專利名稱：：化合物hsr01-4-9在制備抗多藥耐藥金葡菌抑制劑中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于藥學領(lǐng)域，涉及的化合物HSR01-4-9的抑制耐藥細菌活性用途，具體涉及化合物HSR01-4-9在制備抗耐氟諾喹酮類耐甲氧西林金黃葡萄球菌(MRSA)藥物中的用途。
背景技術(shù)：
：耐甲氧西林金黃葡萄球菌(Methicillin-Resistant5to;/^/ococa^myreM，MRSA)已經(jīng)成為近年來醫(yī)院內(nèi)的一種常見嚴重的傳染病菌。除了淺表性皮膚感染，它也存在人體內(nèi)部的深度感染，嚴重者可導致患者死亡。2003年10-12月美國爆發(fā)的兒童流感感，42死亡病例中有3例與MRSA感染有關(guān)(CDC,2004)。對所有內(nèi)酰胺類抗生素如青霉素系列藥物具有耐藥性的MRSA，對大環(huán)內(nèi)酯，氟喏喹酮，四環(huán)素等抗生素也都產(chǎn)生了耐藥性，這使得它的感染變得難以治療，導致臨床醫(yī)院成為嚴重的感染源。目前可用于治療MRSA的抗生素只有萬古霉素(vancomycin)。然而不幸的是，完全抗萬古霉素的MRSA菌株2002年在美國已經(jīng)出現(xiàn)(CDC，2002)。而當前最新的抗MRSA唑啉酮類藥物Linezoid(ZyvoxTM)以及鏈陽菌素類藥物quinupristin/dalfostin合劑是2001年剛剛投放市場的。但已經(jīng)出現(xiàn)了Linezoid耐藥型MRSA(Tsiodras，2001;Potoski,2002)。我國近一兩年來由于抗生素廣泛的使用，甚至濫用，特別是萬古霉素越來越在許多醫(yī)院成為常規(guī)抗生素類用藥之后，這一形勢同樣越來越緊迫。除了采取措施通過限制濫用抗生素以減緩耐藥MRSA增長的速度，同時必須研究幵發(fā)新的抗多藥耐藥MRSA藥物，即新的化學結(jié)構(gòu)類型，新的作用方式的抗多藥耐藥金黃葡萄球菌藥物作為后備，以防當現(xiàn)有的抗菌藥物無法起作用之后，細菌的大規(guī)模爆發(fā)。細菌耐藥有多種機制，其中，減少藥物攝入細胞是細菌幾種重要的耐藥機制中的一種。減少藥物攝入細胞又存在幾種方式細胞膜結(jié)構(gòu)的改變；細胞膜蛋白的變異；藥物從細胞中被主動外排(外泵efflux)。目前普遍接受的細胞對藥物降低通透性的機制是主動外泵機制(Langton,etal,2005)。轉(zhuǎn)染了對抗生素和其他毒素的外泵系統(tǒng)從細菌到哺乳動物器官中都發(fā)現(xiàn)存在。根據(jù)世界衛(wèi)生組織報告，具有多藥耐藥外泵蛋白機制的感染占了醫(yī)院感染的60%(WorldHealthOrganization,2000)。耐甲氧西林金黃葡萄球菌有多種耐藥機制，除了具有染色體為40kb的耐藥基因(wecA)通過編碼甲氧西林接合蛋白(PenicilinBindinProtein,PBP)產(chǎn)生對p-內(nèi)酰胺產(chǎn)生耐藥性之外，還對大環(huán)內(nèi)酯(macrolide)，氟喏喹酮(fluoroqiunolones)，四環(huán)素和季胺鹽類分別通過MsrA(Ross,1990)，NorA(Ng，1994)，TekA(Guay，1993)禾卩QacA(Marshall,1997)外泵蛋白形成外泵耐藥機制。在這些外泵機制中細菌細胞將普遍使用的大多數(shù)種類型抗生素藥物分子"泵出"，使得藥物在細胞內(nèi)的濃度降低而無法起到抗菌作用。NorA基因(42385Da)存在于金黃葡萄球菌S.awe^染色體的SmalD片斷上，它起先是作為氟喏喹酮類耐藥基因，后來表現(xiàn)出對多種抗生素化合物的耐藥性(Yu,2002，)。