專利名稱：：一種防治缺血性腦血管疾病的藥物復(fù)合物及其制備方法一種防治缺血性腦血管疾病的藥物復(fù)合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
：隨著當(dāng)今社會(huì)人口的老齡化，腦血管病發(fā)病率不斷增高，具有發(fā)病率高、致殘率高、死亡率高的"三高，，特點(diǎn)，已成為嚴(yán)重危害人類健康的主要疾病之一。在聯(lián)合國WH0調(diào)查的57個(gè)國家中死于腦血管病者占11.3%,其中有40個(gè)國家腦血管病占死因前三位。美國腦卒中患者的總數(shù)達(dá)400萬人次以上。我國每年死于腦血管病約100萬人，2003年腦血管疾病在城市和農(nóng)村疾病死亡原因中均排名第二位，僅次于惡性肺瘤。在腦血管病中，缺血性腦血管病約占80°/。。缺血性腦血管病是神經(jīng)科常見病、多發(fā)病，致殘率極高，是目前重點(diǎn)防治的一種疾病，它包括腦動(dòng)脈硬化癥，腦梗塞等，這類患者容易引起中風(fēng)、血管性癡呆、認(rèn)知功能障礙合并阿爾茨海默病等疾病。阿魏酸(Ferulicacid，F(xiàn)A),化學(xué)名為4-羥基-3-甲氧基苯丙烯酸，是阿魏、川彎、當(dāng)歸、升麻、木賊等多種中藥的有效成分之一。阿魏酸水溶性不大，因此常制成鈉鹽(Sodiumferulate,SF)應(yīng)用。阿魏酸具有明顯的藥理活性，具有很強(qiáng)的抗氧化活性，能清除自由基，調(diào)節(jié)人體生理機(jī)能，抑制產(chǎn)生自由基的酶，具有促進(jìn)清除自由基的酶的產(chǎn)生，抗血小板凝集和血栓等作用。最新研究表明，阿魏酸具有治療阿爾茨海默癥的開發(fā)前景；對缺血性腦損傷有保護(hù)作用。但由于阿魏酸難以通過血腦屏障，其生物利用度低，療效不佳。削弱了阿魏酸在中樞神經(jīng)系統(tǒng)應(yīng)發(fā)揮的作用。冰片分為天然冰片和合成冰片，天然水片的主成分是龍腦(Borneol，2-莰醇；分子式d。H180),合成冰片也收載于中國藥典，主要成份為龍腦和異龍腦(約含有35%的異龍腦)，均是小分子脂溶性單辟類物質(zhì)，可經(jīng)腸道迅速吸收。最新研究還發(fā)現(xiàn)冰片具有抗腦缺血損傷和加速腦缺血后腦血管內(nèi)皮的修復(fù)的作用。近幾年治療缺血性腦血管病藥物不斷問世，但療效并不令人滿意，且有些藥物毒副作用大。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的就是為了克服現(xiàn)有的單用阿魏酸與冰片治療缺血性腦血管疾病療效不佳的缺點(diǎn)，提供一種具有藥理作用協(xié)同互補(bǔ)、起效快、有效時(shí)間延長、服用劑量小、療效確切的防治缺腦血性腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物，其含有活性成份和載體，所述活性成份由重量比為100:0.5~10的阿魏酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽與水片組成，可以制備為適于臨床應(yīng)用的任何藥物劑型，包括但不限于顆粒、膠嚢劑、片劑、滴丸劑、栓劑、注射劑。本發(fā)明的阿魏酸的藥學(xué)上可接受的藥用鹽可以是鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、4丐鹽、鎂鹽、鐵鹽及其他可接受的藥用鹽，也可以直接采用阿魏酸。本發(fā)明的水片可以是天然冰片，也可以是人工冰片。本發(fā)明的防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物中，所述阿魏酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽與冰片的重量比以100:1~5為較佳。本發(fā)明的防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物中，所述阿魏酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽與冰片的重量比以100:2為最佳。本發(fā)明藥物組合物與藥物中可以接受的相應(yīng)藥用輔料或載體等輔助添加成分并按相應(yīng)的制藥方法加工，即可成為相應(yīng)的口力l藥物制劑和注射藥物制劑。