專利名稱：乳狀液膜分離提取黃連中生物堿的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種可應(yīng)用于藥材生產(chǎn)及藥物分析檢驗(yàn)的乳狀液膜分離提取黃 連中生物堿的方法。
冃 景技術(shù)
黃連屬于毛莫科植物，是一種用途很廣的中藥，藥用取其干燥根莖，主要藥 用成分是小檗堿，藥根堿、巴馬亭等生物堿。它們具有相似結(jié)構(gòu)，常統(tǒng)稱為黃 連生物堿。常用的提取方法是回流提取法，如乙醇水回流提取或水回流提取。 這種工藝所得成品含雜質(zhì)較多，需通過重結(jié)晶來提高成品的純度，然而重結(jié)晶
又不可避免地導(dǎo)致黃連總生物堿的損失。02103880. 5公開了 "一種黃連總生物 堿的提取工藝"，是先將黃連破碎，然后水浸泡并同時(shí)進(jìn)行超聲波處理，水浸 泡時(shí)間為30 240分鐘，水浸泡后的黃連在溫浸條件下進(jìn)行總生物堿提取，提 取溫度為70 98'C，提取時(shí)溶劑水的量為5 16倍生藥材重量，提取時(shí)間為30 180分鐘，提取次數(shù)為1 4次，再將提取液進(jìn)行減壓濃縮，濃縮時(shí)的真空度為 0. 04 0. 08MPa，濃縮提取液至2 10倍生藥材重量的水的體積，然后用濃鹽 酸調(diào)節(jié)濃縮提取液的PH值至1 5，再加入4% 16%氯化鈉趁熱溶解，濃縮提 取液靜置4 24小時(shí)，通過抽濾或離心甩干收集提取液中的沉淀物，沉淀物在 50 80'C的溫度下進(jìn)行烘干，干燥后的沉淀物被粉碎即可得到黃連總生物堿鹽 酸鹽成品。這種方法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、原料消耗多。乳狀液膜法是一種簡(jiǎn)單、 快速、高效、選擇性高、經(jīng)濟(jì)節(jié)能的新型分離提取技術(shù)，已應(yīng)用于環(huán)境、化工 生產(chǎn)、濕法冶金等領(lǐng)域，但還未應(yīng)用于中草藥中總生物堿的提取，且現(xiàn)有乳狀 液膜的膜溶劑通常是甲苯、環(huán)己烷、二氯甲垸和煤油；這些溶劑都具有一定的
毒性，不適用于中草藥提取后人、獸的使用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種液膜分離提取黃連中生物堿的方法。以實(shí)現(xiàn)提 取過程快速、高效、操作簡(jiǎn)單、且所選擇的溶劑無毒，能適用制藥后人、獸使用。
本發(fā)明包括以下步驟 (1)乳狀液的制備按膜溶劑食用油表面活性劑Span 80或Span 80與 助表面活性劑的混合物磷酸脂載體的體積比=(31 45) : (3 9) : (2 10)進(jìn)行混合，然后在混合物中按1: 1 4: 1體積比加入濃度為0. 1 0. 7mol/L 的HC1溶液或稀硫酸溶液，在8000轉(zhuǎn)/分 10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌1-3 min， 即制得穩(wěn)定的W/0型乳狀液；
(2)生物堿的分離提取將pH=4的黃連鹽酸提取液與乳狀液按照一定 的體積比(50:5 50:20)加入提取器中，在200轉(zhuǎn)/分 300轉(zhuǎn)/分的低速攪 拌下提取5-15 min;
(3)破乳將乳液轉(zhuǎn)入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出
油層，所得水相即為黃連中總生物堿溶液。
所述pH=4的黃連鹽酸提取液是在1份黃連粉末中，加入30-60份0. 1 mol/L的HC1，超聲提取二次，每次50-70 min，離心分離，將濾液用0. 1 mol/L 的HC1稀釋8-10倍，再用飽和氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH二4。
所述助表面活性劑是C原子數(shù)為8 — 16的醇類，表面活性劑Span 80與助 表面活性劑的體積比為l: 6 7: 11。 所述助表面活性劑是正癸醇。
本發(fā)明使用食用油作為膜溶劑，解決了乳狀液膜法目前所使用的有機(jī)溶
劑有毒，不適用于中草藥提取后人、獸使用的難題；提取過程快速、高效、 操作簡(jiǎn)單，可應(yīng)用于黃連藥品、獸藥等產(chǎn)品的生產(chǎn)和開發(fā)及檢驗(yàn)。
具體實(shí)施例方式
以下通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明 實(shí)施例1:
