洗滌引起污染樣品上MRSA和ACCB的cfu的2-3個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)減少(表10),但在機(jī)器洗滌后洗脫液和無(wú)菌樣品上檢測(cè)到釋放的細(xì)菌。單獨(dú)使用的兩種商業(yè)清潔劑從污染的樣品上清除MRSA(cfu減少5-6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)；表12)比ACCB(cfu減少1-2個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)；表11)更有效。在兩種情況中，在機(jī)器洗滌后洗脫液中和無(wú)菌樣品上檢測(cè)到活的細(xì)菌，但在MRSA中回收的細(xì)菌數(shù)減少了，表明清潔劑對(duì)這個(gè)細(xì)菌林中等的抗菌作用。如表13所示，在IOO和15ppm下CuWB50單獨(dú)完全殺滅ACCB并在低達(dá)lppm的濃度下減少3-4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的cfu。在l-100ppm下CuWB50單獨(dú)減少4-5個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的MRSAcfu。在兩種情況中，在機(jī)器洗滌后洗脫液中和無(wú)菌樣品上回收的細(xì)菌數(shù)目實(shí)質(zhì)上減少，表明在冷水洗滌中甚至在低濃度下CuWB50單獨(dú)的抗菌作用。在機(jī)器洗滌后洗脫液中和無(wú)菌樣品上，100ppm的CuWB50與任一清潔劑組合導(dǎo)致污染的樣品上ACCB和MRSA10(^的殺滅(表14)。由于100ppm的CuWB50單獨(dú)對(duì)抗MRSA不是完全有效的(表13)以及兩種清潔劑顯示其殺滅MRSA能力的一些差異性(表l2)，很明顯存在兩種產(chǎn)品一起導(dǎo)致完全殺毒作用的附加作用。ACCB對(duì)兩種清潔劑單獨(dú)都相對(duì)耐藥(表ll)，但對(duì)CuWB50非常敏感(表13)，CuWBSO與任一清潔劑的組合導(dǎo)致ACCB的完全殺滅。事實(shí)上，CuWB50和清潔劑A的組合在C11WB50的所有濃度(2-100ppm)下抗MRSA和CuWB50的5-100卯m濃度下抗ACCB是非常有效的。在所有情況中，在機(jī)器洗滌后洗脫液中或無(wú)菌樣品上沒(méi)有回收到活的細(xì)菌?？傊?，這些結(jié)果表明單獨(dú)用清潔劑冷水洗滌護(hù)士制服不可能有效地消除所有的細(xì)菌污染。添加5-10ppm的CuWBSO和任一清潔劑使用冷水洗滌造成MRSA-和ACCB-污染的樣品和才;L器洗滌后洗脫液和無(wú)菌樣品的完全殺菌。通過(guò)向15升洗液加入5ml配制的組合物母液制得10ppm濃度的CuWB50并考慮這些試驗(yàn)中使用的樣品中細(xì)菌污染的高水平(大約108cfu)，這些結(jié)果表明機(jī)器洗液中加入CuWB50和普通量的商品洗滌清潔劑能有助于顯著減少所有醫(yī)院洗衣房的細(xì)菌污染。雖然沒(méi)有測(cè)試C.difficile芽胞，我們此處的結(jié)杲表明C.difficile芽胞也可以通過(guò)CuWB50/清潔劑組合被有效地殺滅。表IO單獨(dú)冷水洗滌從污染樣品消除不動(dòng)桿菌(ACCB)和MRSA的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>NT-沒(méi)有測(cè)試表11使用清潔劑A或P的冷水洗滌從污染樣品消除不動(dòng)桿菌的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>表12使用清潔劑A或P的冷水洗滌從污染樣品消除MRSA的效果<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>表14使用C11WB50(lOOppm)和2種清潔劑(A和P)的冷水洗滌從污染樣品消除不動(dòng)桿菌(ACCB)和MRSA的效果C<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>實(shí)施例7介紹在醫(yī)院衛(wèi)生學(xué)中一個(gè)重要的因素是手部的清潔。PurellTM(GojoIndustriesInc，USA)是目前在英國(guó)醫(yī)院中廣泛為護(hù)理人員使用的基于醇的手部凝膠。本文已經(jīng)顯示銅金屬離子組合物CuAL42對(duì)5種普通致病菌林具有有效的殺滅活性。因此，基于蘆薈的無(wú)醇手部凝膠和含有314ppm的CuAL42稱為Xgel已被制備并在本實(shí)施例中與Purell進(jìn)行比較。使用的試驗(yàn)設(shè)計(jì)基于EN(歐洲標(biāo)準(zhǔn))12054(1997)，其為試驗(yàn)產(chǎn)品必須在60秒內(nèi)產(chǎn)生4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅以獲得需要的標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)化過(guò)程?？s寫ACCB，不動(dòng)桿菌；BSA，牛血清白蛋白；cfu,菌落形成單位；MRSA,耐甲氧苯青霉素金黃色葡萄球菌；PBS，磷酸鹽緩沖液；結(jié)果如圖5-7所示，就MRSA和ACCB分別而言，Purel^和Xgel在60秒內(nèi)都取得需要的4個(gè)對(duì)數(shù)殺滅。但是，在兩種情況下Xgel比Purell更相當(dāng)有效，因?yàn)閄gel殺滅100°/。的兩種菌林。