專利名稱：納米氟尿嘧啶涂層人工晶體及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種涂層的人工晶狀體(intraocular lenses，IOL)及其制備方法。
背景技術(shù)：
氟尿嘧啶(Fluorouracil，5-Fu)是胸苷酸合成酶的抑制劑，可有效抑制細(xì)胞的有絲分裂，是臨床常用抗腫瘤藥物。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)氟尿嘧啶具有抑制晶狀體上皮細(xì)胞增殖和移行的作用(參見(jiàn)孫巖秀，李筱榮，張曉紅等，5-氟尿嘧啶抑制兔晶狀體上皮細(xì)胞(lens epithelial cell，LECs)增殖及眼內(nèi)毒性的研究，眼科研究，2000；18(3)224-226)，可用于預(yù)防人工晶狀體植入術(shù)后人工晶狀體前膜和后發(fā)性白內(nèi)障，還可以抗青光眼術(shù)后疤痕形成(參見(jiàn)熊小玲，青光眼術(shù)后5-Fu抗瘢痕形成的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究和兔眼房水的5-Fu藥代動(dòng)力學(xué)研究，眼科研究，1993；11(3)157-159)。
白內(nèi)障是世界范圍內(nèi)最主要的致盲眼病。治療白內(nèi)障的方法有手術(shù)療法和藥物療法，但目前用于治療白內(nèi)障的藥物均不能有效阻止或延緩晶狀體混濁的發(fā)展，因而手術(shù)治療仍是目前治療白內(nèi)障的主要手段。目前臨床上使用最多的晶狀體材料是聚甲基丙烯酸甲酯(polymethylmethacrylate，PMMA)，但PMMA的生物相容性仍存在一些問(wèn)題，PMMA植入人體內(nèi)后常會(huì)引起炎癥反應(yīng)，人工晶狀體表面細(xì)胞粘附、色素沉著、細(xì)胞增殖、表面蛋白膜的形成，及周圍組織的反應(yīng)，如角膜內(nèi)皮細(xì)胞損害、葡萄膜炎等。為解決這些問(wèn)題，常對(duì)人工晶狀體進(jìn)行表面修飾以改變?nèi)斯ぞ铙w表面特性，增加其生物相容性。目前已有表面修飾肝素的人工晶狀體應(yīng)用于臨床(參見(jiàn)靳濤，李惠琪，微波等離子體在肝素修飾人工晶體表面中的應(yīng)用，山東科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2004；23(4)108-110)。
后囊膜混濁是白內(nèi)障術(shù)后的主要并發(fā)癥，目前認(rèn)為，術(shù)中殘留晶狀體上皮細(xì)胞的增殖、移行及纖維化可引起后囊膜混濁。LECs是晶狀體中保持增殖與分化能力的成分。白內(nèi)障手術(shù)客觀上是一個(gè)創(chuàng)傷，一方面LECs失去皮質(zhì)對(duì)它的壓力；另一方面房水中一些因子作用于它引發(fā)創(chuàng)傷性修復(fù)機(jī)制，表現(xiàn)為上皮細(xì)胞移行、增殖，并且其增殖時(shí)失去單層性向成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)化。同時(shí)傷口愈合機(jī)制誘導(dǎo)纖維化生，膠原產(chǎn)生，使后囊纖維化，出現(xiàn)混濁和皺縮，阻礙光線通過(guò)，引起晶體偏位，影響視力提高。后囊膜混濁的藥物治療是目前研究的熱點(diǎn)問(wèn)題，理想的藥物應(yīng)具備以下三個(gè)條件(1)能有效抑制晶狀體上皮細(xì)胞增生；(2)對(duì)眼內(nèi)其他細(xì)胞無(wú)毒性作用；(3)臨床用藥方便可行。