專利名稱：從龍血竭中分離純化的新雙黃酮化合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從龍血竭中分離純化的新雙黃酮化合物及其制備方法，屬藥物植物化學提取工藝技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
黃酮類化合物是一類具有2-苯并色原酮母核結(jié)構(gòu)的化合物，在植物中分布很廣，而雙黃酮化合物是由二分子黃酮衍生物聚合生成的二聚體。較集中分布于除松科以外的裸子植物中，尤以銀杏綱為普遍，蕨類植物的卷柏屬中亦有存在。常見的天然雙黃酮是由二個分子芹菜素或其甲醚衍生物構(gòu)成，根據(jù)它的結(jié)合方式有銀杏素、異銀杏素的3，8″-雙芹菜素型，柏黃酮的8，8″-雙芹菜素型，扁柏黃酮的雙苯醚型等。雙黃酮類化合物是一類重要的生物活性物質(zhì)，具有解痙、降壓、擴張冠狀血管等作用，臨床上用于治療冠心病。
關(guān)于從百合科龍血樹屬植物劍葉龍血樹的樹脂龍血竭中分離出新雙黃酮化合物8-(3-(4-羥基-2-甲氧基苯基)-1-(4-羥基苯基)丙基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮的結(jié)構(gòu)及其制備方法，經(jīng)SciFinder檢索，尚未見報道；也未見有合成該化合物工藝的相關(guān)報道。該新雙黃酮化合物具有很強的α-葡萄糖苷酶的抑制活性和降血糖作用，可作為治療糖尿病藥物的組成成分。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從百合科龍血樹屬植物劍葉龍血樹的樹脂龍血竭中用化學提取工藝及色譜技術(shù)分離出新雙黃酮化合物的方法。
本發(fā)明的一種從龍血竭中分離純化的新雙黃酮化合物，其特征在于具有以下的分子式和結(jié)構(gòu)式分子式為C32H28O7結(jié)構(gòu)式為
化學名稱為8-(3-(4-羥基-2-甲氧基苯基)-1-(4-羥基苯基)丙基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮。
本發(fā)明一種從龍血竭中分離純化的新雙黃酮化合物的制備方法，其特征在于具有以下的工藝過程和步驟a.稱取60-80目龍血竭粉料，加入1600-2000mL石油醚進行索氏抽提，索氏抽提的溫度為70-80℃，抽提時間為8-15小時，萃余物揮發(fā)掉殘留的石油醚，得石油醚萃余物A；b.將上述萃余物A用250-400mL丙酮在室溫下進行固液萃取，重復3-5次，合并萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，40-50℃干燥，得丙酮萃取物B；c.將上述萃取物B用250-400mL乙酸乙酯在室溫下進行固液萃取，重復3-5次，將萃余物中殘留的乙酸乙酯揮發(fā)干，得乙酸乙酯萃余物C；d.取上述萃余物C用甲醇溶解后，加入等量硅膠混勻，揮發(fā)除去甲醇，將固體樣品，放于研缽中研成粉狀，過80目篩，上硅膠柱或快速硅膠柱進行層析，硅膠粒度為80-120目，用乙酸乙酯洗脫2-5個柱體積后，用乙酸乙酯∶甲醇＝9.5∶0.5，9∶1兩種混合液先后各洗脫2-5個柱體積，收集乙酸乙酯∶甲醇＝9∶1的流份，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，40-50℃干燥，得紅色固體D；e.取上述紅色固體D放入三頸瓶中，加入150-250mL乙酸乙酯，攪拌并加熱回流15-30min，趁熱用砂芯漏斗減壓過濾，再用30mL熱乙酸乙酯分3次洗滌三頸瓶，洗液并入砂芯漏斗過濾，合并濾液，轉(zhuǎn)入燒杯，待冷卻至室溫，4℃以下避光保存10-15小時后，燒杯中有紅棕色粉末析出，先用砂芯漏斗減壓過濾，后用冷乙酸乙酯15-30mL分3次洗滌析出物，取出該析出物，真空干燥，得紅棕色粉狀物質(zhì)E；f.取上述紅棕色粉狀物質(zhì)E用甲醇配成10mg/mL濃度的溶液，注入高效液相制備色譜儀純化，棄去雜質(zhì)峰，收集主成分峰；g.將收集的主成份峰流份用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，真空冷凍干燥，得新雙黃酮化合物8-(3-(4-羥基-2-甲氧基苯基)-1-(4-羥基苯基)丙基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮。
