專利名稱：：一種抗腫瘤活性鐵配合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及配合物的制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，特指一種抗腫瘤活性鐵配合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：癌癥是嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病之一，尋找高效低毒的抗腫瘤藥一直是人類不懈奮斗的目標(biāo)。合成和發(fā)現(xiàn)高效低毒的抗腫瘤藥物，研究其作用機制以及在分子和細(xì)胞水平上研究癌癥的起因，在醫(yī)學(xué)、生物學(xué)和化學(xué)等學(xué)科領(lǐng)域有著重要的意義。最早的有關(guān)金屬配合物在抗腫瘤活性中的報道可以追溯到16世紀(jì)，但直到20世紀(jì)60年代無機配合物順鉑的抗腫瘤活性被發(fā)現(xiàn)才引起人們對其他種類的非有機抑制細(xì)胞生長藥的研究發(fā)生極大興趣(ClarkeMJ，ZhuF，F(xiàn)rascaDR，Chem.Rev.，1999,99(9):2511)?？茖W(xué)工作者在鉑類抗腫瘤藥物領(lǐng)域進行了大量研究工作，這些研究工作大多是圍繞著經(jīng)典鉑類抗腫瘤藥物即以順鉑為模式的二價鉑類配合物進行的，已有四項鉑類抗腫瘤專利報道(CN86106751抗腫瘤鈾配合物及其制備和應(yīng)用；CN87104027新順鉑鉻合物，其小鼠抗腫瘤組合物及其制備過程；CN89106648.9鉑-(IV)-二胺復(fù)合物；CN95103058.2新的抗腫瘤鉑絡(luò)合物)，但鉑類抗腫瘤藥物具有毒副作用和交叉耐藥性等缺點(楊寧，國際泌尿系統(tǒng)雜志，2006，26(6)，849)。順鉑劑量依賴的腎毒性限制了其臨床治療腫瘤的效果。隨后許多非鉑族金屬的配合物，都顯示對人和實驗動物的腫瘤有效，如膦基-烴基VEI族金屬絡(luò)合物具有良好在抗腫瘤方面的應(yīng)用(CN92104058.X制備膦基-烴基WI族金屬絡(luò)合物及含有這些絡(luò)合物的抗腫瘤組合物方法其小鼠抗腫瘤組合物及其制備過程)。已報道的抗腫瘤配合物主要包括過渡金屬鈦、釩、鈮、鉬、錸、釕、銠、銥、鉑以及銅和金等重金屬元素配合物(DreicerR.,PropertK.J"RothB.J.,etal，Cancer,1997，79(1):IIO.曲平，何華，化學(xué)進展，2006，18(12)，1646。李風(fēng)華，吳紅星，林華寬，高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報，2006，27(10)，1800)。而非重金屬配合物特別是能模擬體內(nèi)非血紅素氧活化酶功能的含鐵的仿酶化合物在抗腫瘤方面應(yīng)用國內(nèi)未見報道。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供一種具有良好抗腫瘤活性的鐵配合物及其制備方法。一種抗腫瘤活性鐵配合物，其結(jié)構(gòu)式為表示為[LFeC10FeC10L]BPh4其中L表示上述抗腫瘤活性鐵配合物的制備方法，按照以下步驟進行-(1)以二吡啶甲基胺和2-氯甲基吡啶為原料，按照二吡啶甲基胺2-氯甲基吡啶1:1的摩爾比將兩者在乙腈溶液中，在20-8(TC的溫度條件下反應(yīng)1-3小時，制備出三吡啶甲基胺(配體L);(2)然后將合成的三吡啶甲基胺(L)在甲醇溶液中與三氯化鐵，四苯基棚酸鈉混合，摩爾比三吡啶甲基胺三氯化鐵四苯基棚酸鈉為1:h1，在20-6(TC的溫度條件下攪拌0.5-2小時；合成了氧橋聯(lián)的雙核鐵(III)配合物y-氧-四苯基合二氯三吡啶甲基雙鐵([LFeC10FeC10L]BPh4)。上述制備方法的步驟1中反應(yīng)的最佳溫度為75°C，最佳時間為2小時。