目前已有報(bào)道阿霉素藥物緩釋系統(tǒng)抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁的實(shí)驗(yàn)研究、漢防己甲素抑制兔晶狀體后囊膜混濁的研究、吉西他濱眼內(nèi)應(yīng)用抑制兔眼白內(nèi)障術(shù)后后囊膜混濁的實(shí)驗(yàn)研究、駱駝蓬總堿及其脂質(zhì)體對(duì)兔晶狀體上皮細(xì)胞的抑制作用、全反式維甲酸緩釋系統(tǒng)防治后囊膜混濁的實(shí)驗(yàn)研究、柔紅霉素預(yù)防后囊膜混濁的實(shí)驗(yàn)研究、絲裂霉素抑制后囊膜混濁的實(shí)驗(yàn)研究、組織纖溶酶原激活劑肝素對(duì)晶狀體后囊膜混濁抑制作用的實(shí)驗(yàn)對(duì)比研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種涂層的人工晶狀體，用以增加人工晶狀體的生物相容性、抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁，并預(yù)防人工晶狀體植入術(shù)后前膜和后發(fā)性白內(nèi)障。本發(fā)明的另一目的是提供上述人工晶狀體的制備方法。
本發(fā)明的一種涂層的人工晶狀體，選用抗腫瘤藥氟尿嘧啶作為抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁的藥物，并根據(jù)殼聚糖納米粒在眼內(nèi)穿透力弱及結(jié)膜上皮細(xì)胞對(duì)納米粒的吞噬量與該納米粒粒徑大小有關(guān)的特點(diǎn)，以殼聚糖—聚丙烯酸作為載體制備氟尿嘧啶納米粒制劑，混合涂層在聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體表面。
本發(fā)明的氟尿嘧啶納米粒平均粒徑為100nm～150nm。該納米?；鞈乙狐c(diǎn)眼或晶狀體囊內(nèi)注射后，由于生物黏附性好、易被結(jié)膜上皮細(xì)胞或晶狀體上皮細(xì)胞吸附吞噬且穿透力弱，在結(jié)膜囊或晶狀體囊內(nèi)粘滯度高，停留時(shí)間長(zhǎng)，可提高局部藥物濃度；由于藥物隨殼聚糖的生物降解緩慢釋放，能使眼部有效藥物濃度維持較長(zhǎng)時(shí)間，提高療效；由于該納米粒生物黏附性好，通過(guò)鼻淚管或房水循環(huán)擴(kuò)散到全身的藥量顯著減少，可顯著降低毒副作用。
本發(fā)明還提供了上述人工晶狀體的制備方法，該方法包括首先將殼聚糖溶液、聚丙烯酸溶液和氟尿嘧啶溶液按一定比例混合、以一定速度攪拌并透析，制得殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米粒混懸液，納米粒平均粒徑為100nm～150nm；然后將經(jīng)過(guò)表面清洗活化和離子處理過(guò)的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體浸漬在殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米?；鞈乙?6～72小時(shí)。
(一)材料與試劑PMMA IOL 上海瀟萊科貿(mào)有限公司殼聚糖上海如吉生物科技發(fā)展有限公司脫乙酰度大于92％聚丙烯酸 北京舒伯偉化工儀器有限責(zé)任公司上海分公司分子量100kDa，35％(w/v)氟尿嘧啶 上海旭東海普藥業(yè)有限公司0.25g/10ml冰醋酸上海醫(yī)藥公司制劑公司產(chǎn)品分析純無(wú)水乙醇 上海醫(yī)藥公司制劑公司產(chǎn)品分析純表面活化劑上海醫(yī)藥公司制劑公司產(chǎn)品氟離子上海醫(yī)藥公司制劑公司產(chǎn)品(二)組分與配比殼聚糖8～800mg聚丙烯酸 40～4000mg氟尿嘧啶 