就艱難梭菌芽胞而言，Purell是無(wú)效的，而同時(shí)Xgel在60秒內(nèi)幾乎取得(3000-倍殺滅)需要的4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅。材料和方法遵循標(biāo)準(zhǔn)EN12054(1997)試驗(yàn)設(shè)計(jì)。簡(jiǎn)要地，9ml的試驗(yàn)手部凝膠接種lml的細(xì)菌混懸液并混合。然后在30和60秒時(shí)取1毫升等份樣品并與9ml的林格溶液混合5分鐘。當(dāng)對(duì)CFU計(jì)數(shù)時(shí)，取一部分涂布于瓊脂板上并過(guò)夜培養(yǎng)。討論在醫(yī)院衛(wèi)生學(xué)中手部清潔是非常重要的，因?yàn)榧?xì)菌或其芽胞可以很容易地通過(guò)手部接觸在醫(yī)院傳播。Purel1是目前在英國(guó)醫(yī)院中廣泛為衛(wèi)生工作者使用的基于醇的手部凝膠。本研究的結(jié)果清楚地顯示Xgel，含314ppm的CuAL42的基于蘆薈的手部凝膠，對(duì)抗3種重要的致病菌-MRSA、不動(dòng)桿菌和艱難梭菌芽胞-比PurelTM相當(dāng)更有效。在這方面，注意到艱難梭菌變成比MRSA對(duì)病人的健康更大的威脅是重要的，現(xiàn)在更多的病人正死于艱難梭菌感染而非M亂Purell,像所有基于醇的手部凝膠，已知反復(fù)、延長(zhǎng)使用會(huì)引起皮膚干燥和開裂。相反，作為不含醇并具有蘆薈基質(zhì)的Xgel對(duì)手更加溫和。進(jìn)一步地，我們初步的研究表明當(dāng)醇蒸發(fā)后PurelTM留下的殘留物仍可以支持MRSA和不動(dòng)桿菌的生長(zhǎng)至少3個(gè)小時(shí)，而Xgel殘留物絲毫不會(huì)容許細(xì)菌存活。實(shí)施例8MRSA和不動(dòng)桿菌(ACCB)抗銅組合物編碼的CuAL42、CuPC33和CuWB50，它們的粘合劑組分和硫酸銅溶液的時(shí)間-殺菌曲線(TK)的報(bào)告介紹我們已經(jīng)指出(參見圖17-19)低濃度的這些銅制劑(CuAL42、CuP。3和CuWB50)在lppm時(shí)在2小時(shí)內(nèi)獲得3-4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅。我們?cè)谧钚⒕鷿舛?MBC)下使用RPMI-1460介質(zhì)通過(guò)MIC/MBC試管法進(jìn)行了一系列的時(shí)間殺菌試驗(yàn)并且在15Oppm下(如實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔情形中使用的)也進(jìn)行了試驗(yàn)。MIC/MBC測(cè)定每個(gè)化合物、相關(guān)的粘合劑和硫酸銅的MIC/MBC是通過(guò)在RPMI-1460介質(zhì)中(Sigma)制備從100ppm到下至lppm的最終濃度并隨后每試管接種2xl()5接種量的細(xì)菌測(cè)定的。所有試管37C下過(guò)夜培養(yǎng)，MIC作為顯示無(wú)生長(zhǎng)的第一個(gè)試管，從lppm往上讀數(shù)。通過(guò)次培養(yǎng)所有不顯示生長(zhǎng)的試管至血瓊脂，37r過(guò)夜培養(yǎng)，讀數(shù)任何存活的菌落的生長(zhǎng)測(cè)定MBC。MBC被作為第一個(gè)顯示血瓊脂上無(wú)生長(zhǎng)的試管(從最低濃度向上讀數(shù))。時(shí)間殺菌曲線時(shí)間殺菌曲線是4吏用RPMI-1460介質(zhì)(Sigma)完成的。在組合物、粘合劑和石危酸銅為20ppm和150ppm下對(duì)MRSA進(jìn)行測(cè)試(參見圖1和2)。在組合物、粘合劑和硫酸銅為"ppm和1S0ppm下對(duì)ACCB進(jìn)行測(cè)試(參見圖3和4)。每個(gè)試驗(yàn)的生長(zhǎng)對(duì)照組僅由RPMI-1460和測(cè)試生物體組成。每個(gè)反應(yīng)試管由10ml包含需要濃度的組合物、粘合劑和硫酸銅的RPMI-1460組成，接種2xl(^的生物體并迅速在37t:培養(yǎng)。在0、15、30、60、120、360和960分鐘的時(shí)間點(diǎn)取樣，活菌計(jì)數(shù)三次，使用四分之一濃度的林格溶液作為稀釋劑和中和劑，接種于血瓊脂上37匸過(guò)夜培養(yǎng)。對(duì)菌落計(jì)數(shù)，存活數(shù)以菌落形成單位表示。菌落計(jì)數(shù)的對(duì)數(shù)值對(duì)每個(gè)時(shí)間點(diǎn)作圖，生成每個(gè)生物體在各個(gè)化合物、粘合劑和硫酸銅的每個(gè)濃度下的TK曲線。生長(zhǎng)對(duì)照曲線繪制于各自曲線系列上以比較生長(zhǎng)率。本文俗稱的術(shù)語(yǔ)粘合劑用于包含除銅化合物自身之外的存在于銅組合物中的組分。結(jié)果概述MRSA的MIC/MBC測(cè)定結(jié)果是10/20ppm。ACCB的MIC/MBC測(cè)定結(jié)果是20/40ppm。時(shí)間殺菌曲線抗MRSA:在20ppm下CuAL42和CuWB50在6小時(shí)內(nèi)獲得4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅，在6和16小時(shí)期間的一些時(shí)間獲得6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅。CuPC33的對(duì)數(shù)殺滅分別是3個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)和6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)。