上述制備方法的步驟2中反應(yīng)的最佳溫度為4CTC，最佳時間為1小時。反應(yīng)路線如下FeCl3/02NaBPh4BPh4本發(fā)明合成的一種新的三價鐵配合物具有優(yōu)良的肝癌抑制效果。圖l鐵配合物的晶體結(jié)構(gòu)圖2人肝癌細(xì)胞經(jīng)藥物作用48小時后照片2A:藥物為[LFeC10FeC10L]BPh4，2B:藥物為和5-氟尿嘧啶(5-fu)+BPh具體實施方式試劑和原料實驗中所用試劑均為分析純，除特別注明外，未經(jīng)進一步處理。元素分析用Carlo-Erba-1106型元素分析儀測定，金屬分析用絡(luò)合滴定方法測定；紅外光譜用Fr-IR169(固體用KBr壓片)。晶體結(jié)構(gòu)在BrukerSMARTCCD衍射儀上測定?？鼓[瘤試驗試劑如下(1)RPMI1640培養(yǎng)基(RPMI1640+10%小牛血清+HEPES3.5g/l+NaHC032.2g/l+青霉素0.13g/l+鏈霉素0.15g/l)。(2)高糖DMEM培養(yǎng)基(DMEM+10%小牛血清+冊？￡33.5g/l+NaHC032.2g/l+青霉素0.13g/l+鏈霉素0.15g/l)。(3)MTT(美國Amresco公司產(chǎn)品)。實施例(最佳制備反應(yīng)舉例)1、鐵配合物的合成將含l咖ol2-氯甲基吡啶的5ml乙腈溶液滴入裝有l(wèi)mmol二吡啶甲基胺的20毫升乙腈溶液的圓底燒瓶中，室溫攪拌30分鐘，然后升溫至75t:回流1小時；冷至室溫，蒸餾至干得黃色油狀物，回收20ml乙腈。再用20mlCH2Cl2萃取，10ml飽和硫酸鈉和10ml水各洗滌一次，分液漏斗分離，棄去水層。20mlCH2Cl2溶液置于50ml錐形瓶中加無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸去溶劑得黃色油狀物三吡啶甲基胺(L)。將合成的三吡啶甲基胺與1mmolFeCl3、10mL甲醇溶液混合，控制溫度40°C，攪拌1小時，加lmmolNaBPh4得深紅色沉淀。過濾，沉淀分別用少量水、乙醇洗滌，真空干燥得深紅色粉末，深紅色粉末溶于甲醇溶液室溫?fù)]發(fā)一周得深紅色適合X-衍射的晶體。產(chǎn)率81%，熔點，178-179。C。分子式C68H86BCl2Fe2N802;元素分析計算值C,65.82;H,6.99;0,2.58，F(xiàn)e，9.00;實測值C,65.85;H'7.01;0,2.64,Fe，8.91。紅外光i普(IR，cm-1):2936，1615，1577，1498，1037，841，806，506。X-衍射確定了配合物的晶體結(jié)構(gòu)(配合物結(jié)構(gòu)見附圖l)，由附圖l可見每個鐵原子與三吡啶甲基胺中四個氮原子和一個氯原子配位，同時兩個鐵原子通過一個h-橋聯(lián)的氧相連，每個鐵原子的配位數(shù)均為6。配合物外界為四苯基硼負(fù)離子。2、抗腫瘤活性測定篩選的細(xì)胞株有人肝癌細(xì)胞株(Hepg2)(市場購買培養(yǎng))。測定采用溴化四氮唑藍(lán)(MTT)法?；罴?xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性溴化四氮唑藍(lán)還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物(Formazan)并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，用熒光顯微鏡研究細(xì)胞形狀。操作步驟如下2.l.l接種取處于指數(shù)生長期，狀態(tài)良好的細(xì)胞一瓶，加入適量胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細(xì)胞脫落，用含12%小牛血清的RPMI1640(或DMEM)培養(yǎng)液配成細(xì)胞懸液，計數(shù)，并將細(xì)胞密度調(diào)整稀釋至2.2H407m1.