如普通的顆粒(劑)、膠嚢劑、片劑、滴丸劑、栓劑、注射劑，也可以加工成緩釋制劑與控釋制劑。口服制劑含有常用的可以被接受的輔助添加成分，如粘合劑、填充劑、稀釋劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑、矯味劑等，必要時(shí)可對片劑、滴丸劑進(jìn)行包衣。在注射制中可以被接受的注射用溶劑、緩沖劑、附加劑等常用的輔助添加成分，按相應(yīng)的常規(guī)工藝方法處理，制成注射劑、注射用凍干4分針、輸液制劑。本發(fā)明的藥物的使用劑量以成年人計(jì)是0.2~2g/人/次，每日一至三次。本發(fā)明還進(jìn)一步提供上述防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物的制備方法。本發(fā)明的藥物的制備方法包括如下步驟顆粒(劑)的制備(1)按重量比分別稱取阿魏酸鈉或阿魏酸和冰片，分別研細(xì)，過80目篩，取3%乙醇溶解冰片，加入阿魏酸鹽或阿魏酸，混合均勻得原料；(2)在步驟(1)的混合原料中，加入適量的蔗糖粉、糊精，制成軟材，經(jīng)14目篩制粒，于506(TC干燥至水分在3%以下。即得顆粒劑。膠嚢劑的制備(1)同顆粒的步驟(l);(2)在步驟(1)的混合原料中，加入適量淀粉、糊精，制成軟材，經(jīng)14目篩制粒，于5060。C干燥至水分在3%以下。裝入2號(hào)膠囊殼中，即得膠嚢劑。片劑的制備(1)同顆粒的步驟(l);(2)在步驟(1)的混合原料中，加入與混合原料重量比為1:0.25的淀粉，1:0.15的蔗糖粉，1:0.1的糊精(冒號(hào)后為添加的物質(zhì)，下同)，制成軟材，經(jīng)14目篩制粒，于506(TC干燥至水分在3°/。以下，得干燥顆粒，再加入l:0.Ol的硬脂酸鎂，壓片，即得片劑。滴丸劑的制備(1)同顆粒的步驟(l);(2)在步驟(1)的混合原料中，加入與混合原料重量比為1:1的滴丸基質(zhì)聚乙二醇6000,加熱熔融，溫度為8095。C，充分?jǐn)嚢杈鶆颍迫氲瓮铏C(jī)，以二曱硅油為冷卻劑滴制，即得滴丸劑。栓劑的制備(1)同顆粒的步驟(l);(6)分別取與混合原料重量比為1:5的聚乙二醇400及聚乙二醇4000于水浴上加熱熔化，加入步驟(1)的混合原料，攪拌至溶解，并迅速傾入已涂潤滑劑的栓模內(nèi)，至稍微溢出?？冢浜笙髌?，取出包裝即得栓劑。注射液的制備(1)同顆粒的步驟(l);(7)在步驟(1)的混合原料中，加入0.9%(重量體積比)的氯化鈉調(diào)節(jié)等滲，加入總制備量30%~80%(體積百分比)的注射用水，攪拌使充分溶解，添加注射用水至制備量，以微孔濾膜過濾，分裝，即得注射液。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，阿魏酸鈉與冰片合用后能減輕短暫性全腦缺血小鼠的腦水肺，改善其行為障礙，增強(qiáng)空間學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能是通過協(xié)同發(fā)揮清除自由基抗氧化作用，減少血腦屏障的通透性，減少活性膠質(zhì)細(xì)胞和減少海馬神經(jīng)元死亡實(shí)現(xiàn)的；復(fù)合使用阿魏酸或其可接受的藥用鹽和冰片比單一使用阿魏酸或其鹽、冰片和陽性藥物腦復(fù)康對短暫性全腦缺血小鼠的療效更顯著，尤其是能明顯改善其認(rèn)知障礙。本發(fā)明揭示了阿魏酸或其鹽與冰片的組合物對短暫性全腦缺血的神經(jīng)保護(hù)作用，兩藥聯(lián)合發(fā)揮了兩藥的協(xié)同作用，與單一阿魏酸鈉相比，吸收半衰期延長，達(dá)峰時(shí)間更快，而且降低了阿魏酸的藥量，增加了藥物的安全性。本發(fā)明作為防治缺腦血性腦血管疾病的藥物具有藥理作用協(xié)同互補(bǔ)、起效快、有效時(shí)間延長、月良用劑量小、療效確切的優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施方式以下結(jié)合具體的實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。以下通過實(shí)施例形式的具體實(shí)施方式，是對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的說明，但本發(fā)明不限于以下實(shí)施例。