上述的的制備色譜儀的條件如下制備色譜柱為XDB-C18(Φ9.2×250mm)，柱溫40℃，流動相為甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝21∶29的混合物(體積比)，流速v＝4.0mL/min，檢測波長280nm；本發(fā)明方法所得的新雙黃酮化合物其外觀為紅棕色，它溶于甲醇、乙醇、丙酮等有機溶劑。
α-葡萄糖苷酶的抑制活性實驗證明該新雙黃酮化合物抑制來自酵母的α-葡萄糖苷酶活性的強度遠大于α-葡萄糖苷酶抑制劑代表藥物拜糖蘋的藥用成分acarbose。該新雙黃酮化合物的半抑制率IC50為0.276μg/mL，見表1。對來自大鼠小腸壁α-葡萄糖苷酶的抑制作用與拜糖蘋的藥用成分acarbose相同，見表2。酶動力學實驗表明該新雙黃酮化合物為競爭性抑制劑，Km＝0.988mmol/L，Ki＝0.272μg/mL。
表1 對來自酵母的α-葡萄糖苷酶的抑制作用

表2 對來自大鼠小腸壁α-葡萄糖苷酶的抑制作用

該新雙黃酮類化合物具有很強α-葡萄糖苷酶的抑制活性和的降血糖作用，可作為治療糖尿病藥物的組成成分，用于新藥的開發(fā)。
具體實施例方式
現(xiàn)將本發(fā)明的具體實施例敘述于后。
實施例1稱取60-80目龍血竭粉料100g，加入1800mL石油醚進行索氏抽提，索氏抽提的溫度為75℃，抽提時間為12小時，萃余物揮發(fā)掉殘留的石油醚，得石油醚萃余物A94.5g；將上述萃余物A用300mL丙酮在室溫下進行固液萃取，重復3次，合并萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，40℃干燥，得丙酮萃取物B 84.4g；將上述萃取物B用300mL乙酸乙酯在室溫下進行固液萃取，重復4次，將萃余物中殘留的乙酸乙酯揮干，得乙酸乙酯萃余物C 36.2g；取上述萃余物C用甲醇溶解后，加入等量硅膠混勻，揮發(fā)除去甲醇，將固體樣品于研缽中研成粉狀，過80目篩，上硅膠柱(Φ8.5×100cm)進行層析，硅膠粒度為100目，用乙酸乙酯洗脫2個柱體積后，用乙酸乙酯∶甲醇＝9.5∶0.5，9∶1兩種混合液先后各洗脫2個柱體積，收集乙酸乙酯∶甲醇＝9∶1的流份，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，40℃干燥，得紅色固體D 850mg；取上述紅色固體D放入三頸瓶中，加入200mL乙酸乙酯，攪拌并加熱回流20min，趁熱用砂芯漏斗減壓過濾，再用30mL熱乙酸乙酯分3次洗滌三頸瓶，洗液并入砂芯漏斗過濾，合并濾液，轉(zhuǎn)入燒杯，待冷卻至室溫，4℃以下避光保存15小時后，燒杯中有紅棕色粉末析出，先用砂芯漏斗減壓過濾，后用冷乙酸乙酯30mL分3次洗滌析出物，取出該析出物，真空干燥，得紅棕色粉狀物質(zhì)E 168mg；取上述紅棕色粉狀物質(zhì)E用甲醇配成10mg/mL濃度的溶液，用高效液相制備色譜儀純化，去除雜質(zhì)峰，收集主成分峰；最后將上述純化所得餾分經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，真空冷凍干燥，得新雙黃酮化合物72mg。
上述的制備色譜儀的條件如下制備柱為XDB-C18(Φ9.2×250mm)，柱溫為40℃，流動相為甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝21∶29(體積比)，流速為4.0mL/min。
