專利名稱：一種紫杉醇納米粒子及其制備方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬制藥技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種紫杉醇納米粒子及其制備方法和 應(yīng)用。
背景技術(shù)：
紫杉醇(Paclitaxel， PTX)是由紅豆杉屬植物提取的一種具有抗癌活性的 二萜類化合物。作為目前最好的抗腫瘤藥物之一，它在臨床上己得到廣泛應(yīng) 用，特別是對(duì)乳腺癌、卵巢癌的治療作用明顯。但其水溶性極差，為了增加 其溶解性，便于臨床給藥，目前國(guó)內(nèi)外紫杉醇制劑均采用同一配方，即在紫 杉醇乙醇注射劑中加入了一種表面活性劑一一聚氧乙基蓖麻油(Cremophor EL)。但是聚氧乙基蓖麻油能促進(jìn)組胺釋放，常引起嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)以及產(chǎn)生 高敏性、神經(jīng)毒性、腎毒性、心臟毒性等不良反應(yīng)，給病人帶來(lái)了極度的痛 苦。為了解決上述問(wèn)題，研究不含聚氧乙基蓖麻油并能提高紫杉醇生物利用 度的其它液體制劑成為當(dāng)前的熱點(diǎn)，其中包括合成紫杉醇的易溶性前體藥物 (Kahashi T. Tsukamolo H. Yamada H. el al Design and synthesis of a water-soluble taxol analogue: taxol-sialyl conjugate [J] Bioorg Med Chem Lett. 1998. 8: 113-116)以及脂質(zhì)體(Crosasso P， Cemti M, Brisa P. etal Preparation, characterization and properties of stencally stabilized paclitaxel-contaiuiug liposomes [J] Controlled Release. 2000. 63: 19-30) 等。
殼聚糖(chitosan， CS)是甲殼素脫乙?；漠a(chǎn)物。它是一種氨基多糖，有 許多獨(dú)特的物理、化學(xué)特性和生物功能。殼聚糖具有良好的生物黏附特性和 生物可降解性(蔣挺大.殼聚糖.北京化學(xué)工業(yè)出版社2001: 1 32)，可增
強(qiáng)穿透作用及酶抑制作用，因此被研制成為生物大分子藥物的運(yùn)送載體，以 增加藥物在體內(nèi)的有效濃度，提高療效。而與其它種類的高分子藥物載體相 比，殼聚糖不僅原料豐富，而且具有成本低、可生物降解、良好的生物相容 性和生物親和性、無(wú)毒、易于化學(xué)改性等優(yōu)點(diǎn)，本身還具有抗菌、止血、抑 制癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移等作用。
目前，國(guó)內(nèi)外已有多篇文獻(xiàn)報(bào)道殼聚糖衍生物作為紫杉醇藥物載體的相 關(guān)研究，但事先都需要對(duì)殼聚糖進(jìn)行功能性修飾。

發(fā)明內(nèi)容
所要解決的技術(shù)問(wèn)題
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種紫杉醇納米粒子及其制備方法和 應(yīng)用，以克服現(xiàn)有的殼聚糖衍生物作為紫杉醇藥物載體的相關(guān)技術(shù)事先都需 要對(duì)殼聚糖進(jìn)行功能性修飾的缺陷。
技術(shù)方案
本發(fā)明的技術(shù)方案之一是提供一種紫杉醇納米粒子，通過(guò)如下制備方法
獲得
(1)將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置于室溫條件下，隨著醇溶劑的
揮發(fā)，制得紫杉醇納米粒子；(2) 將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合后在 25-35°0的恒溫下攪拌1 4小時(shí)，制備乳液；
(3) 用交聯(lián)劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機(jī) 溶劑洗滌粒子，真空干燥后即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。
上述的紫杉醇納米粒子的優(yōu)選方案之一為，所述的載有紫杉醇的殼聚糖 納米粒子中殼聚糖與紫杉醇的質(zhì)量比為1:1-4:1。
上述的紫杉醇納米粒子的優(yōu)選方案之二為，所述的殼聚糖納米粒子對(duì)紫 杉醇的包封率為70-80%,載藥量為15-25wt%。
上述的紫杉醇納米粒子的優(yōu)選方案之三為，所述的殼聚糖、表面活性劑、 交聯(lián)劑、油相的質(zhì)量比為500-4000: 250-2000: 80-160、 160000-400000。
上述的紫杉醇納米粒子的優(yōu)選方案之四為，所述的交聯(lián)劑為檸檬酸三鈉， 所述的油相為液體石蠟，所述的洗滌粒子的有機(jī)溶劑為石油醚、異丙醇或者 兩者的組合。
上述的紫杉醇納米粒子的優(yōu)選方案之五為，所述的醇溶液為乙醇溶液， 所述的殼聚糖溶液為殼聚糖的醋酸溶液。
本發(fā)明的技術(shù)方案之二是提供一種紫杉醇納米粒子的制備方法，依次包
括如下步驟