凡在本發(fā)明的技術(shù)思想啟發(fā)下，用本領(lǐng)域普通技術(shù)知識(shí)和工藝方法做出的各種修改、替換和變更，均包括在本發(fā)明中。制劑實(shí)施例l:分別取阿魏酸鈉65.9g，水片1.32g,蔗糖粉673g,糊精67.3g,分別研細(xì)，過80目篩，取3。/。乙醇溶解冰片，加入阿魏酸鈉混勻，再加蔗糖粉和糊精制成軟材，經(jīng)14目篩制粒，于5060。C干燥至水分在3%以下，即得顆粒劑，共制得100包。用法8g/包/次x2次/日。制劑實(shí)施例2:分別取阿魏酸鈉65.9g，水片0.33g,分別研細(xì)，過80目篩，取3%乙醇溶解冰片，加入阿魏酸鈉制成軟材，經(jīng)14目篩制粒，于5060。C干燥至水分在3%以下，裝入2號(hào)膠嚢殼中，即得膠嚢劑。共制得168粒。用法1~2粒/次，2~3粒/日制劑實(shí)施例3:分別取阿魏酸鈉65.9g,冰片6.59g，淀粉16.8g，蔗糖粉IOg,糊精6.7g，硬脂酸鎂0.673g,分別研細(xì)，過8G目篩，取3%乙醇溶解水片，加入阿魏酸鈉，再加入淀粉、蔗糖粉，用水溶解糊精混合制成軟材，經(jīng)14目篩制粒，于5060。C干燥至水分在3°/。以下，再加入硬脂酸鎂，壓片，即得片劑，共制得202片。用法2片/次，2次/日。制劑實(shí)施例4:分別取阿魏酸鉀65.9g，水片0.659g,聚乙二醇600067.3g，取阿魏酸鉀與冰片分別研細(xì)，過80目篩，取少量3°/。乙醇溶解冰片，加入阿魏酸鉀攪拌均勻，再加入聚乙二醇6000，加熱熔融，溫度為80~95°C,充分?jǐn)嚢杈鶆颍迫氲瓮铏C(jī)，以二曱硅油為冷卻劑滴制，即得滴丸劑。共制5384粒，用法10粒/次，2次/日。制劑實(shí)施例5:分別取阿魏酸鉤65.9g，冰片1.32g，聚乙二醇400336.5g,聚乙二醇4000336.5g,取阿魏酸鉤與冰片分別研細(xì)，過80目篩，取少量3°/乙醇溶解冰片。另取聚乙二醇400及聚乙二醇4000于水浴上加熱熔化(水浴溫度為50°C),加入阿魏酸釣與冰片，攪拌至溶解，并迅速傾入已涂潤滑劑的栓模內(nèi)，至稍微溢出?？冢浜笙髌?，取出包裝即得栓劑共制得296粒，用法l粒/次，3次/日。制劑實(shí)施例6:分別取阿魏S臾鎂131.8g,水片2.64g，氯化鈉9g,注射用水800ml,攪拌使充分溶解，添加注射用水至1000ml,以微孔濾膜過濾，分裝，每支5ml即得注射液。每天1支。以本發(fā)明實(shí)施例作試驗(yàn)樣品，進(jìn)行對短暫性全腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ偷亩囗?xiàng)藥效學(xué)指標(biāo)的藥效學(xué)試驗(yàn)。并以單一的阿魏酸鈉高、低劑量、單一水片以及陽性藥物腦復(fù)康進(jìn)行對比試驗(yàn)，以證明本發(fā)明藥物復(fù)合物在預(yù)防與治療缺血性腦血管疾病的效果。短暫全腦缺血模型制備選用C57BL/6J小鼠，以10%水合氯醛35^1/10g腹腔麻醉小鼠后，仰面固定于手術(shù)臺(tái)上，以75%酒精消毒頸部皮膚，行頸部正中切口。剝離下頜腺及雙側(cè)胸骨舌骨肌、肩胛舌骨肌與胸骨乳突肌，暴露頸總動(dòng)脈，鈍性分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，及伴行神經(jīng)尤其是迷走神經(jīng)，用動(dòng)脈夾同時(shí)夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈30min后，恢復(fù)血供，縫合皮膚并消毒傷口?！┲中g(shù)組只分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈，不行缺血再灌注術(shù)。動(dòng)物分組隨機(jī)分10組(1H叚手術(shù)組(SAM，n=30):只分離雙側(cè)CCA，但不夾閉。(2)缺血模型組(VEH,n=30):造模，ig等量生理鹽水。(3)陽性藥物組(PIRACETAMUM，n=30):造模，ig0.5g/kg腦復(fù)康溶液。(4)陽性藥物空白對照組(PIRACETAM薩SAM，n=12):只分離雙側(cè)CCA，但不夾閉，并ig0.5g/kg腦復(fù)康水溶液。