專利名稱：高速逆流色譜法制備高純度六駁堿的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及用高速逆流色譜法(HSCCC)制備高純度六駁堿的方法。
背景技術：
豆豉姜系樟科木姜子屬植物山雞椒("&^cw6eZ^ (Lour.) Pers)的 根及根莖。具有祛風散寒，理氣止痛等功效。其中所含的生物堿六駁堿是 一個藥理活性強的化合物，具有類士的寧的興奮脊髓的作用。
六駁堿在自然界中存在量極低，且含有大量雜質(zhì)，因此至今有大量研 究人員正在探索理想的分離純化方法。Masao等人在文獻Studies on the Alkaloids of Formosan Lauraceous Plants. V. Alkaloids of ZiAsea. cw6e6a Persoon中報道的提取六駁堿的方法如下豆豉姜22.38公斤用乙醇提取， 乙醇提取物用3%醋酸提取，濃縮至一定體積放置一夜后過濾，濾液用氯 仿提取，提取后酸性母液用氫氧化銨中和至析出固體，用氯仿提取出來， 提取液再用20/^氫氧化鈉溶液振搖提取，其中的氫氧化鈉提取液加入碳酸 銨至析出結晶，再用氯仿提取，用無水碳酸鉀干燥得到褐色殘渣。殘渣的 丙酮溶液加入苦酮酸鹽得紅色結晶，過濾，用乙醇多次重結晶得到六駁堿 7.7克，收率僅為0.034%。但該方法操作步驟繁瑣，反復引入酸堿和重結 晶，多次引起目標化合物化學變化和物理變化，過程中損失大，從而回收 率低。
高速逆流色譜技術(HSCCC)是近年發(fā)展起來的一種連續(xù)的無需任何 固體支持物的高效、快速的液液分配色譜分離技術，其原理是利用單向流 體動力學平衡現(xiàn)象來實現(xiàn)對化合物的高速分離的。在這樣的動力平衡體系 中，兩種互不混溶的溶劑相在轉動螺旋管中單向地分布。高速逆流色譜儀 工作時，色譜儀中的螺旋管做行星運動，由于重力及螺旋管力的作用，固 定相移向螺旋管的入端，使得固定相得以保留，同時兩相溶劑在螺旋管中 得以混合。由于不同溶質(zhì)在兩相中的分配系數(shù)不同，溶質(zhì)在兩相溶劑中進行分配平衡，從而使不同成分得以分離。高速逆流色譜技術操作簡單易行， 無需對樣品進行復雜的處理，且可以和靈敏度高的檢測技術聯(lián)用，方便快
捷準確。該技術應用范圍很廣，HSCCC中使用的兩相溶劑體系組成可以 是任意的，故可以適用于各種化合物的分離。它無需固體載體HSCCC在 經(jīng)過多次重復分離均可以實現(xiàn)較好的重現(xiàn)性以及得到較高的回收率。產(chǎn)品 純度高，選擇正確的溶劑體系，可以將樣品分離后得到高于卯％純度的產(chǎn) 品，適用于制備型分離。
但欲用HSCCC進行成功的分離，選擇適宜的溶劑系統(tǒng)非常重要。不 同的溶劑系統(tǒng)，具有不同的上、下相之比，其粘度、極性、密度等性質(zhì)相 差甚遠，對相同的成分具有不同的溶解、分配能力，形成分配系數(shù)的差異， 對分離效果產(chǎn)生不同的影響。目前，溶劑體系的選擇還沒有一套完整的理 論依據(jù)。另外，在選定了溶劑體系后，有時需要對三個儀器運行參數(shù)(轉 速，流動相流速，進樣體積)進行設定。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是克服傳統(tǒng)分離技術的缺陷，采用高速逆流 色譜技術(HSCCC)制備高純度六駁堿的方法。該方法分離條件溫和，分離 效率高，且分離時間短，能得到高純度的六駁堿。
本發(fā)明的技術方案如下
高速逆流色譜法制備高純度六駁堿的方法，包括制備構成固定相和 流動相的溶劑體系；調(diào)節(jié)流動相流速；調(diào)節(jié)主機轉速；其特征在于，所述 溶劑體系由氯仿、甲醇和水組成，三種組分的體積比為2 4: 3: 2 2.5， 該溶劑體系的上相為固定相，下相為流動相。
在不破壞體系平衡的調(diào)節(jié)下，可在上述范圍內(nèi)任意調(diào)節(jié)氯仿甲醇 水的體積比，優(yōu)選的體積比為4: 3: 2或4: 3: 2.5或3.5: 3: 2。