在150ppm下CuAL42和CuWB50在60分鐘后荻得6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅，CuPC33在120分鐘后獲得6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅。所有的粘合劑和硫酸銅具有某些活性但細(xì)菌恢復(fù)?？笰CCB:在40ppm下三種制劑都在6小時(shí)后獲得4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅，在6和16小時(shí)期間獲得6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅。在150ppm下三種組合物都在60分鐘后獲得6個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)殺滅。所有粘合劑和硫酸銅都幾乎沒(méi)有初始活性但細(xì)菌恢復(fù)。附圖1-4顯示在0、15、30、60、120和360分鐘和960分鐘后(26小時(shí)培養(yǎng))記錄的每種組合的生長(zhǎng)曲線。實(shí)施例9包含基于銅的殺蟲劑的無(wú)醇手部凝膠的消毒效能通過(guò)應(yīng)用為特定目的制作的手部凝膠的手部消毒對(duì)感染控制是必要的。目前大多數(shù)手部凝膠包含異丙醇，其賦予凝膠殺蟲和快速千燥的特性。醇對(duì)手和環(huán)境都不友好，并且吸收進(jìn)入血流。我們配制了4種無(wú)醇蘆薈手部凝膠，三種包含三種無(wú)機(jī)殺蟲劑之一(CuWB50、CuAL42和CuPC33)，殺蟲劑包含300ppm的區(qū)域，例如314ppm的有效銅，研究這些凝膠是否能像商業(yè)制劑一樣有效消毒手部。106CFU或MRSA、或Ecoli，應(yīng)用于志愿者的手部，然后迅速提取掌/指印。然后四種手部凝膠之一擦于手部，隨后在時(shí)間間隔取印。與蘆薈對(duì)照不同，在使用后即刻和之后任何時(shí)間沒(méi)有MRSA可以從含有CuAL42或CuWB50的凝膠中恢復(fù)。MRSA可以從CuPC33治療15分鐘的手部恢復(fù)。與對(duì)照組不同，E.coli在任何時(shí)間都不能從含有CuAL42的凝膠處理的手部恢復(fù)；對(duì)其他兩種凝膠生物體的完全消失只在更遲的時(shí)間觀察到。我們認(rèn)為含有CuAL42的凝膠快速和有效地從手部消滅活的生物體，并可以提供對(duì)含醇凝膠更人性和生態(tài)學(xué)上可接受的替代。結(jié)果顯示于圖5、6和7中。實(shí)施例10CuAL42、CuPC33和CuWB50的安全性組織培養(yǎng)物中對(duì)活的人體細(xì)胞細(xì)胞毒性的研究背景、目標(biāo)和目的本文的其他實(shí)施例已經(jīng)確定這些組合物具有顯著的抗菌活'峻，意外地優(yōu)于單個(gè)組分。本實(shí)施例旨在研究CuWB50、CuPC33和CuAL42對(duì)細(xì)菌病原體的抗菌和毒性特性是否會(huì)延伸于哺乳動(dòng)物(人類)細(xì)胞。材料和方法提供三種含銅抗菌溶液-CuPC33、CuAL42和CuWB50，每種含有30.43g/L的銅離子。石危酸銅對(duì)照溶液在蒸餾水中制備為相同濃度。兩種人類細(xì)胞系用于本實(shí)施例HT-29,腸道上皮細(xì)胞系，和U937,單核細(xì)胞淋巴瘤。合適的完全培養(yǎng)基中各種濃度的含銅抗菌溶液或石危酸銅的樣品被加入以建立細(xì)胞培養(yǎng)物，細(xì)胞進(jìn)一步培養(yǎng)24或48小時(shí)。通過(guò)顯微鏡檢查后細(xì)胞隨后被固定并染色以使用磺酰羅丹明(sulforhodamine)(SRB)細(xì)胞毒性測(cè)定法定量測(cè)定細(xì)胞毒性，在國(guó)立癌癥研究院研發(fā)和驗(yàn)證。在含有5%或25^胎牛血清(FCS)的培養(yǎng)基中使用HT-29細(xì)胞在24和48小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)評(píng)價(jià)CuPC33(■)、CuAL42(A)、CuWB50(T)和硫酸銅()的細(xì)胞毒性百分比。所有試驗(yàn)培養(yǎng)物一式三份。結(jié)果顯示于圖8中。在含有5%或25%胎牛血清(FCS)的培養(yǎng)基中使用U937細(xì)胞在24和48小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)評(píng)價(jià)CuPC33(■)、CuAL42(A)、CuWB50(T)和硫酸銅()的細(xì)胞毒性百分比。所有試驗(yàn)培養(yǎng)物一式三份。結(jié)果顯示于圖9中。結(jié)果顯微鏡檢查沒(méi)有發(fā)現(xiàn)在l-100卯ffi濃度下含銅離子的抗菌溶液或硫酸銅對(duì)用5°/。或25%FCS培養(yǎng)的任一細(xì)胞系有明顯的毒性作用。但是，在含有25%FCS的培養(yǎng)基中1000卯m的含銅抗菌i^液和石克酸銅引起HT-29細(xì)胞聚集，而含5%FCS的培養(yǎng)基中HT-29細(xì)胞顯示明顯的細(xì)胞死亡的跡象(粒狀細(xì)胞質(zhì)聚集和折射性喪失)。這些作用在24和48小時(shí)培養(yǎng)物中是相似的。含有5%或25%FCS的培養(yǎng)基中HT-29生長(zhǎng)的同樣地好(參見圖8說(shuō)明中的對(duì)照光密度值)，增加的血清濃度產(chǎn)生對(duì)含銅抗菌溶液的細(xì)胞毒性作用的一些保護(hù)作用。U937細(xì)胞在含有25%FCS的培養(yǎng)基中比在含有5%FCS的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)地更好(參見圖9說(shuō)明中的對(duì)照光密度值)，但顯示與HT-29相似的含銅抗菌溶液和石克酸銅的細(xì)胞毒性模式。