(5)單一阿魏酸鈉(SF)低劑量組(SF100,n=30):造模，igl00mg/kgSF3。/。乙醇溶液。(6)單一SF高劑量組(SF400,n=30):造模，ig400mg/kgSF溶液3%乙醇溶液。(7)單一冰片組(B,n=30):造模，ig2mg/kg冰片3%乙醇溶液。(8)制劑實(shí)施例1低劑量組(SF100+B,n=30):造模，ig100mg/kgSF+2mg/kg水片3%乙醇復(fù)合溶液。(9)制劑實(shí)施例3中劑量組(SF200+B,n=30):造模，ig200mg/kgSF+2mg/kg冰片3y。乙醇復(fù)合溶液。(10)制劑實(shí)施例2高劑量組(SF400+B，n=30):造模，ig400mg/kgSF+2mg/kg水片3°/。乙醇復(fù)合溶液。給藥藥物組造模前30min給藥1次，缺血再灌后5min給藥1次，共2次給藥。假手術(shù)組及缺血組ig等量生理鹽水。藥效學(xué)實(shí)施例1:對短暫全腦缺血小鼠術(shù)后死亡率、癲癇率的比較全腦缺血能誘發(fā)癲癇。術(shù)后每組小鼠分別觀察死亡情況以及是否會(huì)誘發(fā)癲癇。癲癇發(fā)作形式主要有以下4種①狂奔無方向改變的持續(xù)性奔跑，不主動(dòng)避開障礙物。在狂奔時(shí)可伴有胡須的抽動(dòng)和很響的呼吸聲。如小鼠被關(guān)在籠子里，它將撞擊容器壁或跳起撞擊籠蓋?？癖伎沙掷m(xù)約30s至lmin。②全身性陣攣指身體和四肢陣攣。③局部性陣攣指局限的頭部/前肢或后肢/尾發(fā)生陣攣。④肢體抽動(dòng)小鼠后腿站立，前肢抽動(dòng)，并可見失去平^f軒。表l各組全腦缺血小鼠術(shù)后24h死亡率、癲癇率比較<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>Note:▲P<0.05vsSAM(空白組)；#P<0.05vsVEH(才莫型纟且)模型組小鼠術(shù)后至24h內(nèi)的死亡率比其他組高，模型組在術(shù)后24h時(shí)發(fā)生癲癇的機(jī)率比空白組高，說明本實(shí)驗(yàn)造模方法能使小鼠短暫性全腦缺血，從而誘發(fā)癲癇，具體表現(xiàn)為小鼠在籠子里撞擊容器壁或跳起撞擊籠蓋?？癖汲掷m(xù)約30s至lmin;全身和尾部間斷發(fā)生陣攣。單一藥物組發(fā)生癲癇機(jī)率均比模型組低，但沒有顯著性差異。陽性藥物組、復(fù)合藥物中、高劑量組癲癇發(fā)生率比模型組顯著降低，提示陽性藥物、復(fù)合藥物能減輕小鼠腦缺血損傷，單一藥物組有一定作用，但不及復(fù)合藥物組。(結(jié)果見表1)藥效學(xué)實(shí)施例2:對短暫全腦缺血小鼠術(shù)后神經(jīng)功能評(píng)分每組小鼠分別于手術(shù)清醒后(4~6h)、24h和48h在相同環(huán)境中進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分。采用ZeaLonga5分制評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)0分，無神經(jīng)損害的癥狀；1分，不能伸展前爪；2分，向外側(cè)轉(zhuǎn)圈；3分，向外側(cè)傾倒；4分，不能自發(fā)行走，意識(shí)喪失，分?jǐn)?shù)越高，動(dòng)物的行為障礙越嚴(yán)重。表2各組全腦缺血小鼠術(shù)后神經(jīng)功能評(píng)分比較(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>VEH(才莫型組)；$P<0.01vsSF100(單一阿魏酸鈉低劑量組)各組小鼠在大約4~6h完全清醒過來，模型組神經(jīng)功能評(píng)分明顯高于空白組(P<0.001),各藥物組評(píng)分明顯低于模型組，其中以SF與冰片的復(fù)合藥物組最低分(P<0.001),以后小鼠神經(jīng)功能逐漸恢復(fù)，24h后除模型組外，其他組均恢復(fù)至正常水平，模型組48h后恢復(fù)至正常水平。提示單一或復(fù)合使用SF和冰片均能在一定程度上減輕小鼠腦缺血損傷，但復(fù)合用藥的效果比單一SF低劑量組要好(P<0.05)。(結(jié)果見表2)藥效學(xué)實(shí)施例3:對短暫全腦缺血小鼠Morris水迷宮測試主要分為隱蔽平臺(tái)試驗(yàn)與探索試驗(yàn)。