100～1000mg冰醋酸200～400mg蒸餾水750～780ml氟離子5×1013～5×1015ions/cm2(三)操作步驟I制備氟尿嘧啶-殼聚糖納米粒混懸液(i)制備A溶液將殼聚糖粉末充分溶脹于0.5％～1％(w/v)的醋酸溶液，配成0.02％～2％(w/v)的殼聚糖溶液A；(ii)制備B溶液將聚丙烯酸加水稀釋成0.02％～2％(w/v)聚丙烯酸溶液B；(iii)制備C溶液將氟尿嘧啶加水稀釋成2.5～25mg/ml，得氟尿嘧啶溶液C；(iv)制備納米粒混懸液持續(xù)攪拌下，按配比將C溶液逐滴加入B溶液中，控制滴速1～4ml/min，控制pH值3-7，再按配比滴加A溶液，反應(yīng)30分鐘～2小時(shí)；或按配比先將A溶液滴入B溶液，再滴加C溶液，反應(yīng)條件相同；反應(yīng)結(jié)束后移至透析袋，兩端夾閉后置于500ml二次蒸餾水中透析5小時(shí)去除游離組分后取出，即制得殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米粒混懸液；II制備納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體(i)PMMA人工晶狀體由去離子水在凈化工作臺(tái)環(huán)境下用超聲清洗機(jī)反復(fù)清洗3次，在分析純的無(wú)水乙醇中浸泡24小時(shí)，干燥后再浸入表面活化劑溶液中24小時(shí)，在真空干燥器內(nèi)干燥保存待用；(ii)經(jīng)表面清洗活化的人工晶狀體用低能離子注入機(jī)進(jìn)行氟離子雙面注入，處理的能量為70keV，氟離子的劑量為5×1013～5×1015ions/cm2；(iii)經(jīng)氟離子處理的人工晶狀體和氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙号浜辖n48小時(shí)；(iv)經(jīng)上述處理修飾后的人工晶狀體用去離子水在超凈工作臺(tái)上反復(fù)超聲清洗，干燥包裝后用環(huán)氧乙烷消毒保存。
本發(fā)明的人工晶狀體經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明的方法1.術(shù)后3天，以及1、2、4周行活體裂隙燈顯微鏡檢查，觀察前房及后囊膜情況，評(píng)價(jià)各組的眼內(nèi)毒性。
(注晶狀體后囊膜中央視區(qū)混濁程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)0級(jí)為無(wú)混濁；1級(jí)為少量混濁，晶狀體后囊膜可見(jiàn)微皺褶或單層晶狀體上皮細(xì)胞(lensepithelial cells，LECs)薄片；2級(jí)為輕度混濁，晶狀體后囊膜可見(jiàn)蜂巢樣混濁和較厚的晶狀體上皮細(xì)胞片或纖維膜；3級(jí)為中度混濁，可見(jiàn)典型的Elschnig珍珠樣小體或致密的纖維膜；4級(jí)為重度混濁，可見(jiàn)致密的Elschnig珍珠樣小體。)2.術(shù)后4周，摘除兔眼，取角鞏緣組織放入4％甲醛溶液中固定48h以上，梯度乙醇溶液脫水，浸蠟、包埋、切片，常規(guī)HE染色后于光鏡下觀察各部分眼組織情況，評(píng)價(jià)各組的眼內(nèi)毒性。
常規(guī)HE染色方法(1)二甲苯I、二甲苯II脫蠟10分鐘，(2)無(wú)水乙醇洗二甲苯1分鐘，兩次，(3)95％乙醇、90％乙醇、85％乙醇、75％乙醇各1分鐘，(4)流水洗2分鐘，(5)蘇木精染色3分鐘，(6)流水洗2分鐘，(7)1％鹽酸乙醇分化20秒，(8)流水洗2分鐘，(9)伊紅染色1分鐘，(10)85％乙醇、90％乙醇、95％乙醇、無(wú)水乙醇各1分鐘，(11)二甲苯I、二甲苯II、二甲苯III各2分鐘，(12)常規(guī)樹(shù)脂封片。
3.術(shù)后4周，摘除兔眼，分離晶狀體后囊膜，取晶狀體后囊膜中央部位組織，立即放入4℃的2.5％戊二醛溶液中固定24h以上，1％鋨酸染色，618包埋液包埋，超薄切片機(jī)切片，鈾-鉛電子染色，行透射電鏡觀查后囊膜混濁情況。
具體透射電鏡樣品制備過(guò)程前固定2％戊二醛PBS固定液在4℃條件下固定2小時(shí)。
漂洗PBS緩沖液在4℃條件下洗滌兩次，每次10分鐘。
后固定1％鋨酸PBS固定液在4℃條件下固定2小時(shí)。
漂洗PBS緩沖液在4℃條件下洗滌兩次，每次10分鐘。