NorA基因在S.flww^中過度表達產(chǎn)物NorA蛋白位于細胞質(zhì)膜上作為主要轉(zhuǎn)運子(transporter)，將包括氟喏喹酮類的多種藥物作為基質(zhì)，或與其他轉(zhuǎn)運子協(xié)同作用，將藥物分子泵出細胞外，產(chǎn)生細菌的耐藥性(Ng，1994)。因此，將含有NorA基因的MRSA細菌株作為一個篩選耙標是尋找抑制耐藥細菌藥物的一條重要途徑。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供化合物HSR01-4-9的抑制耐藥細菌活性用途，具體涉及化合物HSR01-4-9在制備抗耐氟諾喹酮類耐甲氧西林金黃葡萄球菌(MRSA)藥物中的用途。本發(fā)明所述的化合物l，2-dihydro-3,6，8-trihydroxy-l,l-bis(3-methylbut-2-enyl)-5-(l,l-dimethylprop-2-eny1)—xanthen-2,9-dione(簡稱HSR01陽4-9)所述的化合物1，2-dihydro-3,6，8-trihydroxy-l,卜bis(3-methylbut-2-enyl)-5-(l，l-dimethylprop-2-enyl)-xanthen-2,9-dione(簡稱HSR01-4-9)的化學結(jié)構(gòu)，為取代的口山酮化合物。其中2-位被氧化為羰基；3，6，8-位為羥基取代；l-位被Ri和R2取代；5-位被113取代。R產(chǎn)R2-isoprenyl(異戊基)，R3=l，l-dimethylprop-2-enyl(l,l-二甲基丙烯基)?；衔颒SR01-1的波譜學性質(zhì)特征化合物HSR01-1的碳、氫核磁共振譜學數(shù)據(jù)見表1。化合物HSR01-1為黃色油狀物，其分子式為C2sH3206其ESIMS的碎片峰m/z465.4給出分子量464。表1、化合物1的核磁共振譜數(shù)據(jù)(CDCl3,Sppm乂Hz)No.HCNo.HC155.81116.45，10.56,17.61148.962201.1612a5.39,《10.56113.493158.61b5.48，《17.6146.49,s108.14131.69，s28.094a151.791428.094b154.751，3.42,d《7.04,13.6937.78109.942，4.76,w117.686161.303，135.3276.29，s101.584，1.49,s25.708161.115，1.51，s17.958a105.723-OH7.0,s9179.726-OH7.12,s8b116.218-OH13.40，s1040.88所述化合物HSR01-4-9的通過下述方法制備金絲桃屬(Hypericum)植物元寶草(H.sampsonii)的根，粉碎，用95%乙醇在45攝氏度以下浸泡提取，合并提取液減壓濃縮至乙醇全部揮發(fā)完畢，加水至浸膏混懸，用乙酸乙酯萃取。有機相減壓蒸干后用硅膠和RP-18正反相柱層析多次分離得到HSR01-1為黃色油狀化合物。本發(fā)明化合物HSR01-4-9經(jīng)抑菌試驗，結(jié)果表明，對于耐藥菌株SA-1199B，在對照藥物諾氟沙星最低抑菌濃度為MIC32微克/毫升(100pM)時，化合物HSR01-4-9的最低抑菌濃度為2微克/毫升(4.3pM)，即化合物HSR01-4-9的抑菌活性強于對照藥物諾氟沙星。可進一步制備抑制耐藥細菌的藥物具體實施方式實施例1金絲桃屬(Hypericum)植物元寶草(H.sampsonii)的根1.2千克，粉碎，用1升95%乙醇在45攝氏度以下浸泡提取五次，合并提取液減壓濃縮至乙醇全部揮發(fā)完畢，加水800毫升至浸膏混懸，用乙酸乙酯萃取。有機相減壓蒸干后層析分離。樣品用硅膠柱層析，200-300目硅膠(中國青島海洋化工廠)800克，石油醚-乙酸乙酯(8:22:8)梯度洗脫，每流分為75毫升，硅膠薄層色譜檢測。