SRB測(cè)試結(jié)果證實(shí)3種含銅金屬離子的抗菌溶液的任意一種或石克酸銅高至100ppm的濃度下對(duì)HT-29細(xì)胞(圖8)或U937細(xì)胞(圖9)沒(méi)有顯著地細(xì)胞毒性。lOOOppm的所有三種含銅抗菌溶液對(duì)24和48小時(shí)的兩種細(xì)胞系培養(yǎng)物通常都具有80-100%的細(xì)胞毒性。增加的血清濃度的適度的保護(hù)作用不能通過(guò)SRB測(cè)定加以區(qū)別，這強(qiáng)調(diào)了細(xì)胞顯微鏡評(píng)價(jià)的價(jià)值。在含有25%FCS的培養(yǎng)基中硫酸銅對(duì)HT-29和U937細(xì)胞是相當(dāng)小的毒性的(圖8和9，組C和D)。結(jié)論3種含銅抗菌溶液CuPC33、CuAL42、CuWB50和石危酸銅在l-100ppm的濃度下對(duì)2種不同的人細(xì)胞系沒(méi)有顯著的細(xì)胞毒性。在1000ppm的濃度下3種含銅抗菌溶液對(duì)2種人細(xì)胞系具有非常強(qiáng)的細(xì)胞毒性(80-100%)，培養(yǎng)基中更高地FCS水平只能有限地減少該作用。lOOOppm的石充酸銅對(duì)2種人細(xì)胞系也是非常有毒性的，雖然增加血清濃度實(shí)質(zhì)上減少該毒性并且通過(guò)SRB測(cè)定可以使其直觀化。結(jié)果表明，考慮到其對(duì)細(xì)菌而非哺乳動(dòng)物(人)細(xì)胞的作用，所有三種銅組合物的毒性存在非常大的生物學(xué)安全窗口。該結(jié)論是基于組合物在l-100ppm的濃度范圍內(nèi)明顯的抗菌作用，在此濃度下沒(méi)有檢測(cè)到對(duì)人細(xì)胞系的細(xì)胞毒性。實(shí)施例11CuAL42、CuWB50和CuPC33減少或消除污染的清潔布料上存在的細(xì)菌生物負(fù)荷的能力背景、目標(biāo)和目的最常使用基于濕環(huán)的專有技術(shù)或更現(xiàn)代(和有效的)的基于孩i纖維的布料使細(xì)菌從表面消除?；诔⒗w維的布料(UMF)從硬表面消除細(xì)菌是特別有效的。這些布料最好與不含清潔劑的水一起使用。在醫(yī)院環(huán)境使用后，這些布料成為一種生物公害，因?yàn)樗鼈儼瑪?shù)百萬(wàn)如果不是十億的活的^t生物，已知至少其中一些至少是醫(yī)院獲得性感染的原因。由于這些布料最好用水浸濕使用，我們研究了CuWB50、CuAL42和CuPC33加入水中是否會(huì)減少或消除被布料攜帶的這些生物體的活力。材料和方法層狀表面使用含有合適濃度的MRSA、不動(dòng)桿菌或艱難梭菌芽胞的緩沖鹽水接種，使用無(wú)菌平的涂布器涂布于超過(guò)100平方厘米面積并允許干燥。該區(qū)域接觸涂板以確?；畹摹⒂猩鷻C(jī)的致病生物滿意的沉淀。該區(qū)域隨后使用濕潤(rùn)至推薦的濕度范圍并且具有最終濃度為75ppm的各個(gè)銅組合物的超微纖維布料(IMF)清潔。然后該區(qū)域再次接觸涂板來(lái)評(píng)價(jià)UMF消除的接種量。UMF隨后裝于迷你手提袋中，置于室溫下16小時(shí)模擬去洗衣房。16小時(shí)后UMF置于100ml磷酸鹽緩沖液中，勻漿器(設(shè)計(jì)用于從織物和糧食中釋放活的生物體的設(shè)備)中250rpm攪拌3分鐘。洗脫液進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)，10ml的洗脫液3500rpm下離心IO分鐘，沉積物在血瓊脂上培養(yǎng)。對(duì)任何的環(huán)境污染測(cè)試板的本底計(jì)數(shù)和PBS計(jì)數(shù)。結(jié)果顯示于下表16中。表16<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>結(jié)論接觸涂板顯示被UMF有效消除的有活力的接種物。所有三種銅組合物在16小時(shí)的時(shí)間范圍內(nèi)獲得對(duì)不動(dòng)桿菌和艱難梭菌芽胞的完全殺滅以及對(duì)MRSA的4個(gè)對(duì)數(shù)殺滅(99.99%)。不動(dòng)桿菌或艱難梭菌UMF-Cu布料的洗脫液的離心沉積物中沒(méi)有可恢復(fù)的細(xì)菌。該實(shí)施例顯示所有三種組合物以75ppm存在時(shí)，當(dāng)與目前被NHS評(píng)價(jià)和應(yīng)用的布料清潔技術(shù)結(jié)合使用時(shí)，是非常有效的殺生物劑。同時(shí)其他滅菌劑(例如季胺類化合物、囟化物等)在本文中同樣有效，可能目前對(duì)其消除環(huán)境原因的傾向會(huì)產(chǎn)生對(duì)更安全選擇的需要。本文顯示的數(shù)據(jù)支持了這些銅金屬離子組合物可能提供這樣一種選擇的預(yù)測(cè)。實(shí)施例12銅抗菌劑CuAL42和CuPC33對(duì)抗H.pylori的效力在這個(gè)實(shí)施例中使用標(biāo)準(zhǔn)NCCLS方法進(jìn)行測(cè)試，使用菌林NCTCCagA陽(yáng)性、NCTCCagA陰性和ACTCJ5(基因組序列已知)。臨床分離菌是UK1曱硝唑耐藥和Bl克拉霉素耐藥的。使用1og7cfu/ml的最終接種量(每毫升菌落形成單位數(shù))。在本方法中，每個(gè)抗菌產(chǎn)品在0.5、1.0、5.0和12ppm的濃度下的標(biāo)準(zhǔn)殺菌曲線通過(guò)在15、30、60和120分鐘取樣獲得。使用的中和劑(neuturaliser)是l/4的林格乳酸鹽。至于量化，制備十倍稀釋液，IOO微升涂板。