脫水30％-50％-70％乙醇逐及脫水(70％乙醇含3％醋酸雙氧鈾)，每次10分鐘，4℃塊染，80％-95％-100％乙醇逐及脫水，每次10分鐘。
置換環(huán)氧丙烷置換二次，每次10分鐘。
浸透618包埋液與環(huán)氧丙烷(比例1∶1)，浸透2小時(shí)。618包埋液與環(huán)氧丙烷(比例2∶1)過(guò)液，純618包埋液在37％條件下，浸透6小時(shí)。
包埋60℃烘箱內(nèi)48小時(shí)。
切片LKB V型超薄切片機(jī)切片。
染色鈾-鉛電子染色。
本發(fā)明可以抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁，預(yù)防后發(fā)性白內(nèi)障，并且眼內(nèi)毒性較小。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述實(shí)施例1制備涂層人工晶狀體一、組分與配比殼聚糖8mg聚丙烯酸 40mg氟尿嘧啶 100mg冰醋酸400mg蒸餾水752ml氟離子5×1013ions/cm2二、制備方法(一)制備氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙?、制備A溶液取冰醋酸400mg溶于40ml蒸餾水，加入8mg殼聚糖粉末室溫下充分溶脹，配成0.02％的殼聚糖醋酸溶液A；2、制備B溶液取40mg聚丙烯酸溶于200ml蒸餾水配成0.02％聚丙烯酸溶液B；3、制備C溶液取100mg氟尿嘧啶溶于12ml蒸餾水，得氟尿嘧啶溶液C；4、制備納米?；鞈乙撼掷m(xù)500rpm攪拌下，向B溶液中逐滴滴加溶液C，控制滴速2ml/min，控制pH值3-7，再滴加A溶液，滴速2ml/min，反應(yīng)2小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后移至透析袋，兩端夾閉后置于500ml二次蒸餾水中透析5小時(shí)去除游離組分后取出。
(二)制備納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體1、PMMA人工晶狀體由去離子水在凈化工作臺(tái)環(huán)境下用超聲清洗機(jī)反復(fù)清洗3次。在分析純的無(wú)水乙醇中浸泡24h，干燥后再浸入表面活化劑溶液中24h，在真空干燥器內(nèi)干燥保存待用。
2、經(jīng)表面清洗活化的人工晶狀體用低能離子注入機(jī)進(jìn)行氟離子雙面注入。處理的能量為70keV，氟離子的劑量為5×1013ions/cm2。
3、經(jīng)氟離子處理的人工晶狀體和氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙号浜辖n48h。
4、經(jīng)上述處理修飾后的人工晶狀體用去離子水在超凈工作臺(tái)上反復(fù)超聲清洗，干燥包裝后用環(huán)氧乙烷消毒保存。
實(shí)施例2實(shí)施例1制備的涂層人工晶狀體在兔眼上的應(yīng)用將實(shí)施例1制備的涂層人工晶狀體植入兔眼1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組，將20只兔子分別標(biāo)記為A1-5、B1-5、C1-5、D1-5。
2.術(shù)前麻醉3％戊巴比妥鈉，按每千克體重1ml從耳緣靜脈定量麻醉，球結(jié)膜下注射適量利多卡因局麻，眼表滴愛(ài)爾卡因眼液表面麻醉。
3.麻醉后將兔側(cè)臥在兔臺(tái)上，手術(shù)眼均為左眼。常規(guī)消毒、鋪單，上開(kāi)瞼器。11-1點(diǎn)作以上穹隆為基底的結(jié)膜瓣，11-1點(diǎn)角膜緣后1mm做反眉鞏膜瓣，瓣高2.5mm，2點(diǎn)處刺穿角膜，切開(kāi)隧道切口至3.2mm，前房?jī)?nèi)注入透明質(zhì)酸鈉0.2ml，撕囊鑷環(huán)形撕囊，直徑6mm，水分離。