(1) 黃連提取液的制備稱取1.0克黃連粉末，加入50mL0.1mol/L的HCl， 超聲提取60 min，在轉(zhuǎn)速為4 000 r/min的離心機(jī)上離心10 min，取出濾液， 往濾渣中再加入50mL的0.1mol/L的HCl，超聲提取60min,再離心10 min，合并濾液。用O.l mol/L的HCl稀釋濾液至900 mL，過濾，用飽和 氫氧化鈉調(diào)劑pH:4，備用。
(2) 乳狀液的制備取膜溶劑食用油37 mL，表面活性劑總量為7 mL，其中 Span80為lmL，正癸醇為6mL，磷酸脂載體6mL，將三者進(jìn)行混合，每 取此混合物20 mL就按2: 1的體積比加入10 mL 0.1 mol/L的HC1溶液， 在9000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌2 min，即制得穩(wěn)定的W/O型乳狀液。
(3) 生物堿的分離提取將pH-4的黃連鹽酸提取液與乳狀液按照乳水體積比 為50: IO加入提取器中，在250轉(zhuǎn)/分的低速攪拌提取10min;
(4) 破乳轉(zhuǎn)入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層， 所得水相即為黃連中總生物堿的溶液。
經(jīng)高效液相色譜分析，藥根堿、巴馬亭和小檗堿的萃取率分別達(dá)到了 82.97 %、 85.92%和88.86%;其富集因子分別達(dá)到了 7.21、 6.93和6.97，說明乳狀液 膜能有效地分離富集黃連中的生物堿。 高效液相色譜的條件如下
色譜柱SpherigelC18， SZ: 200 X 4.6 mm, 5 pn
流動(dòng)相A ( 50 mmol/L KH2P04 + 14 mmol/L三乙胺+3.6 mmol/L
C12H25Na03S) : B (乙腈)=65:35(V/V) 流 速l.OmL/min 檢測(cè)波長(zhǎng)346 nm 進(jìn)樣量10 柱溫30 °C 實(shí)施例2:
(1 )黃連提取液的制備:稱取2公斤黃連提取物粉末，加入120 L 0.1 mol/L 的HC1，超聲提取70min，在轉(zhuǎn)速為4000 r/min的離心機(jī)上離心10 min， 取出濾液，往濾渣中再加入120L的0.1mol/L的HCl，超聲提取70min， 再離心10 min，合并濾液。用0.1 mol/L的HC1稀釋濾液至2400 L，過濾， 用飽和氫氧化鈉調(diào)劑pH=4，備用；
(2) 乳狀液的制備取膜溶劑食用油124L，表面活性劑總量為36 L，其中Span
80為14 L，正癸醇為22 L，磷酸脂載體40 L，將三者進(jìn)行混合，然后將 此混合物與0.7 mol/L的HC1溶液按照4: 1的體積比加到制乳器中，在 10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌15 min，即制得穩(wěn)定的W/O型乳狀液。
(3) 生物堿的分離提取將pH-4的黃連鹽酸提取液與乳狀液按照乳水體積比 為50: 5加入提取器中，在300轉(zhuǎn)/分的低速攪拌提取15min;
(4) 破乳轉(zhuǎn)入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層，
所得水相即為黃連中總生物堿的溶液，用高效液相色譜分析其中藥根堿、 巴馬亭和小檗堿的分離、富集程度。
經(jīng)高效液相色譜分析，藥根堿、巴馬亭和小檗堿的萃取率分別達(dá)到了 72.85
%、 78.22%和82.08%;其富集因子分別達(dá)到了 6.65、 6.51和6.82，說明乳狀液 膜能有效地分離富集黃連中的生物堿。
高效液相色譜的條件如下
色譜柱Spherigel C18， SZ: 200X4.6 mm, 5 jam
流動(dòng)相A (50 mmol/LKH2P04+ 14 mmol/L三乙胺+3.6 mmol/L C12H25Na03S) : B (乙腈)=65:35(V/V)
流 速l.Om!Vmin
檢測(cè)波長(zhǎng)346 nm
進(jìn)樣量10 ^iL
柱溫30 °C 實(shí)施例3:
(1) 黃連提取液的制備稱取1.0克黃連粉末，加入30mL0.1mol/L的HCl， 超聲提取30min，在轉(zhuǎn)速為4 000 r/min的離心機(jī)上離心10 min,取出濾液， 往濾渣中再加入30 mL的0.1 mol/L的HC1，超聲提取30 min，再離心10 min， 合并濾液。用0.1 mol/L的HC1稀釋濾液至500 mL，過濾，用飽和氫氧化鈉 調(diào)劑pH二4，備用。
