專利名稱：提取—吸附耦合富集丹酚酸b的制備方法及其裝置的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及化學化工技術領域，具體地說，是一種從丹參中提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法及其裝置。
背景技術：
丹參始載于《神農本草經》，被列為上品，是我國傳統(tǒng)醫(yī)學中的常用藥之一，具有活血養(yǎng)血、益氣的作用，有著悠久的臨床應用史?，F代藥理研究表明，丹參中含有的丹酚酸類化合物具有很強的抗氧化作用，可清除人體內的超氧陰離子和羥基自由基，抑制脂質過氧化反應，改善微循環(huán)。丹參主要用于治療心、腦血管疾病和與之相關的各種疾病，丹參水溶性成分中的丹酚酸B是其主要起效成分，含量高且藥效強。研究表明，丹酚酸B的含量與藥效有密切的關系。臨床上已經證實，丹參具有擴張血管、降血脂及抗動脈粥樣硬化、抑制血小板凝聚及抗血栓形成、保護心肌、增加冠脈流量、抗菌消炎、抗腫瘤等作用，它有著廣泛的藥用前景。
《中華人民共和國藥典(2005年版)》中以丹參為主要成分的藥物有丹參片、雙丹口服液、安坤贊育丸、安神膠囊、復方丹參片、復方丹參滴丸、冠心丹參片、冠心丹參膠囊、荷丹片、樂脈顆粒、心通口服液、心寧片、烏雞白鳳丸、中風回春丸、止痛化癥膠囊、天王補心丸、三寶膠囊、乙肝寧顆粒、痛經寶顆粒、痛經丸、頸復康顆粒、清腦降壓片、消栓通絡膠囊、消栓通絡片、益心通脈顆粒和狼瘡丸等。近年來，對丹參中的主要起效成分丹酚酸B的藥理藥效研究和藥物技術開發(fā)研究有較多的專利文獻公開，見CN1586491、CN1578668、CN1488627、CN1872043、CN1242986、CN1727007、CN1270809、CN1408353、CN1768738、CN1384090、CN1872158、CN1857441、CN1459448、CN1560000。
由于丹酚酸類化合物具有鄰苯二酚及Ar-CH＝CH-COOR結構，其結構和物理化學性質非常相近。此外，丹酚酸B為熱敏性物質，在加熱情況下很容易分解。因此，要從丹參中分離出丹酚酸B的純品非常困難。丹酚酸B的分子結構見附圖1。
目前，國內公開的提取丹酚酸B的工藝和方法在CN1586491、CN1425659、CN1876641、CN1488627、CN1528756等文獻中有所描述。我國已有多家中藥企業(yè)擁有丹酚酸粉針的臨床批件，獲得生產批文的企業(yè)所采用的工藝為CN1270809，CN1459448所記載的技術。
上述提取丹酚酸B的工藝和方法的要點是①采用用水提、用不同濃度乙醇水溶液提取的方法進行制備，它們一般采用的是浸漬、加熱(回流)、傳統(tǒng)滲漉、超聲或微波萃取等工藝。
②采用醇沉、絮凝、過大孔樹脂、萃取等方法進行除雜。
③采用制備色譜柱進行分離，其載樣量少，只能得到微量的提取物。
上述提取丹酚酸B的工藝和方法的不足是①容易引入雜質，如加熱(回流)。
②提取效率不高，如浸提，超聲和傳統(tǒng)滲漉等很難使丹酚酸類物質充分溶出。
③工藝流程時間長，容易造成丹酚酸B的破壞。
④存在有機溶劑殘留，酸堿性環(huán)境不利于工業(yè)化生產，且在酸性條件下容易引起重金屬超標問題。
⑤工藝步驟多，成本高，成品得率低。

發(fā)明內容本發(fā)明的目的在于克服現有提取丹酚酸B的方法和工藝中存在的不足，提供一種能減少工藝流程和生產用時、減少制備過程中丹酚酸B被分解破壞、簡單實用、適于工業(yè)化生產、成本低、產品得率高的提取純化丹酚酸B的制備方法；本發(fā)明的另一個目的是，結合丹酚酸B的制備方法提供一種可高效富集丹參中丹酚酸B的制備裝置。
鑒于丹酚酸B的熱敏性特點，它不適合在高溫下長時間提取。因此，要提取丹酚酸B，滲漉與大孔樹脂吸附技術是一種較好的選擇。但是，傳統(tǒng)的滲漉工藝提取時間過長，藥液中溶出的有效成分較少，大孔樹脂過柱的時間也較長，這樣，既增加了提取的工作量，也容易造成丹酚酸B在制備過程中的分解和損失。