4.Geu der超聲乳化儀超聲乳化約7秒(55％的能量)，吸出皮質(zhì)，注入透明質(zhì)酸鈉0.2ml。
A1-5植入非折疊普通人工晶狀體，于囊袋內(nèi)，調(diào)整位置居中，吸出前房?jī)?nèi)殘余藥液及粘彈劑。
B1-5植入非折疊納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體，于囊袋內(nèi)，調(diào)整位置居中，吸出前房?jī)?nèi)殘余藥液及粘彈劑。
C1-5植入非折疊普通人工晶狀體，并注入0.2ml氟尿嘧啶-殼聚糖納米顆?；鞈乙海饔?min，吸出混懸液及其他殘余藥液和粘彈劑。
D1-5植入非折疊普通人工晶狀體，并注入0.2ml的80ug/ml的氟尿嘧啶溶液，作用5min，吸出氟尿嘧啶溶液及其他殘余藥液和粘彈劑。
5.術(shù)后不包扎，常規(guī)典必殊眼液滴眼。
6.術(shù)后3天，以及1、2、4周行活體裂隙燈顯微鏡檢查前房與晶狀體后囊膜。術(shù)后12周取角膜、虹膜及部分鞏膜行光鏡檢查，取后囊膜行電鏡檢查。
光鏡結(jié)果A組角膜組織結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)明顯異常，各層次分明，內(nèi)皮細(xì)胞有缺失。房角結(jié)構(gòu)疏松。虹膜基質(zhì)形態(tài)正常，無(wú)明顯炎癥。睫狀突上皮細(xì)胞大部分為透明空泡狀，無(wú)明顯水腫。
B組角膜、虹膜組織結(jié)構(gòu)清晰。角膜組織層次分明，無(wú)明顯異常。房角結(jié)構(gòu)因取材撕裂、缺失。虹膜及睫狀體、睫狀突組織正常，上皮細(xì)胞排列完整，基質(zhì)無(wú)水腫及異常，未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
C組角膜層次欠清，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及新生血管，角膜內(nèi)皮有單核樣細(xì)胞附著。房角結(jié)構(gòu)不清，缺失。虹膜血管擴(kuò)張、充盈。淺層鞏膜中有彌散、灶性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，與睫狀突粘連的玻璃體內(nèi)見(jiàn)單核樣淋巴細(xì)胞。睫狀突內(nèi)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，有單核樣細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞。
D組角膜組織層次排列正常，少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。房角內(nèi)出血，有炎癥細(xì)胞，部分睫狀突上皮細(xì)胞空泡化，睫狀突血管擴(kuò)張、充盈，見(jiàn)有少數(shù)單核樣細(xì)胞附著。
電鏡結(jié)果A組晶狀體上皮細(xì)胞呈復(fù)層、扁平狀，梭形，胞體大，細(xì)胞內(nèi)有大量的線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)絲數(shù)量很多，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)疏松，存在大量常染色質(zhì)，提示細(xì)胞增殖活躍。
B組晶狀體上皮細(xì)胞緊密排列，細(xì)胞外形不規(guī)則，細(xì)胞間距相嵌連接，細(xì)胞內(nèi)充滿細(xì)絲樣結(jié)構(gòu)，線粒體數(shù)量少，體積較小，嵴密集，其余細(xì)胞器數(shù)量較少，細(xì)胞核卵圓或不規(guī)則形，染色質(zhì)均勻，有明顯核仁，部分細(xì)胞壞死溶解。提示細(xì)胞增殖不活躍。
C組晶狀體上皮細(xì)胞呈扁平狀，細(xì)胞內(nèi)有很多擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，有少量線粒體，細(xì)胞核扁，提示細(xì)胞增殖不活躍。