取細(xì)胞懸液接種于96孔板上，180ul/孔(含腫瘤細(xì)胞4000/孔)。2.1.2培養(yǎng)將培養(yǎng)板轉(zhuǎn)入恒溫C02培養(yǎng)箱中，在37°C，5%0)2及飽和濕度條件下培養(yǎng)24小時。2.1.3加藥受試化合物先用DMSO配制成O.1M濃度，再作3個稀釋度，濃度依次為1(TM，10、，10-1加入受試化合物，20ul/孔，培養(yǎng)48小時。每組設(shè)3個平行孔，并重復(fù)3次。2.1.4染色-2.1.4.1將MTT加入96孔板(貼壁細(xì)胞)中，20ul/孔，置于培養(yǎng)箱中孵育4小時，吸棄孔內(nèi)上清液，加入DMSOIOOul/孔，置平板搖床上震蕩5分鐘。2.1.4.2將MTT加入96孔板中(懸浮細(xì)胞)，20ul/孔，置于培養(yǎng)箱中孵育4小時，再加入20%SDS50ul/孔，置于培養(yǎng)箱中過夜。2.1.5測定酶標(biāo)儀設(shè)定波長為570nm，參考波長為630nm，測定96孔板每孔吸光值，記錄結(jié)果并計算細(xì)胞抑制率，以判斷受試藥物的抗腫瘤活性。2.3數(shù)據(jù)處理2.3.l細(xì)胞抑制率的計算對照組平均OD值-給藥組平均OD值抑制率=-----------------------------------X100%對照組平均OD值2.3.2IC50的計算根據(jù)中國藥科大學(xué)新藥篩選中心提供的IC50軟件計算所得。MTT法測試結(jié)果示于表1表l配合物(lLFeC10FeC10LlBPh4)和.S-fu對肝癌細(xì)胞抑制作用MTT實驗數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>數(shù)據(jù)顯示在50-5umol/L濃度范圍對肝癌細(xì)胞抑制率超過50%,IC50為4.8umol/L。與陽性對照組5-氟尿嘧啶(5-fu)相比，IC50降低，說明鐵配合物([LFeC10FeC10LlBPh4)對肝癌細(xì)胞抑制較5-氟尿嘧啶強。鐵配合物([LFeC10FeC10LBPh4)禾tl5-氟尿噴啶(5-fu)濃度為10咖ol/L時作用于癌細(xì)胞，48小時后的顯微照片分別示于附圖2A和2B。由圖可以看出受鐵配合物([LFeC10FeC10LBPb4)作用后癌細(xì)胞90%發(fā)生嚴(yán)重變形，圖2A和2B相比，相同條件下鐵配合物([LFeC10FeC10LBPh4)引起癌細(xì)胞變形程度強于5-氟尿嘧啶(5-fu)，這進一步說明我們合成的鐵配合物([LFeC10FeCIOLjBPh4)可作為抗肝癌藥物先導(dǎo)物。實施例21、鐵配合物的合成將含lmmol2-氯甲基吡啶的5ml乙腈溶液滴入裝有l(wèi)mmol二吡啶甲基胺的20毫升乙腈溶液的圓底燒瓶中，室溫攪拌3小時；蒸餾至干得黃色油狀物，回收20ral乙腈。再用20mlCH2Cl2萃取，10ml飽和硫酸鈉和10ml水各洗滌一次，分液漏斗分離，棄去水層。20mlCH2Cl2溶液置于50ml錐形瓶中加無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸去溶劑得黃色油狀物三吡啶甲基胺(U。將合成的三吡啶甲基胺與lmmolFeCl3、10mL甲醇溶液混合，室溫攪拌2小時，加lmmolNaBPh4得深紅色沉淀。過濾，沉淀分別用少量水、乙醇洗滌，真空干燥得深紅色粉末，深紅色粉末溶于甲醇溶液室溫?fù)]發(fā)一周得深紅色適合X-衍射的晶體。產(chǎn)率40%,熔點，178-179°C。分子式C68H86BCl2Fe2N802;元素分析計算值C,65.82;H,6.99;0，2.58,Fe,9.00;實測值C,65.85;H,7.01;0,2.64,Fe，8.91。紅外光i普(IR，cm-l):2936，1615，1577，1498，1037，841，806，506。X-衍射確定了配合物的晶體結(jié)構(gòu)(配合物結(jié)構(gòu)見附圖1)，由附圖1可見每個鐵原子與三吡啶甲基胺中四個氮原子和一個氯原子配位，同時兩個鐵原子通過一個U2-橋聯(lián)的氧相連，每個鐵原子的配位數(shù)均為6。