水迷宮裝置的圓形水池直徑100cm、高40cm、水深25cm,水溫22±0.5°C;透明的圓形平臺(tái)直徑IOcm、高24cm,放在西南象限，沒入水面下1cm,使得小鼠在水池中游泳時(shí)看不到水面下的平臺(tái)。每組12只小鼠，術(shù)后第4天將小鼠放入水迷宮裝置池中自由游泳90s,不放置平臺(tái)，以排除有游泳障礙的動(dòng)物。術(shù)后第5天開始測試隱蔽平臺(tái)試驗(yàn)，每天4次，分別將小鼠從四個(gè)象限面向池壁放入池中，持續(xù)5d。圖像自動(dòng)監(jiān)視系統(tǒng)追蹤小鼠的游泳軌跡(每次《90s),記錄小鼠尋找固定平臺(tái)的時(shí)間(潛伏期)。如果小鼠找到平臺(tái)，記錄實(shí)際找到的時(shí)間并允許其在平臺(tái)上停留15s;如果90s內(nèi)未找到平臺(tái)，則記錄為90s并將其引導(dǎo)至平臺(tái)上停留15s，放入籠中休息1015rain,之后開始下一次測試。4次成績的平均值為當(dāng)日成績。并對每只小鼠的搜索策略按①直線式；②趨向式；③隨機(jī)式；④邊緣式進(jìn)行記錄。直線式和趁向式游泳軌跡為有效搜索策略，邊緣式和隨機(jī)式游泳軌跡為無效搜索策略，計(jì)算每曰有效搜索策略百分比。完成隱蔽平臺(tái)試驗(yàn)后，將小鼠放入籠中休息lh,之后開始做探索試驗(yàn)。除去平臺(tái)，將小鼠從東南象限面向池壁放入水迷宮裝置池中自由游泳90s，記錄小鼠在各象限停留時(shí)間和穿越平臺(tái)的次數(shù)。表3各組全腦缺血小鼠Morris水迷宮測試潛伏期比較(；c±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>(同組第一天的潛伏期)；*P<0.05;P<0.01vsSAM(空白組)；#P<0.05;"P<0.01;*"P<0.001vsVEH(才莫型組)各組小鼠的潛伏期均隨測試天數(shù)增多而明顯縮短。模型組在第1-5天的潛伏期明顯長于假手術(shù)組(P<0.05,P<0.01)。腦復(fù)康假手術(shù)組與假手術(shù)組沒有顯著性差異；腦復(fù)康組與模型組也沒有顯著性差異。單一藥物組中低劑量SF、高劑量SF和水片組分別在第2天、第l-2天、第l天短于模型組(P〈0.05,P<0.01),提示單一藥物在初期對腦缺血均有一定作用。復(fù)合藥物低、中、高劑量的潛伏期分別在第1~5天、第25天、第25天明顯短于模型組(P<0.05，P<0.01，P<0.001)，提示復(fù)合藥物能增強(qiáng)短暫性全腦缺血小鼠的空間學(xué)習(xí)能力，對腦缺血有明顯的保護(hù)作用。(見表3)。表4各組全腦缺血小鼠Morris水迷宮有效搜索策略百分比比較(；土s)組別有效搜索策略(％)Id2d3d4d5dsa-14±92.86±89.29±SAM(n=12)is.9012.2013.36100.oo±o豕100.00±0*29.17±66.67±87.50±95.83±95.83±VEH(n=ll)24.58"30.28sA13.6f10.21$M10.21wPIRACET扁M36.11±69.44±89.29±92.86±87.50±(n=12)30.9030.05s28.35w18.90鵬13.36鵬PIRACETAMUM79.17±83.33±95.83±91.67±100.00±0*SAM(n=12)18.8220.4110.2112.91SF10037.50±75.00±68.75±75.00±81.25±(n=12)32.2720.41*30.3230.0023.94$SF40082.14±85.71±82.14±(n=12)27.82"96.43±9.45'24.4096.43±9.4531.3464.29±78.57±89.29±89.29±B(n=12)19.67'30.3719.67$19.67s100.00±0$$*SF100+B75.00±90.63±96.8,8±(n=12)13.36*##18.60*8.84$*100.00±0SM100.00±O鵬SF200+B64.29±92.86±92.86±(n=12)24.40'18.90#18.90*100.00±0W100.00±(fSF400+B57.14±89.29±92.86±96.43±(n=12)27.82*13.36$18.90s9.45s*100.00±(fNote:*P<0.05;MP<0.01;wP<0.001vsthe1stdaywithinthegroup;(同組第一天的有效搜索策略)▲P<0.05;▲▲P<0.01vsSAM(空白組)；#P<0.05;"P復(fù)01;#"P<0.001vsVEH(模型組)各組有效搜索策略百分比均隨測試天數(shù)增多而明顯增加。