D組晶狀體上皮細(xì)胞數(shù)量很少，散在分布在纖維膜中，細(xì)胞內(nèi)線粒體很少，細(xì)胞核固縮，提示細(xì)胞增殖不活躍。
實(shí)施例3制備涂層人工晶狀體一、組分與配比殼聚糖 80mg聚丙烯酸400mg氟尿嘧啶500mg冰醋酸 200mg蒸餾水 760ml氟離子 5×1015ions/cm2二、制備方法為(一)制備氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙?、制備A溶液取冰醋酸200mg溶于40ml蒸餾水，加入80mg殼聚糖粉末室溫下充分溶脹，配成0.2％的殼聚糖醋酸溶液A；2、制備B溶液取400mg聚丙烯酸溶于200ml蒸餾水配成0.2％聚丙烯酸溶液B；3、制備C溶液取500mg氟尿嘧啶溶于20ml蒸餾水，得氟尿嘧啶溶液C；4、制備納米?；鞈乙撼掷m(xù)600rpm攪拌下，向B溶液中逐滴滴加溶液C，控制滴速2ml/min，控制pH值3-7，再滴加A溶液，滴速2ml/min，反應(yīng)2小時(shí)；反應(yīng)結(jié)束后移至透析袋，兩端夾閉后置于500ml二次蒸餾水中透析5小時(shí)去除游離組分后取出。
(二)制備納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體1、PMMA人工晶狀體由去離子水在凈化工作臺(tái)環(huán)境下用超聲清洗機(jī)反復(fù)清洗3次。在分析純的無(wú)水乙醇中浸泡24h，干燥后再浸入表面活化劑溶液中24h，在真空干燥器內(nèi)干燥保存待用。
2、表面清洗活化的人工晶狀體用低能離子注入機(jī)進(jìn)行氟離子雙面注入。處理的能量為70keV，氟離子的劑量為5×1015ions/cm2。
3、經(jīng)氟離子處理的人工晶狀體和氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙号浜辖n48h。
4、經(jīng)上述處理修飾后的人工晶狀體用去離子水在超凈工作臺(tái)上反復(fù)超聲清洗，干燥包裝后用環(huán)氧乙烷消毒保存。
實(shí)施例4實(shí)施例3制備的涂層人工晶狀體在兔眼上的應(yīng)用將實(shí)施例3制備的涂層人工晶狀體植入兔眼1.實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)分組，將20只兔子分別標(biāo)記為A6-10、B6-10、C6-10、D6-10。
2.術(shù)前麻醉3％戊巴比妥鈉，按每千克體重1ml從耳緣靜脈定量麻醉，球結(jié)膜下注射適量利多卡因局麻，眼表滴愛(ài)爾卡因眼液表面麻醉。
3.麻醉后將兔側(cè)臥在兔臺(tái)上，手術(shù)眼均為左眼。常規(guī)消毒、鋪單，上開(kāi)瞼器。11-1點(diǎn)作以上穹隆為基底的結(jié)膜瓣，11-1點(diǎn)角膜緣后1mm做反眉鞏膜瓣，瓣高2.5mm，2點(diǎn)處刺穿角膜，切開(kāi)隧道切口至3.2mm，前房?jī)?nèi)注入透明質(zhì)酸鈉0.2ml，撕囊鑷環(huán)形撕囊，直徑6mm，水分離。
4.Geu der超聲乳化儀超聲乳化約7秒(55％的能量)，吸出皮質(zhì)，注入透明質(zhì)酸鈉0.2ml。
A6-10植入非折疊普通人工晶狀體，于囊袋內(nèi)，調(diào)整位置居中，吸出前房?jī)?nèi)殘余藥液及粘彈劑。
B6-10植入非折疊納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體，于囊袋內(nèi)，調(diào)整位置居中，吸出前房?jī)?nèi)殘余藥液及粘彈劑。
C6-10植入非折疊普通人工晶狀體，并注入0.2ml稀釋50倍的氟尿嘧啶-殼聚糖納米顆?；鞈乙?，作用5min，吸出混懸液及其他殘余藥液和粘彈劑。