(4) 將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置于室溫條件下，隨著醇溶劑的 揮發(fā)，制得紫杉醇納米粒子；
(5) 將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合后在 25-35'C的恒溫下攪拌1 4小時(shí)，制備乳液；
(6) 用交聯(lián)劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機(jī)
溶劑洗滌粒子，真空干燥后即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。 上述的紫杉醇納米粒子的制備方法的優(yōu)選方案之一為，所述的載有紫杉
醇的殼聚糖納米粒子中殼聚糖與紫杉醇的質(zhì)量比為1:1-4:1。
上述的紫杉醇納米粒子的制備方法的優(yōu)選方案之二為，所述的殼聚糖納
米粒子對(duì)紫杉醇的包封率為70-80%，載藥量為15-25wt%。
本發(fā)明的技術(shù)方案之三是提供一種卵巢癌細(xì)胞的抑制劑，由權(quán)利要求1
所述的載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子和藥學(xué)上可接受的載體組成。
本發(fā)明所制備的殼聚糖/紫杉醇載藥納米粒子可以簡(jiǎn)稱為CS/PTX NPs。
有益效果
本發(fā)明采用生物降解材料殼聚糖制備包裹紫杉醇藥物的納米粒，也可避 免聚氧乙基蓖麻油引起的嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)以及產(chǎn)生高敏性、神經(jīng)毒性、腎毒 性、心臟毒性等不良反應(yīng)問(wèn)題，并且可利用納米粒的耙向和緩控釋作用，在 一定程度上提高藥物的療效，降低其自身的毒副反應(yīng)。
本發(fā)明的載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子采用溶劑揮發(fā)一乳化交聯(lián)法制 備，無(wú)須對(duì)殼聚糖進(jìn)行任何化學(xué)修飾，直接可以將其作為紫杉醇藥物的載體， 避免了繁瑣和復(fù)雜的修飾步驟，操作過(guò)程方便，并降低了生產(chǎn)成本，利于推 廣。且制備的載藥鈉米粒子為單分散的規(guī)則球體，粒徑控制在80±30nm，無(wú) 團(tuán)聚現(xiàn)象。
利用本發(fā)明的殼聚糖/紫杉醇載藥納米粒子對(duì)卵巢癌細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí) 驗(yàn)，結(jié)果表明所制備的載藥納米粒子對(duì)腫瘤細(xì)胞有顯著的緩釋促凋亡作用。


圖1為CS/PTX NPs對(duì)卵巢癌細(xì)胞A2780細(xì)胞生長(zhǎng)抑制趨勢(shì)圖。結(jié)果表 明載藥納米粒子能有效促進(jìn)A2780細(xì)胞的凋亡，且細(xì)胞凋亡量隨著培養(yǎng)時(shí) 間的延長(zhǎng)而增大，證明制得的粒子具有一定的緩釋作用；粒子濃度對(duì)細(xì)胞凋 亡有影響。培養(yǎng)時(shí)間相同時(shí)，粒子濃度越高，細(xì)胞凋亡量越大。
圖2為PTX藥物溶于乙醇的紫外吸收光譜圖。227nm處的特征吸收峰為 PTX藥物的最大吸收波長(zhǎng)(Amax)。
圖3為CS/PTX NPs溶于乙醇的紫外吸收光譜圖。在227nm附近出現(xiàn)了 PTX的特征吸收峰，可知PTX被成功地包裹進(jìn)CS中。
圖4為CS/PTX NPs透射電鏡圖。圖3表明，制成的CS/PTX NPs為球
型粒子，這些粒子分散均勻，且無(wú)團(tuán)聚現(xiàn)象，粒徑范圍控制為80±30nm。
具體實(shí)施例方式
下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，如納 米材料技術(shù)手冊(cè)，或按照制造廠商所建議的條件。 實(shí)施例1
采用溶劑揮發(fā)法和乳液交聯(lián)法，用殼聚糖對(duì)紫杉醇納米粒子進(jìn)行包裹， 得到粒徑大小約為80±30nm的球形粒子，具體實(shí)施方式
如下
(1 )將30mg紫杉醇0.5mL乙醇溶液滴加到50mL含50mg表面活性 劑十二垸基硫酸鈉(SDS)的水中，在室溫條件下，隨著乙醇溶劑的揮發(fā)， 制得紫杉醇納米粒子(PTXNPs);
(2) 將100mg殼聚糖、PTX NPs和0.5mL 0.5%稀醋酸溶液(質(zhì)量比) 混合，加入到80mL液體石蠟中，在25'C條件下恒溫?cái)嚢?小時(shí)；
(3) 在混合液中加入0.5mL 2%檸檬酸三鈉，反應(yīng)30 min后固化析出粒 子；將所得到的粒子分別用石油醚和異丙醇洗滌，并將粒子真空干燥保存。
用紫外分光光譜儀(UV)、透射電子顯微鏡(TEM)等測(cè)試儀器進(jìn)行粒子表 征。結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3和圖4。
實(shí)施例2
(1) 將50mg紫杉醇、0.5mL乙醇溶液滴加到50mL含50mg十二垸基 硫酸鈉的水中，在室溫條件下，隨著乙醇溶劑的揮發(fā)，制得紫杉醇納米粒子
(PTXNPs);
(2) 將100mg殼聚糖、PTX NPs、 2mL0.5。/。稀醋酸溶液(質(zhì)量比)混 合，加入到70mL液體石蠟中，在35'C條件下恒溫?cái)嚢?小時(shí)；