本發(fā)明提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法是，采用滲漉(提取)—大孔樹脂耦合工藝對丹參中的丹酚酸B進行初步提取，再經水洗—空干、乙醇洗脫、減壓濃縮—真空烘干、水溶—萃取—減壓濃縮蒸干的制備步驟得到高純度的丹酚酸B；其具體的制備工藝為(1)循環(huán)滲漉 采用常溫下一步循環(huán)滲漉法，利用水位壓差控制藥液滲漉和吸附的耦合過程，具體的流程為，取一定量的原料丹參放入滲漉柱底部，將原料8～15倍量的水加入滲漉柱，或將部分水加入儲液器，使其能通過導流管經機械泵再進入滲漉柱參與循環(huán)；通過滲漉柱的滲漉液直接由管道進入大孔樹脂柱，過完大孔樹脂柱的藥液由儲液器儲存，經液位壓差自控管的藥液由另一儲液器儲存，根據兩儲液器的液體量，有選擇地通過導流管經機械泵輸入滲漉柱繼續(xù)循環(huán)；同時，采用與滲漉柱連接的液位壓差自控管、緩沖器和儲液器對循環(huán)滲漉進行全程控制和保護；整個循環(huán)滲漉過程的用時小于8小時；滲漉水量與藥材(丹參)量的質量比為6∶1～17∶1，其較佳質量比為9∶1～11∶1；水滲漉的流速為15～160ml/min；過大孔樹脂的流速為4～100ml/min，其較佳流速為18～50ml/min。
(2)水洗—空干 循環(huán)滲漉后，用4～8倍量的清水洗去大孔樹脂上余留的糖類物質和其它雜質，避免糖類在乙醇洗脫樹脂時析出，減少后續(xù)制備中雜質的進入，清洗后，快速空干大孔樹脂；水洗的流速為20～120ml/min，其較佳流速為40～80ml/min。
(3)乙醇洗脫 水洗步驟完成后，用乙醇對大孔樹脂進行洗脫；乙醇的濃度為50～100％，乙醇的用量為4～8倍量，乙醇洗脫的流速為4～50ml/min.
(4)減壓濃縮—真空烘干 對乙醇洗脫液先進行減壓濃縮至密度為1.10g/cm3，濃縮溫度低于50℃；然后進行真空烘干，溫度低于55℃，得到丹酚酸B的粗提物——總酚酸。
(5)水溶—萃取—減壓濃縮蒸干 用清水溶解丹酚酸B粗提物，調節(jié)pH值，過濾除去沉淀，用乙酸乙酯萃取；在乙酸乙酯中加入硅膠以吸收水分，減壓濃縮乙酸乙酯相，開始溫度低于30℃，濃縮至粘稠狀時，迅速升溫至65℃蒸干；得到淺黃色的丹酚酸B；用0.5～3倍量的清水溶解丹酚酸B粗提物，其較佳用量為1～1.5倍量；調節(jié)pH值至1～4，其較佳pH值為1.5～3；用0.5～3倍量的乙酸乙酯進行萃取，其較佳倍量為1～2倍。
本發(fā)明提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法的優(yōu)點是(1)根據丹酚酸B的特點，采用了滲漉液直接過大孔樹脂的一步循環(huán)滲漉法，并利用水位壓差自動控制藥液滲漉和吸附的耦合過程，提高了制備效率，減少了提取時間和用水量，減少了雜質的引入，能有效地防止丹酚酸類活性成分的破壞。
(2)用水先洗去大孔樹脂余留的糖類物質和雜質，避免了糖類物質在乙醇洗脫時的析出，減化了后續(xù)制備的工作。
(3)快速空干大孔樹脂，減少水分的引入，有利于低溫減壓濃縮，減少丹酚酸B的破壞。
(4)用水溶解丹酚酸B粗提物，通過調節(jié)pH至酸性，析出大量膠質類雜質，同時將以鹽的形式存在的丹酚酸B化合物轉化成丹酚酸B，用乙酸乙酯進行萃取。
(5)整個制備方法簡單實用、可操作性強、產品得率高，不僅縮短了提取時間、降低了勞動強度，而且減少了丹酚酸B的分解，一次性產量大，丹酚酸B的提取率達到1.43％，純度達到90％以上，適合工業(yè)化生產。