模型組在第12天的有效搜索策略百分比明顯少于假手術(shù)組(P〈0.05，P<0.01),多以以邊緣式或隨機(jī)式進(jìn)行搜索，即在迷宮中圍繞池壁游動(dòng)或做無規(guī)律運(yùn)動(dòng)，學(xué)習(xí)記憶能力差。腦復(fù)康假手術(shù)組與假手術(shù)組沒有顯著性差異；腦復(fù)康組與模型組也沒有顯著性差異。單一藥物組中高劑量SF和水片組分別在第12天、第1天的有效搜索策略百分比大于模型組(P<0.05，P<0.01),提示單一藥物對腦缺血有一定作用。復(fù)合藥物低、中、高劑量的有效搜索策略百分比均在第1~2天明顯大于模型組(P<0.05,P<0.01)，動(dòng)物多以趨向式或直線式進(jìn)行搜索，即在平臺(tái)周圍做趨向運(yùn)動(dòng)或直接游返平臺(tái)，表現(xiàn)出對平臺(tái)的記憶，提示復(fù)合藥物能增強(qiáng)短暫性全腦缺血小鼠的空間學(xué)習(xí)能力，對腦缺血有明顯的保護(hù)作用。但因模型組的有效搜索策略百分比也隨天數(shù)增多而明顯增加，所以藥物組在3~5天與模型組沒有顯著性差異。(見表4)。表5各組全腦缺血小鼠Morris水迷宮各象限停留時(shí)間比較(S±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>Note:$P<0.05vsIIIquadrantwithinthegroup(同組第III象限的停留時(shí)間)；AP<0.05vsSAM(空白組)；*P<0.05vsVEH(才莫型組)假手術(shù)組小鼠在第III象限即目的象限的停留時(shí)間均比其他三個(gè)象限長(P〈0.05),穿越平臺(tái)次數(shù)較多，說明小鼠經(jīng)過5天的水迷宮訓(xùn)練，已對平臺(tái)產(chǎn)生記憶。而it型組在目的象限的停留時(shí)間與其他象限無顯著性差異，穿越平臺(tái)次數(shù)較少。復(fù)合藥物低、中、高劑量組在目的象限的停留時(shí)間均比其他一二個(gè)象限長(P<0.05)，穿越平臺(tái)次數(shù)比模型組多(P<0.05)。腦復(fù)康組和單一藥物組與模型組無顯著性差異。(見表5)。藥效學(xué)實(shí)施例4:對短暫全腦缺血小鼠血清、皮層和海馬SOD(超氧化歧化酶)活性及MDA(丙二醛)含量測定另取(l)(2)(3)(5)(6)(7)(8)組各6只小鼠，于缺血后再灌60min后，斷頭取血取腦，用預(yù)冷生理鹽水洗干凈腦上血液。10000r/min離心10min分離血清，測定血清SOD活性及MDA含量。分別取小鼠皮層與海馬于玻璃勻漿器中，加入預(yù)冷生理鹽水，進(jìn)行腦勻漿，3000r/min離心10min，取上清液，按照說明書測定腦內(nèi)蛋白含量及S0D活性和MDA含量。表6血清SOD及MDA活性(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表7皮層SOD及MDA活性(X土s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>表8海馬SOD及MDA活性(；±s)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>SF100+B420.21±19.21*140.67±18.37'Note:AP<0.05vsSAM(空白組)；#P<0.05vsVEH(才莫型組)與假手術(shù)組比較，模型組小鼠血清、皮層和海馬SOD活力明顯降低(P<0.05，P<0.001，P<0.0001)，MDA含量明顯增加(P<0.05)。腦復(fù)康組小鼠血清、皮層和海馬SOD活力比;f莫型組明顯增加(P<0.05)。單一SF高劑量組小鼠血清、皮層和海馬的SOD活力比模型組明顯增加(P<0.05),皮層MDA含量比模型組明顯降低(P<0.05)。單一水片組海馬的SOD活力比模型組明顯增加(P<0.05)。