板在CampyGen產(chǎn)生的大氣中37匸培養(yǎng)5天。結(jié)果如附圖10-14描述，CuAL42比CuPC33更有效。5ppm的CuAL42在120分鐘內(nèi)減少5-6對(duì)數(shù)的活菌數(shù)。12ppm的CuAL42在30分鐘內(nèi)減少5-6對(duì)數(shù)的活菌數(shù)并導(dǎo)致60-120分鐘內(nèi)沒(méi)有生長(zhǎng)。CagA狀態(tài)或?qū)跸踹蚧蚩死顾氐哪退帉?duì)兩種銅離子組合物的效力沒(méi)有任何影響。實(shí)施例13手部凝膠殘留物抗MRSA活性方法手部凝膠以每10cm21毫升涂布于層狀表面板上，在室溫下允許干燥過(guò)夜。0.lml的MRSA的PBS混懸液(106CFU/ml)小心地涂布于每個(gè)10cm'標(biāo)記的區(qū)域(各個(gè)時(shí)間點(diǎn)每個(gè)手部凝膠殘留物的正方形)并允許干燥10分鐘。正方形立刻(t-0小時(shí))并隨后在高至24小時(shí)的不同時(shí)間點(diǎn)接觸涂板。接觸涂板培養(yǎng)24小時(shí)，對(duì)菌落形成單位數(shù)進(jìn)行計(jì)數(shù)(CFUs)。結(jié)果如圖20所示，在任何時(shí)間點(diǎn)Xgel殘留物中沒(méi)有CFUs，推測(cè)是由于殘留物中CuAL42存在的緣故。相反，在高至3小時(shí)的任何時(shí)間點(diǎn)Purell殘留物中都檢測(cè)到CFUs，雖然這些以時(shí)間依賴方式減少，表明殘留物中防腐劑和一些其他成分具有適度的抗菌活性。這不是由于Purell殘留物中存在乙醇，因?yàn)槠湓谶^(guò)夜干燥階段已經(jīng)蒸發(fā)了。結(jié)論Xgel殘留物在所有時(shí)間點(diǎn)都預(yù)防MRSA的存活和生長(zhǎng)，同時(shí)Purell殘留物支持MRSA存活至少3小時(shí)。據(jù)NHS估計(jì)每月每床使用1升的Purell。由于1升的Purell含有70%的乙醇然后每月會(huì)在每個(gè)床存放約300ml的殘留物，這可能潛在地支持了MRSA的存活(初步結(jié)果顯示與抗生素耐藥的不動(dòng)桿菌相似的結(jié)果)。相反，Xgel殘留物不支持MRSA的存活(或不動(dòng)桿菌-初步結(jié)果)并且因此有助于在醫(yī)療保健設(shè)置中防止細(xì)菌的生長(zhǎng)和存活。實(shí)施例14使用7Sppm的三種銅組合物消毒MRSA污染的UMF布料方法PBS中MRSA(2xl06)涂布于層狀表面板(50cm2)并允許干燥10分鐘。正方形立即用超孩t纖維(UMF)布料擦拭、stomached、涂板、24小時(shí)后菌落形成單位(CFU)計(jì)數(shù)以確定接種物正確并且被UMF布料完全吸收。其他板用水浸濕的對(duì)照UMF或含有75ppm的3種銅纟且合物的水浸濕的UMFs擦拭。這些污染的UMFs置于塑料袋中16小時(shí)，然后stomached、涂板和24小時(shí)后計(jì)數(shù)CFUs。結(jié)果如圖21所示，接種對(duì)照組含有2xl(T的CFUs，表明UMF布料吸收了所有的MRSA細(xì)菌。僅用水浸濕并儲(chǔ)存16小時(shí)的對(duì)照UMF布料含有l(wèi)xl()S的MRSA，而用3種銅化合物浸濕的UMF布料儲(chǔ)存16小時(shí)后不含活的細(xì)菌。結(jié)論這些結(jié)果清楚地顯示了UMF布料從層狀表面消除MRSA是非常有效的，例如醫(yī)院中應(yīng)用的那些。但是，UMF布料上細(xì)菌的存活是非常好的，這些布料的棄置或洗滌引發(fā)了向各處傳播細(xì)菌的嚴(yán)重風(fēng)險(xiǎn)。因此，用銅化合物浸濕的UMF布料16小時(shí)后不含殘存的MRSA的事實(shí)是非常重要的。這種由3種銅組合物觀察到100%有效的消毒作用在需要從表面消除可能危險(xiǎn)的細(xì)菌的醫(yī)院和其他地方是非常有價(jià)值的。實(shí)施例15手部凝膠對(duì)A431人皮膚細(xì)胞系的細(xì)胞毒性方法人鱗狀上皮細(xì)胞系A(chǔ)431在添加了10%FCS、2g/L碳酸氫鈉和2mM的L-谷氨酰胺(完全培養(yǎng)基)的RPMI1640培養(yǎng)基中，75cm2組織培養(yǎng)瓶中增濕培養(yǎng)箱中37匸下含5?；?2的大氣中進(jìn)行培養(yǎng)。對(duì)細(xì)胞毒性試驗(yàn)，A431細(xì)胞于200n1的完全培養(yǎng)基中以每孔5x104細(xì)胞數(shù)涂布于平底96孔板的孔中并且允許生長(zhǎng)融合。試驗(yàn)當(dāng)天，吸取衰竭的培養(yǎng)基并用100U1新鮮的完全培養(yǎng)基替換。手部凝膠的樣品在完全培養(yǎng)基中稀釋使圖中顯示的濃度加倍，100pl的各種樣品添加于隨后進(jìn)一步培養(yǎng)24小時(shí)的細(xì)胞中。顯微鏡檢查后，細(xì)胞固定并染色以如下所述定量測(cè)定的細(xì)胞毒性?；酋Ａ_丹明(sulforhodamine)B(SRB)細(xì)胞毒性測(cè)定法在國(guó)立癌癥研究院研發(fā)和驗(yàn)證。筒要地，細(xì)胞用RPMI培養(yǎng)基(無(wú)FCS)洗滌兩次然后在4。C下用10%的三氯乙酸固定一小時(shí)。用自來(lái)水洗滌兩次后，在室溫下細(xì)胞用SRB(l。/。的醋酸中0.4%w/vSRB)染色30分鐘。用自來(lái)水洗滌兩次后，剩余染料溶解于10mM的Tris堿中，在540nm下DynatechMultiplateELISAreader中測(cè)定孑L的光密度(0.D.)。細(xì)胞存活的百分?jǐn)?shù)通過(guò)試驗(yàn)0.D.除以對(duì)照0.D.乘以100計(jì)算。