實施例2稱取60-80目龍血竭100g，加入2000mL石油醚進行索氏抽提，索氏抽提的溫度為70℃，抽提時間為15小時，萃余物揮掉殘留的石油醚，得石油醚萃余物A 97.2g；將上述萃余物A用250mL丙酮在室溫下進行固液萃取，重復5次，合并萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，45℃干燥，得丙酮萃取物B 86.7g；將上述萃取物B用250mL乙酸乙酯在室溫下進行固液萃取，重復5次，將萃余物中殘留的乙酸乙酯揮發(fā)干，得乙酸乙酯萃余物C 38.2g；取上述萃余物C用甲醇溶解后，加入等量硅膠混勻，揮發(fā)除去甲醇，將固體樣品于研缽中研成粉狀，過80目篩，上快速色譜系統(tǒng)FlashChromatography system型號為FlashMaster Personal快速硅膠柱(Φ4cm×15cm)進行層析，流速為8mL/min，乙酸乙酯洗脫5個柱體積后，用乙酸乙酯∶甲醇＝9.5∶0.5，9∶1兩種混合液先后各洗脫5個柱體積，收集乙酸乙酯∶甲醇＝9∶1的流份，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，40℃干燥，得紅色固體D 871mg；取上述紅色固體D放入三頸瓶中，加入250mL乙酸乙酯，攪拌并加熱回流30min，趁熱用砂芯漏斗減壓過濾，再用30mL熱乙酸乙酯分3次洗滌三頸瓶，洗液并入砂芯漏斗過濾，合并濾液，轉(zhuǎn)入燒杯，待冷卻至室溫，4℃以下避光保存12小時后，燒杯中有紅棕色粉末析出，先用砂芯漏斗減壓過濾，后用冷乙酸乙酯15-30mL分3次洗滌析出物，取出該析出物，真空干燥，得紅棕色粉狀物質(zhì)E 182mg；取上述紅棕色粉狀物質(zhì)E用甲醇配成10mg/mL濃度的溶液，用高效液相制備色譜儀純化，去除雜質(zhì)峰，收集主成分峰；最后將上述純化所得餾分經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，真空冷凍干燥，得新雙黃酮化合物81mg。
上述的制備色譜儀的條件如下制備柱為XDB-C18(Φ9.2×250mm)，柱溫為40℃，流動相為甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝21∶29(體積比)，流速為4.0mL/min。
上述兩個實施例所得的本發(fā)明的新雙黃酮化合物分子式為C17H18O4，其外觀為紅棕色粉狀物質(zhì)，經(jīng)UV-VIS、IR、NMR、MS波譜分析分子結(jié)構(gòu)為8-(3-(4-羥基-2-甲氧基苯基)-1-(4-羥基苯基)丙基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮，各波譜所得數(shù)據(jù)如下UV-VISλmax(MeOH)nm285，346.5，389，511.5，524.5；IRσmax(KBr)cm-13443.55，1647.75，1609.71、1508.95、1455.34，2956.83；ESI-MS[M+H]+為525，EI m/z269(C16H13O4+)，256(C16H16O3+)，239(C15H11O3+)，225(C14H9O3+)，197(C13H9O2+)，177(C10H9O3+)，153(C8H9O3+)，137(C8H9O2+)，121(C7H5O2+)，107(C7H7O+)，94(C6H6O+)，77(C6H5+)；1H-NMR1和3C-NMR(500MHz，氘代DMSO)數(shù)據(jù)見表3表3 NMR(500MHz)1H和13C譜數(shù)據(jù)(溶劑為氘代DMSO)

由此確定結(jié)構(gòu)式如下
化合物確定為8-(3-(4-羥基-2-甲氧基苯基)-1-(4-羥基苯基)丙基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮，英文名8-(3-(4-hydroxy-2-methoxyphenyl)-1-(4-hydroxyphenyl)propyl)-2-(4-hydroxyphenyl)-7-methoxy-4H-benzopyran-4-one，經(jīng)SciFinder檢索該化合物為新化合物。
該化合物有很強的α-葡萄糖苷酶的抑制活性和降血糖作用，可作為治療糖尿病藥物的組成成分，用于新藥的開發(fā)。
權(quán)利要求