(2) 乳狀液的制備取膜溶劑食用油42 mL，表面活性劑總量為3.5 mL，其中 Span 80為0.5 mL，正癸醇為3 mL，磷酸脂載體4.5mL，將三者進(jìn)行混合， 每取此混合物20 mL就按1: 1的體積比加入20 mL 0.4 mol/L的HC1溶液， 在8000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌1 min，即制得穩(wěn)定的W/O型乳狀液。
(3) 生物堿的分離提取將pH-4的黃連鹽酸提取液與乳狀液按照乳水體積比 為50: 20加入提取器中，在200轉(zhuǎn)/分的低速攪拌提取5min;
(4) 破乳轉(zhuǎn)入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層，
所得水相即為黃連中總生物堿的溶液，用高效液相色譜分析其中藥根堿、巴 馬亭和小檗堿的分離、富集程度。
經(jīng)高效液相色譜分析，藥根堿、巴馬亭和小檗堿的萃取率分別達(dá)到了 75.25 %、 79.24%和82.44%;其富集因子分別達(dá)到了 6.45、 6.48和6.71，說明乳狀液 膜能有效地分離富集黃連中的生物堿。
權(quán)利要求
1.一種乳狀液膜分離提取黃連中生物堿的方法，其特征在于包括以下步驟(1)乳狀液的制備按膜溶劑食用油∶表面活性劑Span 80或Span 80與助表面活性劑的混合物∶磷酸脂載體的體積比＝(31～45)∶(3～9)∶(2～10)進(jìn)行混合，然后在混合物中按1∶1～4∶1體積比加入濃度為0.1～0.7mol/L的HCl溶液或稀硫酸溶液，在8000轉(zhuǎn)/分～10000轉(zhuǎn)/分的轉(zhuǎn)速下攪拌1-3min，即制得穩(wěn)定的W/O型乳狀液；(2)生物堿的分離提取將pH＝4的黃連鹽酸提取液與乳狀液按照一定的體積比(50∶5～50∶20)加入提取器中，在200轉(zhuǎn)/分～300轉(zhuǎn)/分的低速攪拌下提取5-15min；(3)破乳將乳液轉(zhuǎn)入分液漏斗中靜置分層，分出乳液，水浴加熱破乳后分出油層，所得水相即為黃連中總生物堿溶液。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳狀液膜分離提取黃連中生物堿的方法，其特征 在于所述pH==4的黃連鹽酸提取液是在1份黃連粉末中，加入30-60份0. 1 mol/L的HCl，超聲提取二次，每次50-70 rain，離心分離，將濾液用0. 1 mol/L 的HC1稀釋8-10倍，再用飽和氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH-4。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳狀液膜分離提取黃連中生物堿的方法，其特征 在于所述助表面活性劑是C原子數(shù)為8—16的醇類，表面活性劑Span 80與助 表面活性劑的體積比為l: 6 7: 11。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的乳狀液膜分離提取黃連中生物堿的方法，其特征 在于，所述助表面活性劑是正癸醇。
5. 根據(jù)權(quán)利要求i所述的乳狀液膜分離提取黃連中生物堿的方法，其特征 在于，所述磷酸脂載體是二 (2-乙基己基)磷酸脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種乳狀液膜分離提取黃連中生物堿的方法。其乳狀液的制備是以食用油作膜溶劑，以Span 80或Span 80與助表面活性劑的混合物作為表面活性劑，磷酸脂作載體，再將pH＝4的黃連鹽酸提取液或硫酸提取液與乳狀液按照乳水體積比為(50∶5～50∶20)加入提取器中，在200轉(zhuǎn)/分～300轉(zhuǎn)/分的低速攪拌提取5-15min；經(jīng)水浴加熱破乳后分出油層，所得水相即為黃連中總生物堿的溶液。本發(fā)明使用食用油作為膜溶劑，解決了乳狀液膜法目前所使用的有機(jī)溶劑有毒，不適用于中草藥提取后人、獸使用的難題；提取過程快速、高效、操作簡(jiǎn)單，可應(yīng)用于黃連藥品、獸藥等產(chǎn)品的生產(chǎn)和開發(fā)及檢驗(yàn)。
文檔編號(hào)A61K36/718GK101108214SQ200710035399
公開日2008年1月23日 申請(qǐng)日期2007年7月20日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月20日
發(fā)明者何鼎勝, 姚守拙, 歐陽麗, 波 陳, 銘 馬 申請(qǐng)人:湖南師范大學(xué)