D6-10植入非折疊普通人工晶狀體，并注入0.2ml的80ug/ml的氟尿嘧啶溶液，作用5min，吸出氟尿嘧啶溶液及其他殘余藥液和粘彈劑。
5.術(shù)后不包扎，常規(guī)典必殊眼液滴眼。
6.術(shù)后3天，以及1、2、4周行裂隙燈顯微鏡檢查。術(shù)后4周取角膜、虹膜及部分鞏膜行光鏡檢查，取后囊膜行電鏡檢查。
光鏡結(jié)果A組角膜組織結(jié)構(gòu)完整，未見(jiàn)明顯異常，各層次分明，內(nèi)皮細(xì)胞有缺失。房角結(jié)構(gòu)因取材人為撕裂。虹膜基質(zhì)形態(tài)正常，無(wú)明顯炎癥，僅見(jiàn)虹膜瞳孔區(qū)外含少許單核細(xì)胞的玻璃體粘著。睫狀突因取人工晶體斷裂破碎，上皮細(xì)胞排列基本正常，無(wú)明顯水腫、異常改變。
B組角膜、虹膜組織結(jié)構(gòu)清晰。角膜組織層次分明，無(wú)明顯異常。房角結(jié)構(gòu)撕裂、缺失。虹膜及睫狀體、睫狀突組織正常，上皮細(xì)胞排列完整，基質(zhì)無(wú)水腫及異常，胞核、胞漿比例正常，未見(jiàn)明顯炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。
C組角膜層次欠清，有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及新生血管，角膜內(nèi)皮有單核樣細(xì)胞附著，后彈力膜后見(jiàn)有增生的纖維組織。房角結(jié)構(gòu)不清，缺失。虹膜血管擴(kuò)張、充盈。在睫狀突周圍見(jiàn)有少量單核樣細(xì)胞附著，睫狀突內(nèi)有炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，有單核樣細(xì)胞和淋巴樣細(xì)胞。
D組角膜組織層次排列正常，少許炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。房角內(nèi)出血，有炎癥細(xì)胞，見(jiàn)有嗜藍(lán)染色顆粒殘留，部分睫狀突上皮細(xì)胞空泡化，睫狀突血管擴(kuò)張、充盈，見(jiàn)有少數(shù)單核樣細(xì)胞附著。
電鏡結(jié)果A組晶狀體上皮細(xì)胞呈復(fù)層、扁平狀，梭形，胞體大，細(xì)胞內(nèi)有大量的線粒體及粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，細(xì)絲數(shù)量很多，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)疏松，存在大量常染色質(zhì)，提示細(xì)胞增殖活躍。
B組部分晶狀體上皮細(xì)胞脫落、丟失，余結(jié)構(gòu)完整。細(xì)胞排列緊密，呈立方形，相互間有相嵌連接，細(xì)胞內(nèi)少量線粒體，細(xì)絲結(jié)構(gòu)豐富，核呈不規(guī)則形。提示細(xì)胞增殖不活躍。。
C組晶狀體上皮細(xì)胞呈扁平狀，細(xì)胞內(nèi)有很多擴(kuò)張的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，有少量線粒體，細(xì)胞核扁。提示細(xì)胞增殖不活躍。
D組晶狀體上皮細(xì)胞數(shù)量很少，散在分布在纖維膜中，細(xì)胞內(nèi)線粒體很少，細(xì)胞核固縮。提示細(xì)胞增殖不活躍。
權(quán)利要求
1.一種涂層的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體，其特征在于涂層是以殼聚糖-聚丙烯酸作為載體的氟尿嘧啶納米粒制劑，該納米粒的平均粒徑為100nm～150nm。