1.一種從龍血竭中分離純化的新雙黃酮類化合物，其特征在于具有以下的分子式和結(jié)構(gòu)式分子式為C32H28O7結(jié)構(gòu)式為 化學名稱為8-(3-(4-羥基-2-甲氧基苯基)-1-(4-羥基苯基)丙基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的一種從龍血竭中分離純化的新雙黃酮類化合物的制備方法，其特征在于具有以下的工藝過程和步驟a.稱取60-80目龍血竭粉料，加入1600-2000mL石油醚進行索氏抽提，索氏抽提的溫度為70-80℃，抽提時間為8-15小時，萃余物揮發(fā)掉殘留的石油醚，得石油醚萃余物A；b.將上述萃余物A用250-400mL丙酮在室溫下進行固液萃取，重復3-5次，合并萃取液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，40-50℃干燥，得丙酮萃取物B；c.將上述萃取物B用250-400mL乙酸乙酯在室溫下進行固液萃取，重復3-5次，將萃余物中殘留的乙酸乙酯揮發(fā)干，得乙酸乙酯萃余物C；d.取上述萃余物C用甲醇溶解后，加入等量硅膠混勻，揮發(fā)除去甲醇，將固體樣品，放于研缽中研成粉狀，過80目篩，上硅膠柱或快速硅膠柱進行層析，用乙酸乙酯洗脫2-5個柱體積后，用乙酸乙酯∶甲醇＝9.5∶0.5，9∶1兩種混合液先后各洗脫2-5個柱體積，收集乙酸乙酯∶甲醇＝9∶1的流份，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，40-50℃干燥，得紅色固體D；e.取上述紅色固體D放入三頸瓶中，加入150-250mL乙酸乙酯，攪拌并加熱回流15-30min，趁熱用砂芯漏斗減壓過濾，再用30mL熱乙酸乙酯分3次洗滌三頸瓶，洗滌液并入砂芯漏斗過濾，合并濾液，轉(zhuǎn)入燒杯，待冷卻至室溫，4℃以下避光保存10-15小時后，燒杯中有紅棕色粉末析出，先用砂芯漏斗減壓過濾，后用冷乙酸乙酯15-30mL分3次洗滌析出物，取出該析出物，真空干燥，得紅棕色粉狀物質(zhì)E；f.取上述紅棕色粉狀物質(zhì)E用甲醇配成10mg/mL濃度的溶液，注入高效液相制備色譜儀純化，棄去雜質(zhì)峰，收集主成分峰；g.將收集的主成份峰流份用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，真空冷凍干燥，得新雙黃酮化合物8-(3-(4-羥基-2-甲氧基苯基)-1-(4-羥基苯基)丙基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮。
3.按權(quán)利要求2所述的一種從龍血竭中分離純化新雙黃酮類化合物的制備方法，其特征在于所述的高效液相制備色譜的操作條件是制備色譜柱為XDB-C18(Φ9.2×250mm)，柱溫40℃，流動相為甲醇∶0.1％醋酸水溶液＝21∶29的混合液(體積比)，流速v＝4.0mL/min，檢測波長280nm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的新雙黃酮類化合物8-(3-(4-羥基-2-甲氧基苯基)-1-(4-羥基苯基)丙基)-2-(4-羥基苯基)-7-甲氧基-4H-苯并吡喃-4-酮的用途是，因其具有很強的α-葡萄糖苷酶抑制活性和降血糖作用，可用作治療糖尿病藥物的組成成分，用于新藥的開發(fā)。
全文摘要
本發(fā)明涉及從龍血竭中分離純化的新雙黃酮化合物及其制備方法，屬藥物植物化學提取工藝技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的特點是采用化學提取工藝及色譜技術(shù)從龍血竭中分離純化新雙黃酮化合物。本發(fā)明以龍血竭為原料，依次用石油醚、丙酮、乙酸乙酯溶劑提取，將乙酸乙酯溶劑萃取物經(jīng)硅膠柱或快速硅膠柱層析分離、重結(jié)晶、制備色譜純化，最終得到新雙黃酮化合物，化學名稱為8－(3－(4－羥基－2－甲氧基苯基)－1－(4－羥基苯基)丙基)－2－(4－羥基苯基)－7－甲氧基－4H－苯并吡喃－4－酮。該化合物外觀為棕紅色，具有很強的α－葡萄糖苷酶抑制活性和降血糖作用，可作為治療糖尿病藥物的組成成分。
文檔編號A61K31/352GK101041652SQ200710039940
公開日2007年9月26日 申請日期2007年4月25日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月25日
發(fā)明者雍克嵐, 呂敬慈, 盧大勝, 徐魯榮, 陳旭 申請人:上海大學