本發(fā)明提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備裝置為，含有滲漉柱、機械泵、儲液器以及導流管和閥門，其特征是，滲漉柱與大孔樹脂柱耦合、并設有緩沖器和液位壓差自控管；滲漉柱的底端通過導流管、滲漉柱輸出閥、大孔樹脂柱輸入閥與大孔樹脂柱直接連接，大孔樹脂柱下端輸出閥的下方設有儲液器，儲液器通過其輸出閥、導流管、機械泵、滲漉柱輸入閥與滲漉柱連接，形成一路循環(huán)裝置；滲漉柱下端的一側通過滲漉柱側輸出閥、液位壓差自控管、緩沖器與儲液器連接，儲液器通過其輸出閥、導流管、機械泵、滲漉柱輸入閥與滲漉柱連接，組成一防溢裝置，防溢裝置連接導流管，經機械泵至滲漉柱形成另一路循環(huán)裝置。
所述滲漉柱的柱高與直徑比為10∶1～2∶1，所述大孔樹脂柱的柱高與直徑比為20∶1～2∶1，在所述滲漉柱的上端設有備用閥；在滲漉柱的下端一側也設有備用閥，所述液位壓差自控管設在滲漉柱底部的一側。
本發(fā)明提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備裝置的優(yōu)點是(1)滲漉柱與大孔樹脂柱直接連接，使?jié)B漉與吸附一步進行；(2)運用液位壓差自控管進行自動調節(jié)，能控制平衡水位，防止藥液溢出，并能保證藥材始終浸于液體之中，同時具有提高滲漉效率的功能；(3)利用緩沖器存儲從液位壓差自控管中導流出的藥液，避免了藥液從高處流下時在儲液器中產生泡沫；(4)可根據兩個儲液器液位的情況，控制導流管上的兩個閥門，有選擇地輸送藥液；
(5)本裝置應該還能適合其它熱敏性、結構不穩(wěn)定物質的分離和制備。

附圖1丹酚酸B的分子結構圖；附圖2為提取—吸附耦合丹酚酸B的制備裝置結構示意圖；圖中所示的標號分別為，1、滲漉柱，2、大孔樹脂柱，3、機械泵，4、緩沖器，5、6、儲液器，7、液位壓差自控管，8、9、10、導流管，11、12、備用閥門。
具體實施方式以下參照附圖，給出提取—吸附耦合丹酚酸B的制備裝置具體的實施方式，并介紹兩個從丹參中制取丹酚酸B產品的實施例。
參見附圖2。本發(fā)明提取—吸附耦合丹酚酸B的制備裝置由滲漉柱1、大孔樹脂柱2、機械泵3、緩沖器4、儲液器5、6、液位壓差自控管7、導流管8、9、10和備用閥門11、12組成。滲漉柱1的底端通過導流管9、滲漉柱輸出閥、大孔樹脂柱輸入閥與大孔樹脂柱2直接連接，大孔樹脂柱2下端輸出閥的下方設有儲液器6，儲液器6通過其輸出閥、導流管10、導流管8、機械泵3、滲漉柱輸入閥與滲漉柱1連接，形成一路循環(huán)裝置。滲漉柱1下端的一側通過滲漉柱側輸出閥、液位壓差自控管7、緩沖器4與儲液器5連接，儲液器5通過其輸出閥、導流管10、導流管8、機械泵3、滲漉柱輸入閥與滲漉柱1連接，形成又一路循環(huán)裝置。
本發(fā)明的滲漉柱1柱高與直徑的比為10∶1～2∶1，大孔樹脂柱2的柱高與直徑比為20∶1～2∶1。
為防止液體溢出，在滲漉柱1的頂部設有一個備用閥11；為了防止堵塞，在滲漉柱1的下端設有一個備用閥12。
為了防止藥液溢出，同時增加滲漉效率，滲漉柱1底部設有液位壓差自控管7。
制備丹酚酸B產品的實施例1參考附圖2。取原料丹參400克放入滲漉柱1底部，將其8倍量的水加入滲漉柱1，或將部分水加入儲液器6，使其能通過導流管10、導流管8經機械泵3再進入滲漉柱1參與循環(huán)，在室溫下開始循環(huán)滲漉，備用閥門11為打開狀態(tài)，備用閥12為關閉狀態(tài)，儲液器5、6上兩閥門為人工控制，其它閥門為打開狀態(tài)；通過滲漉柱1的滲漉液直接由管道9進入大孔樹脂柱2，通過大孔樹脂柱2后的藥液由儲液器6儲存，再通過導流管10、導流管8經機械泵3輸入滲漉柱1，作為補充滲漉用液體；當滲漉柱1中的藥液液面過高時，另一部分滲漉液則通過液位壓差自控管7導出，經緩沖器4進入儲液器5，再通過導流管10、導流管8經機械泵3輸入滲漉柱1，作為補充滲漉用液體；此時，可通過控制儲液器5、6上的兩個閥門來控制儲液器5、儲液器6中的藥液經機械泵3回至滲漉柱1的循環(huán)；整個滲漉循環(huán)進行6小時。
循環(huán)滲漉后，用8倍量、即3200克的清水洗去大孔樹脂柱2內余留在大孔樹脂上的糖類物質和其它雜質，水洗大孔樹脂的流速為45ml/min，清洗后，快速空干大孔樹脂。