復(fù)合藥物低劑量組小鼠的血清、皮層和海馬SOD活力均比才莫型組明顯增加(P<0.05),MDA含量明顯降^氐(P<0.05)(表6、7、8)。提示復(fù)合藥物低劑量組對模型組小鼠有腦缺血有保護(hù)作用。藥效學(xué)實(shí)施例5:對短暫全腦缺血小鼠腦含水量測定另取(l)(2)(3)(5)(6)(7)(8)組各6只小鼠，于缺血后再灌注24h后，每只小鼠取一半腦進(jìn)行腦含水量測定。如上，取左邊腦于-4。C生理鹽水中洗凈血漬用吸水紙吸干后稱重為濕重，于120。C烘箱烘至恒重約18h(兩次重量之差<0.3mg)，稱重為干重，計(jì)算腦含水量。腦組織含水量(％)=(濕重-干重)/濕重x100%表9各組腦含水量比較(x±s)組號(hào)(n=6)腦含水量(％)SAM78.98±0.13VEH80.43±0.40"PIRACETAMUM79.15±0.20*SF10079.49±0.42SF40079.53±0.53B79.33±0.18*SF100+B79.23±0.20*Note:▲▲P<0.01vsSAM(空白纟且)；#P<0.05vsVEH(才莫型組)模型組腦含水量顯著高于假手術(shù)組(P<0.01),說明短暫性全腦缺血小鼠腦部血供發(fā)生障礙，引起腦水腫。腦復(fù)康、冰片組、復(fù)合藥物低劑量組的腦組織含水量雖也比正常高，但顯著低于模型組(P<0.05)。提示復(fù)合藥物低劑量組能減輕腦缺血引起的腦水肺(見表9)。藥效學(xué)實(shí)施例6:對短暫全腦缺血小鼠血腦屏障通透性測定另取(l)(2)(3)(5)(6)(7)(8)組各10只小鼠，于缺血后再灌注17h經(jīng)尾靜脈iv2%伊文氏藍(lán)溶液(4ml/kg)。于15min后取腦，用-4。C生理鹽水洗干凈腦上血液，再用濾紙吸干，精密稱重。按1.5ml/100mg濕腦組織加入曱酰胺，制成勻漿。置50。C隔水式培養(yǎng)箱中24h。4000轉(zhuǎn)/分離心20min，取上清液以空白腦勻漿平行管為空白管測定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求得腦組織EB(伊文氏藍(lán))含量，以ng/mg濕腦組織表示。Note:P<0.001vsSAM(空白組)；###P<0.001vsVEH(才莫型組)模型組腦組織中的EB含量明顯大于假手術(shù)組(P<0.001)。腦復(fù)康、高劑量SF、冰片與復(fù)合藥物組小鼠腦組織中的EB含量明顯小于模型組(P<0.001),其中復(fù)合藥物的EB含量最低。而低劑量SF組的EB含量與模型組無差異。提示復(fù)合藥物低劑量組能減少腦缺血引起的血管通透性增多(見表IO)。藥效學(xué)實(shí)施例7:對短暫全腦缺血小鼠組織病理學(xué)檢查(HE染色)另取(l)(2)(3)(5)(6)(7)(8)組各6只小鼠，于缺血后再灌注72h取腦，投入10°/。曱醛溶液中固定24h以上，常規(guī)脫水，石蠟包埋，冠狀切片，片厚4jam,行蘇木精-伊紅(Ematoxylinandeosin，HE)染色。結(jié)果顯示，假手術(shù)組小鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞排列整齊、緊密，層次清楚，細(xì)胞核染色清晰，呈深藍(lán)色，胞體呈圓形，胞質(zhì)無明顯嗜伊紅改變。模型組小鼠出現(xiàn)不同程度神經(jīng)元及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞變性壞死，數(shù)目減少，排列紊亂，死亡細(xì)胞結(jié)構(gòu)不清，輪廓模糊，胞漿呈空泡樣變，核破碎、固縮。海馬CA1區(qū)大多數(shù)神經(jīng)元胞體呈三角形，胞質(zhì)嗜伊紅濃染。部分標(biāo)本腦區(qū)見較多的圓形或橢圓形、胞質(zhì)豐富、嗜伊紅色、核小、致密、偏于細(xì)胞一側(cè)的"肥胖型星形膠質(zhì)細(xì)胞(gemistocyticastrocyte)"增生。腦復(fù)康組與單一藥物組海馬CA1區(qū)部分神經(jīng)元胞體呈三角形，胞質(zhì)嗜伊紅部分深染。復(fù)合藥物組與模型組相比細(xì)胞排列規(guī)整，且細(xì)胞形態(tài)較完整，腦組織腫脹及星形膠質(zhì)細(xì)胞增生較輕。