結(jié)果如附圖22顯示，Xgel基質(zhì)(用黃原膠和檸檬酸作為增稠劑的蘆薈凝膠)在任何測(cè)試的濃度下對(duì)A431細(xì)胞存活沒(méi)有顯著的作用。Xgel是含有具有314ppm的銅基殺蟲劑CuAL42的Xgel基質(zhì)的無(wú)醇手部凝膠；該產(chǎn)品在最高濃度下減少大約25%的細(xì)胞存活，但在低濃度下沒(méi)有作用。10%的乙醇減少大約50%的A431細(xì)胞存活但在低濃度下沒(méi)有作用。Purell是目前醫(yī)院中用于手消毒的基于醇的手部凝膠。Purell含有62%的變性醇加十四(烷)酸異丙酯、丙二醇、醋酸維生素E、ammonomethyl丙醇，在10%的濃度下其殺滅超過(guò)95%的A431細(xì)胞，但在低濃度下沒(méi)有作用。Spirigel和Softalind也是含醇的手部凝膠，但Spirigel同時(shí)具有與Purel1相似的特性，Softalind在只是1%的濃度下殺滅大約50%的A431細(xì)胞。但是，Softalind含有變性醇和丙醇的混合物以及PEG-6辛酸/癸酸甘油酯和二異丙基己二酸酯，這大概解釋了對(duì)A431細(xì)胞顯著更多的毒性作用。Nexan是含有0.2%的三氯生加清潔劑的手部凝膠，它是非常細(xì)胞毒性的，在所有測(cè)試濃度下殺滅A431細(xì)胞。在高濃度下(#)Nexan實(shí)際上溶解A431細(xì)胞(顯微鏡觀察)，這最可能歸因于清潔劑的作用。最后，2種含有季銨化合物的清潔產(chǎn)品CBC和Activ8對(duì)A431細(xì)胞也是非常細(xì)胞毒性的。在較高的濃度下(')這些產(chǎn)品粘附死亡的A431細(xì)胞于塑料盤(顯微鏡觀察)上，給出細(xì)胞存活改善的假象。結(jié)論結(jié)果顯示含有醇的手部凝膠對(duì)培養(yǎng)物中A431皮膚上皮細(xì)胞具有適度的細(xì)胞毒性作用。但是，在這些產(chǎn)品被醫(yī)務(wù)人員使用到手部的1/10或更低的濃度下觀察到這些細(xì)胞毒性作用，例如，有文獻(xiàn)證明頻繁日常使用Purell會(huì)引起皮膚干燥或開裂。Xgel在1/10正常強(qiáng)度下也表現(xiàn)非常適中的細(xì)胞毒性-大約與Purell在1/33正常強(qiáng)度下的作用相同-這大概是由于CuAL42滅菌劑存在的作用，因?yàn)閄gel基質(zhì)在任何濃度下對(duì)A431沒(méi)有顯著的作用。這些結(jié)果表明Xgel會(huì)比Purell對(duì)皮膚更溫和。進(jìn)一步地，其他研究已顯示在殺滅MRSA、抗生素耐藥的不動(dòng)桿菌和艱難梭菌芽胞方面Xgel比Purell是相當(dāng)更有效的。事實(shí)上，Purell對(duì)艱難梭菌芽胞是完全無(wú)效的，并且由于可能引起致命的腹瀉的這種細(xì)菌現(xiàn)在是醫(yī)院中比MRSA更大的死亡原因，使用Xgel而非Purell會(huì)是更合理的選擇。Nexan包含0.2%的三氯生和清潔劑，它在所有測(cè)試的濃度下完全殺滅A431細(xì)胞。令人驚異地，Nexan在意大利的醫(yī)院中被醫(yī)務(wù)人員用作標(biāo)準(zhǔn)的手部凝膠。包含季銨化合物作為其活性成分的2種清潔產(chǎn)品CBC和Activ8對(duì)A431也是非常細(xì)胞毒性的，但是由于這些產(chǎn)品假定被戴有橡皮手套的人使用，它們不會(huì)引起皮膚問(wèn)題。實(shí)施例163種銅組合物對(duì)由醫(yī)院暴發(fā)分離的不同細(xì)菌物種敏感性的測(cè)定目的測(cè)定三種銅組合物對(duì)例如腸桿菌、假單胞菌、葡萄球菌和腸球菌等一系列細(xì)菌的活性概要使用MIC測(cè)定法測(cè)試總計(jì)170種不同細(xì)菌菌株(22種不動(dòng)桿菌、18種腸道細(xì)菌、27種克雷白桿菌、26種腸球菌、IO種假單胞菌、37種粘質(zhì)沙雷菌和45種葡萄球菌)對(duì)三種銅組合物的敏感性。區(qū)域從11-31mm大小不等，不顯示耐藥的類型。材料1)使用的銅組合物，如本文定義和編碼的由表1實(shí)施方案1-8得到的CuAL42、CuWB50和CuPC332)Isosensitest瓊月旨(ISO瓊脂)3)Isosensitest肉湯(ISO肉湯)4)抗菌敏感性測(cè)試盤(0X0IDCT0998B)5)由商店獲得的無(wú)菌拭子6)過(guò)夜生長(zhǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)物方法抗菌敏感性測(cè)試盤(OXOIDCT0998B)用20ul的每個(gè)銅組合物飽合，分別在熱氣干燥箱中干燥2小時(shí)，儲(chǔ)存于4x:。細(xì)菌培養(yǎng)物接種于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基上(營(yíng)養(yǎng)瓊脂或MacConkey)并過(guò)夜培養(yǎng)。用環(huán)蘸取5孔分離的菌落并接種于5ml的Isosensitest肉湯中(ISO肉湯)。肉湯在36<€-/+20匸下有氧過(guò)夜培養(yǎng)。接種物通過(guò)渦旋過(guò)夜的肉湯，用長(zhǎng)的塑料巴斯德吸管向5ml的ISO肉湯中移取"x"滴過(guò)夜培養(yǎng)物如下制備腸桿菌1滴假單胞菌1滴腸球菌5滴葡萄球菌2滴無(wú)菌拭子浸入渦旋的接種物混懸液、靠壓管壁并旋轉(zhuǎn)除去過(guò)多的液體。使用旋轉(zhuǎn)接種器接種涂板。使用無(wú)菌鑷子使板置于涂板上以佳L它們完全與瓊脂接觸。一旦應(yīng)用就不移除板。讀數(shù)測(cè)定組合物抑制生長(zhǎng)的抑制區(qū)域。記錄結(jié)果。A=CuAL42B-CuWB50C-CuPC33區(qū)域的大小以mm計(jì)結(jié)果。