主機轉速須控制在1.5 2.5ml/min范圍內(nèi)，優(yōu)選2.0ml/min;流動相的 流速須控制在750 880rpm范圍內(nèi)，優(yōu)選800rpm;恒溫循環(huán)器的溫度設置 在23 27。C內(nèi)，優(yōu)選25。C。
本發(fā)明的具體操作步驟如下
豆豉姜乙醇提取物用正丁醇萃取，正丁醇萃取部分用硅膠柱粗分一次，得到富集六駁堿的混合物，精確稱取富集六駁堿的混合物，用流動相 溶解樣品，用雙泵等比例同時泵入流動相和固定相，當溶劑從管路出口流 出時，停止泵入固定相，設定流動相流速，同時啟動主機電機，調(diào)節(jié)轉速， 十幾分鐘后，管柱內(nèi)溶劑達成動態(tài)平衡，管柱出口處只有流動相流出。通
過進樣器注入樣品，設定檢測器的波長為280nm，在進樣后約4小時至6小 時出現(xiàn)六駁堿峰，收集該流份，濃縮后得到純六駁堿單體。
由于采用了合理的溶劑體系，控制主機轉速和流動相流速等工藝條 件，用本發(fā)明方法可得到高純度的六駁堿。且該分離純化過程條件溫和， 分離時間短，由于不引入酸堿，從而減少了化合物化學性質(zhì)的變化，保持 化合物的穩(wěn)定而減少損失，化合物不流失也不存在死吸附。
具體實施例方式
實施例1
豆豉姜5公斤用乙醇提取，乙醇提取物用正丁醇萃取，正丁醇萃取部 分用硅膠柱粗分一次，得到富集六駁堿的混合物15克。
精確稱取富集六駁堿的混合物3.0克，用氯仿甲醇水(4: 3: 2)
溶劑系統(tǒng)的下相溶解樣品，開啟恒溫循環(huán)器，設置溫度為25t:，以該溶劑
系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，用雙泵等比例同時泵入流動相和固 定相，當溶劑從管路出口流出時，停止泵入固定相，設定流動相流速為
2ml/min，同時啟動主機電機，調(diào)節(jié)轉速為800rpm，十幾分鐘后，管柱內(nèi) 溶劑達成動態(tài)平衡，管柱出口處只有流動相流出。通過進樣器注入樣品， 設定波長為280nm，在進樣后約4小時40分鐘出現(xiàn)六駁堿峰，收集該流 份，濃縮后得到純六駁堿1.4克，其中純度大于99.5%，相對進樣前收率 46.7%，相對藥材收率為0.138%。
實施例2
精確稱取實施例1中富集六駁堿的混合物2.4克，用氯仿甲醇水 (3.5: 3: 2)溶劑系統(tǒng)的下相溶解樣品，開啟恒溫循環(huán)器，設置溫度為 26°C，以該溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，用雙泵等比例同時 泵入流動相和固定相，當溶劑從管路出口流出時，停止泵入固定相，設定流動相流速為1.5ml/min，同時啟動主機電機，調(diào)節(jié)轉速為750rpm，十幾 分鐘后，管柱內(nèi)溶劑達成動態(tài)平衡，管柱出口處只有流動相流出。通過進 樣器注入樣品，設定波長為280nm，在進樣后約5小時35分鐘出現(xiàn)六駁 堿峰，收集該流份，濃縮后得到純六駁堿l.O克，其純度大于99.5%，相 對進樣前收率40.4%，相對藥材收率為0.121%。
實施例3
精確稱取實施例1中富集六駁堿的混合物2.6克，用氯仿甲醇水 (4: 3: 2.5)溶劑系統(tǒng)的下相溶解樣品，開啟恒溫循環(huán)器，設置溫度為 27°C，以該溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，用雙泵等比例同時 泵入流動相和固定相，當溶劑從管路出口流出時，停止泵入固定相，設定 流動相流速為2.5ml/min，同時啟動主機電機，調(diào)節(jié)轉速為880rpm，十幾 分鐘后，管柱內(nèi)溶劑達成動態(tài)平衡，管柱出口處只有流動相流出。通過進 樣器注入樣品，設定波長為280nm，在進樣后約5小時出現(xiàn)六駁堿峰，收 集該流份，濃縮后得到純六駁堿1.1克。其純度大于99.5%,相對進樣前 收率42.3%，相對藥材收率為0.127%。
實施例4
精確稱取實施例1中富集六駁堿的混合物1.2克，用氯仿甲醇水
(2: 3: 2)溶劑系統(tǒng)的下相溶解樣品，開啟恒溫循環(huán)器，設置溫度為24
°c，以該溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，用雙泵等比例同時泵