用濃度為95％、6倍量、即2400克的乙醇洗脫大孔樹脂柱2，流速為6ml/min。
減壓濃縮乙醇洗脫液至密度約1.10g/cm3，濃縮溫度應低于50℃，然后放入真空干燥箱55℃烘干，得到丹酚酸B粗提物——總酚酸，得率為2.05％。
用1倍量藥材、既400ml的水溶解丹酚酸B粗提物，調節(jié)pH值至2，析出大量雜質，過濾去除沉淀，用等體積的乙酸乙酯萃取2次，乙酸乙酯相用變色硅膠干燥30分鐘，減壓濃縮，溫度低于30℃，濃縮至粘稠狀時，迅速升溫至65℃進行蒸干，得到淺黃色的丹酚酸B，丹酚酸B的含量為92％，得率為1.15％。
制備丹酚酸B產品的實施例2基本制備步驟同實施例1。
與實施例1的不同之處為將原料丹參10倍量的水加入滲漉柱1、或部分加入儲液器6，整個滲漉循環(huán)過程進行5小時。
滲漉循環(huán)后，用5倍量，即2000克的清水水洗，清洗的流速為35ml/min。
用濃度為95％、5倍量、即2000克的乙醇洗脫大孔樹脂柱2，流速為4ml/min。
對洗脫液減壓濃縮，真空干燥、烘干，得到丹酚酸B粗提物，得率為2.75％。
用等體積的乙酸乙酯萃取3次，減壓濃縮、蒸干乙酸乙酯相，得到淺黃色的丹酚酸B，丹酚酸B的含量94％，得率為1.43％。
權利要求
1.一種提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法，其特征在于，采用滲漉—大孔樹脂耦合工藝對丹酚酸B進行初步提取，再經水洗—空干、乙醇洗脫、減壓濃縮—真空烘干、水溶—萃取—減壓濃縮蒸干的制備步驟得到高純度的丹酚酸B；其具體的制備工藝為(1)循環(huán)滲漉 采用常溫下一步循環(huán)滲漉法，利用水位壓差控制藥液滲漉和吸附的耦合過程，具體的流程為，取一定量的原料丹參放入滲漉柱底部，將原料8～15倍量的水加入滲漉柱，或將部分水加入儲液器，使其能通過導流管經機械泵再進入滲漉柱參與循環(huán)；通過滲漉柱的滲漉液直接由管道進入大孔樹脂柱，過完大孔樹脂柱的藥液由儲液器儲存，經液位壓差自控管的藥液由另一儲液器儲存，根據兩儲液器的液體量，有選擇地通過導流管經機械泵輸入滲漉柱繼續(xù)循環(huán)；同時，采用與滲漉柱連接的液位壓差自控管、緩沖器和儲液器對循環(huán)滲漉進行全程控制和保護；整個循環(huán)滲漉過程的用時小于8小時；滲漉水量與藥材—丹參量的質量比為6∶1～17∶1，水滲漉的流速為15～160ml/min，過大孔樹脂的流速為4～100ml/min；(2)水洗—空干 循環(huán)滲漉后，用4～8倍量的清水洗去大孔樹脂上余留的糖類物質和其它雜質，避免糖類在乙醇洗脫樹脂時析出，減少后續(xù)制備中雜質的進入，清洗后，快速空干大孔樹脂；水洗的流速為20～120ml/min；(3)乙醇洗脫 水洗步驟完成后，用乙醇對大孔樹脂進行洗脫；乙醇的濃度為50～100％，乙醇的用量為4～8倍量，乙醇洗脫的流速為4～50ml/min；(4)減壓濃縮—真空烘干 對乙醇洗脫液先進行減壓濃縮至密度為1.10g/cm3，濃縮溫度低于50℃；然后進行真空烘干，溫度低于55℃，得到丹酚酸B的粗提物——總酚酸；(5)水溶—萃取—減壓濃縮蒸干 用清水溶解丹酚酸B粗提物，調節(jié)pH值，過濾除去沉淀，用乙酸乙酯萃??；在乙酸乙酯中加入硅膠以吸收水分，減壓濃縮乙酸乙脂相，開始溫度低于30℃，濃縮至粘稠狀時，迅速升溫至65℃蒸干；得到淺黃色的丹酚酸B；用0.5～3倍量的清水溶解丹酚酸B粗提物；調節(jié)pH值至1～4；用0.5～3倍量的乙酸乙酯進行萃取。
2.根據權利要求1所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法，其特征在于，滲漉液過大孔樹脂的流速為18～50ml/min。
3.根據權利要求1所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法，其特征在于，水洗大孔樹脂的流速為40～80ml/min。