金黃色葡萄球菌ABCEMRSA-15H040220409E15Bl262223H040220408E15B3272222H040340351E15B3262626H061500550E15B5272527H061500522E15B7312527H061440332E15Bl302727H061520148E15B17222219,1520592E15B8242525HO61780511E15Bl201718H061780562E15B2302725H061880414E15B3201919H062040630E15B3242021EMRSA-16,5180281E16Al302825,0220405E16A16252221H053000200E16A14252221H055140586E16A12232120H060620616E16A16242220H060620609E16A2222223H060780341E16All222219,1620087E16A7242220H061700478E16A29272219H060780344E16A1212121H060440423E16A14232220H060200417E16A16201918EMRSA-1H043980582GOS262626EMRSA-17,1940150S'hampton262626H053100245S'hampton262625Irish-1H042280049Belfast252525H054360295Craigavon252422Irish-2H052080391Craigavon272624CA-MRSAH043880199ST1PVL-252422H060180184ST5PVL+252525H045260142ST8PVL+272422H044300316ST22PVU221917H060640427ST30PVL+272524H060660187ST59PVL+242322H054960270ST80PVL+252525H052320141ST88PVL+252525MSSAs55/348880/81;PVL+272726H051680084Distinct262522H051760098組II242423MSSAH051660517組II242424MSSAH05126016Q組II272425MSSAH051640376WSS-96272726H052260557DisPVL+272524H060940449NTPVL+262212屎腸球菌H062940352H062940351H06276023OH062920531H062940372H063000437H063000438H062740365H062980090H062940548H062940550H062940547H062940549H062940322H062980250糞腸球菌麵3000"90H062980583H062380292H062960351302730,2960251302832鵓雞腸球菌H062980247293129陰溝腸桿菌ABCH062680089171620H062760216191819cBAE性性4生生4Ej^i歐性Si性性;v曰曰曰曰曰月月性性性曰tfl曰i生性月曰月<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>H062920245151414H062920257121414綠膿假單胞菌暴發(fā)菌林HPA86圣喬治醫(yī)院ABCH062880427201725H062880428171723H062680429171723H061820407201824H061420徹181621H062500552211824H062500553191723H053940608201724H053940608201724H0539福09181723粘質(zhì)沙雷氏桿菌暴發(fā)菌林圣瑪麗兒童醫(yī)院ABC畫28803U191724H062880312181820H062880313201820H062880314201823H062880315191820H062880316201820H062880317202220鮑氏不動(dòng)桿菌ABCA/3009SEclone222023,3260547SEclone222022,1340585SEclone181821A/3214OXA-23clone201622,4640092OXA-23clone202023畫0謂607OXA-23clone191820H044220140NWstrain212127H034940173Tstrain221920H052600376Tstrain201922H060560322Tstrain2118253/A/3311Sporadic1171419H043860186Midlands2161317H060980542Sporadic3201716A/2875/1Wstrain111113躍2034Wstrain131116H060800430賺C-1121112OXA-23cloneU1012H0345601772……0XA-23clone""",22206352111112,2900157Sporadic2121113H04120019824AC-1222023結(jié)論總計(jì)170種菌林、22種不動(dòng)桿菌、18種腸道細(xì)菌、27種克雷白桿菌、26種腸球菌、IO種假單胞菌、37種粘質(zhì)沙雷菌和45種葡萄球菌測(cè)試對(duì)抗三種銅組合物。沒(méi)有耐藥性。區(qū)域從11-31薩大小不等。權(quán)利要求1、一種抗菌制劑，包含(a)至少一種能夠在水性介質(zhì)中分解形成銅離子的水溶性銅化合物；(b)至少一種能夠在水性介質(zhì)中分解形成銨離子的水溶性銨試劑；(c)至少一種水溶性酸，和(d)組分(a)、(b)和(c)溶于其中的水溶性介質(zhì)，所述制劑具有(e)酸性pH和(f)超過(guò)50毫伏的電解電勢(shì)。