(3) 在混合液中加入0.5mL2。/。檸檬酸三鈉，反應(yīng)30 min后固化析出粒 子；將所得到的粒子分別用石油醚和異丙醇洗滌，并將粒子真空干燥保存。
實(shí)施例3
將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的卵巢癌細(xì)胞A2780分別調(diào)成1x104個(gè)/mL接種于96 孔培養(yǎng)板，每孔100|jL。分別加入三種不同濃度的殼聚糖載藥納米粒子(25ijg /mL、 2.5|jg/mL、 0.25|jg/mL)，每種濃度平行4孔。給予10%牛血清1640 培養(yǎng)液，毎孔加100ijL，分別培養(yǎng)24h、 48h、 72h和96h后，觀察所制的粒 子對(duì)細(xì)胞的促凋亡作用效果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。
權(quán)利要求
1.一種紫杉醇納米粒子，通過(guò)如下制備方法獲得(1)將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置于室溫條件下，隨著醇溶劑的揮發(fā)，制得紫杉醇納米粒子；(2)將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合后在25-35℃的恒溫下攪拌1～4小時(shí)，制備乳液；(3)用交聯(lián)劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機(jī)溶劑洗滌粒子，真空干燥后即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇納米粒子，其特征在于，所述的載有紫杉醇 的殼聚糖納米粒子中殼聚糖與紫杉醇的質(zhì)量比為1:1 -4:1 。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇納米粒子，其特征在于，所述的殼聚糖納米 粒子對(duì)紫杉醇的包封率為70-80%，載藥量為15-25wt%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇納米粒子，其特征在于，所述的殼聚糖、表 面活性劑、交聯(lián)劑、油相的質(zhì)量比為500-4000: 250-2000: 80-160、 160000-400000。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的紫杉醇納米粒子，其特征在于，所述的交聯(lián)劑 為檸檬酸三鈉，所述的油相為液體石蠟，所述的洗滌粒子的有機(jī)溶劑為石 油醚、異丙醇或者兩者的組合。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇納米粒子，其特征在于，所述的醇溶液為乙 醇溶液，所述的殼聚糖溶液為殼聚糖的醋酸溶液。
7. —種紫杉醇納米粒子的制備方法，依次包括如下步驟(1)將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置于室溫條件下，隨著醇溶劑的 揮發(fā)，制得紫杉醇納米粒子； (2) 將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合后在 25-35-C的恒溫下攪拌1 4小時(shí)，制備乳液；(3) 用交聯(lián)劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機(jī) 溶劑洗漆粒子，真空干燥后即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇納米粒子的制備方法，其特征在于，所述的 載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子中殼聚糖與紫杉醇的質(zhì)量比為1:1-4:1。
9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的紫杉醇納米粒子的制備方法，其特征在于，所述的 殼聚糖納米粒子對(duì)紫杉醇的包封率為70-80%，載藥量為15-25wt%。
10. —種卵巢癌細(xì)胞的抑制劑，由權(quán)利要求1所述的載有紫杉醇的殼聚糖納米 粒子和藥學(xué)上可接受的載體組成。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種紫杉醇納米粒子，通過(guò)如下制備方法獲得將含有表面活性劑的紫杉醇的醇溶液置于室溫條件下，隨著醇溶劑的揮發(fā)，制得紫杉醇納米粒子；將紫杉醇納米粒子溶解在殼聚糖溶液中作為水相，與油相混合后在25-35℃的恒溫下攪拌1～4小時(shí)，制備乳液；用交聯(lián)劑將殼聚糖包裹的紫杉醇納米粒子從乳液中固化析出，用有機(jī)溶劑洗滌粒子，真空干燥后即可獲得載有紫杉醇的殼聚糖納米粒子。本方法無(wú)須對(duì)殼聚糖進(jìn)行任何化學(xué)修飾，所制備的載藥納米粒子對(duì)腫瘤細(xì)胞有明顯的緩釋促凋亡作用。
文檔編號(hào)A61K31/337GK101167716SQ20071004776
公開(kāi)日2008年4月30日 申請(qǐng)日期2007年11月2日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月2日
發(fā)明者于永春, 朱懷仕, 芳 李, 李佳嚀, 沈鶴柏, 童曉文, 馬經(jīng)緯 申請(qǐng)人:上海市第十人民醫(yī)院