4.根據權利要求1所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法，其特征在于，用乙醇對大孔樹脂進行洗脫時，乙醇的濃度為90～95％，乙醇的用量為5～6倍量，乙醇洗脫的流速為4～25ml/min。
5.根據權利要求1所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法，其特征在于，用1～1.5倍量的清水溶解丹酚酸B粗提物。
6.根據權利要求1所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法，其特征在于，在水溶—萃取過程中，調節(jié)pH值至1.5～3。
7.根據權利要求1所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法，其特征在于，用1～2倍量的乙酸乙酯進行萃取。
8.一種提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備裝置，含有滲漉柱(1)、機械泵(3)、儲液器(5)、(6)、以及導流管和閥門，其特征在于，滲漉柱(1)與大孔樹脂柱(2)耦合、并設有緩沖器(4)和液位壓差自控管(7)；滲漉柱(1)的底端通過導流管(9)、滲漉柱輸出閥、大孔樹脂柱輸入閥與大孔樹脂柱(2)直接連接，大孔樹脂柱(2)下端輸出閥的下方設有儲液器(6)，儲液器(6)通過其輸出閥、導流管(10)、導流管(8)、機械泵(3)、滲漉柱輸入閥與滲漉柱(1)連接，形成一路循環(huán)裝置；滲漉柱(1)下端的一側通過滲漉柱側輸出閥、液位壓差自控管(7)、緩沖器(4)與儲液器(5)連接，儲液器(5)通過其輸出閥、導流管(10)、導流管(8)、機械泵(3)、滲漉柱輸入閥與滲漉柱(1)連接，組成一防溢裝置，防溢裝置形成另一路循環(huán)裝置。
9.根據權利要求8所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備裝置，其特征在于，所述滲漉柱(1)的柱高與直徑比為10∶1～2∶1。
10.根據權利要求8所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備裝置，其特征在于，所述大孔樹脂柱(2)的柱高與直徑比為20∶1～2∶1。
11.根據權利要求8所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備裝置，其特征在于，在所述滲漉柱(1)的上端和下端設有備用閥(11)和(12)。
12.根據權利要求8所述的提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備裝置，其特征在于，所述的液位壓差自控管(7)設在滲漉柱(1)底部的一側。
全文摘要
一種提取—吸附耦合富集丹酚酸B的制備方法，采用滲漉提取—大孔樹脂耦合工藝對丹參中的丹酚酸B進行初步提取，再經水洗—控干、乙醇洗脫、減壓濃縮—真空烘干、水溶—萃取—減壓濃縮蒸干的步驟得到高純度丹酚酸B。實施本方法的制備裝置由滲漉柱、大孔樹脂柱、機械泵、緩沖器、儲液器、液位壓差自控管、導流管和閥門構成，滲漉柱通過導流管直接與大孔樹脂柱連接形成一路循環(huán)裝置；滲漉柱與液位壓差自控管、緩沖器組成的防溢裝置與導流管和機械泵連接可形成另一路循環(huán)裝置，提取丹酚酸類化合物。本制備方法和裝置簡單實用、可操作性強、產品得率高，丹酚酸B的提取率達到1.43％，純度達到90％以上，適合工業(yè)化生產。
文檔編號A61K36/185GK101074221SQ20071003948
公開日2007年11月21日 申請日期2007年4月13日 優(yōu)先權日2007年4月13日
發(fā)明者倪力軍, 顧海昕, 張立國 申請人:華東理工大學