配合物外界為四苯基硼負(fù)離子。2、抗腫瘤活性測定同上實施例31、鐵配合物的合成將含lmmol2-氯甲基吡啶的5ml乙腈溶液滴入裝有l(wèi)mmol二吡啶甲基胺的20毫升乙腈溶液的圓底燒瓶中，5(TC攪拌2小時；蒸餾至干得黃色油狀物，回收20ml乙腈。再用20mlCH2Cl2萃取，10ml飽和硫酸鈉和10ml水各洗滌一次，分液漏斗分離，棄去水層。20mlCH2Cl2溶液置于50ml錐形瓶中加無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸去溶劑得黃色油狀物三吡啶甲基胺(L)。將合成的三吡啶甲基胺與1mmolFeCl:,、10mL甲醇溶液混合，60。C反應(yīng)0.5小時，加lmmolNaBPh4得深紅色沉淀。過濾，沉淀分別用少量水、乙醇洗滌，真空干燥得深紅色粉末，深紅色粉末溶于甲醇溶液室溫?fù)]發(fā)一周得深紅色適合X-衍射的晶體。產(chǎn)率55%，熔點，178-179°C。分子式C68H86BCl2Fe2N802;元素分析計算值C,65.82;H，6.99;0,2.58,Fe,9.00;實測值C,65.85;H,7.01;0，2.64，F(xiàn)e，8.91。紅外光譜(IR，cm-1):2936，1615，1577，1498，1037，841，806，506。X-衍射確定了配合物的晶體結(jié)構(gòu)(配合物結(jié)構(gòu)見附圖1)，由附圖l可見每個鐵原子與三吡啶甲基胺中四個氮原子和一個氯原子配位，同時兩個鐵原子通過一個P2-橋聯(lián)的氧相連，每個鐵原子的配位數(shù)均為6。配合物外界為四苯基硼負(fù)離子。2、抗腫瘤活性測定同上權(quán)利要求1、一種抗腫瘤活性鐵配合物，其結(jié)構(gòu)式為表示為[LFeClOFeClOL]BPh4；其中L表示BPh4-表示2、上述抗腫瘤活性鐵配合物的制備方法，按照以下步驟進行-(1)以二吡啶甲基胺和2-氯甲基吡啶為原料，按照二吡啶甲基胺2-氯甲基吡啶1:1的摩爾比將兩者在乙腈溶液中，在20-8(TC的溫度條件下反應(yīng)1-3小時，制備出三吡啶甲基胺(配體L);(2)然后將合成的三吡啶甲基胺(L)在甲醇溶液中與三氯化鐵，四苯基棚酸鈉混合，摩爾比三吡啶甲基胺三氯化鐵四苯基棚酸鈉為1:1:1，在20-60C的溫度條件下攪拌0.5-2小時；合成了氧橋聯(lián)的雙核鐵(III)配合物u-氧-四苯基合二氯三吡啶甲基雙鐵([LFeC10FeC10L]BPh4)。3、權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性鐵配合物的制備方法，其特征在于步驟1中反應(yīng)的最佳溫度為75'C，最佳時間為2小時。4、權(quán)利要求2所述抗腫瘤活性鐵配合物的制備方法，其特征在于步驟2中反應(yīng)的最佳溫度為4(TC，最佳時間為l小時。全文摘要一種抗腫瘤活性鐵配合物及其制備方法，涉及配合物的制備
技術(shù)領(lǐng)域：
，以二吡啶甲基胺和2-氯甲基吡啶為原料，按照二吡啶甲基胺∶2-氯甲基吡啶1∶1的摩爾比將兩者在乙腈溶液中，在20-80℃的溫度條件下反應(yīng)1-3小時，制備出三吡啶甲基胺(配體L)；然后將合成的三吡啶甲基胺(L)在甲醇溶液中與三氯化鐵，四苯基棚酸鈉混合，摩爾比三吡啶甲基胺∶三氯化鐵∶四苯基棚酸鈉為1∶1∶1，在20-60℃的溫度條件下攪拌0.5-2小時；合成了氧橋聯(lián)的雙核鐵(III)配合物μ-氧-四苯基合二氯三吡啶甲基雙鐵([LFeClOFeClOL]BPh₄)。本發(fā)明合成的一種新的三價鐵配合物具有優(yōu)良的肝癌抑制效果。文檔編號A61P35/00GK101113155SQ20071002488公開日2008年1月30日申請日期2007年7月5日優(yōu)先權(quán)日2007年7月5日發(fā)明者劉青山,陳秋云申請人:江蘇大學(xué)