入流動相和固定相，當溶劑從管路出口流出時，停止泵入固定相，設定流
動相流速為2ml/min，同時啟動主機電機，調(diào)節(jié)轉速為800rpm，十幾分鐘 后，管柱內(nèi)溶劑達成動態(tài)平衡，管柱出口處只有流動相流出。通過進樣器 注入樣品，設定波長為280nm，在進樣后約5小時30分鐘出現(xiàn)六駁堿峰， 收集該流份，濃縮后得到純六駁堿0.5克，其純度大于99.5%，相對進樣 前收率41.7%，相對藥材收率為0.125%。
實施例5
精確稱取實施例1中富集六駁堿的混合物1.4克，用氯仿甲醇水(3: 3: 2.5)溶劑系統(tǒng)的下相溶解樣品，開啟恒溫循環(huán)器，設置溫度為
23°C，以該溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，用雙泵等比例同時 泵入流動相和固定相，當溶劑從管路出口流出時，停止泵入固定相，設定 流動相流速為2.5ml/min，同時啟動主機電機，調(diào)節(jié)轉速為850rpm，十幾 分鐘后，管柱內(nèi)溶劑達成動態(tài)平衡，管柱出口處只有流動相流出。通過進 樣器注入樣品，設定波長為280nm，在進樣后約5小時出現(xiàn)六駁堿峰，收 集該流份，濃縮后得到純六駁堿0.6克。其純度大于99.5%，相對進樣前 收率42.9%，相對藥材收率為0.129%。
實施例6
精確稱取實施例1中富集六駁堿的混合物l.O克，用氯仿甲醇水
(1.5: 1: 3)溶劑系統(tǒng)的下相溶解樣品，開啟恒溫循環(huán)器，設置溫度為
25°C，以該溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，用雙泵等比例同時 泵入流動相和固定相，當溶劑從管路出口流出時，停止泵入固定相，設定 流動相流速為2.0ml/min，同時啟動主機電機，調(diào)節(jié)轉速為800rpm，十幾 分鐘后，管柱內(nèi)溶劑達成動態(tài)平衡，管柱出口處只有流動相流出。通過進 樣器注入樣品，設定波長為280nm，在進樣后約3小時出現(xiàn)六駁堿峰，但 與雜質(zhì)峰交疊，分離度小，收集該流份，濃縮后得到純六駁堿0.2克。其 純度為80%，相對進樣前收率20%，相對藥材收率為0.06%。
權利要求
1.高速逆流色譜法制備高純度六駁堿的方法，包括制備構成固定相和流動相的溶劑體系；調(diào)節(jié)流動相流速；調(diào)節(jié)主機轉速；其特征在于，所述溶劑體系由氯仿、甲醇和水組成，三種組分的體積比為2～4∶3∶2～2.5，該溶劑體系的上相為固定相，下相為流動相。
2. 如權利要求1所述的制備高純度六駁堿的方法，其特征在于，所述 流動相的流速為1.5 2.5ml/min。
3. 如權利要求1所述的制備高純度六駁堿的方法，其特征在于，所述 主機轉速為750 880rpm。
4. 如權利要求1所述的制備高純度六駁堿的方法，其特征在于，所述溶劑體系的三種組分的體積比為4: 3: 2。
5. 如權利要求1所述的制備高純度六駁堿的方法，其特征在于，所述 溶劑體系的三種組分的體積比為4: 3: 2.5。
6. 如權利要求1所述的制備高純度六駁堿的方法，其特征在于，所述溶劑體系的三種組分的體積比為3.5: 3: 2。
全文摘要
本發(fā)明公開一種高速逆流色譜法制備高純度六駁堿的方法，包括制備構成固定相和流動相的溶劑體系；調(diào)節(jié)流動相流速；調(diào)節(jié)主機轉速；其特征在于，所述溶劑體系由氯仿、甲醇和水組成，三種組分的體積比為2～4∶3∶2～2.5，該溶劑體系的上相為固定相，下相為流動相。該方法分離條件溫和，分離效率高，且分離時間短，能得到高純度的六駁堿。
文檔編號A61K36/185GK101293872SQ20071004016
公開日2008年10月29日 申請日期2007年4月28日 優(yōu)先權日2007年4月28日
發(fā)明者翔 倪, 朱超蘭, 楊培明, 許海燕, 佳 陳 申請人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院