海馬CA1區(qū)少量神經(jīng)元胞質(zhì)嗜伊紅濃染，表10藥物對全腦缺血小鼠血管通透性的影響(；±s)組別(n=10)2.00±0.648.84±1.79胞體呈三角形，僅少數(shù)神經(jīng)元胞體橢圓，胞質(zhì)無明顯嗜伊紅改變。提示復(fù)合藥物低劑量組減少腦缺血小鼠CA1區(qū)的神經(jīng)元死亡，對腦缺血有保護(hù)作用。藥效學(xué)實(shí)施例8:對短暫全腦缺血小鼠GFAP免疫組化染色上述每組6只小鼠，于缺血后再灌注72h取腦，石蠟包埋切片后，使用gfap(神經(jīng)膠質(zhì)原纖維酸性蛋白)抗體，檢測各組海馬CA1區(qū)、皮層區(qū)含gfap陽性細(xì)胞的數(shù)目。結(jié)果顯示，假手術(shù)組小鼠海馬CA1區(qū)和皮層gfap在星形膠質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)不明顯，且樹突較細(xì)。模型組的星形膠質(zhì)細(xì)胞呈棕黃色或褐色，數(shù)量增多，染色較深，胞體較大，突起粗大。單一藥物組和復(fù)合藥物組的gfap陽性細(xì)胞數(shù)介于假手術(shù)和模型組之間，其中復(fù)合藥物組比單一藥物組數(shù)目更少。提示復(fù)合藥物低劑量組抑制膠質(zhì)細(xì)胞的激活，對腦缺血有保護(hù)作用。權(quán)利要求1、一種防治缺血性腦血管疾病的藥物復(fù)合物，其含有活性成份和載體，所述活性成份由重量比為100∶0.5～10的阿魏酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽與冰片組成，劑型為適合臨床應(yīng)用的劑型。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于阿魏酸的藥學(xué)上可接受的鹽選自鈉鹽、鉀鹽、銨鹽、4丐鹽、鎂鹽、鐵鹽及其他可接受的藥用鹽。3、才艮據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于冰片是天然冰片。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于冰片是人工冰片。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于所述阿魏酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽與水片的重量比為100:1~5。6、根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物，其特征在于所述阿魏酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽與冰片的重量比為100:2。7、一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物的制備方法，包括如下步驟(1)按重量比分別稱取阿魏酸鈉或阿魏酸和冰片，分別研細(xì)，過80目篩，取3%乙醇溶解水片，加入阿魏酸鹽或阿魏酸，混合均勻得原料；(2)按各種制劑的常規(guī)工藝制備成相應(yīng)的劑型。全文摘要本發(fā)明提供一種防治缺血性腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法，其含有活性成份和載體，所述活性成份由重量比為100∶0.5～10的阿魏酸或其在藥學(xué)上可接受的鹽與冰片組成，可以制備為適于臨床應(yīng)用的藥物劑型包括顆粒、膠囊劑、片劑、滴丸劑、栓劑、注射劑。本發(fā)明揭示了阿魏酸或其鹽與冰片的組合物對短暫性全腦缺血的神經(jīng)保護(hù)作用，兩藥聯(lián)合發(fā)揮了兩藥的協(xié)同作用，與單一阿魏酸相比，吸收半衰期延長，達(dá)峰時(shí)間更快，而且降低了阿魏酸的藥量，增加了藥物的安全性。本發(fā)明作為防治缺腦血性腦血管疾病的藥物具有藥理作用協(xié)同互補(bǔ)、起效快、有效時(shí)間延長、服用劑量小、療效確切的優(yōu)點(diǎn)。文檔編號(hào)A61K31/185GK101181256SQ20071003177公開日2008年5月21日申請日期2007年11月29日優(yōu)先權(quán)日2007年11月29日發(fā)明者劉培慶,姚美村,林竹貞,皮榮標(biāo)申請人:中山大學(xué)