合并83至112流分并蒸干，重新上硅膠柱層析，200-300目硅膠200克置于4x40厘米的層析柱中，石油醚-丙酮(7:3)為洗脫劑，得到略帶棕色固體化合物。再用反相硅膠RP-18柱層析(2xl5厘米)，甲醇-水(8:2)洗脫。得到白色固體化合物25毫克，經(jīng)硅脫薄層色譜和反相RP-18高效液相色譜分析，為一純化合物，鑒定為HSR01-4-9。所述化合物HSR01-4-9的波譜學性質(zhì)特征化合物HSR01-4-9為黃色油狀物，其分子式為C28H3206其ESIMS的碎片峰m/z465.4給出分子量464。表1是化合物HSR01-4-9的碳、氫核磁共振譜學數(shù)據(jù)(CDCl3,Sppm,JHz)。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>實施例2抑菌試驗確定最低抑菌濃度方法，諾氟沙星(Norfloxacin)購于西格瑪公司(SigmaChemicalCo.)穆勒-亨頓肉湯(Mueller-Hintonbroth,MHB;Oxoid)調(diào)至每升含20毫克l丐離子和鎂離子。通過比較McFarland標準，將細菌培養(yǎng)物配制成5x105cfu/ml密度的接種物。諾氟沙星與化合物HSR01-4-9溶解于二甲基亞砜溶劑并稀釋MHB中至512微克/毫升的起始濃度。用Nunc型96微孔板，125微升MHB加入1-11號孔；將125微升化合物或諾氟沙星(對照藥物)加入1號孔并連續(xù)稀釋，留下11號孔不加化合物或藥物作為細菌生長對照。最后的體積加入12號孔，該孔中不含肉湯作為無菌對照。最后，細菌接種物(125微升)分別加入1-11號孔，并將該盤在37oC下培養(yǎng)18小時。最低抑菌濃度(MIC)是看不見細菌生長的最低濃度，所有最低抑菌濃度重復測定兩次。濃度為5毫克/毫升的3-[4，5-二甲基噻唑基-2]-2，5-二苯基四唑藍溴化物(MTT;Lancaster)由顏色黃變藍，用于檢測細菌的生長。實驗細菌SA-1199B過度表達NorA多藥耐藥外泵蛋白的金黃葡萄球菌，它對諾氟沙星的耐藥為MIC32微升/毫升。NorA蛋白是金葡菌的主要藥物外排泵(effluxpump)(Kaatz&Seo,1997)。結(jié)果顯示對于耐藥菌株SA-1199B，在對照藥物諾氟沙星最低抑菌濃度為MIC32微克/毫升(IOO^M)時，化合物HSR01-4-9的最低抑菌濃度為2微克/毫升(4.3^M)，即化合物HSR01-4-9的抑菌活性強于對照藥物諾氟沙星。權(quán)利要求1.化合物HSR01-4-9在制備抗多藥耐藥金葡菌抑制劑中的用途。2、權(quán)利要求1所述的用途，其特征是所述的化合物具有下述結(jié)構(gòu):3、權(quán)利要求1所述的用途，其特征是所述的金葡菌是耐氟諾喹酮類耐甲氧西林金黃葡萄球菌。4、權(quán)利要求4所述的用途，其特征是所述的耐甲西林金黃葡萄球菌同時具有對氟諾喹酮類抗生素藥物的耐藥性。全文摘要本發(fā)明屬于藥學領(lǐng)域，涉及的化合物式I的HSR01-4-9的抑制耐藥細菌活性用途，具體涉及化合物HSR01-4-9在制備抗耐氟諾喹酮類耐甲氧西林金黃葡萄球菌(MRSA)藥物中的用途。本發(fā)明化合物HSR01-4-9經(jīng)抑菌試驗，結(jié)果表明，對于耐藥菌株SA-1199B，在對照藥物諾氟沙星最低抑菌濃度為MIC32微克/毫升(100μM)時，化合物HSR01-4-9的最低抑菌濃度為2微克/毫升(4.3μM)，即化合物HSR01-4-9的抑菌活性強于對照藥物諾氟沙星?？蛇M一步制備抑制耐藥細菌的藥物。文檔編號A61P31/00GK101269060SQ20071003827公開日2008年9月24日申請日期2007年3月21日優(yōu)先權(quán)日2007年3月21日發(fā)明者佳葉,曾祎含,青穆,肖志勇申請人:復旦大學