2.一種涂層的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體的制備方法，其特征在于該方法包括首先將殼聚糖溶液、聚丙烯酸溶液和氟尿嘧啶溶液按一定比例混合、以一定速度攪拌并透析，制得殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米粒混懸液，納米粒平均粒徑為100nm～150nm；然后將經(jīng)過(guò)表面清洗活化和離子處理過(guò)的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體浸漬在殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米粒混懸液36～72小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種涂層的聚甲基丙烯酸甲酯人工晶狀體的制備方法，其特征在于該方法由以下步驟組成I制備氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙?i)制備A溶液將殼聚糖粉末充分溶脹于0.5％～1％(w/v)的醋酸溶液，配成0.02％～2％(w/v)的殼聚糖溶液A；(ii)制備B溶液將聚丙烯酸加水稀釋成0.02％～2％(w/v)聚丙烯酸溶液B；(iii)制備C溶液將氟尿嘧啶加水稀釋成2.5～25mg/ml，得氟尿嘧啶溶液C；(iv)制備納米粒混懸液持續(xù)攪拌下，按配比將C溶液逐滴加入B溶液中，控制滴速1～4ml/min，控制pH值3-7，再按配比滴加A溶液，反應(yīng)30分鐘～2小時(shí)；或按配比先將A溶液滴入B溶液，再滴加C溶液，反應(yīng)條件相同；反應(yīng)結(jié)束后移至透析袋，兩端夾閉后置于500ml二次蒸餾水中透析5小時(shí)去除游離組分后取出，即制得殼聚糖-聚丙烯酸-氟尿嘧啶納米粒混懸液；II制備納米氟尿嘧啶涂層人工晶狀體(i)PMMA人工晶狀體由去離子水在凈化工作臺(tái)環(huán)境下用超聲清洗機(jī)反復(fù)清洗3次，在分析純的無(wú)水乙醇中浸泡24小時(shí)，干燥后再浸入表面活化劑溶液中24小時(shí)，在真空干燥器內(nèi)干燥保存待用；(ii)經(jīng)表面清洗活化的人工晶狀體用低能離子注入機(jī)進(jìn)行氟離子雙面注入，處理的能量為70keV，氟離子的劑量為5×1013～5×1015ions/cm2；(iii)經(jīng)氟離子處理的人工晶狀體和氟尿嘧啶-殼聚糖納米?；鞈乙号浜辖n48小時(shí)；(iv)經(jīng)上述處理修飾后的人工晶狀體用去離子水在超凈工作臺(tái)上反復(fù)超聲清洗，干燥包裝后用環(huán)氧乙烷消毒保存。
全文摘要
本發(fā)明涉及人工晶狀體。目前治療白內(nèi)障臨床常用的聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)人工晶狀體植入人體內(nèi)后常會(huì)引起炎癥反應(yīng)，后囊膜混濁也是白內(nèi)障術(shù)后的主要并發(fā)癥，為解決這些問(wèn)題本發(fā)明選用抗腫瘤藥氟尿嘧啶，并根據(jù)殼聚糖納米粒在眼內(nèi)穿透力弱及結(jié)膜上皮細(xì)胞對(duì)納米粒的吞噬量與該納米粒粒徑大小有關(guān)的特點(diǎn)，以殼聚糖—聚丙烯酸作為載體制備氟尿嘧啶納米粒制劑，混合涂層在PMMA人工晶狀體表面。本發(fā)明還提供上述人工晶狀體的制備方法。本發(fā)明不僅增加了人工晶狀體的生物相容性、抑制人工晶狀體植入術(shù)后后囊膜混濁，還可以預(yù)防人工晶狀體植入術(shù)后前膜和后發(fā)性白內(nèi)障。
文檔編號(hào)A61L27/28GK101036804SQ200710039180
公開(kāi)日2007年9月19日 申請(qǐng)日期2007年4月6日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月6日
發(fā)明者魏銳利, 馬曉曄, 黃瀟, 蔡季平, 劉園園, 李由, 程金偉 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)