2、如權(quán)利要求1所述的制劑，其中(a)包含一種或多種無(wú)機(jī)銅鹽，例如硫酸銅、氯化銅、硝酸銅。3、如權(quán)利要求1或2所述的制劑，其中(b)包含至少一種無(wú)機(jī)銨鹽或氫氧化物。4、如任一前述權(quán)利要求所述的制劑，其中(c)包含一種或多種無(wú)機(jī)酸，例如鹽酸、石克酸、硝酸和磷酸中的一種。5、如權(quán)利要求l-3任一所述的制劑，其中(c)包含一種或多種酸，其選自檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、乙酸、乳酸組成的組。6、如任一前述權(quán)利要求所述的制劑，其中水溶性介質(zhì)包含純的蒸餾水或基本上由純的蒸餾水組成。7、如任一前述權(quán)利要求所述的制劑，其中pH值(e)小于5，優(yōu)選小于4，更優(yōu)選小于3，最優(yōu)選小于2.5。8、如權(quán)利要求7所述的制劑，其中pH值(e)是2或更小。9、如任一前述權(quán)利要求所述的制劑，其中電解電勢(shì)值(f)超過(guò)100毫伏，優(yōu)選超過(guò)150毫伏，更優(yōu)選超過(guò)200毫伏，甚至更優(yōu)選超過(guò)300毫伏，例如在300-400毫伏的范圍內(nèi)。10、如任一前述權(quán)利要求所述的抗菌制劑，其中水性介質(zhì)包含凝膠基質(zhì)。11、如權(quán)利要求IO所述的制劑，其中凝膠基質(zhì)包含,薈和一種或多種增稠劑。12、如權(quán)利要求11所述的制劑，其中增稠劑包含至少一種黃原膠。13、如權(quán)利要求10-12任一所述的制劑，其中銅化合物(a)是有才幾鹽，并且以25-500ppm、優(yōu)選50-400ppm、更優(yōu)選100-350ppm的濃度存在。14、如任一前述權(quán)利要求所述的制劑，其基本上由其中所述的組分組成。15、如權(quán)利要求14所述的制劑，除任何不可避免的雜質(zhì)可能存在外，其由其中所述的組分組成。16、如任一前述權(quán)利要求所述的制劑，其中銅化合物U)是水合的結(jié)晶硫酸銅，酸(c)包含一種酸，選自硫酸、鹽酸和磚酸，銨試劑(b)包含一種銨化合物，選自硫酸銨、氯化銨和磷酸銨。17、用于控制細(xì)菌生長(zhǎng)和/或繁殖的任一前述權(quán)利要求所述的抗菌制劑。18、如權(quán)利要求17所述的制劑，其中細(xì)菌難以治療或是持續(xù)性細(xì)菌。19、如權(quán)利要求18所述的制劑，其中細(xì)菌是醫(yī)院內(nèi)細(xì)菌或耐藥性細(xì)菌。20、用于制備處理細(xì)菌或細(xì)菌感染的藥物的任一前述權(quán)利要求所述的制劑。21、如權(quán)利要求20所述的制劑，其中細(xì)菌難以治療或是持續(xù)性細(xì)菌，例如醫(yī)院內(nèi)細(xì)菌或耐藥性細(xì)菌。22、任一前述權(quán)利要求所述的制劑作為抗細(xì)菌制劑的用途。23、一種處理含有例如醫(yī)院內(nèi)或耐藥性細(xì)菌的細(xì)菌的表面或材料的方法，包含將權(quán)利要求1-21任一所述的制劑應(yīng)用于所述的表面或材料。24、如權(quán)利要求1-21任一所述的抗菌制劑，與至少一種清潔劑組合。25、一種清潔劑組合物，包含與如權(quán)利要求l-21任一所述的抗菌制劑結(jié)合的一種或多種清潔劑。26、一種浸漬至少一種如權(quán)利要求1-21任一所述的抗菌制劑的材料基質(zhì)。27、如權(quán)利要求26所述基質(zhì)，其為組織材料。28、如權(quán)利要求26所述基質(zhì)，其為紡織或織物材料。29、如權(quán)利要求28所述基質(zhì)，其為布材料。30、如權(quán)利要求29所述基質(zhì)，其為微纖維布材料。31、如權(quán)利要求30所述基質(zhì)，其為超^t纖維布材料。32、一種抗菌制劑，包含權(quán)利要求1-21任一所述的制劑和其可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。33、一種消毒表面的方法，其包括將權(quán)利要求26-31任一所述的材料基質(zhì)應(yīng)用于表面。34、一種洗滌含有細(xì)菌的材料的方法，其包括使用權(quán)利要求24所述的制劑或權(quán)利要求25所述的清潔劑組合物洗滌材料。35、如權(quán)利要求1-21任一所述的抗菌制劑，以乳劑、肥皂、洗劑、噴霧溶液、敷料溶液、灌洗液或噴霧制劑的形式。36、一種消毒表面的方法，通過(guò)使表面與權(quán)利要求1-21或35任一定義的抗菌組合物的噴霧或霧接觸。37、一種細(xì)菌感染控制系統(tǒng)，其涉及(i)檢測(cè)細(xì)菌，(ii)顯示檢測(cè)的結(jié)果，(iii)通過(guò)表面應(yīng)用或噴霧權(quán)利要求1-21或35任一定義的組合物處理檢測(cè)到的細(xì)菌，(iv)重復(fù)檢測(cè)步驟并重復(fù)顯示步驟。38、如權(quán)利要求37所述的感染控制系統(tǒng)，其中檢測(cè)步驟(i)是通過(guò)孩l流體檢測(cè)法完成的。全文摘要一種抗菌制劑，包含(a)至少一種能夠在水性介質(zhì)中分解形成銅離子的水溶性銅化合物；(b)至少一種能夠在水性介質(zhì)中分解形成銨離子的水溶性銨試劑；(c)至少一種水溶性酸，和(d)組分(a)、(b)和(c)溶于其中的水溶性介質(zhì)，所述制劑具有(e)酸性pH和(f)超過(guò)50毫伏的電解電勢(shì)。文檔編號(hào)A61P31/00GK101360533SQ200680051202公開日2009年2月4日申請(qǐng)日期2006年11月17日優(yōu)先權(quán)日2005年11月17日發(fā)明者S·S·希考克申請(qǐng)人:治療研究有限公司